生物化学、啤酒、烈性酒、果汁酒、醋、微生物学、酶学、突变或遗传工程

本发明提供了一种用于检测基因多态性的荧光淬灭PCR方法，采用荧光激发组和荧光淬灭组；反应体系中含有具有5’→3’外切酶活性的DNA聚合酶和DNA连接酶；其中，荧光激发组探针为一条5’端标记荧光基团、3’端标记淬灭基团的探针Tc；荧光淬灭组包括两条探针：5’端荧光基团标记的探针TF和5’端磷酸修饰、3’端淬灭基团标记的探针TQ，探针TF的5’端有若干个碱基为2F‑RNA和/或锁核酸修饰用于防止被Taq DNA聚合酶切割；探针Tc和探针TF的Tm值不同，标记的荧光基团相同；采用的扩增程序在扩增完成后，还包括一个高温过程以使荧光淬灭组探针从模板上分离，使模板继续延伸。该方法能够仅采用一条荧光通道、使用荧光曲线的形态判定基因的多态性，操作简单。

本发明公开了一种酱香型白酒防水窖池，涉及白酒生产技术领域，包括装置主体、发酵仓、底板、导流槽、排水管以及竖管，所述装置主体内部设有发酵仓，所述装置主体顶部外侧与支撑板内侧焊接，且支撑板表面通过螺栓安装有驱动电机，所述驱动电机设有两个，两个所述驱动电机输出端外部套装有转轴，通过四根牵引绳能够同步对底板进行提起，进而有利于使底板能够带动发酵物向上移动，进而使发酵物能够向上移动，进而有利于在发酵池外部便能够对发酵物进行收集，避免进入到发酵池内部进行清理，进而提高了便捷性，而解决了现有窖池在进行发酵后将发酵物取出时，需要进入窖池手动将其向外输送，效率较低且费时费力的问题。

本发明公开了一株发酵产高透明型黄原胶的野油菜黄单胞菌及其应用，属于微生物技术领域，该野油菜黄单胞菌为Xanthomonas campestris F417‑6，并于2023年05月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：63459。本发明提供的野油菜黄单胞菌，黄原胶产胶率提升15%~30%，发酵所得黄原胶水溶液的透光率相比于原始菌株提升30~50%，对该野油菜黄单胞菌进行遗传稳定性分析，进行连续传代培养，每隔2次传代测定黄原胶的产胶率，可以看出，本发明提供的野油菜黄单胞菌在连续传代12次后的黄原胶产胶率和胶品质变化幅度不显著，证明其稳定性良好，可以作为工业生产菌株进行高透明型黄原胶的放大化生产。

本发明公开了一种棉花细胞壁相关基因GH_A07G1682的克隆方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的棉花细胞壁相关基因GH_A07G1682的克隆方法，具有较高的准确性和可重复性，可以为棉花产业的发展提供理论基础和技术支持，具有重要的应用价值，可以增加棉花产量和品质，提高棉花的经济价值，还可以应用于棉花的抗逆性、抗病性等方面的研究，具有广泛的研究应用前景。

本发明提供了一种无饲养层体外高效扩增NK细胞培养基及其方法，属于细胞培养领域。本发明培养基包含NK包被液、NK刺激培养基、NK扩增培养基，本发明培养方法采用NK特异活化受体的单抗包被以刺激NK细胞，经过刺激和扩增阶段，培养至21天，本发明的NK细胞总数量扩增至5.7E9个，扩增倍数为1439倍。本发明在扩增阶段更低浓度的IL‑2，降低成本同时满足大规模扩增NK的需求。本发明无需分选，用全部的单个核细胞进行培养，简化操作的程序；本发明无需饲养层细胞、血清以及血替代，规避了饲养层细胞和外来血带来的风险，安全性能高。本发明过程操作简单，成本低，简便了实验流程，同时还获得大量的NK细胞。本发明实现了体外高效扩增培养，便于满足临床使用。

