一种基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法

技术领域

本发明涉及含油脂样品中农残检测领域，特别是一种基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法。

背景技术

农业产业化的发展使农产品的生产越来越依赖于农药、抗生素和激素等外源物质。我国农药在农产品的用量居高不下，而这些物质的不合理使用必将导致农产品中的农药残留超标，影响消费者食用安全，严重时会造成消费者致病、发育不正常，甚至直接导致中毒死亡，农药残留超标也会影响农产品的贸易，世界各国对农药残留问题高度重视，对各种农副产品中农药残留都规定了越来越严格的限量标准，使中国农产品出口面临严峻的挑战，农药残留快速检测方法种类繁多，气相色谱质普检测法为其中的一种，现有的气相色谱质普检测法可以检测绝大多数的食品农残，但对于一些含油脂的食品中，不能够有效的将油脂过滤，从而导致农残检测的数据偏差较大，进而影响农残检测的精确性。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法。

实现上述目的本发明的技术方案为，一种基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法，包括PSA/C18复合柱、食用调和油样品、猪肉样品、牛奶样品以及黄豆样品，所述基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法步骤如下；

步骤1：提取样品：

食用调和油样品提取：

A1：称取1g食用调和油样品，加入15mL乙腈，振荡5min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

A2：再向下层加入15mL乙腈，重复A1步骤提取一次，收集上层清液，将A1收集的上层清液以及重复A1收集的上层清液合并；

A3：将A2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得食用调和油样品提取液，待净化。

猪肉样品提取：

B1：称取2g猪肉样品，加入4g氯化钠、15mL乙腈，振荡5min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

B2：再向下层加入15mL乙腈，重复B1步骤提取一次，收集上层清液，将B1收集的上层清液以及重复B1收集的上层清液合并；

B3：将B2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得猪肉样品提取液，待净化。

牛奶样品提取：

C1：称取5g牛奶样品，加入15mL乙腈，振荡3min，再加2mL200g/L乙酸铅溶液，4g氯化钠，振荡2min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

C2：再向下层加入15mL乙腈，重复C1步骤提取一次，收集上层清液，将C1收集的上层清液以及重复C1收集的上层清液合并；

C3：将C2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得牛奶样品提取液，待净化。

黄豆样品提取：

D1：称取2g样品，加入5mL水，浸泡10min，加入25mL乙腈，振荡10min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

D2：再向下层加入25mL、15mL乙腈，重复D1步骤提取两次，合并D1以及重复D1步骤提取两次的三次上清液；

D3：将D2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得黄豆样品提取液，待净化。

步骤2：净化

a活化：向PSA/C18复合柱加入10mL乙腈，弃去流出液；

b上样：向PSA/C18复合柱加入食用调和油样品提取液、猪肉样品提取液、牛奶样品提取液或黄豆样品提取液，收集流出液；

c洗脱：向PSA/C18复合柱加入20mL乙腈，收集流出液；

d重新溶解：将b以及c的流出液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，混匀，供GC-MS分析。

步骤3：色谱仪检测

将步骤2净化完毕的食用调和油样品提取液、猪肉样品提取液、牛奶样品提取以及黄豆样品提取液分别放入GC-MS仪器中进行分析，色谱条件为：

色谱柱：DM-5MS,30m×0.32mm×0.25μm

进样口温度：240℃

升温程序：初始温度70℃，保持2min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12min。

载气：氦气，流速：1.46mL/min

进样方式：不分流进样

进样量：1.0μL

离子源温度：230℃

接口温度：280℃

溶剂延迟：5.9min

优选的,所述PSA/C18复合柱包括柱管体积为12mL，PSA在上层，质量为1g，中间有筛板，C18在下层，质量为2g。

优选的,所述步骤1中还可以包括：

A3：将A2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化；

B3：将B2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化；

C3：将C2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化；

D3：将D2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化。

优选的,所述基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法适用于食用调和油、猪肉、牛奶、黄豆中敌敌畏、灭线磷、氟乐灵、甲拌磷、a-六六六、六氯苯、乐果、β-六六六、林丹、五氯硝基苯、乙拌磷、δ-六六六、百菌清、氯唑磷、异稻瘟净、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、七氯、甲基立枯磷、皮蝇磷、杀螟硫磷、甲基嘧啶磷、艾氏剂、马拉硫磷、倍硫磷、三氯杀螨醇、毒死蜱、对硫磷、嘧啶磷、环氧七氯、三唑醇、腐霉利、杀扑磷、a-硫丹、氯丹、狄氏剂、丙溴磷、p,p'-DDE、异狄氏剂、β-硫丹、p,p'-DDD、o,p-DDT、乙硫磷、三唑磷、硫丹硫酸盐、p,p'-DDT、苯硫磷、伏杀硫磷、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲环唑、溴氰菊酯的检测。

