以BRD7为靶点在制备肥胖相关精神疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种以含溴区结构蛋白BRD7为靶点在制备肥胖相关精神疾病药物中的应用。

背景技术

brd7基因编码BRD7蛋白，其包含一个高度保守的bromodomain结构域，能够识别组蛋白H3并调控其乙酰化，参与基因的转录调控。BRD7被证实为SWI/SNF染色质重塑复合物的核心组分，通过影响下游基因的转录活性和表达参与疾病的发生发展。我们前期的研究发现全敲除BRD7可导致精子发生障碍和认知功能障碍。有研究报道BRD7与肥胖、葡萄糖稳态、胰岛素信号通路密切相关，例如BRD7通过结合PI3K调节亚基调控XBP1的活性，从而调控葡萄糖稳态；并且BRD7抑制剂处理可恢复β细胞的功能。BRD7在免疫细胞中普遍表达，然而目前BRD7的免疫调控功能尚未被完全阐明。在人类和小鼠中，肥胖都会导致免疫状态的转变。越来越多的研究揭示了肥胖和抑郁相伴相生。在对部分抑郁人群的研究发现肥胖的持续免疫激活可能会导致情绪障碍。因此，肥胖的脂代谢紊乱介导的免疫系统反应与焦虑抑郁症状有着密不可分的关系。研究表明血脂和脂蛋白的浓度与抑郁和焦虑的性状测量呈反比关系，且低胆固醇与抑郁的自杀未遂者的状态和特质攻击性有关，即低脂蛋白浓度人群的抑郁症、焦虑症、自杀企图和暴力行为的发生率明显增加。基于BRD7在肥胖代谢稳态调控中的重要作用，阐明BRD7在免疫稳态和肥胖相关情绪障碍中的功能，可有效防治肥胖相关精神疾病。

应该注意，上面对技术背景的介绍只是为了方便对本申请的技术方案进行清楚、完整的说明，并方便本领域技术人员的理解而阐述的。不能仅仅因为这些方案在本申请的背景技术部分进行了阐述而认为上述技术方案为本领域技术人员所公知。

发明内容

本发明的目的是提供一种以含溴区结构蛋白BRD7为靶点在制备肥胖相关精神疾病药物中的应用，本申请通过实验验证了BRD7小分子抑制剂与采用gRNA敲除BRD7一样都对肥胖导致的相关精神疾病具有很好的治疗效果。本发明证明通过抑制T细胞BRD7基因表达或抑制BRD7蛋白活性能显著改善肥胖诱导的焦虑和抑郁样行为。本发明揭示了BRD7基因在免疫细胞和肥胖相关精神疾病中的新角色，并以BRD7基因或蛋白为靶点设计制备治疗肥胖相关精神疾病的药物或其他治疗手段。

为了达到上述目的，本发明提供一种以含溴区结构蛋白BRD7为靶点在制备肥胖相关精神疾病药物中的应用，所述药物为BRD7小分子抑制剂，所述BRD7小分子抑制剂BI-7273，分子量353.51，CAS号1883429-21-7，分子式C

依照本发明的一个方面，所述以含溴区结构蛋白BRD7为靶点为采用化学药物降低BRD7的蛋白活性或者使BRD7沉默。

本发明的有益效果：

本申请的T细胞敲除BRD7基因表达可显著改善肥胖诱导的焦虑和抑郁样行为。

本发明实验证明条件性敲除T细胞BRD7可显著改善高脂饮食诱导的焦虑抑郁样行为。本发明同时证明了通过抑制T细胞BRD7基因表达，增加高脂饮食小鼠血液低密度脂蛋白胆固醇的浓度，而对血糖，总胆固醇，高密度脂蛋白胆固醇浓度无影响，说明BRD7可能通过T细胞免疫调节维持代谢稳态，进而起到治疗肥胖相关焦虑、抑郁情绪的作用，并据此研发了新的精神疾病治疗方式：BRD7基因特异性siRNA敲降BRD7的表达，小分子抑制剂抑制BRD7蛋白活性。本申请以BRD7为靶点设计了治疗和/预防肥胖相关精神疾病的药物。揭示了BRD7在免疫细胞和免疫系统中的新角色，并为防治肥胖相关精神疾病提供了新的治疗靶标和有效新药。

附图说明

图1为本发明实施例1所述的构建BRD7-CKO小鼠的工艺流程图；

图2为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂后，小鼠体重情况；

图3(a)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行旷场实验，总的运动距离情况；图3(b)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行旷场实验，在中央格的时间百分比情况；

