偶氮嘧啶化合物的固体形式

本申请要求2018年7月18日提交的美国临时申请No.62/700,064的优先权权益，该临时申请的内容通过引用并入本文用于所有目的。

联邦支持的研究与开发有关发明权的声明

不适用

参考在光盘上提交的“序列表”、表格或计算机程序列表附录

不适用

发明背景

腺苷是包含腺嘌呤和核糖分子(呋喃核糖)的复合体的嘌呤核苷化合。腺苷在哺乳动物中天然存在，并且在包括能量转移(作为三磷酸腺苷和一磷酸腺苷)和信号转导(作为环腺一磷酸)在内的几种生物化学过程中起重要作用。腺苷还在与包括心脏血管舒张在内的血管舒张相关的过程起作用，并且充当神经调质(例如，其被认为参与促进睡眠)。除了参与这些生物化学过程之外，腺苷还用作治疗性抗心律失常药剂来治疗例如室上性心动过速。如本文进一步讨论的，肿瘤通过抑制免疫功能和促进耐受来逃避宿主反应，并且腺苷已显示出在介导免疫系统的肿瘤逃避中起了重要作用。已经确定通过在各种免疫细胞亚群和内皮细胞上表达的A

腺苷受体是一类腺苷作为内源配体的嘌呤G蛋白偶联受体。人体中腺苷受体的四种类型被称为A

历史上，腺苷受体的调节剂是非选择性的。这在某些适应症(indication)中是可接受的，例如肠道外施用对心脏组织中所有四种腺苷受体起作用的内源性激动剂腺苷来治疗严重的心动过速。然而，亚型选择性腺苷受体激动剂和拮抗剂的使用提供了在最小化或消除不良反应的同时实现期望结果的潜力。

化合物3-[2-氨基-6-(1-{[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]-2-甲基苄腈，在本文中称为化合物I，如例如在美国专利申请No.15/875,106和PCT申请No.PCT/US18/14352中所述，报道其为亚型选择性腺苷受体拮抗剂。化合物I是有效的A

发明内容

本发明涉及调节腺苷A

在一些实施方式中，本发明提供具有下式的化合物的固体形式：

或其水合物或溶剂化物。

在一些实施方式中，本发明提供了化合物I的固体形式I，或其溶剂化物或水合物，其特征在于，X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在6.9、8.0、8.2、12.5、12.7、14.8、15.0、15.7、16.8、18.1、18.8、19.2、20.6、21.1、21.8、24.9、27.1或27.7度2θ(±0.1度2θ)处的一个或多个峰，其中，XRPD是使用CuK

本发明进一步提供了通过在适于制备形式I的条件下形成化合物I与包含C

另外，提供了包含本文所述固体形式的药物组合物。

本文还提供了治疗至少部分由腺苷A

附图的简要说明

图1示出了化合物I形式(Form)I的X射线粉末衍射(XRPD)图。

图2示出了化合物I形式I的差示扫描量热法(DSC)图，其显示了在约193℃下吸热。

图3示出了化合物I形式I的热重分析(TGA)。

图4示出了化合物I形式I动态蒸气吸附(DVS)等温线图。

图5示出了化合物I形式II的X射线粉末衍射(XRPD)图。

图6示出了化合物I形式II的差示扫描量热法(DSC)图。

图7示出了化合物I形式III的X射线粉末衍射(XRPD)图。

图8示出了化合物I形式III的差示扫描量热法(DSC)图。

具体实施方式

在进一步描述本发明之前，应当理解本发明不限于本文所述的特定实施例，并且还应当理解本文所用的术语仅出于描述特定实施例的目的，并且并非限制性的。

在提供值的范围时，应当理解，除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限和下限之间的中间值(到下限单位的十分之一)以及该陈述范围内的任何其他规定或中间值包含在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地被包括在较小范围内，并且也包含在本发明内，受限于所述范围内的任何具体地排除的限制。在所述范围包括一个或二个限值的情况下，排除那些所包括的限值中的任一个或二个的范围也包括在本发明中。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与在本发明所属领域中的普通技术人员通常理解的相同的含义。

如本文所用，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一”，“一个”，和“该”包括复数形式。还应注意，可以起草权利要求以排除任何可选的元素。正因如在，该陈述旨在作为用于诸如“单独地，”、“仅”等等的与权利要求要素的详述有关的的排除性术语，或用于“否定的”限制的前置基础。

本文讨论的出版物仅是在本申请的提交日期之前公开的。此外，提供的公开的日期可能与实际公开日期不同，可能需要单独确认。

通用

化合物3-[2-氨基-6-(1-{[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]-2-甲基苄腈(化合物I)是腺苷A

本发明源于化合物I的固体形式的令人惊讶的发现，归因于本文所述形式的优点以及制备固体形式的方法。晶体材料通常在物理和化学上更稳定。晶体材料的优异稳定性可能使它们更适合用于最终剂型，因为产品的保质期与稳定性直接相关。活性药物成分(API)加工中的结晶步骤还意味着有机会通过将杂质排入加工溶剂来提高原料药的纯度。

定义

除非另有说明，否则下列术语旨在具有以下所述的含义。其他术语在整个说明书的其他地方被定义。

“水合物”是指通过化合物I和水的结合而形成的复合物。该术语包括化学计量的和非化学计量的水合物。

“溶剂化物”是指通过化合物I和溶剂的结合形成的络合物。

“去溶剂化”是指化合物I形式，为本文所述的溶剂化物，并且溶剂分子已部分或完全从中除去。产生去溶剂化形式的去溶剂化技术包括但不限于将化合物I晶型(溶剂化物)暴露于真空，使溶剂化物经受升高的温度，将溶剂化物暴露于气体流(例如空气或氮气或其任何组合)中。因此，去溶剂化的化合物I形式可以是无水的，即完全没有溶剂分子的，或部分溶剂化的，其中，溶剂分子以化学计量或非化学计量的量存在。

“醇”是指具有羟基的溶剂。代表性的醇可以具有任何合适数量的碳原子，例如C

“基本上不含化合物I的其他晶体形式”是指化合物I的晶体形式，其包含少于10％的化合物I的其他晶体形式。例如，基本上不含可以指化合物I的晶体形式，其包含的化合物I的其他结晶形式小于9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。优选地，基本上不含是指化合物I的结晶形式，其包含小于5％的其他结晶形式。优选地，基本上不含是指化合物I的结晶形式，其包含小于1％的化合物I的其他结晶形式。

术语“药学上可接受的盐”意指包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于本文所述化合物上存在的特定取代基。当本发明化合物含有相对较酸性的官能团时，碱加成盐可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需碱无溶剂或在合适的惰性溶剂中接触而获得。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙基胺、氨丁三醇以及类似基团。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需酸无溶剂或在合适的惰性溶剂中接触而获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些、以及衍生自如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等相对无毒的有机酸的盐。还包括氨基酸，例如精氨酸等的盐，以及有机酸，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见，例如，Berge,S.M.等，“药用盐(PharmaceuticalSalts)”,药物科学杂志(Journal of Pharmaceutical Science),1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，使得化合物可以转化为碱或酸加成盐。

化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物而再生。所述化合物的母体形式在某些物理性质上不同于各种盐形式，例如在极性溶剂中的溶解度，但是，就本发明目的而言，所述盐相当于所述化合物的母体形式。

本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式(包括水合形式)存在。通常，溶剂化形式相当于非溶剂化形式，并且意图包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所设想的用途是等同的，并且意图在本发明的范围内。

本发明的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。同位素的非自然比例可以定义为从自然界中发现的量到100％由所讨论的原子构成的量。例如，所述化合物可以掺入放射性同位素(例如氚(

术语“患者”或“受试者”可以互换使用，指人或非人动物(例如，哺乳动物)。

当应用于，例如，受试者、细胞、组织、器官或生物液，术语“施用”、“给药”等是指将例如A

术语“治疗”、“治疗的”、“疗法”等是指在疾病、病症或病状或其症状被诊断、观察等后开始的行动方案(例如施用A

如本申请所用，术语“需要治疗”是指医师或其他护理人员做出的受试者需要或将从治疗中受益的判断。该判断是基于医师或护理人员专业知识范围内的多种因素做出的。

术语“预防”、“预防的”、“预防法”等是指以某种方式(例如在疾病、病症或病状，或其症状发作之前)启动的行动方案(诸如施用A

如本申请所用，术语“需要预防”是指医师或其他护理者做出的受试者需要或将从预防保健中受益的判断。该判断是基于医师或护理人员的专业知识范围内的多种因素做出的。

短语“治疗有效量”是指将药剂单独或作为药物组合物的一部分并且以单次剂量或作为一系列剂量的一部分施用于对象，当对对象施用时，施用量能够对疾病、病症或病况的任何症状、方面或特征具有任何可检测的积极作用。通过测量相关的生理效应可以确定治疗有效量，并且可以根据对象病况的给药方案和诊断分析等来调整治疗有效量。举例来说，在施用后的特定时间测量A

