一种有助于增强免疫力的调制乳粉及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种有助于增强免疫力的调制乳粉，尤其涉及一种有助于增强免疫力的调制乳粉及其制备方法，属于食品领域。

背景技术

人体免疫力与营养摄入息息相关，合理的营养素摄入是增强免疫力的有效方式之一。调制乳粉是以生牛(羊)乳或及其加工制品为主要原料，添加其它原料，添加或不添加食品添加剂和营养强化剂，经加工制成的乳固体含量不低于70％的粉状产品。在后疫情时代，具有免疫增强活性的调制乳粉成为功能性食品开发的研究热点。

T细胞和巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分，免疫受损个体在细胞水平上的表现包括T细胞数量显著减少，巨噬细胞数量显著减少且巨噬细胞的吞噬功能显著受损。

只有T细胞和巨噬细胞数量保持在合理的水平上，且巨噬细胞吞噬功能正常，才是真正意义上的免疫力提高，而现有的调制乳粉均难以在这一层面上实现。

发明内容

本发明提供一种有助于增强免疫力的调制乳粉，该调制乳粉营养丰富，可改善低免疫力个体T细胞数量和巨噬细胞数量减少以及巨噬细胞吞噬功能降低的情况，促进T细胞和巨噬细胞数量保持在合理的水平上，从而显著增强人体的免疫力。

本发明还提供一种有助于增强免疫力的调制乳粉的制备方法，该制备方法流程简洁、操作简单。

本发明提供一种有助于增强免疫力的调制乳粉，其中，按照总量1000份计，所述调制乳粉包括以下重量份原料：原料乳700-1000份、低聚半乳糖10-50份、异构化乳糖3-20份、枸杞粉0.5-10份、动物双歧杆菌乳亚种BL-990.01-0.5份；

其中，动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数≥1.0×10

如上所述的调制乳粉，所述调制乳粉包括以下重量份原料：所述调制乳粉包括以下重量份原料：所述原料乳750-900份、所述低聚半乳糖15-30份、所述异构化乳糖液5-10份、所述枸杞粉0.5-2份、所述动物双歧杆菌乳亚种BL-99 0.01-0.1份；

其中，所述动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数≥1.5×10

如上所述的调制乳粉，其中，所述异构化乳糖包括异构化乳糖粉或异构化乳糖液中的至少一种。

如上所述的调制乳粉，其中，所述调制乳粉还包括乳铁蛋白0.2-1.0份。

如上所述的调制乳粉，其中，所述调制乳粉还包括动物双歧杆菌乳亚种HN0190.01-0.5份，其中，动物双歧杆菌乳亚种HN019的活菌数≥3.0×10

如上所述的调制乳粉，其中，所述调制乳粉还包括维生素A 0.001-0.01份，维生素D 0.00002-0.00015份，维生素E 0.01-0.35份，维生素B

如上所述的调制乳粉，其中，所述调制乳粉还包括碳酸钙1-19份，硫酸亚铁0.02-0.15份，硫酸锌0.02-0.2份。

本发明还提供一种上述任一项所述的调制乳粉的制备方法，其中，包括以下步骤：

1)将包括所述原料乳的原料体系和所述低聚半乳糖、异构化乳糖进行混合，得到第一物料；

2)将所述第一物料进行均质、杀菌、浓缩处理，其中，浓缩后干物质含量为40-65％，得到第二物料；

3)将所述第二物料进行喷雾干燥处理，冷却后得到第三物料；

4)将所述第三物料和所述枸杞粉、动物双歧杆菌乳亚种BL-99进行混合，得到所述调制乳粉。

如上所述的制备方法，其中，步骤4)中还包括将所述第三物料和乳铁蛋白，和/或动物双歧杆菌乳亚种HN019进行混合。

如上所述的制备方法，其中，步骤1)中还包括将维生素溶解液加入第一物料，其中，所述维生素溶解液包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素B

