一种铁苋菜二萜类化合物、铁苋菜提取物及其在制备具有抗氧化和/或抗炎作用的产品中的应用

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种铁苋菜二萜类化合物、铁苋菜提取物及其在制备具有抗氧化和/或抗炎作用的产品中的应用。

背景技术

铁苋菜是一种大戟科铁苋菜属一年生草本植物。研究报道，铁苋菜营养丰富，具有潜在的抗炎活性。如研究报道，铁苋菜含有的抗氧化物质有助于减轻炎症反应。此外，铁苋菜含有的黄酮类活性化合物，不仅具有抑菌消炎活性，还具有较强的抗氧化作用，能够抑制细胞脂质过氧化，并对UV辐照导致的细胞DNA损伤有保护作用。此外，铁苋菜中的多酚类活性化合物可以通过抑制炎症介质的产生来减轻炎症反应，从而达到抗炎作用。研究也发现，铁苋菜中含有的维生素C和β-胡萝卜素等物质在抗炎过程中起着重要作用。如，铁苋菜中的维生素C和其它抗氧化物质有助于增强免疫系统，提高身体抵抗力，在对抵抗疾病和保持身体健康中起到一定作用。多项研究还发现，铁苋菜中的活性成分还具有抗菌活性，可以帮助抵抗炎症引起的感染。

目前，虽有大量的关于铁苋菜中活性成分或其提取物用于食品、护肤品或抗炎活性的食品等的研究及报道，却鲜有铁苋菜提取物尤其是铁苋菜活性二萜类化合物成分及其组合物用于抗炎、增强细胞抗炎性损伤的活性的研究及报道。

发明内容

鉴于此，本发明首先提供一种全新结构的化合物，经进一步研究表明，所述的化合物具有抗氧化以及抗炎作用。

本发明的详细技术方案如下：

本发明首先提供了一种铁苋菜二萜类化合物，所述的铁苋菜二萜类化合物选自铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV及铁苋菜二萜-V中的一种或一种以上的混合；

其中，铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV及铁苋菜二萜-V的结构式分别如式I、式II、式III、式IV或式V所示；

本发明还提供了一种铁苋菜提取物的制备方法，其包含如下步骤：

(1)制备铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物；

(2)将铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物混合均匀后即得所述的铁苋菜提取物。

优选地，步骤(1)中铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物或铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物通过如下方法制备得到：

取铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV或铁苋菜二萜-V，添加水，然后再添加铁苋菜粗提物，混合均匀后，再经冻干后得铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物或铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物。

优选地，铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV或铁苋菜二萜-V与水以及铁苋菜粗提物的1:(15-25):(5-10)。

最优选地，铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV或铁苋菜二萜-V与水以及铁苋菜粗提物的1:20:8。

优选地，所述的铁苋菜粗提物通过如下方法制备得到：

取新鲜的铁苋菜加水后粉碎，得粉碎液；接着将粉碎液离心；取上清液先用孔径为30kDa的透析膜透析，然后再用孔径为35kDa的透析膜透析；取透过35kDa的透析膜的透析液，浓缩干燥后即得所述的铁苋菜粗提物。

优选地，步骤(2)中铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物以及铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物的质量比为1:(1-100):(1-100):(1-100):(1-100)。

进一步优选地，步骤(2)中铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物以及铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物的质量比为1:(1-20):(1-20):(1-20):(1-20)。

最优选地，步骤(2)中铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物以及铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物的质量比为1:11.8:13.9:6.95:12.1。

本发明还提供了一种由上述制备方法制备得到的铁苋菜提取物。

本发明还提供了一种上述铁苋菜二萜类化合物或铁苋菜提取物在制备具有抗炎作用的产品中的应用。

本发明还提供了一种上述铁苋菜二萜类化合物或铁苋菜提取物在制备具有抗氧化作用的产品中的应用。

优选地，所述的产品为化妆品、护肤品、药物或保健品。

有益效果：本发明提供了一种全新结构的铁苋菜二萜类化合物，以及提供了一种通过全新方法制备得到的全新组成的铁苋菜提取物。研究表明，本发明所述的铁苋菜二萜类化合物其具有显著的抗炎以及抗氧化作用；尤其是，通过本发明所述方法制备得到的铁苋菜提取物，其抗炎以及抗氧化作用要大幅高于铁苋菜二萜类化合物，同样也要大幅高于采用常规方法制备得到的铁苋菜提取物。