术语“抑制剂”和“拮抗剂”，或者“激活剂”和“激动剂”分别指抑制性或活化分子，例如，用于活化例如配体、受体、辅因子、基因、细胞、组织或器官。抑制剂是减少、阻断、阻止、延迟活化、使失活、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。激活剂是增加、活化、促进、增强激活、敏化或上调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。抑制剂也可以定义为减少、阻断或灭活固有活性(constitutive activity)的分子。“激动剂”是与靶标相互作用以引起或促进靶标活化增加的分子。“拮抗剂”是一种与激动剂作用相反的分子。拮抗剂阻止、降低、抑制或中和激动剂的活性，并且拮抗剂还可以阻止、抑制或降低靶标例如靶标受体的固有活性，即使在没有确定的激动剂的情况下。

术语“调节”、“调节法”等是指分子(例如激活剂或抑制剂)直接或间接地增加或降低A

分子的“活性”可以描述或指分子与配体或受体的结合；催化活性；刺激基因表达或细胞信号传导、分化或成熟的能力；抗原活性；其他分子的活性的调控等等。术语“增殖活性”包括促进对于例如正常细胞分裂，以及癌症、肿瘤、发育异常、细胞转化、转移和血管生成所必需的或与其特别相关的活性。

化合物I的固体形式

本发明提供了化合物3-[2-氨基-6-(1-{[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]-2-甲基苄腈(化合物I)的固体形式，包括晶型和无定形形式，以及溶剂化物和水合物形式。在一些实施方式中，本发明提供具有以下结构的化合物I的固体形式(例如晶型)：

及其溶剂化物或水合物。

化合物I可以采用多种固体形式，包括但不限于形式I、形式II和形式III。化合物I可以形成两种或更多种晶体形式的混合物，或形成基本上不含其他晶体形式的单一晶体形式。

形式I

在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过X射线粉末衍射图(XRPD)来表征，其具有在6.9、8.0、8.2、12.5、12.7、14.8、15.0、15.7、16.8、18.1、18.8、19.2、20.6、21.1、21.8、24.9、27.1或27.7度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

化合物I的形式I可以通过X射线粉末衍射(XRPD)图谱表征，其具有在6.9、8.0、8.2、12.5、12.7、14.8、15.0、15.7、16.8、18.1、18.8、19.2、20.6、21.1、21.8、24.9、27.1或27.7度2θ(±0.1度2θ)处的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过X射线粉末衍射图(XRPD)来表征，其具有在6.9、8.0、8.2、12.5、12.7、14.8、15.0、15.7、16.8、18.1、18.8，19.2、20.6、21.1、21.8、24.9、27.1或27.7度2θ(±0.1度2θ)处的六个或更多个峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过X射线粉末衍射图表征，其具有在6.9、8.2和15.7度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD是使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过X射线粉末衍射(XRPD)图表征，其具有在6.9、8.2、15.7和18.8度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过XRPD来表征，其具有在6.9、8.0、8.2、12.5、12.7、14.8、15.0、15.7、16.8、18.1、18.8，19.2、20.6、21.1、21.8、24.9、27.1或27.7度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuKα1辐射制作。在一些实施方案中，化合物I的固体形式I可以通过根据下表1中的峰的XRPD图表征：

表1.化合物I形式I样品的XRPD峰列表

在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过基本上符合图1的XRPD图表征。在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以基本上不含化合物I的其他固体形式。在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以基本上不含形式II和形式III。

化合物I的形式I可以通过在约193℃下具有吸热的差示扫描量热法(DSC)图来表征。在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过基本上符合图2的DSC图谱表征。

化合物I的形式I可以通过下表2所示的单晶X射线衍射数据的一个或多个特征来表征。

表2：化合物I的形式I的单晶X射线衍射数据

形式II

化合物I的形式II可以通过X射线粉末衍射(XRPD)图谱表征，其具有在7.1、7.8、8.2、8.7、12.4、13.9、14.9、15.3、15.6、17.5、18.3、19.3、19.8、20.2、21.4、22.2、25.0、25.6、26.4或27.1度2θ(±0.1度2θ)处的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以通过X射线粉末衍射图来表征，其具有在7.1、7.8、8.2、8.7、12.4、13.9、14.9、15.3、15.6、17.5、18.3、19.3、19.8、20.2、21.4、22.2、25.0、25.6、26.4或27.1度2θ(±0.1度2θ)处的六个或更多个峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以通过XRPD表征，其具有在7.1、7.8和18.3度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以通过XRPD图表征，其具有在7.1、7.8、14.9和18.3度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以通过X射线粉末衍射图来表征，其具有在7.1、7.8、8.2、8.7、12.4、13.9、14.9、15.3、15.6、17.5、18.3、19.3、19.8、20.2、21.4、22.2、25.0、25.6、26.4或27.1度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

表3.化合物I形式II样品的XRPD峰列表

在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以通过基本上如图5的XRPD图表征。在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以基本上不含化合物I的其他固体形式。在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以基本上不含形式I和形式III。

化合物I的形式II可以通过差示扫描量热(DSC)图进行表征，该图在约190℃时具有吸热峰。在一些实施方式中，化合物I的固体形式I可以通过基本上如图6的DSC图表征。

在一些实施方式中，化合物I的固体形式II可以通过基本上如图5的XRPD图和在约190℃下具有吸热峰的DSC图来表征。

形式III

化合物I的形式III可以通过X射线粉末衍射(XRPD)图谱表征，其具有在10.8、12.2、12.6、13.7、15.2、15.3、16.5、17.2、17.8、18.1、18.4、19.3、19.5、20.7、21.3、23.1、23.9、24.7、25.3或28.4度2θ(±0.1度2θ)处的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过X射线粉末衍射图来表征，其具有在10.8、12.2、12.6、13.7、15.2、15.3、16.5、17.2、17.8、18.1、18.4、19.3、19.5、20.7、21.3、23.1、23.9、24.7、25.3或28.4度2θ(±0.1度2θ)处的六个或更多个峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过XPRD图表征，其具有在12.2、20.7和21.3度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过XRPD图表征，其具有在12.2、12.6、20.7和21.3度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过X射线粉末衍射图来表征，其具有在10.8、12.2、12.6、13.7、15.2、15.3、16.5、17.2、17.8、18.1、18.4、19.3、19.5、20.7、21.3、23.1、23.9、24.7、25.3和28.4度2θ(±0.1度2θ)处的峰，其中，XRPD使用CuK

表4.化合物I形式III样品的XRPD峰列表

在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过XRPD图表征，其基本上与选自图7所示中的一种一致。在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以基本上不含化合物I的其他固体形式。在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以基本上不含形式I和形式II。

化合物I的形式III可以通过差示扫描量热(DSC)图进行表征，该图在约178℃和约193℃下具有一个或多个吸热峰。在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过DSC图进行表征，其在约178℃下具有吸热峰。在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过DSC图谱表征，其基本与图8一致。

在一些实施方式中，化合物I的固体形式III可以通过基本上与图7一致的XRPD图和在约178℃和约193℃下具有一个或多个吸热的DSC图来表征。

制备方法

本文提供的化合物I的固体形式可通过以下所述的方法和实施例中的方法制备。

起始原料的适用性

总的来说，起始化合物I原料的形态对于成功回收化合物I的固体形式并不重要，尽管初始溶解的动力学可能会受到影响。例如，通过冻干获得的无定形材料可以用于获得所需的固体形式。或者，化合物I的一种固体形式可用于获得化合物I的另一种固体形式，例如，较不稳定的固体形式可用于获得更稳定的形式。

单一溶剂和二元溶剂混合物

溶剂可以是适合形成溶液的任何溶剂。通常，溶剂可以是极性溶剂，在一些实施方式中，其为质子溶剂。其他合适的溶剂包括非极性溶剂。通过使用单一溶剂或二元溶剂混合物，可以使用多种溶剂来生成所需的化合物I的固体形式。在单一溶剂的情况下，通过在能够形成合理浓溶液的溶剂中加热来溶解起始化合物I原料，然后冷却以引发所需结晶形式的形成。合适的单一溶剂包括但不限于：醚，例如1，4-二恶烷、二乙醚和甲基叔丁基醚；链烷酸酯，例如乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯和乙酸丁酯；乙二醇和聚乙二醇，例如PEG400；酮，例如C

缓慢蒸发原料在适当溶剂中的饱和溶液，对于获得结晶材料也很有效。合适的溶剂包括但不限于：醚，例如1，4-二恶烷、二乙醚和甲基叔丁基醚；链烷酸酯，例如乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯和乙酸丁酯；酮，例如C

在使用二元溶剂混合物的情况下，首先将原料溶解在能够形成浓溶液的溶剂中(如前文所概述的)，以及在溶液仍然很热的同时，加入极性较小的溶剂(即反溶剂)，在这种溶剂中原料不易溶解，从而引发所需材料的结晶。在选定的实施方式中，在加热下，将材料溶解在丙酮中，并加入水以引发所需结晶形式的形成。合适的反溶剂包括但不限于：烷烃，例如C

