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一种On-DNA Aldol反应方法

文献发布时间:2023-06-19 11:22:42



技术领域

本发明属于编码化合物库技术领域,具体涉及一种DNA编码化合物库构建中的On-DNA Aldol反应方法。

背景技术

在药物研发,尤其是新药研发中,针对生物靶标的高通量筛选是快速获得先导化合物的主要手段之一。然而,基于单个分子的传统高通量筛选所需时间长、设备投入巨大、库化合物数量有限(数百万),且化合物库的建成需要数十年的积累,限制了先导化合物的发现效率与可能性。近年来出现的DNA编码化合物库技术(WO2005058479、WO2018166532、CN103882532),结合了组合化学和分子生物学技术,在分子水平上将每个化合物加上一个DNA标签,并能在极短的时间内合成高达亿级的化合物库,成为下一代化合物库筛选技术的趋势,并开始在制药行业广泛应用,产生了诸多积极的效果(Accounts of ChemicalResearch,2014,47,1247-1255)。

DNA编码化合物库通过组合化学快速产生巨型化合物库,并且能高通量地筛选出先导化合物,使得先导化合物的筛选变得前所未有的快捷和高效。构建DNA编码化合物库的挑战之一就是需要在DNA上高收率地合成具有化学多样性的小分子。由于DNA需要在一定的条件下(溶剂、pH、温度、离子浓度)才能维持稳定,同时应用于DNA编码化合物库构建的On-DNA反应还需要有较高的产率。因此DNA上进行的化学反应(简称On-DNA反应)的试剂种类、反应种类、反应条件直接影响到DNA编码化合物库的丰富度和可选择性。从而开发能够与DNA兼容的化学反应也成为目前DNA编码化合物库技术的长期探索和研究方向,也直接影响了DNA编码化合物库的应用及商业价值。

羟醛或羟酮化合物是一类重要的药物化合物骨架或中间体结构,将羟醛或羟酮化合物骨架引入到DNA编码化合物库中能进一步扩展化合物库的多样性,有利于提高筛选到有效化合物的概率。然而目前并没有报道通过On-DNA醛基化合物构建On-DNA羟醛或羟酮化合物的方法。因此希望开发一种新的适用于大批量多孔板操作的On-DNA羟醛或羟酮化合物的合成方法,增加DNA编码化合物库的多样性,进一步提升DNA编码化合物库技术的应用价值。

发明内容

本发明提供了一种On-DNA Aldol反应的方法,该方法反应条件温和、后处理简单,适合DNA编码化合物库的生产,能显著提高化合物库分子的多样性。

本发明提供了一种On-DNA Aldol反应的方法,所述反应是以On-DNA醛基化合物和α氢醛基或酮基化合物为原料,在催化剂存在下得到On-DNA产物;其中所述On-DNA醛基化合物的结构式为DNA-R

其中,结构式中DNA包含由人工修饰的和/或未修饰的核苷酸单体聚合得到的单链或双链的核苷酸链,该核苷酸链通过一个或多个化学键或基团与R

其中,结构式中的DNA与R

R

R

R

R

或R

作为优选,所述的R

更具体地,所述的R

所述的On-DNA醛基化合物具体选自

所述的α氢醛基或酮基化合物具体选自

本发明的另一个目的在于提供一种On-DNA Aldol反应的方法,该方法包括以下步骤:向摩尔当量为1,摩尔浓度为0.5-5mM的On-DNA醛基化合物溶液中,加入1-50倍摩尔当量的催化剂,再加入10-1000倍摩尔当量的α氢醛基或酮基化合物,在10℃~100℃下反应0.5-24小时。

进一步地,所述催化剂为脯氨酸甲酯、脯氨酸、四氢吡咯或哌啶;优选地,所述催化剂为脯氨酸。

进一步地,所述反应在溶剂中进行,溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、二甲亚砜、无机盐缓冲液、有机酸缓冲液、有机碱缓冲液中任意一种或几种的含水混合溶剂;优选地,所述反应溶剂含有硼酸缓冲液。

更进一步地,所述硼酸缓冲液pH为8~10;优选地,pH为9.4。

进一步地,所述反应方法中On-DNA醛基化合物的摩尔当量为1,α氢醛基或酮基化合物的摩尔当量为20当量、50当量、100当量、200当量、400当量、800当量,催化剂的摩尔当量为2当量、5当量、10当量、20当量、30当量、40当量。

进一步地,所述反应的反应温度为20℃、30℃、40℃、50℃或60℃。

进一步地,所述反应的反应时间为0.5小时、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时或8小时。

进一步地,所述反应的加料顺序为先加入On-DNA醛基化合物,再加入催化剂,最后加入α氢醛基或酮基化合物。

进一步地,上述方法用于批量的多孔板操作。

进一步地,上述方法用于多孔板的DNA编码化合物库的合成。

本发明方法可以实现通过Aldol反应在DNA编码化合物库中构建On-DNA羟醛或羟酮化合物,适用于各类醛、酮底物。该方法能够在有机溶剂/水相的混合水相中进行,操作简单,不引入金属类试剂,环境友好,适合使用多孔板进行的DNA编码化合物库的合成。

关于本发明的使用术语的定义:除非另有说明,本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语;对于本文没有具体定义的术语,应该根据公开内容和上下文,给出本领域技术人员能够给予它们的含义。