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及SOCS3作为生物标志物在制备肝衰竭预后预测产品中的应用及检测试剂盒。通过检测生物标志物SOCS3的甲基化率，可以对受试者肝衰竭生存预后进行预测，提供更加及时的临床策略，也避免了现有预测方法的局限性。

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种甲壳动物体内基因过表达的方法，该方法主要包括以下步骤：1)过表达基因引物设计；2)过表达质粒构建；3)人工外泌体包裹过表达质粒。本发明将待过表达基因片段与载体连接后，利用人工外泌体将其运送到甲壳动物血细胞中，实现目的基因在甲壳动物血细胞中的过表达。该方法非病毒转染，能够有效进入细胞，简单实用，且对细胞的伤害比较低，解决了现有技术无法实现甲壳动物中特定目的基因高效过表达的问题。其中利用外泌体将外源基因导入到真核细胞中，促使细胞能够表达特异性基因，具有安全性和已修改的特性。

本发明公开了一种草酸青霉原生质体制备方法，属于微生物技术领域。包括以下步骤：菌株活化；孢子悬浮液的制备；菌丝体制备；原生质体的制备；原生质体的。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：提供了一种操作简单、重复性好、制备原生质体活力高的草酸青霉原生质体制备方法，为建立草酸青霉遗传转化体系，利用草酸青霉原生质体进行基因功能验证、亚细胞定位以及蛋白质互作等的研究提供重要基础。

本发明涉及L‑赖氨酸生产能力得到提高的谷氨酸棒状杆菌突变株及利用其的L‑赖氨酸的生产方法，上述突变株通过使编码天冬氨酸转氨酶的基因的表达增加或增强，从而与亲本菌株相比，可以提高L‑赖氨酸的生产收率。

本发明公开了一种用于鉴定小麦沉淀值的KASP标记及应用。用于鉴定小麦沉淀值的KASP标记的引物组由SEQ ID NO：1所示的上游引物F1、SEQ ID NO：2所示的上游引物F2和SEQ ID NO：3所示的下游引物R组成。实验证明，本发明提供的引物组可以检测待测小麦基于T100G SNP位点的基因型，T100G SNP位点为小麦基因组中SEQ ID NO：4自5’末端起的第100位核苷酸，进而快速、高效的鉴定小麦沉淀值性状。本发明对加快优质小麦新品种的培育具有重要应用价值。

本方案公开了微生物领域的贝莱斯芽孢杆菌GH9；贝莱斯芽孢杆菌GH9菌剂的制备方法，包括以下步骤：步骤一：在LB平板上形成的贝莱斯芽孢杆菌GH9的单菌落接种到LB液体培养基上；步骤二：在28℃，150rpm摇床中培养48h；步骤三：8000rpm离心10min收集菌体；步骤四：用无菌水制成OD600nm＝0.5～0.6的菌悬液，即为贝莱斯芽孢杆菌GH9菌剂；贝莱斯芽孢杆菌GH9菌剂在促进高粱种子萌发和生长方面的应用。本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌GH9菌剂能够促进高粱种子萌发和高粱生长，其促进机制主要为调节高粱的氨基酸代谢等代谢途径并促进高粱对氮素和磷素的吸收。

本发明涉及PCR扩增设备技术领域，具体提供一种随检上样式PCR扩增设备及其控制方法。旨在解决现有的PCR扩增设备无法做到样品随到随检的问题。为此目的，本发明提供一种随检上样式PCR扩增设备，所述PCR扩增设备包括：温控模块，其设置有第一温控部和第二温控部，所述第一温控部包括第一温控孔，所述第二温控部包括第二温控孔；第一抓取模块，其包括第一抓取机构和第一移动机构；第二抓取模块，其包括第二抓取机构和第二移动机构；控制模块，其分别与所述第一温控部、所述第二温控部、所述第一抓取机构、所述第一移动机构、所述第二抓取机构和所述第二移动机构电连接。

