一种甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法

技术领域

本发明属于砧木筛选技术领域，尤其涉及一种甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法。

背景技术

目前，甜瓜作为世界十大水果之一，是我国重要的园艺作物，其在促进农民增收和满足人们日益增长的瓜果需求方面发挥着巨大作用。然而近年来，由于农户常年固定地点栽培，土壤连作障碍问题突出，枯萎病等土传病虫害的发生也日趋严重，严重影响到甜瓜的正常生长，阻碍了甜瓜产业的发展。嫁接换根能够有效的预防这一问题。

但目前我国甜瓜嫁接比例仍旧较低，主要是由于缺乏优质的亲和性甜瓜砧木资源。嫁接亲和性差是甜瓜嫁接栽培中经常面临的问题，由于嫁接不亲和导致生产上打官司的事件经常发生。以往科研单位、种苗公司或者农户筛选亲和性砧木材料，都是通过将不同砧木嫁接后的甜瓜苗定植到大田，检测嫁接苗的后期生长情况、果实产量和品质等，进而判断亲和性好坏。整个过程耗时长，耗费大量的人力物力，成本高。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的甜瓜嫁接亲和性筛选砧木过程耗时长，耗费大量的人力和物力，成本高。

解决以上问题及缺陷的难度为：本方法基于嫁接不亲和砧木导致接穗和砧木之间韧皮部不能有效连通，糖类物质在接穗嫁接愈合部运输受阻，转化为淀粉，从而可根据碘染进行染色，判断甜瓜砧木的嫁接亲和性。解决以上问题的难度适中。

解决以上问题及缺陷的意义为：通过本办法，可以在嫁接后7d就判断砧木与甜瓜的嫁接亲和性，快速、准确性高、省时省力、成本低。对于甜瓜砧木的选育和嫁接栽培具有重要意义，促进嫁接甜瓜在生产上的大面积应用，减少生产上由于嫁接不亲和导致的生产损失。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法。

本发明是这样实现的，一种甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法，所述甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法包括：

分别进行砧木育苗以及接穗育苗，于砧木第1片真叶完全展平且接穗第1 片真叶微露时对砧木、接穗进行处理，并采用单子叶贴接的方式进行嫁接，并通过计算嫁接茎段碘染面积的方式进行嫁接亲和性筛选。

进一步，所述甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法包括以下步骤：

步骤一，对甜瓜砧木种子、甜瓜接穗种子分别进行消毒；分别清洗干净后，室温浸种6h-8h；对浸种后甜瓜砧木种子于30℃恒温催芽24h-48h，胚根露白时播种于50孔穴盘，1穴1粒；

步骤二，对浸种后的甜瓜接穗种子于30℃恒温催芽24h，胚根露白时撒播于平盘中；并于砧木第1片真叶完全展平且接穗第1片真叶微露时采用单子叶贴接的方式进行嫁接；

步骤三，进行嫁接愈合期的管理；并于嫁接愈合7d，取嫁接接穗愈合部2mm 茎段即嫁接愈合界面以上迅速放入2ml 75％医用酒精中，固定脱色24h，室温保存；

步骤四，取出已脱色的茎段样品，自来水水中清洗1min，利用预先配置的碘液染色1min，放入自来水中清洗1min；取出放在滤纸上2s-3s；

步骤五，体视显微镜观察，计算接穗愈合部茎段淀粉碘染面积百分比，基于计算结果进行亲和性砧木筛选。

进一步，步骤一中，所述消毒包括：利用1‰高锰酸钾消毒5min。

进一步，步骤二中，所述并于砧木第1片真叶完全展平且接穗第1片真叶微露时采用单子叶贴接的方式进行嫁接之前还需进行：

用75％医用酒精对刀片、嫁接夹消毒、自然晾干；并于嫁接前1天将基质浇透水。

进一步，步骤二中，所述采用单子叶贴接的方式进行嫁接包括：

砧木处理：先去除所有真叶，再用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面约0.5cm；

接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5cm-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面约0.5cm；

