通过锰消耗抑制真菌生长

技术领域

本发明属于微生物学领域，涉及控制真菌腐败的方法。本发明还涉及食品和制剂。

背景技术

食品工业中的主要问题是有害微生物引起的腐败。根据粮食及农业组织(Foodand Agriculture Organization,FAO)的资料，供人类消费的卡路里中，最终有四分之一未被人类消费。在粮食短缺的时期，超过8亿人遭受饥饿，食品浪费这一话题已成为全球决策者和食品制造商的当务之急。除了对社会的负面社会和经济影响外，浪费的食物还造成许多相关的环境影响，包括不必要的温室气体排放以及对水和土地等稀缺资源的低效利用。

酵母和霉菌非常有效地导致食物腐败，这对大多数食品制造商来说都是一个问题。由于酵母和霉菌导致的腐败作为食品表面上的霉斑或变色是清晰可见的，从而使其在消费前得以处理。酵母倾向于在食物和饮料基质中以浮游生物形式生长，并且它们倾向于发酵糖，在厌氧条件下生长良好。相反，霉菌倾向于在产品表面上以由细胞组成的可见菌丝体的形式生长。

特别是在乳制品行业，欧洲每年有2900万吨乳制品被浪费。保持乳制品新鲜的主要挑战之一是控制酵母和霉菌污染，酵母和霉菌自然存在于各处，尤其是在从生产到消费者餐桌的冷链中断的情况下。

由于经济和环境原因，一直需要有效控制酵母和霉菌污染的新颖或改进的方法。

发明内容

本发明的发明人试图找到控制真菌污染的有效方法，并且令人惊讶地将锰确定为其生长的重要生长限制条件。本发明提供了通过限制可为酵母或霉菌所用的游离锰来抑制真菌生长的新方法。本发明部分基于令人惊讶的发现，即通过降低食品中游离锰的含量，例如通过使用锰清除剂去除游离锰，可以减少或延迟酵母和/或霉菌的污染。此外，本发明人还证明，常见酵母和霉菌对本文所述的方法敏感。

锰被认为对人体健康至关重要，因此是必不可少的微量元素。锰对于人类和动物的正常功能至关重要，因为锰是诸如锰超氧化物歧化酶、丙酮酸羧化酶等许多细胞酶起作用所必需的，并且它可以激活许多其他类似激酶、脱羧酶、转移酶和水解酶。

锰天然存在于许多食物源中，包括叶用蔬菜、坚果、谷物和动物产品。普通食物中锰浓度的典型范围是，例如谷物产品中为0.4-40ppm，在肉类、家禽、鱼和蛋中为0.1-4ppm，在蔬菜产品中为0.4-7ppm。

除了作为膳食补充剂外，有时还将锰添加到发酵制品中，作为增强乳中双歧杆菌生长的有效成分(参见例如WO2017/021754,Compagnie Gervais Danone,France)。然而，本发明人发现这可能具有不利影响，并且，为了防止或延迟有害微生物的生长，限制食品中锰的浓度可能是有利的。

为了解决微生物腐败的问题，本发明在第一方面提供了抑制或延迟产品中一种真菌/多种真菌生长的方法，该方法包括减少存在于所述产品中的游离锰的步骤。本发明所述方法可以降低游离锰浓度。在优选的实施方案中，添加一种或多种锰清除剂以减少游离锰。游离锰浓度优选降低至低于约0.01ppm，例如低于约0.008ppm，或低于约0.003ppm。使用该方法，可以获得有害酵母和/或霉菌几乎不能生长的产品。该产品的特征在于游离锰浓度低于约0.01ppm，例如0.009ppm、0.008ppm、0.007ppm、0.006ppm、0.005ppm或更低。该方法进一步包括测量产品中的游离锰浓度，并获得低于约0.01ppm的值的步骤。

特别是，本发明提供了抑制或延迟酸奶或干酪等由乳制备的发酵食品中酵母和/或霉菌生长的方法。该方法的特征在于降低食品中锰浓度以使酵母和/或霉菌丧失锰的步骤，从而延迟或抑制其在食品中的生长。

在一个优选的实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品中有孢圆酵母属的种(Torulaspora spp)、隐球菌属的种(Cryptococcus spp.)和红酵母属的种(Rhodoturolaspp.)生长的方法，包括减少存在于所述产品中的游离锰的步骤。

在第二方面，本发明提供了制备诸如食品等产品的方法，该方法包括减少存在于所述产品中的游离锰。可以通过本发明所述的方法或本领域技术人员已知的其他方法降低游离锰浓度。在优选的实施方案中，添加一种或多种锰清除剂以减少游离锰。游离锰浓度优选降低至低于约0.01ppm，例如低于约0.005ppm，或低于约0.003ppm。使用该方法，可以获得游离锰浓度低于约0.01ppm的产品。

在第三方面，本发明提供了通过本文所述方法获得的产品，例如食品。在一个实施方案中，本发明提供了提供产品的方法，包括减少产品中的游离锰并获得产品的步骤，其中产品中的游离锰浓度低于约0.01ppm。

在另一方面，本发明提供了一种或多种锰清除剂在抑制或延迟真菌生长以及生产食品中的用途。锰清除剂具有使产品中可为酵母和霉菌所用的游离锰变少的作用，从而抑制或延迟了它们的生长。

在另一方面，本发明提供了锰清除剂、锰清除剂的选择及其在锰吸收中的用途。

附图说明

图1和图2显示了两株不同的汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)在pH 6.5(空心圆)或4.5(黑色正方形)、具有不同锰浓度的化学成分确定培养基中的生长。在17℃孵育6天后测量生长，并通过600nm处的吸光度确定。

图3和图4显示了在存在锰清除剂并添加了不同锰浓度的情况下，两株不同的汉逊德巴利酵母在发酵乳的水相中的生长。在17℃孵育7天后，测量600nm处的吸光度。与未添加锰的参照(正方形)相比，将锰添加到水相中后汉逊德巴利酵母(菌株1)的生长如图3所示，汉逊德巴利酵母(菌株2)的生长如图4所示(空心圆)。显示了技术重复的平均值和标准偏差n＝6(A)和n＝3(B)。

图5显示了在添加了6ppm(顶行)至0.000006ppm(底端行)的不同锰浓度后汉逊德巴利酵母(菌株2)在发酵乳中的生长，该发酵乳是在具有和不具有不同清除剂的情况下制备的。

图6显示了三种不同的酵母在由乳制备的平板上的生长，该乳是用单独的起子培养物(参照，顶行)或与锰清除剂(底端行)一起发酵的。如图片上方所示，添加了不同的锰浓度。以三种不同的浓度添加了三种靶标污染物(A列：汉逊德巴利酵母(菌株2)，B列：长莓隐球酵母(Cryptococcus fragicola)，C列：汉逊德巴利酵母(菌株1))：1x10

图7显示了三种不同的霉菌在由乳制备的平板上的生长，所述乳是由单独的起子培养物(参照，顶行)或与锰清除剂(底端行)一起发酵的。如图所示，添加了不同的锰浓度。如图片上方所示，添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加了三种靶标污染物(A：短密青霉(Penicillium brevicompactum)，B：皮落青霉(Penicillium crustosum)和C：离生青霉(Penicillium solitum))。将平板在7±1℃下孵育25天。

图8显示了三种不同的霉菌在由乳制备的平板上的生长，所述乳是由单独的起子培养物(参照，顶行)或与锰清除剂(底端行)一起发酵的。如图片上方所示，添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加了三种靶标污染物(A：短密青霉，B：皮落青霉和C：离生青霉)。将平板在22±1℃下孵育8天。

图9显示了三种不同的霉菌在由乳制备的平板上的生长，所述乳是由单独的起子培养物(参照，顶行)，或者另外由锰清除剂(底端行)发酵的。如图片上方所示，进一步添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加三种靶标污染物(A：肉色青霉(Penicillium carneum)，B：酒青霉(Penicillium paneum)和C：罗克福尔青霉(Penicillium roqueforti))。将平板在7±1℃下孵育25天。

图10显示了三种不同的霉菌在由乳制备的平板上的生长，所述乳是由单独的起子培养物(参照，顶行)，或者另外由锰清除剂(底端行)发酵的。如图片上方所示，进一步添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加三种靶标污染物(A：肉色青霉，B：酒青霉和C：罗克福尔青霉)。将平板在22±1℃下孵育8天。

图11显示了选定的乳杆菌属(Lactobacillus)的种的MntH锰转运蛋白的示例性系统发育树。

图12显示了汉逊德巴利酵母菌株(菌株1或菌株2)在水相中的生长，所述水相是用1.2μm滤器过滤的(过滤水)，优选是发酵乳的水相，具有不同的EDTA浓度，具有和没有其他锰清除剂，优选锰清除剂1，且具有和不具有6ppm的锰。与参照相比，在17℃下孵育7天后，测量600nm处的吸光度。制备样品一式三份。

图13显示了汉逊德巴利酵母菌株(菌株1或菌株2)在水相中的生长，所述水相是用0.2μm滤器过滤的(无菌水)，优选是发酵乳的水相，具有不同EDTA浓度，具有或没有其他锰清除剂，优选锰清除剂1，且具有和不具有0.6ppm的锰。与参照相比，在17℃下孵育7天后，测量600nm处的吸光度。制备样品一式三份。

图14显示了汉逊德巴利酵母菌株(菌株1或菌株2)在添加了6ppm锰的酸奶中的生长，所述酸奶具有和不具有不同的锰清除剂，例如细菌，优选乳酸菌，和/或化学螯合材料，例如EDTA。EDTA的浓度为14mg/ml(顶行)、7.10mg/ml、3.55mg/ml,1.78mg/ml、0.89mg/ml、0.44mg/ml、0.22mg/ml至0mg/ml(底端行)。

具体实施方式

粮食损失是世界范围内的主要问题-供人类消费的所有食物中约有三分之一被损耗或浪费。造成全球大量食物损失的原因多种多样，但是影响感官产品质量(外观、质地、味道和香气)的微生物腐败起着重要作用。由于真菌可以在不同甚至恶劣的环境中生长，因此它们是食品加工链各个阶段中发现的主要腐败微生物。因此，通过控制真菌污染来减少食物损失至关重要。

本发明响应该需求提供了抑制或延迟产品中真菌生长的新方法。该方法基于令人惊讶的发现，即低游离锰浓度可作为酵母和/或霉菌生长的限制因素。自然界和我们的许多消费品中都存在微量的锰。但是，尚未有报道建议通过操纵游离锰的浓度可以有效地控制微生物腐败。基于这一出乎意料的发现，可以预见，这种腐败防止策略甚至适用于食品以外的产品，并扩展到通常容易受微生物污染的其他产品，例如饲料产品、生物产品、保健产品、药物产品等。

在第一方面，本发明提供了抑制或延迟产品中真菌生长的方法，包括将所述产品中的游离锰消耗至低于约0.01ppm的浓度。

通常，抑制是指细胞或微生物功能和活性的部分或全部降低。如本文所用，涉及酵母和霉菌的术语“抑制(to inhibit)”和“抑制(inhibiting)”是指酵母和霉菌的生长、数量或浓度相同或降低。这可以通过微生物学领域中已知的任何方法来测量。通过将游离锰减少的产品中或其上的真菌生长、数量或浓度与对照进行比较，可以观察到抑制作用。对照可以是相同，但游离锰未减少的产品。

术语“延迟”通常是指比停止、推迟、阻碍或导致某些事情比正常情况更缓慢地发生。如本文所用，“延迟真菌生长”是指推迟真菌生长的行动。通过比较两种产品中真菌生长到给定水平所需的时间，可以观察到这一点，所述两种产品中有一种的锰减少，而另一种的锰未减少(但其他方面相同)。

在一些实施方案中，“延迟真菌生长”是指延迟7天，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60天。

真菌是属于真菌界的成员。可以使用本领域技术人员已知的各种方法来测量真菌的生长。例如，真菌的生长可以通过菌落的密度或大小、细胞数、菌丝体质量变化、孢子产生、菌丝生长、菌落形成单位(colony-forming unit,CFU)等来测量，这取决于真菌的类型和应用方法的产品。也可以通过测量养分或代谢物浓度的变化，例如二氧化碳释放和氧气吸收，来观察真菌的生长。术语“抑制真菌生长(inhibition of fungal growth)”或“抑制真菌生长(inhibiting growth of fungi)”是指抑制真菌细胞增殖。术语“延迟真菌生长(delay of fungal growth)”或“延迟真菌生长(delaying growth of fungi)”是指减慢真菌细胞增殖。例如，可以通过测量真菌的生长并将其与对照进行比较来观察到这一点。这类控制例如可以是没有施加锰清除剂的产品。确定真菌生长抑制或延迟的方法是本领域技术人员已知的。

根据本发明，“游离锰”或有时候的“锰”，是指存在于产品中(即形成产品的一部分，例如在产品内部或在产品的表面上)，且可以被包括酵母和霉菌在内的真菌利用或吸收的锰。例如，游离锰是指产品的食物基质中存在的锰。

在一个优选的实施方案中，本发明涉及抑制或延迟食品中真菌生长的方法，包括降低食品的食品基质中的游离锰浓度。如本文所用，术语“食物基质”是指食物的组成和结构。它基于养分包含在连续介质中这一概念。

术语“减少/降低(reduce)”或“减少/降低(reducing)”通常是指在给定背景下减少物质的量。如本文所用，术语“减少游离锰(to reduce free manganese)”或“降低游离锰(reducing free manganese)”是指减少产品中存在的可被包括酵母和霉菌在内的真菌吸收的锰的量。

例如，这可以通过去除产品中或成为产品一部分的材料中存在的锰来进行。例如，这可以通过使原料经历离子交换色谱法去除锰，从而降低终产品中的浓度来进行。

一旦进入，真菌就会迅速定殖、增加种群，并从它们的周围环境吸收养分。在一些实施方案中，假定真菌可以首先与产品在表面上接触，则在产品的一部分上，例如在产品外部，例如涂层或外层上进行降低步骤，这在本发明的精神范围内。在这种情况下，降低步骤仍然导致产品中浓度的整体下降。

本文所用的锰浓度或锰含量(manganese level)以基于重量/重量计算的百万分率(“ppm”)表示。将产品中的游离锰减少到低于某个值的浓度是指，减少产品或其部分中的游离锰，从而降低整个产品中基于重量的游离锰的浓度。测定微量元素例如锰的方法是本领域已知的，并且描述于例如Nielsen,S.Suzanne,ed.Foodanalysis.Vol.86.Gaithersburg,MD:Aspen Publishers,1998中。

在应用本发明的方法时，本领域的技术人员可以首先确定存在于待处理的产品中的锰含量。食品中锰的浓度已得到很好的研究，可以在国家食品成分数据库中找到，例如丹麦食品成分数据库(Danish Food Composition Databank)、加拿大营养档案(CanadianNutrient Files)。通常，乳中锰的以至少0.03ppm的浓度存在，使乳制品易受真菌污染。牛乳中的锰含量已被报道为0.04-0.1ppm，山羊或绵羊乳中的锰含量被报道高达0.18ppm(Muehlhoff et al.,Milk and dairy products in human nutrition.Food andAgriculture Organization of the United Nations(FAO),2013)。至于干酪等发酵乳制品，由于乳的浓缩过程，锰含量通常会增加通常高达10倍或更多。已经报道了各种干酪类型的不同含量，例如里科塔奶酪(ricotta cheese)为约0.06ppm，奶油干酪为0.11ppm，布里干酪(brie)为0.34ppm，马苏里拉干酪(mozzarella)为0.3ppm，农家干酪(cottage cheese)为0.7ppm，毫达干酪(gouda)为0.68ppm，和切达干酪(cheddar cheese)为0.74ppm(Smit,L.E.,et al.The nutritional content of South African cheeses.ARC-AnimalImprovement Institute,1998；Gebhardt,Susan,et al."USDA national nutrientdatabase for standard reference,release 12."United States Department ofAgriculture,Agricultural Research Service,1998)。

优选将产品中的游离锰减少到低于约0.01ppm的浓度，例如低于约0.009ppm，低于约0.008ppm，低于约0.007ppm，低于约0.006ppm，低于约0.005ppm，低于约0.004ppm，低于约0.003ppm，低于约0.002ppm，低于约0.001ppm，低于约0.0009ppm，低于约0.0008ppm，低于约0.0007ppm，低于约0.0006ppm，低于约0.0005ppm，低于约0.0004ppm，低于约0.0003ppm，或更低。

本文所用的术语“约”表示稍微超出引用值的值，即，加减0.1％至10％。因此，本发明的范围也包括稍微超出所述范围的浓度。

在一个实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品，优选食品中真菌生长的方法，包括以下步骤：

-减少产品中的游离锰，以及

-获得产品，其中产品中的游离锰浓度低于约0.01ppm。

本方法还包括测量游离锰浓度的步骤。这可以在减少步骤之后进行，以确定游离锰的浓度是否降低。在一个实施方案中，本发明提供了抑制或延迟食品中真菌生长的方法，包括将食品中的游离锰减少到在食品中低于约0.01ppm的浓度，并测量食品中的游离锰，并可选地获得低于0.01ppm的值。

在一个实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品中真菌生长的方法，包括以下步骤：

-将产品中的游离锰减少到在产品中低于约0.01ppm的浓度，

-测量产品中游离锰的浓度，并获得低于0.01ppm的值。

测量低浓度锰的方法是本领域技术人员众所周知的。这样的方法包括原子吸收光谱法、原子发射光谱法、质谱法、中子激活分析法和X射线荧光法(参见例如Williams etal."Toxicological profile for manganese."(2012))。