和/或，步骤1)中还包括将碳酸钙溶解液、硫酸亚铁溶解液、硫酸锌溶解液加入第一物料。

本发明提供的有助于增强免疫力的调制乳粉，通过科学复配低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞粉、动物双歧杆菌乳亚种BL-99，并限定动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数，使上述成分协同配合，可为人体提供科学合理的营养，有效保护巨噬细胞和T细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞和T细胞数量减少以及巨噬细胞的吞噬功能降低的情况，从而显著增强人体的免疫力。

附图说明

图1为正常对照组T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图2为模型对照组T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图3为对比例1给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图4为对比例2给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图5为对比例3给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图6为对比例4给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图7为对比例5给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图8为实施例1给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图9为实施例2给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图10为实施例3给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图11为实施例4给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图12为正常对照组巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图13为模型对照组巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图14为对比例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图15为对比例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图16为对比例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图17为对比例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图18为对比例5给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图19为实施例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图20为实施例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图21为实施例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图22为实施例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图23为正常对照组巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图24为模型对照组巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图25为对比例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图26为对比例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图27为对比例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图28为对比例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图29为对比例5给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图30为实施例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图31为实施例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图32为实施例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；

图33为实施例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明第一方面提供一种有助于增强免疫力的调制乳粉，按照总量1000份计，上述调制乳粉包括以下重量份原料：原料乳700-1000份、低聚半乳糖10-50份、异构化乳糖3-20份、枸杞粉0.5-10份、动物双歧杆菌乳亚种BL-99 0.01-0.5份；

其中，动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数≥1.0×10

调制乳粉是以生牛(羊)乳或及其加工制品为主要原料，添加其它原料，添加或不添加食品添加剂和营养强化剂，经加工制成的乳固体含量不低于70％的粉状产品。

本发明不限定上述原料乳的种类，但是限定上述原料乳的干物质量在本发明调制乳粉的原料中的质量百分含量不低于70％，以确保本发明调制乳粉中蛋白质、脂肪等营养成分的含量符合规定。

上述原料乳可为生牛乳、生羊乳、复原乳、全脂乳粉、脱脂乳粉、脱盐乳清粉中的至少一种。

可以理解的是，当上述原料乳包括生牛乳、生羊乳、复原乳等液体乳中的至少一种时，应将上述液体乳按照其干物质在本发明调制乳粉原料中含量进行换算后得到上述液体乳的实际添加量，例如生牛乳500-6000份中，生牛乳的干物质含量为12％-14.5％，即生牛乳在本发明调制乳粉的原料中的实际添加量为60-870份。也就是说，无论原料乳为生牛乳、生羊乳、复原乳等液体乳，还是为全脂乳粉、脱脂乳粉、脱盐乳清粉等干乳粉，上述原料乳在本发明调制乳粉原料中的质量百分含量不低于70％是指上述原料乳的干物质在本发明调制乳粉原料中的质量百分含量不低于70％。

当上述原料乳包括脱盐乳清粉时，其在该调制乳粉中的质量百分含量一般为5％-45％。

免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力，具体表现为，包括T细胞和巨噬细胞的人体免疫系统在清理外来病原体、异常细胞、受感染细胞时表现出来的能力。T细胞的免疫作用主要是通过细胞免疫来实现，可以识别和杀伤特异性的病原体，还可以吞噬病毒和异常细胞，是人体免疫应答功能的重要细胞成分；巨噬细胞具有高度的吞噬能力，能够通过细胞表面的受体与目标物质结合，然后将其包裹成吞噬体，进而将其内部的物质降解和消化，主要作用是吞噬和消化各种病原体、细胞垃圾和异常细胞，以维持组织的清洁和正常功能；巨噬细胞还与T细胞相互作用，激活免疫应答。T细胞和巨噬细胞的数量越少，巨噬细胞的吞噬能力越弱，人体抵御病毒、细菌等的能力自然会变差，免疫力也会降低。总的来说，巨噬细胞和T细胞的数量以及巨噬细胞的吞噬能力维持在正常范围对于保证人体正常免疫力至关重要。

与正常个体相比，低免疫力个体或免疫受损个体的T细胞和巨噬细胞的数量较少，巨噬细胞的吞噬能力较弱，即免疫力差。本发明的增强免疫力是指有效改善低免疫力个体或免疫受损个体T细胞和巨噬细胞的数量减少以及巨噬细胞的吞噬功能受损等情况，有助于提高免疫初期的响应速度，提高免疫系统对病毒和致病菌的清除能力，从细胞水平显著增强人体免疫力。

