12-O-脂肪酸酯齐墩果酸类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药技术领域。具体地，本发明涉及一种作用于法尼酯X受体(FXR)的齐墩果酸类衍生物及其制备方法和用途。更具体地，本发明涉及12-O-脂肪酸酯齐墩果酸类化合物及其制备方法和用途，以及它们在药学上可接受的盐、非对映异构体，这些化合物的制备方法，以及这些化合物在调节FXR活性、用于治疗和/或预防FXR介导的疾病的药物中的应用。这些FXR介导的疾病包括但不限于糖尿病、高脂血症、动脉粥样硬化等代谢性疾病和胆汁淤积、非酒精性脂肪性肝炎等肝胆疾病。

背景技术

法尼酯X受体(FXR)在1995年作为一种孤儿核受体被发现。1999年发现胆汁酸在生理浓度下能激活FXR。作为胆汁酸的受体，FXR通过调控参与胆汁酸代谢的基因表达来维持胆汁酸在体内的平衡。此外，FXR还参与脂质和糖类的代谢过程。FXR作为一个药物靶标，有望为糖尿病、高脂血症、非酒精性脂肪性肝炎，甚至肿瘤、感染性疾病等提供新的治疗选择。

生理浓度的多种初级和次级胆汁酸可激活FXR，其中鹅去氧胆酸(chenodexycholic acid,CDCA)激动作用最强。不过，直接将CDCA用于相关的生物学调控并产生疾病治疗作用，受其自身溶解性差且毒性较高的限制。在甾体结构的基础上，发现了FXR激动剂6-乙基鹅去氧胆酸(6-ECDCA)。6-ECDCA又称奥贝胆酸(OCA)，在2016年被FDA批准用于治疗原发性胆汁性肝硬化，是第一个被批准的以FXR为靶的新药。此外，非甾体类结构的FXR激动剂代表性化合物，有早期发现的GW4064以及处于临床试验的Tropifexor,Nidufexor等。由于在临床实验中的强效FXR激动剂可导致高密度脂蛋白上升、瘙痒等副作用，近来对于FXR部分激动剂乃至拮抗剂的研究增多。

已有的研究表明，由于FXR下游基因众多，选择性调节其中与某种疾病密切相关的部分基因，可治疗疾病并减轻副作用。因此，作用于FXR并具有选择性调节作用的小分子化合物，又被称为选择性胆酸受体调节剂(SBARM)，可用于开发治疗代谢性疾病和肝胆疾病的分子。

含有齐墩果酸(OA)的植物在传统医药中可用于治疗肝病，而OA也在中国被批准用于保肝和辅助性治疗病毒性肝炎(通过降低谷丙转氨酶等机制)。近年来OA还被发现对FXR具有选择性调节作用【Liu W,Wong C.Phytotherapy Research2010,24:369-373.】，并可通过对FXR的拮抗减轻模型动物的胆汁淤积症状。但是OA活性不强，因而我们以这类五环三萜的结构为基础，经过修饰发展了12位取代的OA类似物，对FXR的作用明显增强且对下游基因具有选择性调控作用。本发明所公开的是与FXR作用的12-O-脂肪酸酯齐墩果酸类化合物，及其制备方法和对FXR相关疾病的应用。

发明内容

本发明提供式(I)所示的一类化合物，以及它们在药学上可接受的盐、非对映异构体，它们的制备方法以及用于治疗或预防各种FXR相关疾病方面的应用。

本发明是通过如下技术方案来实现的。

首先，本发明提供一种式(I)所示的含有12-O-脂肪酸酯齐墩果酸类化合物，其特征在于，取代基R选自氢、未取代和取代C1-7烷基。其中所述的C1-7烷基优选C1-6烷基或C1-5烷基，更优选自甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基。

取代C1-7烷基中的取代基优选自氢、甲酰基、C1-5烷酰基、C1-5烷酰氧基、羟基、C1-5烷氧基、C2-5烯氧基、羧基、C1-5烷氧羰基、C3-5烯氧羰基。

所述的C1-5烷酰基优选自乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基；所述的C1-5烷酰氧基选自甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰烷氧基；所述的C1-5烷氧基选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊烷氧基；所述的C2-5烯氧基选自丙烯氧基、丁烯氧基、戊烯氧基；所述的C1-5烷氧羰基选自甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、丁氧羰基、戊烷氧羰基；所述的C3-5烯氧羰基选自丙烯氧羰基、丁烯氧羰基、戊烯氧羰基。

