一种哈茨木霉复配菌肥及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微生物肥料技术领域，特别涉及一种哈茨木霉复配菌肥及其制备方法和应用。

背景技术

现阶段，为了使作物增产，通常会在作物生长的各个阶段使用大量不同类型的化肥，长期以此，土壤板结、土壤养分失衡、化肥残留及环境污染等问题越发严重，不利于作物的种植和生长，导致作物减产。在绿色农业已成为世界农业发展方向的今天，对环境友好的生物源制剂越来越受到人们的关注和青睐，农业的可持续发展和有机农业兴起，也让研究生物源肥料成为重要的课题。

微生物肥料是以有益微生物为主，配以有机、无机成分而制成的一种新型绿色肥料。其利用有益微生物自身生命活动释放的生理活性物质，改善植物根系的微生物环境，调节植物的生长发育，促进植物对营养元素的吸收，拮抗某些致病微生物，减轻作物病害，从而有益于作物生长和产量增加。

木霉菌是一类普遍存在的真菌，常存在于土壤中，是土壤微生物的重要组成群落，是是广泛存在于自然界中的一种根际微生物，哈茨木霉菌是木霉菌中应用最广泛的一个菌种。哈茨木霉(Trichoderma harzianum)作为一种生防菌，对腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌、黑根霉、柱孢霉、核盘菌、齐整小核菌等病原菌具有较好的拮抗作用，而且还具有适应性好，生长范围广，防病机制多样等特点。目前已有利用哈茨木霉制备的菌肥，如CN201510554088.6公开的一种利用剑麻渣生产哈茨木霉菌肥及其制备方法。

但是，目前对微生物菌肥的研究不够透彻，大部分的微生物菌肥中的质量不稳定，菌株目标效能不稳定，尤其是复合菌肥，还对菌肥的使用环境具有较高的要求，致使作物增产、抗逆性等效果不理想。

发明内容

针对上述问题，本发明提出一种哈茨木霉复配菌肥及其制备方法和应用。

本发明所述一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.01-0.03份复合菌、12-14份牡蛎粉、20-26份麦饭石、12-15份沸石、5-6份橄榄油、0.5-1.3份苯甲酸钠、7-13份烯丙基磺酸钠、1.4-2.7份乙酰磺胺酸钾、30-35份农作物废弃物；

进一步的，所述复合菌包括CFU比为(0.6-1)：1：(1.8-3.2)的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 03221、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC30371和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ACCC 19742。

进一步的，所述哈茨木霉复配菌肥中的活菌数为10

进一步的，所述农作物为椰子、水稻、叶菜、芒果、槟榔和/或哈密瓜。

进一步的，所述废弃物为壳、核、皮、叶、枯枝中的一种或多种。

本发明还提供了一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(1)将枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌分别接种于活化培养基进行活化培养，再接种于发酵培养基进行培养，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩，加入牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置10-24h，再加入麦饭石和沸石，加热搅拌混合，冷却至室温，加入混合物1，发酵8-10d后，翻堆，加入苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵5-7d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干，粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

进一步的，所述活化培养基可以为常规的各种能够培养枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌的培养基。

进一步的，步骤(1)中，当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：35-38g葡萄糖、5-7g蛋白胨、1-3g KH

进一步的，步骤(1)中，当菌株为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：25-30g葡萄糖、1-3g KH

进一步的，所述减压浓缩为减压浓缩至原体积的50-60％。

进一步的，所述将农作物废弃物烘干粉碎为将农作物废弃物烘干至含水量10-15％，再粉碎至80-120目。

进一步的，所述加热搅拌混合为加热至35-45℃，以1000-1500r/min的速度搅拌至混合均匀。

进一步的，本发明还提供了所述哈茨木霉复配菌肥在作物增产、抗逆和/或促生长中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明将枯草芽孢杆菌、哈茨木霉、解淀粉芽孢杆菌复配作为发酵菌种，再将其与乙酰磺胺酸钾、牡蛎粉、麦饭石、沸石、橄榄油、苯甲酸钠、烯丙基磺酸钠合用，可提高哈茨木霉复配菌肥的作用效果，减少菌肥的使用量，降低种植成本；本发明的哈茨木霉复配菌肥，能够使作物增产，增强作物的抗逆性和免疫力，还具有促植物生长的作用，而且本发明的哈茨木霉复配菌肥可在作物生长的不同时期施用，可减少化肥的使用。