低聚半乳糖是一种天然属性功能性低聚糖，可以促进合成b族维生素，能够调节肠道微生态的平衡，能够增加蛋白质吸收和利用率，还可以帮助矿物质吸收，进而可以增强人体的免疫力；异构化乳糖属于可溶性膳食纤维，也被称为益生元，在人体肠道菌群调节中起着很重要的作用，促进双歧杆菌和乳酸杆菌的增殖，同时它能提高大便的含水量，增加大便软度，刺激肠道规律蠕动，帮助人体排便通畅，同时在肠道内能够合成部分B族维生素，增强人体的免疫力；枸杞中含有丰富的枸杞多糖，具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、抗自由基、抗疲劳、抗辐射、保护生殖功能和改善作用；动物双歧杆菌乳亚种BL-99，该菌株单菌即具有显著增强体液免疫、激活NK细胞的能力，能用于改善由于饮食不规律和工作压力增加而引发的免疫能力低下等问题。

本发明通过科学复配低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞、动物双歧杆菌乳亚种BL-99，并限定动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数，制备得到的调制乳粉具有显著增强免疫力的功效。这是因为低聚半乳糖、异构化乳糖具有调节肠道菌群的作用，能促进动物双歧杆菌乳亚种BL-99的增殖，枸杞能够提高人体的机能，有助于低聚半乳糖、异构化乳糖和动物双歧杆菌乳亚种BL-99发挥增强免疫的作用，动物双歧杆菌乳亚种BL-99又可反过来促进低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞被人体更好的吸收利用，利用上述四种成分和原料乳等得到的调制乳粉，强化了低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞、动物双歧杆菌乳亚种BL-99协同增强免疫力的功效，具有1+1+1+1>4的效果，在上述合理添加量的基础上不需添加更多的成分就可实现高性价比的增强免疫力的效果。

上述调制乳粉富含丰富的蛋白质，营养丰富，通过科学合理地复配低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞、动物双歧杆菌乳亚种BL-99，并进一步限定动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数，强化了增强免疫力的功效。该调制乳粉能够刺激和营养人体免疫系统，有效保护T细胞和巨噬细胞，显著改善低免疫力个体或免疫受损个体的T细胞和巨噬细胞的数量减少以及巨噬细胞的吞噬功能降低的情况，有利于提高免疫初期的响应速度，提高免疫系统对病毒和致病菌的清除能力，从而显著增强人体免疫力。

进一步地，按照总量1000份计，上述调制乳粉包括以下重量份原料：原料乳750-900份、低聚半乳糖15-30份、异构化乳糖液5-10份、枸杞粉0.5-2份、动物双歧杆菌乳亚种BL-99 0.01-0.1份；其中，动物双歧杆菌乳亚种BL-99的活菌数≥1.5×10

上述异构化乳糖包括异构化乳糖粉或异构化乳糖液中的至少一种，异构化乳糖粉和异构化乳糖液是异构化乳糖在目前市场上的两种常见剂型，均可方便地添加到本发明的产品中。

本发明的调制乳粉还包括乳铁蛋白0.2-1.0份，乳铁蛋白和前述低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞、动物双歧杆菌乳亚种BL-99具有协同增强人体免疫力的功效，可以进一步改善低免疫力个体或免疫受损个体的T细胞和巨噬细胞的数量减少以及巨噬细胞的吞噬功能降低的情况。

当上述调制乳粉还包括动物双歧杆菌乳亚种HN019 0.01-0.5份，其中，动物双歧杆菌乳亚种HN019的活菌数≥3.0×10

上述调制乳粉还包括维生素A 0.001-0.01份，维生素D 0.00002-0.00015份，维生素E 0.01-0.35份，维生素B

上述调制乳粉还包括碳酸钙1-19份，硫酸亚铁0.02-0.15份，硫酸锌0.02-0.2份，添加上述成分使调制乳粉的营养成分更加完善，有利于为人体提供更加全面的营养，更加有利于免疫力的提升。

