多链嵌合多肽和其用途

本申请要求以下的优先权：2018年8月30日提交的美国专利申请第62/724,969号的优先权；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,230号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,043号；2018年8月30日提交的美国专利申请第62/725,010号；2018年10月22日提交的美国专利申请第62/749,007号；2018年10月17日提交的美国专利申请第62/746,832号；2018年10月23日提交的美国专利申请第62/749,506号；2019年3月12日提交的美国专利申请第62/817,241号；2019年3月11日提交的美国专利申请第62/816,683号；和2019年7月31日提交的美国专利申请第62/881,088号，其中每一个均通过引用整体并入本文中。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，更具体地，涉及抗原结合分子。

背景技术

组织因子(TF)是263个氨基酸的整体膜糖蛋白，分子量为约46kDa，并且是外源性凝血路径的触发蛋白，是体内凝血的主要引发子。通常不与循环血液接触的组织因子在暴露于循环凝血丝氨酸蛋白酶因子时引发凝血级联反应。血管损伤暴露了表达组织因子的内皮下细胞，从而引起与先前存在的血浆因子VIIa(FVIIa)形成钙依赖性高亲和性复合物。丝氨酸蛋白酶FVIIa与组织因子的结合促进FX快速裂解为FXa和FIX快速裂解为FIXa。然后，所得FXa和活性膜表面的蛋白水解活性低效地将少量凝血酶原转化为凝血酶。Fxa生成的凝血酶引发血小板激活，并且将微量原辅助因子V(FV)和因子VIII(FVIII)激活成为活性辅助因子Va(FVa)和因子VIIIa(FVIIIa)。FIXa与血小板表面上的FVIIIa复合形成内源性X酶(tenase)复合物，从而引起FXa的快速生成。FXa与FVa形成复合物，在激活的血小板表面形成凝血酶原复合物，从而引起凝血酶原快速裂解为凝血酶。

除了组织因子-FVIIa复合物外，最近的一项研究表明，组织因子-FVIIa-FXa复合物可激活FVIII，这将在引发阶段提供另外水平的FVIIIa。外源性路径通过有限量的凝血酶的激活来引发凝血至关重要，而内源性路径通过初始信号的急剧放大来维持凝血。

细胞表面上表达的许多组织因子被“加密”，为了完全参与凝血，其必须被“解密”。目前，细胞表面组织因子“解密”的机制尚不清楚，但是，阴离子磷脂的暴露在这一过程中起重要作用。健康细胞会主动将阴离子磷脂(如磷脂酰丝氨酸(PS))隔离到质膜的内叶。在细胞损伤、激活或胞质Ca

发明内容

本发明基于以下发现：可溶性组织因子可用作包括抗原结合结构域的嵌合多肽的支架。基于这一发现，本文提供多链嵌合多肽，其包括：(a)第一嵌合多肽，其包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)可溶性组织因子结构域；和(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；以及(b)第二嵌合多肽，其包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和(ii)第二靶标结合结构域，其中第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合。本文还提供组合物，其包括本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种、编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸和包括编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸中的任一种的细胞。本文还提供刺激免疫细胞的方法和治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括使用本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种。本文还提供产生本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的方法。

因此，本文提供一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或配体蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。在一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素、细胞因子受体或可溶性细胞表面受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含在可溶性组织因子结构域与一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一嵌合多肽在第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第一靶标结合结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与第一靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于第一嵌合多肽的N和/或C端，并且一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个另外的靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含安置于第一嵌合多肽中的至少一个另外的靶标结合结构域与第一靶标结合结构域或一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列。在一些实施例中，位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个，直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)可溶性组织因子结构域与一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间，和/或(ii)一对亲和结构域中的第一结构域与一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接一对亲和结构域中的第二结构域。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含第二嵌合多肽中的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与一对亲和结构域中的第二结构域之间的接头序列。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接第二靶标结合结构域。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含第二嵌合多肽中一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与第二靶标结合结构域之间的接头序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。在一些实施例中，抗原结合结构域包含scFv。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素、可溶性细胞因子蛋白或配体蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素、可溶性细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含在第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含在第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一个或多个：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。在一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的凝血。在本文提供的任何单链嵌合多肽的一些实施例中，人可溶性组织因子结构域不引发凝血。在本文提供的任何单链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域包含可溶性野生型人组织因子或由可溶性野生型人组织因子组成。

在一些实施例中，所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域(sushi domain)和可溶性IL-15。在一些实施例中，可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。在一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在一些实施例中，所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶(barnase)和芽胞杆菌RNA酶抑制子(barnstar)、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。在一些实施例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽构成组合物。在一些实施例中，组合物是药物组合物。在一些实施例中，组合物包含至少一个剂量的多链嵌合多肽。在一些实施例中，试剂盒包含至少一个剂量的组合物。

在一些实施例中，本文提供一种刺激免疫细胞的方法，所述方法包含：使免疫细胞与有效量的上述多链嵌合多肽或组合物中的任一种接触。在一些实施例中，所述方法包含体外接触免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含从受试者获得免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含体内接触免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含从以下组成的组选择免疫细胞：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

本文还提供诱导或增加免疫细胞增殖的方法，所述方法包含：使免疫细胞与有效量的上述多链嵌合多肽或组合物中的任一种接触。在一些实施例中，所述方法包含体外接触免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含从受试者获得免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含体内接触免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含从以下组成的组选择免疫细胞：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

本文还提供诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，所述方法包含：使免疫细胞与有效量的以上论述的多链嵌合多肽或组合物中的任一种接触。在一些实施例中，所述方法包含体外接触免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含从受试者获得免疫细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包含在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含体内接触免疫细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞，Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞，CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。在一些实施例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实施例中，所述方法进一步包含在接触步骤之后将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞中。在一些实施例中，所述方法进一步包含向有需要的受试者施用免疫细胞。在一些实施例中，所述方法包含将所述受试者患有鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。在一些实施例中，与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。在一些实施例中，所述方法包含将受试者鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，所述方法包含将受试者诊断或鉴别为患有感染性疾病。在一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

本文还提供在有需要的受试者中杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效量的以上论述的多链嵌合多肽或组合物中的任一种。在一些实施例中，所述方法包含将受试者鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，所述方法包含将所述受试者患有鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。在一些实施例中，所述方法包含向受试者施用治疗有效量的以上论述的多链嵌合多肽或组合物中的任一种。在一些实施例中，所述方法包含将受试者鉴别或诊断为患有癌症。在一些实施例中，癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，所述方法包含将所述受试者患有鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。在一些实施例中，与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。在一些实施例中，所述方法包含将受试者诊断或鉴别为患有感染性疾病。在一些实施例中，感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

本文还提供编码以上论述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸。一些实施例包含含有以上论述的核酸中的任一种的载体。在一些实施例中，载体是表达载体。一些实施例包含含有以上论述的核酸中的任一种的细胞。

本文还提供产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养以上论述的细胞；和从细胞和/或培养基中回收多链嵌合多肽。在一些实施例中，所述方法包含通过以上论述的方法产生多链嵌合多肽。

在一些实施例中，突变可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少95％相同的序列。在一些实施例中，根据权利要求140所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3100％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少80％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少90％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少95％相同的序列。在一些实施例中，可溶性人组织因子结构域包含与SEQID NO:4 100％相同的序列。

如本文所用，术语“嵌合”是指包括最初衍生自两个不同来源(例如，两个不同的天然存在的蛋白质，例如，来自相同或不同物种)的氨基酸序列(例如，结构域)的多肽。例如，嵌合多肽可包括来自至少两种不同的天然存在的人蛋白质的结构域。在一些实例中，嵌合多肽可包括作为合成序列的结构域(例如，scFv)和衍生自天然存在的蛋白质(例如，天然存在的人蛋白质)的结构域。在一些实施例中，嵌合多肽可包括至少两个不同的结构域，其为合成序列(例如，两个不同的scFv)。

“抗原结合结构域”是能够与一种或多种不同抗原特异性结合的一个或多个蛋白质结构域(例如，由来自单个多肽的氨基酸形成或由来自两个或更多个多肽(例如，相同或不同的多肽)的氨基酸形成)。在一些实例中，抗原结合结构域可以与天然存在的抗体相似的特异性和亲和力结合到抗原或表位。在一些实施例中，抗原结合结构域可为抗体或其片段。在一些实施例中，抗原结合结构域可包括替代支架。抗原结合结构域的非限制性实例在本文中描述。抗原结合结构域的另外实例是本领域已知的。

“可溶性组织因子结构域”是指与缺少跨膜结构域和细胞内结构域的野生型哺乳动物组织因子蛋白(例如，野生型人组织因子蛋白)的段具有至少70％同一性(例如，至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性、至少99％同一性或100％相同)的多肽。本文描述可溶性组织因子结构域的非限制性实例。

术语“可溶性白介素蛋白”在本文中用于指成熟并且分泌的白介素蛋白或其生物活性片段。在一些实例中，可溶性白介素蛋白可包括与野生型成熟并且分泌的哺乳动物白介素蛋白(例如，野生型人白介素蛋白)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列，并且保留其生物活性。可溶性白介素蛋白的非限制性实例在本文中描述。

术语“可溶性细胞因子蛋白”在本文中用于指成熟并且分泌的细胞因子蛋白或其生物活性片段。在一些实例中，可溶性细胞因子蛋白可包括与野生型成熟并且分泌的哺乳动物白介素蛋白(例如，野生型人白介素蛋白)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列，并且保留其生物活性。可溶性细胞因子蛋白的非限制性实例在本文中描述。

术语“可溶性白介素受体”在本文中以最广义使用，指能够结合一个或多个其天然配体(例如，在生理条件下，例如，在室温下于磷酸盐缓冲盐水中)，缺少跨膜结构域(和任选的细胞内结构域)的多肽。例如，可溶性白介素受体可包括与野生型白介素受体的细胞外结构域至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，并且保留其特异性结合到一个或多个其天然配体的能力，但缺少其跨膜结构域(并且任选地，还缺少其细胞内结构域)。本文描述可溶性白介素受体的非限制性实例。

术语“可溶性细胞因子受体”在本文中以最广义使用，指能够结合一个或多个其天然配体(例如，在生理条件下，例如，在室温下于磷酸盐缓冲盐水中)，缺少跨膜结构域(和任选的细胞内结构域)的多肽。例如，可溶性细胞因子受体可包括与野生型细胞因子受体的细胞外结构域至少70％相同(例如，至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同)的序列，并且保留其特异性结合到一个或多个其天然配体的能力，但缺少其跨膜结构域(并且任选地，还缺少其细胞内结构域)。本文描述可溶性细胞因子受体的非限制性实例。

术语“抗体”在本文中以其最广义使用，并且包括某些类型的免疫球蛋白分子，其包括一个或多个特异性结合到抗原或表位的抗原结合结构域。抗体具体包括例如完整抗体(例如，完整免疫球蛋白)、抗体片段和多特异性抗体。抗原结合结构域的一个实例是由VH-VL二聚体形成的抗原结合结构域。本文描述抗体的另外实例。抗体的另外实例是本领域已知的。

“亲和力”是指抗原结合位点与其结合伴侣(例如，抗原或表位)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外说明，否则如本文所用，“亲和力”是指固有结合亲和力，其反映抗原结合结构域与抗原或表位的成员之间的1:1相互作用。分子X与其伴侣Y的亲和力可通过解离平衡常数(K

如本文所用，“多链多肽”是指包含两个或更多个(例如，三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)蛋白链(例如，至少第一嵌合多肽和第二多肽)的多肽，其中两个或更多个蛋白链通过非共价键缔合形成四级结构。

术语“一对亲和结构域”是以小于小于1×10

术语“表位”是指与抗原结合结构域特异性结合的抗原的一部分。表位可例如由表面可接近的氨基酸残基和/或糖侧链组成，并且可具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于，在存在变性溶剂的情况下，与前者的结合而非与后者的结合可能会丢失。表位可包含直接参与结合的氨基酸残基和不直接参与结合的其它氨基酸残基。鉴别与抗原结合结构域结合的表位的方法是本领域已知的。

“免疫效应细胞”是指哺乳动物的免疫系统的细胞，其能够直接或间接地识别哺乳动物中的病原性细胞(例如，癌细胞)和/或引起所述细胞的细胞停滞或细胞死亡。免疫效应细胞的非限制性实例包括巨噬细胞、T淋巴细胞(例如，细胞毒性T淋巴细胞和T辅助细胞)、自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞。免疫效应细胞的另外实例是本领域已知的。

术语“治疗”是指改善病症的至少一种症状。在一些实例中，所治疗的病症是癌症，并且改善癌症的至少一种症状包括减少异常增殖、基因表达、信号传导、翻译和/或因子的分泌。一般来说，治疗方法包括向需要或已确定为需要这种治疗的受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物减少病症的至少一种症状。

除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。本文描述用于本发明的方法和材料；还可使用其它在本领域已知的合适的方法和材料。材料、方法和实例仅是说明性的并且不旨在是限制性的。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献通过引用以其整体并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包括定义)为准。

本发明的其它特征和优点将通过以下详细描述和附图以及通过权利要求变得显而易见。

附图说明

图1显示多链嵌合多肽的示例图：(i)第一嵌合多肽，其包括第一靶标结合结构域(A)、可溶性组织因子结构域、结构域亲和对中的第一结构域(可溶性白介素IL-15)，和另外的靶标结合结构域(B)；和(ii)第二嵌合多肽，其包括结构域亲和对中的第二结构域(IL-15受体α寿司结构域)、第二靶标结合结构域(C)和另外的抗原结合结构域(D)。顶部草图描绘第一和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域的缔合。底部示意图显示第一和第二嵌合多肽中结构域的顺序。

图2显示多链嵌合多肽的示例图：(i)第一嵌合多肽，其包括第一靶标结合结构域(A)、包括五个氨基酸取代以便去除可溶性组织因子与FVIIa的结合的可溶性组织因子结构域、结构域亲和对中的第一结构域(包括D8N或D8A氨基酸取代的可溶性白介素IL-15)和另外的靶标结合结构域(B)；和(ii)第二嵌合多肽，其包括结构域亲和对中的第二结构域(IL-15受体α寿司结构域)、第二靶标结合结构域(C)和另外的抗原结合结构域(D)。顶部草图描绘第一和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域的缔合。底部示意图显示第一和第二嵌合多肽中结构域的顺序。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的其它实施例中，可溶性组织因子结构域可包含可溶性野生型人组织因子结构域或由可溶性野生型人组织因子结构域组成(包含野生型人组织因子内的连续序列或由野生型人组织因子内的连续序列组成)。

图3显示示例性IL-12/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图4显示示例性IL-18/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图5显示示例性IL-12/IL-15RαSu与IL-18/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图6显示产生IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu复合物(18t15-12s)的示例性IL-12/IL-15RαSu与IL-18/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图7显示来自抗TF抗体亲和柱的18t15-12s纯化洗脱的色谱图。

图8显示在分析尺寸排阻柱上洗脱后，抗TF Ab/SEC纯化的18t15-12s蛋白的示例性色谱图，证明单体多蛋白18t15-12s复合物与蛋白质聚集体分离。

图9显示二硫键还原后18t15-12s复合物的4-12％SDS-PAGE的实例。泳道1：SeeBlue Plus2标记；泳道2：抗组织因子抗体亲和柱纯化的18t15-12s(0.5μg)；泳道3：抗组织因子抗体亲和柱纯化的18t15-12s(1μg)。

图10显示去糖基化和未去糖基化18t15-12s的SDS PAGE分析。泳道1：抗组织因子抗体亲和柱纯化的18t15-12s(0.5μg)，未去糖基化；泳道2：抗TF Ab纯化的18t15-12s(1μg)，未去糖基化；泳道3：18t15-12s(1μg)，去糖基化，泳道4：Mark12未染色的制造商。

图11显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-12检测抗体(BAF 219)。

图12显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-15检测抗体(BAM 247)。

图13显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-18检测抗体(D045-6)。

图14显示用于18t15-12s复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子(I43)捕获抗体和抗人组织因子检测抗体。

图15显示由18t15-12s复合物(空心方块)和重组IL-15(黑色方块)介导的IL-15依赖性32Dβ细胞的增殖。

图16显示18t15-12s复合物(空心正方形)内IL-18的生物活性，其中重组IL-18(黑色正方形)和重组IL-12(黑色圆)分别用作阳性和阴性对照。

图17显示18t15-12s复合物(空心正方形)内IL-12的生物活性，其中重组IL-12(黑色圆)和重组IL-18(空心正方形)分别用作阳性和阴性对照。

图18A和18B显示由18t15-12s复合物诱导的NK细胞上CD25的细胞表面表达和由18t15-12s复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD69表达。

图19显示由18t15-12s复合物诱导的NK细胞的细胞内干扰素γ表达的流式细胞术图。

图20显示18t15-12s诱导的人NK细胞对K562细胞的细胞毒性。

图21显示示例性IL-12/IL-15RαSu/αCD16 DNA构建体的示意图。

图22显示示例性IL-18/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图23显示示例性IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv与IL-18/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图24显示示例性的18t15-12s/αCD16蛋白复合物的示意图。

图25显示用于18t15-12s16复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-12或IL-18检测抗体。

图26显示示例性TGFβRII/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图27显示示例性IL-21/TF/IL-15构建体的示意图。

图28显示示例性IL-IL-21/TF/IL-15与TGFβRII/IL-15RαSu构建体之间的相互作用的示意图。

图29显示产生IL-21/TF/IL-15/TGFβRII/IL-15RαSu复合物(21t15-TGFRs)的示例性TGFβRII/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图30显示来自抗TF抗体亲和柱的21t15-TGFRs纯化洗脱的色谱图。

图31显示示例性的21t15-TGFRs尺寸排阻色谱图，显示主要蛋白质峰和高分子量峰。

图32显示二硫键还原后21t15-TGFRs复合物的4-12％SDS-PAGE的实例。泳道1：Mark12未染色的标记(左侧的数字指示以kDa为单位的分子量)；泳道2：21t15-TGFRs(0.5μg)；泳道3：21t15-TGFRs(1μg)；泳道4：21t15-TGFRs，去糖基化(1μg)，其中MW是53kDa和39.08kDa的预期大小。

图33显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-21检测抗体(13-7218-81，BioLegend)。

图34显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人IL-15检测抗体(BAM 247，安迪生物公司(R&D Systems))。

图35显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子捕获抗体和生物素化抗人TGFβRII检测抗体(BAF241，安迪生物公司)。

图36显示用于21t15-TGFRs复合物的夹心ELISA，其包含抗人组织因子(I43)捕获抗体和抗人组织因子检测抗体。

图37显示与IL-15(黑色方块)相比，由21t15-TGFRs复合物(空心方块)介导的IL-15依赖性32Dβ细胞增殖。

图38显示21t15-TGFRs复合物(空心正方形)内TGFβRII结构域的生物活性。TGFβRII/Fc(黑色方块)充当阳性对照。

图39A显示由21t15-TGFRs复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD25表达的流式细胞术图。

图40显示由21t15-TGFRs复合物诱导的NK细胞的细胞表面CD69表达的流式细胞术图。

图41显示由21t15-TGFRs复合物诱导的NK细胞的细胞内干扰素γ表达的流式细胞术图。

图42显示21t15-TGFRs诱导的人NK细胞对K562细胞的细胞毒性。

图43显示示例性IL-7/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图44显示示例性IL-21/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图45显示示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图46显示产生IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu复合物(21t15-7s)的示例性IL-7/IL-15RαSu与IL-21/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图47显示通过用21t15-7s+抗TF IgG1抗体刺激引起的原代自然杀伤(NK)细胞的扩增。

图48显示使用CD25 MFI和CD69 MFI作为NK细胞激活的标记，扩增的原代NK细胞的激活。

图49显示扩增的NK细胞对K562人肿瘤细胞的细胞毒活性，其中用21t15-7s+抗TFIgG1抗体刺激的NK细胞展现比未用21t15-7s+抗TF IgG1抗体刺激的NK细胞更大的K562细胞特异性溶解。

图50显示示例性IL-21/IL-15RαSu DNA构建体的示意图。

图51显示示例性IL-7/TF/IL-15DNA构建体的示意图。

图52显示示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15DNA构建体之间的相互作用的示意图。

图53显示产生IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSU复合物(7t15-21s)的示例性IL-21/IL-15RαSu与IL-7/TF/IL-15融合蛋白之间的相互作用的示意图。

图54以图解形式显示通过用21t15-TGFRs+抗TF IgG1抗体刺激引起的原代自然杀伤(NK)细胞的激活和扩增。

图55显示抗TF IgG1抗体、7t15-21s和含有等量抗TF IgG1抗体和7t15-21s的复合物的尺寸排阻色谱(SEC)图。

图56显示从两个不同供体的血液中分离的人NK细胞(2×10

图57显示从两个不同供体的血液中分离的人NK细胞(2×10

图58显示7t15-16s21构建体的示意图。

图59显示7t15-16s21构建体的另一示意图。

图60A和60B显示与对照蛋白相比，7t15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞的结合。

图61A-61C是来自使用针对IL-15、IL-21和IL-7的抗体检测7t15-16s21的ELISA实验的结果。

图62显示用7t15-16s21或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图63显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含7t15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱图。

图64显示7t15-16s21的分析SEC图。

图65显示TGFRt15-16s21构建体的示意图。

图66显示TGFRt15-16s21构建体的另一示意图。

图67A和67B显示TGFRt15-16S21和7t15-21s与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。图67A显示TGFRt15-16S21与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。图67B显示7t15-21s与表达人CD16b的CHO细胞的结合亲和力。

图68显示由TGFRt15-16s21和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图69显示用TGFRt15-16s21或重组IL-15进行的32Dβ细胞增殖分析的结果。

图70A-70C显示使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII的结果。

图71显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含TGFRt15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱图。

图72显示TGFRt15-16s21的还原SDS-PAGE分析的结果。

图73显示7t15-7s构建体的示意图。

图74显示7t15-7s构建体的另一示意图。

图75显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含7t15-7s蛋白的细胞培养上清液的色谱图。

图76显示使用ELISA进行的对7t15-7s中的TF、IL-15和IL-7的检测。

图77显示TGFRt15-TGFRs构建体的示意图。

图78显示TGFRt15-TGFRs构建体的另一示意图。

图79显示由TGFRt15-TGFRs和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图80显示用TGFRt15-TGFRs或重组IL-15进行32Dβ细胞增殖分析的结果。

图81A和81B显示使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-TGFR中的IL-15和TGFβRII的结果。

图82是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含TGFRt15-TGFRs蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图83显示TGFRt15-TGFRs的分析SEC图。

图84显示如通过还原SDS-PAGE分析的去糖基化前后的TGFRt15-TGFR。

图85A和85B显示经TGFRt15-TGFRs处理和对照处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图85A显示与PBS对照相比，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图85B显示与PBS对照相比，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中CD4

图86A和86B显示用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中92小时内的脾脏重量和免疫刺激。图86A显示在处理后16、24、48、72和92小时用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图86B显示在处理后16、24、48、72和92小时用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中免疫细胞的百分比。

图87A和87B显示在一段时间内用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠中Ki67和颗粒酶B的表达。

图88显示在C57BL/6小鼠中，TGFRt15-TGFRs增强脾细胞的细胞毒性。

图89显示在胰腺癌小鼠模型中，响应于PBS处理、单独的化疗、单独的TGFRt15-TGFRs或化疗与TGFRt15-TGFRs组合的肿瘤尺寸变化。

图90显示从用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠分离的NK细胞的细胞毒性。

图91显示7t15-21s137L(长版)构建体的示意图。

图92显示7t15-21s137L(长版)构建体的另一示意图。

图93是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含7t15-21s137L(长版)蛋白质的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图94显示7t15-21s137L(长版)的分析SEC图。

图95显示7t15-21s137L(短版)与CD137L(4.1BBL)的结合。

图96A-96C显示用ELISA进行的对7t15-21s137L(短版)中IL15、IL21和IL7的检测。图96A显示用ELISA进行的对7t15-21s137L(短版)中IL15的检测。图96B显示用ELISA进行的对7t15-21s137L(短版)中IL21的检测。图96C显示用ELISA进行的对7t15-21s137L(短版)中IL7的检测。

图97显示来自CTLL-2细胞增殖分析的结果。

图98显示7t15-1s137L(短版)在促进含IL21R的B9细胞增殖中的活性。

图99显示7t15-TGFRs构建体的示意图。

图100显示7t15-TGFRs构建体的另一示意图。

图101显示由7t15-TGFR和TGFR-Fc引起的TGFβ1抑制的结果。

图102A-102C显示用ELISA进行的对7t15-TGFRs中IL-15、TGFβRII和IL-7的检测。

图103显示用7t15-TGFRs或重组IL-15进行的32Dβ细胞增殖分析的结果。

图104是显示在抗TF抗体亲和柱上结合和洗脱后，含有7t15-TGFRs蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图105显示如使用还原SDS-PAGE分析的去糖基化前后的7t15-TGFRs。

