一种用于河蟹养殖的品质改良剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种用于河蟹养殖的品质改良剂及其制备方法与应用。

背景技术

中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis，俗称河蟹、大闸蟹)是一种重要的淡水养殖蟹类，因肉质鲜美而备受人们的青睐，可创造巨大的经济价值。然而，随着集约化养殖的快速发展，由细菌、病毒和寄生虫等病原引起的各种病害日益严重，给河蟹养殖业造成了重大的经济损失。目前，包括河蟹养殖在内的水产养殖业中，面对细菌、病毒等危害的处理手段多以施加抗生素为主，但是，由于细菌生物被膜的产生及存在，使得耐药性不断增强，随之普遍出现了抗生素滥用的问题，不仅增大了养殖成本，也严重影响了河蟹等水产品的品质。

细菌生物被膜(

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于河蟹养殖的品质改良剂，以解决现有技术中因细菌生物被膜的不利影响而引起耐药性导致河蟹品质不佳的问题；

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述改良剂的制备方法及其应用。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种用于河蟹养殖的品质改良剂，包括如下重量份的组分：鱼粉10-20重量份、豆粕5-15重量份、花生粕5-12重量份、棉粕5-12重量份、菜粕10-15重量份、水产酵母粉3-8重量份、柠檬酸渣3-8重量份、玉米粉20-30重量份、大豆磷脂1-3重量份、乌贼膏1-3重量份、膨润土2-5重量份、磷酸二氢钙1-3重量份、香紫苏内酯3-8重量份。

具体的，所述的河蟹养殖的品质改良剂，包括如下重量份的组分：鱼粉15重量份、豆粕10重量份、花生粕8重量份、棉粕8重量份、菜粕12重量份、水产酵母粉5重量份、柠檬酸渣5重量份、玉米粉25重量份、大豆磷脂2重量份、乌贼膏2重量份、膨润土3重量份、磷酸二氢钙2重量份、香紫苏内酯5重量份。

具体的，所述河蟹养殖的品质改良剂包括颗粒剂、粉剂或散剂。

本发明还公开了一种制备所述河蟹养殖的品质改良剂的方法，包括取选定量的所述鱼粉、豆粕、花生粕、棉粕、菜粕、水产酵母粉、柠檬酸渣、玉米粉、大豆磷脂、乌贼膏、膨润土、磷酸二氢钙、香紫苏内酯进行混合并粉碎或者粉碎并混合的步骤，包装，即得。

具体的，所述粉碎步骤为粉碎至粒径80-150目。

具体的，所述河蟹养殖的品质改良剂的制备方法，还包括添加常规辅料并按照常规工艺制备形成颗粒剂、粉剂或散剂的步骤。

本发明还公开了一种河蟹养殖方法，包括将所述河蟹养殖的品质改良剂加入至河蟹养殖池作为养殖饲料的步骤。

具体的，所述的河蟹养殖方法，还包括加入抗菌药物进行细菌防治和/或加入抗病毒药物进行病毒防治的步骤。

本发明还公开了一种用于防治金黄色葡萄球菌或大肠埃希氏菌引发疾病的水产养殖饲料，所述饲料包括有效剂量的香紫苏内酯。

香紫苏内酯(sclareolide)是一种类倍半萜类物质，是从Salvia sclarea的花中分离出来的一种不溶于水、易溶于有机溶剂的白色结晶状粉末，具有多种抗菌和抗肿瘤的作用，并因其具有特殊的香味而被用于香精香料等行业，是一种优良的烟草增香矫味剂及食品添加剂。

本发明方案在现有技术报道的所述香紫苏内酯具有抗菌性能的基础上，惊喜的发现了香紫苏内酯具有的可抑制和消除细菌生物被膜的特性，并进一步验证了所述香紫苏内酯对于金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生物被膜的清除作用，虽然香紫苏内酯的起效浓度略高，但是，仍然为本领域寻找新型的能瓦解和抑制细菌生物被膜的产品，尤其是抗生素/抑菌产品提供了理论支持以及新的思路。

本发明方案进一步将所述香紫苏内酯用于水产养殖饲料，并结合传统河蟹养殖饲料的应用组分，一方面利用所述香紫苏内酯的抗菌性能和抗病毒性能对河蟹的养殖起到良好的保护，同时利用香紫苏内酯可消除细菌生物被膜的特性优势，有效降低河蟹的耐药性，保证了河蟹养殖的效果以及河蟹产品的品质，可用于防治由金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌导致的疾病，符合健康养殖发展方向。

本发明所述河蟹养殖饲料，在传统养殖饲料的基础上添加香紫苏内酯，有效保障了河蟹养殖的营养需求和抑菌性要求，同时利用香紫苏内酯良好的抗菌性能和抗病毒性能，可以降低对传统使用抗生素的耐药性能，有利于家禽的健康绿色养殖。

具体实施方式

实施例1

本实施例所述用于河蟹养殖的品质改良剂，包括如下重量份的组分：鱼粉10重量份、豆粕15重量份、花生粕5重量份、棉粕12重量份、菜粕10重量份、水产酵母粉8重量份、柠檬酸渣3重量份、玉米粉30重量份、大豆磷脂1重量份、乌贼膏3重量份、膨润土2重量份、磷酸二氢钙3重量份、香紫苏内酯3重量份。