溶剂/反溶剂比例

在二元溶剂混合物的情况下，溶剂与沉淀溶剂的比例，即为形成化合物I的过饱和溶液而添加的反溶剂，不会对化合物I固体形式的形成产生重大影响，只要加入足量反溶剂以引发产品结晶。溶剂与反溶剂的比例可影响相对于化合物I起始量的晶型回收率。

溶剂/化合物比例

相对于溶剂的化合物I的比例或浓度可以根据所用溶剂或溶剂混合物而变化。典型的浓度范围可以从200mg/mL到10mg/mL，上限的限制因素是原料的溶解度，或一旦发生结晶时的原料的易回收性。例如，可以将大约70mg的化合物I溶解在1mL的丙酮中，随后加入水，得到结晶形式。

温度

制备化合物I晶体形式的方法可以在任何合适的反应条件下进行。例如，制备化合物I的晶体形式的方法可以在任何合适的温度下进行，例如但不限于在室温以下、室温或室温以上。通常，本文所述的制备方法中使用的温度可以在约20℃至溶剂的回流温度的范围内。典型温度范围为约50℃至约80℃。一旦获得溶液，并且，如果需要，加入沉淀溶剂(即反溶剂)，将混合物冷却至室温。冷却速率会影响分离的化合物I的固体形式的晶体的大小、形状和质量。

结晶速度

几个因素会显著影响结晶速率。这些因素包括但不限于：添加反溶剂的速度、混合物冷却的速度和成核位点(例如灰尘、晶种或玻璃表面缺陷)的存在。这些参数的变化会影响分离的化合物I的固体形式的晶体的大小、形状和质量。

制备化合物I晶型的方法可以进行任何合适的时间。例如，时间可以是经几分钟、几小时或几天。在一些实施方式中，时间可以是几个小时，例如过夜。化合物I的晶型的制备方法也可以在任何合适的压力下进行。例如，压力可以低于大气压、在大气压左右或高于大气压。

化合物I的固体形式的分离

可以使用几种从上清液中分离出所需固体形式(例如晶型)的方法，包括过滤、倾析和溶剂蒸发。通常，通过真空过滤收集任何形成的固体，然后风干并随后暴露于高真空中以除去任何残留溶剂，从而获得晶型。

形式I

在一些实施方式中，本发明提供了制备本发明的化合物I的形式I的方法，包括在适合于制备形式I的条件下形成本发明的化合物I和溶剂的混合物。任何合适的溶剂可以用于制备化合物I形式I的方法中。在一些实施方式中，溶剂可以是甲苯、乙醇、异丙醇、甲乙酮(即2-丁酮)、丙酮、乙腈、乙酸异丁酯、乙酸乙酯、DMSO或二氯甲烷中的至少一种。在一些实施方式中，溶剂可以是丙酮、乙醇、异丙醇或二氯甲烷中的至少一种。在一些实施方式中，溶剂可包括丙酮、乙醇或异丙醇中的一种。在一些实施方式中，溶剂可以是与水结合的丙酮、乙醇或异丙醇中的至少一种。在一些实施方式中，溶剂可以是丙酮和水。

在一些实施方式中，本发明提供了通过在适于制备形式I的条件下，形成化合物I和溶剂(包括C

可以使用任何合适比例的丙酮和水。例如，如果将原料溶解在丙酮中并且加入水作为反溶剂，则丙酮与水的比例可以在约9：1至约1：9(体积：体积)，例如从约3：1至约1：5或约1：1至约1：6，之间变化。在一些实施方式中，丙酮与水的比例(体积：体积)为约9∶1、8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8或大约1：9。在一些实施方式中，丙酮与水的比例(体积：体积)为约1∶3或约1∶4。

形式II

本发明还提供了制备化合物I形式II的方法。在一些实施方式中，本发明提供了在适合制备形式II的条件下，通过形成化合物I和乙腈的混合物来制备化合物I的形式II的方法。在一些实施方式中，制备化合物I的形式II的方法包括形成化合物I、乙腈和水的混合物。

可以使用任何合适比例的乙腈和水。例如，如果将化合物I溶解在乙腈中并且加入水作为反溶剂，则丙酮与水的比例可以在约9：1至约1：9(体积：体积)，例如从约3：1至约1：5或约1：1至约1：6，之间变化。在一些实施方式中，乙腈与水的比例(体积：体积)为约9∶1、8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8或大约1：9。在一些实施方式中，乙腈与水的比例(体积：体积)为约1∶3或约1∶4。

形式III

在一些实施方式中，本发明提供了制备本发明化合物I的形式III的方法，包括在适合于制备形式III的条件下，形成本发明化合物I和溶剂的混合物。任何合适的溶剂均可用于制备化合物I形式III的方法。在一些实施方式中，制备化合物I的形式III的方法包括加热在溶剂中的化合物I，然后冷却混合物，得到形式III。在一些实施方式中，溶剂可以是水、甲醇、乙醇、异丙醇、甲乙酮(即2-丁酮)、丙酮、乙腈、乙酸异丁酯、乙酸乙酯或甲基叔丁基醚中的至少一种。在一些实施方式中，溶剂可以是水、甲醇、异丙醇或乙腈中的至少一种。在一些实施方式中，溶剂可包括水、甲醇、异丙醇或乙腈中的一种。

治疗和预防用途

本发明考虑了本文所述的化合物I的固体形式在治疗或预防广泛范围的疾病、病症和/或病况和/或其症状中的用途。虽然在下文中详细描述了特定的用途，但是应该理解，本发明不限于此。此外，虽然下文阐述了特定疾病、病症和病况的一般类别，但是某些疾病、病症和病状可以是一个以上类别的成员，而其他疾病、病症或病状可能不是任何公开类别的成员。

在一些实施方案中，本申请所述的疾病、病症和/或病状至少部分地由腺苷A

在一些实施方式中，以有效逆转或终止A

在某些实施方式中，癌症为转移性的或处于转移风险中，或者可能发生在弥散组织中，包括血液癌或骨髓癌(例如白血病)。在一些其他实施方案中，本发明的化合物可用于克服T细胞耐受性。

在一些实施方式中，本发明提供了用化合物I的固体形式和至少一种其他治疗剂或诊断剂治疗增生性疾病、癌症、肿瘤或癌前疾病的方法，其实例在本文其他地方列出。

本发明化合物I的固体形式可用于增加或增强免疫应答；改善免疫作用，包括提高疫苗疗效；以及增加炎症。可以使用本申请公开的化合物治疗与免疫缺陷疾病、免疫抑制医学治疗、急性和/或慢性感染以及衰老有关的免疫缺陷。化合物I的固体形式还可用于刺激患有医源性(iatrogenically)诱导的免疫抑制的患者的免疫系统，包括那些接受过骨髓移植、化疗或放疗的患者。

在本公开的特定实施方式中，通过提供佐剂活性，化合物I的固体形式用于增加或增强对抗原的免疫应答。在一个具体的实施方式中，将至少一种抗原或疫苗与至少一种本发明的化合物I的固体形式组合施用给受试者以延长对抗原或疫苗的免疫应答。还提供了治疗组合物，其包含至少一种抗原性试剂或疫苗组分(括但不限于病毒、细菌和真菌或其部分、蛋白质、肽、肿瘤特异性抗原和核酸疫苗)和至少一种本发明的化合物I的固体形式的组合。

可用本发明的化合物和组合物治疗或预防的免疫和炎症相关的疾病、病症和病况的非限制性名单包括：关节炎(如类风湿性关节炎)、肾衰竭、狼疮、哮喘、银屑病、结肠炎、胰腺炎、过敏、纤维化，手术并发症(如炎性细胞因子阻止愈合的地方)、贫血、和纤维肌痛。其他可能与慢性炎症有关的疾病和病症包括：阿尔茨海默氏病、充血性心力衰竭、中风、主动脉瓣狭窄、动脉硬化、骨质疏松症、帕金森氏病、感染、炎症性肠病(例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、过敏性接触性皮炎和其他湿疹、系统性硬化症、移植和多发性硬化症。

在其他免疫相关病症中，可以预期到抑制A

在一些实施方案中，本文所述的A

下文更详细地描述了上述疾病、病症和病况中的一些，对其A

通常以关节的膜内层(滑膜)中的慢性炎症为特征的类风湿性关节炎(RA)影响了约1％的美国人群(-210万人)。对包括TNF-a和IL-1在内的细胞因子在炎症过程中的作用的进一步理解使得开发和引入一类新的缓解疾病的抗风湿药物(DMARD)成为可能。药剂(其中的一些与用于RA的治疗方式重叠)包括ENBREL(依那西普(etanercept))，REMICADE(英夫利昔单抗(infliximab))，HUMIRA(阿达木单抗(adalimumab))和KINERET(阿那白滞素(anakinra))。尽管这些药剂中的一些缓解症状、抑制结构损伤的进展，并在特定患者群体中改善身体机能，但仍然需要具有改善的效力、互补作用机制和更少/更小严重副作用的替代的药剂。