图106显示7t15-TGFRs蛋白中IL-7、IL-15和TGFβRII的ELISA检测。

图107A和107B显示经7t15-TGFRs处理和对照处理的小鼠的脾脏重量和免疫细胞类型的百分比。图107A显示与PBS对照相比，用各种剂量的7t15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量。图107B显示与PBS对照相比，在用不同剂量的7t15-TGFRs处理的小鼠中，CD4

图108A和108B显示在C57BL/6小鼠中，7t15-TGFRs对CD4+和CD8+T细胞的CD44表达的上调。

图109A和109B显示在C57BL/6小鼠中，7t15-TGFRs对CD8+T细胞和NK细胞的Ki67表达和颗粒酶B表达的上调。

图110显示在C57BL/6小鼠中，7t15-TGFRs增强脾细胞的细胞毒性。

图111显示TGFRt15-21s137L构建体的示意图。

图112显示TGFRt15-21s137L构建体的另一示意图。

图113是显示在抗TF抗体亲和柱上结合和洗脱后，含TGFRt15-21s137L蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图114显示TGFRt15-TGFRs21构建体的示意图。

图115显示TGFRt15-TGFRs21构建体的另一示意图。

图116是显示在抗TF抗体亲和柱上结合和洗脱后，含TGFRt15-TGFRs21蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。

图117显示通过还原SDS-PAGE分析的去糖基化前后的TGFRt15-TGFRs21。

图118A和118B显示使用ELISA进行的TGFRt15-TGFRs21组分的检测。

图119A和119B显示在对照处理和TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

图120显示用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠中脾细胞的颗粒酶B表达的上调。

图121显示在C57BL/6小鼠中，TGFRt15-TGFRs21增强脾细胞的细胞毒性。

图122显示TGFRt15-TGFRs16构建体的示意图。

图123显示TGFRt15-TGFRs16构建体的另一示意图。

图124显示TGFRt15-TGFRs137L构建体的示意图。

图125显示TGFRt15-TGFRs137L构建体的另一示意图。

图126显示用18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s刺激后淋巴细胞群体的表面表型的变化。

图127显示用18t15-12s刺激后NK细胞中磷酸化STAT4和磷酸化STAT5水平的提高。

图128A-128C显示用西方饮食喂养并用TGFRt15-TGFRs处理的ApoE

图129A-129C显示用TGFRt15-TGFRs处理后C57BL/6小鼠的免疫刺激。

图130A和130B显示用西方饮食喂养并用TGFRt15-TGFRs处理的ApoE

图131A和131B显示用TGFRt15-TGFRs处理NK细胞后，NK细胞的细胞毒性增强。

图132A和132B显示用TGFRt15-TGFRs处理NK细胞后，NK细胞的ADCC活性增强。

图133A-133H显示在黑色素瘤小鼠模型中，TGFRt15-TGFRs加抗TRP1抗体(TA99)与化疗组合的抗肿瘤活性。

图134A-134C显示TGFRt15-TGFRs改善了ApoE

图135显示细胞表面染色，概述用18t15-12s刺激并在rhIL15中培养后，NK细胞分化成细胞因子诱导记忆样NK细胞(CIML-NK细胞)。

图136显示上调，显示用TGFRt15-TGFRs处理后CD44hi记忆T细胞上调。

图137显示用单链或多链嵌合多肽处理后因子X(FX)激活的图。

图138显示凝血酶原时间(PT)测试中含有变化浓度的因诺维(Innovin)的缓冲液的凝结时间。

图139显示PT分析中多链嵌合多肽的凝结时间。

图140显示当与32DB细胞混合时，PT分析中多链嵌合多肽的凝结时间。

图141显示当与人PBMC混合时，PT分析中多链嵌合多肽的凝结时间。

图142显示7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)与CD137(4.1BB)的结合。

图143A-143D显示使用ELISA通过相应抗体在7t15-21s137L(长版)中检测IL7、IL21、IL15和4.1BBL。

图144显示如通过含IL2RαβγCTLL2细胞增殖分析评估的7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)的IL-15活性。

具体实施方式

本文提供多链嵌合多肽，其包括：(a)第一嵌合多肽，其包括：(i)第一靶标结合结构域；(ii)可溶性组织因子结构域；(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；和(b)第二嵌合多肽，其包括：(i)一对亲和结构域中的第二结构域；(ii)第二靶标结合结构域，其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合。本文还提供组合物，其包括本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种、编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸和包括编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸中的任一种的细胞。本文还提供刺激免疫细胞的方法和治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括使用本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种。本文还提供产生本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的方法。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实例中，第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽的总长度可各自独立地为约50个氨基酸至约3000个氨基酸，约50个氨基酸至约2500个氨基酸，约50个氨基酸至约2000个氨基酸，约50个氨基酸至约1500个氨基酸，约50个氨基酸至约1000个氨基酸，约50个氨基酸至约950个氨基酸，约50个氨基酸至约900个氨基酸，约50个氨基酸至约850个氨基酸，约50个氨基酸至约800个氨基酸，约50个氨基酸至约750个氨基酸，约50个氨基酸至约700个氨基酸，约50个氨基酸至约650个氨基酸，约50个氨基酸至约600个氨基酸，约50个氨基酸至约550个氨基酸，约50个氨基酸至约500个氨基酸，约50个氨基酸至约480个氨基酸，约50个氨基酸至约460个氨基酸，约50个氨基酸至约440个氨基酸，约50个氨基酸至约420个氨基酸，约50个氨基酸至约400个氨基酸，约50个氨基酸至约380个氨基酸，约50个氨基酸至约360个氨基酸，约50个氨基酸至约340个氨基酸，约50个氨基酸至约320个氨基酸，约50个氨基酸至约300个氨基酸，约50个氨基酸至约280个氨基酸，约50个氨基酸至约260个氨基酸，约50个氨基酸至约240个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约3000个氨基酸，约100个氨基酸至约2500个氨基酸，约100个氨基酸至约2000个氨基酸，约100个氨基酸至约1500个氨基酸，约100个氨基酸至约1000个氨基酸，约100个氨基酸至约950个氨基酸，约100个氨基酸至约900个氨基酸，约100个氨基酸至约850个氨基酸，约100个氨基酸至约800个氨基酸，约100个氨基酸至约750个氨基酸，约100个氨基酸至约700个氨基酸，约100个氨基酸至约650个氨基酸，约100个氨基酸至约600个氨基酸，约100个氨基酸至约550个氨基酸，约100个氨基酸至约500个氨基酸，约100个氨基酸至约480个氨基酸，约100个氨基酸至约460个氨基酸，约100个氨基酸至约440个氨基酸，约100个氨基酸至约420个氨基酸，约100个氨基酸至约400个氨基酸，约100个氨基酸至约380个氨基酸，约100个氨基酸至约360个氨基酸，约100个氨基酸至约340个氨基酸，约100个氨基酸至约320个氨基酸，约100个氨基酸至约300个氨基酸，约100个氨基酸至约280个氨基酸，约100个氨基酸至约260个氨基酸，约100个氨基酸至约240个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约3000个氨基酸，约150个氨基酸至约2500个氨基酸，约150个氨基酸至约2000个氨基酸，约150个氨基酸至约1500个氨基酸，约150个氨基酸至约1000个氨基酸，约150个氨基酸至约950个氨基酸，约150个氨基酸至约900个氨基酸，约150个氨基酸至约850个氨基酸，约150个氨基酸至约800个氨基酸，约150个氨基酸至约750个氨基酸，约150个氨基酸至约700个氨基酸，约150个氨基酸至约650个氨基酸，约150个氨基酸至约600个氨基酸，约150个氨基酸至约550个氨基酸，约150个氨基酸至约500个氨基酸，约150个氨基酸至约480个氨基酸，约150个氨基酸至约460个氨基酸，约150个氨基酸至约440个氨基酸，约150个氨基酸至约420个氨基酸，约150个氨基酸至约400个氨基酸，约150个氨基酸至约380个氨基酸，约150个氨基酸至约360个氨基酸，约150个氨基酸至约340个氨基酸，约150个氨基酸至约320个氨基酸，约150个氨基酸至约300个氨基酸，约150个氨基酸至约280个氨基酸，约150个氨基酸至约260个氨基酸，约150个氨基酸至约240个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约3000个氨基酸，约200个氨基酸至约2500个氨基酸，约200个氨基酸至约2000个氨基酸，约200个氨基酸至约1500个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约480个氨基酸，约200个氨基酸至约460个氨基酸，约200个氨基酸至约440个氨基酸，约200个氨基酸至约420个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约380个氨基酸，约200个氨基酸至约360个氨基酸，约200个氨基酸至约340个氨基酸，约200个氨基酸至约320个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约3000个氨基酸，约220个氨基酸至约2500个氨基酸，约220个氨基酸至约2000个氨基酸，约220个氨基酸至约1500个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约480个氨基酸，约220个氨基酸至约460个氨基酸，约220个氨基酸至约440个氨基酸，约220个氨基酸至约420个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约380个氨基酸，约220个氨基酸至约360个氨基酸，约220个氨基酸至约340个氨基酸，约220个氨基酸至约320个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约3000个氨基酸，约240个氨基酸至约2500个氨基酸，约240个氨基酸至约2000个氨基酸，约240个氨基酸至约1500个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约480个氨基酸，约240个氨基酸至约460个氨基酸，约240个氨基酸至约440个氨基酸，约240个氨基酸至约420个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约380个氨基酸，约240个氨基酸至约360个氨基酸，约240个氨基酸至约340个氨基酸，约240个氨基酸至约320个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约3000个氨基酸，约260个氨基酸至约2500个氨基酸，约260个氨基酸至约2000个氨基酸，约260个氨基酸至约1500个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约480个氨基酸，约260个氨基酸至约460个氨基酸，约260个氨基酸至约440个氨基酸，约260个氨基酸至约420个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约380个氨基酸，约260个氨基酸至约360个氨基酸，约260个氨基酸至约340个氨基酸，约260个氨基酸至约320个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约3000个氨基酸，约280个氨基酸至约2500个氨基酸，约280个氨基酸至约2000个氨基酸，约280个氨基酸至约1500个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约480个氨基酸，约280个氨基酸至约460个氨基酸，约280个氨基酸至约440个氨基酸，约280个氨基酸至约420个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约380个氨基酸，约280个氨基酸至约360个氨基酸，约280个氨基酸至约340个氨基酸，约280个氨基酸至约320个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约3000个氨基酸，约300个氨基酸至约2500个氨基酸，约300个氨基酸至约2000个氨基酸，约300个氨基酸至约1500个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约480个氨基酸，约300个氨基酸至约460个氨基酸，约300个氨基酸至约440个氨基酸，约300个氨基酸至约420个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约380个氨基酸，约300个氨基酸至约360个氨基酸，约300个氨基酸至约340个氨基酸，约300个氨基酸至约320个氨基酸，约320个氨基酸至约3000个氨基酸，约320个氨基酸至约2500个氨基酸，约320个氨基酸至约2000个氨基酸，约320个氨基酸至约1500个氨基酸，约320个氨基酸至约1000个氨基酸，约320个氨基酸至约950个氨基酸，约320个氨基酸至约900个氨基酸，约320个氨基酸至约850个氨基酸，约320个氨基酸至约800个氨基酸，约320个氨基酸至约750个氨基酸，约320个氨基酸至约700个氨基酸，约320个氨基酸至约650个氨基酸，约320个氨基酸至约600个氨基酸，约320个氨基酸至约550个氨基酸，约320个氨基酸至约500个氨基酸，约320个氨基酸至约480个氨基酸，约320个氨基酸至约460个氨基酸，约320个氨基酸至约440个氨基酸，约320个氨基酸至约420个氨基酸，约320个氨基酸至约400个氨基酸，约320个氨基酸至约380个氨基酸，约320个氨基酸至约360个氨基酸，约320个氨基酸至约340个氨基酸，约340个氨基酸至约3000个氨基酸，约340个氨基酸至约2500个氨基酸，约340个氨基酸至约2000个氨基酸，约340个氨基酸至约1500个氨基酸，约340个氨基酸至约1000个氨基酸，约340个氨基酸至约950个氨基酸，约340个氨基酸至约900个氨基酸，约340个氨基酸至约850个氨基酸，约340个氨基酸至约800个氨基酸，约340个氨基酸至约750个氨基酸，约340个氨基酸至约700个氨基酸，约340个氨基酸至约650个氨基酸，约340个氨基酸至约600个氨基酸，约340个氨基酸至约550个氨基酸，约340个氨基酸至约500个氨基酸，约340个氨基酸至约480个氨基酸，约340个氨基酸至约460个氨基酸，约340个氨基酸至约440个氨基酸，约340个氨基酸至约420个氨基酸，约340个氨基酸至约400个氨基酸，约340个氨基酸至约380个氨基酸，约340个氨基酸至约360个氨基酸，约360个氨基酸至约3000个氨基酸，约360个氨基酸至约2500个氨基酸，约360个氨基酸至约2000个氨基酸，约360个氨基酸至约1500个氨基酸，约360个氨基酸至约1000个氨基酸，约360个氨基酸至约950个氨基酸，约360个氨基酸至约900个氨基酸，约360个氨基酸至约850个氨基酸，约360个氨基酸至约800个氨基酸，约360个氨基酸至约750个氨基酸，约360个氨基酸至约700个氨基酸，约360个氨基酸至约650个氨基酸，约360个氨基酸至约600个氨基酸，约360个氨基酸至约550个氨基酸，约360个氨基酸至约500个氨基酸，约360个氨基酸至约480个氨基酸，约360个氨基酸至约460个氨基酸，约360个氨基酸至约440个氨基酸，约360个氨基酸至约420个氨基酸，约360个氨基酸至约400个氨基酸，约360个氨基酸至约380个氨基酸，约380个氨基酸至约3000个氨基酸，约380个氨基酸至约2500个氨基酸，约380个氨基酸至约2000个氨基酸，约380个氨基酸至约1500个氨基酸，约380个氨基酸至约1000个氨基酸，约380个氨基酸至约950个氨基酸，约380个氨基酸至约900个氨基酸，约380个氨基酸至约850个氨基酸，约380个氨基酸至约800个氨基酸，约380个氨基酸至约750个氨基酸，约380个氨基酸至约700个氨基酸，约380个氨基酸至约650个氨基酸，约380个氨基酸至约600个氨基酸，约380个氨基酸至约550个氨基酸，约380个氨基酸至约500个氨基酸，约380个氨基酸至约480个氨基酸，约380个氨基酸至约460个氨基酸，约380个氨基酸至约440个氨基酸，约380个氨基酸至约420个氨基酸，约380个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约3000个氨基酸，约400个氨基酸至约2500个氨基酸，约400个氨基酸至约2000个氨基酸，约400个氨基酸至约1500个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约480个氨基酸，约400个氨基酸至约460个氨基酸，约400个氨基酸至约440个氨基酸，约400个氨基酸至约420个氨基酸，约420个氨基酸至约3000个氨基酸，约420个氨基酸至约2500个氨基酸，约420个氨基酸至约2000个氨基酸，约420个氨基酸至约1500个氨基酸，约420个氨基酸至约1000个氨基酸，约420个氨基酸至约950个氨基酸，约420个氨基酸至约900个氨基酸，约420个氨基酸至约850个氨基酸，约420个氨基酸至约800个氨基酸，约420个氨基酸至约750个氨基酸，约420个氨基酸至约700个氨基酸，约420个氨基酸至约650个氨基酸，约420个氨基酸至约600个氨基酸，约420个氨基酸至约550个氨基酸，约420个氨基酸至约500个氨基酸，约420个氨基酸至约480个氨基酸，约420个氨基酸至约460个氨基酸，约420个氨基酸至约440个氨基酸，约440个氨基酸至约3000个氨基酸，约440个氨基酸至约2500个氨基酸，约440个氨基酸至约2000个氨基酸，约440个氨基酸至约1500个氨基酸，约440个氨基酸至约1000个氨基酸，约440个氨基酸至约950个氨基酸，约440个氨基酸至约900个氨基酸，约440个氨基酸至约850个氨基酸，约440个氨基酸至约800个氨基酸，约440个氨基酸至约750个氨基酸，约440个氨基酸至约700个氨基酸，约440个氨基酸至约650个氨基酸，约440个氨基酸至约600个氨基酸，约440个氨基酸至约550个氨基酸，约440个氨基酸至约500个氨基酸，约440个氨基酸至约480个氨基酸，约440个氨基酸至约460个氨基酸，约460个氨基酸至约3000个氨基酸，约460个氨基酸至约2500个氨基酸，约460个氨基酸至约2000个氨基酸，约460个氨基酸至约1500个氨基酸，约460个氨基酸至约1000个氨基酸，约460个氨基酸至约950个氨基酸，约460个氨基酸至约900个氨基酸，约460个氨基酸至约850个氨基酸，约460个氨基酸至约800个氨基酸，约460个氨基酸至约750个氨基酸，约460个氨基酸至约700个氨基酸，约460个氨基酸至约650个氨基酸，约460个氨基酸至约600个氨基酸，约460个氨基酸至约550个氨基酸，约460个氨基酸至约500个氨基酸，约460个氨基酸至约480个氨基酸，约480个氨基酸至约3000个氨基酸，约480个氨基酸至约2500个氨基酸，约480个氨基酸至约2000个氨基酸，约480个氨基酸至约1500个氨基酸，约480个氨基酸至约1000个氨基酸，约480个氨基酸至约950个氨基酸，约480个氨基酸至约900个氨基酸，约480个氨基酸至约850个氨基酸，约480个氨基酸至约800个氨基酸，约480个氨基酸至约750个氨基酸，约480个氨基酸至约700个氨基酸，约480个氨基酸至约650个氨基酸，约480个氨基酸至约600个氨基酸，约480个氨基酸至约550个氨基酸，约480个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约3000个氨基酸，约500个氨基酸至约2500个氨基酸，约500个氨基酸至约2000个氨基酸，约500个氨基酸至约1500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约3000个氨基酸，约550个氨基酸至约2500个氨基酸，约550个氨基酸至约2000个氨基酸，约550个氨基酸至约1500个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约3000个氨基酸，约600个氨基酸至约2500个氨基酸，约600个氨基酸至约2000个氨基酸，约600个氨基酸至约1500个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约3000个氨基酸，约650个氨基酸至约2500个氨基酸，约650个氨基酸至约2000个氨基酸，约650个氨基酸至约1500个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约3000个氨基酸，约700个氨基酸至约2500个氨基酸，约700个氨基酸至约2000个氨基酸，约700个氨基酸至约1500个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约3000个氨基酸，约750个氨基酸至约2500个氨基酸，约750个氨基酸至约2000个氨基酸，约750个氨基酸至约1500个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约3000个氨基酸，约800个氨基酸至约2500个氨基酸，约800个氨基酸至约2000个氨基酸，约800个氨基酸至约1500个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约3000个氨基酸，约850个氨基酸至约2500个氨基酸，约850个氨基酸至约2000个氨基酸，约850个氨基酸至约1500个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约3000个氨基酸，约900个氨基酸至约2500个氨基酸，约900个氨基酸至约2000个氨基酸，约900个氨基酸至约1500个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，约950个氨基酸至约3000个氨基酸，约950个氨基酸至约2500个氨基酸，约950个氨基酸至约2000个氨基酸，约950个氨基酸至约1500个氨基酸，约950个氨基酸至约1000个氨基酸，约1000个氨基酸至约3000个氨基酸，约1000个氨基酸至约2500个氨基酸，约1000个氨基酸至约2000个氨基酸，约1000个氨基酸至约1500个氨基酸，约1500个氨基酸至约3000个氨基酸，约1500个氨基酸至约2500个氨基酸，约1500个氨基酸至约2000个氨基酸，约2000个氨基酸至约3000个氨基酸，约2000个氨基酸至约2500个氨基酸，或约2500个氨基酸至约3000个氨基酸。图1和图2描绘本文提供的示例性多链嵌合多肽的图。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域(例如，本文所描述的第一靶标结合结构域中的任一种)和可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含在第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域(例如，本文所描述的示例性第一靶标结合结构域中的任一种)与可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含在第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第二结构域中的任一种)与第二靶标结合结构域(例如，本文所描述的示例性第二靶标结合结构域中的任一种)在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含在第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第二结构域中的任一种)与第二靶标结合结构域(例如，本文所描述的示例性第二靶标结合结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

这些嵌合多肽、核酸、载体、细胞和方法的非限制性方面在下文描述，并且可在无限制的情况下以任何组合使用。这些嵌合多肽、核酸、载体、细胞和方法的另外方面是本领域已知的。

组织因子

人组织因子是263个氨基酸的跨膜蛋白，其含有三个结构域：(1)219个氨基酸的N端细胞外结构域(残基1-219)；(2)22个氨基酸的跨膜结构域(残基220-242)；和(3)21个氨基酸的胞质C端尾(残基242-263)((UniProtKB标识符编号：P13726)。胞质尾在Ser253和Ser258处含有两个磷酸化位点，在Cys245处含有一个S-棕榈酰化位点。没有发现胞质结构域的缺失或突变影响组织因子凝血活性。组织因子在蛋白质细胞内结构域中Cys245处具有一个S-棕榈酰化位点。Cys245位于细胞内结构域的氨基酸端，并且靠近膜表面。组织因子跨膜结构域由单跨度的α-螺旋构成。

由两个纤连蛋白III型结构域构成的组织因子的细胞外结构域通过六氨基酸接头与跨膜结构域连接。这一接头提供构象灵活性，以使组织因子细胞外结构域与其跨膜结构域和胞质结构域解偶联。每个组织因子纤连蛋白III型模块均由两个重叠的β折叠构成，其中顶层折叠结构域含有三个反平行的β链，而底层折叠含有四个β链。β链通过β环在链βA和βB、βC和βD以及βE和βF之间连接，其在两个模块中均构象保守。有三个短的α螺旋段连接β链。组织因子的独特特征是链β10与链β11之间的17个氨基酸的β-发夹，这不是纤连蛋白超家族的常见成分。N端结构域还在β6F与β7G之间包含一个12个氨基酸的环，所述环不存在于C端结构域，并且是组织因子特有的。这种纤连蛋白III型结构域结构是免疫球蛋白样家族蛋白质折叠的特征，并且在广泛多种细胞外蛋白中是保守的。

一旦酶原FVII与组织结合形成活性组织因子-FVIIa复合物，就可通过有限的蛋白水解将其迅速转化为FVIIa。FVIIa以大约0.1nM(血浆FVII的1％)的浓度作为酶循环，也可直接结合到组织因子。组织因子与FVIIa在组织因子-FVIIa复合物上的变构相互作用极大地提高了FVIIa的酶促活性：小的发色肽基底物的水解速率提高约20到100倍，并且天然大分子底物FIX和FX的激活速率提高接近一百万倍。与结合到组织因子时FVIIa活性位点的变构激活相一致，磷脂双层上组织因子-FVIIa复合物的形成(即，当磷脂酰-L-丝氨酸暴露在膜表面时)以Ca

FVII是约50kDa的单链多肽，由406个氨基酸残基组成，具有N端富含γ-羧基谷氨酸(GLA)的结构域，两个表皮生长因子样结构域(EGF1和EFG2)和C端丝氨酸蛋白酶结构域。FVII通过在EGF2与蛋白酶结构域之间的短接头区中Ile-

FVIIa活性位点在膜表面上方的组织因子介导的定位对于FVIIa朝向同源底物很重要。游离FVIIa在结合到膜上时采用稳定扩展结构，其活性位点定位在膜表面上方约

丙氨酸扫描诱变已用于评定组织因子细胞外结构域中特定氨基酸侧链对与FVIIa相互作用的作用(Gibbs等人,《生物化学(Biochemistry)》33(47):14003-14010,1994；Schullek等人,《生物化学杂志(J Biol Chem)》269(30):19399-19403,1994)。丙氨酸取代鉴别出有限数量的残基位置，在这些位置处，丙氨酸置换引起对FVIIa结合的亲和力降低5到10倍。发现这些残基侧链中的大多数在晶体结构中充分暴露于溶剂，与大分子配体相互作用一致。FVIIa配体结合位点位于两个模块之间边界处的宽广区上。在C模块中，位于突出的B-C环上的残基Arg

组织因子-FVIIa的已知生理底物是FVII、FIX和FX以及某些蛋白酶激活的受体。突变分析已鉴别出许多残基，当突变时，所述残基支持对小肽基底物的完全FVIIa酰胺分解活性，但缺少支持大分子底物(即，FVII、FIX和FX)激活的能力(Ruf等人,《生物化学杂志》267(31):22206-22210,1992；Ruf等人,《生物化学杂志》267(9):6375-6381,1992；Huang等人,《生物化学杂志》271(36):21752-21757,1996；Kirchhofer等人,《生物化学》39(25):7380-7387,2000)。已显示在残基159-165处的组织因子环区和在这一柔性环中或附近的残基对于组织因子-FVIIa复合物的蛋白水解活性至关重要。这定义了提出的组织因子的底物结合位点外区，所述区与FVIIa活性位点相距甚远。甘氨酸残基被稍大的残基丙氨酸取代会大大损害组织因子-FVIIa的蛋白水解活性。这表明甘氨酸提供的柔性对于用于组织因子大分子底物识别的残基159-165的环至关重要。

