一种复合植物代用茶及其制备方法与水溶性总黄酮的检测方法

技术领域

本发明属于复合植物代用茶分析领域，涉及一种复合植物代用茶及其制备方法与水溶性总黄酮的检测方法。

背景技术

中国是茶树的原产地，有超过2000年的饮茶历史，茶在中国的传统饮品中具有特殊地位，茶文化对中国影响深远，长久以来国人认为茶是一种健康饮品。

溪黄草、新会陈皮以及白木香叶均为广东省常见可食用植物成分，也是部分有食用习惯的地区的茶饮料，但均为单一使用，而且味道异常。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种冲泡方便、具有一定的清热下火调理脾胃的作用的复合植物代用茶及其制备方法与水溶性总黄酮的检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一方面，本发明提供了一种复合植物代用茶，包括以下重量份的组分：溪黄草3-4份、白木香叶1-1.5份、陈皮2.5-3.5份、红茶粉1-2份、红糖0.5-1份。

溪黄草，学名是狭基线纹香茶菜，俗称土黄连等，具有清热利湿、退黄祛湿、凉血散瘀的功效，对于急性肝炎、急性胆囊炎有一定治疗作用。溪黄草在我国广泛分生长布，是广东地区常用凉茶的原料之一，于2013年批准成为新资源食品，规定的食用限量为≤8g/天。

白木香，别名女儿香，《中国药典》记载，白木香可以“行气止痛，温中止呕，纳气平喘。用于胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，肾虛气逆喘急”。白木香叶是采自人工种植的瑞香科沉香属植物白木香的叶片，经杀青、揉捻、发酵、烘干而成。白木香叶是广东地区特色食品，广东地区地方标准《广东省食品安全地方标准白木香叶》(DBS44/011-2018)中推荐的冲泡每日限量为≤3g。

陈皮是药食同源物质，为芸香科植物橘(Citrus reticulata Blanco)及其栽培变种的干燥成熟果皮。采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低温干燥而成。陈皮具有理气健脾，燥湿化痰的功效。《中国药典》推荐用量为3g～10g。

本发明所述复合植物代用茶是一种冲泡方便的复合植物代用茶，采用广东常用植物溪黄草、新会陈皮、白木香叶、红茶为主要原料，加入红糖调节味道后加工制作而成的代用茶，具有一定的清热下火调理脾胃的作用。本发明将溪黄草、新会陈皮、白木香叶组合使用，避免产品过于寒凉，且使用了红糖、红茶来调节异味，使得口味可为大多数人能接受。

作为本发明所述复合植物代用茶的一种优选实施方式，所述复合植物代用茶包括以下重量份的组分：溪黄草3份、白木香叶1-1.5份、陈皮3-3.5份、红茶粉1.5-2份、红糖0.5-1份。

本发明所述复合植物代用茶的各个组分在优选比例下复配，使复合植物代用茶具有更好的汤色、香气和滋味。

第二方面，本发明提供了所述复合植物代用茶的制备方法，包括以下步骤：

取溪黄草粉末、陈皮粉末、白木香叶粉末，红茶粉末，红糖粉末，均匀混合，即制得本发明所述复合植物代用茶。

本发明将溪黄草粉末、陈皮粉末、白木香叶粉末，红茶粉末，红糖粉末，均匀混合，制得本发明所述复合植物代用茶，操作简便，且制得的复合植物代用茶能够更快完成冲泡，口感良好，质量也更加均匀可控。

第三方面，本发明提供了所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法，包括以下步骤：

S1、制备复合植物代用茶供试品溶液：称取复合植物代用茶，加80℃以上热水提取水溶性总黄酮，定容，吸取上清液，加入聚酰胺粉吸附杂质，转入层析柱，分别采用甲苯和甲醇进行洗脱，定容，制备得到复合植物代用茶供试品溶液；