银屑病，一组常见的免疫介导的慢性皮肤病，在美国影响超过450万人，其中150万人被认为患有中度至重度形式的疾病。此外，超过10％的银屑病患者会发展成银屑病关节炎，这会损伤关节周围的骨骼和结缔组织。对银屑病潜在生理学的更好理解导致引入了例如靶向T淋巴细胞和造成该疾病的炎性性质原因的细胞因子的活性的药剂。这些药剂包括TNF-α抑制剂(也用于治疗类风湿性关节炎(RA))，包括ENBREL(依那西普)、REMICADE(英夫利昔单抗)、HUMIRA(阿达木单抗)和诸如AMEVIVE(阿法赛特(alefacept))和RAPTIVA(依法珠单抗(efalizumab))的T细胞抑制剂。尽管这些药剂中的几种在某些患者群体中在某种程度上有效，但没有一种显示出有效治疗了所有患者。

设想的病毒性疾病、病症和病况的实例包括但不限于乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、HIV、AIDS(包括其表现，例如恶病质、痴呆和腹泻)、单纯疱疹病毒(HSV)、爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)、水痘带状疱疹病毒、柯萨奇病毒和巨细胞病毒(CMV)。

这类疾病和病症的其他实例包括：葡萄球菌和链球菌感染(例如分别为金黄色葡萄球菌和血链球菌)、利什曼原虫、弓形虫、滴虫、贾第虫、白色念珠菌、炭疽杆菌和铜绿假单胞菌。在一些实施方式中，疾病和病症包括分支杆菌感染(例如麻风分枝杆菌或结核分支杆菌)或者由单核细胞增多性李斯特氏菌或刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)造成的感染。本发明化合物I的固体形式可以治疗败血症、降低或抑制细菌生长，和降低或抑制炎性细胞因子。

其他实施方式考虑了治疗寄生虫感染，所述寄生虫感染包括但不限杜氏利什曼虫、热带利什曼原虫、大型利什曼原虫、埃塞俄比亚利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫(Plasmodium ovale)、或三日疟原虫(Plasmodiummalariae)。通常，采用预防性地抗寄生虫治疗(例如，在受试者前往寄生虫感染频率高的区域之前)。

患有多发性硬化症(MS)(一种严重衰弱性自身免疫的疾病，包括在脑和脊髓中多个炎症区域和髓鞘的瘢痕)的对象，可能特别受助于本文所述的化合物I的固体形式，因为目前的治疗仅缓解症状或延迟残疾的进展。

类似地，化合物I的固体形式对于患有神经退行性疾病，如阿尔茨海默氏病(AD)(一种严重损害患者思想、记忆和语言过程的脑部病症)；和帕金森病(PD)(一种以例如异常运动、僵硬和震颤为特征的CNS进行性疾病)的对象可能特别有利。这些疾病是进行性和衰弱性的，并且没有可用的有疗效的药剂。

药物组合物

本发明化合物I的固体形式可以是适于给予受试者的组合物形式。通常，这样的组合物是“药物组合物”，其包含化合物I的固体形式和一种或多种药学上可接受的或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。在某些实施方式中，化合物I的固体形式以治疗上可接受的量存在。药物组合物可用于本发明方法；因此，例如，所述药物组合物可被离体或体内施用至受试者以进行本申请所述的治疗和预防方法和用途。

可以将本发明的药物组合物配制成与预期的方法或施用途径相容；示例性的给药途径在本文中阐述。此外，药物组合物可以与本文所述的其他治疗活性剂或化合物联合使用，来治疗或预防本发明所考虑的疾病、病症和病况。

含有活性成分(例如A

适用于口服给药的片剂、胶囊剂等可以未包衣或通过已知技术包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并由此提供持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可以用本领域已知的技术包衣以形成用于控释的渗透治疗片剂。其他试剂包括生物可降解或生物相容性颗粒或聚合物质，如聚酯、聚胺酸、水凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚酐、聚乙醇酸、乙烯-乙酸乙烯酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硫酸鱼精蛋白或丙交酯/乙交酯共聚物、聚交酯/乙交酯共聚物或乙烯醋酸乙烯酯共聚物以控制施用的组合物的递送。例如，可以将口服剂分别包埋在通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，分别使用羟基甲基纤维素或明胶微胶囊或聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊或在胶体药物递送系统。胶体分散系统包括大分子复合物、纳米胶囊、微球、微珠和基于脂质的系统(包括水包油乳液、微胶粒、混合微胶粒和脂质体)。制备上述制剂的方法对于本领域技术人员将是显而易见的。

用于口服使用的制剂也可以作为硬明胶胶囊，其中，活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙、高岭土或微晶纤维素)混合，或者为软明胶胶囊，其中，活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

水性悬浮液含有与适于制造其的赋形剂混合的活性材料。这样的赋形剂可以是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟基丙基甲基纤维素，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或湿润剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)或烯氧化物与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或乙烯氧化物与长链脂肪醇(例如十七乙烯基氧基鲸蜡醇)或乙烯氧化物与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或乙烯氧化物与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚乙烯基脱水山梨醇单油酸酯)。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂。

油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油悬浮液可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇。可加入如上述那些甜味剂和调味剂，以提供可口的口服制剂。

适用于通过加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供了与分散或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。在本申请中举例说明了合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂，以及由脂肪酸衍生的酯或偏酯；己糖醇酐，例如山梨糖醇酐单油酸酯；和偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。

药物组合物通常包含治疗有效量的本发明设想的化合物I的固体形式以及一种或多种药学和生理学上可接受的制剂。合适的药学上可接受的或生理上可接受的稀释剂、载体或赋形剂，包括但不限于抗氧化剂(例如抗坏血酸和硫酸氢钠)、防腐剂(例如苯甲醇，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯)、乳化剂、悬浮剂、分散剂、溶剂、填料、填充剂、洗涤剂、缓冲剂、载体、稀释剂和/或佐剂。例如，合适的载体可以是生理盐水溶液或柠檬酸盐缓冲盐水，可能补充有用于肠胃外施用的药物组合物中常见的其它物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是进一步的示例性载体。本领域技术人员将容易地认识到可用于本文所考虑的药物组合物和剂型中的各种缓冲剂。典型的缓冲剂包括但不限于药学上可接受的弱酸、弱碱或其混合物。作为例子，缓冲组分可以是水溶性物质，如磷酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、柠檬酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、谷氨酸，及它们的盐。可接受的缓冲剂包括，例如，氨丁三醇(Tris)缓冲剂、N-(2-羟基乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)(HEPES)、2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、2-(N-吗啉)乙磺酸钠盐(MES)、3-(N-吗啉)丙磺酸(MOPS)和N-三[羟甲基]甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)。

在配制完药物组合物后，可将其作为溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体或脱水或冻干粉储存在无菌小瓶中。这种制剂可以以即用形式、使用前需要重构的冻干形式、使用前需要稀释的液体形式或其他可接受的形式被储存。在一些实施方式中，药物组合物在一次性使用容器(例如，一次性使用的小瓶、安瓿、注射器或自动注射器(类似于例如

制剂还可包括载体以保护组合物免于从体内快速降解或消除，例如控释制剂，包括脂质体、水凝胶、前药和微囊化递送系统。例如，可以使用延时材料，例如单独的与蜡组合的单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。任何药物递送设备均可用于递送A

积存注射(depot injection)，通常通过皮下或肌肉注射，也可用于在限定的时间段内释放本申请公开的A

药物组合物可以是无菌可注射的水溶液或油质悬浮液的形式。该悬浮液可根据已知技术使用本文提及的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射的制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液(例如，在1,3-丁二醇中的溶液)。可使用的可接受的稀释剂、溶剂和分散介质包括水、林格溶液、等渗氯化钠溶液、聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL

本发明设想了以栓剂形式用于直肠给药的化合物I的固体形式给药。栓剂可通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此，将在直肠中融化以释放药物。这种材料包括但不限于可可脂和聚乙二醇。

本发明设想的化合物I的固体形式可以是当前已知或将来开发的任何其他合适的药物组合物的形式(例如，用于鼻腔或吸入剂的喷雾剂)。

给药途径

本发明设想以任何合适的方式给药化合物I的固体形式及其组合物。合适的施用途径包括口服、肠胃外(例如肌内、静脉内、皮下(如注射或植入)、腹膜内、脑池内、关节内、腹膜内、脑内(脑实质内)和脑室内)、鼻、阴道、舌下、眼内、直肠、局部(如透皮)、口腔和吸入。通常，皮下或肌内给药的积存注射剂还可用于在限定的时间内释放本文公开的化合物I的固体形式。

本发明的特定实施方式包括口服给药。

联合疗法

本发明设想了将化合物I的固体形式与一种或多种活性治疗剂(例如化学治疗剂)或其他预防性或治疗方式(例如辐射)联合使用。在这种联合疗法中，各种活性剂通常具有不同的互补作用机制。这种联合疗法特别有益，其可以允许一种或多种试剂的剂量减少，从而减少或消除与一种或多种试剂相关的副作用。此外，这种联合疗法可以对潜在的疾病，病症或病状具有协同的治疗或预防作用。

如本文所用，“联合”意指包括可以分开给药的疗法，例如分别配制用于单独给药(例如，如可以在试剂盒中提供的)以及可以以单一制剂(即，“联合制剂(co-formulation)”)一起给药的疗法。