将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹。

进一步，步骤三中，所述进行嫁接愈合期的管理包括：

温度管理：白天28℃-25℃，晚上22℃-18℃；

湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95％以上；

嫁接后4d-6d，通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜；

7d后掀开薄膜，进入正常管理；

光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/m

进一步，所述碘染液配制包括：

取8.8g KI溶于30mL蒸馏水，之后再加入2.2g结晶碘溶解，得到母液放置于棕色试剂瓶常温保存；

取1mL母液溶于30mL自来水中稀释使用即可得碘染液。

进一步，所述接穗愈合部茎段淀粉碘染面积百分比计算公式如下：

进一步，所述基于计算结果进行亲和性砧木筛选包括：若碘染面积百分比小于10％，则为亲和性砧木。

结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明提供了一种甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法，能够在嫁接后7d就完成亲和性砧木材料的筛选(表1)，接穗愈合茎段碘染百分比就表现显著差异，准确性高，省时省力，成本低。传统方法至少需要28d，在嫁接后7d接穗株高和干重未表现出显著差异，不能判断是否亲和，直到28d才表现显著差异(表2，表3)。

现有技术三种筛选方法对不同砧木筛选结果及所需时间以及本发明实验对比表明：

表1本方法对不同砧木筛选结果及所需时间

注：同列不同字母表示结邓肯多重比较后差异达到显著水平(P<0.05)

表2传统筛选方法对不同砧木筛选结果及所需时间(株高数据)

注：同列不同字母表示结邓肯多重比较后差异达到显著水平(P<0.05)

表3传统筛选方法对不同砧木筛选结果及所需时间(接穗干重数据)

注：同列不同字母表示结邓肯多重比较后差异达到显著水平(P<0.05)

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的甜瓜嫁接亲和性砧木高效高效筛选方法原理图。

图2是本发明实施例提供的甜瓜嫁接亲和性砧木高效高效筛选方法流程图。

图3是本发明实施例提供的甜瓜与四种砧木嫁接愈合7d的表型及接穗茎段淀粉碘染情况示意图。

图中：图3(a)青圣砧(亲和性砧木)；图3(b)青优砧一号(亲和性砧木)；图3(c)京欣砧一号(不亲和性砧木)；图3(d)安生葫芦(不亲和性砧木)。

图4是本发明实施例提供的甜瓜与四种砧木嫁接28d后的表型及接穗茎段淀粉碘染情况示意图。

图中：图4(a)青圣砧(亲和性砧木)；图4(b)青优砧一号(亲和性砧木)；图4(c)京欣砧一号(不亲和性砧木)；图4(d)安生葫芦(不亲和性砧木)。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法包括：

分别进行砧木育苗以及接穗育苗，于砧木第1片真叶完全展平且接穗第1 片真叶微露时对砧木、接穗进行处理，并采用单子叶贴接的方式进行嫁接，并通过计算嫁接茎段碘染面积的方式进行嫁接亲和性筛选。

如图2所示，本发明实施例提供的甜瓜嫁接亲和性砧木筛选方法包括以下步骤：

S101，对甜瓜砧木种子、甜瓜接穗种子分别利用1‰高锰酸钾消毒5min；分别清洗干净后，室温浸种6h-8h；对浸种后甜瓜砧木种子于30℃恒温催芽24 h-48h，胚根露白时播种于50孔穴盘，1穴1粒；

S102，对浸种后的甜瓜接穗种子于30℃恒温催芽24h，胚根露白时撒播于平盘中；并于砧木第1片真叶完全展平且接穗第1片真叶微露时采用单子叶贴接的方式进行嫁接；

S103，进行嫁接愈合期的管理；并于嫁接愈合7d时，取嫁接接穗愈合部2 mm茎段即嫁接愈合界面以上迅速放入2ml 75％医用酒精中，固定脱色24h，室温保存；

S104，取出已脱色的茎段样品，自来水水中清洗1min，利用预先配置的碘液染色1min，放入自来水中清洗1min；取出放在滤纸上2s-3s；

S105，体视显微镜观察，计算接穗愈合部茎段淀粉碘染面积百分比，基于计算结果进行亲和性砧木筛选。

步骤S102中，本发明实施例提供的并于砧木第1片真叶完全展平且接穗第 1片真叶微露时采用单子叶贴接的方式进行嫁接之前还需进行：

用75％医用酒精对刀片、嫁接夹消毒、自然晾干；并于嫁接前1d将基质浇透水。

步骤S102中，本发明实施例提供的采用单子叶贴接的方式进行嫁接包括：

砧木处理：先去除所有真叶，再用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面约0.5cm；

接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5cm-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面约0.5cm；