为了使上述调制乳粉的营养更加全面，进而可以更好地增强人体免疫力，上述调制乳粉还可包括固体玉米糖浆、乳矿物盐、磷脂中的至少一种。

进一步地，按照总量1000份计，上述调制乳粉包括固体玉米糖浆0-300份，乳矿物盐0-10份，磷脂0-15份，这些成分可以和前述的调制乳的功效成分协同配合，显著增强人体的免疫力。

上述调制乳粉还包括食品辅剂，上述食品辅剂使用本领域常用的种类即可，例如包括稳定剂、乳化剂、酸度调节剂、防腐剂、抗结剂中的至少一种。

本发明第二方面提供一种上述有助于增强免疫力的调制乳粉的制备方法，包括以下步骤：

1)将包括原料乳的原料体系和低聚半乳糖、异构化乳糖进行混合，得到第一物料；

2)将第一物料进行均质、杀菌、浓缩处理，其中，浓缩后干物质含量为40-65％，得到第二物料；

3)将第二物料进行喷雾干燥处理，冷却后得到第三物料；

4)将第三物料和枸杞粉、动物双歧杆菌乳亚种BL-99进行混合，得到上述调制乳粉。

可以先将原料乳通过储奶罐和粉仓称重后打入真空混料罐，进行高速搅拌混匀，混料温度为40-60℃，混料时间为30-70min，得到上述原料体系。

本发明不限定上述均质的条件，采用本领域常规条件即可。

为了提高第一物料的均质效果，可在均质前将第一物料预热至45-65℃。上述杀菌一般选用巴氏杀菌，杀菌温度为85-105℃，杀菌时间为5-35s。

上述浓缩处理的目的是提高第一物料中干物质量，有利于步骤3)喷雾干燥的进行，减少喷雾干燥处理的工作量，进而有利于提高工作效果、节约能源，有利于提高产品的品质。

上述浓缩处理使第一物料中干物质量提高至40-65％时，再进行喷雾干燥的效果更好，更有利于提高产品的品质。

上述喷雾干燥是系统化技术应用于物料干燥的一种方法，具体步骤包括于干燥室中将上述第二物料雾化后，使其在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥产品，将该干燥产品过流化床冷却后得到第三物料。

喷雾干燥的条件选择本领域常用的条件即可，例如进风温度160-220℃，排风温度75-95℃。

上述冷却的目的在于，因枸杞粉含有大量活性功能成分，动物双歧杆菌乳亚种BL-99是活的益生菌，在高温下均容易失活，所以为了避免了上述两种成分受热失活，确保两种成分的增强免疫功能不受影响，进而确保上述调制乳粉的增强免疫的功效，需在加入上述两种成分之前先将喷雾干燥后的物料进行冷却。一般地，上述冷却的温度为30℃以下。

将上述冷却后的第三物料和上述枸杞粉、动物双歧杆菌乳亚种BL-99进行干混，混合均匀后，即可得到均匀一致的调制乳粉。

上述制备方法，针对枸杞粉和动物双歧杆菌乳亚种BL-99均具有热敏感性的特点，将上述两种成分的添加步骤安排在喷雾干燥并冷却处理之后，而不是和其他原料一起添加，如此安排有助于保持枸杞粉和动物双歧杆菌乳亚种BL-99的功能活性，进而确保了在上述制备得到的调制乳粉中能充分发挥出协同增强免疫力的功效。

上述制备方法工艺成熟、操作简便，适合工业化生产。

一般地，在工业化大生产中，因为第一物料的产量非常多，可在上述均质结束后，将均质后的第一物料迅速冷却至8℃以下暂存备用，待需要时再取出，有助于提高生产效率。

当上述调制乳粉的原料中还包括乳铁蛋白，和/或动物双歧杆菌乳亚种HN019时，为了避免高温导致乳铁蛋白的营养流失，以及高温使动物双歧杆菌乳亚种HN019灭活，可在步骤4)中将第三物料和乳铁蛋白，和/或动物双歧杆菌乳亚种HN019进行混合。上述操作有利于保持乳铁蛋白和动物双歧杆菌乳亚种HN019的功能活性，有利于提高调制乳粉增强免疫力的功效。