由于本发明所述的铁苋菜二萜类化合物以及铁苋菜提取物具有抗炎以及抗氧化作用；因此，将其作为有效成分，用于制备具有抗炎以及抗氧化作用化妆品、护肤品、药物或保健品具有重要的应用价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例的附图，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为铁苋菜二萜-I ESI-MS谱图。

图2为铁苋菜二萜-I

图3为铁苋菜二萜-I

图4为铁苋菜二萜-IDEPT谱图。

图5为铁苋菜二萜-II ESI-MS谱图。

图6为铁苋菜二萜-II

图7为铁苋菜二萜-II

图8为铁苋菜二萜-IIDEPT谱图。

图9为铁苋菜二萜-III ESI-MS谱图。

图10为铁苋菜二萜-III

图11为铁苋菜二萜-III

图12为铁苋菜二萜-III DEPT谱图。

图13为铁苋菜二萜-IV HR-ESI-MS谱图。

图14为铁苋菜二萜-IV

图15为铁苋菜二萜-IV

图16为铁苋菜二萜-IV DEPT谱图。

图17为铁苋菜二萜-V HR-ESI-MS谱图。

图18为铁苋菜二萜-V

图19为铁苋菜二萜-V

图20为铁苋菜二萜-V DEPT谱图。

图21为铁苋菜提取物提高NCM460细胞活力及对LPS诱导的NCM460细胞内ROS、细胞上清液中MDA、GSH含量及抗氧化酶SOD活性的影响实验结果图。

图22铁苋菜提取物对LPS诱导的NCM460细胞血清炎性因子含量的影响实验结果图。

图23铁苋菜提取物对LPS诱导的NCM460细胞的iNOS、COX-2及MAPK/NF-κB/TLR4通路蛋白表达的影响实验结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1铁苋菜二萜类化合物的制备

①、取4000g新鲜铁苋菜加水6L粉碎机粉碎得粉碎液，将粉碎液在10℃离心10min，收集上清，依次通过孔径为1kDa、1.5kDa、3kDa、3.5kDa、5kDa、10kDa、15kDa、30kDa、35kDa、50kDa的透析膜透析并将透析液冻干，得不同分子量的铁苋菜提取物。

②、将分子量小于1kDa的铁苋菜提取物200g溶于1000mL水并依次用石油醚、乙酸乙酯及氯仿萃取并分别真空浓缩萃取液得提取物。

③、将步骤②所得乙酸乙酯萃取物经大孔树脂(HZ-818)柱色谱分离，依次用3倍柱体积的乙醇溶液(15％，30％、45％、60％、75％及95％)梯度洗脱，洗脱液冻干得不同组分。

④、将步骤③所得45％乙醇洗脱液浓缩干燥后，经葡聚糖凝胶柱(Sephadex G15，5.0×90cm)色谱分离，用体积分数为45％的乙醇水溶液洗脱，收集每200mL洗脱液作为1个组分，共收集15个组分并冷冻干燥；并依次编号成活性组分-1～15。

⑤、将步骤④所得的活性组分-10进一步经不同高效液相色谱(HPLC)分离纯化，得铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV、铁苋菜二萜-V；

其中，铁苋菜二萜-I的HPLC制备条件为：采用C18柱(9.4*250mm，5μm，安捷伦，USA)；流动相为：A：水(含0.1％三氟乙酸)，B：甲醇；梯度洗脱程序为：0-15min 42％B，15-25min 55％B，25-30min 70％B；进样量为：300μL；检测波长为：260nm，300nm；流速：10.0mL/min；柱温：20℃；