S2、制备标准样品溶液；

S3、建立标准曲线；

S4、测定复合植物代用茶供试品溶液中水溶性总黄酮的浓度。

黄酮类化合物是指两个苯环通过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物的总称，即具有C6-C3-C6结构的一类化合物的总称，橙皮苷又称二氢黄酮苷，是典型的黄酮类化合物，水溶性总黄酮是指食品通过通常的食用方式可被人体获得的总黄酮。本发明提取出产品中的水溶性总黄酮后，通过紫外-可见分光光度法，以橙皮苷为标准物质，以标准曲线外标法测定产品中水溶性总黄酮的含量，以水溶性总黄酮含量来作为产品功效成分的质量指标。

本发明所述复合植物代用茶中主要原料溪黄草、陈皮、白木香叶及红茶中含有大量的黄酮类化合物，因而为了更好地控制产品质量，本发明提供了一种通过紫外-可见分光光度法测定复合植物代用茶中水溶性总黄酮浓度的方法，通过控制产品中水溶性总黄酮的方式来对产品进行质量控制，该方法适用于本产品中水溶性总黄酮的检测，同时该方法也适用于其他复合植物植源性食品中水溶性总黄酮的检测。

本发明通过模拟食用方式，采用80℃以上热水浸泡产品，提取出产品中的水溶性总黄酮。现有总黄酮检测技术一般为加入极性有机溶剂提取或者强碱提取显色，而人们对于复合植物代用茶的食用通常不会加入有机溶剂或者强碱，因而检测得到的数据会跟人们实际利用的总黄酮存在较大差异，本发明首次提供了一种水溶性总黄酮含量的检测方法。

本发明通过添加吸附剂聚酰胺粉净化掉部分色素杂质，可以使制备得到的复合植物代用茶供试品溶液中含有的杂质更少。

本发明同时采用甲苯和甲醇进行洗脱，可以在去除更多杂质的同时，留住更多的提取出来的水溶性总黄酮。

作为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种优选实施方式，所述步骤S1中，复合植物代用茶供试品溶液中复合植物代用茶的质量浓度为20～40μg/mL。

作为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种优选实施方式，所述步骤S1中，热水的温度为85℃。

本发明采用85℃的热水可以更好的模拟食用方式，提取出产品中的水溶性总黄酮。

作为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种优选实施方式，所述步骤S1中，所述聚酰胺粉与复合植物代用茶的重量比为聚酰胺粉：复合植物代用茶＝(1～2)：1。

本发明通过添加特定比例的聚酰胺粉可以在不会添加过多的量的同时尽可能多的净化掉色素杂质，可以使制备得到的复合植物代用茶供试品溶液中含有的杂质更少。

作为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种优选实施方式，所述步骤S1中，采用甲苯和甲醇进行洗脱的方式为：先用甲苯洗脱，弃去甲苯液后再用甲醇洗脱。

本发明同时采用甲苯和甲醇进行洗脱，先用甲苯洗脱，弃去甲苯液，再用甲醇洗脱，合并洗脱液后定容，可以在去除更多杂质的同时，留住更多的提取出来的水溶性总黄酮。

作为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种优选实施方式，所述步骤S2中，精密称取橙皮苷标准样品，加甲醇溶解，转移至容量瓶中定容，制得标准样品储备液；

所述步骤S3中，分别吸取不同体积的标准样品储备液，置于容量瓶中，加甲醇定容，得到一系列不同浓度的橙皮苷标准工作液；分别取上述橙皮苷标准工作液，以甲醇为空白溶剂，采用紫外-可见分光光度法，于波长275-295nm测定吸光度，绘制标准曲线；

所述步骤S4中，取所述复合植物代用茶供试品溶液，采用紫外-可见分光光度法，于波长275-295nm测定吸光度，从标准曲线上读取浓度，计算，即测得复合植物代用茶供试品溶液中水溶性总黄酮的浓度。

本发明提取出产品中的水溶性总黄酮后，以橙皮苷为标准物质，通过紫外-可见分光光度法，于波长275-295nm测定吸光度，以橙皮苷标准工作液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，以标准曲线外标法测定产品中水溶性总黄酮的含量，以水溶性总黄酮含量来作为产品功效成分的质量指标。

