一种微小昆虫永久显微玻片标本制作方法

技术领域

本发明涉及昆虫标本技术领域，具体为一种微小昆虫永久显微玻片标本制作方法。

背景技术

在自然科学研究、技术推广研究、生物实验教学和课外科技活动中开展小型昆虫(如蚧虫、蚜虫、粉虱、螨类等)的形态学研究时，为了更好的了解其形态结构，一般将其制成显微玻片标本，通过显微镜直接观察虫体的内部结构。显微玻片包括：暂时和半永久玻片、永久玻片两种。

目前，常见的永久显微玻片制作方法包括威尼斯松节油法、叔丁醇树胶法和二氧六环树胶法等。而上述的方法基本包括如下步骤：脱色、脱水、透明和封片等。但是，实践结果表明，现有的永久显微玻片制作方法需要精确的计量溶液种类、浓度，及其使用温度和时间，一旦计量不准备，极易出现标本质量较低的问题。例如：标本的干燥不彻底，容易出现封片内部出现气泡，进而造成虫体表面模糊而不利于观察的情况；酒精浓度使用不当，容易出现虫体在脱水过程中身体结构因酒精浓度控制不当，而出现收缩和变形等问题。

发明内容

1.需要解决的技术问题

本发明的需要解决的技术问题在于，提供一种微小昆虫永久显微玻片标本制作方法，简化显微玻片标本的制作流程，通过准确的计量溶液种类、浓度，及其使用温度和时间，达到标本制作质量的控制，避免封面内气泡，虫体结构脱水过程中出现的收缩、变形等问题。

2.技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种微小昆虫永久显微玻片标本制作方法，包括如下步骤：

步骤1，将昆虫活体放置在65-76％的酒精溶液中浸泡；

步骤2，将昆虫从酒精溶液中取出，切开躯体，放入加有氢氧化钠溶液的烧杯中，将烧杯放置在加热板上加热浸泡并清理内含物和内脏直至虫体变为透明；

步骤3，将步骤2处理后的虫体从氢氧化钠溶液中取出，依次放入浓度递增的恒温冷浴酸性品红酒精溶液中固色；

步骤4，将步骤3处理的虫体移出放置于滤纸上，并放置在恒温的真空室中干燥脱水；

步骤5，将二甲苯蒸汽向步骤4真空室中的昆虫内外表面喷涂，形成5-10μm的涂层；

步骤6，在载玻片上滴加拿大树胶，将步骤5处理后的昆虫置于加拿大树胶上，摆好昆虫身体各部位，盖上盖玻片，晾干，获得永久玻片标本。

上述的显微玻片标本制作方法，其中，所述氢氧化钠溶液的浓度为5％。

上述的显微玻片标本制作方法，其中，在步骤2中，所述加热板的加热温度为100-120℃，加热时间为20min。

上述的显微玻片标本制作方法，其中，在步骤3中，所述酸性品红酒精溶液，采用浓度分别为30％、55％、65％、90％、100％的酒精作为溶剂。

上述的显微玻片标本制作方法，其中，在步骤3中，虫体在所述酒精溶剂浓度为30％、55％、65％、90％的酸性品红酒精溶液内分别浸泡40～80min，在100％浓度下浸泡80-160min。

上述的显微玻片标本制作方法，其中，所述步骤3的固色时间为4～8h。

上述的显微玻片标本制作方法，其中，所述步骤4的恒温真空室温度为25℃，虫体在滤纸上干燥脱水至滤纸上没有溶剂。

3.有益效果

综上所述，本发明的有益效果在于：

(1)本发明的玻片标本制作方法相比于现有的标本制作方法步骤简单，使用材料不会造成环境污染且染色效果好，能够降低标本制作过程的复杂程度和对人体的伤害性；

(2)本发明的玻片标本制作方法通过恒温真空室实现标本的干燥，易于冲体内溶液的充分蒸发，不会造成现有自然风干而出现的内部气泡，以及进一步造成的标本表面浑浊的问题；

(3)本发明的玻片标本制作方法通过酸性品红酒精溶液对虫体染色，能够使虫体的身体结构更加明显的显现，通过不同浓度酒精的逐层脱水，不会引起虫体结构的收缩和变形。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

步骤1，将褐飞虱活体放置在65％的酒精溶液中浸泡；

步骤2，将褐飞虱从酒精溶液中取出，切开躯体，放入加有5％氢氧化钠溶液的烧杯中，将烧杯放置在加热板上加热120℃浸泡20min并清理内含物和内脏直至褐飞虱虫体变为透明；

步骤3，将步骤2处理后的褐飞虱虫体从氢氧化钠溶液中取出，依次放入酒精溶剂浓度为30％、55％、65％、90％的恒温冷浴酸性品红酒精溶液中40min、酒精溶剂浓度为100％恒温冷浴酸性品红酒精溶液中100min，完成虫体固色；