收集保留时间为11.00min的色谱峰对应的洗脱液，浓缩干燥后得铁苋菜二萜-I；

铁苋菜二萜-II的HPLC制备条件为：采用C18柱(9.4*250mm，5μm，安捷伦，USA)；流动相为：A：水(含0.1％三氟乙酸)，B：甲醇；梯度洗脱程序为：0-15min 38％B，15-25min45％B，25-30min 60％B；进样量为：300μL；检测波长为：260nm，300nm；流速：10.0mL/min；柱温：20℃；

收集保留时间为13.02min的色谱峰对应的洗脱液，浓缩干燥后得铁苋菜二萜-II；

铁苋菜二萜-III的HPLC制备条件为：采用C18柱(9.4*250mm，5μm，安捷伦，USA)；流动相为：A：水(含0.1％三氟乙酸)，B：甲醇；梯度洗脱程序为：0-10min 55％B，11-25min75％B，25-30min 80％B；进样量为：300μL；检测波长为：260nm，300nm；流速：10.0mL/min；柱温：20℃；

收集保留时间为9.32min的色谱峰对应的洗脱液，浓缩干燥后得铁苋菜二萜-III；

铁苋菜二萜-IV的HPLC制备条件为：采用C18柱(9.4*250mm，5μm，安捷伦，USA)；流动相为：A：水(含0.1％三氟乙酸)，B：甲醇；梯度洗脱程序为：0-10min 60％B，1125min 65％B，25-30min 75％B；进样量为：300μL；检测波长为：260nm，300nm；流速：10.0mL/min；柱温：20℃；

收集保留时间为7.04min的色谱峰对应的洗脱液，浓缩干燥后得铁苋菜二萜-IV；

铁苋菜二萜-V的HPLC制备条件为：采用C18柱(9.4*250mm，5μm，安捷伦，USA)；流动相为：A：水(含0.1％三氟乙酸)，B：甲醇；梯度洗脱程序为：0-8min 50％B，9-25min 50％B，25-30min 75％B；进样量为：300μL；检测波长为：260nm，300nm；流速：10.0mL/min；柱温：20℃；

收集保留时间为10.06min的色谱峰对应的洗脱液，浓缩干燥后得铁苋菜二萜-V。

铁苋菜二萜-I：淡黄色油状物，ESI-MS(图1)m/z 623.5[M+Na]

1

结合以上信息，最终鉴定化合物的结构如式I所示，本发明中命名为铁苋菜二萜-I，

表1铁苋菜二萜-I

铁苋菜二萜-II：淡黄色油状物ESI-MS(图5)m/z 611.3[M+Na]

1

结合以上信息，最终鉴定化合物的结构如式II所示，本发明中命名为铁苋菜二萜-II，

表2铁苋菜二萜-II

铁苋菜二萜-III：白色粉末，ESI-MS(图9)m/z 511.5[M+Na]

1

结合以上信息，最终鉴定化合物的结构如式III所示，本发明中命名为铁苋菜二萜-III，

表3铁苋菜二萜-III

/>

铁苋菜二萜-IV：白色粉末，HR-ESI-MS(图13)m/z 513.2463[M+Na]

1

结合以上信息，最终鉴定化合物的结构如式IV所示，本发明中命名为铁苋菜二萜-IV，

表4铁苋菜二萜-IV

/>

铁苋菜二萜-V：白色粉末，HR-ESI-MS(图17)m/z 539.2640[M+Na]

1

结合以上信息，最终鉴定化合物的结构如式V所示，本发明中命名为铁苋菜二萜-V，

表5铁苋菜二萜-V

/>

实施例2铁苋菜提取物的制备

(1)取铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV或铁苋菜二萜-V，添加水，然后再添加铁苋菜粗提物，混合均匀后，再经冻干后得铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物或铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物；