本发明哈茨木霉复配菌肥的制备方法，通过将牡蛎粉先与枯草芽孢杆菌、哈茨木霉、解淀粉芽孢杆菌混合，在菌种的作用下，使牡蛎粉能够与其他成分充分接触，减少牡蛎粉的团聚，避免出现结块现象，提高菌肥的均匀度；向农作物废弃物中加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油，让三者充分作用，再加入麦饭石和沸石，最后加入复合菌进行发酵，在发酵中期进行翻堆，并加入苯甲酸钠和烯丙基磺酸钠继续发酵，提高发酵效果，获得富含有机质的哈茨木霉复配菌肥。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

本发明以下所述份的单位为g或kg。

实施例1

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.01份复合菌、12份牡蛎粉、20份麦饭石、15份沸石、6份橄榄油、0.5份苯甲酸钠、7份烯丙基磺酸钠、1.4份乙酰磺胺酸钾、35份农作物废弃物；

所述复合菌中枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌的CFU比为0.6：1：3.2；

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(1)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：35g葡萄糖、5g蛋白胨、1g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：30g葡萄糖、3g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的60％，再加入牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置24h，再加入麦饭石和沸石，加热至35℃，以1500r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵8d后，翻堆，加入苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵7d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

实施例2

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.02份复合菌、13份牡蛎粉、25份麦饭石、14份沸石、5份橄榄油、0.8份苯甲酸钠、12份烯丙基磺酸钠、1.8份乙酰磺胺酸钾、32份农作物废弃物。

所述复合菌包括CFU比0.8：1：2.6的枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌。

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(1)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：36g葡萄糖、6g蛋白胨、2g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：28g葡萄糖、2g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的55％，再加入牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置20h，再加入麦饭石和沸石，加热至40℃，以1200r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵9d后，翻堆，加入苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵6d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

实施例3

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.03份复合菌、14份牡蛎粉、26份麦饭石、12份沸石、5份橄榄油、1.3份苯甲酸钠、13份烯丙基磺酸钠、2.7份乙酰磺胺酸钾、30份农作物废弃物。

所述复合菌包括CFU比为1：1：1.8的枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌。

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(1)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：38g葡萄糖、7g蛋白胨、3g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：25g葡萄糖、1g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的50％，再加入牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置10h，再加入麦饭石和沸石，加热至45℃，以1000r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵10d后，翻堆，加入苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵5d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

实施例4

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.02份复合菌、13份牡蛎粉、25份麦饭石、14份沸石、5份橄榄油、0.8份苯甲酸钠、12份烯丙基磺酸钠、1.8份乙酰磺胺酸钾、32份农作物废弃物。

所述复合菌包括CFU比0.8：1：2.6的枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌。

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(1)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：36g葡萄糖、6g蛋白胨、2g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：28g葡萄糖、2g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的55％，再加入麦饭石、牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置20h，再加入沸石，加热至40℃，以1200r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵9d后，翻堆，加入苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵6d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

实施例5

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.02份复合菌、13份牡蛎粉、25份麦饭石、14份沸石、5份橄榄油、0.8份苯甲酸钠、12份烯丙基磺酸钠、1.8份乙酰磺胺酸钾、32份农作物废弃物。

所述复合菌包括CFU比0.8：1：2.6的枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌。

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(1)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：36g葡萄糖、6g蛋白胨、2g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：28g葡萄糖、2g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的55％，得复合菌；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置20h，再加入麦饭石、沸石、牡蛎粉、苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，混合均匀后，加入复合菌，发酵9d后，翻堆，继续发酵6d，得混合物；

(4)将混合物烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

对比例1

一种哈茨木霉菌剂，包括以下重量份原料：0.02份哈茨木霉、13份牡蛎粉、25份麦饭石、14份沸石、5份橄榄油、0.8份苯甲酸钠、12份烯丙基磺酸钠、1.8份乙酰磺胺酸钾、32份农作物废弃物。