图4(a)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行高架十字迷宫实验，分析总的运动距离情况；图4(b)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行高架十字迷宫实验，在开放臂的时间百分比情况；

图5(a)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，分析小鼠在家笼摄食的潜伏期情况；图5(b)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，分析小鼠在新奇环境摄食的潜伏期情况；

图6为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行悬尾实验，其不动时间百分比情况；

图7为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，小鼠体重情况；

图8(a)为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，进行旷场实验，其总的运动距离情况；图8(b)为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，进行旷场实验，其在中央格的时间百分比情况；

图9(a)为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，进行高架十字迷宫实验，其总的运动距离情况；图9(b)为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，进行高架十字迷宫实验，其在开放臂的时间百分比情况；

图10(a)为本发明实施例2的为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，分析小鼠在家笼摄食的潜伏期情况；图10(b)为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，分析小鼠在新奇环境的潜伏期情况；

图11为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后进行悬尾实验，其不动时间百分比情况；

图12A为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的血糖情况；图12B为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的总胆固醇情况；图12C为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的高密度脂蛋白-胆固醇情况；图12D为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的低密度脂蛋白-胆固醇情况；图12E为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的高密度脂蛋白-胆固醇与总胆固醇的比值情况；图12F为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的非高密度脂蛋白胆固醇的浓度情况。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有定义，下文所用专业术语和本领域专业技术人员所理解的含义一致；除非特殊说明，本文所涉及的原料、试剂均可从市场购买，或通过公知的方法制得。

需要说明的是，“Brd7-201”表示Brd7基因有7个转录本，本申请使用转录本是201这个转录本。

需要说明的是，本申请敲除BRD7基因小鼠是基于C57BL/6小鼠进行敲除其BRD7基因，简称BRD7-CKO小鼠；本申请的C57BL/6小鼠简称WT小鼠。

需要说明的是，本申请的BRD7基因特异性siRNA为gRNA，具体包括gRNA1和gRNA2。gRNA1的5’-3’序列号为：5’-AGTGTGACCGTGAGACAGCG-3’，如SEQ ID NO.6所示；gRNA2的5’-3’序列号为：5’-ATGTGCAAGGGCCAACCGAC-3’，如SEQ ID NO.7所示。

实施例1

利用CRISPR/Cas9技术构建T细胞敲除BRD7小鼠(BRD7-CKO小鼠)。流程图如图1所示。

Brd7基因有7个转录本，Brd7基因的DNA序列的正义链的序列号如SEQ ID NO.1所示。根据Brd7基因的结构，Brd7-201(ENSMUST00000034085.7)转录本的第3外显子-第4外显子为敲除区域，第3个外显子的序列号如SEQ ID NO.2所示，第4个外显子的序列号如SEQ IDNO.3所示。该区域包含188bp的编码序列，敲除该区域将导致蛋白质功能的破坏。我们使用CRISPR/Cas9技术来编辑Brd7基因。简要过程如下：CRISPR/Cas9系统gRNA被微注射到C57BL/6JGpt小鼠的受精卵中，该受精卵生产的小鼠为阳性F0小鼠，并通过PCR和测序进行确认。通过将阳性F0代小鼠与C57BL/6JGpt小鼠交配，获得稳定的F1代小鼠模型。稳定的F1代小鼠(携带flox小鼠)与表达Cre重组酶的小鼠(通用的工具小鼠)交配后将BRD7基因的3-4号外显子敲除，导致brd7在T细胞中的功能丧失。gRNA设计如下：以序列号如SEQ ID NO.1所示的Brd7基因的DNA序列的正义链的BRD7Brd7-201(ENSMUST00000034085.7)转录本编辑目标序列，Loxp插入位点分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。其中，CRISPR/Cas9系统的gRNA包括gRNA1和gRNA2，其分别用于切割第3外显子和第4外显子，gRNA1的5’-3’序列号为：5’-AGTGTGACCGTGAGACAGCG-3’，如SEQ ID NO.6所示；gRNA2的5’-3’序列号为：5’-ATGTGCAAGGGCCAACCGAC-3’，如SEQ ID NO.7所示。

需要说明的是，3-4号外显子两侧插入Loxp标签，Cre识别两侧插入的Loxp标签并将标签内的第3外显子-第4外显子的敲除区域，达到基因编辑的目的。

需要说明的是，由于本申请人设备有限，我们把上述BRD7基因的3-4号外显子敲除的方案提供给江苏集萃药康生物科技有限公司进行代加工，制备得到敲除BRD7基因的3-4号外显子的小鼠(BRD7-CKO小鼠)用于本申请的实验，其具体参加证据1。