作为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种优选实施方式，所述步骤S3中，采用紫外-可见分光光度法，于波长283nm测定吸光度；

所述步骤S4中，采用紫外-可见分光光度法，于波长283nm测定吸光度。

当检测波长为283nm时，检测样品中的橙皮苷有最大吸收，且回收率更好。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1、本发明提供了一种以溪黄草、陈皮及白木香叶、红茶等植源性食品组合而成的有一定调理脾胃作用的复合植物代用茶的配方，该配方形成的复合植物代用茶口感柔和，有一定的调理脾胃的效果，是一种全新的配方；

2、本发明所述复合植物代用茶是一种冲泡方便的复合植物代用茶，采用广东常用植物溪黄草、新会陈皮、白木香叶、红茶为主要原料，加入红糖调节味道后加工制作而成的代用茶，具有一定的清热下火调理脾胃的作用；

3、本发明将溪黄草、新会陈皮、白木香叶组合使用，避免产品过于寒凉，且使用了红糖、红茶来调节异味，使得口味可为大多数人能接受；

4、本发明将溪黄草、陈皮以及白木香叶、红糖、红茶均混合粉碎，使得代用茶能够更快完成冲泡，质量也更加均匀可控；

5、本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法，通过模拟食用方式，采用85℃的热水浸泡产品，提取出产品中的水溶性总黄酮，通过吸附剂净化掉部分色素杂质后，通过紫外-可见分光光度法，以橙皮苷为标准物质，以标准曲线外标法测定产品中水溶性总黄酮的含量，以水溶性总黄酮含量来作为产品功效成分的质量指标；

6、本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的检出限和定量限能满足检测的需求，线性范围良好，重复性良好，准确可靠。该方法可应用于复合植物代用茶中水溶性总黄酮含量的检测，从而应用于产品的质量控制。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1～5

实施例1～5为本发明所述复合植物代用茶，其配方如表1所示。

实施例1～5所述复合植物代用茶的制备方法，包括以下步骤：

S1、取溪黄草，洗净，去除杂质，晒干，粉碎，过100目筛，得到溪黄草粉末备用；取陈皮，清扫干净，粉碎，过100目筛，得到陈皮粉末备用；取白木香叶，去除杂质，粉碎，过100目筛，得到白木香叶粉末备用；取红茶，粉碎，过100目筛，得到红茶粉末备用；取红糖，打碎，得到红糖粉末备用；

S2、取所述步骤S1中的溪黄草粉末、陈皮粉末、白木香叶粉末，红茶粉末，红糖粉末，均匀混合，进行装袋，即制得本发明所述复合植物代用茶。

表1

实施例6

本发明所述复合植物代用茶的一种实施例，本实施例依据《GB/T 23776-2018茶叶感官审评方法》对实施例1～5所述复合植物代用茶的汤色、香气及滋味进行感官评价，各项感官评价最好的得10分，以下依次得8分、5分、3分、1分，实施例1～5各项评分如表2所示。

表2

从以上结果可以看出，实施例1所述复合植物代用茶，茶味过淡，青草泥土味过重，因而调整了红茶粉的用量，增加茶香，形成了实施例2所述复合植物代用茶，实施例2所述复合植物代用茶进行感官评价后发现仍然无法掩盖较重的青草泥土味，因而降低了溪黄草含量，形成了实施例3、4、5所述复合植物代用茶，比较实施例3、4、5所述复合植物代用茶，实施例3、4、5所述复合植物代用茶的口感柔和无异味，适口性最好，因而最终采用实施例5所述复合植物代用茶进行后续复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的验证。

实施例7

实施例7为本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法，包括以下步骤：

S1、复合植物代用茶供试品溶液的制备：称取1g所述复合植物代用茶，置25mL容量瓶中，加85℃热水定容，摇匀，85℃水浴恒温震荡声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，水浴挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL甲苯洗脱，弃去甲苯液；然后用甲醇洗脱，合并洗脱液并定容至25mL，即得复合植物代用茶供试品溶液；