在某些实施方式中，化合物I的固体形式是顺序给药或施用的，例如，一种药物先于一种或多种其他药物给药。在其他实施方式中，化合物I的固体形式是同时施用的，例如其中两种或多种药剂同时或大约同时施用；所述两种或多种药剂可以存在在两种或多种分开的制剂中或组合成单一制剂(即，共制剂(co-formulation))。无论两种或多种药剂是顺序地施用还是同时施用，出于本发明的目的它们被认为是联合施用的。

本发明化合物I的固体形式可以与至少一种其他(活性)试剂联合使用，以在该情况下任何适合的方式。在一个实施方式中，在一段时间内维持用至少一种活性剂和至少一种本发明化合物I的固体形式的治疗。在另一个实施方式中，减少或中断用至少一种活性剂的治疗(例如，当受试者稳定时)，同时将本发明的化合物I的固体形式的治疗维持在恒定的给药方案下。在另一个实施方式中，减少或中断用至少一种活性剂的治疗(例如，当受试者稳定时)，同时减少本发明化合物I的固体形式的治疗(例如，较低剂量、更低给药频率或更短时间的治疗方案)。在又一个实施方案中，减少或中断用至少一种活性剂的治疗(例如，当受试者稳定时)，并且用本发明的化合物I的固体形式的治疗增加(例如，更高剂量、更频繁地给药或更长时间的治疗方案)。在又一个实施方式中，维持用至少一种活性剂的治疗，并减少或中断用本发明的化合物I的固体形式的治疗(例如，较低剂量、更低给药频率给药或较短时间的治疗方案)。在又一个实施方式中，减少或中断用至少一种活性剂的治疗和本发明的固体形式的治疗(例如，较低剂量、更低频率给药或较短时间的治疗方案)。

在某些实施方式中，本发明提供了用于肿瘤抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括给予本文所述的化合物I的固体形式与信号转导抑制剂(STI)组合以实现累加或协同抑制肿瘤生长。如本文所用，术语“信号转导抑制剂”是指选择性抑制信号传导通路中的一个或多个步骤的药剂。本发明的信号转导抑制剂(STI)包括：(i)bcr/abl激酶抑制剂(例如GLEEVEC)；(ii)表皮生长因子(EGF)受体抑制剂，包括激酶抑制剂和抗体；(iii)her-2/neu受体抑制剂(例如赫赛汀(HERCEPTIN))；(iv)Akt家族激酶或Akt通路抑制剂(例如雷帕霉素)；(v)细胞周期激酶抑制剂(例如，夫拉平度(flavopiridol))；和(vi)磷脂酰肌醇激酶抑制剂。参与免疫调节的药剂也可以与本文所述的A

化学治疗剂的实例包括但不限于：烷化剂，如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如苯唑多巴(benzodopa)、卡洛醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)和乌雷多巴(uredopa)；乙烯亚胺类和甲基三聚氰胺类，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺、三乙撑硫代磷酰胺和三羟甲基；氮芥类，如苯丁酸氮芥(chiorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴(novembichin)、氮芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼氮芥、曲洛磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，如卡莫司汀、氯脲毒素、福莫司汀、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，如阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸、博来霉素(bleomycin)，放线菌素C、卡奇霉素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、卡米诺霉素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素、更生霉素、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、奎拉霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素、链脲菌素(streptozocin)、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星；抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU；雄激素，如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；贝司布西(bestrabucil)；比生群；艾达曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛；地吖醌(diaziquone)；艾福米辛(elformithine)；依利醋铵；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫派达明(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁；凡那明(phenamet)；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofiran)；螺环锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；乌拉坦(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷；甲托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(Ara-C)；环磷酰胺；塞替派；类紫杉醇类，例如紫杉醇和多西他赛(doxetaxel)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂和铂配位化合物，如顺铂、卡铂和奥沙利铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯(navelbine)；诺凡特龙(novantrone)；替尼泊苷；道诺霉素；氨喋呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT11；拓扑异构酶抑制剂；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃司波霉素(esperamicin)；卡培他滨；蒽环类；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

化学治疗剂还包括用于调节或抑制对肿瘤激素作用的抗激素剂，例如抗如抗雌激素包括例如他莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)；以及抗雄激素如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，联合治疗包括包含了一种或多种化学治疗剂的化疗方案。在某些实施方式中，联合治疗包括施用激素或相关的激素药剂。

可以与化合物I的固体形式联合使用的其他治疗方式包括放射疗法、抗肿瘤抗原的单克隆抗体、单克隆抗体和毒素的复合物、T细胞佐剂、骨髓移植或抗原呈递细胞(例如树突状细胞疗法)。

所有癌症的特征的大量的遗传和表观遗传改变提供了一组多种多样的抗原，免疫系统可以利用它们来区分肿瘤细胞和其正常的对应细胞。在T细胞的情况下，通过经由T细胞受体(TCR)的抗原识别开起的应答的最终幅度(例如，细胞因子产生或增殖的水平)和质量(例如，所产生的免疫应答的类型，例如细胞因子产生的模式)受共刺激和抑制信号(免疫检查点)之间的平衡调节。在正常生理条件下，免疫检查点对于自身免疫的预防(即维持自身耐受性)以及还对于当免疫系统对致病性感染作出应答时保护组织免受伤害是至关重要的。免疫检查点蛋白作为一种重要的免疫抵抗机制，在肿瘤中表达异常。

T细胞一直是治疗上控制内源性抗肿瘤免疫力的主要焦点，因为：i)它们选择性识别所有细胞区室中蛋白质衍生的多肽的能力；ii)它们直接识别和杀死抗原表达细胞的能力(通过CD8+效应T细胞；也称为细胞毒性T淋巴细胞(CTLs))；和iii)它们通过CD4+辅助T细胞协调多种免疫反应的能力，这整合了适应性和先天效应机制。

在临床环境中，免疫检查点的阻断—其导致抗原特异性T细胞应答的放大—已经证明是人类癌症治疗中的有前景的方法。

T-细胞介导的免疫包括多个连续步骤，每个步骤通过平衡刺激和抑制信号来调节，以使应答最优化。虽然免疫应答中的几乎所有抑制信号最终调节细胞内信号传导通路，但许多通过膜受体启动，其配体是膜结合的或可溶的(细胞因子)。虽然相对于正常组织，调节T细胞激活的共刺激和抑制性受体和配体通常不会在癌症中过表达，但是在组织中调节T细胞效应功能的抑制性配体和受体通常在肿瘤细胞上或在与肿瘤微环境相关的非转化细胞上过表达。可以是使用激动剂抗体(用于共刺激通路)或拮抗剂抗体(用于抑制通路)调节可溶性和膜结合受体-配体免疫检查点的功能。因此，与目前批准用于癌症治疗的大多数抗体相反，阻断免疫检查点的抗体不直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体，以增强内源性抗肿瘤活性。[见Pardoll，(2012年4月)癌症自然评论(Nature Rev.Cancer)12：252-64]。

免疫检查点(配体和受体)的实例，其中的一些在各种类型的肿瘤细胞中被选择性地上调，是用于阻断的候选者，包括PD1(程序性细胞死亡蛋白1)；PDL1(PD1配体)；BTLA(B和T淋巴细胞衰减子)；CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)；TIM3(T细胞膜蛋白3)；LAG3(淋巴细胞激活基因3)；TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)；和杀伤剂抑制性受体，其可根据它们的结构特征被分为两类：i)杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)和ii)C型凝集素受体(II型跨膜受体家族的成员)。文献中已经描述了其他较不明确的免疫检查点，包括受体(例如2B4(也称为CD244)受体)和配体(例如某些B7家族抑制性配体，例如B7-H3(也称为CD276)和B7-H4(也称为B7-S1、B7x和VCTN1))。[见Pardoll，(2012年4月)癌症自然评论(Nature Rev.Cancer)12：252-64]。

本发明设想将本文所述的A

在本发明的一方面，将所要求保护的化合物I的固体形式与免疫肿瘤剂组合，所述免疫肿瘤剂为(i)刺激性(包括共刺激性)受体的激动剂或(ii)T细胞上的抑制(包括共抑制)信号的拮抗剂，两者都导致了放大的抗原特异性T细胞应答。刺激和抑制分子中的某些是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员。结合至共刺激或共抑制受体的膜结合配体的一个重要的家族是B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)、和B7-H6。结合至共刺激或共抑制受体的膜结合配体的其他家族是结合至同源TNF受体家族成员的TNF家族分子，其包括CD40和CD4OL、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD3OL、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LT13R、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素a/TNF13、TNFR2、TNFa、LT13R、淋巴毒素a 1132、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY、NGFR。

在其他方面，免疫肿瘤学试剂是抑制T细胞激活的细胞因子(例如，IL-6、IL-10、TGF-B、VEGF和其他免疫抑制细胞因子)或者刺激T细胞活化的细胞因子，其用于促进免疫应答。