铁苋菜二萜-I、铁苋菜二萜-II、铁苋菜二萜-III、铁苋菜二萜-IV或铁苋菜二萜-V与水以及铁苋菜粗提物的1:20:8；

所述的铁苋菜粗提物通过如下方法制备得到：取4000g新鲜铁苋菜加水6L粉碎机粉碎得粉碎液，将粉碎液在10℃离心；取上清液先用孔径为30kDa的透析膜透析，然后再用孔径为35kDa的透析膜透析；取透过35kDa的透析膜的透析液，浓缩干燥后即得所述的铁苋菜粗提物；

(2)将铁苋菜二萜-I-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-II-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-III-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-IV-铁苋菜包裹物、铁苋菜二萜-V-铁苋菜包裹物按质量比为1:11.8:13.9:6.95:12.1混合均匀后即得所述的铁苋菜提取物。

效果实施例

人结肠上皮细胞(NCM460细胞)用含10％FBS的RPMI-1640培养基于37℃5％CO

实验分组：空白对照组、铁苋菜二萜-I组、铁苋菜二萜-II组、铁苋菜二萜-III组、LPS暴露组、铁苋菜二萜-IV组、铁苋菜二萜-V组、市售铁苋菜提取物组及本发明铁苋菜提取物组。

结果如图21A所示，与空白对照组(空白组细胞活力设为100％)相比，LPS刺激使NCM460细胞活力显著降低。相比于空白对照组，LPS组细胞活力降低31.1％(p<0.01)。而与LPS组相比，铁苋菜二萜化合物及本发明铁苋菜提取物均能提高NCM460细胞活力。相比于LPS组，铁苋菜二萜-I组、铁苋菜二萜-II组、铁苋菜二萜-III组、铁苋菜二萜-IV组、铁苋菜二萜-V组NCM460细胞活力分别提高12.4％(p<0.05)、10.8％(p<0.05)、9.91％、10.4％(p<0.05)、10.1％(p<0.05)。而相比于铁苋菜二萜化合物，本发明铁苋菜提取物能够更好的提高NCM460细胞活力。相比于LPS暴露组，铁苋菜提取物组NCM460细胞活力提高21.3％(p<0.01)，NCM460细胞活力提高最为明显。且相比于市售铁苋菜提取物，本发明铁苋菜提取物具有更优秀的提高NCM460细胞活力活性。在同等浓度的铁苋菜二萜化合物共培养条件下，本发明铁苋菜提取物提高NCM460细胞活力的活性最强。我们推测，铁苋菜提取物中的活性二萜可发挥协同作用，能够更好的减轻LPS暴露导致的炎性损伤进而提高NCM460细胞活力。

进一步分析实验结果显示(图21B,C)，相比于空白组，LPS组NCM460细胞内ROS含量及细胞上清液中MDA含量显著上升。相比于空白组，LPS组NCM460细胞内ROS含量及细胞上清液中MDA含量分别增加251.3％(p<0.01)及167.3％(p<0.01)。说明，LPS暴露使NCM460细胞MDA、ROS等氧化性物质过量积累，进而诱发氧化损伤并造成NCM460细胞活力显著降低。而与LPS组相比，本发明铁苋菜提取物能有效抑制LPS暴露诱导的NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量增加。相比于LPS组，铁苋菜二萜-I组NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量分别减少27.6％(p<0.01)、20.9％(p<0.01)；相比于LPS组，铁苋菜二萜-II组NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量分别减少23.9％(p<0.01)、12.6％(p<0.05)；相比于LPS组，市售铁苋菜提取物组NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量分别减少14.9％(p<0.01)、9.73％；其中，与市售铁苋菜提取物组相比，本发明中的铁苋菜二萜化合物具有更优秀的抗炎活性，能够更好的抑制LPS暴露诱导的NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量增加。而相比于LPS组，本发明铁苋菜提取物组NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量分别减少51.8％(p<0.01)、32.2％(p<0.01)。本发明铁苋菜提取物在相同剂量条件下具有比本发明铁苋菜二萜类化合物单体及市售铁苋菜提取物更好的抑制LPS暴露诱导的NCM460细胞内ROS及细胞上清液中MDA含量增加的活性。

