一种溴芬酸钠滴眼液中聚合物杂质的检测方法

技术领域

本发明涉及聚合物的检测技术领域，具体涉及一种溴芬酸钠滴眼液中聚合物杂质的检测方法。

背景技术

溴芬酸钠是一种有效的和具有口服活性的COX抑制剂，是溴化非甾体类抗炎镇痛药，通常可用于白内障手术后的术后炎症和疼痛以及假晶状体囊状黄斑水肿的研究。溴芬酸钠在制剂方面已有的剂型是滴眼剂。

溴芬酸钠滴眼液用于外眼部和前眼部的炎症性疾病(结膜炎、巩膜炎、术后炎症)的对症治疗。根据药品说明书，溴芬酸钠滴眼液中含有聚维酮K30作为增黏剂以延长药物的作用时间。

聚维酮K30为1-乙烯基-2-吡咯烷酮均聚物，平均分子量为3.8×10

聚合物为溴芬酸钠滴眼液中特定杂质，限度为8.0％；聚合物的含量，很大程度上影响产品的质量。聚合物不可准确定量，对用药人群的自身健康存在较大风险，故开发一个可对溴芬酸钠滴眼液中聚合物定量检测的方法非常重要。

溴芬酸钠滴眼液目前可以查询到的质量标准有：日本药典Bromfenac SodiumOphthalmic Solution和溴芬酸钠滴眼液进口注册标准(标准号：JX20140410)。

日本药典中无公开有关物质方法；进口注册标准中收载的方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶柱(CAPCELL PAK C18 SG120)测定聚合物，聚合物峰形较差且不好定量，色谱图如图2所示。图2中，“DAD1A，sig＝266.4Ref＝off”表示：使用DAD1A检测器，检测波长266.4nm，参比波长：关。mAu是峰高的单位，DAD1A检测器是二极管阵列检测器。

专利CN 112684031(以下简称对比专利)公开了一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法，测定方法以硝酸钾-乙腈-水混合溶液为流动相，采用分子排阻色谱柱和示差折光检测器测定待测产品中的聚维酮K30含量。

流动相中使用的硝酸钾是强氧化剂，与有机物接触能引起燃烧和爆炸，为易制爆危险化学品，使用时较危险；分子排阻色谱柱是根据待测物质分子量的大小进行分离，聚维酮K30为均聚物，非单一化合物，溴芬酸钠与聚维酮K30发生复合形成杂质--聚合物，也非单一化合物，用分子排阻色谱柱测定溴芬酸钠滴眼液中聚合物，专属性差，灵敏度差，准确度不高；示差折光检测器非常用检测器，对检测环境要求高，可及性不强。

综上所述，目前公开的方法，均无法对溴芬酸钠中的聚合物杂质进行准确定量，或存在一定隐患。因此，有必要提供一种溴芬酸钠滴眼液中聚合物杂质测定方法以解决上述技术缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种溴芬酸钠滴眼液中聚合物杂质的检测方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种溴芬酸钠滴眼液中聚合物杂质的检测方法，步骤包括：

流动相的配制：以乙腈水溶液为流动相；

对照品溶液的配制：将聚维酮K30与溶剂配制成对照品溶液；所述溶剂选自水、甲醇、乙醇；

供试品溶液：将待测产品与所述溶剂配制成供试品溶液；所述待测产品为溴芬酸钠滴眼液，辅料中含有聚维酮K30；

空白辅料溶液：将溴芬酸钠滴眼液空白辅料与所述溶剂配制成空白辅料溶液；

将空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

色谱柱以强阴离子交换硅胶为填充剂，流动相为乙腈水溶液，其中水：乙腈＝30～70：70～30。

1.进一步的技术方案，色谱条件如下：

色谱柱：Waters Spherisorb SAX 4.6mm×250mm×5μm色谱柱；

流动相：乙腈水溶液，水：乙腈＝30～70：70～30；

检测波长：205±5nm；

流速：1.0±0.2ml/min；

进样体积：20μl；

柱温：20±5℃。

除此而外，还可采用其他色谱柱，如：Agilent Zorbax SAX，4.6mm×250mm×5μm；或者，Thermo Hypersil SAX,4.6mm×250mm×5μm。