需要说明的是，本申请的上述小鼠只是用于实验室目的，没有用于商业用途，其CRISPR/Cas9系统的gRNA在本申请之前尚未公开。

需要说明的是，本申请的CRISPR/Cas9系统的gRNA的合成为碱基合成，其为序列合成的通用方法，在此不进行赘述。

实施例2

建立高脂饮食模型(HFD)模型：用刚断奶4周龄的C57BL/6(WT)或实施例1的BRD7敲除(BRD7-CKO)小鼠一直喂养HFD(60％脂肪，#12492,Research Diets)，持续32周，自由饮水。观测小鼠体重的变化以及检测血脂血糖等相关指标。

实施例3

HFD模型建立后，自造模当天起(记为Day 0)，随机分为两组，每组10只，标记为对照组(saline组)和BI-727组。BI-727组每只小鼠给予每日口服180mg/kg BI-7273抑制剂，对照组给予每只小鼠口服相同体积的饮用水。对两组小鼠进行焦虑和抑郁样行为进行检测。

实施例4

HFD模型建立后进行旷场实验(OFT)：通过OFT评估小鼠的活动度和焦虑样行为。检测装置为40cm×40cm×40cm的旷场，旷场被平均分割为25格，其中最中央的9格为中央区域。实验前将小鼠放于行为室中适应1小时，待适应结束后开始行为学检测。实验开始时，将小鼠放入旷场正中央区域，使小鼠在旷场内自由探索5min。通过摄像系统及Smart 3.0软件，记录5min内小鼠在旷场中的运动距离以及中央区域停留的时间百分比。每只小鼠测试完毕后，使用75％的医用酒精消毒，减少旷场内小鼠的气味，以免残留的异味对下一只小鼠的检测结果造成影响。小鼠总运动距离可以作为反映活度指标。小鼠在中央区域停留时间长短可以反映小鼠的焦虑样行为水平。小鼠在中央区域停留时间越短，说明小鼠的焦虑样行为水平高。

实施例5

HFD模型建立后进行高架实验(EPM)：通过EPM评估小鼠的焦虑样行为。高架十字迷宫由两个开放臂(30cm×8cm)，两个闭合臂(30cm×8cm)和一个中间平台(8cm×8cm)组成。高架十字迷宫离地面50cm。实验前将小鼠放于行为室中适应1小时，待适应结束后开始行为学检测。实验开始时，将小鼠面向开放臂置于中间平台，通过摄像系统及Smart 3.0软件，记录5min内小鼠运动距离、进入开放臂的时间、进入闭合臂的时间、进入开放臂次数、进入闭合臂次数等。两次检测之间，使用75％的酒精清洁高架。小鼠在开放臂停留时间长短可以反映小鼠的焦虑样行为水平。小鼠在开放臂停留时间，说明小鼠的焦虑样行为水平高。

实施例6

HFD模型建立后进行新奇环境抑制摄食(NSFT)：通过NSFT评估小鼠的抑郁样行为。在行为检测前小鼠被禁食24h，但保证自由饮水。实验前将小鼠放于行为室中适应1小时，待适应结束后开始行为学检测。在1颗食物放在新环境(检测装置：40cm×40cm×40cm)正中间，随后将小鼠放置在检测装置角落，记录小鼠在600s内的摄食潜伏期(定义为小鼠咬第一口食物的时间)。此外，立即检测小鼠在家笼中摄食潜伏期，以评估HFD饲养以及T细胞敲除BRD7对摄食动力的影响。实验中小鼠摄食潜伏期越长，小鼠的抑郁样水平越高。

实施例7

HFD模型建立后进行悬尾实验(TST)：通过TST评估小鼠的抑郁样行为。实验前将小鼠放于行为室中适应1小时，待适应结束后开始行为学检测。小鼠尾巴尖端(1cm)处绑上胶带，并悬挂在离地面20cm处，进行6min实验检测，通过Smart 3.0行为学视频采集和分析系统记录，其中前2min为小鼠适应时间，后4min则记录小鼠不动时间百分比。不动时间定义为小鼠在悬挂时停止挣扎，表现出行为绝望。实验中小鼠不动时间越长，小鼠的抑郁样水平越高。

结果分析：

图2为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂后，小鼠体重情况。由图2可知，高脂饮食可显著增加小鼠的体重，但是在高脂饮食的saline组和BI-727组小鼠的体重没有显著差异；

图3为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行旷场实验，总的运动距离和在中央格的时间百分比情况。由图3可知，四组小鼠总的运动距离没有差异；BRD7抑制剂组(BI-727组)小鼠在中央区域停留的时间百分比显著增加，说明抑制BRD7蛋白活性不影响小鼠活动度但可缓解HFD小鼠焦虑样行为。