优选地，根据以下所述的标准程序测量锰浓度：欧洲标准化委员会(EuropeanCommittee for Standardization)出版欧洲标准EN13805:2014中的“Foodstuffs-Determination of trace elements-Pressure digestion”，或国际标准化组织(International Organization for Standardization)出版的ISO 11885:2007中的“Water quality-Determination of selected elements by inductively coupledplasma optical emission spectrometry(ICP-OES)”。

本发明的发明人惊奇地发现，酵母和霉菌均可被锰消耗抑制。在一个优选的实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品，优选食品中酵母生长的方法，包括减少产品中的游离锰的步骤。在另一个优选的实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品，优选食品中霉菌生长的方法，包括减少在产品中的游离锰的步骤。

在一个实施方案中，该方法用于抑制酵母的生长，例如念珠菌属的种(Candidaspp.)、迈耶氏酵母属的种(Meyerozyma spp.)、克鲁维酵母属的种(Kluyveromyces spp.)、毕赤酵母属的种(Pichia spp.)、耐碱酵母属的种(Galactomyces spp.)、丝孢酵母属的种(Trichosporon spp.)、锁掷酵母属的种(Sporidiobolus spp.)、有孢圆酵母属的种、隐球菌属的种(Cryptococcus spp.)、酵母属的种(Saccharomyces spp.)、耶氏酵母属的种(Yarrowia spp.)、德巴利酵母属的种(Debaryomyces spp.)和红酵母属的种。优选，真菌是选自由以下组成的组的酵母：有孢圆酵母属的种、隐球菌属的种、酵母属的种、耶氏酵母属的种、德巴利酵母属的种、念珠菌属的种和红酵母属的种。更优选，真菌是选自由以下组成的组的酵母：德尔布有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、长莓隐球酵母、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、汉逊德巴利酵母和粘质红酵母(Rhodoturola mucilaginosa)。

在一个实施例中，该方法用于抑制霉菌的生长。优选，真菌是选自由曲霉属的种(Aspergillus spp.)、枝孢霉属的种(Cladosporium spp.)、亚隔孢壳属的种(Didymellaspp.)或青霉属的种(Penicillium spp.)组成的组的霉菌。更优选，真菌是选自由短密青霉、皮落青霉、离生青霉、肉色青霉、酒青霉以及罗克福尔青霉组成的组的霉菌。

除锰的方法是本领域已知的。锰是许多矿井水、地下水和淡水中的常见污染物。在废水处理中，可以通过氧化成MnO

作为替代选项，除锰可以涉及生物过程作为化学途径的替代方案。微生物活性在修复锰污染的水中的作用已在各种文献中有所描述，例如Burger et al.Manganeseremoval during bench-scale biofiltration.Water Research.2008；42(19):4733–4742；Johnson et al.Rapid manganese removal from mine waters using an aeratedpacked-bed bioreactor.Journal of Environmental Quality.2005；34(3):987–993；Tekerlekopoulou et al."Removal of ammonium,iron and manganese from potablewater in biofiltration units:a review."Journal of Chemical Technology andBiotechnology 88.5(2013):751-773；Patil et al.“A review of technologies formanganese removal from wastewaters."Journal of Environmental ChemicalEngineering 4.1(2016):468-487。在一个实施方案中，减少产品中游离锰的步骤包括使用离子交换色谱法。如果产品是液体或基本上是液体，这尤其适用。

在一个优选的实施方案中，通过添加锰清除剂来进行减少产物中游离锰的步骤。本文所用的术语“锰清除剂(manganese scavenging agent)”或“锰清除剂(manganesescavenger)”是指能够使锰不可为酵母或霉菌所用的材料。该材料可以是化学材料，例如选自由以下组成的组的化学螯合材料：乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N,N,N′,N′-四乙酸(EGTA)、二氨基环己烷四乙酸(DCTA)、次氮基三乙酸(NTA)、1,2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸(BAPTA)或二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)，优选，化学螯合材料是乙二胺四乙酸(EDTA)。该材料也可以是生物材料，例如细菌。

在一些优选的实施方案中，锰清除剂是一种或多种细菌菌株。在这种情况下，应该注意的是，当测量游离锰时，这种游离锰不包括在细胞内发现的锰。而是，游离锰是指在细胞外，即在产品的无细胞部分中发现的锰，因为它们可被真菌吸收。因此，在这种情况下，应仅考虑细胞外的锰来测量游离锰的浓度。例如，可以通过离心除去细胞(例如起子培养物)并获得无细胞的上清液，然后测量无细胞的上清液中的锰来测量游离锰的浓度。本文所用的术语“细菌菌株”在微生物学领域中具有其通用含义，并且是指细菌的遗传变体。

在一个实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品中真菌生长的方法，包括以下步骤：

选择一种或多种细菌菌株作为锰清除剂，和

-通过添加锰清除剂将产品中的游离锰减少到在产品中低于约0.03ppm的浓度。

根据本发明的优选实施方案，该方法包括选择具有锰吸收活性的细菌菌株作为锰清除剂。选择基于细菌菌株是否具有锰转运系统。

锰参与许多关键的生物过程，并在所有生物中普遍存在。锰还有助于防止氧化应激，还可以有助于活性氧的催化解毒。许多细菌已经发展出精细的采集系统(acquisitionsystem)，以使用螯合金属或游离金属的低和高亲和力转运系统来清除环境中的必需金属。细菌吸收的锰在蛋白质中形成不可透析的聚磷酸化蛋白质聚集体的大复合物，其可能达到非常高的细胞内浓度。

已经研究了锰的转运系统，例如其描述于Kehres et al.,"Emerging themes inmanganese transport,biochemistry and pathogenesis in bacteria."FEMSmicrobiology reviews 27.2-3(2003):263-290.

在一个实施方案中，具有锰吸收活性的细菌菌株包含细菌Mn 2+转运蛋白。Mn2+转运蛋白可以是ABC转运蛋白(例如SitABCD和YfeABCD)，或是质子依赖性Nramp相关转运系统，该系统属于在转运蛋白分类数据库(M.Saier；U of CA,San Diego,Saier MH,ReddyVS,Tamang DG,Vastermark A.(2014))给出的转运蛋白分类系统中称为TC#3.A.1.15和TC#2.A.55的家族。TC系统是转运蛋白的分类系统，类似于酶委员会(EC)的酶分类系统。转运蛋白分类(TC)系统是国际生物化学与分子生物学联合会批准的用于转运蛋白分类的术语系统。TCDB可在

在一个实施方案中，该方法包括选择细菌菌株作为锰清除剂，该细菌菌株包含属于称为TC#3.A.1.15的家族(锰螯合物吸收转运蛋白(manganese chelate uptaketransporter,MZT)家族)的蛋白质。

例如，锰清除剂是包含称为TC#3.A.1.15.2、TC#3.A.1.15.6、TC#3.A.1.15.8、TC#3.A.1.15.14的锰螯合物吸收转运蛋白或其功能变体的细菌菌株。

尽管ABC转运蛋白主要在较高的pH值下具有活性，但质子驱动的转运蛋白在酸性条件下可能更具有活性。这使得它们特别可用作发酵食品中的锰清除剂。因此，在一个实施方案中，选择包含属于称为TC#2.A.55家族(金属离子(Mn

选择一种或多种细菌菌株作为锰清除剂的步骤包括，确定一种或多种细菌菌株是否包含称为TC#2.A.55的锰转运蛋白或其功能变体。

更优选，作为锰清除剂的转运蛋白属于称为TC#2.A.55.2亚家族或称为TC#2.A.55.3亚家族。

例如，锰清除剂是包含称为TC#2.A.55.3.1、TC#2.A.55.3.2、TC#2.A.55.3.2、TC#2.A.55.3.3、TC#2.A.55.3.4、TC#2.A.55.3.5、TC#2.A.55.3.6、TC#2.A.55.3.7、TC#2.A.55.3.8或TC#2.A.55.3.9的金属离子(Mn

最优选，该方法包括选择包含称为TC#2.A.55.2.6的蛋白质或其功能变体的细菌菌株作为锰清除剂。

优选，锰清除剂选自由以下组成的组：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)、嗜酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)和高加索酸奶乳杆菌(Lactobacillus kefiri)。

术语“功能变体”是具有基本相似的生物学活性，即锰吸收活性的蛋白质变体。

如本文所用，“变体”是指蛋白质的与该蛋白质特定核酸或氨基酸序列共享至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的变异形式。

本发明为选择合适的锰清除剂来实施本发明另外提供了锰转运蛋白的多肽序列。

在一个优选的实施方案中，锰清除剂是包含多肽或其功能变体的细菌菌株，所述多肽具有SEQ ID NO:1的序列(MASEDKKSKREHIIHFEDTPSKSLDEVNGSVEVPHNAGFWKTLAAYTGPGILVAVGYMDPGNWITSIAGGASFKYSLLSVILISSLIAMLLQAMAARLGIVTGRDLAQMTRDHTSKAMGGFLWVITELAIMATDIAEIIGSAIALKLLFNMPLIVGIIITTADVLILLLLMRLGFRKIEAVVATLVLVILLVFAYEVILAQPNVPELLKGYLPHADIVTNKSMLYLSLGIVGATVMPHDLFLGSSISQTRKIDRTKHEEVKKAIKFSTIDSNLQLTMAFIVNSLLLILGAALFFGTSSSVGRFVDLFNALSNSQIVGAIASPMLSMLFAVALLASGQSSTITGTLAGQIIMEGFIHLKMPLWAQRLLTRLMSVTPVLIFAIYYHGNEAKIENLLTFSQVFLSIALPFAVIPLVLYTSDKKIMGEFANRAWVKWTAWFISGVLIILNLYLIAQTLGFVK)。

在其他优选的实施方案中，锰清除剂是包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少55％，例如至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的多肽的细菌菌株。

表1显示了编码SEQ ID NO:1的功能变体的示例性序列，以及它们与SEQ ID NO:1的序列同一性。

表1

在一个优选的实施方案中，锰清除剂是包含多肽或其功能变体的细菌菌株，所述多肽具有SEQ ID NO:2的序列(MARPDERLTVQREKRSLDDINRSVQVPSVYESSFFQKFLAYSGPGALVAVGYMDPGNWLTALEGGSRYHYALLSVLLMSILVAMFMQTLAIKLGVVARLDLAQAIAAFIPNWSRICLWLINEAAMMATDMTGVVGTAIALKLLFGLPLMWGMLLTIADVLVVLLFLRFGIRRIELIVLVSILTVGIIFGIEVARADPSIGGIAGGFVPHTDILTNHGMLLLSLGIMGATIMPHNIYLHSSLAQSRKYDEHIPAQVTEALRFGKWDSNVHLVAAFLINALLLILGAALFYGVGGHVTAFQGAYNGLKNPMIVGGLASPLMSTLFAFALLITGLISSIASTLAGQIVMEGYLNIRMPLWERRLLTRLVTLIPIMVIGFMIGFSEHNFEQVIVYAQVSLSIALPFTLFPLVALTNRRDLMGIHVNSQLVRWVGYFLTGVITVLNIQLAISVFV)。

在其他优选的实施方案中，锰清除剂是包含与SEQ ID NO:2的序列具有至少55％，例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的多肽的细菌菌株。

表2显示了编码SEQ ID NO:2的功能变体的示例性序列，以及它们与SEQ ID NO:2的序列同一性。

表2

在一个优选的实施方案中，锰清除剂是包含多肽或其功能变体的细菌菌株，所述多肽具有SEQ ID NO:3的序列(MSDDHKKRHPIKLIQYANGPSLEEINGTVEVPHGKGFWRTLFAYSGPGALVAVGYMDPGNWSTSITGGQNFQYLLISVILMSSLIAMLLQYMAAKLGIVSQMDLAQAIRARTSKKLGIVLWILTELAIMATDIAEVIGAAIALYLLFHIPLVIAVLVTVLDVLVLLLLTKIGFRKIEAIVVALILVILLVFVYQVALSDPNMGALLKGFIPTGETFASSPSINGMSPIQGALGIIGATVMPHNLYLHSAISQTRKIDYKNPDDVAQAVKFSAWDSNIQLSFAFVVNCLLLVMGVAVFKSGAVKDPSFFGLFQALSDSSTLSNGVLIAVAKSGILSILFAVALLASGQNSTITGTLTGQVIMEGFVHMKMPLWARRLVTRIISVIPVIVCVMLTARDTPIQQHEALNTLMNNSQVFLAFALPFSMLPLLMFTNSKVEMGDRFKNTGWVKVLGWISVLGLTGLNLKGLPDSIAGFFGDHPTATQTNMANIIAIVLIVAILALLAWTIWDLYKGNQRYEAHLAAVADEKEAKADVDEQ)。

在其他优选的实施方案中，锰清除剂是包含与SEQ ID NO:3的序列具有至少55％，例如至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的多肽的细菌菌株。

表3显示了编码SEQ ID NO:3的功能变体的示例性序列，以及它们与SEQ ID NO:3的序列同一性。

表3

出于本发明的目的，使用在EMBOSS软件包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite(欧洲分子生物学开放软件套件),Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277)的Needle程序(优选版本3.0.0或以后版本)中执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)，确定两条氨基酸序列之间的“序列同一性”程度。使用的可选参数是缺口开放罚分为10，空位延伸罚分为0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。标有“最长同一性”的Needle的输出(使用nobrief选项获得)用作同一性百分比，并按如下计算：

(相同残基x100)/(比对的长度-比对中缺口的总数)

出于本发明的目的，使用在EMBOSS软件包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite,Rice et al.,2000,同上)的Needle程序(优选版本3.0.0或以后版本)中实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman and Wunsch,1970,同上)，确定两条脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性程度。使用的可选参数是缺口开放罚分为10，空位延伸罚分为0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)替代矩阵。标有“最同一性”的Needle的输出(使用-nobrief选项获得)用作同一性百分比，并按如下计算：

(相同的脱氧核糖核苷酸x100)/(比对长度-比对中缺口的总数).

在一个实施方案中，选择步骤包括确定细菌菌株是否包含与SEQ ID NO:1-3中任一个的序列具有至少55％，例如至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的锰转运蛋白。该确定可以基于对细菌菌株进行测序或在已知序列数据库中进行BLAST搜索。

本发明的实施例部分所用的锰清除剂具有编码的SEQ ID NO:1-3或其功能变体的锰转运蛋白。

在其他实施方案中，本发明提供了抑制或延迟产品中真菌生长的方法，包括以下步骤：

-选择一种或多种细菌菌株作为锰清除剂，和

-通过添加所述锰清除剂，将产品中的游离锰减少到在产品中的浓度低于约0.01ppm，

其中选择步骤包括测量一种或多种细菌菌株的锰吸收活性。

锰吸收活性可以使用本领域已知的常规方法来测量，参见例如Kehres et al."The NRAMP proteins of Salmonella typhimurium and Escherichia coli areselective manganese transporters involved in the response to reactiveoxygen."Molecular microbiology 36.5(2000):1085-1100。

对于诸如发酵乳制品等发酵食品，锰清除剂优选为乳杆菌。乳杆菌中存在不同的锰转运蛋白家族，并且经常也存在这些锰转运蛋白家族的多种同源物。在图11中，发明人提供的系统发育树概述了乳杆菌属物种中的锰转运蛋白MntH家族的系统发育。如所示，在乳杆菌属的物种中可以发现锰转运蛋白。除了乳杆菌属的种之外，也可以在其他细菌中发现MntH转运蛋白家族。该树是使用mafft v.7通过比对乳杆菌MntH蛋白序列而构建的，而系统发育则是通过邻接聚类(neighbor-joining clustering)推断的。

在优选的实施方案中，锰清除剂是选自由鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、发酵乳杆菌、清酒乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、高加索酸奶乳杆菌、消化乳杆菌和嗜酸片球菌组成的组的细菌菌株。

另一方面，这种转运蛋白似乎在瑞士乳杆菌(L.helveticus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、加氏乳杆菌(L.gasseri)和德氏乳杆菌保加利亚亚种(L.delbrueckiisubsp.bulgaricus)中不存在，使得它们不太适合去除游离锰。

根据本发明的优选实施方案，该方法包括选择确定一种或多种细菌菌株不含超氧化物歧化酶，优选不含锰超氧化物歧化酶的步骤。

已经研究了超氧化物歧化酶，例如锰超氧化物歧化酶，并且其尤其描述于例如Kehres et al.,"Emerging themes in manganese transport,biochemistry andpathogenesis in bacteria."FEMS microbiology reviews 27.2-3(2003):263-290，Culotta V.C“Superoxide dismutase,oxidative stress,and cell metabolism”Curr.Top.Cell Regul.36,117–132(2000)，或Whittaker J.W“Manganese superoxidedismutase”Met.Ions Biol.Syst.37,587–611(2000)中。

在本发明的上下文中，术语“不含”是指一种或多种细菌菌株的基因组不呈现编码超氧化物歧化酶的基因，或即使一种或多种细菌菌株的基因组呈现编码超氧化物歧化酶的基因，但是该基因不被该一种或多种细菌菌株表达。

在一些实施方案中，产品是食品、化妆品、保健产品或药物产品。“食物”和“食品”具有这些术语的共同含义。“食品”是指适合人类或动物消费的任何食品或饲料产品。食品可以是新鲜食品或易腐烂食品，以及储存或加工的食品。食品包括但不限于水果和蔬菜，包括衍生产品，谷物和谷物衍生产品，乳制品、肉、禽肉和海鲜。更优选，食品是肉制品或乳制品，例如酸奶、特沃劳格奶酪(tvarog)、酸奶油、干酪等。