具有式(I)结构的化合物，进一步优选为12-正戊酰、正己酰、乙酰丙酰、乙酰丁酰、(3-羧基)丙酰、(3-羧基)丁酰、甲氧羰乙酰、甲氧羰丙酰、甲氧羰丁酰取代的12β-O-羟基-13H-齐墩果烷-3β-羟基-28-羧酸。

其次，本发明所述的12-O-脂肪酸酯齐墩果酸类化合物可以采用下述流程中描述的方法和/或本领域普通技术人员已知的其他技术来合成，但不仅限于以下方法。

反应步骤为：

1.将原料OA溶于有机溶剂(如四氢呋喃、乙醚)，在碱(如碳酸钾、碳酸铯、三乙胺、三丁胺、吡啶)的水溶液存在下，与苄基卤化物(如溴苄、氯苄)反应，形成中间体1所示的化合物。

2.将中间体1溶于有机溶剂中(如二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺)，在碱(如三乙胺、咪唑)和硅烷化试剂(如三氟甲磺酸叔丁基二甲基硅烷酯、叔丁基二甲基氯硅烷)存在下，形成中间体2所示的化合物。

3.将中间体2溶于有机溶剂(如氯仿)，加入氧化剂(如间氯过氧苯甲酸、叔丁基过氧化氢)，经后处理形成中间体3所示的化合物。

4.将中间体3溶于有机溶剂(如四氢呋喃、乙醚)，加入还原剂(如硼氢化钠、硼氢化锂)，形成中间体4所示的化合物。

5.将中间体4溶于有机溶剂(如二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、乙醚)，与适当的酰化试剂进行反应，形成中间体5所示的化合物。

6.将中间体5溶于有机溶剂(如二氯甲烷、乙腈)，在含氟试剂(如氢氟酸-吡啶、四丁基氟化铵)或酸(盐酸、三氟化硼-乙醚)存在下，形成如中间体6所示的化合物。

7.将中间体6溶于有机溶剂(如甲醇、乙醇、四氢呋喃、乙醚)的混合溶剂中，加入催化剂(如Pd/C)和氢供体(如氢气、1,4-环己二烯)，形成如式(I)所示的化合物。

以上反应式中的R如前文所定义。

本发明还涉及式(I)化合物的有机或无机盐。

本发明还涉及这些化合物单一光学异构体和/或非对映异构体及其所有比例的混合物。

再次，本发明提供一种式(I)所述的化合物，以及它们在药学上可接受的盐、非对映异构体，通过调节FXR的作用，用于预防或治疗由FXR介导的疾病的一个或多个症状的方法。其中调节FXR的作用包括但不限于对FXR激动剂的拮抗作用。

本发明涉及的FXR介导的疾病，包括但不限于高胆固醇血症、高脂蛋白血症、高甘油三酯血症、血脂异常、脂肪代谢障碍、高血糖、糖尿病、胰岛素耐受、动脉粥样硬化等代谢性疾病，以及非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝细胞性肝癌、胆汁淤积症、胆石症等肝胆疾病。

与现有技术相比，本发明具有如下显著效果：

本发明发现了一系列结构新颖的作用于FXR的齐墩果酸类似物。如实施例中所示，部分化合物可强烈拮抗FXR激动剂CDCA的激动作用，IC

附图说明

图1是实施例8改善KKay小鼠的葡萄糖平衡。KKay小鼠在喂食和不喂食OCA(10mg/kg，qd)或实施例8(100mg/kg和200mg/kg，qd)的情况下高脂饮食(HFD)喂养6周。(A)在5周治疗期间的小鼠体重。(B)食物摄取曲线。(C)禁食血糖水平。(D)随机血糖水平。(E)糖化血红蛋白HbA1c水平。(F)OGTT结果。(E)ITT结果。数据结果以平均值±SD(n＝9)表示(*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001)。

