红景天苷在制备具有抗皱紧致功能化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及护肤化妆品领域，尤其涉及红景天苷在制备具有抗皱紧致功能化妆品中的应用。

背景技术

红景天苷，或称红景天甙，是一种天然的糖苷，是植物红景天(Rhodiola roseaL.)的有效成分之一。它具有抗疲劳、耐缺氧、抗微波辐射等多方面药理作用。胶原蛋白流失是导致皮肤松弛、皱纹出现，及其他皮肤老化迹象的最大原因之一。成纤维细胞是皮肤真皮中最重要的细胞组分，能够合成并分泌胶原蛋白、弹性蛋白。成纤维细胞数量的减少、形态的改变、分泌合成功能的减弱或衰退与皮肤老化密切相关，而巨噬细胞在调节成纤维细胞功能方面发挥重要作用。在皮肤组织中，巨噬细胞能够释放TGFβ1，TGFβ1作用于成纤维细胞，促进成纤维细胞中I、III型前胶原的合成，进而增加真皮中胶原的含量。

现有技术中红景天苷的主要功效包括抗氧化、美白、抗辐射，其他功效还未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供红景天苷在制备具有抗皱紧致功能化妆品中的应用；研究了其在皮肤抗皱、紧致中的应用，并测定了红景天苷的皮肤刺激作用。

红景天苷在皮肤抗皱、紧致方面的作用活性研究首先为红景天苷对巨噬细胞中TGF-β表达的影响。如图2所示，100μM的红景天苷能够显著提高巨噬细胞株Raw264.7细胞中TGFβ1mRNA的表达水平；同时，100μM的红景天苷能够显著促进Raw264.7细胞TGFβ1蛋白的释放。

红景天苷在皮肤抗皱、紧致方面的作用活性研究包括对巨噬细胞介导的成纤维细胞增殖的影响。如图3所示，100μM的红景天苷作用的Raw264.7细胞上清与Raw264.7细胞上清液相比，能够显著促进成纤维细胞株L929细胞的增殖。

红景天苷在皮肤抗皱、紧致方面的作用活性研究包括对巨噬细胞介导的成纤维细胞迁移的影响。如图4所示，100μM的红景天苷作用的Raw264.7细胞上清与Raw264.7细胞上清液相比，能够显著促进成纤维细胞株L929细胞的迁移。

红景天苷在皮肤抗皱、紧致方面的作用活性研究还包括对巨噬细胞介导的成纤维细胞胶原合成的影响。如图5所示，100μM的红景天苷作用的Raw264.7细胞上清与Raw264.7细胞上清液相比，能够显著促进成纤维细胞株L929细胞中Collagen I与Collagen III的mRNA表达。

红景天苷在皮肤抗皱、紧致方面的作用活性研究还包括对ROS清除的作用。如图6所示，红景天苷在0.05g/L测试浓度下对斑马鱼胚胎ROS清除率为43％，红景天苷在0.01g/L测试浓度下对斑马鱼胚胎ROS清除率为35％，说明红景天苷能够显著清除斑马鱼胚胎中的ROS，具有抗氧化效果，支持了抗皱、紧致的功能。

红景天苷对皮肤的刺激作用研究应用了兔皮肤刺激模型。如表2和图8、图9所示，与对照组相比，涂抹红景天苷溶液后，没有出现明显的红斑、水肿现象，且H&E切片染色结果显示兔皮肤组织也没有病理变化(图10)，故红景天苷对兔皮肤无显著刺激作用。