然而，应当注意，在本发明的上下文中，本发明中的术语“产品”和“食品”就其本身而言确实涉及水。尽管锰对人体营养至关重要，但根据美国环境保护署(United StatesEnvironmental Protection Agency,EPA)，普遍认为在水中，锰对人体不健康。因此，有时为了净化和健康目的而处理饮用水或废水以除去过量的锰，这与本发明的精神无关。

本发明特别适用于具有中等至高水活度的食品。水活度(a

容易发生真菌腐败的主要食品种类是具有中等至高水活度的乳制品，例如酸奶、奶油、黄油、干酪等。然而，还可以预见，本发明适用于具有较低水活度的食品，例如加工的肉、谷物、坚果、香料、奶粉、肉干和发酵肉。

在优选的实施方案中，可以应用本发明公开的方法的产品的水活度(a

在一些实施方案中，产品是水活度(a

测量水活度的方法在本领域中是已知的，例如，描述于Fontana Jr,Anthony J."Measurement of water activity,moisture sorption isotherms,and moisturecontent of foods."Water activity in foods:Fundamentals and applications(2007):155-173中。

在一个实施方案中，进行本文所述的步骤，以抑制或延迟发酵食品中真菌的生长。发酵食品是通过微生物作用生产或保存的食物。发酵是指通过微生物的作用将碳水化合物转化为醇或酸。发酵通常是指使用酵母将糖发酵为酒精。但是，它也可能涉及将乳糖转化为乳酸。例如，发酵可用于制造食物，例如酸奶、干酪、香肠(salami)、酸菜(sauerkraut)、朝鲜泡菜、泡菜等。

在一个实施方案中，食品是乳酸发酵的产品，即通过乳酸菌(LAB)发酵制备的产品。“乳酸菌”表示革兰氏阳性、微需氧菌或厌氧菌，其发酵糖以产生酸，包括乳酸作为主要产生的酸。食品的pH通常为约3.5至约6.5，例如约4至约6，例如约4.5至约5.5，例如约5。

本发明在抑制或延迟乳制品中真菌的生长中特别有用。在此类制品中，酵母和霉菌的污染很普遍，并限制了此类制品的保质期。除乳外，“乳制品”还包括来源于乳的产品，例如奶油、冰淇淋、黄油、干酪和酸奶，以及乳清和酪蛋白等副产品，和任何含有乳或乳成分作为主要成分的预制食品，例如配方乳。在一个优选的实施方案中，乳制品是发酵乳制品。术语“乳”应理解为通过对诸如牛、绵羊、山羊、水牛或骆驼等任何哺乳动物挤奶而获得的乳分泌物。在优选的实施方案中，乳是牛乳，该术语还包括由植物材料制备的蛋白质/脂肪溶液，例如豆浆。

乳中锰的含量各不相同，这取决于生产乳的动物、饲料以及季节。通常，乳制品中存在的锰的浓度为至少0.03ppm，例如对于脱脂乳，为至少0.08ppm，对于全脂乳，为至少0.1ppm。根据本发明人的发现，减少这种产品或由其制备的产品中的锰量将使它们更耐腐败。

在一个实施方案中，食品是通过用嗜热生物发酵制备的产品，即嗜热发酵食品。术语“嗜热生物”是指在高于43℃的温度下成长得最好的微生物。工业上最有用的嗜热细菌包括链球菌属(Streptococcus)的种和乳杆菌属(Lactobacillus)的种。术语“嗜热发酵”在本文中是指在高于约35℃的温度下的发酵，例如在约35℃至约45℃。“嗜热发酵食品”是指通过嗜热起子培养物的嗜热发酵制备的发酵食品。这类食品包括例如酸奶、脱脂酸牛奶(skyr)、浓缩酸奶(labneh)、印度酸奶(lassi)、咸酸奶(ayran)以及薄荷咸酸奶(doogh)。

在一个实施方案中，食品是通过用嗜温生物发酵制备的产品，即嗜温发酵食品。术语“嗜温生物”是指在中等温度(15℃-40℃)下成长得最好的微生物。工业上最有用的嗜温菌包括乳球菌属的种(Lactococcus spp.)和明串珠菌属的种(Leuconostoc spp.)。本文中的术语“嗜温发酵”是指在约22℃至约35℃之间的温度下的发酵。“嗜温发酵食品”是指通过嗜温起子培养物的嗜温发酵制备的发酵食品。这类食品包括例如酪乳、酸乳、发酵乳、斯美塔那奶酪(smetana)、酸奶油和新鲜干酪，例如夸克奶酪(quark)、特沃劳格奶酪(tvarog)和奶油干酪。

本文公开的方法对于抑制或延迟发酵乳制品，例如嗜热和嗜温发酵乳制品例如酸奶产品中的酵母和/或霉菌生长特别有用。术语“发酵乳制品”是通常根据相关官方规定的术语，并且标准在本领域中是众所周知的。例如，使用嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)和德氏乳杆菌保加利亚亚种的共生培养物作为酸奶的起子培养物，而嗜酸乳杆菌则用于制备嗜酸乳。使用其他嗜温乳酸菌生产夸克奶酪或清爽干酪(fromagefrais)。

表述“发酵乳制品”是指食品或饲料产品，其中食品或饲料产品的制备涉及用乳酸菌发酵乳基质。如本文所用，“发酵乳制品”包括但不限于诸如嗜热发酵乳制品(例如酸奶)和嗜温发酵乳制品(例如酸奶油和酪乳，以及发酵乳清、夸克奶酪和清爽干酪)等产品。发酵乳制品还包括干酪，例如欧式干酪(continental type cheese)、新鲜干酪、软干酪、切达干酪、马斯卡彭奶酪(mascarpone)、帕斯特干酪(pasta filata)、马苏里拉干酪、莫扎来拉干酪(provolone)、白卤干酪(white brine cheese)、披萨干酪(pizza cheese)、菲达奶酪(feta)、布里干酪、卡门培尔干酪(camembert)、农家干酪、红波奶(Edam)、豪达干酪、太尔西特干酪(Tilsiter)、哈瓦蒂干酪(Havarti)或埃曼塔尔干酪(Emmental)、瑞士干酪(Swisscheese)以及玛斯登干酪(Maasdamer)。

术语“酸奶”具有其通常的含义，并且通常根据相关官方规定来定义，并且标准在本领域中是众所周知的。用于制备酸奶的起子培养物包含至少一种德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株和至少一种嗜热链球菌菌株。有趣的是，锰转运蛋白在德氏乳杆菌保加利亚亚种中不存在，并且仅在嗜热链球菌中表现出低表达，这两种菌株出现在酸奶的起子培养物中，使它们特别容易受到真菌腐败的影响。因此，为了清除酸奶中存在的游离锰，优选包括其他细菌菌株。

优选，将发酵制品中的游离锰减少到低于约0.005ppm的浓度。

在食品加工过程中,传统上使用化学防腐剂来避免真菌腐败。然而，鉴于社会对较少加工和不含防腐剂食品的强烈需求，本发明通过使用生物锰清除剂降低锰浓度来提供控制酵母和霉菌生长的有效解决方案。

当使用生物清除剂时，考虑本发明提供的实施例以及食品的性质，例如水活度、养分、天然存在的锰的含量、保质期、储存条件、包装等，本领域技术人员能够调节各种参数，例如pH、温度以及实现期望的结果的锰清除剂或细菌的量。

优选包装游离锰浓度降低的产品，以进一步限制与酵母和霉菌接触。还优选将产品存储在低温(低于15℃)下，以帮助延长保质期。

对于发酵食品，可以在发酵之前、发酵开始时或发酵过程中添加除锰细菌。取决于所选的参数，将锰含量降低至优选水平的步骤可能花费数小时，例如至少5小时，例如至少10小时，例如至少15小时，例如至少20小时，例如至少1天、2天、3天或更长时间。本领域技术人员将能够根据需要抑制或延迟真菌的产品来选择合适的参数。

本发明提供了制备发酵食品的方法，包括将发酵剂和锰清除剂添加到食物基质(food substrate)中，将基质发酵一段时间，直到达到目标pH。锰清除剂优选是乳酸菌菌株。

本文所用的术语“食物基质”基质是指要进行发酵的基质。

为了生产发酵乳制品，食物基质是乳基质。在本发明中广泛使用“乳基质”来表示可用作供起子培养物生长和发酵的培养基的、基于乳或乳成分的组合物。“乳”通常是指通过对诸如牛、绵羊、山羊、水牛或骆驼等任何哺乳动物挤奶而获得的乳分泌物。乳基质可以由任何未加工和/或加工的乳材料以及由复原乳粉(reconstituted milk powder)获得。乳基质也可以是植物基的，即由植物材料例如豆浆制备。优选由来自牛的乳或乳成分制备的乳基质。

乳基质包括包括但不限于任何乳或包含蛋白质的乳样产品的溶液/悬浮液，例如全脂乳或低脂乳、脱脂乳、酪乳、复原乳粉、炼乳、干奶粉(dried milk)。

根据消费者的需求，还可以减少乳基的乳糖。可以根据本领域已知的任何方法，包括通过乳糖酶将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，或者通过纳滤、电渗析、离子交换色谱和离心，生产乳糖减少的乳。

为了发酵乳基质，添加起子培养物。在本文中所用的术语“起子”或“起子培养物”是指负责乳基质酸化的一种或多种食品级微生物的培养物，特别是乳酸菌的培养物。

可以在发酵前、发酵开始时或发酵期间，与起子培养物同时或在不同时间添加锰清除剂。

在添加起子培养物和锰清除剂并使乳基质经历合适的条件后，开始发酵过程，并持续一段时间。本领域普通技术人员知道如何选择合适的工艺条件，例如温度、氧气、碳水化合物的添加、微生物的数量和特征以及所花费的加工时间。此过程可能需要三个小时、四个小时、五个小时、六个小时或更长时间。

这些条件包括设定适合于具体起子培养物菌株的温度。例如，当起子培养物包含嗜温乳酸菌时，可以将温度设定为约30℃，并且如果培养物包含嗜热乳酸菌菌株，则将温度保持在约35℃至50℃的范围内，例如40℃至45℃。发酵温度的设定还取决于添加到发酵中的酶，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。在本发明的具体实施方案中，发酵温度为35℃至45℃，优选37℃至43℃，并且更优选40℃至43℃。在另一个实施方案中，发酵温度为15℃至35℃，优选20℃至35℃，并且更优选30℃至35℃。

可以使用本领域已知的任何方法终止发酵。通常，取决于工艺的各种参数，可以通过使乳基质不适合起子培养物的菌株生长来终止发酵。例如，当达到目标pH时，可以通过快速冷却发酵乳制品来终止发酵。已知在发酵过程中发生酸化，这导致形成由酪蛋白簇和链组成的三维网络。术语“目标pH”是指发酵步骤结束时的pH。目标pH取决于要获得的发酵乳制品，并且可以由本领域普通技术人员容易地确定。

在本发明的具体实施方案中，进行发酵直到达到至少5.2的pH，例如直到达到5.1、5.0、4.9、4.8、4.7、4.6、4.5、4.4、4.3、4.2、4.1、4.0、3.9、3.8或3.7的pH。优选，进行发酵，直至达到4.0-5.0，更优选4.0-4.6的目标pH。在优选的实施方案中，进行发酵，直到达到低于4.6的目标pH。

在优选的实施方案中，发酵食品选自由夸克奶酪、奶油干酪、清爽干酪、希腊酸奶(greek yogurt)、脱脂酸牛奶、浓缩酸奶、酪乳、酸奶油、酸乳、发酵乳、开菲尔(kefir)、印度酸奶、咸酸奶、特沃劳格奶酪(twarog)、薄荷咸酸奶、斯美塔那奶酪、养乐多(yakult)以及达希酸奶(dahi)组成的组。

在另一个优选的实施方案中，发酵食品是奶酪，包括欧式干酪、新鲜干酪、软干酪、切达干酪、马斯卡彭奶酪、帕斯特干酪、马苏里拉干酪、莫扎来拉干酪、白卤干酪、披萨干酪、菲达奶酪、布里干酪、卡门培尔干酪、农家干酪、红波奶酪、豪达干酪、太尔西特干酪、哈瓦蒂干酪或埃曼塔尔干酪、瑞士干酪以及玛斯登干酪。

在另一个实施方案中，该方法还包括包装食品以减少与酵母和霉菌接触。

本发明包括通过本文所述的方法获得的食品。

通过本发明获得的产品优选是发酵乳制品，其在储存至少两天，例如至少3天，至少4天，更优选至少5天，至少6天，至少7天，至少8天，至少9天，至少10天，至少11天，至少12天，至少13天和至少14天后，游离锰的浓度降低至小于0.01ppm。

通过结合附图阅读以下描述，本发明的其他特征和优点会变得显而易见。除非另有定义，否则本文所用的所有术语与本领域普通技术人员的通常理解具有相同含义。除非本文另有说明，或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(特别是在所附权利要求的上下文中)术语“一(a)”、“一(an)”、“该/所述(the)”以及类似指示物的使用，应解释为涵盖单数和复数。除非另有说明，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应解释为开放式术语(即，意思是“包括但不限于”)。除非本文另外指出，否则本文对数值范围的列举仅旨在用作分别表示落入该范围内的每个单独值的简写方法，并且将每个单独值并入说明书中，如同其在本文中被单独列举一样。除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法都可以以任何合适的顺序实施。除非另有说明，否则本文所提供的所有精确值都代表相应的近似值(例如，针对特定因子或测量值提供的所有精确的示例性值也可以视为还提供了相应的近似测量值，在适当情况下用“约”修饰)。除非另外要求，否则本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明，并非限制本发明的范围。说明书中的任何语言都不应解释为表明任何未要求保护的要素对于实施本发明必不可少。

实施例

本文描述和要求保护的发明的范围不受本文公开的具体方面的限制，因为这些方面旨在阐明本发明的几个方面。任何等同方面都意图在本发明的范围内。实际上，除了本文中示出和描述的那些之外，根据前面的描述和以下实施例，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这样的修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在发生冲突的情况下，以包括定义在的本公开为准。

本实施例证明了在基本培养基中汉逊德巴利酵母对锰的需求。使用了分别从腐败的酸奶(菌株1)和夸克奶酪(菌株2)分离的两株汉逊德巴利酵母。使菌株在具有不同锰浓度的化学成分确定的培养基中生长。

基本培养基含有生物素2μg/L、泛酸钙400μg/L、叶酸2μg/L、肌醇2μg/L、烟酸400μg/L、对氨基苯甲酸200μg/L、吡哆醇400μg/L、核黄素200μg/L、硫胺素400μg/L、硼酸500μg/L、硫酸铜40μg/L、碘化钾100μg/L、氯化铁200μg/L、钼酸钠200μg/L、硫酸锌400μg/L、磷酸二氢钾0.5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化钠0.1g/L、氯化钙0.2g/L、葡萄糖20g/L、硫酸铵5g/L。

所用的锰浓度：6ppm、0.6ppm、0.06ppm、0.006ppm、0.0006ppm、0.00006ppm、0.000006ppm。

测试了两种不同的pH：pH 6.5和4.5。

将菌株接种到96孔板内的150μl不同培养基中。将平板在17℃下孵育几天，酵母菌株生长后，在读板仪中测量600nm处的吸光度。

图1(菌株1)和图2(菌株2)显示了不同pH和不同锰浓度对两种不同的汉逊德巴利酵母菌株生长的影响。可以看出，在低于约0.01ppm的锰浓度下，汉逊德巴利酵母的生长受到抑制。两种不同的pH值之间没有差异，表明该机制在此pH范围内有效。

本实施例证明了发酵乳制品中汉逊德巴利酵母对锰的需求。

制备具有起子培养物(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种)或另外具有锰清除剂(鼠李糖乳杆菌和副干酪乳杆菌)的发酵乳制品。将发酵乳制品离心(5000rpm下10分钟),并将上清液无菌过滤。将上清液转移至无菌的96孔板(每孔150μl)中,并将锰添加到第一孔中，至最终浓度为6ppm，然后进行10倍连续稀释，以得到从6ppm到0.000006ppm的不同锰浓度。约20个细胞/孔接种汉逊德巴利酵母，并将平板在17℃下孵育几天，酵母菌株生长,然后在第7天在读板仪中测量600nm处的吸光度。

图3和4显示了汉逊德巴利酵母的生长(分别为菌株1和菌株2)。将锰添加到水相中后，菌株1的酵母生长如图3所示，而菌株2的酵母生长如图4所示(空心圆)。显示了技术重复的平均值和标准偏差n＝6(A)和n＝3(B)。作为比较，还显示了参照酸奶水相的酵母生长，其中既未添加锰清除剂也未添加其他锰(正方形)。注意，该参照的固有锰浓度为0.03ppm。对于空心圆，x轴表示所添加的锰浓度，对于正方形(参照酸奶水相)，x轴表示水相固有的锰。

该结果表明，酵母菌株在食物基质中的生长取决于锰。锰的添加导致与参照相似的生长，从而证明低锰浓度是发酵乳制品中酵母生长的主要限制因素。

本实施例证明了各种细菌的锰清除活性以及它们对德巴利酵母和红酵母的抑制作用。评估了在具有低锰浓度和高锰浓度的发酵乳制品中的抑制作用。

表4列出了所添加的细菌以及它们是否包含锰转运蛋白。

表4

使所列细菌在MRS培养基中生长过夜。

制备：给2ml含有起子培养物(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种)的乳接种10μl过夜培养物。将乳在43℃发酵约6小时，直到达到pH 4.5。将发酵乳储存在冰箱中，供进一步使用。将150μl发酵乳一式两份转移至96孔板的各个孔中。向一半的样品中添加锰，使锰增加6ppm，并在所有孔中接种约20个细胞的汉逊德巴利酵母或粘质红酵母。4天后，将一排稀释液点样在选择性YGC平板上，以分析酵母的生长。通过光学检查测量酵母的生长，而对于无生长给出0，对于完全生长给出5。表5显示了德巴利酵母的两个生物学独立实验的平均值，而表6则显示了红酵母的两个生物学独立实验的平均值。