上述制备方法的步骤1)中还包括将维生素溶解液加入第一物料，其中，该维生素溶解液包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素B

也就是说，当上述调制乳粉的原料还包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素B

步骤1)中还包括将碳酸钙溶解液、硫酸亚铁溶解液、硫酸锌溶解液加入第一物料。

当上述调制乳粉的原料还包括碳酸钙、硫酸亚铁、硫酸锌时，可先将这些矿物质分别进行溶解，得到碳酸钙溶解液、硫酸亚铁溶解液、硫酸锌溶解液，再将这些溶解液加入第一物料中，有利于减少这些矿物质与上述维生素的接触反应时间，降低上述维生素的损失，同时保证这些矿物质与第一物料混合均匀。

具体地，可将碳酸钙加水搅拌溶解10-40min，得到碳酸钙溶解液；硫酸亚铁加水搅拌溶解20-50min，得到硫酸亚铁溶解液；硫酸锌加水搅拌溶解20-50min，得到硫酸锌溶解液。

可以理解的是，上述碳酸钙、维生素类、硫酸亚铁、硫酸锌可在上述制备方法的步骤1)混合过程中分别通过营养素罐打入混料罐。当上述调制乳粉中同时包括碳酸钙、维生素类、硫酸亚铁、硫酸锌时，一般按照先添加碳酸钙，再添加维生素类，最后添加硫酸亚铁、硫酸锌的顺序进行添加。如此有利于避免维生素类的损失，还可提高上述各物料充分溶解、混匀于第一物料中。

可以理解的是，当上述调制乳粉中还包括磷脂时，可在上述制备方法的步骤1)中将磷脂通过料斗、储油罐或随其他原料加入混料罐中进行混合。

以下，通过具体实施例和对比例对本发明进行更为详细的介绍。

实施例1

本实施例的有助于增强免疫力的调制乳粉，包括以下重量份的原料：

生牛乳3700份，脱脂奶粉150份，低聚半乳糖15份，异构化乳糖液6份，枸杞粉1.2份，动物双歧杆菌乳亚种BL-99 0.02份，乳铁蛋白0.5份，动物双歧杆菌乳亚种HN019 0.2份，维生素A 0.0056份，维生素D 0.000103份，维生素E 0.166份，维生素B

上述调制乳粉的制备方法，包括以下步骤：

1)将生牛乳、脱脂奶粉、脱盐乳清粉、固体玉米糖浆、乳矿物盐、通过储奶罐和粉仓称重后打入真空混料罐，进行高速搅拌混匀，混料温度为48℃，混料时间为42min；将碳酸钙加水搅拌溶解15min后得到碳酸钙溶解液，将维生素A、维生素D、维生素E、维生素B

2)将上述第一物料预热至55℃后进行均质，将均质后的料液进行巴氏杀菌，杀菌温度为91℃，杀菌时间为20s，将杀菌后的料液浓缩至料液干物质含量为49％，得到第二物料；