一种哈茨木霉菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，接种量为发酵培养基体积的2.5％，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d，得哈茨木霉发酵液；

每升所述发酵培养基，包括以下成分：36g葡萄糖、6g蛋白胨、2g KH

(2)取哈茨木霉发酵液，减压浓缩至原体积的55％，再加入牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾和橄榄油混合均匀，静置20h，再加入麦饭石和沸石，加热至40℃，以1200r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵9d后，翻堆，加入苯甲酸钠和稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵6d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉菌肥。

对比例2

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.02份复合菌、13份牡蛎粉、25份麦饭石、14份沸石、0.8份苯甲酸钠、1.8份乙酰磺胺酸钾、32份农作物废弃物。

所述复合菌包括CFU比0.8：1：2.6的枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌。

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(2)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：36g葡萄糖、6g蛋白胨、2g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：28g葡萄糖、2g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的55％，再加入牡蛎粉，得混合物1；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入乙酰磺胺酸钾、麦饭石和沸石，加热至40℃，以1200r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵9d后，翻堆，加入苯甲酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵6d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

对比例3

一种哈茨木霉复配菌肥，包括以下重量份原料：0.02份复合菌、13份牡蛎粉、25份麦饭石、14份沸石、5份橄榄油、12份烯丙基磺酸钠、32份农作物废弃物。

所述复合菌包括CFU比0.8：1：2.6的枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和解淀粉芽孢杆菌。

一种哈茨木霉复配菌肥的制备方法，包括以下步骤：

(3)将枯草芽胞杆菌接种到PDA培养基中，在28℃培养6h，再接种到发酵培养基中，在30℃、140r/min的条件下培养2h，得枯草芽胞杆菌发酵菌液；将哈茨木霉菌株接种到PDA培养基，在28℃培养4d，用无菌水冲洗PDA培养基，得到孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到发酵培养基，在28℃、140r/min振荡培养7d；将解淀粉芽孢杆菌分别接种到LB培养基中，在30℃培养2d，再接种到发酵培养基，在30℃、160r/min振荡培养5d，得枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液；所述接种的接种量为发酵培养基体积的2.5％；

当菌株为哈茨木霉时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：36g葡萄糖、6g蛋白胨、2g KH

当菌株为枯草芽胞杆菌和解淀粉芽孢杆菌时，每升所述发酵培养基，包括以下成分：28g葡萄糖、2g KH

(2)取枯草芽孢杆菌发酵液、哈茨木霉发酵液和解淀粉芽孢杆菌发酵液混合后，减压浓缩至原体积的55％，得复合菌；

(3)将农作物废弃物烘干粉碎后，加入橄榄油混合均匀，静置20h，再加入麦饭石和沸石，加热至40℃，以1200r/min的速度搅拌至混合均匀，冷却至室温，加入混合物1，发酵9d后，翻堆，加入稀丙基磺酸钠，搅拌混合均匀，继续发酵6d，得混合物2；

(4)将混合物2烘干、粉碎，得哈茨木霉复配菌肥。

试验例1质量检测

根据NY/T 798-2015《复合微生物肥料》对本发明的菌肥进行检测，结果见表1；

表1

由检测结果可知，本发明制备的哈茨木霉复配菌肥的各项指标均符合要求，与对比例相比，本发明菌肥中含有的有效活菌数、有机质及总养分均较高。

试验例2田间试验

供试品种：水稻特优382

试验于2020年3月份在海南琼海水稻田开展，水稻种植密度为基本苗4.1万/亩，本试验共设6个试验组，其中5组为实验组，1组为空白对照组(按照常规田间管理施用有机肥)，采用随机区组设计，每组设3次平行，共18个小区，每个小区面积110m

表2

从田间试验结果可以看出，施用本发明的哈茨木霉复配菌肥后，水稻成熟时间缩短7-18d，增产3.1-12.7％，发病率降低至4.2％，说明本发明的菌肥可有效促进作物生长，增加作物产量，提高作物抗逆性和免疫力。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。