表5对德巴利酵母属的抑制

表6对红酵母的抑制

结果表明，清除锰的菌株可用于抑制汉逊德巴利酵母和粘质红酵母，但在添加锰后抑制作用减弱。

本实施例评估了在有和没有锰清除剂的情况下用起子培养物制备的发酵乳的水相中酵母生长的差异。

表7列出了所用的锰清除剂：

表7

本实施例显示了在两种不同锰浓度下的酵母生长。评估了对具有低锰浓度和高锰浓度的发酵乳制品中6种不同酵母的抑制作用。

将降脂(1.5％w/v)均质乳在90±1℃下热处理20分钟，然后立即冷却。在3L桶中以0.02％(v/w)接种商业起子培养物(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种)。一个桶接种总浓度为100U/T的锰清除剂，一个桶用作参照，并且仅接种起子培养物。将所有桶在43±1℃的水浴中孵育并在这些条件下发酵，直至达到4.60±0.1的pH。将发酵乳制品分到200mL瓶中并冷却。

然后将发酵乳制品离心(5000rpm下10分钟)，并将上清液无菌过滤。将上清液转移至无菌的96孔板(每孔150μl)中，并向一半的孔中添加锰，以使锰增加6ppm。选择六种不同的酵母，每孔接种约20个细胞，并在17℃下生长7天。仅用起子培养物发酵的乳(参照)用作对照。通过测量在600nm处的吸光度来确定生长。

表8-13显示了至少5次重复的平均值和标准偏差。

表8对汉逊德巴利酵母(菌株1)的抑制：

表9对汉逊德巴利酵母(菌株2)的抑制

表10对酿酒酵母的抑制

表11对粘质红酵母的抑制

表12对长莓隐球酵母的抑制

表13对德尔布有孢圆酵母的抑制

结果表明，清除锰的细菌能够抑制德巴利酵母属、酵母属、红酵母属、隐球菌属和有孢圆酵母属的菌株，添加锰后降低了抑制作用。

本实施例评估了，测试了不同锰浓度对在具有或不具有锰清除剂的情况下用起子培养物制备的发酵乳的影响。

表14列出了所用的锰清除剂：

表14

如实施例4制备发酵乳制品。

将150μl发酵乳一式两份或一式三份转移至96孔板的各个孔中。进行连续稀释以导致添加的不同锰浓度达到6ppm至0.000006ppm。给所有孔接种约20个细胞的汉逊德巴利酵母(菌株2)，并将平板在17℃下孵育5天。之后，将10μl在盐水蛋白胨中制备的1000倍稀释液点样在选择性YGC平板上，以分析酵母的生长。

图5显示了在添加了不同的锰浓度：6ppm(顶行)、0.6ppm(第2行)、0.06ppm(第3行)、0.006ppm(第4行)、0.0006ppm(第5行)、0.00006ppm(第6行)、0.000006ppm(第7行)和0ppm(底端行)后，在具有清除剂(1、2号和3号)和没有清除剂(REF(参照))的情况下制备的发酵乳中汉逊德巴利酵母的生长。

如图所示，添加0.6ppm后，具有1号和2号清除剂的发酵乳中酵母的生长受到抑制(比较第3行和第2行)；在存在3号清除剂的情况下，添加0.006ppm确实会导致某些酵母菌生长。

评估了锰对不同霉菌抑制作用的影响。使用类似于发酵乳制品的制造方法和生产的琼脂测定法。鼠李糖乳杆菌和副干酪乳杆菌一起用作锰清除剂。

发酵乳样品的制备：

将降脂(1.5％w/v)均质乳在90±1℃下热处理20分钟，然后立即冷却。在3L桶中以0.02％(v/w)接种商业起子培养物(嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种)。一个桶接种总浓度为100U/T的锰清除剂，一个桶用作参照，并且仅接种起子培养物。将所有桶在43±1℃的水浴中孵育，并在这些条件下发酵，直至达到4.60±0.1的pH。将发酵乳制品分到200mL瓶中，并冷却。先前已确定参照产品中已经存在的锰浓度为约0.03ppm，而具有清除菌株的产品中锰浓度低于0.003ppm的检测极限。

添加锰：

在具有和不具有锰清除剂的情况下，向发酵乳制品中添加不同浓度的锰，以增加锰含量(参照产品中0、0.006和6ppm的锰，和0、0.000006、0.00006、0.0006、0.006、0.06、0.6和6ppm锰)。

将所有发酵乳样品加热至40℃的温度，并加入40ml已融化并冷却至60℃的5％无菌琼脂溶液。然后将发酵乳和琼脂的这种溶液倒入无菌皮氏培养皿中，并将平板在LAF工作台中干燥30分钟。

使用酵母的攻击测试：

以10

结果：

酵母琼脂测定的结果显示在图6中，图6显示了3种不同酵母在由用单独的起子培养物(参照，顶行)或与锰清除剂一起(底端行)发酵的乳制备的平板上的生长。如图片上方所示，添加了不同的锰浓度。以三种不同的浓度：1x10

从图6可以看出，测试的酵母在由仅用起子培养物发酵的乳(参照)制备的琼脂平板上生长良好。但是，当乳发酵过程中存在锰清除剂时，所有酵母的生长晕都被延迟。

锰含量高达0.0006ppm时，清除剂对所有三种酵母均保持了较高的抑制活性。当锰含量为0.006ppm至0.6ppm时，清除剂对长莓隐球酵母的抑制活性降低。锰浓度为6ppm似乎抑制了长莓隐球酵母的生长。锰清除剂在锰含量高达0.006ppm时抑制汉逊德巴利酵母(菌株1)。在锰含量为0.06ppm或更高时，锰清除剂失去了对汉逊德巴利酵母(菌株1)的抑制活性。锰清除剂在锰含量高达0.6ppm时抑制汉逊德巴利酵母(菌株2)，而在锰含量为6ppm时，活性会丧失。

如实施例6所述制备具有不同含量的锰的发酵乳制品样品。

使用霉菌的攻击测试：

图7显示了三种不同霉菌在由用单独的起子培养物(参照，顶行)或另外用锰清除剂(底端行)发酵的乳制备的平板上的生长。如图片上方所示，进一步添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加了三种靶标污染物(A：短密青霉，B：皮落青霉和C：离生青霉)。将平板在7±1℃下孵育25天。

图8显示了三种不同霉菌在由用单独的起子培养物(参照，顶行)或另外用锰清除剂(底端行)发酵的乳制备的平板上的生长。如图片上方所示，进一步添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加了三种靶标污染物(A：短密青霉，B：皮落青霉和C：离生青霉)。将平板在22±1℃下孵育8天。

图9显示了三种不同霉菌在由用单独的起子培养物(参照，顶行)或者另外用锰清除剂(底端行)发酵的乳制备的平板上的生长。如图片上方所示，进一步添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加三种靶标污染物(A：肉色青霉，B：酒青霉和C：罗克福尔青霉)。将平板在7±1℃下孵育25天。

图10显示了三种不同霉菌在由用单独的起子培养物(参照，顶行)，或者另外用锰清除剂(底端行)发酵的乳制备的平板上的生长。如图片上方所示，进一步添加了不同的锰浓度。以500个孢子/斑点的浓度，添加三种靶标污染物(A：肉色青霉，B：酒青霉和C：罗克福尔青霉)。将板在22±1℃下孵育8天。

所有测试的霉菌在仅用起子培养物发酵的乳制成的琼脂平板上生长良好(参照)。但是，当乳发酵过程中存在锰清除剂时，所有测试的霉菌的生长晕都会被延迟。在较低温度下抑制作用更强(图7和9)。

锰清除剂在高达0.006ppm的另外锰含量下保持了对所有霉菌的高抑制活性。在锰含量为0.06ppm和以上时，锰清除剂的抑制活性降低。在6ppm时，锰清除剂失去了对敏感物的大部分抑制活性(图7和8)，并且0.06ppm时丧失了对稳健霉菌的大部分抑制活性(图9和10)。

与在水相中发现的浓度相比，减弱该测定法中发现的抑制作用的所添加的锰浓度较高，这是因为发酵乳制品中活的代谢活性锰清除剂的持续吸收所致。

在实施例8中，使用两种浓度的锰：6ppm和0.6ppm。已经证明，6ppm的浓度对酵母生长具有抑制/毒性作用，而0.6ppm用作足以废除由一种或多种作为锰清除剂的细菌菌株引起的锰缺乏的标准浓度。

图12和13显示了，化学螯合材料，例如EDTA，对水相中的汉逊德巴酵母的生长具有抑制作用。

图12显示了当面对浓度为0.05mg/ml的EDTA时，汉逊德巴利酵母细胞停止生长。因此，EDTA在浓度为0.05mg/ml时表现出抑制作用。

图13显示了浓度为0.05mg/ml EDTA且在不存在锰(0.6ppm)的情况下，汉逊德巴利酵母停止生长。因此，在这些条件下，EDTA对汉逊德巴酵母具有抑制作用。添加0.6ppm的锰和0.05mg/ml的EDTA恢复了汉逊德巴利酵母的生长，而过量的锰则消除了EDTA的作用。

在酸奶中，可以通过向酸奶中添加高达0.89mg/ml的锰清除剂EDTA，来再现选自一种或多种细菌菌株(清除剂1)的锰清除剂的抑制。在所述浓度下，参照酸奶表现出的抑制与添加锰清除剂1时观察到的抑制相似。图14底端行的阴性对照(未添加EDTA)在存在锰清除剂1的情况下表现出正常的抑制，并在添加了锰的情况下恢复了酵母的生长。

实施例9表明化学螯合材料，例如EDTA，具有与选自本文公开的一种或多种细菌的锰清除剂相同的作用(图14)。因此，实施例9证明，EDTA具有与本文公开的作为锰清除剂的一种或多种细菌菌株相同的作用。

当存在于给定产品，例如食品中时，锰清除剂，化学螯合材料和/或生物材料，例如一种或多种细菌菌株，会导致针对腐败真菌的锰消耗，从而抑制真菌生长。

序列表

<110> 科·汉森有限公司

<120> 通过锰消耗抑制真菌生长

<130> P6438

<150> EP18168109.9

<151> 2018-04-19

<160> 25

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 458

<212> PRT

<213> 乳杆菌属(Lactobacillus)

<400> 1

Met Ala Ser Glu Asp Lys Lys Ser Lys Arg Glu His Ile Ile His Phe

1 5 10 15

Glu Asp Thr Pro Ser Lys Ser Leu Asp Glu Val Asn Gly Ser Val Glu

20 25 30

Val Pro His Asn Ala Gly Phe Trp Lys Thr Leu Ala Ala Tyr Thr Gly

35 40 45

Pro Gly Ile Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ile

50 55 60

Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ala Ser Phe Lys Tyr Ser Leu Leu Ser Val

65 70 75 80

Ile Leu Ile Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Ala Met Ala Ala

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Arg Leu Gly Ile Val Thr Gly Arg Asp Leu Ala Gln Met Thr Arg Asp

100 105 110

His Thr Ser Lys Ala Met Gly Gly Phe Leu Trp Val Ile Thr Glu Leu

115 120 125

Ala Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Ile Ile Gly Ser Ala Ile Ala

130 135 140

Leu Lys Leu Leu Phe Asn Met Pro Leu Ile Val Gly Ile Ile Ile Thr

145 150 155 160

Thr Ala Asp Val Leu Ile Leu Leu Leu Leu Met Arg Leu Gly Phe Arg

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Lys Ile Glu Ala Val Val Ala Thr Leu Val Leu Val Ile Leu Leu Val

180 185 190

Phe Ala Tyr Glu Val Ile Leu Ala Gln Pro Asn Val Pro Glu Leu Leu

195 200 205

Lys Gly Tyr Leu Pro His Ala Asp Ile Val Thr Asn Lys Ser Met Leu

210 215 220

Tyr Leu Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Val Met Pro His Asp Leu

225 230 235 240

Phe Leu Gly Ser Ser Ile Ser Gln Thr Arg Lys Ile Asp Arg Thr Lys

245 250 255

His Glu Glu Val Lys Lys Ala Ile Lys Phe Ser Thr Ile Asp Ser Asn

260 265 270

Leu Gln Leu Thr Met Ala Phe Ile Val Asn Ser Leu Leu Leu Ile Leu

275 280 285

Gly Ala Ala Leu Phe Phe Gly Thr Ser Ser Ser Val Gly Arg Phe Val

290 295 300

Asp Leu Phe Asn Ala Leu Ser Asn Ser Gln Ile Val Gly Ala Ile Ala

305 310 315 320

Ser Pro Met Leu Ser Met Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly

325 330 335

Gln Ser Ser Thr Ile Thr Gly Thr Leu Ala Gly Gln Ile Ile Met Glu

340 345 350

Gly Phe Ile His Leu Lys Met Pro Leu Trp Ala Gln Arg Leu Leu Thr

355 360 365

Arg Leu Met Ser Val Thr Pro Val Leu Ile Phe Ala Ile Tyr Tyr His

370 375 380

Gly Asn Glu Ala Lys Ile Glu Asn Leu Leu Thr Phe Ser Gln Val Phe

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Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Ala Val Ile Pro Leu Val Leu Tyr Thr

405 410 415

Ser Asp Lys Lys Ile Met Gly Glu Phe Ala Asn Arg Ala Trp Val Lys

420 425 430

Trp Thr Ala Trp Phe Ile Ser Gly Val Leu Ile Ile Leu Asn Leu Tyr

435 440 445

Leu Ile Ala Gln Thr Leu Gly Phe Val Lys

450 455

<210> 2

<211> 450

<212> PRT

<213> 乳杆菌属

<400> 2

Met Ala Arg Pro Asp Glu Arg Leu Thr Val Gln Arg Glu Lys Arg Ser

1 5 10 15

Leu Asp Asp Ile Asn Arg Ser Val Gln Val Pro Ser Val Tyr Glu Ser

20 25 30

Ser Phe Phe Gln Lys Phe Leu Ala Tyr Ser Gly Pro Gly Ala Leu Val

35 40 45

Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Leu Thr Ala Leu Glu Gly

50 55 60

Gly Ser Arg Tyr His Tyr Ala Leu Leu Ser Val Leu Leu Met Ser Ile

65 70 75 80

Leu Val Ala Met Phe Met Gln Thr Leu Ala Ile Lys Leu Gly Val Val

85 90 95

Ala Arg Leu Asp Leu Ala Gln Ala Ile Ala Ala Phe Ile Pro Asn Trp

100 105 110

Ser Arg Ile Cys Leu Trp Leu Ile Asn Glu Ala Ala Met Met Ala Thr

115 120 125

Asp Met Thr Gly Val Val Gly Thr Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu Phe

130 135 140

Gly Leu Pro Leu Met Trp Gly Met Leu Leu Thr Ile Ala Asp Val Leu

145 150 155 160

Val Val Leu Leu Phe Leu Arg Phe Gly Ile Arg Arg Ile Glu Leu Ile

165 170 175

Val Leu Val Ser Ile Leu Thr Val Gly Ile Ile Phe Gly Ile Glu Val

180 185 190

Ala Arg Ala Asp Pro Ser Ile Gly Gly Ile Ala Gly Gly Phe Val Pro

195 200 205

His Thr Asp Ile Leu Thr Asn His Gly Met Leu Leu Leu Ser Leu Gly

210 215 220

Ile Met Gly Ala Thr Ile Met Pro His Asn Ile Tyr Leu His Ser Ser

225 230 235 240

Leu Ala Gln Ser Arg Lys Tyr Asp Glu His Ile Pro Ala Gln Val Thr

245 250 255

Glu Ala Leu Arg Phe Gly Lys Trp Asp Ser Asn Val His Leu Val Ala

260 265 270

Ala Phe Leu Ile Asn Ala Leu Leu Leu Ile Leu Gly Ala Ala Leu Phe

275 280 285

Tyr Gly Val Gly Gly His Val Thr Ala Phe Gln Gly Ala Tyr Asn Gly

290 295 300

Leu Lys Asn Pro Met Ile Val Gly Gly Leu Ala Ser Pro Leu Met Ser

305 310 315 320

Thr Leu Phe Ala Phe Ala Leu Leu Ile Thr Gly Leu Ile Ser Ser Ile

325 330 335

Ala Ser Thr Leu Ala Gly Gln Ile Val Met Glu Gly Tyr Leu Asn Ile

340 345 350

Arg Met Pro Leu Trp Glu Arg Arg Leu Leu Thr Arg Leu Val Thr Leu

355 360 365

Ile Pro Ile Met Val Ile Gly Phe Met Ile Gly Phe Ser Glu His Asn

370 375 380

Phe Glu Gln Val Ile Val Tyr Ala Gln Val Ser Leu Ser Ile Ala Leu

385 390 395 400

Pro Phe Thr Leu Phe Pro Leu Val Ala Leu Thr Asn Arg Arg Asp Leu

405 410 415

Met Gly Ile His Val Asn Ser Gln Leu Val Arg Trp Val Gly Tyr Phe

420 425 430

Leu Thr Gly Val Ile Thr Val Leu Asn Ile Gln Leu Ala Ile Ser Val

435 440 445

Phe Val

450

<210> 3

<211> 535

<212> PRT

<213> 乳杆菌属

<400> 3

Met Ser Asp Asp His Lys Lys Arg His Pro Ile Lys Leu Ile Gln Tyr

1 5 10 15

Ala Asn Gly Pro Ser Leu Glu Glu Ile Asn Gly Thr Val Glu Val Pro

20 25 30

His Gly Lys Gly Phe Trp Arg Thr Leu Phe Ala Tyr Ser Gly Pro Gly

35 40 45

Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ser Thr Ser

50 55 60

Ile Thr Gly Gly Gln Asn Phe Gln Tyr Leu Leu Ile Ser Val Ile Leu

65 70 75 80

Met Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ala Ala Lys Leu

85 90 95

Gly Ile Val Ser Gln Met Asp Leu Ala Gln Ala Ile Arg Ala Arg Thr

100 105 110

Ser Lys Lys Leu Gly Ile Val Leu Trp Ile Leu Thr Glu Leu Ala Ile

115 120 125

Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Val Ile Gly Ala Ala Ile Ala Leu Tyr

