一种鸢尾组织培养繁殖方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种鸢尾组织培养繁殖方法。

背景技术

鸢尾又名：蓝蝴蝶、紫蝴蝶、扁竹花等，属百合目、鸢尾科、鸢尾属多年生草本，根状茎粗壮，-花蓝紫色，直径约10cm；蒴果长椭圆形或倒卵形。原产于中国中部以及日本，主要分布在中国中南部。可供观赏，花香气淡雅，可以调制香水，其根状茎可作中药，全年可采，具有消炎作用。目前该系列花卉植物的市场形势看好，但由于其主要以分株、种子进行繁殖，繁殖速度较慢，且费工费时，因此优质苗木供不应求，满足不了市场的需求。

发明内容

本发明克服了现有技术存在的不足，提供了一种能大量快速繁殖结构完整、再生率高、无菌种苗后代遗传稳定的鸢尾组织培养繁殖方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种鸢尾组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

1）外植体处理及消毒：选取健壮鸢尾植株地下新芽顶端作为外植体，先用去污粉水浸泡清洗5～10min，然后用流水下冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用12%过氧化氢消毒5～15min后用无菌水洗1～2次，再用0.15%升汞溶液消毒5～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

2）诱导培养：将步骤1中处理后的外植体，切成0.5-1cm的小段接种到诱导培养基上，接种后在20-25℃条件下黑暗培养1-2d，然后在18-20℃，光照12-14h，光照强度为1500lx条件下培养15-20天，至诱导形成丛生芽；

3）继代培养：将步骤2中培养得到的丛生芽，转接入增殖培养基中进行继代培养，接种后在18-20℃条件下黑暗培养1-2d，然后在15-18℃，光照13-16h，光照强度为1500-2000lx条件下培养15-20天，得到丛生芽；

4）生根培养：将步骤3中培养得到的丛生芽切割接种到生根培养基中，接种后在15-18℃条件下黑暗培养1-2d，然后在14-16℃，光照15-16h，光照强度为5000-7000lx条件下培养，至生根；

5）炼苗：将步骤4中生根的小苗，取其培养瓶放置于自然环境下3-5天，然后将苗取出移栽入由80%的泥炭土加20%的珍珠岩组成的基质中，每天用大量元素营养液给幼苗浇水，待幼苗成活后，获得扩繁苗。

所述步骤2中的诱导培养基为：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤3中的增值培养基为：WPM+ZT 0～1.0mg/L+TDZ 0.25～0.3mg/L+2，4-D 0～0.1mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤4中的生根培养基为：WPM+IBA0.5～1.5mg/L+NAA0.5～1.5mg/L，pH为5.6～5.8。

本发明与现有技术相比具有的有益效果是：本发明通过无性快繁技术快速获得大量鸢尾优良品种幼苗的方法。以鸢尾植株地下新芽顶端为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了鸢尾组织培养快繁技术体系，为今后鸢尾组织培养繁殖苗木，加速良种繁育满足市场需求提供技术支持。本发明所采用的无光预培养及低温培养，使得植株再生率高，降低了苗体的玻璃化和褐化风险。

具体实施方式

结合以下实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1

一种鸢尾组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

1）外植体处理及消毒：选取健壮鸢尾植株地下新芽顶端作为外植体，先用去污粉水浸泡清洗10min，然后用流水下冲洗3h后置于超净工作台中，先用12%过氧化氢消毒15min后用无菌水洗2次，再用0.15%升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

2）诱导培养：将步骤1中处理后的外植体，切成0.5-1cm的小段接种到诱导培养基上，接种后在25℃条件下黑暗培养2d，然后在20℃，光照12h，光照强度为1500lx条件下培养20天，至诱导形成丛生芽；

3）继代培养：将步骤2中培养得到的丛生芽，转接入增殖培养基中进行继代培养，接种后在20℃条件下黑暗培养2d，然后在18℃，光照16h，光照强度为1500-2000lx条件下培养20天，得到丛生芽；

4）生根培养：将步骤3中培养得到的丛生芽切割接种到生根培养基中，接种后在18℃条件下黑暗培养2d，然后在16℃，光照16h，光照强度为5000-7000lx条件下培养，至生根；