“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。

碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示,例如,前缀(Ca~C

烷基是指烷烃分子中直链或支链的烃基,例如甲基-CH

环烷基是指具有多个碳原子且没有环杂原子,且具有单个环或多个环(包括稠合、桥连和螺环体系)的饱和或部分饱和的环状基团。

所述卤素为氟、氯、溴或碘。

烷氧基是指烷基与氧原子连接形成取代基,例如甲氧基为-OCH

卤代苯基是指苯基上的H被卤素取代而形成的基团。

烷基苯基是指苯基上的H被烷基取代而形成的基团。

芳基是指不含杂原子,由C原子构成的芳香性单一环状或多个环状基团。

芳杂环基是指5~10个的C、O、S、N等原子构成具有芳香性的单一环状或多个环状基团。

显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1:实施例13中化合物24的LC-MS谱图和MS谱图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整清楚的描述。显然,所描述的实施例是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。

本发明中DNA-NH

其中,A为腺嘌呤,T为胸腺嘧啶,C为胞嘧啶,G为鸟嘌呤。

DMA:二甲基乙酰胺。HATU:2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。DIPEA:N,N-二异丙基乙胺。BBS buffer:硼酸盐缓冲溶液。DMSO:二甲基亚砜。室温为20~30℃。

实施例1、On-DNA羟醛化合物3的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol,50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟;将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。

乙醇沉淀标准操作:向溶液中加入总体积10%的5M的氯化钠溶液,然后继续加入总体积的3倍的无水乙醇,振荡均匀后,将反应置于干冰中冷冻2小时,之后在12000rpm的转速下离心半个小时,倒掉上清液。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物2溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。

反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5436.1,实测分子量为5435.3,转化率为98%。

实施例2、On-DNA羟醛化合物5的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol,50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5418.1,实测分子量为5417.9,转化率为86%。

实施例3、On-DNA羟醛化合物7的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol,50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物6溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5418.1,实测分子量为5417.5,转化率为88%。

实施例4、On-DNA羟醛化合物9的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol,50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物8溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5390.1,实测分子量为5389.5,转化率为92%。

实施例5、On-DNA羟醛化合物11的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol,50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物10溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5418.1,实测分子量为5418.0,转化率为84%。

实施例6、On-DNA羟醛化合物13的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol,50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物12溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5466.1,实测分子量为5466.0,转化率为77%。

实施例7、On-DNA羟醛化合物15的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol、50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物14溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5436.1,实测分子量为5434.8,转化率为73%。

实施例8、On-DNA羟醛化合物17的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol、50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物16溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5436.1,实测分子量为5434.9,转化率为61%。

实施例9、On-DNA羟醛化合物19的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol、50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物18溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5400.1,实测分子量为5399.6,转化率为55%。

实施例10、On-DNA羟醛化合物21的合成

将DNA原料1溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(20μL,20nmol),酸醛(1μmol、50当量,200mM DMA溶液)、HATU(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)、DIPEA(1μmol,50当量,400mM DMA溶液)分别放置于-20摄氏度冰箱中降温5分钟后混合,将该混合物用涡旋振荡充分混匀,然后放置于4摄氏度冰箱中保存5分钟。将上述混合物加入到DNA原料1的溶液中,混合均匀,室温过夜。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。直接用于下一步反应。

将On-DNA醛基化合物20溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、环丁基甲醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5401.1,实测分子量为5400.5,转化率为80%。

实施例11、On-DNA羟醛化合物22的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5526.3,实测分子量为5525.6,转化率为90%。

实施例12、On-DNA羟醛化合物23的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、酮(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5484.1,实测分子量为5483.6,转化率为89%。

实施例13、On-DNA羟醛化合物24的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、酮(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5529.2,实测分子量为5528.4,转化率为89%。

实施例14、On-DNA羟醛化合物25的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、酮(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5514.2,实测分子量为5513.6,转化率为85%。

实施例15、On-DNA羟醛化合物26的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol)。向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5494.2,实测分子量为5494.1,转化率为84%。

实施例16、On-DNA羟醛化合物27的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5436.1,实测分子量为5436.2,转化率为76%。

实施例17、On-DNA羟醛化合物28的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、酮(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5528.2,实测分子量为5528.0,转化率为64%。

实施例18、On-DNA羟醛化合物29的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、酮(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5490.2,实测分子量为5490.2,转化率为61%。

实施例19、On-DNA羟醛化合物30的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5496.2,实测分子量为5496.2,转化率为59%。

实施例20、On-DNA羟醛化合物31的合成

将On-DNA醛基化合物4溶解到250mM,pH=9.4的硼酸缓冲液中,配制成1mM浓度溶液(10μL,10nmol),向溶液中依次加入脯氨酸(100nmol,10当量,200mM DMSO溶液)、醛(1μmol,100当量,200mM DMSO溶液),混合均匀,室温反应2小时。反应完毕后乙醇沉淀标准操作后处理。余下沉淀用去离子水溶解,得到On-DNA产物的溶液,通过酶标仪OD定量后,送LCMS监测,该化合物理论分子量为5482.2,实测分子量为5482.3,转化率为58%。

综上所述,本发明通过控制反应的溶剂、温度、pH等条件,在催化剂的存在下,由On-DNA醛基化合物和α氢醛基或酮基化合物反应可以得到On-DNA羟醛化合物。该方法能够在有机溶剂/水相的混合水相中进行,操作简单,不引入金属类试剂,环境友好,适合使用多孔板进行的DNA编码化合物库的合成。上述各实施例及附图仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,皆应包含在本发明的范围内。

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06120112907977