130 135 140

Leu Leu Phe His Ile Pro Leu Val Ile Ala Val Leu Val Thr Val Leu

145 150 155 160

Asp Val Leu Val Leu Leu Leu Leu Thr Lys Ile Gly Phe Arg Lys Ile

165 170 175

Glu Ala Ile Val Val Ala Leu Ile Leu Val Ile Leu Leu Val Phe Val

180 185 190

Tyr Gln Val Ala Leu Ser Asp Pro Asn Met Gly Ala Leu Leu Lys Gly

195 200 205

Phe Ile Pro Thr Gly Glu Thr Phe Ala Ser Ser Pro Ser Ile Asn Gly

210 215 220

Met Ser Pro Ile Gln Gly Ala Leu Gly Ile Ile Gly Ala Thr Val Met

225 230 235 240

Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ala Ile Ser Gln Thr Arg Lys Ile

245 250 255

Asp Tyr Lys Asn Pro Asp Asp Val Ala Gln Ala Val Lys Phe Ser Ala

260 265 270

Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Ser Phe Ala Phe Val Val Asn Cys Leu

275 280 285

Leu Leu Val Met Gly Val Ala Val Phe Lys Ser Gly Ala Val Lys Asp

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Pro Ser Phe Phe Gly Leu Phe Gln Ala Leu Ser Asp Ser Ser Thr Leu

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Ser Asn Gly Val Leu Ile Ala Val Ala Lys Ser Gly Ile Leu Ser Ile

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Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr Ile Thr

340 345 350

Gly Thr Leu Thr Gly Gln Val Ile Met Glu Gly Phe Val His Met Lys

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Met Pro Leu Trp Ala Arg Arg Leu Val Thr Arg Ile Ile Ser Val Ile

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Pro Val Ile Val Cys Val Met Leu Thr Ala Arg Asp Thr Pro Ile Gln

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Gln His Glu Ala Leu Asn Thr Leu Met Asn Asn Ser Gln Val Phe Leu

405 410 415

Ala Phe Ala Leu Pro Phe Ser Met Leu Pro Leu Leu Met Phe Thr Asn

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435 440 445

Val Leu Gly Trp Ile Ser Val Leu Gly Leu Thr Gly Leu Asn Leu Lys

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Gly Leu Pro Asp Ser Ile Ala Gly Phe Phe Gly Asp His Pro Thr Ala

465 470 475 480

Thr Gln Thr Asn Met Ala Asn Ile Ile Ala Ile Val Leu Ile Val Ala

485 490 495

Ile Leu Ala Leu Leu Ala Trp Thr Ile Trp Asp Leu Tyr Lys Gly Asn

500 505 510

Gln Arg Tyr Glu Ala His Leu Ala Ala Val Ala Asp Glu Lys Glu Ala

515 520 525

Lys Ala Asp Val Asp Glu Gln

530 535

<210> 4

<211> 458

<212> PRT

<213> 干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)

<400> 4

Met Ala Ser Glu Asp Lys Lys Ser Lys Arg Glu His Ile Ile His Phe

1 5 10 15

Glu Asp Thr Pro Ser Lys Ser Leu Asp Glu Val Asn Gly Ser Val Glu

20 25 30

Val Pro His Asn Ala Gly Phe Trp Lys Thr Leu Ala Ala Tyr Thr Val

35 40 45

Pro Gly Ile Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ile

50 55 60

Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ala Ser Phe Lys Tyr Ser Leu Leu Ser Val

65 70 75 80

Ile Leu Ile Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Ala Met Ala Ala

85 90 95

Arg Leu Gly Ile Val Thr Gly Arg Asp Leu Ala Gln Met Thr Arg Asp

100 105 110

His Thr Ser Lys Ala Met Gly Gly Phe Leu Trp Val Ile Thr Glu Leu

115 120 125

Ala Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Ile Ile Gly Ser Ala Ile Ala

130 135 140

Leu Lys Leu Leu Phe Asn Met Pro Leu Ile Val Gly Ile Ile Ile Thr

145 150 155 160

Thr Ala Asp Val Leu Ile Leu Leu Leu Leu Met Arg Leu Gly Phe Arg

165 170 175

Lys Ile Glu Ala Val Val Ala Thr Leu Val Leu Val Ile Leu Leu Val

180 185 190

Phe Ala Tyr Glu Val Ile Leu Ala Gln Pro Asn Val Pro Glu Leu Leu

195 200 205

Lys Gly Tyr Leu Pro His Ala Asp Ile Val Thr Asn Lys Ser Met Leu

210 215 220

Tyr Leu Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Val Met Pro His Asp Leu

225 230 235 240

Phe Leu Gly Ser Ser Ile Ser Gln Thr Arg Lys Ile Asp Arg Thr Lys

245 250 255

His Glu Glu Val Lys Lys Ala Ile Lys Phe Ser Thr Ile Asp Ser Asn

260 265 270

Leu Gln Leu Thr Met Ala Phe Ile Val Asn Ser Leu Leu Leu Ile Leu

275 280 285

Gly Ala Ala Leu Phe Phe Gly Thr Ser Ser Ser Val Gly Arg Phe Val

290 295 300

Asp Leu Phe Asn Ala Leu Ser Asn Ser Gln Ile Val Gly Ala Ile Ala

305 310 315 320

Ser Pro Met Leu Ser Met Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly

325 330 335

Gln Ser Ser Thr Ile Thr Gly Thr Leu Ala Gly Gln Ile Ile Met Glu

340 345 350

Gly Phe Ile His Leu Lys Met Pro Leu Trp Ala Gln Arg Leu Leu Thr

355 360 365

Arg Leu Met Ser Val Thr Pro Val Leu Ile Phe Ala Ile Tyr Tyr His

370 375 380

Gly Asn Glu Ala Lys Ile Glu Asn Leu Leu Thr Phe Ser Gln Val Phe

385 390 395 400

Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Ala Val Ile Pro Leu Val Leu Tyr Thr

405 410 415

Ser Asp Lys Lys Ile Met Gly Glu Phe Ala Asn Arg Ala Trp Val Lys

420 425 430

Trp Thr Ala Trp Phe Ile Ser Gly Val Leu Ile Ile Leu Asn Leu Tyr

435 440 445

Leu Ile Ala Gln Thr Leu Gly Phe Val Lys

450 455

<210> 5

<211> 459

<212> PRT

<213> 短乳杆菌(Lactobacillus brevis)

<400> 5

Met Lys Asn His Glu Thr Asp Thr Lys Thr Lys His His Met Ile Glu

1 5 10 15

Ser Thr Gly Ser Gly Gln Lys Ser Leu Asp Glu Val Asn Gly Thr Val

20 25 30

Glu Val Pro Gln Asn Ala Gly Phe Trp Arg Thr Leu Met Ala Tyr Thr

35 40 45

Gly Pro Gly Ala Leu Ile Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp

50 55 60

Ile Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ala Gln Tyr Lys Tyr Thr Leu Leu Thr

65 70 75 80

Val Val Leu Leu Ser Ser Leu Val Ala Met Leu Leu Gln Ala Met Ser

85 90 95

Ala Arg Leu Gly Ile Val Thr Gly Lys Asp Leu Ala Gln Leu Thr Arg

100 105 110

Glu His Thr Gly Lys Arg Thr Gly Phe Ala Leu Trp Ile Ile Thr Glu

115 120 125

Leu Ala Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Ile Ile Gly Ser Ala Ile

130 135 140

Ala Leu Lys Leu Leu Phe Gly Phe Pro Leu Ile Val Gly Ile Ile Ile

145 150 155 160

Thr Ala Met Asp Val Leu Val Leu Leu Val Leu Met Lys Leu Gly Phe

165 170 175

Arg Lys Ile Glu Ala Ile Val Ala Thr Leu Val Ala Val Ile Leu Phe

180 185 190

Val Phe Leu Tyr Glu Val Ile Leu Ala Gln Pro His Met Gly Glu Val

195 200 205

Leu Lys Gly Tyr Leu Pro Ser Ser Thr Val Val Thr Asn His Gly Met

210 215 220

Leu Tyr Leu Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Val Met Pro His Asp

225 230 235 240

Leu Tyr Leu Gly Ser Ser Ile Ser Gln Thr Arg Ser Phe Asp Arg Lys

245 250 255

Asn Arg Lys Ser Val Ala Gln Ala Ile Lys Phe Thr Thr Ile Asp Ser

260 265 270

Asn Ile Gln Leu Thr Leu Ala Phe Val Val Asn Ser Leu Leu Leu Ile

275 280 285

Leu Gly Ala Ala Leu Phe Phe Gly Thr Asn Ser Asp Leu Gly Arg Phe

290 295 300

Val Asp Leu Phe Asn Ala Leu Ser Asp Ser Gln Ile Val Gly Ala Ile

305 310 315 320

Ala Ser Pro Met Leu Ser Met Leu Phe Ala Leu Ala Leu Leu Ser Ser

325 330 335

Gly Gln Ser Ser Thr Ile Thr Gly Thr Leu Ala Gly Gln Ile Ile Met

340 345 350

Glu Gly Phe Ile Asn Leu Lys Met Pro Leu Trp Ala Gln Arg Leu Ile

355 360 365

Thr Arg Leu Leu Ser Val Thr Pro Val Ile Ile Phe Ala Ile Ile Tyr

370 375 380

His Gly Asn Glu Ala Lys Ile Glu Asp Leu Leu Thr Phe Ser Gln Val

385 390 395 400

Phe Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Ala Met Ile Pro Leu Val Ile Phe

405 410 415

Thr Ser Ser Lys Lys Leu Met Gly Glu Phe Ala Asn Arg Thr Trp Ser

420 425 430

Lys Ile Leu Gly Trp Ile Ile Ala Val Ile Leu Ile Ile Leu Asn Ile

435 440 445

Tyr Leu Ile Leu Asn Thr Leu His Ile Val Gln

450 455

<210> 6

<211> 447

<212> PRT

<213> 嗜酸片球菌(Pediococcus acidilactici)

<400> 6

Met Ser Lys Lys Leu Asp Glu Val Asp Asn Lys Ser Leu Asp Glu Ile

1 5 10 15

Asn Gly Ser Ile Lys Val Pro Lys Asn Ala Gly Phe Phe Lys Thr Leu

20 25 30

Met Ala Tyr Thr Gly Pro Gly Ile Leu Ile Ala Val Gly Tyr Met Asp

35 40 45

Pro Gly Asn Trp Ile Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ala Gln Phe Lys Tyr

50 55 60

Thr Leu Leu Ser Val Val Leu Ile Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu

65 70 75 80

Gln Ala Met Ser Ala Arg Leu Gly Ile Val Thr Gly Lys Asp Leu Ala

85 90 95

Gln Leu Thr Arg Glu Arg Thr Ser Lys Arg Val Gly Phe Met Leu Trp

100 105 110

Val Val Ala Glu Leu Ala Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Ile Ile

115 120 125

Gly Ser Gly Ile Ala Leu Glu Leu Leu Phe His Ile Pro Leu Ile Ile

130 135 140

Gly Ile Leu Ile Thr Ala Ala Asp Val Leu Ile Leu Leu Leu Leu Met

145 150 155 160

Arg Leu Gly Phe Arg Lys Ile Glu Ala Ile Val Ala Thr Leu Val Met

165 170 175

Val Ile Leu Ile Val Phe Ala Tyr Glu Val Phe Leu Ser Asp Pro Ser

180 185 190

Ile Ser Gly Ile Ile Lys Gly Tyr Val Pro Ala Pro Val Ile Leu Gln

195 200 205

Asn Asn Ser Met Leu Tyr Leu Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Val

210 215 220

Met Pro His Asp Leu Tyr Leu Gly Ser Ser Ile Ser Gln Thr Arg Glu

225 230 235 240

Ile Asp Arg Arg Asp Arg Lys Asn Val Ala Gln Ala Ile Arg Phe Ser

245 250 255

Thr Ile Asp Ser Asn Met Gln Leu Phe Leu Ala Phe Ile Val Asn Ser

260 265 270

Leu Leu Leu Ile Leu Gly Ala Ala Leu Phe Tyr Gly Thr Asp Ser Ser

275 280 285

Leu Gly Arg Phe Val Asp Leu Phe Asn Ala Leu Ser Asp Asn Gln Ile

290 295 300

Val Gly Ala Ile Ala Ser Pro Met Leu Ser Met Leu Phe Ala Val Ala

305 310 315 320

Leu Leu Ala Ser Gly Gln Ser Ser Thr Ile Thr Gly Thr Leu Ser Gly

325 330 335

Gln Ile Ile Met Glu Gly Phe Ile Arg Leu Arg Val Pro Leu Trp Val

340 345 350

Gln Arg Leu Val Thr Arg Leu Leu Ser Val Ala Pro Val Leu Ile Phe

355 360 365

Ala Ile Tyr Tyr His Gly Asp Glu Ala Lys Ile Glu Asn Leu Leu Thr

370 375 380

Phe Ser Gln Val Phe Leu Ser Val Ala Leu Pro Phe Ala Val Ile Pro

385 390 395 400

Leu Val Met Tyr Thr Ser Ser Lys Lys Leu Met Gly Glu Phe Ala Asn

405 410 415

Arg Gln Trp Val Lys Trp Cys Ala Trp Ile Ala Thr Ile Ile Leu Ile

420 425 430

Leu Leu Asn Ile Tyr Leu Ile Leu Gln Thr Leu Gly Ile Val Lys

435 440 445

<210> 7

<211> 464

<212> PRT

<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)

<400> 7

Met Lys Ser Ala Lys Thr Lys Asp His Ala Lys Met Lys Ala Ala Glu

1 5 10 15

Glu Lys Ala Ile His Ser Thr Gly Ala Asp Ser Lys Ser Leu Asp Glu

20 25 30

Val Asn Gly Ser Val Arg Val Pro Lys Asp Ala Ser Phe Trp Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Ala Tyr Thr Gly Pro Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met

50 55 60

Asp Pro Gly Asn Trp Ile Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ser Gln Tyr Lys

65 70 75 80

Tyr Ala Leu Leu Ser Val Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu

85 90 95

Leu Gln Ala Met Ala Ala Arg Leu Gly Ile Val Thr Gly Lys Asp Leu

100 105 110

Ala Gln Leu Thr Arg Glu Arg Thr Ser Lys Gly Met Gly Ile Phe Leu

115 120 125

Trp Ile Ile Thr Glu Leu Ala Ile Met Ala Thr Asp Val Ala Glu Ile

130 135 140

Ile Gly Ser Gly Ile Ala Leu Lys Leu Leu Phe Gly Phe Pro Leu Ile

145 150 155 160

Val Gly Ile Leu Ile Thr Thr Ala Asp Val Leu Ile Leu Leu Leu Leu

165 170 175

Met Lys Leu Gly Phe Arg Lys Ile Glu Ala Ile Val Ala Thr Leu Val

180 185 190

Ala Val Ile Leu Phe Val Phe Leu Tyr Glu Val Ile Ile Ser Gln Pro

195 200 205

Asn Ile Pro Glu Met Leu Lys Gly Tyr Val Pro Thr Ser Arg Ile Val

210 215 220

Ser Asn Arg Ser Met Leu Phe Leu Ala Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr

225 230 235 240

Val Met Pro His Asn Leu Tyr Leu Gly Ser Ser Ile Ser Gln Thr Arg

245 250 255

Gln Val Asp Arg Ser Asp Glu Lys Glu Val Ala Lys Ala Val Lys Phe

260 265 270

Thr Thr Ile Asp Ser Asn Ile Gln Leu Ser Val Ala Phe Val Val Asn

275 280 285

Ser Leu Leu Leu Ile Leu Gly Ala Ala Leu Phe Phe Gly Thr Lys Gly

290 295 300

Asp Leu Gly Arg Phe Val Asp Leu Tyr Asn Ala Leu Gly Asp Ser Lys

305 310 315 320

Val Val Gly Ser Ile Ala Ser Pro Leu Leu Ser Met Leu Phe Ala Ile

325 330 335

Ala Leu Leu Ser Ser Gly Gln Ser Ser Thr Ile Thr Gly Thr Leu Ser

340 345 350

Gly Gln Ile Ile Met Glu Gly Phe Ile Arg Leu Lys Met Pro Leu Trp

355 360 365

Ala Gln Arg Leu Leu Thr Arg Leu Ile Ser Val Thr Pro Val Leu Ala

370 375 380

Phe Ala Ile Tyr Tyr His Gly Asn Glu Ala Lys Ile Glu Asp Leu Leu

385 390 395 400

Thr Met Ser Gln Val Phe Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Ala Met Ile