2.进一步的技术方案，所述乙腈水溶液中，水：乙腈＝50：50。

3.进一步的技术方案，测定法如下：

分别取空白辅料溶液、供试品溶液与对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；

供试品溶液色谱图中与对照品溶液色谱图中聚维酮K30保留时间一致的峰为聚合物杂质与聚维酮K30的峰。

4.进一步的技术方案，计算法如下：

供试品溶液色谱图中与对照品溶液色谱图中聚维酮K30保留时间一致的峰面积扣除空白辅料溶液色谱图中聚维酮K30的峰面积后为聚合物杂质的峰面积，按外标法以峰面积计算聚合物杂质的含量。

5.进一步的技术方案，所述溴芬酸钠滴眼液空白辅料的配制包括：分别称取硼砂11g、硼酸11g、聚维酮K30 20g、依地酸二钠0.2g、无水亚硫酸钠2g、聚山梨酯80 1.5g、苯扎氯铵0.01g至1000ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。

6.进一步的技术方案，所述空白辅料溶液的配制包括：取溴芬酸钠滴眼液空白辅料1ml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

7.进一步的技术方案，所述供试品溶液的配制包括：取溴芬酸钠滴眼液1ml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

8.进一步的技术方案，所述对照品溶液的配制包括：取聚维酮K30对照品40±0.5mg，精密称定，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

9.进一步的技术方案，还包括空白溶液，该空白溶液为水。

本发明的工作原理及优点如下：

本发明提供了一种峰形好、可准确定量的溴芬酸钠滴眼液中聚合物检测方法。本发明的流动相为乙腈水溶液，检测器为紫外检测器，均为高效液相色谱法中的常见流动相与检测器，安全性高，操作简便，可及性强。

不同于进口注册标准中使用的十八烷基硅烷键合硅胶柱与专利CN112684031中的分子排阻色谱柱，本发明的方法采用强阴离子交换硅胶色谱柱，是根据化合物的结构特点选择的，通过离子交换作用，可有效解决十八烷基硅烷键合硅胶柱上聚合物峰形差与分子排阻色谱柱上聚合物检测专属性、灵敏度差的问题。

相比现有技术而言，本发明具有以下优势：

1、本发明为强阴离子交换硅胶柱；进口注册标准为十八烷基硅烷键合硅胶柱，峰形差；对比专利为分子排阻色谱柱，灵敏度不高，不适用于溴芬酸钠和聚维酮K30形成的杂质的检测。

2、本发明流动相体系简单，易得且安全性好；对比专利方法中的硝酸钾为易制爆试剂，不易获得且安全性差。

3、本发明中检测器为紫外检测器，为常用检测器，易得；对比专利方法中示差检测器非常用检测器，且需较长时间平衡，操作环境要求高。

附图说明

附图1为溴芬酸钠与聚维酮K30复合后的聚合物结构图；

附图2为采用十八烷基硅烷键合硅胶柱测定聚合物的色谱图；

附图3为本发明实施例空白溶液(水)高效液相色谱图；

附图4为本发明实施例对照品溶液高效液相色谱图；

附图5为本发明实施例供试品溶液高效液相色谱图；

附图6为本发明实施例对照品溶液中聚维酮K30峰面积对浓度线性图(以主峰峰面积为纵坐标，以聚维酮K30对照品溶液浓度为横坐标)。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

实施例：以下将以图式及详细叙述对本案进行清楚说明，任何本领域技术人员在了解本案的实施例后，当可由本案所教示的技术，加以改变及修饰，其并不脱离本案的精神与范围。

本文的用语只为描述特定实施例，而无意为本案的限制。关于本文中所使用的用词(terms)，除有特别注明外，通常具有每个用词使用在此领域中、在本案内容中与特殊内容中的平常意义。某些用以描述本案的用词将于下或在此说明书的别处讨论，以提供本领域技术人员在有关本案描述上额外的引导。