还证明了残基Lys

可溶性组织因子结构域

在本文所描述的任何多肽、组合物或方法的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为缺少信号序列、跨膜结构域和细胞内结构域的野生型组织因子多肽。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可为组织因子突变体，其中野生型组织因子多肽缺少信号序列、跨膜结构域和细胞内结构域，并且已在所选择的氨基酸处被进一步修饰。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可为可溶性人组织因子结构域。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可为可溶性小鼠组织因子结构域。在一些实例中，可溶性组织因子结构域可为可溶性大鼠组织因子结构域。可溶性人组织因子结构域、小鼠可溶性组织因子结构域、大鼠可溶性组织因子结构域和突变可溶性组织因子结构域的非限制性实例在以下显示。

示例性可溶性人组织因子结构域(SEQ ID NO:1)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

编码可溶性人组织因子结构域的示例性核酸(SEQ ID NO:2)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

示例性突变可溶性人组织因子结构域(SEQ ID NO:3)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

示例性突变可溶性人组织因子结构域(SEQ ID NO:4)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDAKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLAENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

示例性可溶性小鼠组织因子结构域(SEQ ID NO:5)

agipekafnltwistdfktilewqpkptnytytvqisdrsrnwknkcfsttdtecdltdeivkdvtwayeakvlsvprrnsvhgdgdqlvihgeeppftnapkflpyrdtnlgqpviqqfeqdgrklnvvvkdsltlvrkngtfltlrqvfgkdlgyiityrkgsstgkktnitntnefsidveegvsycffvqamifsrktnqnspgsstvcteqwksflge

示例性可溶性大鼠组织因子结构域(SEQ ID NO:6)

Agtppgkafnltwistdfktilewqpkptnytytvqisdrsrnwkykctgttdtecdltdeivkdvnwtyearvlsvpwrnsthgketlfgthgeeppftnarkflpyrdtkigqpviqkyeqggtklkvtvkdsftlvrkngtfltlrqvfgndlgyiltyrkdsstgrktntthtneflidvekgvsycffaqavifsrktnhkspesitkcteqwksvlge

在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可包括与SEQ ID NO:1、3、4、5或6至少70％相同、至少72％相同、至少74％相同、至少76％相同、至少78％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可包括SEQ ID NO:1、3、4、5或6的序列，其中一到二十个氨基酸(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)从其N端去除和/或一到二十个氨基酸(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)从其C端去除。

如本领域中可了解，本领域技术人员将理解，在不同哺乳动物物种之间保守的氨基酸的突变更可能降低蛋白质的活性和/或结构稳定性，而在不同哺乳动物物种之间不保守的蛋白质的突变不太可能降低蛋白质的活性和/或结构稳定性。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实例中，可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实例中，可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的凝血。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域可为可溶性人组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为可溶性小鼠组织因子结构域。在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为可溶性大鼠组织因子结构域。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域不包括以下中的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个或七个)：在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。在一些实施例中，突变可溶性组织因子具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的氨基酸序列。

在一些实例中，可溶性组织因子结构域可由包括与SEQ ID NO:2至少70％相同、至少72％相同、至少74％相同、至少76％相同、至少78％相同、至少80％相同、至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同的序列的核酸编码。

在一些实施例中，可溶性组织因子结构域可具有的总长度为约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约215个氨基酸，约20个氨基酸至约210个氨基酸，约20个氨基酸至约205个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约220个氨基酸，约30个氨基酸至约215个氨基酸，约30个氨基酸至约210个氨基酸，约30个氨基酸至约205个氨基酸，约30个氨基酸至约200个氨基酸，约30个氨基酸至约195个氨基酸，约30个氨基酸至约190个氨基酸，约30个氨基酸至约185个氨基酸，约30个氨基酸至约180个氨基酸，约30个氨基酸至约175个氨基酸，约30个氨基酸至约170个氨基酸，约30个氨基酸至约165个氨基酸，约30个氨基酸至约160个氨基酸，约30个氨基酸至约155个氨基酸，约30个氨基酸至约150个氨基酸，约30个氨基酸至约145个氨基酸，约30个氨基酸至约140个氨基酸，约30个氨基酸至约135个氨基酸，约30个氨基酸至约130个氨基酸，约30个氨基酸至约125个氨基酸，约30个氨基酸至约120个氨基酸，约30个氨基酸至约115个氨基酸，约30个氨基酸至约110个氨基酸，约30个氨基酸至约105个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约95个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约85个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约75个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约220个氨基酸，约40个氨基酸至约215个氨基酸，约40个氨基酸至约210个氨基酸，约40个氨基酸至约205个氨基酸，约40个氨基酸至约200个氨基酸，约40个氨基酸至约195个氨基酸，约40个氨基酸至约190个氨基酸，约40个氨基酸至约185个氨基酸，约40个氨基酸至约180个氨基酸，约40个氨基酸至约175个氨基酸，约40个氨基酸至约170个氨基酸，约40个氨基酸至约165个氨基酸，约40个氨基酸至约160个氨基酸，约40个氨基酸至约155个氨基酸，约40个氨基酸至约150个氨基酸，约40个氨基酸至约145个氨基酸，约40个氨基酸至约140个氨基酸，约40个氨基酸至约135个氨基酸，约40个氨基酸至约130个氨基酸，约40个氨基酸至约125个氨基酸，约40个氨基酸至约120个氨基酸，约40个氨基酸至约115个氨基酸，约40个氨基酸至约110个氨基酸，约40个氨基酸至约105个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约95个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约85个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约75个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约220个氨基酸，约50个氨基酸至约215个氨基酸，约50个氨基酸至约210个氨基酸，约50个氨基酸至约205个氨基酸，约50个氨基酸至约200个氨基酸，约50个氨基酸至约195个氨基酸，约50个氨基酸至约190个氨基酸，约50个氨基酸至约185个氨基酸，约50个氨基酸至约180个氨基酸，约50个氨基酸至约175个氨基酸，约50个氨基酸至约170个氨基酸，约50个氨基酸至约165个氨基酸，约50个氨基酸至约160个氨基酸，约50个氨基酸至约155个氨基酸，约50个氨基酸至约150个氨基酸，约50个氨基酸至约145个氨基酸，约50个氨基酸至约140个氨基酸，约50个氨基酸至约135个氨基酸，约50个氨基酸至约130个氨基酸，约50个氨基酸至约125个氨基酸，约50个氨基酸至约120个氨基酸，约50个氨基酸至约115个氨基酸，约50个氨基酸至约110个氨基酸，约50个氨基酸至约105个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约95个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约85个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约75个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约220个氨基酸，约60个氨基酸至约215个氨基酸，约60个氨基酸至约210个氨基酸，约60个氨基酸至约205个氨基酸，约60个氨基酸至约200个氨基酸，约60个氨基酸至约195个氨基酸，约60个氨基酸至约190个氨基酸，约60个氨基酸至约185个氨基酸，约60个氨基酸至约180个氨基酸，约60个氨基酸至约175个氨基酸，约60个氨基酸至约170个氨基酸，约60个氨基酸至约165个氨基酸，约60个氨基酸至约160个氨基酸，约60个氨基酸至约155个氨基酸，约60个氨基酸至约150个氨基酸，约60个氨基酸至约145个氨基酸，约60个氨基酸至约140个氨基酸，约60个氨基酸至约135个氨基酸，约60个氨基酸至约130个氨基酸，约60个氨基酸至约125个氨基酸，约60个氨基酸至约120个氨基酸，约60个氨基酸至约115个氨基酸，约60个氨基酸至约110个氨基酸，约60个氨基酸至约105个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约95个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约85个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约75个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约220个氨基酸，约70个氨基酸至约215个氨基酸，约70个氨基酸至约210个氨基酸，约70个氨基酸至约205个氨基酸，约70个氨基酸至约200个氨基酸，约70个氨基酸至约195个氨基酸，约70个氨基酸至约190个氨基酸，约70个氨基酸至约185个氨基酸，约70个氨基酸至约180个氨基酸，约70个氨基酸至约175个氨基酸，约70个氨基酸至约170个氨基酸，约70个氨基酸至约165个氨基酸，约70个氨基酸至约160个氨基酸，约70个氨基酸至约155个氨基酸，约70个氨基酸至约150个氨基酸，约70个氨基酸至约145个氨基酸，约70个氨基酸至约140个氨基酸，约70个氨基酸至约135个氨基酸，约70个氨基酸至约130个氨基酸，约70个氨基酸至约125个氨基酸，约70个氨基酸至约120个氨基酸，约70个氨基酸至约115个氨基酸，约70个氨基酸至约110个氨基酸，约70个氨基酸至约105个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约95个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约85个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约220个氨基酸，约80个氨基酸至约215个氨基酸，约80个氨基酸至约210个氨基酸，约80个氨基酸至约205个氨基酸，约80个氨基酸至约200个氨基酸，约80个氨基酸至约195个氨基酸，约80个氨基酸至约190个氨基酸，约80个氨基酸至约185个氨基酸，约80个氨基酸至约180个氨基酸，约80个氨基酸至约175个氨基酸，约80个氨基酸至约170个氨基酸，约80个氨基酸至约165个氨基酸，约80个氨基酸至约160个氨基酸，约80个氨基酸至约155个氨基酸，约80个氨基酸至约150个氨基酸，约80个氨基酸至约145个氨基酸，约80个氨基酸至约140个氨基酸，约80个氨基酸至约135个氨基酸，约80个氨基酸至约130个氨基酸，约80个氨基酸至约125个氨基酸，约80个氨基酸至约120个氨基酸，约80个氨基酸至约115个氨基酸，约80个氨基酸至约110个氨基酸，约80个氨基酸至约105个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约95个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，约90个氨基酸至约220个氨基酸，约90个氨基酸至约215个氨基酸，约90个氨基酸至约210个氨基酸，约90个氨基酸至约205个氨基酸，约90个氨基酸至约200个氨基酸，约90个氨基酸至约195个氨基酸，约90个氨基酸至约190个氨基酸，约90个氨基酸至约185个氨基酸，约90个氨基酸至约180个氨基酸，约90个氨基酸至约175个氨基酸，约90个氨基酸至约170个氨基酸，约90个氨基酸至约165个氨基酸，约90个氨基酸至约160个氨基酸，约90个氨基酸至约155个氨基酸，约90个氨基酸至约150个氨基酸，约90个氨基酸至约145个氨基酸，约90个氨基酸至约140个氨基酸，约90个氨基酸至约135个氨基酸，约90个氨基酸至约130个氨基酸，约90个氨基酸至约125个氨基酸，约90个氨基酸至约120个氨基酸，约90个氨基酸至约115个氨基酸，约90个氨基酸至约110个氨基酸，约90个氨基酸至约105个氨基酸，约90个氨基酸至约100个氨基酸，约100个氨基酸至约220个氨基酸，约100个氨基酸至约215个氨基酸，约100个氨基酸至约210个氨基酸，约100个氨基酸至约205个氨基酸，约100个氨基酸至约200个氨基酸，约100个氨基酸至约195个氨基酸，约100个氨基酸至约190个氨基酸，约100个氨基酸至约185个氨基酸，约100个氨基酸至约180个氨基酸，约100个氨基酸至约175个氨基酸，约100个氨基酸至约170个氨基酸，约100个氨基酸至约165个氨基酸，约100个氨基酸至约160个氨基酸，约100个氨基酸至约155个氨基酸，约100个氨基酸至约150个氨基酸，约100个氨基酸至约145个氨基酸，约100个氨基酸至约140个氨基酸，约100个氨基酸至约135个氨基酸，约100个氨基酸至约130个氨基酸，约100个氨基酸至约125个氨基酸，约100个氨基酸至约120个氨基酸，约100个氨基酸至约115个氨基酸，约100个氨基酸至约110个氨基酸，约110个氨基酸至约220个氨基酸，约110个氨基酸至约215个氨基酸，约110个氨基酸至约210个氨基酸，约110个氨基酸至约205个氨基酸，约110个氨基酸至约200个氨基酸，约110个氨基酸至约195个氨基酸，约110个氨基酸至约190个氨基酸，约110个氨基酸至约185个氨基酸，约110个氨基酸至约180个氨基酸，约110个氨基酸至约175个氨基酸，约110个氨基酸至约170个氨基酸，约110个氨基酸至约165个氨基酸，约110个氨基酸至约160个氨基酸，约110个氨基酸至约155个氨基酸，约110个氨基酸至约150个氨基酸，约110个氨基酸至约145个氨基酸，约110个氨基酸至约140个氨基酸，约110个氨基酸至约135个氨基酸，约110个氨基酸至约130个氨基酸，约110个氨基酸至约125个氨基酸，约110个氨基酸至约120个氨基酸，约110个氨基酸至约115个氨基酸，约115个氨基酸至约220个氨基酸，约115个氨基酸至约215个氨基酸，约115个氨基酸至约210个氨基酸，约115个氨基酸至约205个氨基酸，约115个氨基酸至约200个氨基酸，约115个氨基酸至约195个氨基酸，约115个氨基酸至约190个氨基酸，约115个氨基酸至约185个氨基酸，约115个氨基酸至约180个氨基酸，约115个氨基酸至约175个氨基酸，约115个氨基酸至约170个氨基酸，约115个氨基酸至约165个氨基酸，约115个氨基酸至约160个氨基酸，约115个氨基酸至约155个氨基酸，约115个氨基酸至约150个氨基酸，约115个氨基酸至约145个氨基酸，约115个氨基酸至约140个氨基酸，约115个氨基酸至约135个氨基酸，约115个氨基酸至约130个氨基酸，约115个氨基酸至约125个氨基酸，约115个氨基酸至约120个氨基酸，约120个氨基酸至约220个氨基酸，约120个氨基酸至约215个氨基酸，约120个氨基酸至约210个氨基酸，约120个氨基酸至约205个氨基酸，约120个氨基酸至约200个氨基酸，约120个氨基酸至约195个氨基酸，约120个氨基酸至约190个氨基酸，约120个氨基酸至约185个氨基酸，约120个氨基酸至约180个氨基酸，约120个氨基酸至约175个氨基酸，约120个氨基酸至约170个氨基酸，约120个氨基酸至约165个氨基酸，约120个氨基酸至约160个氨基酸，约120个氨基酸至约155个氨基酸，约120个氨基酸至约150个氨基酸，约120个氨基酸至约145个氨基酸，约120个氨基酸至约140个氨基酸，约120个氨基酸至约135个氨基酸，约120个氨基酸至约130个氨基酸，约120个氨基酸至约125个氨基酸，约125个氨基酸至约220个氨基酸，约125个氨基酸至约215个氨基酸，约125个氨基酸至约210个氨基酸，约125个氨基酸至约205个氨基酸，约125个氨基酸至约200个氨基酸，约125个氨基酸至约195个氨基酸，约125个氨基酸至约190个氨基酸，约125个氨基酸至约185个氨基酸，约125个氨基酸至约180个氨基酸，约125个氨基酸至约175个氨基酸，约125个氨基酸至约170个氨基酸，约125个氨基酸至约165个氨基酸，约125个氨基酸至约160个氨基酸，约125个氨基酸至约155个氨基酸，约125个氨基酸至约150个氨基酸，约125个氨基酸至约145个氨基酸，约125个氨基酸至约140个氨基酸，约125个氨基酸至约135个氨基酸，约125个氨基酸至约130个氨基酸，约130个氨基酸至约220个氨基酸，约130个氨基酸至约215个氨基酸，约130个氨基酸至约210个氨基酸，约130个氨基酸至约205个氨基酸，约130个氨基酸至约200个氨基酸，约130个氨基酸至约195个氨基酸，约130个氨基酸至约190个氨基酸，约130个氨基酸至约185个氨基酸，约130个氨基酸至约180个氨基酸，约130个氨基酸至约175个氨基酸，约130个氨基酸至约170个氨基酸，约130个氨基酸至约165个氨基酸，约130个氨基酸至约160个氨基酸，约130个氨基酸至约155个氨基酸，约130个氨基酸至约150个氨基酸，约130个氨基酸至约145个氨基酸，约130个氨基酸至约140个氨基酸，约130个氨基酸至约135个氨基酸，约135个氨基酸至约220个氨基酸，约135个氨基酸至约215个氨基酸，约135个氨基酸至约210个氨基酸，约135个氨基酸至约205个氨基酸，约135个氨基酸至约200个氨基酸，约135个氨基酸至约195个氨基酸，约135个氨基酸至约190个氨基酸，约135个氨基酸至约185个氨基酸，约135个氨基酸至约180个氨基酸，约135个氨基酸至约175个氨基酸，约135个氨基酸至约170个氨基酸，约135个氨基酸至约165个氨基酸，约135个氨基酸至约160个氨基酸，约135个氨基酸至约155个氨基酸，约135个氨基酸至约150个氨基酸，约135个氨基酸至约145个氨基酸，约135个氨基酸至约140个氨基酸，约140个氨基酸至约220个氨基酸，约140个氨基酸至约215个氨基酸，约140个氨基酸至约210个氨基酸，约140个氨基酸至约205个氨基酸，约140个氨基酸至约200个氨基酸，约140个氨基酸至约195个氨基酸，约140个氨基酸至约190个氨基酸，约140个氨基酸至约185个氨基酸，约140个氨基酸至约180个氨基酸，约140个氨基酸至约175个氨基酸，约140个氨基酸至约170个氨基酸，约140个氨基酸至约165个氨基酸，约140个氨基酸至约160个氨基酸，约140个氨基酸至约155个氨基酸，约140个氨基酸至约150个氨基酸，约140个氨基酸至约145个氨基酸，约145个氨基酸至约220个氨基酸，约145个氨基酸至约215个氨基酸，约145个氨基酸至约210个氨基酸，约145个氨基酸至约205个氨基酸，约145个氨基酸至约200个氨基酸，约145个氨基酸至约195个氨基酸，约145个氨基酸至约190个氨基酸，约145个氨基酸至约185个氨基酸，约145个氨基酸至约180个氨基酸，约145个氨基酸至约175个氨基酸，约145个氨基酸至约170个氨基酸，约145个氨基酸至约165个氨基酸，约145个氨基酸至约160个氨基酸，约145个氨基酸至约155个氨基酸，约145个氨基酸至约150个氨基酸，约150个氨基酸至约220个氨基酸，约150个氨基酸至约215个氨基酸，约150个氨基酸至约210个氨基酸，约150个氨基酸至约205个氨基酸，约150个氨基酸至约200个氨基酸，约150个氨基酸至约195个氨基酸，约150个氨基酸至约190个氨基酸，约150个氨基酸至约185个氨基酸，约150个氨基酸至约180个氨基酸，约150个氨基酸至约175个氨基酸，约150个氨基酸至约170个氨基酸，约150个氨基酸至约165个氨基酸，约150个氨基酸至约160个氨基酸，约150个氨基酸至约155个氨基酸，约155个氨基酸至约220个氨基酸，约155个氨基酸至约215个氨基酸，约155个氨基酸至约210个氨基酸，约155个氨基酸至约205个氨基酸，约155个氨基酸至约200个氨基酸，约155个氨基酸至约195个氨基酸，约155个氨基酸至约190个氨基酸，约155个氨基酸至约185个氨基酸，约155个氨基酸至约180个氨基酸，约155个氨基酸至约175个氨基酸，约155个氨基酸至约170个氨基酸，约155个氨基酸至约165个氨基酸，约155个氨基酸至约160个氨基酸，约160个氨基酸至约220个氨基酸，约160个氨基酸至约215个氨基酸，约160个氨基酸至约210个氨基酸，约160个氨基酸至约205个氨基酸，约160个氨基酸至约200个氨基酸，约160个氨基酸至约195个氨基酸，约160个氨基酸至约190个氨基酸，约160个氨基酸至约185个氨基酸，约160个氨基酸至约180个氨基酸，约160个氨基酸至约175个氨基酸，约160个氨基酸至约170个氨基酸，约160个氨基酸至约165个氨基酸，约165个氨基酸至约220个氨基酸，约165个氨基酸至约215个氨基酸，约165个氨基酸至约210个氨基酸，约165个氨基酸至约205个氨基酸，约165个氨基酸至约200个氨基酸，约165个氨基酸至约195个氨基酸，约165个氨基酸至约190个氨基酸，约165个氨基酸至约185个氨基酸，约165个氨基酸至约180个氨基酸，约165个氨基酸至约175个氨基酸，约165个氨基酸至约170个氨基酸，约170个氨基酸至约220个氨基酸，约170个氨基酸至约215个氨基酸，约170个氨基酸至约210个氨基酸，约170个氨基酸至约205个氨基酸，约170个氨基酸至约200个氨基酸，约170个氨基酸至约195个氨基酸，约170个氨基酸至约190个氨基酸，约170个氨基酸至约185个氨基酸，约170个氨基酸至约180个氨基酸，约170个氨基酸至约175个氨基酸，约175个氨基酸至约220个氨基酸，约175个氨基酸至约215个氨基酸，约175个氨基酸至约210个氨基酸，约175个氨基酸至约205个氨基酸，约175个氨基酸至约200个氨基酸，约175个氨基酸至约195个氨基酸，约175个氨基酸至约190个氨基酸，约175个氨基酸至约185个氨基酸，约175个氨基酸至约180个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约215个氨基酸，约180个氨基酸至约210个氨基酸，约180个氨基酸至约205个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约215个氨基酸，约185个氨基酸至约210个氨基酸，约185个氨基酸至约205个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约215个氨基酸，约190个氨基酸至约210个氨基酸，约190个氨基酸至约205个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约215个氨基酸，约195个氨基酸至约210个氨基酸，约195个氨基酸至约205个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约200个氨基酸至约215个氨基酸，约200个氨基酸至约210个氨基酸，约200个氨基酸至约205个氨基酸，约205个氨基酸至约220个氨基酸，约205个氨基酸至约215个氨基酸，约205个氨基酸至约210个氨基酸，约210个氨基酸至约220个氨基酸，约210个氨基酸至约215个氨基酸，或约215个氨基酸至约220个氨基酸。

接头序列

在一些实施例中，接头序列可为柔性接头序列。可使用的接头序列的非限制性实例描述于Klein等人,《蛋白质工程、设计和选择(Protein Engineering,Design&Selection)》27(10):325–330,2014；Priyanka等人,《蛋白质科学(Protein Sci.)》22(2):153–167,2013中。在一些实例中，接头序列是合成接头序列。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一嵌合多肽可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如，相同或不同的接头序列，例如本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽可包括一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个接头序列(例如，相同或不同的接头序列，例如本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