图4为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行高架十字迷宫实验，分析总的运动距离和在开放臂的时间百分比情况。由图4可知，四组小鼠总的运动距离没有差异。BRD7抑制剂组(BI-727组)小鼠在开放臂的时间百分比比显著增加，说明抑制BRD7蛋白活性不影响小鼠活动度但可缓解HFD小鼠焦虑样行为。

图5为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，分析小鼠在家笼和在新奇环境摄食的潜伏期情况。由图5可知，四组小鼠在家笼摄食的潜伏期无显著差异，而在新奇环境，相比saline组的HFD小鼠，BRD7抑制剂组(BI-727组)小鼠摄食的潜伏期显著降低，说明抑制BRD7蛋白活性可缓解HFD小鼠抑郁样行为。

图6为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，对照组以普通饲料喂养8个月并进行实施例3的分组进行口服饮用水和BI-7273抑制剂，喂养后进行悬尾实验，其不动时间百分比情况。由图6可知，正常饲料喂养的saline和BRD7抑制剂组小鼠的不动百分比无显著差异；高脂喂养后，saline组小鼠的不动百分比显著增加，而BRD7抑制剂组(BI-727组)小鼠的不动百分比显著降低，说明抑制BRD7蛋白活性可缓解HFD小鼠抑郁样行为。

图7为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，小鼠体重情况。由图7可知，高脂饮食可显著增加小鼠的体重，但是在高脂饮食的WT组和BRD7-CKO小鼠的体重没有显著差异。

图8为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，进行旷场实验，其总的运动距离和在中央格的时间百分比的情况。由图8可知，四组小鼠总的运动距离没有差异。T细胞敲除BRD7的HFD小鼠在中央区域停留的时间百分比显著增加，说明T细胞敲除BRD7不影响小鼠活动度但可缓解HFD小鼠焦虑样行为。

图9为本发明实施例2的WT小鼠和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养后，进行高架十字迷宫实验，其总的运动距离和在开放臂的时间百分比情况。由图9可知，四组小鼠总的运动距离没有差异。T细胞敲除BRD7的HFD小鼠在开放臂的时间百分比比显著增加，说明T细胞敲除BRD7不影响小鼠活动度但可缓解HFD小鼠焦虑样行为。

图10为本发明实施例2的为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，分析小鼠在家笼和在新奇环境摄食的潜伏期情况。由图10可知，四组小鼠在家笼摄食的潜伏期无显著差异，而在新奇环境，相比WT组的HFD小鼠，T细胞敲除BRD7的HFD小鼠摄食的潜伏期显著降低，说明T细胞敲除BRD7可缓解HFD小鼠抑郁样行为。

图11为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后进行悬尾实验，其不动时间百分比情况。由图11可知，正常饲料喂养的WT和BRD7-CKO小鼠的不动百分比无显著差异；高脂喂养后，WT组小鼠的不动百分比显著增加，而BRD7-CKO小鼠的不动百分比显著降低，说明T细胞敲除BRD7可缓解HFD小鼠抑郁样行为。

图12为本发明实施例2的WT小鼠(4周龄)和BRD7-CKO小鼠高脂饲料(65％脂肪)喂养8个月，对照组以普通饲料喂养8个月，喂养后外周血的血糖、、总胆固醇、高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、高密度脂蛋白-胆固醇与总胆固醇的比值、非高密度脂蛋白胆固醇的浓度情况。由图12A可知，脂饮食对血糖没有显著影响；由图12B可知，相比普通饲料喂养，高脂饮食显著增加总胆固醇的浓度，但WT组和BRD7CKO组之间没有显著差异；由图12C可知，相比普通饲料喂养，高脂饮食显著增加高密度脂蛋白-胆固醇的浓度，但WT组和BRD7CKO组之间没有显著差异；由图12D可知，相比普通饲料喂养，高脂饮食显著增加BRD7CKO组低密度脂蛋白-胆固醇的浓度，且BRD7CKO组显著高于WT组，然而WT小鼠的低密度脂蛋白-胆固醇的浓度在普通饲料喂养和高脂饮食之间没有显著差异；由图12E可知，高脂饮食对高密度脂蛋白-胆固醇与总胆固醇的比值没有显著影响；由图12F可知，相比普通饲料喂养，高脂饮食显著增加非高密度脂蛋白胆固醇的浓度，但WT组和BRD7CKO组之间没有显著差异。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域技术的技术人员在本发明公开的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。