S2、标准样品溶液的制备：精密称取橙皮苷标准样品5.88mg(纯度为94.8％，精确至0.01mg)，加甲醇溶解，并转移至100mL容量瓶中定容至刻度，制得橙皮苷的浓度为55.7μg/mL的标准样品储备液；

S3、标准曲线的建立：精密吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的标准样品储备液，分别置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成橙皮苷浓度分别为0.0μg/mL、5.57μg/mL、11.14μg/mL、16.71μg/mL、22.28μg/mL、27.85μg/mL的橙皮苷标准工作液；分别取上述橙皮苷标准工作液，以甲醇为空白溶剂，用紫外-可见分光光度法于波长283nm测定吸光度，以橙皮苷标准工作液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；

S4、测定法：取步骤S1所述复合植物代用茶供试品溶液，用紫外-可见分光光度法于波长283nm测定吸光度，从标准曲线上读取浓度，平行测定次数不少于两次；

S5、结果计算：样品中水溶性总黄酮含量按下式计算：

式中：X—试样中水溶性总黄酮的含量，以橙皮苷计，单位为克每一百克(g/100g)；C—试样溶液中水溶性总黄酮的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；V1—试样定容体积，单位为毫升(mL)；V2—吸取试样溶液体积，单位为毫升(mL)；V3—过柱后定容体积，单位为毫升(mL)；M—试样取样量，单位为克或毫升(g或mL)。

实施例8

实施例8与实施例7的区别为：在所述步骤S1中，称取0.5g所述复合植物代用茶，其余步骤均相同。

实施例9

实施例8与实施例7的区别为：在所述步骤S1中，称取0.8g所述复合植物代用茶，其余步骤均相同。

实施例10

本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的一种实施例，本实施例以实施例7为例，对本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法进行验证：

1、线性范围

以橙皮苷标准工作液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，其线性回归方程为Y＝0.0273x-0.0031，其中x为浓度(μg/mL)，Y为吸收度，相关系数R2为0.9996。表明以该方法测试橙皮苷含量，在0μg/mL～27.85μg/mL范围内，本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的线性关系良好。

2、方法检出限和定量限

按照《合格评定化学分析方法确认和验证指南》GB/T 27417-2017中空白标准偏差法评估本检测方法的检出限和定量限。独立测试样品空白10次，计算检测结果的标准偏差(SD值)，样品空白平均值加上3倍重复性标准偏差作为检出限，样品空白平均值加上10倍重复性标准偏差作为定量限，结果如表3所示。

表3

通过上述方法确定，当称样量为0.2g，最终定容体积为625mL时，本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的检出限为0.103g/100g，定量限为0.192g/100g。

3、方法精密度

对制备好的复合植物代用茶，进行水溶性总黄酮含量精密度实验。按照上述样品前处理方法平行配制7份试样溶液进行测试，七份样品测试结果的平均含量为5.35g/100g，相对标准偏差RSD＝1.2％，符合《实验室质量控制规范食品理化检测》GB/T 27404-2008附录F中该浓度实验室内变异系数≤2％的要求，说明本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的重复性良好。

4、方法准确度

以制备好的复合植物代用茶为样品，进行水溶性总黄酮含量测定方法的准确度实验。向样品中加入适量橙皮苷标准品，按照上述前处理方法平行测定6次，重复三次，计算回收率，结果如表4所示。

表4

从以上结果可以看出，本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的回收率均在95～105％范围内，符合《实验室质量控制规范食品理化检测》GB/T 27404-2008附录F的要求。

综上所述，本发明所述复合植物代用茶的水溶性总黄酮的检测方法的检出限和定量限能满足检测的需求，线性范围良好，重复性良好，准确可靠。该方法可应用于复合植物代用茶中水溶性总黄酮含量的检测，从而应用于产品的质量控制。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。