本发明提供了红景天苷作为促进胶原合成剂在制备具有抗皱、紧致功效的化妆品中的应用。

优选的，所述化妆品还包括辅料。

优选的，所述化妆品的剂型包括膏霜剂、乳液剂、水剂、凝胶剂、油剂、粉剂、泥剂、气雾剂、贴剂、膜剂或纳米制剂。

本发明提供了红景天苷在制备促进巨噬细胞中TGFβ1的表达的试剂中的应用。

本发明提供了红景天苷在制备促进成纤维细胞增殖的试剂中的应用。

本发明提供了红景天苷在制备促进成纤维细胞迁移的试剂中的应用。

本发明提供了红景天苷在制备促进成纤维细胞胶原合成的试剂中的应用。

本发明提供了红景天苷在制备清除ROS的试剂中的应用。

优选的，所述红景天苷通过巨噬细胞介导实现促进成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成，清除体内ROS，达到抗皱、紧致效果。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明提供了红景天苷在制备具有抗皱紧致功能化妆品中的应用；成纤维细胞的胶原合成是皮肤抗皱、紧致的重要机制；本发明中合成的红景天苷能够调节巨噬细胞中TGFβ1的表达，进而促进成纤维细胞的增殖、迁移和胶原合成。斑马鱼胚胎ROS清除测试试验结果支持了红景天苷的抗皱、紧致效果。兔皮肤刺激试验证明红景天苷对皮肤无刺激作用，能够应用于护肤品中。

附图说明

图1为红景天苷对Raw264.7细胞活力的影响；

图2为红景天苷对Raw264.7细胞中TGFβ1mRNA表达与蛋白释放的影响；

图3为红景天苷处理的巨噬细胞上清对成纤维细胞增殖的影响；

图4为红景天苷处理的巨噬细胞上清对成纤维细胞迁移的影响；

图5为红景天苷处理的巨噬细胞上清对成纤维细胞中胶原合成的影响；

图6为红景天苷处理的斑马鱼胚胎中ROS的水平；

图7为红景天苷对斑马鱼胚胎中ROS清除作用的检测流程；

图8为红景天苷给药4h后对兔皮肤刺激反应的代表性图片；

图9为红景天苷给药72h后对兔皮肤刺激反应的代表性图片；

图10为红景天苷对兔皮肤刺激反应的H&E染色结果。

具体实施方式

本发明提供了红景天苷作为促进胶原合成剂在制备具有抗皱、紧致功效的化妆品中的应用。

在本发明中，所述化妆品还包括辅料，本发明对所述辅料的种类没有特殊限定，采用化妆品领域能够使用的辅料即可。

在本发明中，所述化妆品的剂型优选的包括膏霜剂、乳液剂、水剂、凝胶剂、油剂、粉剂、泥剂、气雾剂、贴剂、膜剂或纳米制剂。

本发明还提供了红景天苷在制备促进巨噬细胞中TGFβ1的表达的试剂中的应用。

本发明还提供了红景天苷在制备促进成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的试剂中的应用。

本发明还提供了红景天苷在制备ROS清除的试剂中的应用。

在本发明中，所述红景天苷通过巨噬细胞介导实现促进成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成，清除体内ROS，达到抗皱、紧致效果。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

本实施例为红景天苷对巨噬细胞中TGFβ1基因表达的调节作用。分别测定了红景天苷对巨噬细胞活力的影响、红景天苷对巨噬细胞中TGFβ1mRNA表达与蛋白释放的影响。其中巨噬细胞Raw264.7(ATCC TIB-71)细胞购自于中国科学院细胞库。具体实施方法如下：

(1)红景天苷对巨噬细胞活力的影响

所用细胞株为Raw264.7，细胞活力测定方法为CCK8实验，红景天苷作用时间为48h。结果如图1所示，10mM以内的红景天苷作用于Raw264.7细胞，无显著细胞毒性。

(2)红景天苷对巨噬细胞中TGFβ1mRNA表达与蛋白释放的影响

所用细胞株为Raw264.7。TGFβ1mRNA表达水平的检测方法为qRT-PCR，红景天苷作用时间为9h。TGFβ1蛋白释放的检测方法为ELISA，红景天苷作用时间为12h。结果如图2所示，100μM的红景天苷能够显著提高Raw264.7细胞中TGFβ1mRNA的表达水平和TGFβ1蛋白的释放。

实施例2

本实施例为红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的影响。测定了红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞增殖的影响、红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞增迁移的影响、红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞胶原合成的影响。其中巨噬细胞Raw264.7(ATCC TIB-71)细胞和小鼠成纤维细胞L929购自于中国科学院细胞库。具体实施方法和结果如下：

(1)红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞增殖的影响

所用细胞株为巨噬细胞Raw264.7和成纤维细胞L929。L929细胞活力测定方法为CCK8试验。具体为100μM的红景天苷作用于Raw264.7细胞12h后收集上清，上清作用于L929细胞24h后测定细胞活力。结果如图3所示：100μM的红景天苷作用的Raw264.7细胞上清(红景天苷100μM)与Raw264.7细胞上清液(Control)相比，能够显著促进L929细胞的增殖。因此，红景天苷能够通过调节巨噬细胞促进成纤维细胞的增殖。