405 410 415

Pro Leu Val Met Phe Thr Ser Asn Arg Ala Leu Met Gly Asn Phe Thr

420 425 430

Asn Arg Val Trp Val Lys Trp Thr Ala Trp Ile Val Thr Val Ile Leu

435 440 445

Ile Ile Leu Asn Ile Tyr Leu Ile Leu Gln Thr Val Gly Leu Val Lys

450 455 460

<210> 8

<211> 443

<212> PRT

<213> 清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)

<400> 8

Met His Tyr Ala Asp Gly Ser Ser Leu Glu Glu Ile Asn Asn Thr Val

1 5 10 15

Ala Ile Pro Lys Asn Ala Gly Phe Trp Lys Thr Leu Met Ala Phe Met

20 25 30

Gly Pro Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp

35 40 45

Ile Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ala Gln Phe Ala Tyr Thr Leu Ile Ser

50 55 60

Val Ile Leu Val Ser Asn Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Ala Met Ala

65 70 75 80

Ala Arg Leu Gly Ile Val Thr Gly Met Asp Leu Ala Gln Met Thr Arg

85 90 95

Ala Lys Thr Gly Lys Lys Met Gly Ile Phe Leu Trp Ile Val Thr Glu

100 105 110

Leu Ala Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Ile Ile Gly Ser Ala Ile

115 120 125

Ala Leu Glu Leu Ile Phe Asn Ile Pro Leu Leu Trp Gly Val Leu Ile

130 135 140

Thr Ala Phe Asp Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Met Lys Leu Gly Phe

145 150 155 160

Arg Lys Ile Glu Ala Ile Val Ala Thr Leu Val Ala Val Ile Leu Phe

165 170 175

Val Phe Leu Tyr Glu Val Ile Leu Ala Gln Pro Asn Met Gly Asp Val

180 185 190

Val Arg Gly Phe Val Pro Ser Pro Arg Ile Met Thr Asp Lys Lys Met

195 200 205

Leu Phe Leu Ala Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Val Met Pro His Asn

210 215 220

Leu Tyr Leu His Ser Ser Ile Ala Gln Ala Arg Gln Tyr Asp Arg Asp

225 230 235 240

Asp Val Ala Glu Lys Arg Lys Ala Ile Lys Phe Thr Val Ile Asp Ser

245 250 255

Asn Ile Gln Leu Thr Ile Ala Phe Val Val Asn Cys Leu Leu Leu Ile

260 265 270

Leu Gly Ala Ala Met Phe Tyr Gly Thr Asn Ser Asp Leu Gly Arg Phe

275 280 285

Val Asp Leu Phe Asn Ala Leu Gln Asn Lys Glu Ile Val Gly Ser Ile

290 295 300

Ala Ser Pro Met Leu Ser Leu Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser

305 310 315 320

Gly Gln Asn Ser Thr Ile Thr Gly Thr Leu Ser Gly Gln Ile Val Met

325 330 335

Glu Gly Phe Val Arg Met Lys Ile Pro Leu Trp Ala Arg Arg Val Ile

340 345 350

Thr Arg Gly Leu Ser Ile Leu Pro Val Ile Ile Phe Thr Val Tyr Tyr

355 360 365

His Gly Asn Glu Ala Gln Val Glu Asn Leu Leu Ile Tyr Ser Gln Val

370 375 380

Phe Leu Ser Ile Ala Leu Pro Val Ser Met Ile Pro Leu Thr Leu Phe

385 390 395 400

Thr Ser Asp Glu Lys Ile Met Gly Pro Phe Val Asn Arg Pro Trp Val

405 410 415

Lys Tyr Thr Ala Trp Phe Val Thr Ile Val Leu Thr Leu Leu Asn Ile

420 425 430

Tyr Leu Ile Leu Gln Thr Val Gly Leu Ala Ala

435 440

<210> 9

<211> 454

<212> PRT

<213> 消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)

<400> 9

Met Ser Ser Lys Asn Lys Lys His Glu Ser Leu Ile His Tyr Ala Asn

1 5 10 15

Gly Pro Ser Leu Glu Glu Ile Asn Asp Thr Val Glu Ile Pro Lys Asp

20 25 30

Ala Gly Phe Phe Lys Thr Leu Leu Ala Tyr Ser Gly Pro Gly Ala Leu

35 40 45

Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Val Thr Ser Ile Ala

50 55 60

Gly Gly Ala Gln Phe Lys Tyr Lys Leu Leu Ser Val Ile Leu Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ser Ala Lys Leu Gly Ile

85 90 95

Val Thr Gly Arg Asp Leu Ala Gln Leu Thr Arg Asp Arg Thr Ser Arg

100 105 110

Val Gly Gly Phe Ile Leu Trp Ile Ile Thr Glu Leu Ala Ile Met Ala

115 120 125

Thr Asp Ile Ala Glu Ile Ile Gly Ser Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu

130 135 140

Phe Asn Ile Pro Val Leu Trp Gly Val Ile Ile Thr Ala Phe Asp Val

145 150 155 160

Leu Leu Leu Leu Val Leu Met Lys Leu Gly Phe Arg Lys Ile Glu Ala

165 170 175

Ile Val Ala Thr Leu Ile Met Val Ile Leu Leu Val Phe Leu Tyr Glu

180 185 190

Val Ile Leu Ala Lys Pro Asp Val Gly Gln Met Met Val Gly Phe Ile

195 200 205

Pro Glu Pro Lys Ile Leu Gln Asn Gln Ser Met Leu Tyr Leu Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Val Gly Ala Thr Val Met Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser

225 230 235 240

Ser Ile Ser Gln Ala Arg Lys Tyr Asp Arg Asp Asp Pro Lys Ser Ile

245 250 255

His Gln Ala Val Arg Phe Ser Thr Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Thr

260 265 270

Leu Ala Phe Val Val Asn Thr Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Ala Leu

275 280 285

Phe Tyr Gly Thr Ser Ser Asp Leu Gly Arg Phe Val Asp Leu Phe Asn

290 295 300

Ala Leu Gln Asp Pro Lys Val Ala Gly Ala Val Ala Ser Pro Val Leu

305 310 315 320

Ser Ile Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr

325 330 335

Ile Thr Gly Thr Leu Ser Gly Gln Ile Val Met Glu Gly Phe Ile His

340 345 350

Met Lys Met Lys Leu Trp Ala Arg Arg Val Ile Thr Arg Leu Met Ser

355 360 365

Ile Ile Pro Val Ile Thr Phe Ala Ile Ile Tyr His Gly Asn Glu Ala

370 375 380

Lys Ile Glu Ser Leu Leu Thr Phe Ser Gln Val Phe Leu Ser Val Ala

385 390 395 400

Leu Pro Phe Ser Ile Phe Pro Leu Ile Lys Phe Thr Ser Asn Lys Lys

405 410 415

Leu Met Gly Glu Phe Val Asn Asn Lys Leu Val Glu Tyr Ile Gly Tyr

420 425 430

Phe Val Ala Ile Val Leu Thr Ile Leu Asn Ile Trp Leu Ile Tyr Thr

435 440 445

Thr Phe Val Pro Thr Ala

450

<210> 10

<211> 451

<212> PRT

<213> 栖花乳杆菌(Lactobacillus floricola)

<400> 10

Met Thr Lys Glu Glu Thr Lys Leu Phe His Tyr Ala Asp Gly Pro Ser

1 5 10 15

Leu Glu Glu Ile Asn Gly Thr Val Ala Val Pro Lys Lys Gly Gly Phe

20 25 30

Trp Lys Thr Leu Phe Ala Phe Ser Gly Pro Gly Ala Leu Val Ala Val

35 40 45

Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Val Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ala

50 55 60

Gln Tyr Gln Tyr Thr Leu Leu Ser Val Ile Leu Ile Ser Ser Leu Ile

65 70 75 80

Ala Met Leu Leu Gln Ala Met Ser Ala Arg Leu Gly Ile Ala Ser Gly

85 90 95

Leu Asp Leu Ala Gln Ala Thr Ala Lys His Ser Pro Lys Trp Leu Arg

100 105 110

Tyr Thr Leu Trp Ile Ile Thr Glu Leu Ala Ile Met Ala Thr Asp Ile

115 120 125

Ala Glu Ile Val Gly Ala Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu Phe Asn Leu

130 135 140

Pro Leu Ile Val Gly Ile Phe Leu Thr Thr Leu Asp Val Met Leu Leu

145 150 155 160

Leu Leu Leu Met Lys Leu Gly Phe Arg Lys Ile Glu Ala Ile Val Gly

165 170 175

Ala Leu Ile Val Ser Ile Leu Val Ile Phe Leu Tyr Glu Val Ile Leu

180 185 190

Ala Arg Pro Asp Val Gly Ala Met Phe Ala Gly Tyr Ile Pro Gln Pro

195 200 205

Glu Val Val Thr Asn Lys Gly Ala Phe Tyr Ile Ala Leu Gly Ile Val

210 215 220

Gly Ala Thr Val Met Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ser Ile Ala

225 230 235 240

Gln Ala Arg Gln Tyr Asp Arg Asn Asp Ile Glu Glu Lys Lys Arg Ala

245 250 255

Ile Lys Phe Thr Val Leu Asp Ser Asn Ile Gln Leu Ser Val Ala Phe

260 265 270

Val Val Asn Thr Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Ala Leu Phe Tyr Gly

275 280 285

Ala Gln Thr Asp Leu Gly Thr Phe Ser Glu Leu Tyr Asn Ala Leu Gln

290 295 300

Asn Pro Gln Val Ala Gly Val Ile Ala Ser Pro Ile Leu Ser Val Leu

305 310 315 320

Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr Ile Thr Gly

325 330 335

Thr Leu Ser Gly Gln Ile Val Met Glu Gly Phe Ile His Leu Lys Met

340 345 350

Pro Met Trp Ala Arg Arg Val Ile Thr Arg Leu Ile Ser Val Ile Pro

355 360 365

Val Leu Ile Phe Ala Ile Ile Tyr His Ser Asn Glu Ala Lys Ile Glu

370 375 380

Asp Leu Leu Val Phe Ser Gln Val Phe Leu Ser Ile Ala Leu Pro Val

385 390 395 400

Ser Ile Ile Pro Leu Val Met Phe Thr Ala Asn Lys Lys Ile Met Gly

405 410 415

Pro Phe Val Asn Lys Lys Trp Val Thr Ile Thr Ser Ser Leu Val Ala

420 425 430

Ile Ile Leu Thr Gly Leu Asn Ile Phe Leu Ile Leu Gln Thr Leu Gly

435 440 445

Trp Val Gln

450

<210> 11

<211> 455

<212> PRT

<213> 短乳杆菌(Lactobacillus brevis)

<400> 11

Met Thr Asp Asn Val Ser Ala Lys Ser Val Gln Gly Asp Leu Thr Asn

1 5 10 15

Gly Pro Ser Leu Ala Glu Ile Asn Gly Ser Val Arg Val Pro Lys Glu

20 25 30

Lys Gly Phe Val Arg Asn Leu Leu Ala Phe Ser Gly Pro Gly Ala Leu

35 40 45

Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Val Thr Ser Ile Gly

50 55 60

Gly Gly Ala Gln Tyr Gly Tyr Leu Leu Met Ser Val Ile Leu Met Ser

65 70 75 80

Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ala Ala Lys Leu Gly Ile

85 90 95

Val Thr Gln Met Asp Leu Ala Arg Ala Thr Arg Ala His Thr Gly Lys

100 105 110

Arg Ile Gly Ala Val Leu Trp Val Met Thr Glu Leu Ala Ile Met Ala

115 120 125

Thr Asp Ile Ala Glu Val Ile Gly Gly Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu

130 135 140

Phe Gly Val Pro Leu Ile Leu Gly Val Ser Leu Thr Val Leu Asp Val

145 150 155 160

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Arg Leu Gly Phe Arg Lys Ile Glu Ala

165 170 175

Ile Val Leu Cys Leu Ile Leu Val Ile Leu Val Val Phe Ala Tyr Glu

180 185 190

Val Val Ile Ala Gln Pro Ser Met Gly Gln Ala Val Ala Ser Phe Val

195 200 205

Pro Gln Ala Glu Ile Met Arg Pro Gly Gln Leu Thr Met Ala Leu Gly

210 215 220

Ile Val Gly Ala Thr Val Met Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ser

225 230 235 240

Ile Ala Gln Thr Arg Lys Phe Asp Arg Gln Asp Pro Ala Glu Met Ala

245 250 255

Arg Ala Val Lys Phe Thr Ala Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Phe Gly

260 265 270

Ala Phe Ile Ile Asn Cys Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala Ala Met Phe

275 280 285

Phe Gly Lys Asp Ala Gly Ala Leu Gly Thr Phe Gly Gln Leu Tyr Asp

290 295 300

Ala Leu Gln Asp Asn Arg Leu Ala Gly Ala Val Ala Ser Pro Val Leu

305 310 315 320

Ser Thr Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr

325 330 335

Ile Thr Gly Thr Leu Thr Gly Gln Val Ile Met Glu Gly Phe Ile Asn

340 345 350

Met Arg Leu Pro Ile Trp Val Arg Arg Leu Val Thr Arg Leu Ile Ser

355 360 365

Val Ala Pro Val Ile Ile Val Thr Ile Leu Tyr Gly Gly Ser Glu Gln

370 375 380

Ala Leu Asp Arg Leu Leu Val Asn Ser Gln Val Phe Leu Ser Ile Ala

385 390 395 400

Leu Pro Phe Ser Met Ile Pro Leu Thr Ile Phe Thr Ser Ser Lys Arg

405 410 415

Ile Met Gly Thr Arg Trp Val Asn Arg Trp Trp Val Thr Ala Leu Ala

420 425 430

Trp Gly Cys Thr Ala Ile Leu Thr Val Leu Asn Ile Gln Ile Val Trp

435 440 445

Ala Thr Met Thr Thr Leu Phe

450 455

<210> 12

<211> 450

<212> PRT

<213> 干酪乳杆菌

<400> 12

Met Ala Arg Pro Asp Glu Arg Leu Thr Val Gln Arg Glu Lys Arg Ser

1 5 10 15

Leu Asp Asp Ile Asn Arg Ser Val Gln Val Pro Ser Val Tyr Glu Ser

20 25 30

Ser Phe Phe Gln Lys Phe Leu Ala Tyr Ser Gly Pro Gly Ala Leu Val

35 40 45

Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Leu Thr Ala Leu Glu Gly

50 55 60

Gly Ser Arg Tyr His Tyr Ala Leu Leu Ser Val Leu Leu Met Ser Ile

65 70 75 80

Leu Val Ala Met Phe Met Gln Thr Leu Ala Ile Lys Leu Gly Val Val

85 90 95

Ala Arg Leu Asp Leu Ala Gln Ala Ile Ala Ala Phe Ile Pro His Trp

100 105 110

Ser Arg Ile Cys Leu Trp Leu Ile Asn Glu Ala Ala Met Met Ala Thr

115 120 125

Asp Met Thr Gly Val Val Gly Thr Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu Phe

130 135 140

Gly Leu Pro Leu Met Trp Gly Met Leu Leu Thr Ile Ala Asp Val Leu

145 150 155 160

Val Val Leu Leu Phe Leu Arg Phe Gly Ile Arg Arg Val Glu Leu Ile

165 170 175

Val Leu Val Ser Ile Leu Thr Val Gly Ile Ile Phe Gly Ile Glu Val

180 185 190

Ala Arg Ala Asp Pro Ser Ile Gly Gly Ile Ala Gly Gly Phe Val Pro

195 200 205

His Thr Asp Ile Leu Thr Asn His Gly Met Leu Leu Leu Ser Leu Gly

210 215 220

Ile Met Gly Ala Thr Ile Met Pro His Asn Ile Tyr Leu His Ser Ser

225 230 235 240

Leu Ala Gln Ser Arg Lys Tyr Asp Glu His Ile Pro Ala Gln Val Thr

245 250 255

Glu Ala Leu Arg Phe Gly Lys Trp Asp Ser Asn Val His Leu Val Ala

260 265 270

Ala Phe Leu Ile Asn Ala Leu Leu Leu Ile Leu Gly Ala Ala Leu Phe

275 280 285

Tyr Gly Val Gly Gly His Val Thr Ala Phe Gln Gly Val Tyr Asn Gly

290 295 300

Leu Lys Asn Pro Met Ile Val Gly Gly Leu Ala Ser Pro Leu Met Ser

305 310 315 320

Thr Leu Phe Ala Phe Ala Leu Leu Ile Thr Gly Leu Ile Ser Ser Ile

325 330 335

Ala Ser Thr Leu Ala Gly Gln Ile Val Met Glu Gly Tyr Leu Asn Ile

340 345 350

Arg Met Pro Leu Trp Glu Arg Arg Leu Leu Thr Arg Leu Val Thr Leu

355 360 365

Ile Pro Ile Met Val Ile Gly Phe Met Ile Gly Phe Ser Glu His Asn

370 375 380

Phe Glu Gln Val Ile Val Tyr Ala Gln Val Ser Leu Ser Ile Ala Leu

385 390 395 400

Pro Phe Thr Leu Phe Pro Leu Val Ala Leu Thr Asn Arg Arg Asp Leu

405 410 415

Met Gly Ile His Val Asn Ser Gln Leu Val Arg Trp Val Gly Tyr Phe

420 425 430

Leu Thr Gly Val Ile Thr Val Leu Asn Ile Gln Leu Ala Ile Ser Val

435 440 445

Phe Val

450

<210> 13

<211> 451

<212> PRT

<213> 鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)