本发明提供局部分泌表达PD‑L1单链抗体的重组溶瘤腺病毒及应用，所述病毒以5型腺病毒为骨架，以CMV启动子启动分泌表达PD‑L1单链阻断抗体。本发明通过在5型腺病毒E1A基因组后插入aPD‑L1scFv基因，重组溶瘤腺病毒能够有效分泌表达aPD‑L1scFv，不影响其生物学特性，安全性较好。本发明构建的重组溶瘤腺病毒ZD55‑aPD‑L1scFv在体内体外实验中均验证了其比对照处理组具有更强的肿瘤生长抑制作用，奠定了此溶瘤腺病毒作为肿瘤免疫治疗性药物研发的基础，所述重组溶瘤腺病毒ZD55‑aPD‑L1scFv可在制备免疫治疗PD‑L1阳性的肿瘤药物中的应用。

本发明提供了颅内钙化的药物靶标及其应用，具体地本发明涉及一组用于检测颅内钙化和评估颅内钙化治疗效果的标志物，其中所述标志物选自：骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)、肌球蛋白重链15(MYH15)、天冬氨酰氨基葡糖苷酶(AGA)、禽肉瘤病毒17假定转化基因(Jun)、β‑肌动蛋白(ACTB)、磷脂酶C(PLCG2)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAP3K14)、整合素β2(ITGB2)、死亡相关蛋白激酶(DAP)、Maestro heat‑like repeat家族成员7(MROH7)、细胞色素p450家族成员(CYP2J13)、趋化因子CXC基序配体10(CXCL10)、c型凝集素结构域家族7成员a(CLEC7A)、IV型胶原蛋白的α‑2亚基(COL4A2)、或其组合。

本发明涉及一种通过生物转化包含至少一个腈官能团的CN化合物获得包含烯属不饱和度的MO单体的生物方法，所述CN化合物是至少部分可再生且非化石的，所述生物方法包括至少一个在包含至少一种酶的生物催化剂存在下对CN化合物进行酶促生物转化的步骤。

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，属于肝癌检测领域。提供了所述试剂用于制备辅助诊断肝癌的试剂盒的用途；与此同时，还提供了一种试剂，其能够辅助诊断肝癌，包含所述试剂的试剂盒。使用本发明的试剂能够至少以82.35％的灵敏度和100％的特异性诊断肝癌，其曲线下面积至少为0.8720。

提供一种药剂评价方法，能够在接近人体的环境下连续地而非只在某一时间点回收胆汁并评价药剂。药剂评价方法具备：工序1，向微流体设备中导入肝细胞及培养基；工序2，在工序1之后将肝细胞培养至能够排泄胆汁；工序3，在工序2之后向肝细胞投送药剂；以及工序4，在工序3之后回收从肝细胞排泄的胆汁。

本发明公开了一组可降解聚乙烯塑料的祖先漆酶，属于生物技术领域。本发明的可降解PE塑料的祖先漆酶序列可在没有添加介体的条件下，不需要预处理(高温或者UV处理)聚乙烯(PE)塑料，就可以实现对PE的高效降解。本发明的漆酶在PE降解中存在广泛的应用前景。

本申请公开了一种检测心血管病常见药物相关基因多态性的方法和试剂盒。本申请方法包括采用针对心血管病常见药物相关基因多态性位点设计的特异性不对称PCR扩增引物对和探针，对待测样本进行指数扩增和线性扩增，并利用熔解曲线法获得准确分型；不对称PCR扩增引物对中，上游引物为限制性引物，下游引物为非限制性引物；限制性引物的Tm值比非限制性引物的Tm值高5‑10℃；特异性探针为与野生位点或突变位点完全匹配，且与反义链结合的荧光探针。本申请方法将指数后线性扩增PCR与荧光熔解曲线法联合，具有灵敏度高、特异性强、操作简单等优点，能对各种含基因组的样本进行检测，快速、准确的获得心血管病常见药物相关基因分型结果。