实施例2

本实施例所述用于河蟹养殖的品质改良剂，包括如下重量份的组分：鱼粉20重量份、豆粕5重量份、花生粕12重量份、棉粕5重量份、菜粕15重量份、水产酵母粉3重量份、柠檬酸渣8重量份、玉米粉20重量份、大豆磷脂3重量份、乌贼膏1重量份、膨润土5重量份、磷酸二氢钙1重量份、香紫苏内酯8重量份。

实施例3

本实施例所述用于河蟹养殖的品质改良剂，包括如下重量份的组分：鱼粉15重量份、豆粕10重量份、花生粕8重量份、棉粕8重量份、菜粕12重量份、水产酵母粉5重量份、柠檬酸渣5重量份、玉米粉25重量份、大豆磷脂2重量份、乌贼膏2重量份、膨润土3重量份、磷酸二氢钙2重量份、香紫苏内酯5重量份。

实验例

一、香紫苏内酯的体外抑菌性能验证

现有技术中已报道的香紫苏内酯对金黄色葡萄球菌ATCC 25923、铜绿假单胞菌ATCC 27950、大肠埃希菌ATCC 25922和粪肠球菌ATCC 29212具有良好的抗菌活性(HayetE,et al.Antibacterial and cytotoxic activity of the acetone extract of theflowers of Salvia sclarea and some natural products.Pak J Pharm Sci.2007Apr；20(2):146-8.)。

本实验例通过传统的抑菌圈法进行抗菌性验证，进一步验证了所述香紫苏内酯对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌都能产生明显的抑菌圈，表明皆有抑制作用。

二、香紫苏内酯对细菌生物被膜的消除作用

本实验例中参照已报道的方法构建实验所需的细菌生物被膜，以进行香紫苏内酯的性能验证。

按照硕士论文《血根碱对细菌生物被膜的作用研究》中第三章公开的方法进行所需构建金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生物被膜的构建，构建所用菌株为市售购买的标准菌株，并基于文献公开的刚果红染色法和结晶紫染色法，均证明成功构建了所需的金黄色葡萄球菌生物被膜和大肠埃希菌生物被膜，常规保存，即可。

1、香紫苏内酯对生物被膜消除的影响

同样参照于上述硕士论文第四章4.1.2.1节中记载的对所述生物被膜的消除影响方案，利用CRA平板法鉴定所述香紫苏内酯对形成的金黄色葡萄球菌生物被膜和大肠埃希菌生物被膜的消除作用。根据刚果红平板法鉴定原理，CRA平板上细菌菌落呈现的颜色与细菌生物被膜分泌的多糖情况直接相关，从而可以直观地判断BBF的情况。

用MH肉汤分别配制香紫苏内酯浓度为0.5g/L、1.0g/L及1.5g/L浓度的实验组样品。按照文献记载方法进行接种处理及培养，观察平板上的菌落颜色，记录于下表1。

表1香紫苏内酯对生物被膜的消除结果

可见，香紫苏内酯浓度达到1.0g/L时，菌落在CRA平板上即呈现红色不显黑，说明该浓度下的香紫苏内酯即可以完全清除金黄色葡萄球菌的生物被膜，而对于大肠埃希菌生物被膜，则需要达到1.5g/L的浓度才能够实现完全清除，进一步验证了所述香紫苏内酯对于细菌生物被膜的清除作用和效果。

2、香紫苏内酯对细菌数量的影响

同样参照于上述硕士论文第四章4.1.2.2节中记载的对所述生物被膜细菌数量的影响方案。分别配制浓度为0.5g/L、1.0g/L及1.5g/L的香紫苏内酯样品，分别加样于前述构建的金黄色葡萄球菌生物被膜和大肠埃希菌生物被膜，并设置空白对照，其他操作步骤参照文献中记载步骤即可，计数结果见下表2所示。

表2香紫苏内酯对生物被膜上细菌数的影响

可见，所述香紫苏内酯具有较好的清楚细菌生物被膜的作用，虽然起效的浓度需要略高，但是，依然为本领域寻找新型的能防治金黄色葡萄球菌或大肠埃希氏菌引发疾病的河蟹养殖饲料提供了理论支持以及新的思路，后续可针对于香紫苏内酯清除细菌生物被膜的原理进行深入的研究，以开发更多具有功能性的养殖思路类产品。

应用例

应用本发明实施例3中提供的改良剂进行河蟹的养殖，在无需改变养殖方式的情况下，所述改良剂可以满足河蟹生长的营养成分，且在无需额外添加抗生素和抗病毒药物的情况下，有效保证了河蟹的健康生长，相比于不含香紫苏内酯的传统饲料的养殖方式，河蟹的成活率提高了13％左右，可见，香紫苏内酯可作为河蟹养殖饲料的潜在抗生素产品。

应当理解的是，本申请中所述实施例仅用以说明本申请实施例的原则。其他的变形也可能属于本申请的范围。因此，作为示例而非限制，本申请实施例的替代配置可视为与本申请的教导一致。相应地，本申请的实施例不仅限于本申请明确介绍和描述的实施例。