米卡芬净有关物质的分析方法

本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及米卡芬净有关物质的分析方法。

米卡芬净(Micafungin)是通过对Coleophoma empetri的天然产物进行适当改造，再经过化学合成得到的新型棘白菌素类抗真菌药物；其对念珠菌如白念珠菌、光滑念珠菌、热代念珠菌、克柔念珠菌和近平滑念珠菌有较好的抑制活性，另外，对于曲霉也有优良的体外抑制活性。因此，拥有广阔的市场前景。

为了保证米卡芬净持续研发和生产质量，需要对原料药及其制剂的质量进行控制。现在各国对杂质谱研究愈加重视，对米卡芬净来说，也是如此。因此，研究一种米卡芬净的有关物质测定的方法，这对医药生产企业来说显得非常必要。通过查阅中外文献及专利，目前对米卡芬净有关物质的检测方法比较缺乏，不利于企业对产品质量的把控，所以亟需一种有效测定米卡芬净有关物质的分析方法。

米卡芬净有关物质的分析方法，包括以下步骤：

利用带紫外检测器的反相高效液相色谱进行测定，选用十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱，按照体积分数设置梯度洗脱；

流动相由流动相A和流动相B组成，其中：流动相A为缓冲盐，流动相B为有机相；以及

采用面积归一法进行分析计算。

图1示出了本公开的实施例1的米卡芬净供试品溶液的色谱图；

图2示出了本公开的实施例2的米卡芬净供试品溶液的色谱图。

在以下的说明中，包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案提供全面的理解。然而，相关领域的技术人员会认识到，不采用一个或多个这些具体的细节，而采用其他方法、部件、材料等的情况下仍实现实施方案。

除非本公开中另有要求，在整体说明书和所附的权利要求中，词语“包括”、“包含”、“含有”和“具有”应解释为开放式的、含括式的意义，即“包括但不限于”。

在整体说明书中提到的“一实施方案”、“实施方案”、“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”意指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，在整个说明书中不同位置出现的短语“在一实施方案中”或“在实施方案中”或“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”不必全部指同一实施方案，此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。

在本公开中，术语“反相液相色谱”是指流动相为极性、固定相为非极性的液相色谱。反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式。反相色谱柱是指以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

在本公开中，术语“梯度洗脱”是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成和流速按照的梯度洗脱方式。

在本公开中，术语“空白溶液”是指在高效液相色谱检测分析方法中，为消除干扰，用与测定试样时完全一致的条件进行测定的溶液。测得结果称为"空白值"，应从试样测定结果中扣除，以此提高测定的准确性。

在本公开中，术语“供试品溶液”是指在高效液相色谱检测分析方法中，待测样品的溶液。

在本公开中，术语“流动相”是指在液相色谱过程中携带待测组分向前移动的物质。

在本公开中，术语“面积归一化法”是指用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。

具体实施方式

米卡芬净有关物质的分析方法，包括以下步骤：

利用带紫外检测器的反相高效液相色谱进行测定，选用十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱，按照体积分数设置梯度洗脱；