本发明公开了一种增强表达安丝菌素体内靶标蛋白APASM_6307的高产安丝菌素方法。通过在珍贵束丝放线菌ATCC 31280中，利用强启动子kasOp*分别增强表达安丝菌素体内靶标蛋白APASM_6307，得到高产安丝菌素的突变株HQG‑04。与出发菌株相比，本发明所得到的高产菌株HQG‑04发酵产量提高了93.5％，实验室摇瓶发酵水平达到89mg/L。

本发明提供一种生物胶乳的制备系统，包括淀粉蒸煮槽，其特征在于所述淀粉蒸煮槽的一侧入料口处安装淀粉储存槽，所述淀粉蒸煮槽另一侧的入料口处安装淀粉酶储存槽，所述淀粉蒸煮槽底部一侧的出料口处通过管道以及放料阀A与中间储槽的入料口处连接，所述中间储槽底部的出料口处通过管道、卸料阀A以及卸料泵与糊化器入料口连接，所述糊化器旁侧安装温度控制阀B；本发明具有全自动化控制系统，控制指标稳定可靠，成本较低；各流量、温度通过PID模块精准控制，使得各项反应数值更加准确；通过采用本发明装置以及工艺进行制备时，其制备后的成品固含量、粘度、PH值等指标稳定可靠。

本发明公开了用于制备口腔癌微肿瘤模型的专用培养基以及相关的方法产品和应用。首先，本发明提供了用于制备口腔癌PTC的培养基。进一步，本发明提供了一种制备口腔癌PTC的方法，包括如下步骤：利用样本解离液对口腔癌实体瘤样本进行解离处理，获取细胞并用PTC培养基进行悬浮培养，得到口腔癌PTC。利用本发明方法得到的口腔癌微肿瘤模型可以准确反应患者原病灶的各种特征，是肿瘤精准诊疗领域良好的科研实验模型和临床前实验模型。可以预见，这种培养方法在口腔癌的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

本公开涉及一种微藻养殖的方法，该方法包括：将微藻藻种接入含有培养基的养殖装置中，进行养殖；所述养殖的过程包括对所述养殖装置中的微藻藻液交替地进行光照处理和非光照处理，所述光照处理包括第一搅动段和第一非搅动段；其中，所述微藻可漂浮于所述培养基中。本申请的微藻养殖的方法简单，便于操作，并且极大程度地降低养殖能耗，且藻种易于浓缩分离，采收便利。

本发明提供了油菜开花关键基因BnaFT.A2作为油菜开花时间改良的分子标记及应用，属于分子标记技术领域。本发明提供了甘蓝型油菜BnaFT基因不同拷贝突变在调控油菜开花时间中的应用，并提供了两种BnaFT.A2的基因单倍型。本发明利用所述两条BnaFT.A2基因构建了油菜开花时间相关的分子标记，验证春性甘蓝型油菜来源的基因BnaFT.A2具有提前开花的功能。本发明还提供了能够对所有BnaFT基因拷贝型具有编辑作用的sgRNA，进一步证实了BnaFT.A2基因调控油菜开花时间的作用，可用于常规油菜和杂交油菜开花期和生育期的辅助选择育种。

本发明公开了一种醋糟水资源循环利用的食醋酿造方法。本申请方法在酿醋过程中添加了醋糟水，结合优化后的制备条件，最终制备得到的食醋成品中乳酸的含量显著提高，更加柔和适口，提高了香醋品质等级。且实现了醋糟水资源的循环利用，解决了酿醋过程中醋糟水难以处理排放污染环境的难题。

本发明公开了一种促进番茄不定根的基因及其瞬间过表达的方法和应用，涉及生物技术领域，包括基因solyc10g079310等12种基因；瞬间过表达上述基因的方法为：基因克隆、载体构建、制备外植体、制备农杆菌侵染悬浮液和侵染；该方法在促进番茄不定根发生的应用。本发明通过瞬时过表达特定基因，促进植物茎生根和胚轴生根，从而增加番茄不定根的数量和长度，有助于改善植物的生长状况和适应性。