优选的,所述PSA为硅胶键合乙二胺-N-丙基微球。

优选的,所述C18为硅胶键合十八烷基微球。

有益效果

利用本发明的技术方案制作的一种基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法，通过PSA/C18复合柱对样品提取液进行过滤，其中PSA/C18复合柱中的PSA为硅胶键合乙二胺-N-丙基微球，具有弱阴离子交换和正相保留作用，去除食品基质中影响检测的脂肪酸(如油酸，棕榈酸，亚油酸)，有机酸，部分色素，金属离子，糖类干扰物等，C18为硅胶键合十八烷基微球，通过疏水作用保留非极性化合物，二者结合可以将食品中的油脂以及杂质进行过滤，降低农残检测的数据偏差，进而提高农残检测的精确性。

附图说明

图1是本发明选择离子监测组表。

图2是本发明多种农药残留标准(10ug/mL)TIC图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

基于复合SPE检测富含油脂样品中农残的方法适用于食用调和油、猪肉、牛奶、黄豆中敌敌畏、灭线磷、氟乐灵、甲拌磷、a-六六六、六氯苯、乐果、β-六六六、林丹、五氯硝基苯、乙拌磷、δ-六六六、百菌清、氯唑磷、异稻瘟净、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、七氯、甲基立枯磷、皮蝇磷、杀螟硫磷、甲基嘧啶磷、艾氏剂、马拉硫磷、倍硫磷、三氯杀螨醇、毒死蜱、对硫磷、嘧啶磷、环氧七氯、三唑醇、腐霉利、杀扑磷、a-硫丹、氯丹、狄氏剂、丙溴磷、p,p'-DDE、异狄氏剂、β-硫丹、p,p'-DDD、o,p-DDT、乙硫磷、三唑磷、硫丹硫酸盐、p,p'-DDT、苯硫磷、伏杀硫磷、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲环唑、溴氰菊酯的检测。

实施例1：

步骤1：提取样品：

食用调和油样品提取：

A1：称取1g食用调和油样品，加入15mL乙腈，振荡5min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

A2：再向下层加入15mL乙腈，重复A1步骤提取一次，收集上层清液，将A1收集的上层清液以及重复A1收集的上层清液合并；

A3：将A2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得食用调和油样品提取液，待净化，还可以在PSA/C18复合柱时可将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化。

步骤2：净化

PSA/C18复合柱包括柱管体积为12mL，PSA在上层，质量为1g，中间有筛板，C18在下层，质量为2g，PSA为硅胶键合乙二胺-N-丙基微球，C18为硅胶键合十八烷基微球。

a活化：向PSA/C18复合柱加入10mL乙腈，弃去流出液；

b上样：向PSA/C18复合柱加入食用调和油样品提取液收集流出液；

c洗脱：向PSA/C18复合柱加入20mL乙腈，收集流出液；

d重新溶解：将b以及c的流出液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，混匀，供GC-MS分析。

步骤3：色谱仪检测

将步骤2净化完毕的食用调和油样品提取液放入GC-MS仪器中进行分析，色谱条件为：

色谱柱：DM-5MS,30m×0.32mm×0.25μm

进样口温度：240℃

升温程序：初始温度70℃，保持2min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12min。

载气：氦气，流速：1.46mL/min

进样方式：不分流进样

进样量：1.0μL

离子源温度：230℃

接口温度：280℃

溶剂延迟：5.9min

电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1。

实施例2：

步骤1：提取样品

猪肉样品提取：

B1：称取2g猪肉样品，加入4g氯化钠、15mL乙腈，振荡5min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

B2：再向下层加入15mL乙腈，重复B1步骤提取一次，收集上层清液，将B1收集的上层清液以及重复B1收集的上层清液合并；

B3：将B2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得猪肉样品提取液，待净化，还可以在PSA/C18复合柱时可将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化。