具体实施方式

本发明由以下的实施例来更进一步阐明。这些实施例并非用来限制上文所定义的或要求保护的本发明的范围。

齐墩果烷-28-苄基酯的制备

齐墩果酸21.6mg用0.35ml四氢呋喃溶解，室温加入碳酸钾12.9mg、溴苄13μl和水8μl，4小时后停止反应。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后用硅胶柱层析，石油醚：丙酮＝9:1洗脱，得产物25.7mg，产率99％。

3β-叔丁基二甲基硅烷基齐墩果烷-28-苄基酯的制备

将齐墩果烷-28-苄基酯(12.5g)溶解在CH

3β-叔丁基二甲基硅烷基-12-氧代-齐墩果烷-28-苄基酯的制备

将3β-叔丁基二甲基硅烷基齐墩果烷-28-苄基酯(12.5g)溶于二氯甲烷(248mL)中，加入85％的间氯过氧苯甲酸(11.5g)，室温反应约9h，反应完全后，用饱和亚硫酸氢钠水溶液(248mL)淬灭，分离有机相，用乙酸乙酯(2×248mL)萃取水相，合并有机相减压浓缩，浓缩物分别用饱和碳酸钠溶液和饱和食盐水溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后蒸干溶剂，通过硅胶柱色谱法(5％乙酸乙酯/石油醚)纯化得到产物3β-叔丁基二甲基硅烷基-12-氧代-齐墩果烷-28-苄基酯，产率63％。

3β-叔丁基二甲基硅烷基-12-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯的制备

3β-叔丁基二甲基硅烷基-12-氧代-齐墩果烷-28-苄基酯24.3mg，溶于0.54ml四氢呋喃中，加入硼氢化钠4.1mg，水54μl，室温反应11小时后结束反应。反应液用饱和氯化铵水溶液调节pH值至中性，有机层依次用3×10ml水和10ml饱和氯化钠水溶液洗涤，水层用3×10ml二氯甲烷萃取，合并有机层并用无水硫酸钠干燥。有机层浓缩后用硅胶柱层析，石油醚：丙酮＝50:1洗脱，得3β-叔丁基二甲基硅烷基-12α-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯8.6mg，产率35％；3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯15.7mg，产率64％。

3β-叔丁基二甲基硅烷基-12α-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯：

3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯：

3β-羟基-12β-正戊酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7a)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯100mg溶于3mL无水二氯甲烷中，随后依次加入4-二甲氨基吡啶183mg、正戊酸76μL和N,N'-二异丙基碳二亚胺115μL，反应混合物在室温下反应12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物减压浓缩，然后用30mL乙酸乙酯稀释，用2×10mL水和10mL饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂，通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝200：1)得到产物3β-叔丁基二甲基硅氧基-12β-正戊酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(2)该产物(191mg)溶于5.6mL无水二氯甲烷中，在0℃氩气保护的条件下，缓慢加入三氟化硼乙醚1.4mL，在0℃下反应约2.5h，TLC监测，反应完全后，反应混合物用25mL二氯甲烷稀释，用10mL水饱和2×10mL食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩除去有机溶剂，通过硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝5：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-正戊酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(3)该产物(80mg)溶于1mL四氢呋喃和1mL甲醇中，并向反应混合物中加入10％钯碳45mg，在室温下在氢气存在的条件下反应约12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物用硅藻土助滤剂过滤，硅藻土助滤剂用3×12mL的6％甲醇/二氯甲烷洗涤，减压浓缩有机层，通过快速硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝3：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-正戊酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7a)，三步合计产率71％。

3β-羟基-12β-正己酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7b)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯(300mg)和己酸(137mg)溶解在甲苯(8.90ml)中，随后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(677mg)和4-二甲氨基吡啶(108mg)。反应混合物在氩气下60℃搅拌3h，反应混合物浓缩在真空中，然后用二氯甲烷(18.0mL)稀释，用H