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种检测HBV剪接型RNA的引物和探针组合物及其应用。本发明所述检测HBV剪接型RNA的引物和探针组合物，通过针对性设计的引物和探针的组合物，并通过首次建立特异性定量检测spRNA的方法学，可以特异性定量检测血清spRNA水平，而野生型则不会被检出，有效解决了以往血清HBV RNA的定量方法不区分是否为剪接型的RNA进而影响检测结果判断的缺陷。

本发明公开一种青霉ZJUT23及其在发酵制备吡喃酮类化合物中的应用。本发明首次报道了利用该菌株发酵培养，高产率制备高纯度streptopyrone的方法，纯度达到99％；该制备方法具有发酵条件简单、菌种易培养、工艺步骤少、生产周期短等优势，具有工业化、规模化生产的潜力。本方法对于制备高纯度streptopyrone标准品或对照品具有重要意义。

本发明公开了一株不产毒黄曲霉菌APqn‑3、其生物菌剂及其在抑制产毒黄曲霉、花生病害防控中的应用，属于微生物技术领域。本发明不产毒黄曲霉菌为黄曲霉菌(Aspergillus flavus)APqn‑3菌株，保藏编号为CGMCC NO.40537。该菌株不仅能够抑制产毒黄曲霉菌的生长和产毒，还对花生果腐病、根腐病等病害具有防治作用。将该菌株制备成生物菌剂，能够提高菌株对抗自然环境的能力，能在旱坡地、洼地、水稻田、沙壤地、盐碱地等不同类型的土壤中快速生长繁殖，抑制产毒黄曲霉的生长和产毒；因而，本发明的菌株APqn‑3具有较好的应用前景。

本发明提供一种Cas12a突变体及其应用，主要包括三种点突变蛋白，分别为在野生型Cas12a上发生H759A、K768A、K785A氨基酸位点突变，本发明中的CRISPR‑Cas12a系统(含有突变的Cas12a蛋白)可应用于体内外基因编辑中，降低对细胞内RNA的非特异性脱靶效应，也可应用于分子检测中，避免检测中错误结果的出现，发明中的CRISPR‑Cas12a系统(含有突变的Cas12a蛋白)可实现与CRISPR‑Cas13a联合使用，互不干扰，用于检测两种不同的靶核酸。

本发明公开一种大豆免疫防御基因及其蛋白质和应用，包括大豆免疫防御GmPR‑1基因从大豆品系Wiliams82中使用引物对PR‑1‑F/R克隆获得，GmPR‑1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，GmPR‑1蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明提出的大豆病程相关基因GmPR‑1是一个编码参与到大豆免疫防御反应核心蛋白的基因，并且通过过表达GmPR‑1能够影响大豆在根瘤菌侵染时触发的早期免疫防御反应，进而提高共生结瘤和固氮能力，也能够增加单颗根瘤的瘤重和大小，提高大豆根瘤总重量和植株地上部分生物量。

本发明公开了一种转基因大豆事件XP‑2及其检测方法，所述转基因大豆事件XP‑2以SEQ ID NO:27所示的核苷酸序列为外源基因的左侧翼区，以SEQ ID NO:28所示的核苷酸序列为外源基因的右侧翼区。本发明转基因大豆事件XP‑2将编码草甘膦和啶嘧磺隆耐受性性状的基因连锁在同一DNA区段上，并且存在于转基因大豆事件XP‑2基因组的单一基因座上，这一点提供了增强的育种效率并使得能够用分子标记来追踪繁殖群体及其子代中的转基因插入片段。本发明提供的用于检测大豆植物的特异性核酸序列能够特异性检测转基因大豆事件XP‑2。

本发明涉及一种原发性肺癌辅助诊断panel、试剂盒及其应用，所述panel包括如下序号1至569所示的罕见功能性突变区域的90％及以上，所述罕见功能性突变区域与原发性肺癌相关。本发明进一步提供可应用于临床或人群的肺癌辅助诊断试剂盒，为肺癌早期筛查和诊断提供支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。