在一些实施例中，接头序列可具有的总长度为1个氨基酸至约100个氨基酸，1个氨基酸至约90个氨基酸，1个氨基酸至约80个氨基酸，1个氨基酸至约70个氨基酸，1个氨基酸至约60个氨基酸，1个氨基酸至约50个氨基酸，1个氨基酸至约45个氨基酸，1个氨基酸至约40个氨基酸，1个氨基酸至约35个氨基酸，1个氨基酸至约30个氨基酸，1个氨基酸至约25个氨基酸，1个氨基酸至约24个氨基酸，1个氨基酸至约22个氨基酸，1个氨基酸至约20个氨基酸，1个氨基酸至约18个氨基酸，1个氨基酸至约16个氨基酸，1个氨基酸至约14个氨基酸，1个氨基酸至约12个氨基酸，1个氨基酸至约10个氨基酸，1个氨基酸至约8个氨基酸，1个氨基酸至约6个氨基酸，1个氨基酸至约4个氨基酸，约2个氨基酸至约100个氨基酸，约2个氨基酸至约90个氨基酸，约2个氨基酸至约80个氨基酸，约2个氨基酸至约70个氨基酸，约2个氨基酸至约60个氨基酸，约2个氨基酸至约50个氨基酸，约2个氨基酸至约45个氨基酸，约2个氨基酸至约40个氨基酸，约2个氨基酸至约35个氨基酸，约2个氨基酸至约30个氨基酸，约2个氨基酸至约25个氨基酸，约2个氨基酸至约24个氨基酸，约2个氨基酸至约22个氨基酸，约2个氨基酸至约20个氨基酸，约2个氨基酸至约18个氨基酸，约2个氨基酸至约16个氨基酸，约2个氨基酸至约14个氨基酸，约2个氨基酸至约12个氨基酸，约2个氨基酸至约10个氨基酸，约2个氨基酸至约8个氨基酸，约2个氨基酸至约6个氨基酸，约2个氨基酸至约4个氨基酸，约4个氨基酸至约100个氨基酸，约4个氨基酸至约90个氨基酸，约4个氨基酸至约80个氨基酸，约4个氨基酸至约70个氨基酸，约4个氨基酸至约60个氨基酸，约4个氨基酸至约50个氨基酸，约4个氨基酸至约45个氨基酸，约4个氨基酸至约40个氨基酸，约4个氨基酸至约35个氨基酸，约4个氨基酸至约30个氨基酸，约4个氨基酸至约25个氨基酸，约4个氨基酸至约24个氨基酸，约4个氨基酸至约22个氨基酸，约4个氨基酸至约20个氨基酸，约4个氨基酸至约18个氨基酸，约4个氨基酸至约16个氨基酸，约4个氨基酸至约14个氨基酸，约4个氨基酸至约12个氨基酸，约4个氨基酸至约10个氨基酸，约4个氨基酸至约8个氨基酸，约4个氨基酸至约6个氨基酸，约6个氨基酸至约100个氨基酸，约6个氨基酸至约90个氨基酸，约6个氨基酸至约80个氨基酸，约6个氨基酸至约70个氨基酸，约6个氨基酸至约60个氨基酸，约6个氨基酸至约50个氨基酸，约6个氨基酸至约45个氨基酸，约6个氨基酸至约40个氨基酸，约6个氨基酸至约35个氨基酸，约6个氨基酸至约30个氨基酸，约6个氨基酸至约25个氨基酸，约6个氨基酸至约24个氨基酸，约6个氨基酸至约22个氨基酸，约6个氨基酸至约20个氨基酸，约6个氨基酸至约18个氨基酸，约6个氨基酸至约16个氨基酸，约6个氨基酸至约14个氨基酸，约6个氨基酸至约12个氨基酸，约6个氨基酸至约10个氨基酸，约6个氨基酸至约8个氨基酸，约8个氨基酸至约100个氨基酸，约8个氨基酸至约90个氨基酸，约8个氨基酸至约80个氨基酸，约8个氨基酸至约70个氨基酸，约8个氨基酸至约60个氨基酸，约8个氨基酸至约50个氨基酸，约8个氨基酸至约45个氨基酸，约8个氨基酸至约40个氨基酸，约8个氨基酸至约35个氨基酸，约8个氨基酸至约30个氨基酸，约8个氨基酸至约25个氨基酸，约8个氨基酸至约24个氨基酸，约8个氨基酸至约22个氨基酸，约8个氨基酸至约20个氨基酸，约8个氨基酸至约18个氨基酸，约8个氨基酸至约16个氨基酸，约8个氨基酸至约14个氨基酸，约8个氨基酸至约12个氨基酸，约8个氨基酸至约10个氨基酸，约10个氨基酸至约100个氨基酸，约10个氨基酸至约90个氨基酸，约10个氨基酸至约80个氨基酸，约10个氨基酸至约70个氨基酸，约10个氨基酸至约60个氨基酸，约10个氨基酸至约50个氨基酸，约10个氨基酸至约45个氨基酸，约10个氨基酸至约40个氨基酸，约10个氨基酸至约35个氨基酸，约10个氨基酸至约30个氨基酸，约10个氨基酸至约25个氨基酸，约10个氨基酸至约24个氨基酸，约10个氨基酸至约22个氨基酸，约10个氨基酸至约20个氨基酸，约10个氨基酸至约18个氨基酸，约10个氨基酸至约16个氨基酸，约10个氨基酸至约14个氨基酸，约10个氨基酸至约12个氨基酸，约12个氨基酸至约100个氨基酸，约12个氨基酸至约90个氨基酸，约12个氨基酸至约80个氨基酸，约12个氨基酸至约70个氨基酸，约12个氨基酸至约60个氨基酸，约12个氨基酸至约50个氨基酸，约12个氨基酸至约45个氨基酸，约12个氨基酸至约40个氨基酸，约12个氨基酸至约35个氨基酸，约12个氨基酸至约30个氨基酸，约12个氨基酸至约25个氨基酸，约12个氨基酸至约24个氨基酸，约12个氨基酸至约22个氨基酸，约12个氨基酸至约20个氨基酸，约12个氨基酸至约18个氨基酸，约12个氨基酸至约16个氨基酸，约12个氨基酸至约14个氨基酸，约14个氨基酸至约100个氨基酸，约14个氨基酸至约90个氨基酸，约14个氨基酸至约80个氨基酸，约14个氨基酸至约70个氨基酸，约14个氨基酸至约60个氨基酸，约14个氨基酸至约50个氨基酸，约14个氨基酸至约45个氨基酸，约14个氨基酸至约40个氨基酸，约14个氨基酸至约35个氨基酸，约14个氨基酸至约30个氨基酸，约14个氨基酸至约25个氨基酸，约14个氨基酸至约24个氨基酸，约14个氨基酸至约22个氨基酸，约14个氨基酸至约20个氨基酸，约14个氨基酸至约18个氨基酸，约14个氨基酸至约16个氨基酸，约16个氨基酸至约100个氨基酸，约16个氨基酸至约90个氨基酸，约16个氨基酸至约80个氨基酸，约16个氨基酸至约70个氨基酸，约16个氨基酸至约60个氨基酸，约16个氨基酸至约50个氨基酸，约16个氨基酸至约45个氨基酸，约16个氨基酸至约40个氨基酸，约16个氨基酸至约35个氨基酸，约16个氨基酸至约30个氨基酸，约16个氨基酸至约25个氨基酸，约16个氨基酸至约24个氨基酸，约16个氨基酸至约22个氨基酸，约16个氨基酸至约20个氨基酸，约16个氨基酸至约18个氨基酸，约18个氨基酸至约100个氨基酸，约18个氨基酸至约90个氨基酸，约18个氨基酸至约80个氨基酸，约18个氨基酸至约70个氨基酸，约18个氨基酸至约60个氨基酸，约18个氨基酸至约50个氨基酸，约18个氨基酸至约45个氨基酸，约18个氨基酸至约40个氨基酸，约18个氨基酸至约35个氨基酸，约18个氨基酸至约30个氨基酸，约18个氨基酸至约25个氨基酸，约18个氨基酸至约24个氨基酸，约18个氨基酸至约22个氨基酸，约18个氨基酸至约20个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约45个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约35个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约20个氨基酸至约25个氨基酸，约20个氨基酸至约24个氨基酸，约20个氨基酸至约22个氨基酸，约22个氨基酸至约100个氨基酸，约22个氨基酸至约90个氨基酸，约22个氨基酸至约80个氨基酸，约22个氨基酸至约70个氨基酸，约22个氨基酸至约60个氨基酸，约22个氨基酸至约50个氨基酸，约22个氨基酸至约45个氨基酸，约22个氨基酸至约40个氨基酸，约22个氨基酸至约35个氨基酸，约22个氨基酸至约30个氨基酸，约22个氨基酸至约25个氨基酸，约22个氨基酸至约24个氨基酸，约25个氨基酸至约100个氨基酸，约25个氨基酸至约90个氨基酸，约25个氨基酸至约80个氨基酸，约25个氨基酸至约70个氨基酸，约25个氨基酸至约60个氨基酸，约25个氨基酸至约50个氨基酸，约25个氨基酸至约45个氨基酸，约25个氨基酸至约40个氨基酸，约25个氨基酸至约35个氨基酸，约25个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约100个氨基酸，约30个氨基酸至约90个氨基酸，约30个氨基酸至约80个氨基酸，约30个氨基酸至约70个氨基酸，约30个氨基酸至约60个氨基酸，约30个氨基酸至约50个氨基酸，约30个氨基酸至约45个氨基酸，约30个氨基酸至约40个氨基酸，约30个氨基酸至约35个氨基酸，约35个氨基酸至约100个氨基酸，约35个氨基酸至约90个氨基酸，约35个氨基酸至约80个氨基酸，约35个氨基酸至约70个氨基酸，约35个氨基酸至约60个氨基酸，约35个氨基酸至约50个氨基酸，约35个氨基酸至约45个氨基酸，约35个氨基酸至约40个氨基酸，约40个氨基酸至约100个氨基酸，约40个氨基酸至约90个氨基酸，约40个氨基酸至约80个氨基酸，约40个氨基酸至约70个氨基酸，约40个氨基酸至约60个氨基酸，约40个氨基酸至约50个氨基酸，约40个氨基酸至约45个氨基酸，约45个氨基酸至约100个氨基酸，约45个氨基酸至约90个氨基酸，约45个氨基酸至约80个氨基酸，约45个氨基酸至约70个氨基酸，约45个氨基酸至约60个氨基酸，约45个氨基酸至约50个氨基酸，约50个氨基酸至约100个氨基酸，约50个氨基酸至约90个氨基酸，约50个氨基酸至约80个氨基酸，约50个氨基酸至约70个氨基酸，约50个氨基酸至约60个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，或约90个氨基酸至约100个氨基酸。

在一些实施例中，接头富含甘氨酸(Gly或G)残基。在一些实施例中，接头富含丝氨酸(Ser或S)残基。在一些实施例中，接头富含甘氨酸和丝氨酸残基。在一些实施例中，接头具有一个或多个甘氨酸-丝氨酸残基对(GS)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GS对。在一些实施例中，接头具有一个或多个Gly-Gly-Gly-Ser(GGGS)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGGS序列。在一些实施例中，接头具有一个或多个Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(GGGGS)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGGGS序列。在一些实施例中，接头具有一个或多个Gly-Gly-Ser-Gly(GGSG)序列，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个GGSG序列。

在一些实施例中，接头序列可包含以下或由以下组成：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:7)。在一些实施例中，接头序列可由包含以下或由以下组成的核酸编码：GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT(SEQ ID NO:8)。在一些实施例中，接头序列可包含以下或由以下组成：GGGSGGGS(SEQ ID NO:9)。

靶标结合结构域

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或另外的一个或多个靶标结合结构域可为抗原结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性抗原结合结构域中的任一种)、可溶性白介素或细胞因子蛋白(例如，本文所描述的示例性可溶性白介素蛋白或可溶性细胞因子蛋白中的任一种)和可溶性白介素或细胞因子受体(例如，本文所描述的示例性可溶性白介素受体或可溶性细胞因子受体中的任一种)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，一个或多个第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性第一靶标结合结构域中的任一种)、第二靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性第二靶标结合结构域中的任一种)和一个或多个另外的靶标结合结构域可各自独立地特异性结合到选自以下的组的靶标：特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3(例如，CD3α、CD3β、CD3δ、CD3ε和CD3γ中的一种或多种)、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白(例如ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5和ULBP6)、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体，NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NK