5）炼苗：将步骤4中生根的小苗，取其培养瓶放置于自然环境下3-5天，然后将苗取出移栽入由80%的泥炭土加20%的珍珠岩组成的基质中，每天用大量元素营养液给幼苗浇水，待幼苗成活后，获得扩繁苗。

所述步骤2中的诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤3中的增值培养基为：WPM+ZT1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L+2，4-D 0.1mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤4中的生根培养基为：WPM+IBA1.5mg/L+NAA1.5mg/L，pH为5.6～5.8。

实施例2

一种鸢尾组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

1）外植体处理及消毒：选取健壮鸢尾植株地下新芽顶端作为外植体，先用去污粉水浸泡清洗5min，然后用流水下冲洗1h后置于超净工作台中，先用12%过氧化氢消毒5min后用无菌水洗1次，再用0.15%升汞溶液消毒5min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

2）诱导培养：将步骤1中处理后的外植体，切成0.5-1cm的小段接种到诱导培养基上，接种后在20℃条件下黑暗培养1d，然后在18℃，光照12h，光照强度为1500lx条件下培养15天，至诱导形成丛生芽；

3）继代培养：将步骤2中培养得到的丛生芽，转接入增殖培养基中进行继代培养，接种后在18℃条件下黑暗培养1d，然后在15℃，光照13h，光照强度为1500-2000lx条件下培养15天，得到丛生芽；

4）生根培养：将步骤3中培养得到的丛生芽切割接种到生根培养基中，接种后在15℃条件下黑暗培养1d，然后在14℃，光照15h，光照强度为5000-7000lx条件下培养，至生根；

5）炼苗：将步骤4中生根的小苗，取其培养瓶放置于自然环境下3-5天，然后将苗取出移栽入由80%的泥炭土加20%的珍珠岩组成的基质中，每天用大量元素营养液给幼苗浇水，待幼苗成活后，获得扩繁苗。

所述步骤2中的诱导培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤3中的增值培养基为：WPM+ +TDZ 0.25mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤4中的生根培养基为：WPM+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L，pH为5.6～5.8。

实施例3

一种鸢尾组织培养繁殖方法，包括以下步骤：

1）外植体处理及消毒：选取健壮鸢尾植株地下新芽顶端作为外植体，先用去污粉水浸泡清洗6min，然后用流水下冲洗1.5h后置于超净工作台中，先用12%过氧化氢消毒10min后用无菌水洗1次，再用0.15%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

2）诱导培养：将步骤1中处理后的外植体，切成0.5-1cm的小段接种到诱导培养基上，接种后在21℃条件下黑暗培养2d，然后在19℃，光照12h，光照强度为1500lx条件下培养18天，至诱导形成丛生芽；

3）继代培养：将步骤2中培养得到的丛生芽，转接入增殖培养基中进行继代培养，接种后在19℃条件下黑暗培养2d，然后在16℃，光照15h，光照强度为1500-2000lx条件下培养18天，得到丛生芽；

4）生根培养：将步骤3中培养得到的丛生芽切割接种到生根培养基中，接种后在16℃条件下黑暗培养2d，然后在15℃，光照15h，光照强度为5000-7000lx条件下培养，至生根；

5）炼苗：将步骤4中生根的小苗，取其培养瓶放置于自然环境下3-5天，然后将苗取出移栽入由80%的泥炭土加20%的珍珠岩组成的基质中，每天用大量元素营养液给幼苗浇水，待幼苗成活后，获得扩繁苗。

所述步骤2中的诱导培养基为：MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.3mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤3中的增值培养基为：WPM+ZT 0.7mg/L+TDZ 0.28mg/L+2，4-D 0.045mg/L，pH为5.6～5.8。

所述步骤4中的生根培养基为：WPM+IBA0.9mg/L+NAA 1mg/L，pH为5.6～5.8。

上述实施方式仅示例性说明本发明的原理及其效果，而非用于限制本发明。对于熟悉此技术的人皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改进。因此，凡举所述技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。