在一个方面，T细胞应答可以通过将所公开的A

还用于联合治疗其他药剂包括抑制或消耗巨噬细胞或单核细胞的试剂，包括但不限于：CSF-1R拮抗剂，例如CSF-1R拮抗剂抗体包括RG7155(W011/70024、W011/107553、W011/131407、W013/87699、W013/119716、W013/132044)或FPA-008(W011/140249；W013169264；W014/036357)。

另一方面，所公开的A

在一方面，所述免疫肿瘤学试剂为CTLA-4拮抗剂，例如拮抗性的CTLA-4抗体。适合的CTLA-4抗体包括例如伊匹单抗(YERVOY)(易普利姆玛(ipilimumab))或曲美木单抗(tremelimumab)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为PD-1拮抗剂，例如拮抗性的PD-1抗体。适合的PD-1抗体包括例如OPDIVO(纳武单抗)、KEYTRUDA(派姆单抗)、或MEDI-0680(AMP-514；W02012/145493)。该免疫肿瘤治疗剂也可能包括皮地珠单抗(Pidilizumab)(CT-011)，尽管其对PD-1结合的特异性存有疑问。靶向PD-1受体的另一种方法是由与IgGl的Fc部分融合的PD-L2(B7-DC)的胞外域组成的重组蛋白，称为AMP-224。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为PD-L1拮抗剂，例如拮抗性的PD-L1抗体。适合的PD-Ll抗体包括例如MPDL3280A(RG7446；W02010/077634)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(MEDI4736)、BMS-936559(W02007/005874)和MSB0010718C(W02013/79174)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为LAG-3拮抗剂，例如拮抗性的LAG-3抗体。适合的LAG3抗体包括例如BMS-986016(W010/19570,W014/08218)、或者IMP-731或IMP-321(W008/132601,W009/44273)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为CD137(4-1BB)激动剂，例如激动性的CD137抗体。适合的CD137抗体包括例如乌瑞鲁单抗(urelumab)和PF-05082566(W012/32433)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为GITR激动剂，例如激动性的GITR抗体。适合的GITR抗体包括例如BMS-986153、BMS-986156、TRX-518(W006/105021,W009/009116)和MK-4166(W011/028683)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为OX40激动剂，例如激动性的OX40抗体。适合的OX40抗体包括例如MEDI-6383或MEDI-6469。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂是OX40L拮抗剂，例如拮抗性的OX40L抗体。适合的OX40L抗体包括例如RG-7888(W006/029879)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为CD40激动剂，例如激动性的CD40抗体。在又一实施方式中，所述免疫肿瘤学试剂是CD40拮抗剂，例如拮抗性的CD40抗体。适合的CD40抗体包括例如鲁卡木单抗(lucatumumab)或达西珠单抗(dacetuzumab)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为CD27激动剂，例如激动性的CD27抗体。适合的CD27抗体包括例如瓦力单抗(varlilumab)。

在另一方面，所述免疫肿瘤学试剂为MGA271(对B7H3)(W011/109400)。

本发明包括上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

在治疗高胆固醇血症(以及动脉粥样硬化)的联合治疗中可用的治疗剂的实例包括抑制胆固醇酶促合成的他汀类药物(例如瑞舒伐他汀、氟伐他汀、立普妥、洛伐他汀、PRAVACOL和辛戈他丁)；胆汁酸树脂(例如，考来替泊(COLESTID)、LO-CHOLEST、PREVALITE、考来烯胺(QUESTRAN)和考来维仑(WELCHOL))，其螯合胆固醇并防止其吸收；阻止胆固醇吸收的依泽替米贝(ZETIA)；纤维酸(例如TRICOR)，其减少甘油三酯并可适度增加HDL；烟酸(例如NIACOR)，其适度降低LDL胆固醇和甘油三酯；和/或前述的组合(例如，VYTORIN(依泽替米贝与辛伐他汀))。可以与本文所述的A

本发明包括上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

可用于联合疗法的治疗剂示例包括但不限于以下药物：非类固醇抗炎药物(NSAID)，例如阿司匹林、布洛芬,和其他的丙酸衍生物(阿明洛芬、苯恶洛芬、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬、苯布芬(fenbufen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吲哚布洛芬(indoprofen)、酪洛芬(ketoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、萘普生、奥沙普秦(oxaprozin)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)和硫恶洛芬(tioxaprofen))，乙酸衍生物(茚甲新、阿西美辛(acemetacin)、阿氯芬酸(alclofenac)、环氯茚酸(clidanac)、双氯芬酸、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、芬替酸(fentiazac)、呋罗芬酸(fuirofenac)、异丁芬酸(ibufenac)、伊索克酸(isoxepac)、奥平内克(oxpinac)、舒林酸(sulindac)、硫平酸(tiopinac)、托美丁(tolmetin)、齐多美辛(zidometacin)、和佐美酸(zomepirac))，芬那酸(fenamic acid)衍生物(氟灭酸、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、尼氟灭酸(niflumic acid)和托芬那酸(tolfenamic acid))，联苯甲酸衍生物(二氟尼柳(diflunisal)和氟苯柳(flufenisal))、昔康类(oxicams)(伊索昔康(isoxicam)、吡罗昔康、舒多昔康(sudoxicam)和替诺昔康(tenoxican))，水杨酸盐类(乙酰水杨酸、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)和吡唑酮类(阿扎丙宗(apazone)、苯哌隆(bezpiperylon)、非普拉宗(feprazone)、莫非保松、羟基保泰松、苯基丁氮酮。其他联合包括环氧酶-2(COX-2)抑制剂。

用于联合的其他活性剂包括类固醇，例如泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松或氢化可的松。这种联合可能是特别有利的，因为可以通过逐渐减少所需的类固醇剂量来减少或甚至消除类固醇的一种或多种副作用。

可联合使用以治疗例如类风湿性关节炎的活性剂的其他实例包括细胞因子抑制性抗炎药(CSAID)；针对其他人细胞因子或生长因子，例如，TNF、LT、IL-10、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF的抗体或拮抗剂。

特定的激活剂组合可能在自身免疫和随后的炎症级联中的不同点产生干扰，并且包括TNF拮抗剂，例如嵌合、人源化或人TNF抗体、REMICADE、抗TNF抗体片段(如CDP870)和可溶性p55或p75 TNF受体、其衍生物、p75TNFRIgG(ENBREL)或p55TNFR1gG(LENERCEPT)、可溶性IL-13受体(sIL-13),以及TNFa转化酶(TACE)抑制剂；类似地，IL-1抑制剂(如白介素1转化酶抑制剂)可能有效。其他联用包括白介素11、抗P7和p-选择素糖蛋白配体(PSGL)。与本文所述的A

这种组合疗法包括靶向各种病毒生命周期阶段并具有不同作用机制的抗病毒剂，包括但不限于以下：病毒脱壳抑制剂(例如金刚烷胺和金刚烷乙胺(rimantidine))；逆转录酶抑制剂(例如阿昔洛韦，齐多夫定和拉米夫定)；靶向整合酶的药物；阻断转录因子与病毒DNA结合的药物；影响翻译的药物(例如反义分子)(例如，弗米韦森(fomivirsen))；调节翻译/核糖核苷酶功能的药物；蛋白酶抑制剂；病毒组装调节剂(例如利福平)；抗逆转录病毒药，例如核苷类似物逆转录酶抑制剂(例如叠氮胸苷(AZT)、dd1、ddC、3TC、d4T)；非核苷逆转录酶抑制剂(例如依法韦仑，奈韦拉平)；核苷酸类似物逆转录酶抑制剂；和防止病毒颗粒释放的药物(例如扎那米韦和奥司他韦)。某些病毒感染(例如HIV)的治疗和/或预防通常需要抗病毒剂的组(“鸡尾酒”)。

被考虑与固体形式的化合物I联合使用的其他抗病毒药包括但不限于以下药物：阿巴卡韦、阿德福韦、金刚烷胺、安普那韦、安普利近、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥、波谱瑞韦尔特(boceprevirertet)、西多福韦、可比韦(combivir)、地瑞那韦(darunavir)、地拉夫定、地达诺新、二十二烷醇、依度尿苷(edoxudine)、恩曲他滨、恩夫韦地(enfuvirtide)、恩替卡韦、泛昔洛韦、福沙那韦(fosamprenavir)、膦甲酸、膦乙醇(fosfonet)、http://en.wikipedia.org/wiki/Fusion_inhibitor、更昔洛韦、伊巴他宾、异丙肌苷(imunovir)、碘苷(idoxuridine)、咪喹莫特(imiquimod)、印第那韦(indinavir)、肌苷、各种干扰素(例如聚乙二醇干扰素α-2a)、洛匹那韦、洛韦胺(loviride)、马拉维罗、吗啉脒胍(moroxydine)、甲吲噻腙(methisazone)、奈非那韦、奈沙韦(nexavir)、喷昔洛韦、帕拉米韦、普可那利、鬼臼毒素、雷特格韦(raltegravir)、利巴韦林、利托那韦、普拉咪定(pyramidine)、沙奎那韦(saquinavir)、司他夫定(stavudine)、特拉匹韦(telaprevir)、替诺福韦、替拉那韦(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、三协维(trizivir)、曲金刚胺、特鲁瓦达、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、维立韦罗(vicriviroc)、阿糖腺苷、韦拉咪定(viramidine)和扎西他滨。