步骤4，将步骤3处理的褐飞虱虫体移出放置于滤纸上，并放置在25℃恒温的真空室中干燥脱水至滤纸上没有溶剂；

步骤5，将二甲苯蒸汽向步骤4真空室中的褐飞虱虫体内外表面喷涂，形成6μm的涂层；

步骤6，在载玻片上滴加拿大树胶，将步骤5处理后的褐飞虱虫体置于加拿大树胶上，摆好褐飞虱身体各部位，盖上盖玻片，晾干，获得永久褐飞虱玻片标本I。

实施例2：

步骤1，将小麦蚜虫活体放置在70％的酒精溶液中浸泡；

步骤2，将小麦蚜虫从酒精溶液中取出，切开躯体，放入加有5％氢氧化钠溶液的烧杯中，将烧杯放置在加热板上加热100℃浸泡20min并清理内含物和内脏直至虫体变为透明；

步骤3，将步骤2处理后的小麦蚜虫虫体从氢氧化钠溶液中取出，依次放入酒精溶剂浓度为30％、55％、65％、90％的恒温冷浴酸性品红酒精溶液中50min、酒精溶剂浓度为100％恒温冷浴酸性品红酒精溶液中120min，完成小麦蚜虫虫体固色；

步骤4，将步骤3处理的小麦蚜虫虫体移出放置于滤纸上，并放置在25℃恒温的真空室中干燥脱水至滤纸上没有溶剂；

步骤5，将二甲苯蒸汽向步骤4真空室中的小麦蚜虫内外表面喷涂，形成6μm的涂层；

步骤6，在载玻片上滴加拿大树胶，将步骤5处理后的小麦蚜虫置于加拿大树胶上，摆好小麦蚜虫身体各部位，盖上盖玻片，晾干，获得永久玻片标本II。

实施例3：

步骤1，将蚧虫活体放置在76％的酒精溶液中浸泡；

步骤2，将蚧虫从酒精溶液中取出，切开躯体，放入加有5％氢氧化钠溶液的烧杯中，将烧杯放置在加热板上加热100℃浸泡20min并清理内含物和内脏直至蚧虫虫体变为透明；

步骤3，将步骤2处理后的蚧虫虫体从氢氧化钠溶液中取出，依次放入酒精溶剂浓度为30％、55％、65％、90％的恒温冷浴酸性品红酒精溶液中45min、酒精溶剂浓度为100％恒温冷浴酸性品红酒精溶液中100min，完成蚧虫虫体固色；

步骤4，将步骤3处理的蚧虫虫体移出放置于滤纸上，并放置在25℃恒温的真空室中干燥脱水至滤纸上没有溶剂；

步骤5，将二甲苯蒸汽向步骤4真空室中的蚧虫内外表面喷涂，形成5μm的涂层；

步骤6，在载玻片上滴加拿大树胶，将步骤5处理后的蚧虫置于加拿大树胶上，摆好蚧虫身体各部位，盖上盖玻片，晾干，获得永久玻片标本III。

实施例4：

步骤1，将头虱活体放置在65％的酒精溶液中浸泡；

步骤2，将头虱从酒精溶液中取出，切开躯体，放入加有5％氢氧化钠溶液的烧杯中，将烧杯放置在加热板上加热110℃浸泡20min并清理内含物和内脏直至头虱虫体变为透明；

步骤3，将步骤2处理后的头虱虫体从氢氧化钠溶液中取出，依次放入酒精溶剂浓度为30％、55％、65％、90％的恒温冷浴酸性品红酒精溶液中50min、酒精溶剂浓度为100％恒温冷浴酸性品红酒精溶液中120min，完成头虱虫体固色；

步骤4，将步骤3处理的头虱虫体移出放置于滤纸上，并放置在25℃恒温的真空室中干燥脱水至滤纸上没有溶剂；

步骤5，将二甲苯蒸汽向步骤4真空室中的头虱内外表面喷涂，形成5μm的涂层；

步骤6，在载玻片上滴加拿大树胶，将步骤5处理后的头虱置于加拿大树胶上，摆好头虱身体各部位，盖上盖玻片，晾干，获得永久玻片标本IV。

实施例5：

步骤1，将圆盾蚧活体放置在72％的酒精溶液中浸泡；

步骤2，将圆盾蚧从酒精溶液中取出，切开躯体，放入加有5％氢氧化钠溶液的烧杯中，将烧杯放置在加热板上加热100℃浸泡20min并清理内含物和内脏直至圆盾蚧虫体变为透明；

步骤3，将步骤2处理后的圆盾蚧虫体从氢氧化钠溶液中取出，依次放入酒精溶剂浓度为30％、55％、65％、90％的恒温冷浴酸性品红酒精溶液中45min、酒精溶剂浓度为100％恒温冷浴酸性品红酒精溶液中130min，完成圆盾蚧虫体固色；

步骤4，将步骤3处理的圆盾蚧虫体移出放置于滤纸上，并放置在25℃恒温的真空室中干燥脱水至滤纸上没有溶剂；

步骤5，将二甲苯蒸汽向步骤4真空室中的圆盾蚧内外表面喷涂，形成8μm的涂层；

步骤6，在载玻片上滴加拿大树胶，将步骤5处理后的圆盾蚧置于加拿大树胶上，摆好圆盾蚧身体各部位，盖上盖玻片，晾干，获得永久玻片标本V。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。