(2)红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞迁移的影响

所用细胞株为巨噬细胞Raw264.7和成纤维细胞L929。L929细胞迁移的测定方法为划痕实验。具体为100μM的红景天苷作用于Raw264.7细胞12h后收集上清，上清作用于L929细胞24h后测定细胞迁移。结果如图4所示：100μM的红景天苷作用的Raw264.7细胞上清(红景天苷100μM)与Raw264.7细胞上清液(Control)相比，能够显著促进L929细胞的迁移。因此，红景天苷能够通过调节巨噬细胞促进成纤维细胞的迁移。

(3)红景天苷对巨噬细胞介导的成纤维细胞胶原合成的影响

所用细胞株为巨噬细胞Raw264.7和成纤维细胞L929。胶原合成的测定方法为qRT-PCR方法测定Collagen I与Collagen III的mRNA水平。具体为100μM的红景天苷作用于Raw264.7细胞12h后收集上清，上清作用于L929细胞48h后测定Collagen I与Collagen III的mRNA水平。结果如图5所示：100μM的红景天苷作用的Raw264.7细胞上清(红景天苷100μM)与Raw264.7细胞上清液(Control)相比，能够显著促进L929细胞中Collagen I与CollagenIII的mRNA表达。因此，红景天苷能够通过调节巨噬细胞促进成纤维细胞中Collagen I与Collagen III的mRNA表达。

实施例3

本实施例为红景天苷对斑马鱼胚胎中ROS清除作用的研究。

实验生物为斑马鱼胚胎。实验方法为将48h的斑马鱼胚胎转移至96孔板中，每孔一尾鱼胚胎，设置0.05g/L红景天苷组、0.01g/L红景天苷组和空白对照组，每组24尾斑马鱼胚胎。放置于28±1℃恒温箱中培养至受精后72±1h。转移至24孔板中，每孔含12尾鱼胚胎和2mL活性氧(ROS)测试溶液，再放置于28±1℃恒温箱中2±1h。将鱼胚胎侧身摆放，于荧光立体显微镜下对鱼胚胎按统一的拍照参数进行拍照。具体实验委托第三方检测公司水中银(国际)生物科技有限公司完成。检测流程见图7：

活性氧(ROS)清除率计算方法如下：

上式中，T为受试物处理组鱼胚胎ROS“平均信号强度”的平均值，C为空白对照组鱼胚胎ROS“平均信号强度”的平均值。对受试物处理组鱼胚胎ROS信号强度和空白对照组ROS信号强度进行双尾T检验，取得p值。

实施例4

本实施例为红景天苷对兔皮肤刺激作用的研究。

实验动物为清洁级新西兰兔(2-2.2kg)，购自上海中医药大学实验动物中心(上海市车墩实验动物良种场有限公司)。红景天苷溶液配置方法为：称取红景天苷药物粉末300mg溶于300ml生理盐水中，得100mg/ml红景天苷溶液。将兔背部脊柱两侧的毛剃除，不得损伤皮肤。用棉棒蘸取红景天苷药物溶液适量直接涂在皮肤上，涂毕用纱布敷在其上，然后用无刺激胶布固定。另一侧去毛皮肤涂抹生理盐水作为阴性对照。在自然光线下肉眼观察涂抹4h、24h、48h、72h后皮肤反应，并按照表1对皮肤刺激反应进行评分，实验结束后计算每只兔子的总分值(刺激指数)，判定皮肤刺激强度。

表1皮肤刺激反应评分方法

实验结果如表2和图8、图9所示，与对照组相比，涂抹红景天苷溶液后，没有出现明显的红斑、水肿现象，且H&E切片染色结果显示兔皮肤组织也没有病理变化(图10)，故红景天苷对兔皮肤无显著刺激作用。

表2红景天苷对兔皮肤刺激反应的评分

由上述实施例可知，本发明中合成的红景天苷能够调节巨噬细胞中TGFβ1的表达，进而促进成纤维细胞的增殖、迁移和胶原合成。兔皮肤刺激试验证明红景天苷对皮肤无刺激作用，能够应用于护肤品中。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。