将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹。

步骤S103中，本发明实施例提供的进行嫁接愈合期的管理包括：

温度管理：白天28℃-25℃，晚上22℃-18℃；

湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95％以上；

嫁接后4d-6d，通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜；

7d后掀开薄膜，进入正常管理；

光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/m

本发明实施例提供的碘染液配制包括：

取8.8g KI溶于30mL蒸馏水，之后再加入2.2g结晶碘溶解，得到母液放置于棕色试剂瓶常温保存；

取1mL母液溶于30mL自来水中稀释使用即可得碘染液。

本发明实施例提供的接穗愈合部茎段淀粉碘染面积百分比计算公式如下：

本发明实施例提供的基于计算结果进行亲和性砧木筛选包括：若碘染面积百分比小于10％，则为亲和性砧木。

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

实施例：

一种甜瓜砧木嫁接亲和性砧木高效筛选技术

(1)甜瓜与砧木品种：本案例选择“青优砧一号”、“安生葫芦、“京欣砧一号”、“青圣砧”四种瓜类砧木作为甜瓜砧木，选择甜瓜“阿克可口奇”作为甜瓜接穗

(2)砧木育苗：对甜瓜砧木种子进行1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6h-8h；随后30℃恒温催芽24h-48h，胚根露白时播种于50孔穴盘， 1穴1粒，第1片真叶完全展平时嫁接。

(2)接穗育苗：对甜瓜接穗种子进行1‰高锰酸钾消毒5min，清洗干净后，室温浸种6h-8h；随后30℃恒温催芽24h，胚根露白时撒播于平盘中，第1片真叶微露时嫁接。

(3)嫁接时期：砧木：第1片真叶完全展平，接穗：第1片真叶微露；并在嫁接前一天将基质全部浇透水。

(4)嫁接操作：采用单子叶贴接，砧木处理：先用手去除所有真叶，再用刀片在子叶基部斜向45°向下切除一片子叶，切面约0.5cm；接穗处理：嫁接刀片在距子叶基部0.5cm-1.0cm处向上成45°左右斜切，切面约0.5cm；最后将砧木与接穗切面紧密贴合，夹上嫁接夹。

(6)嫁接愈合期的管理：

温度控制在白天28℃-25℃，晚上22℃-18℃，湿度管理：嫁接后前3d湿度保持在95％以上。可用塑料薄膜覆盖。嫁接后4d-6d，应逐渐通风，通风时间以接穗子叶不萎蔫为宜。7d后掀开薄膜，进入正常管理。光照管理：嫁接后第1d，黑暗，1d后保持弱光，光强约80μmol/m

(7)嫁接亲和性筛选：

嫁接茎段取样：嫁接愈合7d以后，取嫁接接穗愈合部2mm茎段(嫁接愈合界面以上)迅速放入2ml 75％医用酒精中，固定脱色24h，室温保存。

碘染液配制：取8.8g KI溶于30mL蒸馏水，之后再加入2.2g结晶碘溶解，棕色试剂瓶常温保存。每次用之前取1mL母液溶于30mL自来水中稀释使用。

茎段碘染：取出已脱色的茎段样品，自来水水中清洗1min，碘液染色1min，放入自来水中清洗1min(去除背景色)；之后，取出放在滤纸上，吸除多余水分(约2s-3s)。

拍照观察：体视显微镜观察，用imagej软件计算接穗愈合部茎段淀粉碘染面积百分比：

表1本方法对不同砧木筛选结果及所需时间

注：同列不同字母表示结邓肯多重比较后差异达到显著水平(P<0.05) 表2传统筛选方法对不同砧木筛选结果及所需时间(株高数据)

注：同列不同字母表示结邓肯多重比较后差异达到显著水平(P<0.05)

表3传统筛选方法对不同砧木筛选结果及所需时间(接穗干重数据)

注：同列不同字母表示结邓肯多重比较后差异达到显著水平(P<0.05)

在本发明中，图3是本发明实施例提供的甜瓜与四种砧木嫁接7d时的表型及接穗茎段淀粉碘染情况示意图。

图中：图3(a)青圣砧(亲和性砧木)；图3(b)青优砧一号(亲和性砧木)；图3(c)京欣砧一号(不亲和性砧木)；图3(d)安生葫芦(不亲和性砧木)。

图4是本发明实施例提供的甜瓜与四种砧木嫁接28d后的表型及接穗茎段淀粉碘染情况示意图。

图中：图4(a)青圣砧(亲和性砧木)；图4(b)青优砧一号(亲和性砧木)；图4(c)京欣砧一号(不亲和性砧木)；图4(d)安生葫芦(不亲和性砧木)。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。