本发明公开了一种低氧环境下提高骨髓间充质干细胞活率的方法，具体涉及生物医药技术领域。所述方法包括获取骨髓间充质干细胞，并培养至第三代（F3）；选取生长良好的第三代（F3）细胞，进行细胞融合培养，培养至细胞融合到70%‑80%时，更换培养基；更换培养基后，放到通入含5%氧气和95%氮气的三气培养箱中低氧继续培养，得骨髓间充质干细胞。本发明优化细胞培养的方法，通过调节培养环境，促进细胞代谢和能量产生，增强细胞抗氧化能力，提高细胞在低氧环境下的适应能力和生存率。

本发明提供了用于快速鉴别槟榔鲜果果形的SSR分子标记引物，属于生物技术领域，所述引物包括SSR‑2‑F和SSR‑2‑R，所述SSR‑2‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述SSR‑2‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该SSR分子标记引物对槟榔鲜果果形的鉴别具有较高的特异性，利用该SSR分子标记引物对槟榔基因组进行PCR扩增，扩增产物进行凝胶电泳，根据所得凝胶电泳图谱即可鉴别槟榔鲜果果形，将该SSR分子标记引物用于鉴别槟榔鲜果果形，具有易于操作、鉴别效率高和结果可靠的特点,具有极大的潜在应用价值。本发明还提供了用于快速鉴别槟榔鲜果果形的试剂盒及应用。

本发明提供了一种农杆菌介导玉米自交系B104幼胚的高效遗传转化方法，包括如下步骤：(1)获取玉米幼胚；(2)农杆菌侵染和共培养；(3)将共培养后的幼胚置于静息培养基；(4)将静息培养的胚状体用深蓝激发光源照射，再用体视镜观察，将含有绿色荧光的幼胚，夹掉其胚芽、胚根，转移到含双丙氨膦的筛选分化培养基中进行培养；挑选生长状态好的胚性愈伤组织转移至新的筛选分化培养基；(5)将筛选出的抗性组织继续置于筛选分化培养基，分化幼苗；(6)生根培养及炼苗移栽。本发明成功建立了简单、高效、重复性好的适合玉米自交系B104的遗传转化方法，对加快玉米育种进程、基因功能解析、丰富玉米种质资源等方面具有重要意义。

本发明涉及一种与花生蔗糖含量紧密连锁的分子标记及应用，所述分子标记为A06.115805462的SNP位点和A16.148167815‑148167817的InDel位点，根据这两个分子标记位点前后100bp的序列，分别设计KASP引物组合，基于候选基因的野生型和突变型序列，开发两位点的KASP分子标记，该标记在花生不同亲本的遗传群体中的分型结果与蔗糖含量紧密连锁，证明了该标记的准确性。该KASP标记能够快速准确的获得花生蔗糖含量信息，且能应用于花生分子辅助标记育种。

本发明公开了一株广西鸡源H9N2禽流感病毒毒株，所述广西鸡源H9N2禽流感病毒毒株命名为A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)，保藏编号为CGMCC No.45216；以及所述的广西鸡源H9N2禽流感病毒毒株在制备疫苗中的应用。本发明阐明了广西鸡源H9N2禽流感病毒与其他分离毒株的抗原变异情况；该毒株制成灭活疫苗后，免疫4W SPF鸡，通过对同源和异源H9流感野毒株的攻毒免疫保护效果分析，证明该病毒株可以用作H9亚型禽流感疫苗候选株；免疫源性强。

本发明属于植物分子生物学技术领域，特别涉及一种鉴定棉花花药颜色性状的分子标记组合及方法和应用，具体涉及棉花花药颜色性状基因位点的SNP分子标记及应用，该SNP分子标记位于棉花第A05号染色体上第105079550、105080001、105080116位碱基及其上下游碱基组成的核苷酸序列。该SNP分子标记直接以DNA的形式表现，在棉花的各个发育阶段以及不同的组织器官中均可检测，且不受环境和季节的限制，不存在表达与否等问题影响。因此，该标记操作简洁、扩增结果精准、所需试剂成本较低，该标记的开发可用于棉花黄色花药和其它颜色花药品种的筛选与鉴定，加快目标性状的分子标记辅助选择育种效率。