流动相由流动相A和流动相B组成，其中：流动相A为缓冲盐，流动相B为有机相；以及

采用面积归一法进行分析计算。

在某些实施方案中，还包括液相色谱检测前溶液的制备，所述溶液包括：

空白溶液，所述空白溶液是由稀释剂组成；

供试品溶液，所述供试品溶液是由米卡芬净和稀释剂组成。

在某些实施方案中，米卡芬净选自米卡芬净或米卡芬净注射剂；稀释剂选自乙腈、甲醇、乙醇、水或其混合物。

在某些实施方案中，米卡芬净选自米卡芬净或米卡芬净注射剂；稀释剂选自乙腈。

在某些实施方案中，流动相A中缓冲盐包括水和磷酸盐缓冲液，磷酸盐选自磷酸二氢钠或磷酸二氢钾缓冲液。

在某些实施方案中，流动相A中缓冲盐包括水和磷酸盐缓冲液，磷酸盐选自磷酸二氢钠。

在某些实施方案中，流动相A的pH值为4.5，pH值通过磷酸进行调节。

在某些实施方案中，流动相B中有机相选自甲醇、乙醇、乙腈、水或其混合物。

在某些实施方案中，流动相B中有机相选自乙腈。

在某些实施方案中，流动相A与流动相B的体积比为90:10至97:3。

在某些实施方案中，流动相A与流动相B的体积比为95:5。

在某些实施方案中，色谱柱的检测波长为208nm至220nm。

在某些实施方案中，色谱柱的检测波长为215nm。

在某些实施方案中，色谱柱的流速为0.8至1.2mL/min。

在某些实施方案中，色谱柱的流速为1.0mL/min。

在某些实施方案中，色谱柱的柱温为30℃至40℃。

在某些实施方案中，色谱柱的柱温为35℃。

在某些实施方案中，色谱柱的进样量为8μL至15μL。

在某些实施方案中，色谱柱的进样量为10μL。

实施例1

实施例中所述检测方法的色谱条件：

所用的仪器为：安捷伦Agilent 1260II高效液相色谱仪；带紫外检测器；色谱柱：YMC-Pack ODS，规格为250mm×4.6mm 5μm；流动相A为1000mL水中加入3.8g磷酸二氢钠，用磷酸调pH＝4.5；流动相B为乙腈。按照体积分数等度洗脱，其中A∶B＝95∶5；检测波长208nm，流速为1.0mL/min；柱温为30℃；进样体积为10μL；

溶液配制：

空白溶液：乙腈；

供试品溶液的配制：精密称取一定量的米卡芬净，加稀释剂溶解并稀释成每1mL中约含1mg米卡芬净的溶液，作为供试品溶液。

进样顺序

精密吸取空白溶液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测定，记录色谱图。

相关数据如表1所示：

表1

Signal：DAD1A.Sig＝210,4 Ref＝off

根据色谱图，按照面积归一化法计算米卡芬净发酵液的有关物质。

结果表明，空白溶剂不干扰米卡芬净的检测。供试品溶液中，米卡芬净峰与相邻杂质的分离度最小为2.78，大于1.5，峰形良好，峰纯度良好，理论塔板数11280，大于1500，均符合标准。该供试品各杂质可从表中直接读出。

实施例2

实施例中所述检测方法的色谱条件：

所用的仪器为：安捷伦Agilent 1260II高效液相色谱仪；色谱柱：Phenomenexluna 5u C18规格为250mm×4.6mm；流动相A为1000mL水中加入3.8g磷酸二氢钠，用磷酸调pH＝4.5；流动相B为乙腈。等度洗脱，其中A∶B＝90∶10；检测波长210nm，流速为1.2mL/min；柱温为40℃；进样体积为15μL；

实验步骤：

溶液配制：

空白溶液：甲醇

供试品溶液的配制：精密移取一定量的米卡芬净注射剂，加稀释剂溶解并稀释成每1mL中约含0.3mg米卡芬净的溶液，作为供试品溶液。

精密吸取空白溶液、供试品溶液各15μL，注入高效液相色谱仪进行测定，得到色谱图。

相关数据如表2所示：

表2

Signal：VWD1A，Wavelength＝210nm

根据色谱图，按照面积归一化法计算米卡芬净注射剂的有关物质。

结果表明，空白溶剂不干扰米卡芬净的有关物质检测。供试品溶液中，米卡芬净与相邻杂质的分离度最小为2.06，大于1.5，峰形良好，峰纯度良好，理论塔板数为1878，大于1500，均符合标准。该供试品各杂质可从表中直接读出。

综上所述：本发明提供的米卡芬净的有关物质的分析方法，适用于米卡芬净的有关物质检测分析，大大提高检测效率；其次该法具有准确度高、精密度高、操作简单、快速的优点。能够有效地控制该产品的质量。

从前述中可以理解，尽管为了示例性说明的目的描述了本公开的具体实施方案，但是在不偏离本公开的精神和范围的条件下，本领域所述技术人员可以作出各种变形或改进、这些变形或修改都应落入本公开所附权利要求的范围。