3β-羟基-12β-乙酰丙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7c)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯100mg溶于3mL无水二氯甲烷中，随后依次加入4-二甲氨基吡啶183mg、4甲基-4氧代丁酸76μL和N,N'-二异丙基碳二亚胺115μL，反应混合物在室温下反应12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物减压浓缩，然后用30mL乙酸乙酯稀释，用2×10mL水和10mL饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂，通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝200：1)得到产物3β-叔丁基二甲基硅氧基-12β-乙酰丙酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。该产物(191mg)溶于5.6mL无水二氯甲烷中，在0℃氩气保护的条件下，缓慢加入三氟化硼乙醚1.4mL，在0℃下反应约2.5h，TLC监测，反应完全后，反应混合物用25mL二氯甲烷稀释，用10mL水和饱和2×10mL食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩除去有机溶剂，通过硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝5：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-乙酰丙酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(3)该产物(80mg)溶于1mL四氢呋喃和1mL甲醇中，并向反应混合物中加入10％钯碳45mg，在室温下在氢气存在的条件下反应约12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物用硅藻土助滤剂过滤，硅藻土助滤剂用3×12mL的6％甲醇/二氯甲烷洗涤，减压浓缩有机层，通过快速硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝3：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-乙酰丙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7c)，三步合计产率65％。

3β-羟基基-12β-乙酰丁酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7d)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯(300mg)和5-甲基-5氧代戊酸(153mg)溶解在甲苯(8.90ml)中，随后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(677mg)和4-二甲氨基吡啶(108mg)。反应混合物在氩气下60℃搅拌3h，反应混合物浓缩在真空中，然后用二氯甲烷(18.0mL)稀释，用H

3β-羟基-12β-(3-羧基)丙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7e)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯100mg溶于3mL无水二氯甲烷中，随后依次加入4-二甲氨基吡啶183mg、3-羧基丙酸76μL和N,N'-二异丙基碳二亚胺115μL，反应混合物在室温下反应12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物减压浓缩，然后用30mL乙酸乙酯稀释，用2×10mL水和10mL饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂，通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝200：1)得到产物3β-叔丁基二甲基硅氧基-12β-(3-羧基)丙酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。该产物(191mg)溶于5.6mL无水二氯甲烷中，在0℃氩气保护的条件下，缓慢加入三氟化硼乙醚1.4mL，在0℃下反应约2.5h，TLC监测，反应完全后，反应混合物用25mL二氯甲烷稀释，用10mL水和2×10mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩除去有机溶剂，通过硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝5：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-(3-羧基)丙酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(3)该产物(80mg)溶于1mL四氢呋喃和1mL甲醇中，并向反应混合物中加入10％钯碳45mg，在室温下在氢气存在的条件下反应约12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物用硅藻土助滤剂过滤，硅藻土助滤剂用3×12mL的6％甲醇/二氯甲烷洗涤，减压浓缩有机层，通过快速硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝3：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-(3-羧基)丙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7e)，三步合计产率65％。

3β-羟基-12β-(3-羧基)丁酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7f)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯100mg溶于3mL无水二氯甲烷中，随后依次加入4-二甲氨基吡啶183mg、4-羧基丁酸76μL和N,N'-二异丙基碳二亚胺115μL，反应混合物在室温下反应12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物减压浓缩，然后用30mL乙酸乙酯稀释，用2×10mL水和10mL饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂，通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝200：1)得到产物3β-叔丁基二甲基硅氧基-12β-(3-羧基)丁酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(2)该产物(191mg)溶于5.6mL无水二氯甲烷中，在0℃氩气保护的条件下，缓慢加入三氟化硼乙醚1.4mL，在0℃下反应约2.5h，TLC监测，反应完全后，反应混合物用25mL二氯甲烷稀释，用10mL水和2×10mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩除去有机溶剂，通过硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝5：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-(3-羧基)丁酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(3)该产物(80mg)溶于1mL四氢呋喃和1mL甲醇中，并向反应混合物中加入10％钯碳45mg，在室温下在氢气存在的条件下反应约12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物用硅藻土助滤剂过滤，硅藻土助滤剂用3×12mL的6％甲醇/二氯甲烷洗涤，减压浓缩有机层，通过快速硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝3：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-(3-羧基)丁酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7f)，三步合计产率57％。

