一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法

技术领域

本发明涉及一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，属微生物检测技术领域。

背景技术

目前的标准中检测牛乳中免疫球蛋白IgG的方法只有分光光度计法，《NY/T 2070-2011 牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定 分光光度法》，该方法虽然可以满足时间检测作业的需要，但操作步骤繁琐，检测效率低下，而且兔抗牛IgG抗体粉剂在市场上很难购买，进一步增加了检测作业的成本和难度和成本。

因此针对这一现状，需要开发一种全新的牛乳中免疫球蛋白检测方法，以满足实际使用的需要。

发明内容

本发明的目的是提供本发明提供一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：

S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；

S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至10℃—45℃，然后将S1步骤制备的样品取8—15μL，并以0.3—0.6mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。

进一步的，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:2—10。

进一步的，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。

本发明建立了一种全新的牛乳中免疫球蛋白IgG的测定方法，有效的拓展了牛乳中免疫球蛋白IgG的检测方法的种类和类型，且检测精度高，为检测领域提供更多的选择，而且本方法采用的液相色谱仪较传统的检测备普及率高，仪器运行稳定性好且容易操作，同时还可有效的简化检测样品的前处理步骤，从而提高了检测的效率。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明结构示意图；

图2为液相流动相梯度洗脱条件表。

具体实施方式

下面将结合本发明的附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

如图1所示，一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：

S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；

S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至10℃，然后将S1步骤制备的样品取8μL，并以0.3mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。

其中，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:2。

同时，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。

实施例2

如图1所示，一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：

S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；

S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至45℃，然后将S1步骤制备的样品取15μL，并以0.6mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。

本实施例中，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1: 10。

同时，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。

实施例3

如图1所示，一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：

S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；

S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至25℃，然后将S1步骤制备的样品取5μL，并以0.5mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。

本实施例中，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:5。

本实施例中，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。

本发明建立了一种全新的牛乳中免疫球蛋白IgG的测定方法，有效的拓展了牛乳中免疫球蛋白IgG的检测方法的种类和类型，且检测精度高，为检测领域提供更多的选择，而且本方法采用的液相色谱仪较传统的检测备普及率高，仪器运行稳定性好且容易操作，同时还可有效的简化检测样品的前处理步骤，从而提高了检测的效率。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。