步骤2：净化

PSA/C18复合柱包括柱管体积为12mL，PSA在上层，质量为1g，中间有筛板，C18在下层，质量为2g，PSA为硅胶键合乙二胺-N-丙基微球，C18为硅胶键合十八烷基微球。

a活化：向PSA/C18复合柱加入10mL乙腈，弃去流出液；

b上样：向PSA/C18复合柱加入猪肉样品提取液收集流出液；

c洗脱：向PSA/C18复合柱加入20mL乙腈，收集流出液；

d重新溶解：将b以及c的流出液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，混匀，供GC-MS分析。

步骤3：色谱仪检测

将步骤2净化完毕的猪肉样品提取液分别放入GC-MS仪器中进行分析，色谱条件为：

色谱柱：DM-5MS,30m×0.32mm×0.25μm

进样口温度：240℃

升温程序：初始温度70℃，保持2min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12min。

载气：氦气，流速：1.46mL/min

进样方式：不分流进样

进样量：1.0μL

离子源温度：230℃

接口温度：280℃

溶剂延迟：5.9min

电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1。

实施例3：

步骤1：提取样品：

牛奶样品提取：

C1：称取5g牛奶样品，加入15mL乙腈，振荡3min，再加2mL200g/L乙酸铅溶液，4g氯化钠，振荡2min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

C2：再向下层加入15mL乙腈，重复C1步骤提取一次，收集上层清液，将C1收集的上层清液以及重复C1收集的上层清液合并；

C3：将C2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得牛奶样品提取液，待净化，还可以在PSA/C18复合柱时可将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化。

步骤2：净化

PSA/C18复合柱包括柱管体积为12mL，PSA在上层，质量为1g，中间有筛板，C18在下层，质量为2g，PSA为硅胶键合乙二胺-N-丙基微球，C18为硅胶键合十八烷基微球。

a活化：向PSA/C18复合柱加入10mL乙腈，弃去流出液；

b上样：向PSA/C18复合柱加入牛奶样品提取液收集流出液；

c洗脱：向PSA/C18复合柱加入20mL乙腈，收集流出液；

d重新溶解：将b以及c的流出液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，混匀，供GC-MS分析。

步骤3：色谱仪检测

将步骤2净化完毕的牛奶样品提取液分别放入GC-MS仪器中进行分析，色谱条件为：

色谱柱：DM-5MS,30m×0.32mm×0.25μm

进样口温度：240℃

升温程序：初始温度70℃，保持2min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12min。

载气：氦气，流速：1.46mL/min

进样方式：不分流进样

进样量：1.0μL

离子源温度：230℃

接口温度：280℃

溶剂延迟：5.9min

电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1。

实施例4：

步骤1：提取样品：

黄豆样品提取：

D1：称取2g样品，加入5mL水，浸泡10min，加入25mL乙腈，振荡10min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

D2：再向下层加入25mL、15mL乙腈，重复D1步骤提取两次，合并D1以及重复D1步骤提取两次的三次上清液；

D3：将D2收集的上层清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，获得黄豆样品提取液，待净化，还可以在PSA/C18复合柱时可将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至约5mL，待净化。

步骤2：净化

PSA/C18复合柱包括柱管体积为12mL，PSA在上层，质量为1g，中间有筛板，C18在下层，质量为2g，PSA为硅胶键合乙二胺-N-丙基微球，C18为硅胶键合十八烷基微球。

a活化：向PSA/C18复合柱加入10mL乙腈，弃去流出液；

b上样：向PSA/C18复合柱加入黄豆样品提取液收集流出液；

c洗脱：向PSA/C18复合柱加入20mL乙腈，收集流出液；

d重新溶解：将b以及c的流出液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，混匀，供GC-MS分析。

步骤3：色谱仪检测

将步骤2净化完毕的黄豆样品提取液分别放入GC-MS仪器中进行分析，色谱条件为：

色谱柱：DM-5MS,30m×0.32mm×0.25μm

进样口温度：240℃

升温程序：初始温度70℃，保持2min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12min。

载气：氦气，流速：1.46mL/min

进样方式：不分流进样

进样量：1.0μL

离子源温度：230℃

接口温度：280℃

溶剂延迟：5.9min

电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1。

实施例1、实施例2、实施例3、实施例4中多种农药残留GC-MS检测的添加回收结果如下：

如图2所示，按照实施例1的检测方法进行测定，获取了检测样品的质谱图，从图中可得，60种农残分离效果好。实施例2、实施例3以及实施例4的测试结果与实施例1类似，在此不再赘述

上述技术方案仅体现了本发明技术方案的优选技术方案，本技术领域的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本发明的原理，属于本发明的保护范围之内。