<400> 13

Met Thr Lys Arg Asn Glu Gln Leu Ser Val Gln Gln Ala Lys Pro Ser

1 5 10 15

Leu Asp Glu Ile Asn Arg Ser Val Gln Val Pro Gly Val Tyr Glu Pro

20 25 30

Ser Phe Val Gln Lys Phe Leu Ala Tyr Ser Gly Pro Gly Ala Leu Val

35 40 45

Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Leu Thr Ala Leu Glu Gly

50 55 60

Gly Ser Arg Tyr His Glu Thr Leu Leu Ala Val Leu Leu Leu Ser Ile

65 70 75 80

Leu Ala Ala Met Phe Met Gln Thr Leu Ala Ile Lys Leu Gly Val Val

85 90 95

Ala Arg Leu Asp Leu Ala Gln Ala Ile Ala Ala Phe Val Pro Lys Trp

100 105 110

Ser Arg Ile Gly Leu Trp Leu Val Asn Glu Ala Ala Met Met Ala Thr

115 120 125

Asp Met Thr Gly Val Val Gly Thr Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu Phe

130 135 140

Gly Leu Pro Leu Met Trp Gly Met Leu Leu Thr Ile Ala Asp Val Leu

145 150 155 160

Val Val Leu Met Phe Leu Arg Phe Gly Ile Arg Arg Ile Glu Leu Ile

165 170 175

Val Leu Ala Ser Ile Leu Thr Val Gly Ile Ile Phe Gly Ile Glu Val

180 185 190

Val Arg Ala Arg Pro Ser Met Gly Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Pro

195 200 205

His Thr Glu Ile Leu Thr Asn Arg Gly Met Leu Leu Leu Ser Leu Gly

210 215 220

Ile Met Gly Ala Thr Ile Met Pro His Asn Ile Tyr Leu His Ser Ser

225 230 235 240

Leu Ala Gln Ser Arg Arg Tyr Asp Glu His Ile Pro Ala Gln Val Thr

245 250 255

Glu Ala Leu Arg Phe Gly Lys Trp Asp Ser Asn Val His Leu Val Ala

260 265 270

Ala Phe Ile Ile Asn Ala Leu Leu Leu Ile Leu Gly Ala Thr Leu Phe

275 280 285

Tyr Gly Met Ser Ser His Ala Thr Ala Phe Glu Gly Val Tyr Asn Gly

290 295 300

Leu Lys Asn Pro Ala Ile Val Gly Gly Leu Ala Ser Pro Leu Met Ser

305 310 315 320

Thr Leu Phe Ala Phe Ala Leu Leu Ile Thr Gly Leu Ile Ser Ser Ile

325 330 335

Ala Ser Thr Leu Ala Gly Gln Ile Val Met Glu Gly Tyr Leu Asn Ile

340 345 350

Gln Ile Pro Leu Trp Ala Arg Arg Leu Leu Thr Arg Leu Val Thr Leu

355 360 365

Ile Pro Ile Met Ile Ile Gly Phe Val Met Gly Phe Ser Glu Gln His

370 375 380

Phe Glu Gln Val Ile Val Tyr Ala Gln Val Ala Leu Ser Ile Ala Leu

385 390 395 400

Pro Phe Thr Leu Phe Pro Leu Val Ala Leu Thr Asp Arg Arg Asp Leu

405 410 415

Met Gly Gln His Val Asn Ser Pro Val Val Arg Trp Met Gly Tyr Val

420 425 430

Leu Thr Gly Ile Ile Thr Leu Leu Asn Val Gln Leu Ile Leu Ser Val

435 440 445

Ile Leu Pro

450

<210> 14

<211> 442

<212> PRT

<213> 高加索酸奶乳杆菌(Lactobacillus kefiri)

<400> 14

Met Ser Gln Glu Pro Thr His Lys Ser Leu Asp Glu Ile Asn Gln Ser

1 5 10 15

Val Glu Val Pro Ser Val Tyr Glu Thr Ser Phe Leu Gln Lys Phe Leu

20 25 30

Ala Tyr Ser Gly Pro Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro

35 40 45

Gly Asn Trp Leu Thr Ser Leu Ser Gly Gly Ser Gln Phe Arg Tyr Ala

50 55 60

Leu Leu Ser Val Leu Leu Met Ser Ile Leu Val Ala Met Phe Met Gln

65 70 75 80

Thr Leu Ser Ile Lys Leu Gly Val Val Ala Arg Leu Asp Leu Ala Gln

85 90 95

Ala Ile Ala Gln Lys Val Pro Lys Ser Gly Arg Tyr Thr Leu Trp Ile

100 105 110

Ile Asn Glu Leu Ala Met Met Ala Thr Asp Met Thr Gly Val Val Gly

115 120 125

Thr Ala Ile Ala Leu Lys Leu Leu Phe Gly Leu Pro Leu Val Tyr Gly

130 135 140

Ile Leu Leu Thr Ile Phe Asp Val Leu Leu Val Leu Leu Phe Leu Arg

145 150 155 160

Phe Gly Ile Arg Arg Ile Glu Phe Ile Val Leu Ala Ala Ile Leu Ile

165 170 175

Val Gly Val Ile Phe Gly Ile Glu Val Thr Arg Ala Thr Pro Asn Ile

180 185 190

Val Glu Ile Ala Gly Gly Leu Ile Pro Thr Thr His Ile Val Thr Asn

195 200 205

His Glu Met Leu Ile Met Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Ile Met

210 215 220

Pro His Asn Val Tyr Leu His Ser Ser Leu Ala Gln Ser Arg Arg Tyr

225 230 235 240

Asp Tyr His Asn Pro Lys Gln Val Asn Glu Ala Leu Arg Phe Ala Lys

245 250 255

Trp Asp Ser Asn Val His Leu Val Ala Ala Phe Leu Ile Asn Ala Leu

260 265 270

Leu Leu Val Leu Gly Gly Thr Leu Phe Phe His Thr Asn Ser His Phe

275 280 285

Ser Ala Phe Gln Asp Val Tyr Asn Gly Leu Lys Ser Ser Ala Ile Val

290 295 300

Gly Ser Leu Ala Ser Pro Leu Met Ser Thr Leu Phe Ala Phe Ala Leu

305 310 315 320

Leu Ile Thr Gly Met Ile Ser Ser Ile Thr Ser Thr Leu Ser Gly Gln

325 330 335

Ile Val Met Glu Gly Tyr Leu His Ile Arg Leu Pro Leu Trp Glu Arg

340 345 350

Arg Leu Leu Thr Arg Phe Val Thr Leu Ile Pro Ile Leu Ala Ile Gly

355 360 365

Phe Leu Val Gly Phe Asn Asp His Asp Phe Glu Glu Ile Ile Val Tyr

370 375 380

Ala Gln Ile Ala Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Thr Leu Phe Pro Met

385 390 395 400

Val Ala Leu Thr Ser Asn His Asp Leu Met Gly Val His Thr Asn Arg

405 410 415

Arg Tyr Val Thr Val Ile Gly Tyr Leu Leu Thr Ser Ile Ile Thr Ile

420 425 430

Leu Asn Leu Gln Phe Val Leu Ala Ser Ile

435 440

<210> 15

<211> 439

<212> PRT

<213> 消化乳杆菌

<400> 15

Met Pro Asn Lys Lys Ser Leu Asp Glu Ile Asn Glu Ser Val Lys Val

1 5 10 15

Pro Ser Val Tyr Asp Thr Ser Phe Leu Gln Lys Phe Leu Ala Tyr Ser

20 25 30

Gly Pro Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp

35 40 45

Leu Thr Ser Leu Ser Gly Gly Ser Gln Tyr Arg Tyr Asp Leu Leu Ser

50 55 60

Val Leu Leu Ile Ser Ile Leu Val Ala Met Phe Met Gln Thr Leu Ser

65 70 75 80

Ile Lys Leu Gly Val Val Ala Arg Leu Asp Leu Ala Gln Ala Ile Ala

85 90 95

Thr Lys Val Ser Lys Pro Ile Arg Tyr Phe Leu Trp Ile Leu Asn Glu

100 105 110

Ile Ala Met Met Ala Thr Asp Leu Thr Gly Val Ile Gly Thr Ala Ile

115 120 125

Ala Leu Lys Leu Leu Phe Asn Leu Pro Leu Val Phe Gly Ile Leu Leu

130 135 140

Thr Val Phe Asp Val Leu Ile Val Leu Ile Phe Leu Arg Phe Gly Ile

145 150 155 160

Arg Arg Ile Glu Phe Ile Val Leu Ala Ala Ile Leu Thr Val Gly Ile

165 170 175

Ile Phe Gly Ile Glu Val Phe Arg Ala Gln Pro Lys Leu Phe Ser Ile

180 185 190

Ile Ser Gly Val Ile Pro Ser Thr Asp Leu Phe Thr Asn His Arg Lys

195 200 205

Leu Val Leu Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Ile Met Pro His Asn

210 215 220

Ile Tyr Leu His Ser Ser Leu Ala Gln Ser Arg Arg Tyr Asp His Asn

225 230 235 240

Asp Pro Leu Gln Val Asn Glu Ala Leu Arg Phe Ala Lys Trp Asp Ser

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Asn Val His Leu Ile Ala Ala Phe Ile Ile Asn Ala Leu Leu Leu Val

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Gly Met Ile Ser Ser Ile Thr Ser Thr Leu Ser Gly Gln Ile Val Met

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Ile Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Thr Leu Phe Pro Met Ile Phe Leu

385 390 395 400

Thr Asn Asp Lys Lys Ile Met Gly Asn His Val Asn Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Thr Thr Val Gly Ile Ile Leu Ala Ser Ala Ile Thr Ile Leu Asn Leu

420 425 430

Gln Leu Leu Phe Ser Leu Ile

435

<210> 16

<211> 441

<212> PRT

<213> 植物乳杆菌

<400> 16

Met Gln Ser His Arg His Gln Ser Leu Glu Glu Ile Asn Gln Ser Val

1 5 10 15

Ala Val Pro Asp Val His Gln Thr Ala Phe Trp Arg Lys Phe Leu Ala

20 25 30

Tyr Ser Gly Pro Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly

35 40 45

Asn Trp Leu Thr Ser Leu Ala Gly Gly Gly Gln Phe Gln Tyr Arg Leu

50 55 60

Leu Ala Val Leu Ala Leu Ala Ile Ile Val Ala Met Phe Met Gln Gly

65 70 75 80

Leu Ala Ile Arg Leu Gly Val Val Ala Arg Gln Asp Leu Ala Gln Ala

85 90 95

Ile Ala Ser Lys Leu Pro Arg Pro Val Arg Tyr Ala Ala Trp Ile Leu

100 105 110

Asn Glu Val Ala Met Met Ala Thr Asp Met Thr Gly Val Ile Gly Thr

115 120 125

Ala Ile Ala Leu Lys Met Leu Phe Gly Leu Pro Leu Leu Ala Gly Ile

130 135 140

Leu Leu Thr Ile Ala Asp Val Leu Val Val Leu Leu Phe Leu Arg Phe

145 150 155 160

Gly Ile Arg Arg Val Glu Val Ile Val Leu Val Ala Ile Leu Thr Val

165 170 175

Gly Ile Ile Phe Gly Ile Glu Val Gly Arg Ala His Val Gln Phe Gly

180 185 190

Asn Val Leu Leu Gly Leu Val Pro Thr Pro Leu Ile Val Lys Asn His

195 200 205

Thr Ala Leu Val Leu Ser Leu Gly Ile Leu Gly Ala Thr Ile Met Pro

210 215 220

His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ser Leu Ala Gln Ser Arg Arg Tyr Asp

225 230 235 240

Tyr His Asn Pro Ala Gln Val Thr Glu Ala Leu Arg Phe Ala Asn Trp

245 250 255

Asp Ser Thr Val His Leu Ile Ala Ala Phe Leu Ile Asn Ala Leu Leu

260 265 270

Leu Val Leu Gly Gly Thr Leu Phe Phe Gly His Thr Asn Ala Leu Ala

275 280 285

Ser Leu Gln Ala Val Phe Asp Gly Leu Lys Ser Thr Thr Val Val Gly

290 295 300

Ala Leu Ala Ser Pro Val Met Ser Trp Leu Phe Ala Leu Ala Leu Leu

305 310 315 320

Ile Thr Gly Leu Ile Ser Ser Ile Thr Ser Thr Leu Ala Gly Gln Ile

325 330 335

Val Met Glu Gly Tyr Leu His Ile Arg Leu Pro Leu Trp Gln Arg Arg

340 345 350

Leu Leu Thr Arg Ala Val Thr Leu Ile Pro Ile Leu Ile Ile Gly Met

355 360 365

Leu Val Gly Phe Ser Asp Ala Ala Phe Glu Asn Leu Ile Ile Tyr Ala

370 375 380

Gln Val Ala Leu Ser Ile Ala Leu Pro Phe Thr Leu Leu Pro Leu Val

385 390 395 400

Ala Leu Thr Asn Asp Ala Ser Leu Met Lys Ala His Val Asn Arg Pro

405 410 415

Ala Val Thr Trp Val Gly Tyr Gly Leu Ala Gly Ile Ile Thr Val Leu

420 425 430

Asn Ile Tyr Leu Val Tyr Ser Leu Phe

435 440

<210> 17

<211> 434

<212> PRT

<213> 罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)

<400> 17

Met Glu Arg Lys Ser Leu Asp Glu Ile Asn Gly Ser Val Asp Val Pro

1 5 10 15

Asn Val Tyr Gln Ser Ala Phe Trp Gln Lys Phe Leu Ala Tyr Ser Gly

20 25 30

Pro Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Leu

35 40 45

Thr Ser Leu Ala Gly Gly Ser Gln Tyr Arg Tyr Gln Leu Leu Val Val

50 55 60

Leu Phe Thr Ala Ile Leu Ile Ala Met Tyr Met Gln Ser Leu Ala Ile

65 70 75 80

Lys Leu Gly Val Thr Thr Arg Thr Asp Leu Ala Gln Ala Ile Ala Arg

85 90 95

Arg Leu Pro Thr Pro Leu Arg Ile Ala Leu Trp Leu Phe Asn Glu Ile

100 105 110

Ala Met Met Ala Thr Asp Leu Thr Gly Val Val Gly Thr Ala Val Ala

115 120 125

Leu Asn Met Leu Phe Lys Leu Pro Leu Leu Ile Gly Val Leu Leu Thr

130 135 140

Ile Ala Asp Val Leu Val Val Leu Phe Phe Leu His Phe Gly Ile Arg

145 150 155 160

Arg Ile Glu Phe Ile Val Leu Thr Ala Ile Leu Val Val Gly Ala Ile

165 170 175

Phe Ala Ile Glu Val Cys Arg Ala His Pro Glu Phe Ser Ala Ile Met

180 185 190

Asp Gly Phe Val Pro Arg Ser Thr Ile Phe Thr Asn His Ser Glu Leu

195 200 205

Leu Ile Ser Leu Gly Ile Val Gly Ala Thr Ile Met Pro His Asn Ile

210 215 220

Tyr Leu His Ser Ser Leu Ala Gln Ser Arg Arg Tyr Asp Glu His Asp

225 230 235 240

Pro Lys Gln Val Lys Glu Thr Leu Arg Phe Ala Asn Trp Asp Ser Leu

245 250 255

Ile His Leu Phe Ala Ala Phe Ile Val Asn Ala Leu Leu Leu Ile Leu

260 265 270

Gly Gly Thr Leu Phe Phe His Ala Ala Ser Leu Gly Ser Leu Glu Asp

275 280 285

Val Phe Phe Gly Leu Lys Asn Pro Gln Ile Val Gly Ser Leu Ala Ser

290 295 300

Pro Leu Met Ser Trp Leu Phe Ala Phe Ala Leu Leu Val Thr Gly Leu

305 310 315 320

Ile Ser Ser Ile Thr Ser Thr Leu Ala Gly Gln Ile Val Met Glu Gly

325 330 335

Phe Ile Asn Ile Arg Leu Pro Leu Trp Lys Arg Arg Leu Leu Thr Arg

340 345 350

Ala Val Thr Leu Val Pro Ile Leu Ile Ile Gly Phe Met Ile Asn Phe

355 360 365

Lys Glu Glu Gln Phe Glu Gln Leu Ile Ile Tyr Ala Gln Ile Val Leu

370 375 380

Ser Ile Ala Leu Pro Phe Thr Leu Tyr Pro Leu Val Ala Leu Thr Gly

385 390 395 400

Asn Lys Lys Leu Met Gly Pro His Val Asn Ser Arg Trp Gln Thr Val

405 410 415

Leu Gly Tyr Ile Leu Ala Ser Leu Val Thr Gly Leu Asn Leu Leu Val

420 425 430

Leu Val

<210> 18

<211> 440

<212> PRT

<213> 面包乳杆菌(Lactobacillus crustorum)