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和/或一个或多个另外的靶标结合结构域的氨基酸总数可各自独立地为约5个氨基酸至约1000个氨基酸，约5个氨基酸至约950个氨基酸，约5个氨基酸至约900个氨基酸，约5个氨基酸至约850个氨基酸，约5个氨基酸至约800个氨基酸，约5个氨基酸至约750个氨基酸，约5个氨基酸至约700个氨基酸，约5个氨基酸至约650个氨基酸，约5个氨基酸至约600个氨基酸，约5个氨基酸至约550个氨基酸，约5个氨基酸至约500个氨基酸，约5个氨基酸至约450个氨基酸，约5个氨基酸至约400个氨基酸，约5个氨基酸至约350个氨基酸，约5个氨基酸至约300个氨基酸，约5个氨基酸至约280个氨基酸，约5个氨基酸至约260个氨基酸，约5个氨基酸至约240个氨基酸，约5个氨基酸至约220个氨基酸，约5个氨基酸至约200个氨基酸，约5个氨基酸至约195个氨基酸，约5个氨基酸至约190个氨基酸，约5个氨基酸至约185个氨基酸，约5个氨基酸至约180个氨基酸，约5个氨基酸至约175个氨基酸，约5个氨基酸至约170个氨基酸，约5个氨基酸至约165个氨基酸，约5个氨基酸至约160个氨基酸，约5个氨基酸至约155个氨基酸，约5个氨基酸至约150个氨基酸，约5个氨基酸至约145个氨基酸，约5个氨基酸至约140个氨基酸，约5个氨基酸至约135个氨基酸，约5个氨基酸至约130个氨基酸，约5个氨基酸至约125个氨基酸，约5个氨基酸至约120个氨基酸，约5个氨基酸至约115个氨基酸，约5个氨基酸至约110个氨基酸，约5个氨基酸至约105个氨基酸，约5个氨基酸至约100个氨基酸，约5个氨基酸至约95个氨基酸，约5个氨基酸至约90个氨基酸，约5个氨基酸至约85个氨基酸，约5个氨基酸至约80个氨基酸，约5个氨基酸至约75个氨基酸，约5个氨基酸至约70个氨基酸，约5个氨基酸至约65个氨基酸，约5个氨基酸至约60个氨基酸，约5个氨基酸至约55个氨基酸，约5个氨基酸至约50个氨基酸，约5个氨基酸至约45个氨基酸，约5个氨基酸至约40个氨基酸，约5个氨基酸至约35个氨基酸，约5个氨基酸至约30个氨基酸，约5个氨基酸至约25个氨基酸，约5个氨基酸至约20个氨基酸，约5个氨基酸至约15个氨基酸，约5个氨基酸至约10个氨基酸，约10个氨基酸至约1000个氨基酸，约10个氨基酸至约950个氨基酸，约10个氨基酸至约900个氨基酸，约10个氨基酸至约850个氨基酸，约10个氨基酸至约800个氨基酸，约10个氨基酸至约750个氨基酸，约10个氨基酸至约700个氨基酸，约10个氨基酸至约650个氨基酸，约10个氨基酸至约600个氨基酸，约10个氨基酸至约550个氨基酸，约10个氨基酸至约500个氨基酸，约10个氨基酸至约450个氨基酸，约10个氨基酸至约400个氨基酸，约10个氨基酸至约350个氨基酸，约10个氨基酸至约300个氨基酸，约10个氨基酸至约280个氨基酸，约10个氨基酸至约260个氨基酸，约10个氨基酸至约240个氨基酸，约10个氨基酸至约220个氨基酸，约10个氨基酸至约200个氨基酸，约10个氨基酸至约195个氨基酸，约10个氨基酸至约190个氨基酸，约10个氨基酸至约185个氨基酸，约10个氨基酸至约180个氨基酸，约10个氨基酸至约175个氨基酸，约10个氨基酸至约170个氨基酸，约10个氨基酸至约165个氨基酸，约10个氨基酸至约160个氨基酸，约10个氨基酸至约155个氨基酸，约10个氨基酸至约150个氨基酸，约10个氨基酸至约145个氨基酸，约10个氨基酸至约140个氨基酸，约10个氨基酸至约135个氨基酸，约10个氨基酸至约130个氨基酸，约10个氨基酸至约125个氨基酸，约10个氨基酸至约120个氨基酸，约10个氨基酸至约115个氨基酸，约10个氨基酸至约110个氨基酸，约10个氨基酸至约105个氨基酸，约10个氨基酸至约100个氨基酸，约10个氨基酸至约95个氨基酸，约10个氨基酸至约90个氨基酸，约10个氨基酸至约85个氨基酸，约10个氨基酸至约80个氨基酸，约10个氨基酸至约75个氨基酸，约10个氨基酸至约70个氨基酸，约10个氨基酸至约65个氨基酸，约10个氨基酸至约60个氨基酸，约10个氨基酸至约55个氨基酸，约10个氨基酸至约50个氨基酸，约10个氨基酸至约45个氨基酸，约10个氨基酸至约40个氨基酸，约10个氨基酸至约35个氨基酸，约10个氨基酸至约30个氨基酸，约10个氨基酸至约25个氨基酸，约10个氨基酸至约20个氨基酸，约10个氨基酸至约15个氨基酸，约15个氨基酸至约1000个氨基酸，约15个氨基酸至约950个氨基酸，约15个氨基酸至约900个氨基酸，约15个氨基酸至约850个氨基酸，约15个氨基酸至约800个氨基酸，约15个氨基酸至约750个氨基酸，约15个氨基酸至约700个氨基酸，约15个氨基酸至约650个氨基酸，约15个氨基酸至约600个氨基酸，约15个氨基酸至约550个氨基酸，约15个氨基酸至约500个氨基酸，约15个氨基酸至约450个氨基酸，约15个氨基酸至约400个氨基酸，约15个氨基酸至约350个氨基酸，约15个氨基酸至约300个氨基酸，约15个氨基酸至约280个氨基酸，约15个氨基酸至约260个氨基酸，约15个氨基酸至约240个氨基酸，约15个氨基酸至约220个氨基酸，约15个氨基酸至约200个氨基酸，约15个氨基酸至约195个氨基酸，约15个氨基酸至约190个氨基酸，约15个氨基酸至约185个氨基酸，约15个氨基酸至约180个氨基酸，约15个氨基酸至约175个氨基酸，约15个氨基酸至约170个氨基酸，约15个氨基酸至约165个氨基酸，约15个氨基酸至约160个氨基酸，约15个氨基酸至约155个氨基酸，约15个氨基酸至约150个氨基酸，约15个氨基酸至约145个氨基酸，约15个氨基酸至约140个氨基酸，约15个氨基酸至约135个氨基酸，约15个氨基酸至约130个氨基酸，约15个氨基酸至约125个氨基酸，约15个氨基酸至约120个氨基酸，约15个氨基酸至约115个氨基酸，约15个氨基酸至约110个氨基酸，约15个氨基酸至约105个氨基酸，约15个氨基酸至约100个氨基酸，约15个氨基酸至约95个氨基酸，约15个氨基酸至约90个氨基酸，约15个氨基酸至约85个氨基酸，约15个氨基酸至约80个氨基酸，约15个氨基酸至约75个氨基酸，约15个氨基酸至约70个氨基酸，约15个氨基酸至约65个氨基酸，约15个氨基酸至约60个氨基酸，约15个氨基酸至约55个氨基酸，约15个氨基酸至约50个氨基酸，约15个氨基酸至约45个氨基酸，约15个氨基酸至约40个氨基酸，约15个氨基酸至约35个氨基酸，约15个氨基酸至约30个氨基酸，约15个氨基酸至约25个氨基酸，约15个氨基酸至约20个氨基酸，约20个氨基酸至约1000个氨基酸，约20个氨基酸至约950个氨基酸，约20个氨基酸至约900个氨基酸，约20个氨基酸至约850个氨基酸，约20个氨基酸至约800个氨基酸，约20个氨基酸至约750个氨基酸，约20个氨基酸至约700个氨基酸，约20个氨基酸至约650个氨基酸，约20个氨基酸至约600个氨基酸，约20个氨基酸至约550个氨基酸，约20个氨基酸至约500个氨基酸，约20个氨基酸至约450个氨基酸，约20个氨基酸至约400个氨基酸，约20个氨基酸至约350个氨基酸，约20个氨基酸至约300个氨基酸，约20个氨基酸至约280个氨基酸，约20个氨基酸至约260个氨基酸，约20个氨基酸至约240个氨基酸，约20个氨基酸至约220个氨基酸，约20个氨基酸至约200个氨基酸，约20个氨基酸至约195个氨基酸，约20个氨基酸至约190个氨基酸，约20个氨基酸至约185个氨基酸，约20个氨基酸至约180个氨基酸，约20个氨基酸至约175个氨基酸，约20个氨基酸至约170个氨基酸，约20个氨基酸至约165个氨基酸，约20个氨基酸至约160个氨基酸，约20个氨基酸至约155个氨基酸，约20个氨基酸至约150个氨基酸，约20个氨基酸至约145个氨基酸，约20个氨基酸至约140个氨基酸，约20个氨基酸至约135个氨基酸，约20个氨基酸至约130个氨基酸，约20个氨基酸至约125个氨基酸，约20个氨基酸至约120个氨基酸，约20个氨基酸至约115个氨基酸，约20个氨基酸至约110个氨基酸，约20个氨基酸至约105个氨基酸，约20个氨基酸至约100个氨基酸，约20个氨基酸至约95个氨基酸，约20个氨基酸至约90个氨基酸，约20个氨基酸至约85个氨基酸，约20个氨基酸至约80个氨基酸，约20个氨基酸至约75个氨基酸，约20个氨基酸至约70个氨基酸，约20个氨基酸至约65个氨基酸，约20个氨基酸至约60个氨基酸，约20个氨基酸至约55个氨基酸，约20个氨基酸至约50个氨基酸，约20个氨基酸至约45个氨基酸，约20个氨基酸至约40个氨基酸，约20个氨基酸至约35个氨基酸，约20个氨基酸至约30个氨基酸，约20个氨基酸至约25个氨基酸，约25个氨基酸至约1000个氨基酸，约25个氨基酸至约950个氨基酸，约25个氨基酸至约900个氨基酸，约25个氨基酸至约850个氨基酸，约25个氨基酸至约800个氨基酸，约25个氨基酸至约750个氨基酸，约25个氨基酸至约700个氨基酸，约25个氨基酸至约650个氨基酸，约25个氨基酸至约600个氨基酸，约25个氨基酸至约550个氨基酸，约25个氨基酸至约500个氨基酸，约25个氨基酸至约450个氨基酸，约25个氨基酸至约400个氨基酸，约25个氨基酸至约350个氨基酸，约25个氨基酸至约300个氨基酸，约25个氨基酸至约280个氨基酸，约25个氨基酸至约260个氨基酸，约25个氨基酸至约240个氨基酸，约25个氨基酸至约220个氨基酸，约25个氨基酸至约200个氨基酸，约25个氨基酸至约195个氨基酸，约25个氨基酸至约190个氨基酸，约25个氨基酸至约185个氨基酸，约25个氨基酸至约180个氨基酸，约25个氨基酸至约175个氨基酸，约25个氨基酸至约170个氨基酸，约25个氨基酸至约165个氨基酸，约25个氨基酸至约160个氨基酸，约25个氨基酸至约155个氨基酸，约25个氨基酸至约150个氨基酸，约25个氨基酸至约145个氨基酸，约25个氨基酸至约140个氨基酸，约25个氨基酸至约135个氨基酸，约25个氨基酸至约130个氨基酸，约25个氨基酸至约125个氨基酸，约25个氨基酸至约120个氨基酸，约25个氨基酸至约115个氨基酸，约25个氨基酸至约110个氨基酸，约25个氨基酸至约105个氨基酸，约25个氨基酸至约100个氨基酸，约25个氨基酸至约95个氨基酸，约25个氨基酸至约90个氨基酸，约25个氨基酸至约85个氨基酸，约25个氨基酸至约80个氨基酸，约25个氨基酸至约75个氨基酸，约25个氨基酸至约70个氨基酸，约25个氨基酸至约65个氨基酸，约25个氨基酸至约60个氨基酸，约25个氨基酸至约55个氨基酸，约25个氨基酸至约50个氨基酸，约25个氨基酸至约45个氨基酸，约25个氨基酸至约40个氨基酸，约25个氨基酸至约35个氨基酸，约25个氨基酸至约30个氨基酸，约30个氨基酸至约1000个氨基酸，约30个氨基酸至约950个氨基酸，约30个氨基酸至约900个氨基酸，约30个氨基酸至约850个氨基酸，约30个氨基酸至约800个氨基酸，约30个氨基酸至约750个氨基酸，约30个氨基酸至约700个氨基酸，约30个氨基酸至约650个氨基酸，约30个氨基酸至约600个氨基酸，约30个氨基酸至约550个氨基酸，约30个氨基酸至约500个氨基酸，约30个氨基酸至约450个氨基酸，约30个氨基酸至约400个氨基酸，约30个氨基酸至约350个氨基酸，约30个氨基酸至约300个氨基酸，约30个氨基酸至约280个氨基酸，约30个氨基酸至约260个氨基酸，约30个氨基酸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酸，约60个氨基酸至约400个氨基酸，约60个氨基酸至约350个氨基酸，约60个氨基酸至约300个氨基酸，约60个氨基酸至约280个氨基酸，约60个氨基酸至约260个氨基酸，约60个氨基酸至约240个氨基酸，约60个氨基酸至约220个氨基酸，约60个氨基酸至约200个氨基酸，约60个氨基酸至约195个氨基酸，约60个氨基酸至约190个氨基酸，约60个氨基酸至约185个氨基酸，约60个氨基酸至约180个氨基酸，约60个氨基酸至约175个氨基酸，约60个氨基酸至约170个氨基酸，约60个氨基酸至约165个氨基酸，约60个氨基酸至约160个氨基酸，约60个氨基酸至约155个氨基酸，约60个氨基酸至约150个氨基酸，约60个氨基酸至约145个氨基酸，约60个氨基酸至约140个氨基酸，约60个氨基酸至约135个氨基酸，约60个氨基酸至约130个氨基酸，约60个氨基酸至约125个氨基酸，约60个氨基酸至约120个氨基酸，约60个氨基酸至约115个氨基酸，约60个氨基酸至约110个氨基酸，约60个氨基酸至约105个氨基酸，约60个氨基酸至约100个氨基酸，约60个氨基酸至约95个氨基酸，约60个氨基酸至约90个氨基酸，约60个氨基酸至约85个氨基酸，约60个氨基酸至约80个氨基酸，约60个氨基酸至约75个氨基酸，约60个氨基酸至约70个氨基酸，约60个氨基酸至约65个氨基酸，约65个氨基酸至约1000个氨基酸，约65个氨基酸至约950个氨基酸，约65个氨基酸至约900个氨基酸，约65个氨基酸至约850个氨基酸，约65个氨基酸至约800个氨基酸，约65个氨基酸至约750个氨基酸，约65个氨基酸至约700个氨基酸，约65个氨基酸至约650个氨基酸，约65个氨基酸至约600个氨基酸，约65个氨基酸至约550个氨基酸，约65个氨基酸至约500个氨基酸，约65个氨基酸至约450个氨基酸，约65个氨基酸至约400个氨基酸，约65个氨基酸至约350个氨基酸，约65个氨基酸至约300个氨基酸，约65个氨基酸至约280个氨基酸，约65个氨基酸至约260个氨基酸，约65个氨基酸至约240个氨基酸，约65个氨基酸至约220个氨基酸，约65个氨基酸至约200个氨基酸，约65个氨基酸至约195个氨基酸，约65个氨基酸至约190个氨基酸，约65个氨基酸至约185个氨基酸，约65个氨基酸至约180个氨基酸，约65个氨基酸至约175个氨基酸，约65个氨基酸至约170个氨基酸，约65个氨基酸至约165个氨基酸，约65个氨基酸至约160个氨基酸，约65个氨基酸至约155个氨基酸，约65个氨基酸至约150个氨基酸，约65个氨基酸至约145个氨基酸，约65个氨基酸至约140个氨基酸，约65个氨基酸至约135个氨基酸，约65个氨基酸至约130个氨基酸，约65个氨基酸至约125个氨基酸，约65个氨基酸至约120个氨基酸，约65个氨基酸至约115个氨基酸，约65个氨基酸至约110个氨基酸，约65个氨基酸至约105个氨基酸，约65个氨基酸至约100个氨基酸，约65个氨基酸至约95个氨基酸，约65个氨基酸至约90个氨基酸，约65个氨基酸至约85个氨基酸，约65个氨基酸至约80个氨基酸，约65个氨基酸至约75个氨基酸，约65个氨基酸至约70个氨基酸，约70个氨基酸至约1000个氨基酸，约70个氨基酸至约950个氨基酸，约70个氨基酸至约900个氨基酸，约70个氨基酸至约850个氨基酸，约70个氨基酸至约800个氨基酸，约70个氨基酸至约750个氨基酸，约70个氨基酸至约700个氨基酸，约70个氨基酸至约650个氨基酸，约70个氨基酸至约600个氨基酸，约70个氨基酸至约550个氨基酸，约70个氨基酸至约500个氨基酸，约70个氨基酸至约450个氨基酸，约70个氨基酸至约400个氨基酸，约70个氨基酸至约350个氨基酸，约70个氨基酸至约300个氨基酸，约70个氨基酸至约280个氨基酸，约70个氨基酸至约260个氨基酸，约70个氨基酸至约240个氨基酸，约70个氨基酸至约220个氨基酸，约70个氨基酸至约200个氨基酸，约70个氨基酸至约195个氨基酸，约70个氨基酸至约190个氨基酸，约70个氨基酸至约185个氨基酸，约70个氨基酸至约180个氨基酸，约70个氨基酸至约175个氨基酸，约70个氨基酸至约170个氨基酸，约70个氨基酸至约165个氨基酸，约70个氨基酸至约160个氨基酸，约70个氨基酸至约155个氨基酸，约70个氨基酸至约150个氨基酸，约70个氨基酸至约145个氨基酸，约70个氨基酸至约140个氨基酸，约70个氨基酸至约135个氨基酸，约70个氨基酸至约130个氨基酸，约70个氨基酸至约125个氨基酸，约70个氨基酸至约120个氨基酸，约70个氨基酸至约115个氨基酸，约70个氨基酸至约110个氨基酸，约70个氨基酸至约105个氨基酸，约70个氨基酸至约100个氨基酸，约70个氨基酸至约95个氨基酸，约70个氨基酸至约90个氨基酸，约70个氨基酸至约85个氨基酸，约70个氨基酸至约80个氨基酸，约70个氨基酸至约75个氨基酸，约75个氨基酸至约1000个氨基酸，约75个氨基酸至约950个氨基酸，约75个氨基酸至约900个氨基酸，约75个氨基酸至约850个氨基酸，约75个氨基酸至约800个氨基酸，约75个氨基酸至约750个氨基酸，约75个氨基酸至约700个氨基酸，约75个氨基酸至约650个氨基酸，约75个氨基酸至约600个氨基酸，约75个氨基酸至约550个氨基酸，约75个氨基酸至约500个氨基酸，约75个氨基酸至约450个氨基酸，约75个氨基酸至约400个氨基酸，约75个氨基酸至约350个氨基酸，约75个氨基酸至约300个氨基酸，约75个氨基酸至约280个氨基酸，约75个氨基酸至约260个氨基酸，约75个氨基酸至约240个氨基酸，约75个氨基酸至约220个氨基酸，约75个氨基酸至约200个氨基酸，约75个氨基酸至约195个氨基酸，约75个氨基酸至约190个氨基酸，约75个氨基酸至约185个氨基酸，约75个氨基酸至约180个氨基酸，约75个氨基酸至约175个氨基酸，约75个氨基酸至约170个氨基酸，约75个氨基酸至约165个氨基酸，约75个氨基酸至约160个氨基酸，约75个氨基酸至约155个氨基酸，约75个氨基酸至约150个氨基酸，约75个氨基酸至约145个氨基酸，约75个氨基酸至约140个氨基酸，约75个氨基酸至约135个氨基酸，约75个氨基酸至约130个氨基酸，约75个氨基酸至约125个氨基酸，约75个氨基酸至约120个氨基酸，约75个氨基酸至约115个氨基酸，约75个氨基酸至约110个氨基酸，约75个氨基酸至约105个氨基酸，约75个氨基酸至约100个氨基酸，约75个氨基酸至约95个氨基酸，约75个氨基酸至约90个氨基酸，约75个氨基酸至约85个氨基酸，约75个氨基酸至约80个氨基酸，约80个氨基酸至约1000个氨基酸，约80个氨基酸至约950个氨基酸，约80个氨基酸至约900个氨基酸，约80个氨基酸至约850个氨基酸，约80个氨基酸至约800个氨基酸，约80个氨基酸至约750个氨基酸，约80个氨基酸至约700个氨基酸，约80个氨基酸至约650个氨基酸，约80个氨基酸至约600个氨基酸，约80个氨基酸至约550个氨基酸，约80个氨基酸至约500个氨基酸，约80个氨基酸至约450个氨基酸，约80个氨基酸至约400个氨基酸，约80个氨基酸至约350个氨基酸，约80个氨基酸至约300个氨基酸，约80个氨基酸至约280个氨基酸，约80个氨基酸至约260个氨基酸，约80个氨基酸至约240个氨基酸，约80个氨基酸至约220个氨基酸，约80个氨基酸至约200个氨基酸，约80个氨基酸至约195个氨基酸，约80个氨基酸至约190个氨基酸，约80个氨基酸至约185个氨基酸，约80个氨基酸至约180个氨基酸，约80个氨基酸至约175个氨基酸，约80个氨基酸至约170个氨基酸，约80个氨基酸至约165个氨基酸，约80个氨基酸至约160个氨基酸，约80个氨基酸至约155个氨基酸，约80个氨基酸至约150个氨基酸，约80个氨基酸至约145个氨基酸，约80个氨基酸至约140个氨基酸，约80个氨基酸至约135个氨基酸，约80个氨基酸至约130个氨基酸，约80个氨基酸至约125个氨基酸，约80个氨基酸至约120个氨基酸，约80个氨基酸至约115个氨基酸，约80个氨基酸至约110个氨基酸，约80个氨基酸至约105个氨基酸，约80个氨基酸至约100个氨基酸，约80个氨基酸至约95个氨基酸，约80个氨基酸至约90个氨基酸，约80个氨基酸至约85个氨基酸，约85个氨基酸至约1000个氨基酸，约85个氨基酸至约950个氨基酸，约85个氨基酸至约900个氨基酸，约85个氨基酸至约850个氨基酸，约85个氨基酸至约800个氨基酸，约85个氨基酸至约750个氨基酸，约85个氨基酸至约700个氨基酸，约85个氨基酸至约650个氨基酸，约85个氨基酸至约600个氨基酸，约85个氨基酸至约550个氨基酸，约85个氨基酸至约500个氨基酸，约85个氨基酸至约450个氨基酸，约85个氨基酸至约400个氨基酸，约85个氨基酸至约350个氨基酸，约85个氨基酸至约300个氨基酸，约85个氨基酸至约280个氨基酸，约85个氨基酸至约260个氨基酸，约85个氨基酸至约240个氨基酸，约85个氨基酸至约220个氨基酸，约85个氨基酸至约200个氨基酸，约85个氨基酸至约195个氨基酸，约85个氨基酸至约190个氨基酸，约85个氨基酸至约185个氨基酸，约85个氨基酸至约180个氨基酸，约85个氨基酸至约175个氨基酸，约85个氨基酸至约170个氨基酸，约85个氨基酸至约165个氨基酸，约85个氨基酸至约160个氨基酸，约85个氨基酸至约155个氨基酸，约85个氨基酸至约150个氨基酸，约85个氨基酸至约145个氨基酸，约85个氨基酸至约140个氨基酸，约85个氨基酸至约135个氨基酸，约85个氨基酸至约130个氨基酸，约85个氨基酸至约125个氨基酸，约85个氨基酸至约120个氨基酸，约85个氨基酸至约115个氨基酸，约85个氨基酸至约110个氨基酸，约85个氨基酸至约105个氨基酸，约85个氨基酸至约100个氨基酸，约85个氨基酸至约95个氨基酸，约85个氨基酸至约90个氨基酸，约90个氨基酸至约1000个氨基酸，约90个氨基酸至约950个氨基酸，约90个氨基酸至约900个氨基酸，约90个氨基酸至约850个氨基酸，约90个氨基酸至约800个氨基酸，约90个氨基酸至约750个氨基酸，约90个氨基酸至约700个氨基酸，约90个氨基酸至约650个氨基酸，约90个氨基酸至约600个氨基酸，约90个氨基酸至约550个氨基酸，约90个氨基酸至约500个氨基酸，约90个氨基酸至约450个氨基酸，约90个氨基酸至约400个氨基酸，约90个氨基酸至约350个氨基酸，约90个氨基酸至约300个氨基酸，约90个氨基酸至约280个氨基酸，约90个氨基酸至约260个氨基酸，约90个氨基酸至约240个氨基酸，约90个氨基酸至约220个氨基酸，约90个氨基酸至约200个氨基酸，约90个氨基酸至约195个氨基酸，约90个氨基酸至约190个氨基酸，约90个氨基酸至约185个氨基酸，约90个氨基酸至约180个氨基酸，约90个氨基酸至约175个氨基酸，约90个氨基酸至约170个氨基酸，约90个氨基酸至约165个氨基酸，约90个氨基酸至约160个氨基酸，约90个氨基酸至约155个氨基酸，约90个氨基酸至约150个氨基酸，约90个氨基酸至约145个氨基酸，约90个氨基酸至约140个氨基酸，约90个氨基酸至约135个氨基酸，约90个氨基酸至约130个氨基酸，约90个氨基酸至约125个氨基酸，约90个氨基酸至约120个氨基酸，约90个氨基酸至约115个氨基酸，约90个氨基酸至约110个氨基酸，约90个氨基酸至约105个氨基酸，约90个氨基酸至约100个氨基酸，约90个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80个氨基酸至约400个氨基酸，约180个氨基酸至约350个氨基酸，约180个氨基酸至约300个氨基酸，约180个氨基酸至约280个氨基酸，约180个氨基酸至约260个氨基酸，约180个氨基酸至约240个氨基酸，约180个氨基酸至约220个氨基酸，约180个氨基酸至约200个氨基酸，约180个氨基酸至约195个氨基酸，约180个氨基酸至约190个氨基酸，约180个氨基酸至约185个氨基酸，约185个氨基酸至约1000个氨基酸，约185个氨基酸至约950个氨基酸，约185个氨基酸至约900个氨基酸，约185个氨基酸至约850个氨基酸，约185个氨基酸至约800个氨基酸，约185个氨基酸至约750个氨基酸，约185个氨基酸至约700个氨基酸，约185个氨基酸至约650个氨基酸，约185个氨基酸至约600个氨基酸，约185个氨基酸至约550个氨基酸，约185个氨基酸至约500个氨基酸，约185个氨基酸至约450个氨基酸，约185个氨基酸至约400个氨基酸，约185个氨基酸至约350个氨基酸，约185个氨基酸至约300个氨基酸，约185个氨基酸至约280个氨基酸，约185个氨基酸至约260个氨基酸，约185个氨基酸至约240个氨基酸，约185个氨基酸至约220个氨基酸，约185个氨基酸至约200个氨基酸，约185个氨基酸至约195个氨基酸，约185个氨基酸至约190个氨基酸，约190个氨基酸至约1000个氨基酸，约190个氨基酸至约950个氨基酸，约190个氨基酸至约900个氨基酸，约190个氨基酸至约850个氨基酸，约190个氨基酸至约800个氨基酸，约190个氨基酸至约750个氨基酸，约190个氨基酸至约700个氨基酸，约190个氨基酸至约650个氨基酸，约190个氨基酸至约600个氨基酸，约190个氨基酸至约550个氨基酸，约190个氨基酸至约500个氨基酸，约190个氨基酸至约450个氨基酸，约190个氨基酸至约400个氨基酸，约190个氨基酸至约350个氨基酸，约190个氨基酸至约300个氨基酸，约190个氨基酸至约280个氨基酸，约190个氨基酸至约260个氨基酸，约190个氨基酸至约240个氨基酸，约190个氨基酸至约220个氨基酸，约190个氨基酸至约200个氨基酸，约190个氨基酸至约195个氨基酸，约195个氨基酸至约1000个氨基酸，约195个氨基酸至约950个氨基酸，约195个氨基酸至约900个氨基酸，约195个氨基酸至约850个氨基酸，约195个氨基酸至约800个氨基酸，约195个氨基酸至约750个氨基酸，约195个氨基酸至约700个氨基酸，约195个氨基酸至约650个氨基酸，约195个氨基酸至约600个氨基酸，约195个氨基酸至约550个氨基酸，约195个氨基酸至约500个氨基酸，约195个氨基酸至约450个氨基酸，约195个氨基酸至约400个氨基酸，约195个氨基酸至约350个氨基酸，约195个氨基酸至约300个氨基酸，约195个氨基酸至约280个氨基酸，约195个氨基酸至约260个氨基酸，约195个氨基酸至约240个氨基酸，约195个氨基酸至约220个氨基酸，约195个氨基酸至约200个氨基酸，约200个氨基酸至约1000个氨基酸，约200个氨基酸至约950个氨基酸，约200个氨基酸至约900个氨基酸，约200个氨基酸至约850个氨基酸，约200个氨基酸至约800个氨基酸，约200个氨基酸至约750个氨基酸，约200个氨基酸至约700个氨基酸，约200个氨基酸至约650个氨基酸，约200个氨基酸至约600个氨基酸，约200个氨基酸至约550个氨基酸，约200个氨基酸至约500个氨基酸，约200个氨基酸至约450个氨基酸，约200个氨基酸至约400个氨基酸，约200个氨基酸至约350个氨基酸，约200个氨基酸至约300个氨基酸，约200个氨基酸至约280个氨基酸，约200个氨基酸至约260个氨基酸，约200个氨基酸至约240个氨基酸，约200个氨基酸至约220个氨基酸，约220个氨基酸至约1000个氨基酸，约220个氨基酸至约950个氨基酸，约220个氨基酸至约900个氨基酸，约220个氨基酸至约850个氨基酸，约220个氨基酸至约800个氨基酸，约220个氨基酸至约750个氨基酸，约220个氨基酸至约700个氨基酸，约220个氨基酸至约650个氨基酸，约220个氨基酸至约600个氨基酸，约220个氨基酸至约550个氨基酸，约220个氨基酸至约500个氨基酸，约220个氨基酸至约450个氨基酸，约220个氨基酸至约400个氨基酸，约220个氨基酸至约350个氨基酸，约220个氨基酸至约300个氨基酸，约220个氨基酸至约280个氨基酸，约220个氨基酸至约260个氨基酸，约220个氨基酸至约240个氨基酸，约240个氨基酸至约1000个氨基酸，约240个氨基酸至约950个氨基酸，约240个氨基酸至约900个氨基酸，约240个氨基酸至约850个氨基酸，约240个氨基酸至约800个氨基酸，约240个氨基酸至约750个氨基酸，约240个氨基酸至约700个氨基酸，约240个氨基酸至约650个氨基酸，约240个氨基酸至约600个氨基酸，约240个氨基酸至约550个氨基酸，约240个氨基酸至约500个氨基酸，约240个氨基酸至约450个氨基酸，约240个氨基酸至约400个氨基酸，约240个氨基酸至约350个氨基酸，约240个氨基酸至约300个氨基酸，约240个氨基酸至约280个氨基酸，约240个氨基酸至约260个氨基酸，约260个氨基酸至约1000个氨基酸，约260个氨基酸至约950个氨基酸，约260个氨基酸至约900个氨基酸，约260个氨基酸至约850个氨基酸，约260个氨基酸至约800个氨基酸，约260个氨基酸至约750个氨基酸，约260个氨基酸至约700个氨基酸，约260个氨基酸至约650个氨基酸，约260个氨基酸至约600个氨基酸，约260个氨基酸至约550个氨基酸，约260个氨基酸至约500个氨基酸，约260个氨基酸至约450个氨基酸，约260个氨基酸至约400个氨基酸，约260个氨基酸至约350个氨基酸，约260个氨基酸至约300个氨基酸，约260个氨基酸至约280个氨基酸，约280个氨基酸至约1000个氨基酸，约280个氨基酸至约950个氨基酸，约280个氨基酸至约900个氨基酸，约280个氨基酸至约850个氨基酸，约280个氨基酸至约800个氨基酸，约280个氨基酸至约750个氨基酸，约280个氨基酸至约700个氨基酸，约280个氨基酸至约650个氨基酸，约280个氨基酸至约600个氨基酸，约280个氨基酸至约550个氨基酸，约280个氨基酸至约500个氨基酸，约280个氨基酸至约450个氨基酸，约280个氨基酸至约400个氨基酸，约280个氨基酸至约350个氨基酸，约280个氨基酸至约300个氨基酸，约300个氨基酸至约1000个氨基酸，约300个氨基酸至约950个氨基酸，约300个氨基酸至约900个氨基酸，约300个氨基酸至约850个氨基酸，约300个氨基酸至约800个氨基酸，约300个氨基酸至约750个氨基酸，约300个氨基酸至约700个氨基酸，约300个氨基酸至约650个氨基酸，约300个氨基酸至约600个氨基酸，约300个氨基酸至约550个氨基酸，约300个氨基酸至约500个氨基酸，约300个氨基酸至约450个氨基酸，约300个氨基酸至约400个氨基酸，约300个氨基酸至约350个氨基酸，约350个氨基酸至约1000个氨基酸，约350个氨基酸至约950个氨基酸，约350个氨基酸至约900个氨基酸，约350个氨基酸至约850个氨基酸，约350个氨基酸至约800个氨基酸，约350个氨基酸至约750个氨基酸，约350个氨基酸至约700个氨基酸，约350个氨基酸至约650个氨基酸，约350个氨基酸至约600个氨基酸，约350个氨基酸至约550个氨基酸，约350个氨基酸至约500个氨基酸，约350个氨基酸至约450个氨基酸，约350个氨基酸至约400个氨基酸，约400个氨基酸至约1000个氨基酸，约400个氨基酸至约950个氨基酸，约400个氨基酸至约900个氨基酸，约400个氨基酸至约850个氨基酸，约400个氨基酸至约800个氨基酸，约400个氨基酸至约750个氨基酸，约400个氨基酸至约700个氨基酸，约400个氨基酸至约650个氨基酸，约400个氨基酸至约600个氨基酸，约400个氨基酸至约550个氨基酸，约400个氨基酸至约500个氨基酸，约400个氨基酸至约450个氨基酸，约450个氨基酸至约1000个氨基酸，约450个氨基酸至约950个氨基酸，约450个氨基酸至约900个氨基酸，约450个氨基酸至约850个氨基酸，约450个氨基酸至约800个氨基酸，约450个氨基酸至约750个氨基酸，约450个氨基酸至约700个氨基酸，约450个氨基酸至约650个氨基酸，约450个氨基酸至约600个氨基酸，约450个氨基酸至约550个氨基酸，约450个氨基酸至约500个氨基酸，约500个氨基酸至约1000个氨基酸，约500个氨基酸至约950个氨基酸，约500个氨基酸至约900个氨基酸，约500个氨基酸至约850个氨基酸，约500个氨基酸至约800个氨基酸，约500个氨基酸至约750个氨基酸，约500个氨基酸至约700个氨基酸，约500个氨基酸至约650个氨基酸，约500个氨基酸至约600个氨基酸，约500个氨基酸至约550个氨基酸，约550个氨基酸至约1000个氨基酸，约550个氨基酸至约950个氨基酸，约550个氨基酸至约900个氨基酸，约550个氨基酸至约850个氨基酸，约550个氨基酸至约800个氨基酸，约550个氨基酸至约750个氨基酸，约550个氨基酸至约700个氨基酸，约550个氨基酸至约650个氨基酸，约550个氨基酸至约600个氨基酸，约600个氨基酸至约1000个氨基酸，约600个氨基酸至约950个氨基酸，约600个氨基酸至约900个氨基酸，约600个氨基酸至约850个氨基酸，约600个氨基酸至约800个氨基酸，约600个氨基酸至约750个氨基酸，约600个氨基酸至约700个氨基酸，约600个氨基酸至约650个氨基酸，约650个氨基酸至约1000个氨基酸，约650个氨基酸至约950个氨基酸，约650个氨基酸至约900个氨基酸，约650个氨基酸至约850个氨基酸，约650个氨基酸至约800个氨基酸，约650个氨基酸至约750个氨基酸，约650个氨基酸至约700个氨基酸，约700个氨基酸至约1000个氨基酸，约700个氨基酸至约950个氨基酸，约700个氨基酸至约900个氨基酸，约700个氨基酸至约850个氨基酸，约700个氨基酸至约800个氨基酸，约700个氨基酸至约750个氨基酸，约750个氨基酸至约1000个氨基酸，约750个氨基酸至约950个氨基酸，约750个氨基酸至约900个氨基酸，约750个氨基酸至约850个氨基酸，约750个氨基酸至约800个氨基酸，约800个氨基酸至约1000个氨基酸，约800个氨基酸至约950个氨基酸，约800个氨基酸至约900个氨基酸，约800个氨基酸至约850个氨基酸，约850个氨基酸至约1000个氨基酸，约850个氨基酸至约950个氨基酸，约850个氨基酸至约900个氨基酸，约900个氨基酸至约1000个氨基酸，约900个氨基酸至约950个氨基酸，或约950个氨基酸至约1000个氨基酸。

本文所描述的靶标结合结构域中的任一种均可以小于1×10

本文所描述的靶标结合结构域中的任一种均可结合到其靶标，其中K

本文所描述的靶标结合结构域中的任一种均可结合到其靶标，其中K

可使用本领域中已知的多种不同方法来确定本文所描述的抗原结合蛋白构建体中的任一种的K

抗原结合结构域

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，抗原结合结构域包括或为scFv或单结构域抗体(例如，VHH或VNAR结构域)。