本发明考虑将本文所述的化合物I的固体形式与抗寄生虫剂联合使用。这些药剂包括但不限于噻苯咪唑、双羟萘酸噻嘧啶、甲苯咪唑、吡喹酮、氯硝柳胺、硫双二氯酚、奥沙尼喹、美曲磷脂、依维菌素、阿苯达唑、依氟鸟氨酸(eflornithine)、美拉胂醇、喷他脒(pentamidine)、苄硝唑、硝呋莫司和硝基咪唑。本领域技术人员知道可用于治疗寄生虫病的其他药剂。

本发明的实施方式考虑了将本文所述的化合物I的固体形式与可用于治疗或预防细菌性疾病的药物的联合使用。可以按照各种方式对抗菌剂进行分类，包括基于作用机制，基于化学结构以及基于活性谱。抗细菌剂的实例包括靶向细菌细胞壁(例如头孢菌素和青霉素)或细胞膜(例如多粘菌素)或者干扰必需细菌酶(例如磺酰胺类，利福霉素和喹啉类)的那些。靶向蛋白质合成的大多数抗菌剂(例如四环素类和大环内酯类)是抑菌剂，而诸如氨基糖苷类的试剂是杀菌剂。另一种分类抗菌剂的方法是基于它们的靶向特异性；“窄谱”药剂靶向特定类型的细菌(例如，革兰氏阳性菌，如链球菌)，而“广谱”药剂具有靶向更广泛范围的细菌的活性。本领域技术人员知道适用于特定细菌感染的抗菌剂的类型。

本发明的实施方案方式考虑了本文所述的A

本发明包括上述药剂(和药剂类别的成员)的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

剂量

本发明的A

通常，给药参数规定剂量小于对对象可能具有不可逆毒性的量(最大耐受剂量(MTD))并且不小于对对象产生可测量效果所需的量。考虑给药途径和其他因素，这些量由例如与ADME相关的药代动力学和药效学参数确定。

有效剂量(ED)是在服用它的一部分对象中产生治疗反应或所需效果的药剂的剂量或量。药剂的“中值有效剂量”或ED50是在其给药的群体的50％中产生治疗反应或所需作用的药剂的剂量或量。尽管ED50通常用于衡量药物效应的合理预期，但临床医生在考虑所有相关因素后可能认为适当的剂量不一定是合适的剂量。因此，在某些情况下，有效量大于计算的ED50，在其他情况下，有效量小于计算的ED50，而在其他情况下，有效量与计算的ED50相同。

此外，本发明化合物I的固体形式的有效剂量可以是当以一个或多个剂量给予受试者时，相对于健康受试者产生期望结果的量。例如，对于经历特定病症的对象，有效剂量可以是该量将该病症的诊断参数、估量、标志等改善至少约5％，至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％或更多超过90％的剂量，其中100％被定义为正常对象表现出的诊断参数、估量、标志等。

在某些实施方式中，本发明考虑的化合物I的固体形式可以每天一次或多次以每天受试者体重的约0.01mg/kg至约50mg/kg，或约1mg/kg至约25mg/kg的剂量水平施用(例如，口服)，以获得所需的治疗效果。

对于口服剂的给药，组合物可以以含有1.0-1000毫克活性成分(具体地，1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分)的片剂、胶囊等形式提供。

在某些实施方式中，所需化合物I的固体形式的剂量包含在单位剂型中。短语“单位剂型”是指物理上不连续的单位，每个单位含有足以产生所需的效果的单独的或与一种或多种另外的试剂组合的预定量的固体形式其。应该理解，单位剂型的参数将取决于特定的药剂和待实现的效果。

试剂盒

本发明还考虑了包含本文所述的化合物I的固体形式及其药物组合物的试剂盒。如下所述，试剂盒通常为容纳各种组分的物理结构的形式，并且可以用于，例如，实施上述方法。

试剂盒可以包括本文公开的一种或多种的化合物I的固体形式(在例如无菌容器中提供)，其可以是适合向对象施用的药物组合物的形式。本文所述的化合物I的固体形式可以以随时可用的形式(例如片剂或胶囊)或以在施用之前需要例如重新配制(reconstitution)或稀释的形式(例如粉末)提供。当本文所述的化合物I的固体形式为需要由使用者重新配制或稀释的形式时，所述试剂盒还可包括稀释剂(例如无菌水)、缓冲液、药学上可接受的赋形剂等，与如本文所述的固体形式一起或分开包装。当考虑联合治疗时，试剂盒可以单独包含几种试剂，或者它们可能已经在试剂盒已被联合。试剂盒的每个组分可以被包含在单独的容器内，并且所有的各种容器可以在单个包装内。本发明的试剂盒可以被设计用于适当地保持容纳在其中的组分所需的条件(例如，冷藏或冷冻)。

试剂盒可以包含标签或包装插页，其包括其中组分的识别信息和它们的使用说明(例如，剂量参数、活性成分的临床药理学，包括作用机制、药代动力学和药效学、不良作用、禁忌症等)。标签或插页可以包含诸如批号和到期日期的制造商信息。标签或包装插页可以例如整合到容纳组分的物理结构中，单独包含在物理结构内，或者附着到试剂盒的组分(例如安瓿、管或小瓶)上。

标签或插页可以附加地包括或结合到如下的计算机可读载体中，诸如磁盘(例如，硬盘、卡、存储盘)、光盘，诸如CD或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁带，诸如RAM和ROM的电存储载体或者这些的组合如磁/光存储媒介、FLASH媒介或者记忆型存储卡之类的。在一些实施方式中，实际的说明不在试剂盒中，但是提供了用于从远程源，例如通过互联网获得指示的手段。

实验

提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供有关如何制作和使用本发明的完整公开和描述，并且无意限制发明人认为其发明的范围，它们也不旨在表示已进行以下实验，或者它们是可以进行的所有实验。应该理解，用现在时写出的示例性描述不一定被执行，而是可以执行该描述以生成其中描述的性质的数据等。已经努力确保所使用的数字(例如量、温度等)的准确性，但是应该考虑到一些实验误差和偏差。

除非另有说明，份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度以摄氏度(℃)为单位，以及压力处于或接近大气压。使用标准缩写，包括以下缩写：wt＝野生型；bp＝碱基对；kb＝千碱基；nt＝核苷酸；aa＝氨基酸；s或sec＝秒；min＝分钟；h或hr＝小时；ng＝纳克；μg＝微克；mg＝毫克；g＝克；kg＝千克；dl或dL＝分升；μl或μL＝微升；ml或mL＝毫升；l或L＝升；μM＝微摩尔；mM＝毫摩尔；M＝摩尔；kDa＝千道尔顿；i.m.＝肌内的(地)；i.p.＝腹膜内的(地)；SC或SQ＝皮下的(地)；QD＝每日；BID＝每天两次；QW＝每周；QM＝每月；HPLC＝高效液相色谱；BW＝体重；U＝单位；ns＝无统计学意义；PBS＝磷酸盐缓冲盐水；IHC＝免疫组化；DMEM＝杜尔贝科改良伊格尔培养基(Dulbeco's Modification of Eagle's Medium)；EDTA＝乙二胺四乙酸。

材料和方法

在指出之处或下面的实施例中使用以下通用材料和方法：

文献中有丰富的可用作评价本文所述化合物的基础的分析和其他实验技术。

X射线粉末衍射(XRPD)

在帕纳科X射线衍射仪(PANalytical Xpert pro)上进行XRPD分析，在3至35°2θ之间扫描样品。将材料轻轻研磨以粉碎结块，然后将其装载到带有Kapton或Mylar聚合物薄膜的多孔板上以支持样品。然后将多孔板放入衍射仪中，并使用40kV/40mA发电机设置以透射模式(步长为0.0130°2θ)运行的Cu K辐射(

偏光显微镜(PLM)

使用配备了Motic相机和图像捕获软件(Motic Images Plus 2.0)的奥林巴斯(Olympus)BX50偏振显微镜确定了结晶度(双折射)的存在。所有图像均使用20倍物镜记录。

差示扫描量热法(DSC)

将约5mg的材料称入铝制DSC盘中，并用穿孔铝盖非密封地封上。然后将样品盘装入Seiko DSC6200(配有冷却器)中，冷却并保持在20℃。一旦获得稳定的热流响应，就以10℃/min的扫描速率将样品和参比样品加热到230℃，并监控所得的热流响应。氮气用作吹扫气体，流速为50cm

热重分析(TGA)

将约5mg的材料称入一个敞开的铝盘中，并装入同时热重/差示热分析仪(TG/DTA)中，并保持在室温下。然后将样品以10℃/min的速度从20℃加热到300℃，在此期间记录样品重量的变化以及任何差热事件(DTA)。氮气用作吹扫气体，流速为300cm

动态蒸气吸附(DVS)