本公开的实施方案包括用于生成或扩增对病毒有特异性的免疫细胞群体的方法，所述方法包括通过在下述的存在下：(i)对应于病毒的一种或多种抗原的全部或部分的一种或多种肽；或(ii)呈递对应于病毒的一种或多种抗原的全部或部分的一种或多种肽的抗原呈递细胞(APC)，在包含人血小板裂解物的细胞培养基中培养外周血单核细胞(PBMC)来刺激对病毒有特异性的免疫细胞。在特定的实施方案中，例如，细胞培养基包含特定百分比的人血小板裂解物和/或所述PBMC被清除了CD45RA阳性细胞。

本发明公开了一种用于新型冠状病毒核酸检测的标准物质，所述标准物质是以NDV病毒为载体，插入外源新冠病毒基因序列形成NDV重组病毒载体，NDV重组病毒载体经病毒拯救形成重组NDV病毒，随后利用灭活型病毒保存液将重组NDV病毒稀释5倍以上，测定拷贝数后形成标准物质。本发明标准物质不存在质粒DNA残留，能完整的质控从核酸提取到荧光定量PCR扩增的整个过程。

本发明公开了一个调控大豆下胚轴伸长和叶面积大小的基因GmERECTAb及其编码蛋白与应用，通过对GmERECTAb的基因组序列gGmERECTAb进行扩增，并采用无缝连接方法进行载体重组，高效得将gGmERECTAb的基因组全长序列克隆到pBF载体上；通过Bar标记基因赋予转化受体的除草剂抗性筛选，以及Western Blot检测gGmERECTAb‑FLAG融合蛋白表达，确保阳性苗能准确快速检出，阳性苗筛选到T3代纯合，无分离情况出现，避免假阳性干扰。本发明GmERECTAb对荫蔽下大豆株型调控效果显著，结果准确可靠，调控方法操作简单，方便，可公式化，易于推广应用。

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及LRH基因在调控植物根毛伸长中的应用。本发明提供了LRH基因在调控植物根毛伸长中的应用，所述LRH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明发现LRH基因功能缺失株系的根毛明显长于野生型株系，而基因过表达株系的根毛长度显著短于野生型株系，进而验证了LRH基因在调控植物根毛伸长中的作用，明确LRH基因的新用途。

本发明提供了一种快速高效稳定验证辣椒基因功能的方法及应用，属于基因功能方法研究技术领域。本发明基于烟草脆裂病毒(TRV)开发的VIGS技术，构建了一套可快速、高效、稳定验证辣椒基因功能的方法，并在辣椒朝天椒和薄皮椒类型中通过严格条件优化得出，辣椒在农杆菌侵染后生长温度、农杆菌侵染浓度、农杆菌接种方式等方面有较为显著的影响，且最终发现，辣椒VIGS基因沉默体系的最优条件为：侵染后生长温度24℃，农杆菌接种浓度OD600值0.01，最佳接种方法为注射法。本发明中的方法对于辣椒中各种基因功能的验证意义重大。

本发明提供一种核酸检测POCT卡盒，包括：试剂腔主体，试剂腔主体内构造有上下贯通其两端的柱塞腔以及多个容置腔，柱塞腔内设有柱塞；扁平式反应腔体，其内部空间能够与柱塞腔可控连通，扁平式反应腔体具有能够与柱塞腔连通的第二反应腔进出液口以及与试剂腔主体内的通气通道连通的第一出口，扁平式反应腔体内构造有主流道，主流道的一端为第二反应腔进出液口，主流道的另一端与第一出口连通，主流道具有分支流道，分支流道的末端连接扩增室，扩增室具有扩增室通气口，扩增室通气口处设有透气不透水的密封膜。本发明有效防止了对反应试剂量的降低，保证了后续的扩增以及光学检测结果的准确性。