在一些实例中，抗原结合结构域(例如，本文所描述的抗原结合结构域中的任一种)可特异性结合到以下中的任一种：CD16a(参见例如美国专利第9,035,026号中所描述的那些)、CD28(参见例如美国专利第7,723,482号中所描述的那些)、CD3(参见例如美国专利第9,226,962号中所描述的那些)、CD33(参见例如美国专利第8,759,494号中所描述的那些)、CD20(参见例如WO 2014/026054中所描述的那些)、CD19(参见例如美国专利第9,701,758号中所描述的那些)、CD22(参见例如WO 2003/104425中所描述的那些)，CD123(参见例如WO 2014/130635中所描述的那些)、IL-1R(参见例如美国专利第8,741,604号中所描述的那些)、IL-1(参见例如WO 2014/095808中所描述的那些)、VEGF(参见例如美国专利第9,090,684号中所描述的那些)、IL-6R(参见例如美国专利第7,482,436号中所描述的那些)、IL-4(参见例如美国专利申请公开第2012/0171197号中所描述的那些)、IL-10(参见例如美国专利申请公开第2016/0340413号中所描述的那些)、PDL-1(参见例如Drees等人,《蛋白质表达和纯化(Protein Express.Purif.)》94:60-66,2014中所描述的那些)、TIGIT(参见例如美国专利申请公开第2017/0198042号中所描述的那些)、PD-1(参见例如美国专利第7,488,802号中所描述的那些)、TIM3(参见例如美国专利第8,552,156号中所描述的那些、CTLA4(参见例如WO 2012/120125中所描述的那些)、MICA(参见例如WO 2016/154585中所描述的那些)、MICB(参见例如美国专利第8,753,640号中所描述的那些)、IL-6(参见例如Gejima等人,《人抗体(Human Antibodies)》11(4):121-129,2002中所描述的那些)、IL-8(参见例如美国专利第6,117,980号中所描述的那些)、TNFα(参见例如Geng等人,《免疫学研究(Immunol.Res.)》62(3):377-385,2015中所描述的那些)、CD26a(参见例如WO 2017/189526中所描述的那些)、CD36(参见例如美国专利申请公开第2015/0259429号中所描述的那些)、ULBP2(参见例如美国专利第9,273,136号中所描述的那些)、CD30(参见例如Homach等人,《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand.J.Immunol.)》48(5):497-501,1998中所描述的那些)、CD200(参见例如美国专利第9,085,623号中所描述的那些)、IGF-1R(参见例如美国专利申请公开第2017/0051063号中所描述的那些)、MUC4AC(参见例如WO 2012/170470中所描述的那些)、MUC5AC(参见例如美国专利第9,238,084号中所描述的那些)、Trop-2(参见例如WO 2013/068946中所描述的那些)、CMET(参见例如Edwardraja等人,《生物技术与生物工程(Biotechnol.Bioeng.)》106(3):367-375,2010中所描述的那些)、EGFR(参见例如Akbari等人,《蛋白质表达和纯化》127:8-15,2016中所描述的那些)、HER1(参见例如美国专利申请公开第2013/0274446号中所描述的那些)、HER2(参见例如Cao等人,《生物技术快报(Biotechnol.Lett.)》37(7):1347-1354,2015中所描述的那些)、HER3(参见例如美国专利第9,505,843号中所描述的那些)、PSMA(参见例如Parker等人,《蛋白质表达和纯化》89(2):136-145,2013中所描述的那些)、CEA(参见例如WO 1995/015341中所描述的那些)、B7H3(参见例如美国专利第9,371,395号中所描述的那些)、EPCAM(参见例如WO 2014/159531中描述的那些)、BCMA(参见例如Smith等人,《分子疗法(Mol.Ther.)》26(6):1447-1456,2018中所描述的那些)、P-钙粘着蛋白(参见例如美国专利第7,452,537号中所描述的那些)、CEACAM5(参见例如美国专利第9,617,345号中所描述的那些)、UL16结合蛋白(参见例如WO 2017/083612中所述)、HLA-DR(参见例如Pistillo等人,《实验和临床免疫遗传学(Exp.Clin.Immunogenet.)》14(2):123-130,1997中所描述的那些)、DLL4(参见例如WO2014/007513中所描述的那些)、TYRO3(参见例如WO 2016/166348中所描述的那些)、AXL(参见例如WO 2012/175692中所描述的那些)、MER(参见例如WO 2016/106221中所描述的那些)、CD122(参见例如美国专利申请公开第2016/0367664号中所描述的那些)、CD155(参见例如WO 2017/149538中所描述的那些)或PDGF-DD(参见例如美国专利第9,441,034号中所描述的那些)。

存在于本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种中的抗原结合结构域各自独立地选自以下组成的组：VHH结构域、VNAR结构域和scFv。在一些实施例中，本文所描述的抗原结合结构域中的任一种是BiTe、(scFv)

VHH结构域是可在骆驼科动物中发现的单个单体可变抗体结构域。VNAR结构域是可在软骨鱼中发现的单个单体可变抗体结构域。VHH结构域和V

在一些实施例中，本文所描述的多链嵌合多肽中的每个抗原结合结构域均为VHH结构域，或至少一个抗原结合结构域为VHH结构域。在一些实施例中，本文所描述的多链嵌合多肽中的每个抗原结合结构域均为VNAR结构域，或至少一个抗原结合结构域为VNAR结构域。在一些实施例中，本文所描述的多链嵌合多肽中的每个抗原结合结构域均为scFv结构域，或至少一个抗原结合结构域为scFv结构域。

在一些实施例中，存在于多链嵌合多肽中的两个或更多个多肽可组装(例如，非共价组装)以形成本文所描述的抗原结合结构域中的任一种，例如抗体的抗原结合片段(例如，本文所描述抗体的抗原结合片段中的任一种)、VHH-scAb、VHH-Fab、双scFab、F(ab')2、双功能抗体、crossMab、DAF(二合一)、DAF(四合一)、DutaMab、DT-IgG、隆突-孔(knobs-in-holes)共同轻链、隆突-孔组合件、电荷对、Fab臂交换、SEEDbody、LUZ-Y、Fcab、κλ体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody、DVI-IgG、双功能抗体-CH3、三体、微型抗体(miniantibody)、微抗体(minibody)、TriBi微抗体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、F(ab')2-scFv2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、单链双功能抗体-Fc、双功能抗体-Fc、串联scFv-Fc、内抗体(Intrabody)、对接和锁定(dock and lock)、lmmTAC、IgG-IgG缀合物、Cov-X体和scFv1-PEG-scFv2。参见例如Spiess等人,《分子免疫学(Mol.Immunol.)》67:95-106,2015，其在此全文并入，以便描述这些元件。抗体的抗原结合片段的非限制性实例包括Fv片段、Fab片段、F(ab')

“Fv”片段包括一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的非共价连接的二聚体。

“Fab”片段包括除Fv片段的重链和轻链可变结构域外，轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(C

“F(ab')

“双可变结构域免疫球蛋白”或“DVD-Ig”是指多价且多特异性结合蛋白，如例如DiGiammarino等人,《分子生物学方法》899:145-156,2012；Jakob等人,《单抗(MABs)》5:358-363,2013；和美国专利第7,612,181号；第8,258,268号；第8,586,714号；第8,716,450号；第8,722,855号；第8,735,546号；和第8,822,645号中所描述，其中的每一个均通过引用整体并入。

DART描述于例如Garber,《自然综述：药物发现(Nature Reviews DrugDiscovery)》13:799-801,2014中。

在本文所描述的抗原结合结构域中的任一种的一些实施例中，可结合到选自以下组成的组的抗原：蛋白质、碳水化合物、脂质和其组合。

抗原结合结构域的另外实例和方面是本领域已知的。

可溶性白介素或细胞因子蛋白

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个可为可溶性白介素蛋白或可溶性细胞因子蛋白。在一些实施例中，可溶性白介素或可溶性细胞因子蛋白选自以下组成的组：IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。可溶性IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L的非限制性实例在以下提供。

人可溶性IL-2(SEQ ID NO:9)

人可溶性IL-3(SEQ ID NO:10)

人可溶性IL-7(SEQ ID NO:11)

人可溶性IL-8(SEQ ID NO:12)

人可溶性IL-10(SEQ ID NO:13)

人可溶性IL-15(SEQ ID NO:14)

人可溶性IL-17(SEQ ID NO:15)

人可溶性IL-18(SEQ ID NO:16)

人可溶性PDGF-DD(SEQ ID NO:17)

人可溶性SCF(SEQ ID NO:18)

人可溶性FLT3L(SEQ ID NO:19)

以下提供可溶性MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5和ULBP6的非限制性实例。

人可溶性MICA(SEQ ID NO:20)

人可溶性MICB(SEQ ID NO:21)

人可溶性ULBP1(SEQ ID NO:22)

人可溶性ULBP2(SEQ ID NO:23)

人可溶性ULBP3(SEQ ID NO:24)

人可溶性ULBP4(SEQ ID NO:25)

人可溶性ULBP5(SEQ ID NO:26)

人可溶性ULBP6(SEQ ID NO:27)

可溶性白介素蛋白和可溶性细胞因子蛋白的另外实例是本领域已知的。

可溶性受体

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素受体、可溶性细胞因子受体或配体受体。在一些实施例中，可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)(参见例如Yung等人,《美国呼吸与重症医学杂志(Am.J.Resp.Crit.Care Med.)》194(9):1140-1151,2016中所描述的那些)、可溶性TGF-βRIII(参见例如Heng等人,《胎盘(Placenta)》57:320,2017中所描述的那些)、可溶性NKG2D(参见例如Cosman等人,《免疫(Immunity)》14(2):123-133,2001；Costa等人,《免疫学前沿(Front.Immunol.)》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp30(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150)、可溶性NKp44(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150中所描述的那些)、可溶性NKp46(参见例如Mandelboim等人,《自然(Nature)》409:1055-1060,2001；Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150中所描述的那些)、可溶性DNAM-1(参见例如Costa等人,《免疫学前沿》,第9卷,第1150条,2018年5月29日；doi：10.3389/fimmu.2018.01150中所描述的那些)、scMHCI(参见例如Washburn等人,《公共科学图书馆·综合(PLoS One)》6(3):e18439,2011中所描述的那些)、scMHCII(参见例如Bishwajit等人,《细胞免疫学(Cellular Immunol.)》170(1):25-33,1996中所描述的那些)、scTCR(参见例如Weber等人,《自然》356(6372):793-796,1992中所描述的那些)、可溶性CD155(参见例如Tahara-Hanaoka等人,《国际免疫学(Int.Immunol.)》16(4):533-538,2004中所描述的那些)或可溶性CD28(参见例如Hebbar等人,《临床与实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)》136:388-392,2004)。

可溶性白介素受体和可溶性细胞因子受体的另外实例是本领域已知的。

另外的抗原结合结构域

在多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)另外的靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)，其中一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)之间。在一些实施例中，第一嵌合多肽可进一步包括在可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)与一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)，和/或一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的本文所描述的示例性第一结构域中的任一种)之间的本文所接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一嵌合多肽在第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)另外的靶标结合结构域。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接亲和结构域对中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的本文所描述的示例性第一结构域中的任一种)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括在一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的本文所描述的示例性第一结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含在一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，在第一嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)安置于第一嵌合多肽的N和/或C端，并且一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)定位在可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述或本领域已知的任何示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)之间。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于N端的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中安置于至少一个另外的靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的接头序列中的任一种)。在一些实施例中，在第一嵌合多肽中，安置于C端的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中安置于至少一个另外的靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与第一靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)或一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的接头序列中的任一种)。在一些实施例中，位于可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的第一结构域中的任一种或本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种)之间的一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接可溶性组织因子结构域和/或一对亲和结构域中的第一结构域。在一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包含接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)，所述接头序列安置于(i)可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子中的任一种)与一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域(例如，本文所描述的示例性可溶性组织因子中的任一种)与一对亲和结构域中的第一结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第一结构域中的任一种)之间，和/或(ii)一对亲和结构域中的一个结构域与一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端和/或C端进一步包括一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个)另外的靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接所述一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第二结构域中的任一种)。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中在一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与一对亲和结构域中的第二结构域(例如，本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种的示例性第二结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。在一些实施例中，在第二嵌合多肽中，一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)直接邻接第二靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的靶标结合结构域中的任一种)。在一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中在一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)与第二靶标结合结构域(例如，本文所描述或本领域已知的示例性靶标结合结构域中的任一种)之间的接头序列(例如，本文所描述或本领域已知的示例性接头序列中的任一种)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个(例如，三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个(例如，三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个(例如，三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)包括相同的氨基酸序列。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自包括相同的氨基酸序列。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个(例如，两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个或十个或更多个)是抗原结合结构域。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域各自是抗原结合结构域(例如，scFv或单结构域抗体)。

亲和结构域对

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括：1)包括一对亲和结构域中的第一结构域的第一嵌合多肽，和2)包括一对亲和结构域中的第二结构域的第二嵌合多肽，使得第一嵌合多肽和第二嵌合多肽通过一对亲和结构域中的第一结构域和第二结构域的结合而缔合。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。寿司结构域，也称为短共有重复序列或1型糖蛋白基序，是蛋白质-蛋白质相互作用中的常见基序。已在许多蛋白质结合分子，包括补体组分C1r、C1s、因子H和C2m以及非免疫分子因子XIII和β2-糖蛋白上鉴别了寿司结构域。典型的寿司结构域具有大约60个氨基酸残基，并且包含四个半胱氨酸(Ranganathan,《太平洋生物计算专题讨论会(Pac.SympBiocomput.)》2000:155-67)。第一半胱氨酸可与第三半胱氨酸形成二硫键，并且第二半胱氨酸可与第四半胱氨酸形成二硫桥键。在其中一对亲和结构域中的一个成员是可溶性IL-15的一些实施例中，可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。在其中一对亲和结构域中的一个成员是人IL-15受体的α链(IL15Rα)的一些实施例中，人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是PKA和AKAP。在一些实施例中，所述一对亲和结构域是基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块(Rossi,《美国国家科学院院刊(Proc NatlAcad Sci USA.)》103:6841-6846,2006；Sharkey等人,《癌症研究(Cancer Res.)》68:5282-5290,2008；Rossi等人,《药物科学趋势(Trends Pharmacol Sci.)》33:474-481,2012)或基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25相互作用的SNARE模块(Deyev等人,《自然·生物技术(Nat Biotechnol.)》1486-1492,2003)。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第一结构域，并且多链嵌合多肽的第二嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第二结构域，其中一对亲和结构域中的第一结构域和一对亲和结构域中的第二结构域以小于1×10

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第一结构域，并且多链嵌合多肽的第二嵌合多肽包括一对亲和结构域中的第二结构域，其中一对亲和结构域中的第一结构域、一对亲和结构域中的第二结构域或两者为约10至100个氨基酸的长度。例如，一对亲和结构域中的第一结构域、一对亲和结构域中的第二结构域或两者可为约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，一对亲和结构域中的第一结构域、一对亲和结构域中的第二结构域或两者均为约1015、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

在一些实施例中，本文公开的一对亲和结构域中的第一和/或第二结构域中的任一种可在其N端和/或C端包括一个或多个另外的氨基酸(例如1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要一对亲和结构域中第一个和/或第二结构域的功能保持完整即可。例如，来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域可在N端和/或C端包括一个或多个另外的氨基酸，同时仍保留与可溶性IL-15结合的能力。另外地或可替代地，可溶性IL-15可在N端和/或C端包括一个或多个另外的氨基酸，同时仍保留与来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域结合的能力。

来自IL-15受体α的α链(IL15Rα)的寿司结构域的非限制性实例可包括与ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:28)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施例中，来自IL15Rα的α链的寿司结构域可由包括ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:29)的核酸编码。

在一些实施例中，可溶性IL-15可包括与NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:14)至少70％相同、至少75％相同、至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少99％相同或100％相同的序列。在一些实施例中，可溶性IL-15可由包括AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:30)的序列的核酸编码。

信号序列

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第一嵌合多肽，所述第一嵌合多肽在其N端包括信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第二嵌合多肽，所述第二嵌合多肽在其N端包括信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和多链嵌合多肽的第二嵌合多肽均包括信号序列。如本领域普通技术人员将理解，信号序列是存在于许多内源产生的蛋白质的N端的氨基酸序列，其将蛋白质引导到分泌路径(例如，蛋白质被引导以存在于某些细胞内细胞器中、存在于细胞膜中或从细胞中分泌)。信号序列是异质的，并且其一级氨基酸序列差异很大。但是，信号序列的长度典型地为16至30个氨基酸，并且包括亲水、通常带正电荷的N端区，中央疏水域和含有信号肽酶的裂解位点的C端区。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQ ID NO:31)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括由核酸序列ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:32)、ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC(SEQ ID NO:33)或ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO:34)编码的信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO:35)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MGQIVTMFEALPHIIDEVINIVIIVLIIITSIKAVYNFATCGILALVSFLFLAGRSCG(SEQ ID NO:36)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MPNHQSGSPTGSSDLLLSGKKQRPHLALRRKRRREMRKINRKVRRMNLAPIKEKTAWQHLQALISEAEEVLKTSQTPQNSLTLFLALLSVLGPPVTG(SEQ ID NO:37)的信号序列。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括具有氨基酸序列MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS(SEQ ID NO:38)的信号序列。本领域普通技术人员将知道用于本文所描述的多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽的其它合适的信号序列。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括信号序列，其具有约10至100个氨基酸的长度。例如，信号序列可为约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，信号序列为约1015、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

在一些实施例中，本文公开的信号序列中的任一种可在其N端和/或C端包括一个或多个另外的氨基酸(例如，1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要信号序列的功能保持完整即可。例如，具有氨基酸序列MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO:35)的信号序列可在N端或C端包括一个或多个另外的氨基酸，同时仍保留将多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者引导到分泌路径的能力。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括将多链嵌合多肽引导到细胞外空间中的信号序列。这类实施例可用于产生相对容易分离和/或纯化的多链嵌合多肽。

肽标签

在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第一嵌合多肽，其包括肽标签(例如，在第一嵌合多肽的N端或C端)。在一些实施例中，多链嵌合多肽包括第二嵌合多肽，其包括肽标签(例如，在第二嵌合多肽的N端或C端)。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和多链嵌合多肽的第二嵌合多肽均包括肽标签。在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括两个或更多个肽标签。

可包括在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中的示例性肽标签包括但不限于AviTag(GLNDIFEAQKIEWHE；SEQ ID NO:39)、钙调蛋白标签(KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL；SEQ ID NO:40)、聚谷氨酸标签(EEEEEE；SEQ ID NO:41)、E标签(GAPVPYPDPLEPR；SEQ ID NO:42)、FLAG标签(DYKDDDDK；SEQ ID NO:43)、HA标签、来自血凝素的肽(YPYDVPDYA；SEQ ID NO:44)、his标签(HHHHH(SEQ ID NO:45)；HHHHHH(SEQ IDNO:46)；HHHHHHH(SEQ ID NO:47)；HHHHHHHH(SEQ ID NO:48)；HHHHHHHHH(SEQ ID NO:49)；或HHHHHHHHHH(SEQ ID NO:50))、myc标签(EQKLISEEDL；SEQ ID NO:51)、NE标签(TKENPRSNQEESYDDNES；SEQ ID NO:52)、S标签、(KETAAAKFERQHMDS；SEQ ID NO:53)、SBP标签(MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP；SEQ ID NO:54)、Softag 1(SLAELLNAGLGGS；SEQ ID NO:55)、Softag 3(TQDPSRVG；SEQ ID NO:56)、Spot标签(PDRVRAVSHWSS；SEQ ID NO:57)、Strep标签(WSHPQFEK；SEQ ID NO:58)、TC标签(CCPGCC；SEQ ID NO:59)、Ty标签(EVHTNQDPLD；SEQ ID NO:60)、V5标签(GKPIPNPLLGLDST；SEQ IDNO:61)、VSV标签(YTDIEMNRLGK；SEQ ID NO:62)和Xpress标签(DLYDDDDK；SEQ ID NO:63)。在一些实施例中，组织因子蛋白是肽标签。

可包括在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中的肽标签可用于与多链嵌合多肽相关的多种应用中的任一种。例如，肽标签可用于纯化多链嵌合多肽。作为一个非限制性实例，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽(例如，重组表达的第一嵌合多肽)、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽(例如，重组表达的第二嵌合多肽)或两者可包括myc标签；可使用识别myc标签的抗体纯化包括加myc标签的第一嵌合多肽、加myc标签的第二嵌合多肽或两者的多链嵌合多肽。识别myc标签的抗体的一个非限制性实例是9E10，其可从非商业发展研究杂交瘤银行(Developmental Studies Hybridoma Bank)获得。作为另一非限制性实例，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽(例如，重组表达的第一嵌合多肽)、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽(例如，重组表达的第二嵌合多肽)或两者可包括组氨酸标签；可使用镍或钴螯合物纯化包括加组氨酸标签的第一嵌合多肽、加组氨酸标签的第二嵌合多肽或两者的多链嵌合多肽。本领域普通技术人员将知道其它合适的标签和结合这些标签的试剂以用于纯化多链嵌合多肽。在一些实施例中，纯化后从多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽中去除肽标签。在一些实施例中，纯化后未从多链嵌合多肽的第一嵌合多肽和/或第二嵌合多肽中去除肽标签。

可包括在多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中的肽标签可用于例如多链嵌合多肽的免疫沉淀、多链嵌合多肽的成像(例如，通过蛋白质印迹、ELISA、流式细胞术和/或免疫细胞化学)和/或多链嵌合多肽的增溶。

在一些实施例中，多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者包括肽标签，其具有约10至100个氨基酸的长度。例如，肽标签可为约10至100个氨基酸的长度，约15至100个氨基酸的长度，约20至100个氨基酸的长度，约25至100个氨基酸的长度，约30至100个氨基酸的长度，约35至100个氨基酸的长度，约40至100个氨基酸的长度，约45至100个氨基酸的长度，约50至100个氨基酸的长度，约55至100个氨基酸的长度，约60至100个氨基酸的长度，约65至100个氨基酸的长度，约70至100个氨基酸的长度，约75至100个氨基酸的长度，约80至100个氨基酸的长度，约85至100个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约95至100个氨基酸的长度，约10至95个氨基酸的长度，约10至90个氨基酸的长度，约10至85个氨基酸的长度，约10至80个氨基酸的长度，约10至75个氨基酸的长度，约10至70个氨基酸的长度，约10至65个氨基酸的长度，约10至60个氨基酸的长度，约10至55个氨基酸的长度，约10至50个氨基酸的长度，约10至45个氨基酸的长度，约10至40个氨基酸的长度，约10至35个氨基酸的长度，约10至30个氨基酸的长度，约10至25个氨基酸的长度，约10至20个氨基酸的长度，约10至15个氨基酸的长度，约20至30个氨基酸的长度，约30至40个氨基酸的长度，约40至50个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，约60至70个氨基酸的长度，约70至80个氨基酸的长度，约80至90个氨基酸的长度，约90至100个氨基酸的长度，约20至90个氨基酸的长度，约30至80个氨基酸的长度，约40至70个氨基酸的长度，约50至60个氨基酸的长度，或介于两者之间的任何范围。在一些实施例中，肽标签为约1015、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸的长度。

多链嵌合多肽的第一嵌合多肽、多链嵌合多肽的第二嵌合多肽或两者中包括的肽标签可具有任何合适的长度。例如，肽标签的长度可为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸。在多链嵌合多肽包括两个或更多个肽标签的实施例中，两个或更多个肽标签可具有相同或不同的长度。在一些实施例中，本文公开的任何肽标签可在N端和/或C端包括一个或多个另外的氨基酸(例如，1、2、3、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸)，只要肽标签的功能保持完整即可。例如，具有氨基酸序列EQKLISEEDL(SEQ ID NO:64)的myc标签可包括一个或多个另外的氨基酸(例如，在肽标签的N端和/或C端)，同时仍保留与抗体(例如，9E10)结合的能力。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-18(例如，可溶性人IL-18)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:16)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT(SEQ ID NO:65)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-12(例如，可溶性人IL-12)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-15包括可溶性人IL-12β(p40)的序列和可溶性人IL-12α(p35)的序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-15人IL-15进一步包括可溶性IL-12β(p40)的序列与可溶性人IL-12α(p35)的序列之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头序列中的任一种)。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头序列包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS(SEQ ID NO:66)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC(SEQ ID NO:67)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS(SEQ ID NO:68)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC(SEQ IDNO:69)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:70)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:71)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:72)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGCTACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:73)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:74)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:75)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:76)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCCATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:77)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21多肽)或可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFRβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFRβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-21的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFRβRII受体(例如，可溶性人TGFRβRII受体))。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，人TGFβRII受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:86)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:87)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:88)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:89)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:90)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA(SEQ ID NO:91)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:92)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA(SEQ ID NO:93)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21多肽)或可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7多肽)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性IL-7。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:94)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:11)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:95)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:96)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAAAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:97)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MGVKVLFALICIAVAEAQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:98)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCCCAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCCTCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAAAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:99)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:100)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:101)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MGVKVLFALICIAVAEADCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:102)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCCGATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:103)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21多肽)或可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7多肽)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性IL-7。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:94)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:11)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:95)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:104)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:105)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:106)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:107)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:108)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ IDNO:109)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:110)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:111)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-18(例如，可溶性人IL-18)的受体、IL-12(例如，可溶性人IL-12)的受体或CD16(例如，抗CD16 scFv)。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-12的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的抗原结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的抗原结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-15或可溶性IL-18。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到CD16，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-18(例如，可溶性人IL-18)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:16)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-18由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT(SEQ ID NO:65)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-12(例如，可溶性人IL-12)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-15包括可溶性人IL-12β(p40)的序列和可溶性人IL-12α(p35)的序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-15(例如，可溶性人IL-15)进一步包括可溶性IL-12β(p40)的序列与可溶性人IL-12α(p35)的序列之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头序列中的任一种)。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头序列包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS(SEQ ID NO:66)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12β(p40)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC(SEQ ID NO:67)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS(SEQ ID NO:68)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-12α(p35)由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC(SEQ IDNO:69)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv(例如，抗CD16 scFv)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:112)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:113)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:114)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:115)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:116)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:117)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNEDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:118)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGCTACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:119)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQID NO:120)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:121)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNASITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:122)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCCATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:123)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7(例如，可溶性人IL-7)的受体、CD16(例如，抗CD16 scFv)或IL-21(例如，可溶性人IL-21)的受体。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的抗原结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的抗原结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到受体IL-7，并且第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-7蛋白。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，可溶性IL-7蛋白是可溶性人IL-7。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二抗原结合结构域包括特异性结合到CD16的靶标结合结构域。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，可溶性IL-21是可溶性人IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到IL-21的受体的另外的靶标结合结构域。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，另外的靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，可溶性IL-21是可溶性人IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到CD16的另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:11)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC(SEQ ID NO:95)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:94)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv(例如，抗CD16 scFv)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:112)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:113)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:114)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:115)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:125)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:126)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:127)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:128)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:129)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:130)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:131)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:132)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGFβ(例如，人TGFβRII受体)、CD16(例如，抗CD16 scFv)或IL-21(例如，可溶性人IL-21)的受体。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的抗原结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的抗原结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、CD16或IL-21的受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二抗原结合结构域包括特异性结合到CD16的抗原结合结构域。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二抗原结合结构域包括特异性结合到CD16的scFv。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性人IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到IL-21的受体的另外的靶标结合结构域。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，另外的靶标结合结构域包括可溶性IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，可溶性IL-21是可溶性人IL-21。在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括特异性结合到CD16的另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。在一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括TGFβRII受体(例如，可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFβRII受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21的序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC(SEQ ID NO:94)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:112)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:113)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:114)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:115)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:133)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:134)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:135)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:136)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:137)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:138)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSRITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:139)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGGATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:140)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:11)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:95)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:141)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:142)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:143)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:144)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQID NO:145)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACACATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA(SEQ ID NO:146)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:147)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:148)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域包括相同的氨基酸序列。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

c(SEQ ID NO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:149)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:150)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:151)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:152)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:153)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:154)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:155)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:156)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、IL-21的受体或CD137L的受体。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到IL-21(例如，可溶性IL-21，例如可溶性人IL-21)的受体或CD137L(例如，可溶性CD137L，例如可溶性人CD137L)的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括另外的靶标结合结构域。在一些实施例中，另外的靶标结合结构域和