进一步分析实验结果(图21D)发现，相比于空白组，LPS组NCM460细胞上清液中GSH含量显著减少。相比于空白组，LPS组NCM460细胞上清液中GSH含量减少28.7％(p<0.01)。而与LPS组相比，本发明铁苋菜提取物能有效抑制LPS暴露诱导的NCM460细胞上清液中GSH含量降低。其中，相比于LPS组，铁苋菜二萜-I组NCM460细胞上清液中GSH含量增加12.3％(p<0.05)；相比于LPS暴露组，铁苋菜二萜-II组NCM460细胞上清液中GSH含量增加10.4％(p<0.05)；相比于LPS组，市售铁苋菜提取物组NCM460细胞上清液中GSH含量增加8.11％；进一步分析实验结果发现，相比于LPS组，本发明铁苋菜提取物组NCM460细胞上清液中GSH含量增加21.8％(p<0.01)。其中，与市售铁苋菜提取物组相比，本发明中的铁苋菜二萜类化合物能够更好的抑制LPS暴露诱导的NCM460细胞上清液中GSH含量减少。相比于市售铁苋菜提取物或本发明铁苋菜类化合物，本发明铁苋菜提取物具有更优秀的提高NCM460细胞活力，能够更好的抑制LPS暴露导致的NCM460细胞内ROS含量及MDA含量升高，提高细胞中抗氧化性物质如GSH的含量。我们推测，本发明铁苋菜提取物中的活性二萜类化合物能够发挥协同作用并更好的抑制LPS暴露导致的NCM460细胞氧化性损伤。

进一步分析实验结果(图21E)发现，LPS暴露后，与空白组相比，NCM460细胞上清液中抗氧化酶SOD活性显著降低，结合LPS暴露对NCM460细胞内ROS、MDA等的影响实验结果，说明LPS暴露诱导NCM460细胞氧化应激并使其受到严重的氧化损伤。与空白组相比，LPS组NCM460细胞抗氧化酶SOD活性下降31.8％(p<0.01)。而本发明铁苋菜提取物组的抗氧化酶SOD活性却显著高于LPS组，相比于LPS组，本发明铁苋菜提取物组抗氧化酶SOD活性增加21.3％(p<0.01)。同时，相比于同等浓度的铁苋菜二萜类化合物及市售铁苋菜提取物，本发明铁苋菜提取物组NCM460细胞抗氧化酶SOD活性提升最为明显。我们推测，铁苋菜提取物中的活性二萜类化合物能够发挥协同作用并更好的提高NCM460细胞抗氧化酶SOD的活性，进而能够更好的提高NCM460细胞的抗氧化损伤活性。

进一步分析本发明铁苋菜提取物对LPS诱导的NCM460细胞炎性因子的影响实验结果(图22)可知，与空白组相比，LPS组细胞上清液中炎性因子(IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α)含量显著增加。相比于空白组，LPS组细胞上清液中炎性因子IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α含量分别增加194.2％(p<0.01)、231.3％(p<0.01)、97.7％(p<0.01)、171.3％(p<0.01)及311.5％(p<0.01)。本部分实验结果说明，LPS暴露在诱发NCM460细胞氧化损伤的同时也诱发NCM460细胞炎症，进而使细胞炎性细胞因子分泌增加并对NCM460细胞造成炎性损伤。而经本发明铁苋菜二萜类化合物、市售铁苋菜提取物或本发明铁苋菜提取物治疗后，尤其是本发明铁苋菜提取物组，与LPS组相比，NCM460细胞上清液中炎性因子IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α含量增加被显著抑制。其中，与LPS刺激组相比，本发明铁苋菜二萜-I组炎性因子IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α含量分别减少28.2％(p<0.01)、10.2％(p<0.05)、20.8％(p<0.01)、32.4％(p<0.01)及28.5％(p<0.01)；与LPS刺激组相比，市售铁苋菜提取物组炎性因子IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α含量分别减少18.0％(p<0.01)、5.74％、13.1％(p<0.05)、11.8％(p<0.05)及18.2％(p<0.01)；与LPS刺激组相比，本发明铁苋菜提取物组炎性因子IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α含量分别减少42.5％(p<0.01)、21.8％(p<0.01)、38.0％(p<0.01)、43.5％(p<0.01)及55.7％(p<0.01)。说明本发明铁苋菜提取物能够有效抑制LPS暴露诱发的NCM460细胞炎性因子过量积累，减轻LPS刺激导致的NCM460细胞炎性损伤。