本发明采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1、仪器设备

可采用安捷伦高效液相色谱仪(Agilent 1260)，Waters色谱柱(PSS832715)，OpenLab CDS色谱数据工作站，赛多利斯电子天平(SECURA225D-1CN)。

2、试药

选用聚维酮K30(ISP Technologies Inc)，乙腈(Merck)；

3、溶液配制

流动相的配制：量取水500ml与乙腈500ml，混匀，即得。

空白溶液的配制：水。

溴芬酸钠滴眼液空白辅料的配制：分别称取硼砂11g、硼酸11g、聚维酮K30 20g、依地酸二钠0.2g、无水亚硫酸钠2g、聚山梨酯80 1.5g、苯扎氯铵0.01g至1000ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。

空白辅料溶液的配制：取溴芬酸钠滴眼液空白辅料1ml置于10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

对照品溶液的配制：取聚维酮K30对照品40±0.5mg，精密称定，置于20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液的配制：精密量取溴芬酸钠滴眼液1ml置于10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

4、方法学

1)色谱系统适用性实验：

待仪器稳定后，取对照品溶液进样6针(六次进样体积的量)。对照品溶液连续进样6针主峰面积RSD应不得大于5.0％，主峰保留时间RSD应不得大于1.0％。

2)方法专属性：

根据本法测定空白溶液、对照品溶液与供试品溶液，得到相应的保留时间为3.072分钟，聚合物色谱峰不受溶剂峰、主成分溴芬酸钠的干扰，且峰形较好(如图3～5所示，其中“DAD1，sig＝205Ref＝off”表示：使用DAD检测器，检测波长205nm，参比波长：关。mAu是峰高的单位，DAD检测器是二极管阵列检测器)。

3)线性范围：

配制含聚维酮K30浓度为1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0mg/ml的对照品溶液，各取20μl进样，按上述色谱条件进行分析，以主峰峰面积对线性溶液浓度的函数作图(标准曲线如图6)，再用最小二乘法进行线性回归，得到线性回归方程：

y＝310.38x-0.3766；

其中，x为浓度，y为峰面积，对照品溶液样品数＝5，R

结果表明：在1.077～3.231mg/ml的范围内线性良好。由此可知，聚维酮K30与聚合物峰面积A与浓度C呈良好线性关系。

4)方法的准确度及重复性(以回收率表示)

配制含聚维酮K30浓度为1.0mg/ml、2.0mg/ml、3.0mg/ml的准确度溶液，依法(测定浓度除以理论浓度)进行回收率测定，测得准确度溶液的回收率见下表1所示：

表1 方法回收率结果

5)方法的精密度

按照供试品溶液的配制方法，平行配制6份供试品溶液，进行重复性测定。

不同时间，由不同人在不同仪器上重新配制6份供试品溶液了，再次重复性测定，作为中间精密度测定，结果见下表2所示：

表2 精密度试验结果

6)溶液的稳定性

配制2.0mg/ml的对照品溶液并于冷藏(2～8℃)条件下放置4h、8h、12h、18h、24h、36h、48h，同时于每个时间点分别取对照品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。考察溶液的稳定性，结果显示，对照品溶液在48h内未有明显变化，峰面积RSD为1.3％，表明在48h内样品测定是稳定的。

7)样品中聚合物含量测定

依法配制供试品溶液6份，注入液相色谱仪。按外标法计算溴芬酸钠滴眼液中聚合物杂质的含量，结果如表3所示：

表3 溴芬酸钠滴眼液中聚合物的含量

上述验证结果表明，该方法可用于溴酚酸钠滴眼液中聚合物的检测，结果准确可靠。采用验证后的方法对6份溴酚酸钠滴眼液进行聚合物检测，结果均符合标准要求，且基本一致。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。