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的靶标结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。在一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性IL-7(例如，可溶性人IL-7)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:11)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或另外的靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或另外的靶标结合结构域是可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到CD137L的受体的另外的靶标结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域和/或另外的靶标结合结构域是可溶性CD137L(例如，可溶性人CD137L)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:157)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:158)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:159)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:160)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:161)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:162)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:163)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:164)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:165)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:166)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:167)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:168)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:169)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:170)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:171)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:172)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，并且第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域包括可溶性IL-7蛋白(例如，可溶性人IL-7蛋白)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7蛋白包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH(SEQ ID NO:11)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-7由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT(SEQ ID NO:124)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包含特异性结合到TGF-β的靶标结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:173)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:174)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSDCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEHSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:175)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCATAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQID NO:176)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:177)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:178)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR(SEQ ID NO:179)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG(SEQ ID NO:180)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、IL-21的受体或CD137L的受体。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到IL-21(例如，可溶性IL-21，例如可溶性人IL-21)的受体或CD137L(例如，可溶性CD137L，例如可溶性人CD137L)的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的靶标结合结构域中的一个或多个是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域、第二靶标结合结构域和另外的靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，抗原结合结构域包括scFv或单结构域抗体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或另外的靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或另外的靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，可溶性人IL-21)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域或另外的靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域和/或另外的靶标结合结构域包括可溶性CD137L(例如，可溶性人CD137L)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:157)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:158)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:159)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:160)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:181)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:182)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:183)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:184)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:185)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:186)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:187)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:188)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:189)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:190)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:191)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCCATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:192)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域特异性结合到IL-21(例如，可溶性IL-21，例如可溶性人IL-21)的受体或TGF-β(例如，可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括可溶性IL-21(例如，人可溶性IL-21)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:78)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性IL-21由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:79)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:193)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:194)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:195)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:196)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:197)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQ ID NO:198)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:199)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGCAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC(SEQID NO:200)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD16。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述另外的靶标结合结构域特异性结合到CD16(例如，抗CD16 scFv)或TGF-β(例如，可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或CD16。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQID NO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二靶标结合结构域包括抗CD16 scFv。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH(SEQ ID NO:112)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的轻链可变结构域序列编码：

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT(SEQ ID NO:113)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv包括重链可变结构域，所述重链可变结构域包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:114)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，特异性结合到CD16的scFv由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的重链可变结构域序列编码：

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:115)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:201)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:202)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:203)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:204)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ IDNO:205)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:206)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR(SEQ ID NO:207)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGTCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG(SEQ ID NO:208)。

在本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的一些实施例中，第一靶标结合结构域和第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD137L的受体。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括另外的靶标结合结构域。在本文所描述的这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述另外的靶标结合结构域特异性结合到TGF-β的受体(例如，可溶性TGF-β受体，例如可溶性TGFβRII受体)或CD137L。

在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一靶标结合结构域和可溶性组织因子结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，第一嵌合多肽进一步包含第一嵌合多肽中的第一靶标结合结构域与可溶性组织因子结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域和一对亲和结构域中的第一结构域在第一嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一嵌合多肽进一步包括第一嵌合多肽中的可溶性组织因子结构域与一对亲和结构域中的第一结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，一对亲和结构域中的第二结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与第二靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽在第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和一对亲和结构域中的第二结构域在第二嵌合多肽中彼此直接邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的一对亲和结构域中的第二结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，另外的靶标结合结构域和第二靶标结合结构域在第二嵌合多肽中直接彼此邻接。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第二嵌合多肽进一步包括第二嵌合多肽中的第二靶标结合结构域与另外的靶标结合结构域之间的接头序列(例如，本文所描述的示例性接头中的任一种)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性组织因子结构域可为本文所描述的示例性可溶性组织因子结构域中的任一种。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，所述一对亲和结构域可为本文所描述的示例性亲和结构域对中的任一种。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，第一靶标结合结构域或另外的靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体(例如，可溶性TGFβRII受体，例如可溶性人TGFβRII受体)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括可溶性人TGFRβRII的第一序列和可溶性人TGFRβRII的第二序列。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII包括安置于可溶性人TGFRβRII的第一序列与可溶性人TGFRβRII的第二序列之间的接头。在这些多链嵌合多肽的一些实例中，接头包括序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:7)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:80)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列包含与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:81)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第一序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO:82)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人TGFRβRII受体的第二序列由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:83)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ IDNO:85)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性TGF-β受体由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO:84)。

在一些实施例中这些多链嵌合多肽，第二靶标结合结构域包括可溶性CD137L蛋白(例如，可溶性人CD137L蛋白)。在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:157)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:158)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L包括与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI(SEQ ID NO:159)。

在这些多链嵌合多肽的一些实施例中，可溶性人CD137L由与以下至少80％相同(例如，至少85％相同、至少90％相同、至少95％相同、至少96％相同、至少97％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC(SEQ ID NO:160)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:209)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:210)。

在一些实施例中，第一嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

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在一些实施例中，第一嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO:212)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

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在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:214)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽可包括与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列：

MKWVTFISLLFLFSSAYSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:215)。

在一些实施例中，第二嵌合多肽由与以下至少80％相同(例如，至少82％相同、至少84％相同、至少86％相同、至少88％相同、至少90％相同、至少92％相同、至少94％相同、至少96％相同、至少98％相同、至少99％相同或100％相同)的序列编码：

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGACATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGGGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA(SEQ ID NO:216)。

组合物/试剂盒

本文还提供包括本文所描述的任何多链嵌合多肽、任何细胞或任何核酸中的至少一种的组合物(例如，药物组合物)。在一些实施例中，组合物包括本文所描述的任何多链嵌合多肽中的至少一种。在一些实施例中，组合物包括免疫细胞中的任一种(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种，例如使用本文所描述的方法中的任一种产生的免疫细胞中的任一种)。

在一些实施例中，将药物组合物配制成用于不同的给药途径(例如，静脉内、皮下)。在一些实施例中，药物组合物可包括药学上可接受的载体(例如，磷酸盐缓冲盐水)。

可将药物组合物的单次或多次施用给予有需要的受试者，例如取决于：受试者所需和耐受的剂量和频率。配制物应提供足够量的活性剂以有效治疗、预防或改善病况、疾病或症状。

本文还提供试剂盒，其包括本文所描述的多链嵌合多肽、组合物、核酸或细胞(例如，免疫细胞)中的任一种。在一些实施例中，试剂盒可包括用于进行本文所描述的方法中的任一种的说明书。在一些实施例中，试剂盒可包括至少一个剂量的本文所描述的药物组合物中的任一种。

核酸/载体

本文还提供编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸。在一些实施例中，第一核酸可编码第一嵌合多肽，并且第二核酸可编码第二嵌合多肽。在一些实施例中，单个核酸可编码第一嵌合多肽和第二嵌合多肽两者。

本文还提供载体，其包括编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的核酸中的任一种。在一些实施例中，第一载体可包括编码第一嵌合多肽的核酸，并且第二载体可包括编码第二嵌合多肽的核酸。在一些实施例中，单个载体可包括编码第一嵌合多肽的第一核酸和编码第二嵌合多肽的第二核酸。

本文所描述的载体中的任一种可为表达载体。例如，表达载体可包括与编码第一嵌合多肽和第二嵌合多肽的序列可操作地连接的启动子序列。

载体的非限制性实例包括质粒、转座子、粘粒和病毒载体(例如，任何腺病毒载体(例如，pSV或pCMV载体)、腺相关病毒(AAV)载体、慢病毒载体和逆转录病毒载体)和任何

细胞

本文还提供细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性细胞中的任一种)，其包含编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种(例如，编码第一和第二嵌合多肽两者)的本文所描述的核酸中的任一种。本文还提供细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性细胞中的任一种)，其包含编码本文所描述的第一嵌合多肽中的任一种的本文所描述的核酸中的任一种。还提供细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性细胞中的任一种)，其包含编码本文所描述的第二嵌合多肽中的任一种的本文所描述的核酸中的任一种。

本文还提供细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性细胞中的任一种)，其包括编码本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种(例如，编码第一和第二嵌合多肽两者)的本文所描述的载体中的任一种。本文还提供细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性细胞中的任一种)，其包括编码本文所描述的第一嵌合多肽中的任一种的本文所描述的载体中的任一种。本文还提供细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性细胞中的任一种)，其包括编码本文所描述的第二嵌合多肽中的任一种的本文所描述的载体中的任一种。

在本文所描述的方法中的任一种的一些实施例中，细胞可为真核细胞。如本文所用，术语“真核细胞”是指具有明显的膜结合核的细胞。这类细胞可包括例如哺乳动物(例如，啮齿动物、非人灵长类动物或人)、昆虫、真菌或植物细胞。在一些实施例中，真核细胞是酵母细胞，如啤酒酵母。在一些实施例中，真核细胞是高级真核生物，如哺乳动物、禽类、植物或昆虫细胞。哺乳动物细胞的非限制性实例包括中国仓鼠卵巢细胞和人胚胎肾细胞(例如，HEK293细胞)。

将核酸和表达载体引入到细胞(例如，真核细胞)中的方法是本领域已知的。可用于将核酸引入到细胞中的方法的非限制性实例包括脂质转染、转染、电穿孔、显微注射、磷酸钙转染、基于树状大分子的转染、阳离子聚合物转染、细胞挤压、声致穿孔、光学转染、刺穿感染、流体动力学递送、磁转染、病毒转导(例如，腺病毒和慢病毒转导)和纳米颗粒转染。

产生多链嵌合多肽的方法

本文还提供产生本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的方法，其包括在足以引起产生多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养本文所描述的细胞中的任一种；和从细胞和/或培养基中回收多链嵌合多肽。

本文还提供产生本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种的方法，其包括：在足以引起产生第一嵌合多肽的条件下在第一培养基中培养本文所描述的细胞中的任一种；从细胞和/或第一培养基中回收第一嵌合多肽；在足以引起产生第二嵌合多肽的条件下，在第二培养基中培养本文所描述的细胞中的任一种；从细胞和/或第二培养基中回收第二嵌合多肽；将回收的第一嵌合多肽和回收的第二嵌合多肽组合(例如，混合)以形成多链嵌合多肽(例如，本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种)。

可使用本领域众所周知的技术(例如，硫酸铵沉淀、聚乙二醇沉淀、离子交换色谱法(阴离子或阳离子)、基于疏水相互作用的色谱法、金属亲和色谱法、配体亲和色谱法和尺寸排阻色谱法)从细胞(例如，真核细胞)中回收多链嵌合多肽、第一嵌合多肽或第二嵌合多肽。

培养细胞的方法是本领域众所周知的。可将细胞在有利于增殖、分化和生长的条件下体外维持。简单来说，可通过使细胞(例如，任何细胞)与细胞培养基接触来培养细胞，所述细胞培养基包括必需的生长因子和补充剂以支持细胞活力和生长。

本文还提供通过本文所描述的方法中的任一种产生的多链嵌合多肽(例如，本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种)、第一嵌合多肽(例如，第一嵌合多肽中的任一种)或第二嵌合多肽(例如，第二嵌合多肽中的任一种)。

刺激免疫细胞的方法

本文还提供刺激免疫细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性免疫细胞中的任一种)的方法，其包括使免疫细胞与有效量的本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种或本文所描述的组合物(例如，药物组合物)中的任一种接触。在一些实例中，免疫细胞在体外接触(例如，在足以引起对免疫细胞的刺激的条件下在合适的液体培养基中)。

在一些实例中，免疫细胞先前已获自受试者(例如，哺乳动物，例如人)。这些方法的一些实施例进一步包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在一些实例中，免疫细胞在体内接触。在这类实施例中，将多链嵌合多肽以足以引起对受试者中的免疫细胞的刺激的量施用于受试者(例如，哺乳动物，例如人)。

在本文所描述的任何方法的一些实例中，免疫细胞可为未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

在一些实例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实例中，免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)先前已经过基因修饰以表达共刺激分子(例如，CD28)。

这些方法的一些实施例可进一步包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)中。这些方法的一些实施例可进一步包括在接触步骤之后，将编码共刺激分子(例如，CD28)的核酸引入到免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)中。

这些方法的一些实施例可进一步包括将治疗有效量的免疫细胞施用于有需要的受试者(例如，本文所描述的示例性受试者中的任一种)。

在一些实例中，受试者可为被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况的受试者。与年龄相关的疾病或病症的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

在一些实例中，受试者可为已被鉴别或诊断为患有癌症的受试者。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在一些实例中，受试者可为已被诊断或鉴别为患有感染性疾病的受试者。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

可使用本领域已知的方法来确定免疫细胞的激活。例如，可通过检测在免疫细胞激活后分泌的细胞因子和趋化因子的水平或上调的细胞毒性颗粒和调节分子的水平来确定免疫细胞的激活。在免疫细胞激活后分泌或上调的细胞因子、趋化因子、细胞毒性颗粒和调节分子的非限制性实例包括：IL-2、IFN-γ、IL-1、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22、IL-33、白三烯B4、CCL5、TNFα、颗粒酶、穿孔素、TGFβ、STAT3、STAT4、STAT5、RORγT、FOXP3、STAT6和GATA3。这些细胞因子、趋化因子、细胞毒性颗粒或调节分子的检测可使用免疫分析(例如，酶联免疫吸附分析)和定量PCR进行。例如，免疫细胞的激活可引起增加约1％至约800％(例如，约1％至约750％，约1％至约700％，约1％至约650％，约1％至约600％，约1％至约550％，约1％至约500％，约1％至约450％，约1％至约400％，约1％至约350％，约1％至约300％，约1％至约280％，约1％至约260％，约1％至约240％，约1％至约220％，约1％至约200％，约1％至约180％，约1％至约160％，约1％至约140％，约1％至约120％，约1％至约100％，约1％至约90％，约1％至约80％，约1％至约70％，约1％至约60％，约1％至约50％，约1％至约45％，约1％至约40％，约1％至约35％，约1％至约30％，约1％至约25％，约1％至约20％，约1％至约15％，约1％至约10％，约1％至约5％，约5％至约800％，约5％至约750％，约5％至约700％，约5％至约650％，约5％至约600％，约5％至约550％，约5％至约500％，约5％至约450％，约5％至约400％，约5％至约350％，约5％至约300％，约5％至约280％，约5％至约260％，约5％至约240％，约5％至约220％，约5％至约200％，约5％至约180％，约5％至约160％，约5％至约140％，约5％至约120％，约5％至约100％，约5％至约90％，约5％至约80％，约5％至约70％，约5％至约60％，约5％至约50％，约5％至约45％，约5％至约40％，约5％至约35％，约5％至约30％，约5％至约25％，约5％至约20％，约5％至约15％，约5％至约10％，约10％至约800％，约10％至约750％，约10％至约700％，约10％至约650％，约10％至约600％，约10％至约550％，约10％至约500％，约10％至约450％，约10％至约400％，约10％至约350％，约10％至约300％，约10％至约280％，约10％至约260％，约10％至约240％，约10％至约220％，约10％至约200％，约10％至约180％，约10％至约160％，约10％至约140％，约10％至约120％，约10％至约100％，约10％至约90％，约10％至约80％，约10％至约70％，约10％至约60％，约10％至约50％，约10％至约45％，约10％至约40％，约10％至约35％，约10％至约30％，约10％至约25％，约10％至约20％，约10％至约15％，约15％至约800％，约15％至约750％，约15％至约700％，约15％至约650％，约15％至约600％，约15％至约550％，约15％至约500％，约15％至约450％，约15％至约400％，约15％至约350％，约15％至约300％，约15％至约280％，约15％至约260％，约15％至约240％，约15％至约220％，约15％至约200％，约15％至约180％，约15％至约160％，约15％至约140％，约15％至约120％，约15％至约100％，约15％至约90％，约15％至约80％，约15％至约70％，约15％至约60％，约15％至约50％，约15％至约45％，约15％至约40％，约15％至约35％，约15％至约30％，约15％至约25％，约15％至约20％，约20％至约800％，约20％至约750％，约20％至约700％，约20％至约650％，约20％至约600％，约20％至约550％，约20％至约500％，约20％至约450％，约20％至约400％，约20％至约350％，约20％至约300％，约20％至约280％，约20％至约260％，约20％至约240％，约20％至约220％，约20％至约200％，约20％至约180％，约20％至约160％，约20％至约140％，约20％至约120％，约20％至约100％，约20％至约90％，约20％至约80％，约20％至约70％，约20％至约60％，约20％至约50％，约20％至约45％，约20％至约40％，约20％至约35％，约20％至约30％，约20％至约25％，约25％至约800％，约25％至约750％，约25％至约700％，约25％至约650％，约25％至约600％，约25％至约550％，约25％至约500％，约25％至约450％，约25％至约400％，约25％至约350％，约25％至约300％，约25％至约280％，约25％至约260％，约25％至约240％，约25％至约220％，约25％至约200％，约25％至约180％，约25％至约160％，约25％至约140％，约25％至约120％，约25％至约100％，约25％至约90％，约25％至约80％，约25％至约70％，约25％至约60％，约25％至约50％，约25％至约45％，约25％至约40％，约25％至约35％，约35％至约800％，约35％至约750％，约35％至约700％，约35％至约650％，约35％至约600％，约35％至约550％，约35％至约500％，约35％至约450％，约35％至约400％，约35％至约350％，约35％至约300％，约35％至约280％，约35％至约260％，约35％至约240％，约35％至约220％，约35％至约200％，约35％至约180％，约35％至约160％，约35％至约140％，约35％至约120％，约35％至约100％，约35％至约90％，约35％至约80％，约35％至约70％，约35％至约60％，约35％至约50％，约35％至约45％，约35％至约40％，约40％至约800％，约40％至约750％，约40％至约700％，约40％至约650％，约40％至约600％，约40％至约550％，约40％至约500％，约40％至约450％，约40％至约400％，约40％至约350％，约40％至约300％，约40％至约280％，约40％至约260％，约40％至约240％，约40％至约220％，约40％至约200％，约40％至约180％，约40％至约160％，约40％至约140％，约40％至约120％，约40％至约100％，约40％至约90％，约40％至约80％，约40％至约70％，约40％至约60％，约40％至约50％，约40％至约45％，约45％至约800％，约45％至约750％，约45％至约700％，约45％至约650％，约45％至约600％，约45％至约550％，约45％至约500％，约45％至约450％，约45％至约400％，约45％至约350％，约45％至约300％，约45％至约280％，约45％至约260％，约45％至约240％，约45％至约220％，约45％至约200％，约45％至约180％，约45％至约160％，约45％至约140％，约45％至约120％，约45％至约100％，约45％至约90％，约45％至约80％，约45％至约70％，约45％至约60％，约45％至约50％，约50％至约800％，约50％至约750％，约50％至约700％，约50％至约650％，约50％至约600％，约50％至约550％，约50％至约500％，约50％至约450％，约50％至约400％，约50％至约350％，约50％至约300％，约50％至约280％，约50％至约260％，约50％至约240％，约50％至约220％，约50％至约200％，约50％至约180％，约50％至约160％，约50％至约140％，约50％至约120％，约50％至约100％，约50％至约90％，约50％至约80％，约50％至约70％，约50％至约60％，约60％至约800％，约60％至约750％，约60％至约700％，约60％至约650％，约60％至约600％，约60％至约550％，约60％至约500％，约60％至约450％，约60％至约400％，约60％至约350％，约60％至约300％，约60％至约280％，约60％至约260％，约60％至约240％，约60％至约220％，约60％至约200％，约60％至约180％，约60％至约160％，约60％至约140％，约60％至约120％，约60％至约100％，约60％至约90％，约60％至约80％，约60％至约70％，约70％至约800％，约70％至约750％，约70％至约700％，约70％至约650％，约70％至约600％，约70％至约550％，约70％至约500％，约70％至约450％，约70％至约400％，约70％至约350％，约70％至约300％，约70％至约280％，约70％至约260％，约70％至约240％，约70％至约220％，约70％至约200％，约70％至约180％，约70％至约160％，约70％至约140％，约70％至约120％，约70％至约100％，约70％至约90％，约70％至约80％，约80％至约800％，约80％至约750％，约80％至约700％，约80％至约650％，约80％至约600％，约80％至约550％，约80％至约500％，约80％至约450％，约80％至约400％，约80％至约350％，约80％至约300％，约80％至约280％，约80％至约260％，约80％至约240％，约80％至约220％，约80％至约200％，约80％至约180％，约80％至约160％，约80％至约140％，约80％至约120％，约80％至约100％，约80％至约90％，约90％至约800％，约90％至约750％，约90％至约700％，约90％至约650％，约90％至约600％，约90％至约550％，约90％至约500％，约90％至约450％，约90％至约400％，约90％至约350％，约90％至约300％，约90％至约280％，约90％至约260％，约90％至约240％，约90％至约220％，约90％至约200％，约90％至约180％，约90％至约160％，约90％至约140％，约90％至约120％，约90％至约100％，约100％至约800％，约100％至约750％，约100％至约700％，约100％至约650％，约100％至约600％，约100％至约550％，约100％至约500％，约100％至约450％，约100％至约400％，约100％至约350％，约100％至约300％，约100％至约280％，约100％至约260％，约100％至约240％，约100％至约220％，约100％至约200％，约100％至约180％，约100％至约160％，约100％至约140％，约100％至约120％，约120％至约800％，约120％至约750％，约120％至约700％，约120％至约650％，约120％至约600％，约120％至约550％，约120％至约500％，约120％至约450％，约120％至约400％，约120％至约350％，约120％至约300％，约120％至约280％，约120％至约260％，约120％至约240％，约120％至约220％，约120％至约200％，约120％至约180％，约120％至约160％，约120％至约140％，约140％至约800％，约140％至约750％，约140％至约700％，约140％至约650％，约140％至约600％，约140％至约550％，约140％至约500％，约140％至约450％，约140％至约400％，约140％至约350％，约140％至约300％，约140％至约280％，约140％至约260％，约140％至约240％，约140％至约220％，约140％至约200％，约140％至约180％，约140％至约160％，约160％至约800％，约160％至约750％，约160％至约700％，约160％至约650％，约160％至约600％，约160％至约550％，约160％至约500％，约160％至约450％，约160％至约400％，约160％至约350％，约160％至约300％，约160％至约280％，约160％至约260％，约160％至约240％，约160％至约220％，约160％至约200％，约160％至约180％，约180％至约800％，约180％至约750％，约180％至约700％，约180％至约650％，约180％至约600％，约180％至约550％，约180％至约500％，约180％至约450％，约180％至约400％，约180％至约350％，约180％至约300％，约180％至约280％，约180％至约260％，约180％至约240％，约180％至约220％，约180％至约200％，约200％至约800％，约200％至约750％，约200％至约700％，约200％至约650％，约200％至约600％，约200％至约550％，约200％至约500％，约200％至约450％，约200％至约400％，约200％至约350％，约200％至约300％，约200％至约280％，约200％至约260％，约200％至约240％，约200％至约220％，约220％至约800％，约220％至约750％，约220％至约700％，约220％至约650％，约220％至约600％，约220％至约550％，约220％至约500％，约220％至约450％，约220％至约400％，约220％至约350％，约220％至约300％，约220％至约280％，约220％至约260％，约220％至约240％，约240％至约800％，约240％至约750％，约240％至约700％，约240％至约650％，约240％至约600％，约240％至约550％，约240％至约500％，约240％至约450％，约240％至约400％，约240％至约350％，约240％至约300％，约240％至约280％，约240％至约260％，约260％至约800％，约260％至约750％，约260％至约700％，约260％至约650％，约260％至约600％，约260％至约550％，约260％至约500％，约260％至约450％，约260％至约400％，约260％至约350％，约260％至约300％，约260％至约280％，约280％至约800％，约280％至约750％，约280％至约700％，约280％至约650％，约280％至约600％，约280％至约550％，约280％至约500％，约280％至约450％，约280％至约400％，约280％至约350％，约280％至约300％，约300％至约800％，约300％至约750％，约300％至约700％，约300％至约650％，约300％至约600％，约300％至约550％，约300％至约500％，约300％至约450％，约300％至约400％，约300％至约350％，约350％至约800％，约350％至约750％，约350％至约700％，约350％至约650％，约350％至约600％，约350％至约550％，约350％至约500％，约350％至约450％，约350％至约400％，约400％至约800％，约400％至约750％，约400％至约700％，约400％至约650％，约400％至约600％，约400％至约550％，约400％至约500％，约400％至约450％，约450％至约800％，约450％至约750％，约450％至约700％，约450％至约650％，约450％至约600％，约450％至约550％，约450％至约500％，约500％至约800％，约500％至约750％，约500％至约700％，约500％至约650％，约500％至约600％，约500％至约550％，约550％至约800％，约550％至约750％，约550％至约700％，约550％至约650％，约550％至约600％，约600％至约800％，约600％至约750％，约600％至约700％，约600％至约650％，约650％至约800％，约650％至约750％，约650％至约700％，约700％至约800％，约700％至约750％或约750％至约800％)本文所描述的任何细胞因子或趋化因子或细胞毒性颗粒或调节分子中的一种或多种(例如，IL-2、IFN-γ、IL-1、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22、IL-33、白三烯B4、CCL5、TNFα、颗粒酶、穿孔素、TGFβ、STAT3、STAT4、STAT5、RORγT、FOXP3和GATA3)(例如，与未与本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种接触的对照中的一种或多种细胞因子、趋化因子、细胞毒性颗粒和调节分子的水平相比)。