3)将上述第二物料进行喷雾干燥处理，进风温度181℃，排风温度88℃；然后过流化床冷却至30℃以下，得到第三物料；

4)将上述第三物料和枸杞粉、乳铁蛋白、动物双歧杆菌乳亚种BL-99、动物双歧杆菌乳亚种HN019干混均匀，得到均匀一致的调制乳粉。

实施例2

本实施例与实施例1基本相同，区别在于：

低聚半乳糖10份，异构化乳糖液20份，枸杞粉0.5份，动物双歧杆菌乳亚种BL-990.5份，其中，动物双歧杆菌乳亚种BL-99的菌种数为1.0×10

实施例3

本实施例与实施例1基本相同，区别在于：

低聚半乳糖50份，异构化乳糖液3份，枸杞粉10份，动物双歧杆菌乳亚种BL-990.01份，余量为生牛乳。

实施例4

本实施例与实施例1基本相同，区别在于：

低聚半乳糖30份，异构化乳糖液10份，枸杞粉2份，动物双歧杆菌乳亚种BL-99 0.1份，余量为生牛乳。

对比例1

维生素C，用标准稀释水配制成100mg/mL母液，现配现用。

对比例2

本对比例与实施例1基本一致，区别在于：

用低聚半乳糖6份代替异构化乳糖液6份，其他条件保持不变。

对比例3

本对比例与实施例1基本一致，区别在于：

用低聚半乳糖1.2份代替枸杞粉1.2份，其他条件保持不变。

对比例4

本对比例与实施例1基本一致，区别在于：

用动物双歧杆菌乳亚种HN019 0.02份代替动物双歧杆菌乳亚种BL-990.02份，其他条件保持不变。

对比例5

本对比例与实施例1基本一致，区别在于：

用异构化乳糖液15份代替低聚半乳糖15份，其他条件保持不变。

试验例实施例和对比例中的组合物对T细胞和巨噬细胞的影响

1、实验动物

1)T细胞数量减少改善实验：转基因T细胞红色荧光品系斑马鱼，自然成对交配繁殖，年龄3dpf，每实验组为30尾，每实验组进行10组平行实验。

2)巨噬细胞数量减少改善实验：转基因巨噬细胞绿色荧光品系斑马鱼，自然成对交配繁殖，年龄3dpf，每实验组为30尾，每实验组进行10组平行实验。

3)巨噬细胞吞噬功能改善实验：野生型AB品系斑马鱼，自然成对交配繁殖，年龄3dpf，每实验组为30尾，每实验组进行10组平行实验。

上述斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450～550μS/cm；pH为6.5～8.5；硬度为50～100mg/L CaCO

2、仪器和试剂

解剖显微镜(SZX7，OLYMPUS，Japan)；CCD相机(VertA1，上海土森视觉科技有限公司，China)；电动聚焦连续变倍荧光显微镜(AZ100，Nikon，Japan)；显微注射仪(IM-300，Narishige，Japan)；拉针仪(PC-10，Narishige，Japan)；精密电子天平(CP214，OHAUS，USA)；6孔板(Nest Biotech，China)；

维生素C，白色片剂，批号5210331，东北制药集团沈阳第一制药有限公司；酒石酸长春瑞滨注射液(批号190401，江苏豪森药业股份有限公司，China)。

3、实验方法

3-1：T细胞数量减少改善实验

1)随机选取3dpf转基因T细胞红色荧光品系斑马鱼，下午13:00静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液，构建斑马鱼T细胞免疫功能损伤模型；

2)随机选取模型斑马鱼，每实验组为30尾，每实验组进行10组平行实验；

3)按照表1的给药剂量浓度，利用实施例和对比例的样品对实验组进行给药处理，同时设置正常对照组(3dpf转基因T细胞红色荧光品系斑马鱼，未注射酒石酸长春瑞滨注射液)和模型对照组(静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液但未进行给药处理)，使用养鱼用水处理正常对照组和模型对照组。

每组斑马鱼生存环境容量均为20mL；每组均加入0.01％过碳酸钠增氧；每天10:00换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至斑马鱼年龄达到7dpf，当天9:00，随机选取每组10尾斑马鱼，在荧光显微镜下拍照，用NIS-Elements D 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中T细胞荧光强度总和(S)，采用LSD法对T细胞荧光强度总和(S)进行统计学分析结果，用于评价供试品对T细胞数量减少的改善作用。荧光显微镜照片见图1-图11，其中，图1为正常对照组T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图2为模型对照组T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图3为对比例1给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图4为对比例2给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图5为对比例3给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图6为对比例4给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图7为对比例5给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图8为实施例1给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图9为实施例2给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图10为实施例3给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图11为实施例4给药浓度为250ug/mL的T细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；对图1-图11进行图像分析并采集数据，结果见表1。统计学处理结果用mean±SE表示。两组间用T-Test，多组间用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析，p<0.05表明具有显著性差异。T细胞减少改善作用计算公式如下：

3-2：巨噬细胞数量减少改善实验

1)随机选取3dpf转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，下午13:00静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液，构建斑马鱼巨噬细胞免疫功能损伤模型；