本发明涉及多肽水凝胶技术领域，且公开了一种多肽水凝胶负载充质干细胞及其制备工艺，将蚕茧制成丝胶溶液与聚乙烯醇溶液混合，制成凝胶，将聚乙烯醇、丙烯酰氯、巯基乙酸混合反应，多肽IKVAV和丙烯酰氯‑聚乙烯醇‑巯基溶解到磷酸缓冲盐溶液中制成溶液，得到丙烯酰氯‑聚乙烯醇‑IKVAV溶液，并滴加到水凝胶薄膜上，紫外灯照射得多肽水凝胶，将充质干细胞置于水凝胶培养，观察充质干细胞的后续生长状态。水凝胶与多肽的融合，填补了水凝胶在负载充质干细胞方面功能单一化的缺点，为充质干细胞提供一个更完善的生存环境。

本发明提供了一种高效连接mRNA片段的方法及其应用，所述方法包括：将第一mRNA片段、第二mRNA片段与DNA夹板混合，并用RNA连接酶进行连接反应；所述DNA夹板由互补序列1和互补序列2组成；所述互补序列1与第一mRNA片段的3’末端互补配对；所述互补序列2与第二mRNA片段的5’末端互补配对；所述互补序列1与第一mRNA片段的3’末端互补配对后第一mRNA片段的3’末端含有3‑10个碱基冗余。本发明将体外转录和化学合成相结合，优势互补，用特殊设计的DNA夹板将体外转录产物和化学合成片段高效连接，可制备不同长度的mRNA，并可以突破polyA尾的长度限制，长度可精确控制且可引入特定的修饰。

本发明属于提取制备技术领域，具体涉及一种具有护肝功能的动物肝肽及其制备方法。包括如下步骤：将新鲜肝脏洗净，剥离结缔组织，搅拌成肝肉糜，加入纯净水，搅拌均匀制成肝脏组织匀浆；将肝脏组织匀浆调节pH至6.0‑7.0，加入脂肪酶和糖原磷酸化酶后，在室温下酶解20‑50min得到酶解液；将酶解液在80‑90℃条件下灭菌30‑60min，得到灭菌液；将灭菌液冷却至室温，加入发酵菌粉液，在温度30‑40℃下发酵30‑53h得到发酵液，将发酵液离心去除残渣得到上层清液；用分子量为3kDa、2kDa、1kDa的串联超滤膜对离心后的上层清液进行超滤分级分离，得到不同分子质量段的多肽液。该方法得到分子量＜1kDa的含量较高的分子肽段，并且该肽段具有很好的抗氧化能力和保护化学性肝损伤的作用。

本发明公开了一种检测HTLV‑1前病毒DNA的多酶恒温扩增试剂盒及检测方法。多酶恒温扩增试剂盒包括引物探针混合液、A buffer、冻干酶粉、B buffer、侧向流层析试纸条、阳性对照物和阴性对照物。引物探针混合液包括检测HTLV‑1前病毒DNA的特异性引物对和探针；引物对和探针序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本发明将MIRA检测方法与胶体金侧流层析技术结合，可通过肉眼观察条带对检测结果实现可视化，能有效检测HTLV‑1前病毒DNA，可用于HTLV‑1感染的快速体外诊断。本发明试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简单便携、用时短的优点，在实验室资源匮乏的基层医疗机构或血液中心(血站)具有很高的应用价值。

本发明公开了鉴定水稻中胚轴长度的方法及其所用SNP标记Kasp‑7‑13.7与应用。本发明所解决的技术问题是鉴定或辅助鉴定水稻中胚轴长度。本发明在纯系中验证了序列1的第37位为AA基因型的水稻的中胚轴长度长于或候选长于序列1的第37位为GG基因型的水稻，GG纯合型的水稻品种比AA纯合型的水稻品种的中胚轴的平均值降低了36.1％,表明其单倍型或基因型分子标记可用于水稻分子标记辅助选择育种，显著提高水稻中胚轴长度的选择效率。