将约10mg的样品放入网状蒸汽吸附天平盘中，并装载到表面测量系统(SurfaceMeasurement Systems)的DVS-1、DVS Intrinsic或DVS Advantage动态蒸汽吸附天平中。使样品经受增量为10％的40％至90％的相对湿度(RH)的爬升曲线，，在每个阶段(step)保持样品直到25℃下达到稳定的重量(dm/dt 0.004％，最小阶段长度30min，最大阶段长度500min)。吸附循环完成后，使用相同程序将样品干燥至0％RH，然后再进行第二次吸附循环回到40％RH。进行两个循环。绘制了在吸附/解吸循环期间的重量变化，从而可以确定样品的吸湿性。然后对保留的任何固体进行XRPD分析。

重量分析蒸气吸附(GVS)

将大约10-20mg的样品放入网状蒸汽吸附天平盘中，并装载到海德分析技术(Hiden Analytical)的IGASorp水分吸附分析仪天平中。使样品经受增量为10％的40％至90％的相对湿度(RH)的爬升曲线。在每个阶段保持样品直到25℃下达到稳定的重量(98％的阶段完成，最小阶段长度30min，最大阶段长度60min)。吸附循环完成后，使用相同的程序将样品干燥至0％RH，最后恢复到40％RH的起始点。进行两个循环。绘制了在吸附/解吸循环期间的重量变化，从而可以确定样品的吸湿性。

高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)

仪器：安捷伦1100

柱：Zorbax Eclipse Plus C18 150mm x 3.0mm，颗粒尺寸3.5μm

柱温：35℃

自动进样器温度：室温

UV波长：228nm

注射量：3μL

流量：1mL/min

流动相A：水(95：5水：ACN，0.1％甲酸)

流动相B：乙腈(0.1％甲酸)

梯度程序：

实施例

本领域技术人员将认识到，有多种方法可用于制备如权利要求中所述的分子。本领域已知的多种方法已用于制备本发明的化合物，其中一些在实施例中举例说明。

实施例1：3-[2-氨基-6-(1-{[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]-2-甲基苄腈(化合物I)的合成

步骤1:在装有磁力搅拌棒的250mL圆底烧瓶中，依次加入硼酸酯(3.89g，16mmol)和2-氨基-4，6-二氯嘧啶(3.67g，22.4mmol)。加入无水乙醇(100mL)，然后加入KHCO

步骤2:在圆底烧瓶中，将5.1g(20.8mmol)的氯嘧啶悬浮在42mL脱气的THF中。向该悬浮液中加入8.68mL(62.4mmol)的Et

步骤3:在圆底烧瓶中，将前一步骤中的粗制TIPS产品溶于42mL无水THF中，冷却至0℃。向其中加入25mL(25.0mmol)的TBAF(1.0M的THF溶液)。在0℃下，将反应搅拌15min。加入饱和NH

步骤4:在N

步骤5：在N

步骤6：叠氮化物(3.34g，17.4mmol)、炔烃(3.71g，15.8mmol)、硫酸铜(II)(39mg；0.158mmol)和抗坏血酸钠(156mg，0.790mmol)在2：1的t-BuOH/H

实施例2：3-[2-氨基-6-(1-{[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]-2-甲基苄腈晶体固体形态的制备

通过加热至回流，将实施例1的步骤6的产物(7.53g)溶解在丙酮(109mL)中，此时以10mL/min的速率加入水(218mL)以引发结晶。冷却混合物，并通过过滤收集固体，用1：2丙酮/水(109mL)洗涤，并在真空下干燥，得到呈白色固体的化合物I的形式I(7.08g；94％)。

实施例3：3-[2-氨基-6-(1-{[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]甲基}-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基]-2-甲基苄腈固体形式的筛选

通过将化合物I溶解在1，4-二恶烷中并随后冻干来生产无定形化合物I。通过XRPD缺乏指示峰，证实了无定形固体形式。对于无定形化合物I，将溶剂加入到12x40 mg样品中，以制备用于热循环的浆液。该材料易溶于12种溶剂中的许多种，因此，一些样品作为饱和溶液进行了热循环。

表5：无定形化合物I的定性溶出数据

然后将浆液/溶液热循环(搅拌下)经约72h–r.t.4h，然后40℃4 h。过滤所有温度循环后剩余的固体物质，并通过XRPD和PLM分析分离出的物质。在物质量允许的情况下，在任何晶体物质上也收集TG/DTA。剩余的12种饱和溶液(无论是过滤后还是不存在固体物质)均分为三部分，然后进行以下操作：

-在

-反溶剂加入–加入1mL反溶剂(tBME)，并将样品放置过夜。在没有分离出固体的情况下，将溶剂蒸发并将该物质重新溶解于其原始溶剂中，然后加入1mL tBME或庚烷作为反溶剂。将样品放置过夜。

-蒸发–从小瓶上取下盖子，以使溶剂蒸发。

通过XRPD、PLM分析此阶段分离出的任何固体，如果是结晶，则收集TG/DTA(在材料量允许的情况下)。

热循环后，以下溶剂产生了没有固体物质的透明溶液：1,4-二恶烷、2-乙氧基乙醇和THF。

化合物I的形式I是由25％丙酮：75％水；二氯甲烷；和甲苯制备的。形式I的示例性XRPD如图1所示，其峰列表如表1所示。

化合物I的形式II由25％乙腈：75％水制得，其具有与图5一致的XRPD和与图6一致的DSC图。图5中形式II的XRPD的峰列表如表3所示。

化合物I的形式III是从异丙醇、乙腈、甲醇和水样品中制备的。形式III具有与图7所示的一致的XRPD和与图8所示的一致的DSC图。图7中形式III的XRPD的峰列表如表4所示。

实施例4：化合物I的其他示例性结晶条件

使用单一溶剂加热，二元溶剂混合物加热和缓慢蒸发的方法，确定了产生物质的晶体形式的各种条件。结晶度最初是通过物质的熔化范围来确定的，其中，与无定形物质相比，结晶化合物显示出相对尖锐和更高的熔化范围。通过冻干获得的无定形物质表现出＜100℃的熔融范围。表6和表7显示了所选条件的概要。

表6：使用单一溶剂通过加热/冷却或缓慢蒸发结晶

熔点(℃)。*第二熔化发生在大约193-194℃

表7：通过使用二元溶剂混合物结晶

熔点(℃)。*第二熔化发生在大约193-194℃

对由不同溶剂组合获得的物质进行的熔点测量表明，可以得到该材料的至少两种晶型。观察到的最高熔点形式(形式I)大约在193-195℃熔化，并通常从二元混合物中获得。还观察到在179-181℃下熔融的另一种形式(形式III)，其通常通过使用包含醇溶剂的二元混合物或使用一种溶剂获得。通常情况下，在179-181℃时观察到部分熔化，然后在193-195℃时观察到剩余的固体熔化。此外，在某些样品中，观察到在179-181℃下的完全熔化，然后再凝固和在193-195℃下再次熔化。对选定批次的NMR分析显示只有微量的溶剂存在。

通过XRPD和DSC分析获得形态差异的确认。XRPD分析显示了各自晶型的两种不同的图。DSC数据也与观察到的熔点一致。

相比在178℃处发生转变的形式III，基于DSC数据，形式I(熔点为193-195℃)是更热稳定的多晶型物，DSC数据指示其在194℃处发生了转变。两种形式的竞争性1：1浆料实验为稳定性提供了另外的支持，由于在各种溶剂中，形式III转化为了形式I。

实施例5：化合物I的形式I的单晶X射线衍射

单晶X射线衍射研究是在配置有Mo K

用全矩阵最小二乘(SHELXL-2014)各向异性地细化所有非氢原子。使用骑乘模型放置所有碳键合的氢原子。使用SHELXL-2014中的适当HFIX命令，它们的位置相对于它们的母原子受到限制。所有其他氢原子(氢键)都位于差图中。使用DFIX命令限制了它们的相对位置，并且可以自由优化其热量。

实施例6：化合物I的形式I的稳定性和吸湿性

将含有一定数量的化合物I的形式I的样品瓶在40℃，75％相对湿度(RH)的温度下放置一周。HPLC和XRPD分析表明该结晶物质是稳定的，没有观察到分解或形态变化。另外，将含有一定量的结晶物质的小瓶在密闭的小瓶中置于80℃的温度下一周。通过HPLC和XRPD分析表明，该结晶物质是稳定的，没有观察到分解或形态变化。

通过动态蒸气吸附(DVS)分析了一定量的化合物I形式I。样品置于以10％的增量的40％至90％的RH的爬升曲线。在25℃下，在每个阶段(step)保持样品直到达到稳定的重量。吸附循环完成后，使用相同程序将样品干燥至0％RH，然后再进行第二次吸附循环回到40％RH。进行两个循环。绘制了在吸附/解吸循环期间的重量变化，从而可以确定样品的吸湿性。然后对所得固体进行XRPD分析，未观察到形态变化。DVS显示在0-90％相对湿度范围内，水的可逆吸收，在90％相对湿度下，最大值为1.1％水，如图4所示。该值表明吸湿性稍强，但低于理论一水合物值4.22％。在循环使用材料时没有观察到滞后现象。

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