2)随机选取模型斑马鱼，每实验组为30尾，每实验组进行10组平行实验；

3)按照表2的给药剂量浓度，利用实施例和对比例的样品对实验组进行给药处理，同时设置正常对照组(3dpf转基因巨噬细胞荧光斑马鱼，未注射酒石酸长春瑞滨注射液)和模型对照组(静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液但未进行给药处理)，使用养鱼用水处理正常对照组和模型对照组。

每组斑马鱼生存环境容量均为20mL；每组均加入0.01％过碳酸钠增氧；每天10:00换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至斑马鱼年龄达到7dpf，当天9:00，随机选取每组10尾斑马鱼，在荧光显微镜下拍照，用NIS-Elements D 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度总和(S)，采用LSD法对巨噬细胞荧光强度总和(S)进行统计学分析结果，用于评价供试品的巨噬细胞数量减少改善作用。

荧光显微镜照片见图12-图22，其中，图12为正常对照组巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图13为模型对照组巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图14为对比例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图15为对比例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图16为对比例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图17为对比例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图18为对比例5给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图19为实施例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图20为实施例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图21为实施例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图22为实施例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞数量减少改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；对图12-图22进行图像分析并采集数据，结果见表2。统计学处理结果用mean±SE表示。两组间用T-Test，多组间用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析，p<0.05表明具有显著性差异。巨噬细胞减少改善作用计算公式如下：

3-3：巨噬细胞吞噬功能促进实验

1)随机选取3dpf野生型AB品系斑马鱼，下午13:00同时静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液和荧光颗粒建立斑马鱼免疫功能损伤模型；

2)随机选取模型斑马鱼，放置于烧杯中，每个烧杯(即每实验组)30尾，每实验组进行10组平行实验；

3)按照表2的给药剂量浓度，利用实施例和对比例的样品对实验组进行给药处理，同时设置正常对照组(3dpf野生型AB品系斑马鱼，未注射酒石酸长春瑞滨注射液)和模型对照组(静脉注射酒石酸长春瑞滨注射液和荧光颗粒，但未进行给药处理)，使用养鱼用水处理正常对照组和模型对照组。

每组斑马鱼生存环境容量为20mL；每组均加入0.01％过碳酸钠增氧；每天10：00换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至斑马鱼年龄达到7dpf，当天9:00，随机选取每组10尾斑马鱼，在荧光显微镜下拍照，用Image J高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼体内剩余荧光颗粒的数量(N)，采用LSD法对剩余荧光颗粒的数量(N)进行统计学分析结果，用于评价供试品对巨噬细胞吞噬促进功效。荧光显微镜照片见图23-图33，其中，图23为正常对照组巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图24为模型对照组巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图25为对比例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图26为对比例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图27为对比例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图28为对比例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图29为对比例5给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图30为实施例1给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图31为实施例2给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图32为实施例3给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片，图33为实施例4给药浓度为250ug/mL的巨噬细胞吞噬功能改善实验斑马鱼荧光显微镜照片；对图23-图33进行图像分析并采集数据，结果见表2。统计学处理结果用mean±SE表示。两组间用T-Test，多组间用方差分析和Dunnett’sT-检验进行统计学分析，p<0.05表明具有显著性差异。巨噬细胞吞噬促进作用计算公式如下：

4、实验结果

表1T细胞数量减少改善实验结果

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说明：星号(*)代表与模型对照组对比，有显著性差异。*代表p＜0.05，**代表p＜0.01，***代表p<0.001。

表1结果显示：通过科学合理地复配低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞、动物双歧杆菌乳亚种BL-99，可显著改善T细胞数量减少的情况，强化了上述成分协同增强免疫力的功效。

表2巨噬细胞数量减少及吞噬功能改善实验结果

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说明：星号(*)代表与模型对照组对比，有显著性差异。*代表p＜0.05，**代表p＜0.01，***代表p<0.001。

表2结果显示：通过科学合理地复配低聚半乳糖、异构化乳糖、枸杞、动物双歧杆菌乳亚种BL-99，可显著改善巨噬细胞数量减少和巨噬细胞吞噬功能受损的情况，强化了上述成分协同增强免疫力的功效。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。