<400> 18

Met Thr Glu Lys Lys Ser Leu Asp Glu Ile Asn Gly Ser Val Ala Val

1 5 10 15

Pro Gln Tyr Asn Thr Ser Phe Phe Arg Lys Phe Leu Ala Tyr Ser Gly

20 25 30

Pro Gly Ala Leu Ile Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Leu

35 40 45

Thr Ser Leu Val Gly Gly Ala His His Lys Tyr Gln Leu Leu Ser Val

50 55 60

Leu Leu Ile Ser Ile Leu Val Ala Thr Phe Met Gln Ser Leu Ser Ile

65 70 75 80

Arg Leu Gly Ile Ala Ser Arg Gln Asp Leu Ala Gln Ala Ile Ala Lys

85 90 95

Lys Ala Lys Lys Pro Val Arg Tyr Cys Leu Trp Ile Ile Asn Glu Leu

100 105 110

Ala Met Met Ala Thr Asp Leu Thr Gly Val Ile Gly Thr Ala Leu Ala

115 120 125

Leu Asn Met Leu Phe Lys Leu Pro Leu Val Phe Gly Val Leu Ile Thr

130 135 140

Ile Leu Asp Val Phe Leu Ile Leu Trp Phe Met Arg Phe Gly Ile Arg

145 150 155 160

Arg Ile Glu Ser Ile Val Val Ile Ser Ile Leu Thr Val Gly Leu Ile

165 170 175

Phe Ala Phe Glu Val Ser His Val Gln Pro Asn Leu Thr Ala Ile Phe

180 185 190

Lys Gly Phe Val Pro Ser Gln Thr Ile Ile Thr Asn Gln Asn Lys Leu

195 200 205

Ile Leu Ser Leu Gly Ile Ile Gly Ala Thr Ile Met Pro His Asn Ile

210 215 220

Tyr Leu His Ser Ala Leu Ala Gln Ser Arg Arg Tyr Asp Tyr His Asp

225 230 235 240

Ser Arg Gln Val Arg Glu Ala Leu Arg Phe Ala Asn Trp Asp Ser Ile

245 250 255

Val His Leu Ile Ala Ala Leu Ile Ile Asn Cys Leu Leu Leu Ile Leu

260 265 270

Gly Gly Thr Ile Phe Tyr Asp Lys Ala Asp Gln Leu Ala Ser Leu Met

275 280 285

Thr Val Phe Lys Gly Leu Met Asn Tyr Gln Val Val Gly Ser Leu Ala

290 295 300

Ser Ser Phe Met Ser Tyr Leu Phe Ala Phe Ala Leu Leu Val Thr Gly

305 310 315 320

Leu Ile Ser Ser Ile Thr Ser Thr Leu Ser Gly Gln Ile Val Met Glu

325 330 335

Gly Tyr Leu Asn Ile Arg Leu Pro Leu Trp Gln Arg Arg Leu Leu Thr

340 345 350

Arg Ile Ile Thr Leu Ile Pro Ile Leu Val Ile Gly Phe Leu Val His

355 360 365

Phe Asn Glu Val Ile Phe Glu Asp Leu Ile Val Tyr Ala Gln Ile Ala

370 375 380

Leu Ser Val Ala Leu Pro Phe Thr Leu Phe Pro Leu Val Tyr Leu Thr

385 390 395 400

Asn Asn Ala Lys Ile Met Gly Lys His Val Asn Lys Lys Trp Gln Thr

405 410 415

Ile Leu Gly Phe Val Leu Ala Leu Ile Ile Thr Ile Leu Asn Ile Val

420 425 430

Leu Ile Ala Thr Thr Leu Ser His

435 440

<210> 19

<211> 535

<212> PRT

<213> 干酪乳杆菌

<400> 19

Met Ser Asp Asp His Lys Lys Arg His Pro Ile Lys Leu Ile Gln Tyr

1 5 10 15

Ala Asn Gly Pro Ser Leu Glu Glu Ile Asn Gly Thr Val Glu Val Pro

20 25 30

His Gly Lys Gly Phe Trp Arg Thr Leu Phe Ala Tyr Ser Gly Pro Gly

35 40 45

Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ser Thr Ser

50 55 60

Ile Thr Gly Gly Gln Asn Phe Gln Tyr Leu Leu Ile Ser Val Ile Leu

65 70 75 80

Met Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ala Ala Lys Leu

85 90 95

Gly Ile Val Ser Gln Met Asp Leu Ala Gln Ala Ile Arg Ala Arg Thr

100 105 110

Ser Lys Lys Leu Gly Ile Val Leu Trp Ile Leu Thr Glu Leu Ala Ile

115 120 125

Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Val Ile Gly Ala Ala Ile Ala Leu Tyr

130 135 140

Leu Leu Phe His Ile Pro Leu Val Ile Ala Val Leu Val Thr Val Leu

145 150 155 160

Asp Val Leu Val Leu Leu Leu Leu Thr Lys Ile Gly Phe Arg Lys Ile

165 170 175

Glu Ala Ile Val Val Ala Leu Ile Leu Val Ile Leu Leu Val Phe Val

180 185 190

Tyr Gln Val Ala Leu Ser Asp Pro Asn Met Gly Ala Leu Leu Lys Gly

195 200 205

Phe Ile Pro Thr Gly Glu Thr Phe Ala Ser Ser Pro Ser Ile Asn Gly

210 215 220

Met Ser Pro Ile Gln Gly Ala Leu Gly Ile Ile Gly Ala Thr Val Met

225 230 235 240

Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ala Ile Ser Gln Thr Arg Lys Ile

245 250 255

Asp His Lys Asn Pro Asp Asp Val Ala Gln Ala Val Lys Phe Ser Ala

260 265 270

Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Ser Phe Ala Phe Val Val Asn Cys Leu

275 280 285

Leu Leu Val Met Gly Val Ala Val Phe Lys Ser Gly Ala Val Lys Asp

290 295 300

Pro Ser Phe Phe Gly Leu Phe Gln Ala Leu Ser Asp Ser Ser Thr Leu

305 310 315 320

Ser Asn Gly Val Leu Ile Ala Val Ala Lys Ser Gly Ile Leu Ser Ile

325 330 335

Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr Ile Thr

340 345 350

Gly Thr Leu Thr Gly Gln Val Ile Met Glu Gly Phe Val His Met Lys

355 360 365

Met Pro Leu Trp Ala Arg Arg Leu Val Thr Arg Ile Ile Ser Val Ile

370 375 380

Pro Val Ile Val Cys Val Met Leu Thr Ala Arg Asp Thr Pro Ile Gln

385 390 395 400

Gln His Glu Ala Leu Asn Thr Leu Met Asn Asn Ser Gln Val Phe Leu

405 410 415

Ala Phe Ala Leu Pro Phe Ser Met Leu Pro Leu Leu Met Phe Thr Asn

420 425 430

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500 505 510

Gln Arg Tyr Glu Ala His Leu Ala Ala Val Ala Asp Glu Lys Glu Ala

515 520 525

Lys Ala Asp Val Asp Glu Gln

530 535

<210> 20

<211> 535

<212> PRT

<213> 鼠李糖乳杆菌

<400> 20

Met Ser Asp Asp His Lys Lys Lys His Ser Met Lys Leu Ile Gln Tyr

1 5 10 15

Ala Asn Gly Pro Ser Leu Glu Glu Ile Asn Gly Thr Val Glu Val Pro

20 25 30

His Gly Lys Gly Phe Trp Arg Thr Leu Phe Ala Tyr Ser Gly Pro Gly

35 40 45

Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ser Thr Ser

50 55 60

Ile Thr Gly Gly Gln Asn Phe Gln Tyr Leu Leu Ile Ser Val Ile Leu

65 70 75 80

Met Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ala Ala Lys Leu

85 90 95

Gly Ile Val Ser Gln Met Asp Leu Ala Gln Ala Ile Arg Ala Arg Thr

100 105 110

Ser Lys Lys Leu Gly Ile Val Leu Trp Ile Leu Thr Glu Leu Ala Ile

115 120 125

Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Val Ile Gly Ala Ala Ile Ala Leu Tyr

130 135 140

Leu Leu Phe His Ile Pro Leu Val Ile Ala Val Leu Val Thr Val Leu

145 150 155 160

Asp Val Leu Val Leu Leu Leu Leu Thr Lys Ile Gly Phe Arg Lys Ile

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Glu Ala Ile Val Val Ala Leu Ile Leu Val Ile Leu Leu Val Phe Val

180 185 190

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210 215 220

Met Ser Pro Ile Gln Gly Ala Leu Gly Ile Ile Gly Ala Thr Val Met

225 230 235 240

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245 250 255

Asp His Lys Asp Pro Glu Asp Val Ala Gln Ala Val Lys Phe Ser Ala

260 265 270

Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Thr Phe Ala Phe Val Val Asn Cys Leu

275 280 285

Leu Leu Val Met Gly Val Ala Val Phe Lys Ser Gly Ala Val Lys Asp

290 295 300

Pro Ser Phe Phe Gly Leu Phe Gln Ala Leu Ser Asp Ser Ser Thr Leu

305 310 315 320

Ser Asn Gly Val Leu Ile Ala Val Ala Lys Ser Gly Ile Leu Ser Ile

325 330 335

Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr Ile Thr

340 345 350

Gly Thr Leu Thr Gly Gln Val Ile Met Glu Gly Phe Ile His Met Lys

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Pro Val Ile Val Cys Val Met Leu Thr Ala Arg Glu Thr Pro Ile Gln

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405 410 415

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420 425 430

Ser Lys Val Glu Met Gly Asp Arg Phe Lys Asn Thr Gly Trp Val Lys

435 440 445

Val Leu Gly Trp Val Ser Val Ile Gly Leu Thr Tyr Leu Asn Leu Lys

450 455 460

Gly Leu Pro Asp Ser Ile Ala Gly Phe Phe Gly Asp Asn Pro Thr Ala

465 470 475 480

Ala Gln Thr Asn Ile Ala Asn Met Ile Ala Tyr Val Leu Ile Ala Ala

485 490 495

Val Leu Ala Leu Leu Ala Trp Thr Ile Trp Asp Leu Tyr Lys Gly Asn

500 505 510

Lys Arg Tyr Glu Ala His Leu Glu Ala Val Ala Asp Glu Glu Glu Ala

515 520 525

Lys Ala Asn Asp Asp Val Gln

530 535

<210> 21

<211> 530

<212> PRT

<213> 植物乳杆菌

<400> 21

Met Ser Glu Lys Thr Asn Thr Pro Asn Arg Lys His Lys Leu Ile Glu

1 5 10 15

Tyr Ala Asn Gly Pro Ser Leu Glu Glu Ile Asn Gly Thr Ile Glu Val

20 25 30

Pro Lys Asn Leu Asn Phe Trp Lys Thr Leu Phe Ala Tyr Ser Gly Pro

35 40 45

Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ser Thr

50 55 60

Ser Ile Thr Gly Gly Gln Asn Tyr Gln Tyr Met Leu Met Ser Val Ile

65 70 75 80

Leu Ile Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ala Ala Lys

85 90 95

Leu Gly Ile Val Ser Gln Met Asp Leu Ala Gln Ala Ile Arg Ala Arg

100 105 110

Thr Ser Lys Ser Leu Gly Ile Val Leu Trp Ile Leu Thr Glu Leu Ala

115 120 125

Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Val Ile Gly Ala Ala Ile Ala Leu

130 135 140

Tyr Leu Leu Phe Asn Ile Pro Leu Val Ile Ala Val Phe Ile Thr Val

145 150 155 160

Leu Asp Val Leu Val Leu Leu Leu Leu Thr Lys Ile Gly Phe Arg Lys

165 170 175

Ile Glu Ala Ile Val Val Cys Leu Ile Leu Val Ile Leu Phe Val Phe

180 185 190

Val Tyr Gln Val Ala Leu Ser Asn Pro Asp Trp Gly Gly Val Ile Lys

195 200 205

Gly Leu Val Pro Thr Ala Asp Thr Phe Ser Thr Ser Arg Ser Val Asn

210 215 220

Gly Met Thr Pro Leu Ser Gly Ala Leu Gly Ile Ile Gly Ala Thr Val

225 230 235 240

Met Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ala Ile Ser Gln Thr Arg Lys

245 250 255

Ile Asp His Asn Asp Glu Glu Asp Val Ala Arg Thr Val Lys Phe Ala

260 265 270

Ala Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Ser Phe Ala Phe Val Val Asn Ser

275 280 285

Leu Leu Leu Ile Met Gly Val Ala Val Phe Lys Ser Gly Ala Val Lys

290 295 300

Asp Pro Ser Phe Phe Gly Leu Tyr Glu Ala Leu Ser Asn Thr Ser Met

305 310 315 320

Leu Ser Asn Gly Ile Leu Ile Ser Val Ala Lys Ser Gly Ala Leu Ser

325 330 335

Ala Leu Phe Ala Ile Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr Ile

340 345 350

Thr Gly Thr Leu Thr Gly Gln Val Ile Met Glu Gly Phe Val His Met

355 360 365

Arg Met Pro Leu Trp Leu Arg Arg Leu Val Thr Arg Leu Ile Ser Val

370 375 380

Ile Pro Val Leu Ile Cys Val Leu Leu Thr Ser Gly Lys Ser Ala Ile

385 390 395 400

Asp Glu His Thr Ala Leu Asn Asn Leu Met Asn Asn Ser Gln Val Phe

405 410 415

Leu Ala Phe Ala Leu Pro Phe Ser Met Leu Pro Leu Leu Met Met Thr

420 425 430

Asp Ser Ala Ala Glu Met Gly Lys Arg Phe Lys Asn Ser Leu Trp Ile

435 440 445

Lys Gly Leu Gly Trp Leu Ser Val Ile Gly Leu Thr Phe Leu Asn Leu

450 455 460

Leu Gly Leu Pro Asp Ser Ile Leu Gly Phe Phe Gly Asp Asn Pro Ser

465 470 475 480

Ala Gly Glu Gln Thr Phe Ser Lys Ile Leu Ala Tyr Leu Leu Ile Ala

485 490 495

Ala Ile Leu Ala Leu Leu Val Trp Thr Val Phe Asp Leu Gln Arg Gly

500 505 510

Asn Lys Arg Tyr Val Glu Gln Gln Leu Ala Ala Ala Ala Lys Glu Ala

515 520 525

Asn Lys

530

<210> 22

<211> 530

<212> PRT

<213> 嗜酸片球菌

<400> 22

Met Ser Asn Glu Ile Lys Asn Pro Lys Lys Arg Arg Lys Leu Ile Ser

1 5 10 15

Tyr Ala Asn Gly Arg Ser Leu Glu Glu Ile Asn Gly Thr Val Lys Val

20 25 30

Pro Lys Asn Ile Gly Phe Trp Lys Thr Leu Phe Met Tyr Ser Gly Pro

35 40 45

Gly Ala Leu Val Ala Val Gly Tyr Met Asp Pro Gly Asn Trp Ser Thr

50 55 60

Ser Ile Thr Gly Gly Gln Asn Phe Gln Tyr Met Leu Met Ser Ile Ile

65 70 75 80

Leu Ile Ser Ser Leu Ile Ala Met Leu Leu Gln Tyr Met Ala Ala Lys

85 90 95

Leu Gly Ile Val Ser Gln Met Asp Leu Ala Gln Ala Ile Arg Ala Arg

100 105 110

Thr Ser Arg Ala Leu Gly Ile Val Leu Trp Ile Leu Thr Glu Leu Ala

115 120 125

Ile Met Ala Thr Asp Ile Ala Glu Val Ile Gly Ala Ala Ile Ala Leu

130 135 140

Tyr Leu Leu Phe His Ile Pro Leu Val Val Ala Val Phe Ile Thr Val

145 150 155 160

Phe Asp Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Lys Ile Gly Phe Arg Lys

165 170 175

Ile Glu Ala Ile Val Val Cys Leu Ile Met Val Ile Leu Val Val Phe

180 185 190

Val Tyr Gln Val Ala Leu Ser His Pro Ser Trp Gly Ala Val Phe Gly

195 200 205

Gly Leu Ile Pro Thr Thr Lys Ala Phe Ala Thr Thr Pro Thr Val Gly

210 215 220

Gly Met Thr Pro Leu Ser Gly Ser Leu Gly Ile Ile Gly Ala Thr Val

225 230 235 240

Met Pro His Asn Leu Tyr Leu His Ser Ala Val Ser Gln Thr Arg Lys

245 250 255

Ile Asn His Asp Asp Glu Glu Asp Val Ala Arg Thr Val Arg Phe Ser

260 265 270

Thr Trp Asp Ser Asn Ile Gln Leu Ser Phe Ala Phe Val Val Asn Ala

275 280 285

Leu Leu Leu Val Met Gly Val Ala Val Phe Lys Thr Gly Ala Val Gln

290 295 300

Asp Pro Ser Phe Phe Gly Leu Phe His Ala Leu Asn Asp Thr Ser Thr

305 310 315 320

Leu Ser Asn Gly Ile Leu Ile Gly Val Ala Lys Thr Gly Ile Leu Ser

325 330 335

Thr Leu Phe Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln Asn Ser Thr Ile

340 345 350

Thr Gly Thr Leu Thr Gly Gln Val Ile Met Glu Gly Phe Val His Met

355 360 365

Arg Met Pro Leu Trp Ala Arg Arg Leu Ile Thr Arg Leu Ile Ser Val

370 375 380

Val Pro Val Leu Ile Cys Val Met Leu Thr Ser Gly Lys Gly Thr Ile

385 390 395 400

Gln Glu His Glu Ala Leu Asn Asn Leu Met Asn Asn Ser Gln Val Phe

405 410 415

Leu Ala Phe Ala Leu Pro Phe Ser Met Val Pro Leu Leu Met Met Thr

420 425 430

Asp Ser Arg Val Glu Met Gly Asp Arg Phe Lys Asn Ser Trp Ile Val

435 440 445

Arg Ile Leu Gly Trp Ile Ser Val Ile Phe Leu Thr Tyr Leu Asn Leu

450 455 460

Thr Gly Leu Pro Asp Ser Ile Ala Ala Phe Phe Gly Glu Asn Ala Ser

465 470 475 480

Ala Ala Glu Ile Ser Met Ala His Asp Ile Ala Tyr Ala Leu Ile Val

485 490 495

Ala Val Leu Ala Leu Leu Ala Trp Thr Val Ile Glu Leu Tyr Lys Gly

500 505 510

Asn Lys Arg Tyr Glu Ile Glu Leu Ala Glu Lys Ala Asn Ala Lys Glu

515 520 525

Ala Ala

530

<210> 23

<211> 521

<212> PRT

<213> 唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)

<400> 23

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1 5 10 15

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