3β-羟基-12β-甲氧羰乙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7g)的制备

(1)3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯100mg溶于3mL无水二氯甲烷中，随后依次加入4-二甲氨基吡啶183mg、3-甲氧基-3-氧代丙酸76μL和N,N'-二异丙基碳二亚胺115μL，反应混合物在室温下反应12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物减压浓缩，然后用30mL乙酸乙酯稀释，用2×10mL水和10mL饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，在真空下除去溶剂，通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝200：1)得到产物3β-叔丁基二甲基硅氧基-12β-甲氧羰乙酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(2)该产物(191mg)溶于5.6mL无水二氯甲烷中，在0℃氩气保护的条件下，缓慢加入三氟化硼乙醚1.4mL，在0℃下反应约2.5h，TLC监测，反应完全后，反应混合物用25mL二氯甲烷稀释，用10mL水和饱和2×10mL食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩除去有机溶剂，通过硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝5：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-甲氧羰乙酰氧-齐墩果烷-28-苄基酯。(3)该产物(80mg)溶于1mL四氢呋喃和1mL甲醇中，并向反应混合物中加入10％钯碳45mg，在室温下在氢气存在的条件下反应约12h，TLC监测，反应完全后，将反应混合物用硅藻土助滤剂过滤，硅藻土助滤剂用3×12mL的6％甲醇/二氯甲烷洗涤，减压浓缩有机层，通过快速硅胶柱色谱法(石油醚：丙酮＝3：1)纯化得到产物3β-羟基-12β-甲氧羰乙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7g)，三步合计产率25％。

3β-羟基-12β-甲氧羰丙酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7h)的制备

(1)3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯(300mg)和4-甲氧基-4-氧代丁酸(156mg)溶解在甲苯(8.90ml)中，随后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(677mg)和4-二甲氨基吡啶(108mg)。反应混合物在氩气下60℃搅拌3h，反应混合物浓缩在真空中，然后用二氯甲烷(18.0mL)稀释，用H

3β-羟基-12β-甲氧羰丁酰氧-齐墩果烷-28-羧酸(7i)的制备

(1)将3β-叔丁基二甲基硅烷基-12β-羟基-齐墩果烷-28-苄基酯(300mg)和5-甲氧基-5-氧代戊酸(172mg)溶解在甲苯(8.90ml)中，随后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(677mg)和4-二甲氨基吡啶(108mg)。反应混合物在氩气下60℃搅拌3h，反应混合物浓缩在真空中，然后用二氯甲烷(18.0mL)稀释，用H

取对数生长的293T细胞以10,000/孔接种至96孔板。使用无酚红DMEM(70ul/孔)+5％活性炭处理的FBS培养24h。使用表达载体pGAL4-DBD-binding domain pBIND-FXRα(10ng/孔)，报告基因载体pGL4.35[luc2P/9X GAL4 UAS/Hygro](50ng/孔)，高效转染试剂FuGENE HD Transfection Reagent(0.3μl/孔)进行转染，按照10μL/孔的转染混合物进行瞬时转染。转染24小时后，用含有CDCA(50μM)的0.5％活性炭处理FBS的MEM培养液，然后加入待测化合物的DMSO溶液。继续培养24小时后，根据Dual-Luciferase报告基因说明书检测Luciferase酶活性。以RL酶活性为内参。

表1实施例中化合物的FXR拮抗活性

使用自发性2型糖尿病KKAy小鼠，雌性(购于中国医学科学院动物中心)进行动物实验。依据胰岛素耐量实验，按40分钟血糖下降百分数、空腹血糖、体重、血浆甘油三酯和胆固醇水平随机分为两组。

两组KKAy小鼠分别为阴性对照组(Con组)，以水灌胃(0.05ml/10g体重)；化合物组，灌胃给药(0.05ml/10g体重，剂量为100mg/kg，200mg/kg)。对照组奥贝胆酸(OCA)组，灌胃给药(0.05ml/10g体重，剂量为10mg/kg)每天1次，连续42天。实验期间，定时称量体重，每天记录食水。

于给药第1-5周测定禁食血糖和随机血糖水平。

于给药第3，5周进行胰岛素耐量实验(Insulin tolerance test,ITT)。

于给药第2，4周进行口服葡萄糖耐量实验(Oral glucose tolerance test,OGTT)。

于给药第4，5周进行血HbA1C的测定

于给药第6周停药并处理动物，取肝脏组织，称重。进行多种生化指标的检测，具体结果见图1。

综上，实施例8对KKay小鼠的非禁食血糖、禁食血糖和糖化血红蛋白水平具有降低作用，对胰岛素耐量和口服葡萄糖耐量有改善作用。