进一步分析实验结果发现，本发明铁苋菜提取物抑制LPS诱发的NCM460细胞炎性因子IL-6、IL-1β、NO、PGE2及TNF-α含量升高的活性强于同等浓度的铁苋菜二萜化合物或市售铁苋菜提取物。我们推测，本发明铁苋菜提取物中的铁苋菜二萜类化合物可通过协同作用提升NCM460细胞中抗氧化酶活性并提高NCM460细胞清除氧化性物质，如MDA、ROS的能力，并能够提高NCM460细胞抑制炎性因子过量积累的活性，进而能够更好的提高NCM460细胞的抗炎活性，提高NCM460细胞的抗炎能力。

与此同时，我们还检测了本发明铁苋菜提取物对LPS诱导的NCM460细胞iNOS、COX-2及MAPK/NF-κB/TLR4等通路相关蛋白表达的影响。分析实验结果显示(图23A、B)，与空白组比较，LPS组iNOS、COX-2蛋白显著增高(p<0.01)，结合LPS暴露诱发NO及PGE2分泌增加，我们推测，LPS暴露诱导细胞iNOS、COX-2蛋白表达升高，进而诱发NO及PGE2分泌增加。而与LPS组比较，本发明铁苋菜提取物组iNOS、COX-2蛋白表达显著减少，且LPS暴露诱发NO及PGE2分泌增加也被显著抑制，我们推测，本发明铁苋菜提取物可能是通过抑制LPS暴露诱导的细胞iNOS、COX-2蛋白过量表达，进而抑制NO及PGE2分泌增加发挥活性的。

分析实验结果显示(图23C、D、E、F、G)，与空白组比较，LPS组TLR4、p-JNK、p-NF-κB蛋白表达显著增加(p<0.01)，而JNK及NF-κB蛋白表达显著减少(p<0.01)，说明LPS暴露可能通过激活细胞MAPK/NF-κB/TLR4通路进而诱发细胞炎症；而与LPS组比，本发明铁苋菜提取物组TLR4、p-JNK、p-NF-κB蛋白表达降低而JNK及NF-κB蛋白表达增加。本部分实验结果表明，铁苋菜提取物可通过调控MAPK/NF-κB/TLR4通路相关蛋白表达发挥抑制LPS暴露诱导的细胞炎性损伤进进而发挥保护活性。且深一步分析实验结果发现，铁苋菜提取物对抑制LPS诱导的NCM460细胞TLR4、p-JNK、p-NF-κB蛋白表达增高及缓解LPS诱导的NCM460细胞JNK及NF-κB蛋白表达抑制具有比本发明铁苋菜二萜类化合物及其市售铁苋菜提取物更好的活性。我们推测，本发明中铁苋菜提取物中的活性二萜类化合物可通过协同作用能够更好的调控MAPK/NF-κB/TLR4通路蛋白及iNOS、COX-2蛋白的表达发挥保护活性。

以上实施例说明，本发明铁苋菜提取物能够提高NCM460细胞在炎性损伤条件下的细胞活力，提高NCM460细胞的抗氧化及抗炎性损伤的活性。且本实施例实验结果表明，相同浓度条件下，铁苋菜提取物具有比铁苋菜二萜化合物或市售铁苋菜提取物更好的抗氧化、抗炎活性。我们推测本发明铁苋菜提取物中的活性二萜化合物能够通过协同效应更好的发挥抗氧化、抗炎活性。

以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。