诱导或增加免疫细胞增殖的方法

本文还提供诱导或增加免疫细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性免疫细胞中的任一种)增殖的方法，其包括使免疫细胞与有效量的本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种或本文所描述的组合物(例如，药物组合物)中的任一种接触。在一些实例中，免疫细胞在体外接触(例如，在足以引起对免疫细胞的刺激的条件下在合适的液体培养基中)。

在一些实例中，免疫细胞先前已获自受试者(例如，哺乳动物，例如人)。这些方法的一些实施例进一步包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在一些实例中，免疫细胞在体内接触。在这类实施例中，将多链嵌合多肽以足以引起对受试者中的免疫细胞的刺激的量施用于受试者(例如，哺乳动物，例如人)。

在本文所描述的任何方法的一些实例中，免疫细胞可为未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

在一些实例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实例中，免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)先前已经过基因修饰以表达共刺激分子(例如，CD28)。

这些方法的一些实施例可进一步包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)中。这些方法的一些实施例可进一步包括在接触步骤之后，将编码共刺激分子(例如，CD28)的核酸引入到免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)中。

这些方法的一些实施例可进一步包括将治疗有效量的免疫细胞施用于有需要的受试者(例如，本文所描述的示例性受试者中的任一种)。

在一些实例中，受试者可为被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况的受试者。与年龄相关的疾病或病症的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

在一些实例中，受试者可为已被鉴别或诊断为患有癌症的受试者。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在一些实例中，受试者可为已被诊断或鉴别为患有感染性疾病的受试者。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

免疫细胞增殖的检测可使用本领域已知的方法进行，例如流式细胞术(例如，荧光辅助流式细胞术)、显微镜检查和免疫荧光显微镜检查，例如通过将未经多链嵌合多肽接触的样品中免疫细胞浓度的增加速率与经本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种接触的相似样品中的免疫细胞浓度增加的速率进行比较来进行)。在其它实例中，免疫细胞的增殖可通过检测由增殖免疫细胞分泌或上调的一种或多种细胞因子或趋化因子或细胞毒性颗粒或调节性分子(例如，IL-2、IFN-γ、IL-1、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-22、IL-33、白三烯B4、CCL5、TNFα、颗粒酶、穿孔素、TGFβ、STAT3、STAT4、STAT5、RORγT、FOXP3和GATA3中的一种或多种)水平的提高(例如，与未与本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种接触的对照中的一种或多种细胞因子、趋化因子、细胞毒性颗粒和调节分子的水平相比)而间接检测。

在一些实施例中，本文提供的方法可引起与不与本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种接触的类似对照样品中免疫细胞浓度的增加速率相比，与本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种接触的样品中免疫细胞浓度的增加速率增加(例如，约1％至约800％增加或本文所描述的这一范围的任何子范围)。

诱导免疫细胞分化的方法

本文还提供诱导免疫细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性免疫细胞中的任一种)分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，其包括使免疫细胞与有效量的本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种或本文所描述的组合物(例如，药物组合物)中的任一种接触。在一些实例中，免疫细胞在体外接触(例如，在足以引起对免疫细胞的刺激的条件下在合适的液体培养基中)。

在一些实例中，免疫细胞先前已获自受试者(例如，哺乳动物，例如人)。这些方法的一些实施例进一步包括在接触步骤之前从受试者获得免疫细胞。

在一些实例中，免疫细胞在体内接触。在这类实施例中，将多链嵌合多肽以足以引起对受试者中的免疫细胞的刺激的量施用于受试者(例如，哺乳动物，例如人)。

在本文所描述的任何方法的一些实例中，免疫细胞可为未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞或自然杀伤细胞或其组合。

在一些实例中，免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。在一些实例中，免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)先前已经过基因修饰以表达共刺激分子(例如，CD28)。

在一些实例中，将有效量的本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种或本文所描述的组合物(例如，药物组合物)中的任一种与抗TF IgG1抗体组合以产生记忆或记忆样免疫细胞。

这些方法的一些实施例可进一步包括在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)中。这些方法的一些实施例可进一步包括在接触步骤之后，将编码共刺激分子(例如，CD28)的核酸引入到免疫细胞(例如，本文所描述的免疫细胞中的任一种)中。

这些方法的一些实施例可进一步包括将治疗有效量的免疫细胞施用于有需要的受试者(例如，本文所描述的示例性受试者中的任一种)。

在一些实例中，受试者可为被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况的受试者。与年龄相关的疾病或病症的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

在一些实例中，受试者可为已被鉴别或诊断为患有癌症的受试者。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在一些实例中，受试者可为已被诊断或鉴别为患有感染性疾病的受试者。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

在一些实例中，免疫细胞是NK细胞，并且记忆NK细胞的检测可包括例如检测IL-12、IL-18、IL-33、CD25、CD69、CD62L、STAT4、Zbtb32、DNAM-1、NKp30、NKp44、NKp46、BIM、Noxa、SOCS1、BNIP3、BNIP3L、IFN-γ、CXCL16、CXCR6、NKG2D、TRAIL、CD49、Ly49D、CD49b和Ly79H中的一种或多种的水平。O'Sullivan等人,《免疫》43:634-645,2015中描述对NK记忆细胞和其检测方法的描述。

在一些实例中，免疫细胞是T细胞，并且记忆T细胞的检测可包括例如检测CD45RO、CCR7、L-选择蛋白(CD62L)、CD44、CD45RA、整联蛋白αeβ7、CD43、CD27、CD28、IL-7Rα、CD95、IL-2Rβ、CXCR3和LFA-1中的一种或多种的表达水平。在一些实例中，免疫细胞是B细胞，并且记忆B细胞的检测可包括例如CD27表达水平的检测。记忆或记忆样免疫细胞的其它类型和标记是本领域已知的。

治疗方法

本文还提供治疗有需要的受试者(例如，本文所描述或本领域已知的示例性受试者中的任一种)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种或本文所描述的组合物(例如，药物组合物)中的任一种。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。在一些实施例中，这些方法可引起受试者中癌症的一种或多种症状的数目、严重性或频率降低(例如，与治疗前受试者中癌症的一种或多种症状的数目、严重性或频率相比)。在一些实施例中，这些方法可引起受试者中一种或多种实体肿瘤的体积减少(例如，约1％减少至约99％减少，约1％减少至约95％减少，约1％减少至约90％减少，约1％减少至约85％减少，约1％减少至约80％减少，约1％减少至约75％减少，约1％减少至约70％减少，约1％减少至约65％减少，约1％减少至约60％减少，约1％减少至约55％减少，约1％减少至约50％减少，约1％减少至约45％减少，约1％减少至约40％减少，约1％减少至约35％减少，约1％减少至约30％减少，约1％减少至约25％减少，约1％减少至约20％减少，约1％减少至约15％减少，约1％减少至约10％减少，约1％减少至约5％减少，约5％减少至约99％减少，约5％减少至约95％减少，约5％减少至约90％减少，约5％减少至约85％减少，约5％减少至约80％减少，约5％减少至约75％减少，约5％减少至约70％减少，约5％减少至约65％减少，约5％减少至约60％减少，约5％减少至约55％减少，约5％减少至约50％减少，约5％减少至约45％减少，约5％减少至约40％减少，约5％减少至约35％减少，约5％减少至约30％减少，约5％减少至约25％减少，约5％减少至约20％减少，约5％减少至约15％减少，约5％减少至约10％减少，约10％减少至约99％减少，约10％减少至约95％减少，约10％减少至约90％减少，约10％减少至约85％减少，约10％减少至约80％减少，约10％减少至约75％减少，约10％减少至约70％减少，约10％减少至约65％减少，约10％减少至约60％减少，约10％减少至约55％减少，约10％减少至约50％减少，约10％减少至约45％减少，约10％减少至约40％减少，约10％减少至约35％减少，约10％减少至约30％减少，约10％减少至约25％减少，约10％减少至约20％减少，约10％减少至约15％减少，约15％减少至约99％减少，约15％减少至约95％减少，约15％减少至约90％减少，约15％减少至约85％减少，约15％减少至约80％减少，约15％减少至约75％减少，约15％减少至约70％减少，约15％减少至约65％减少，约15％减少至约60％减少，约15％减少至约55％减少，约15％减少至约50％减少，约15％减少至约45％减少，约15％减少至约40％减少，约15％减少至约35％减少，约15％减少至约30％减少，约15％减少至约25％减少，约15％减少至约20％减少，约20％减少至约99％减少，约20％减少至约95％减少，约20％减少至约90％减少，约20％减少至约85％减少，约20％减少至约80％减少，约20％减少至约75％减少，约20％减少至约70％减少，约20％减少至约65％减少，约20％减少至约60％减少，约20％减少至约55％减少，约20％减少至约50％减少，约20％减少至约45％减少，约20％减少至约40％减少，约20％减少至约35％减少，约20％减少至约30％减少，约20％减少至约25％减少，约25％减少至约99％减少，约25％减少至约95％减少，约25％减少至约90％减少，约25％减少至约85％减少，约25％减少至约80％减少，约25％减少至约75％减少，约25％减少至约70％减少，约25％减少至约65％减少，约25％减少至约60％减少，约25％减少至约55％减少，约25％减少至约50％减少，约25％减少至约45％减少，约25％减少至约40％减少，约25％减少至约35％减少，约25％减少至约30％减少，约30％减少至约99％减少，约30％减少至约95％减少，约30％减少至约90％减少，约30％减少至约85％减少，约30％减少至约80％减少，约30％减少至约75％减少，约30％减少至约70％减少，约30％减少至约65％减少，约30％减少至约60％减少，约30％减少至约55％减少，约30％减少至约50％减少，约30％减少至约45％减少，约30％减少至约40％减少，约30％减少至约35％减少，约35％减少至约99％减少，约35％减少至约95％减少，约35％减少至约90％减少，约35％减少至约85％减少，约35％减少至约80％减少，约35％减少至约75％减少，约35％减少至约70％减少，约35％减少至约65％减少，约35％减少至约60％减少，约35％减少至约55％减少，约35％减少至约50％减少，约35％减少至约45％减少，约35％减少至约40％减少，约40％减少至约99％减少，约40％减少至约95％减少，约40％减少至约90％减少，约40％减少至约85％减少，约40％减少至约80％减少，约40％减少至约75％减少，约40％减少至约70％减少，约40％减少至约65％减少，约40％减少至约60％减少，约40％减少至约55％减少，约40％减少至约50％减少，约40％减少至约45％减少，约45％减少至约99％减少，约45％减少至约95％减少，约45％减少至约90％减少，约45％减少至约85％减少，约45％减少至约80％减少，约45％减少至约75％减少，约45％减少至约70％减少，约45％减少至约65％减少，约45％减少至约60％减少，约45％减少至约55％减少，约45％减少至约50％减少，约50％减少至约99％减少，约50％减少至约95％减少，约50％减少至约90％减少，约50％减少至约85％减少，约50％减少至约80％减少，约50％减少至约75％减少，约50％减少至约70％减少，约50％减少至约65％减少，约50％减少至约60％减少，约50％减少至约55％减少，约55％减少至约99％减少，约55％减少至约95％减少，约55％减少至约90％减少，约55％减少至约85％减少，约55％减少至约80％减少，约55％减少至约75％减少，约55％减少至约70％减少，约55％减少至约65％减少，约55％减少至约60％减少，约60％减少至约99％减少，约60％减少至约95％减少，约60％减少至约90％减少，约60％减少至约85％减少，约60％减少至约80％减少，约60％减少至约75％减少，约60％减少至约70％减少，约60％减少至约65％减少，约65％减少至约99％减少，约65％减少至约95％减少，约65％减少至约90％减少，约65％减少至约85％减少，约65％减少至约80％减少，约65％减少至约75％减少，约65％减少至约70％减少，约70％减少至约99％减少，约70％减少至约95％减少，约70％减少至约90％减少，约70％减少至约85％减少，约70％减少至约80％减少，约70％减少至约75％减少，约75％减少至约99％减少，约75％减少至约95％减少，约75％减少至约90％减少，约75％减少至约85％减少，约75％减少至约80％减少，约80％减少至约99％减少，约80％减少至约95％减少，约80％减少至约90％减少，约80％减少至约85％减少，约85％减少至约99％减少，约85％减少至约95％减少，约85％减少至约90％减少，约90％减少至约99％减少，约90％减少至约95％减少或约95％减少至约99％减少)(例如，与治疗之前或治疗开始时一种或多种实体肿瘤的体积相比)。在一些实施例中，这些方法可减少(例如，约1％减少至约99％减少或本文所描述的这一范围的任何子范围)在受试者中发生转移或发生一种或多种另外的转移的风险(例如，与在治疗之前的受试者或施用不同治疗的相似受试者或受试者群体中发生转移或发生一种或多种另外的转移的风险相比)。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。与老化相关的疾病或病况的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。在一些实例中，这些方法可引起受试者中与老化相关的疾病或病况的一种或多种症状的数目、严重性或频率降低(例如，与治疗前受试者中与老化相关的疾病或病况的一种或多种症状的数目、严重性或频率相比)。在一些实例中，方法可引起例如与治疗前受试者中衰老细胞的数目相比，受试者中衰老细胞的数目降低(例如，受试者中与老化相关的疾病或病症中所涉及和/或牵涉的一种或多种特定组织中衰老细胞的数目降低)(例如，约1％降低至约99％降低，约1％降低至约95％降低，约1％降低至约90％降低，约1％降低至约85％降低，约1％降低至约80％降低，约1％降低至约75％降低，约1％降低至约70％降低，约1％降低至约65％降低，约1％降低至约60％降低，约1％降低至约55％降低，约1％降低至约50％降低，约1％降低至约45％降低，约1％降低至约40％降低，约1％降低至约35％降低，约1％降低至约30％降低，约1％降低至约25％降低，约1％降低至约20％降低，约1％降低至约15％降低，约1％降低至约10％降低，约1％降低至约5％降低，约5％降低至约99％降低，约5％降低至约95％降低，约5％降低至约90％降低，约5％降低至约85％降低，约5％降低至约80％降低，约5％降低至约75％降低，约5％降低至约70％降低，约5％降低至约65％降低，约5％降低至约60％降低，约5％降低至约55％降低，约5％降低至约50％降低，约5％降低至约45％降低，约5％降低至约40％降低，约5％降低至约35％降低，约5％降低至约30％降低，约5％降低至约25％降低，约5％降低至约20％降低，约5％降低至约15％降低，约5％降低至约10％降低，约10％降低至约99％降低，约10％降低至约95％降低，约10％降低至约90％降低，约10％降低至约85％降低，约10％降低至约80％降低，约10％降低至约75％降低，约10％降低至约70％降低，约10％降低至约65％降低，约10％降低至约60％降低，约10％降低至约55％降低，约10％降低至约50％降低，约10％降低至约45％降低，约10％降低至约40％降低，约10％降低至约35％降低，约10％降低至约30％降低，约10％降低至约25％降低，约10％降低至约20％降低，约10％降低至约15％降低，约15％降低至约99％降低，约15％降低至约95％降低，约15％降低至约90％降低，约15％降低至约85％降低，约15％降低至约80％降低，约15％降低至约75％降低，约15％降低至约70％降低，约15％降低至约65％降低，约15％降低至约60％降低，约15％降低至约55％降低，约15％降低至约50％降低，约15％降低至约45％降低，约15％降低至约40％降低，约15％降低至约35％降低，约15％降低至约30％降低，约15％降低至约25％降低，约15％降低至约20％降低，约20％降低至约99％降低，约20％降低至约95％降低，约20％降低至约90％降低，约20％降低至约85％降低，约20％降低至约80％降低，约20％降低至约75％降低，约20％降低至约70％降低，约20％降低至约65％降低，约20％降低至约60％降低，约20％降低至约55％降低，约20％降低至约50％降低，约20％降低至约45％降低，约20％降低至约40％降低，约20％降低至约35％降低，约20％降低至约30％降低，约20％降低至约25％降低，约25％降低至约99％降低，约25％降低至约95％降低，约25％降低至约90％降低，约25％降低至约85％降低，约25％降低至约80％降低，约25％降低至约75％降低，约25％降低至约70％降低，约25％降低至约65％降低，约25％降低至约60％降低，约25％降低至约55％降低，约25％降低至约50％降低，约25％降低至约45％降低，约25％降低至约40％降低，约25％降低至约35％降低，约25％降低至约30％降低，约30％降低至约99％降低，约30％降低至约95％降低，约30％降低至约90％降低，约30％降低至约85％降低，约30％降低至约80％降低，约30％降低至约75％降低，约30％降低至约70％降低，约30％降低至约65％降低，约30％降低至约60％降低，约30％降低至约55％降低，约30％降低至约50％降低，约30％降低至约45％降低，约30％降低至约40％降低，约30％降低至约35％降低，约35％降低至约99％降低，约35％降低至约95％降低，约35％降低至约90％降低，约35％降低至约85％降低，约35％降低至约80％降低，约35％降低至约75％降低，约35％降低至约70％降低，约35％降低至约65％降低，约35％降低至约60％降低，约35％降低至约55％降低，约35％降低至约50％降低，约35％降低至约45％降低，约35％降低至约40％降低，约40％降低至约99％降低，约40％降低至约95％降低，约40％降低至约90％降低，约40％降低至约85％降低，约40％降低至约80％降低，约40％降低至约75％降低，约40％降低至约70％降低，约40％降低至约65％降低，约40％降低至约60％降低，约40％降低至约55％降低，约40％降低至约50％降低，约40％降低至约45％降低，约45％降低至约99％降低，约45％降低至约95％降低，约45％降低至约90％降低，约45％降低至约85％降低，约45％降低至约80％降低，约45％降低至约75％降低，约45％降低至约70％降低，约45％降低至约65％降低，约45％降低至约60％降低，约45％降低至约55％降低，约45％降低至约50％降低，约50％降低至约99％降低，约50％降低至约95％降低，约50％降低至约90％降低，约50％降低至约85％降低，约50％降低至约80％降低，约50％降低至约75％降低，约50％降低至约70％降低，约50％降低至约65％降低，约50％降低至约60％降低，约50％降低至约55％降低，约55％降低至约99％降低，约55％降低至约95％降低，约55％降低至约90％降低，约55％降低至约85％降低，约55％降低至约80％降低，约55％降低至约75％降低，约55％降低至约70％降低，约55％降低至约65％降低，约55％降低至约60％降低，约60％降低至约99％降低，约60％降低至约95％降低，约60％降低至约90％降低，约60％降低至约85％降低，约60％降低至约80％降低，约60％降低至约75％降低，约60％降低至约70％降低，约60％降低至约65％降低，约65％降低至约99％降低，约65％降低至约95％降低，约65％降低至约90％降低，约65％降低至约85％降低，约65％降低至约80％降低，约65％降低至约75％降低，约65％降低至约70％降低，约70％降低至约99％降低，约70％降低至约95％降低，约70％降低至约90％降低，约70％降低至约85％降低，约70％降低至约80％降低，约70％降低至约75％降低，约75％降低至约99％降低，约75％降低至约95％降低，约75％降低至约90％降低，约75％降低至约85％降低，约75％降低至约80％降低，约80％降低至约99％降低，约80％降低至约95％降低，约80％降低至约90％降低，约80％降低至约85％降低，约85％降低至约99％降低，约85％降低至约95％降低，约85％降低至约90％降低，约90％降低至约99％降低，约90％降低至约95％降低或约95％降低至约99％降低)。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。在一些实施例中，这些方法可引起受试者中感染滴度(例如，病毒滴度)的降低(例如，与治疗前受试者中的感染滴度相比)。在一些实施例中，这些方法可引起受试者中感染性疾病(例如，病毒感染)的一种或多种症状的数目、严重性或频率降低(例如，与治疗之前受试者中感染性疾病的一种或多种症状的数目、严重性或频率相比)。

术语“受试者”是指任何哺乳动物。在一些实施例中，受试者或“需要治疗的受试者”可为犬科动物(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、绵羊、牛、猪、山羊、灵长类动物，例如猿猴(例如，猴(例如狨猴、狒狒)或猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩或长臂猿)或人；或啮齿动物(例如，小鼠、豚鼠、仓鼠或大鼠)。在一些实施例中，受试者或“需要治疗的受试者”可为非人哺乳动物，尤其可使用常规用作证明在人中的治疗功效的模型的哺乳动物(例如，鼠、兔、猪、犬或灵长类动物)。

杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法

本文还提供杀死有需要的受试者(例如，本文所描述或本领域已知的示例性受试者中的任一种)的癌细胞(例如，本文所描述或本领域已知的示例性癌症类型中的任一种)、受感染细胞(例如，感染有本文所描述或本领域已知的示例性病毒中的任一种的细胞)、或衰老细胞(例如，衰老癌细胞、衰老成纤维细胞或衰老内皮细胞)的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种或本文所描述的组合物(例如，药物组合物)中的任一种。

在这些方法的一些实施例中，受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。癌症的非限制性实例包括：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

在这些方法的一些实例中，受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。与老化相关的疾病或病况的非限制性实例包括：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

在这些方法的一些实例中，受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。感染性疾病的非限制性实例包括感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

衰老细胞

衰老是不可逆的生长停滞的一种形式，伴随着表型变化、对细胞凋亡的抗性和损伤感知信号传导路径的激活。细胞衰老最早在培养的人成纤维细胞中描述，所述细胞失去了增殖能力，在约50群体翻倍后到达永久停滞(称为海弗利克极限(Hayflick limit))。衰老被认为是可由广泛范围的内在和外在伤害，包括氧化和遗传毒性应激、DNA损伤、端粒损耗、致癌激活、线粒体功能障碍或化疗剂诱导的应激反应。

衰老细胞保持代谢活性，并且可通过其分泌表型影响组织止血、疾病和老化。衰老被认为是生理过程，并且对促进伤口愈合、组织稳态、再生和纤维化调节很重要。例如，在伤口愈合期间观察到衰老细胞的瞬时诱导，并且其有助于伤口愈合。衰老的最重要作用之一可能是其在肿瘤抑制中的作用。但是，衰老细胞的积累也驱动老化和与老化相关的疾病和病况。衰老表型还可触发慢性炎性反应，并且因此增强慢性炎症病况以促进肿瘤生长。衰老与老化之间的联系最初是基于衰老细胞在老化组织中积累的观察结果。转基因模型的使用已使得能够在许多年龄相关的病理中系统地检测衰老细胞。选择性消除衰老细胞的策略展现衰老细胞确实可在老化和相关病理中起因果作用。

衰老细胞显示重要且独特的特性，包括形态、染色质组织、基因表达和代谢的变化。存在与细胞衰老相关的几种生化和功能特性，如(i)细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制子p16和p21的表达增加，(ii)存在衰老相关的β-半乳糖苷酶，即溶酶体活性的标记，(iii)出现衰老相关的异染色质灶和核纤层蛋白B1水平下调，(iv)对由抗凋亡BCL家族蛋白表达增加引起的凋亡的抗性，和(v)CD26(DPP4)、CD36(清道夫(Scavenger)受体)、叉头盒4(FOXO4)和分泌性载体膜蛋白4(SCAMP4)上调。衰老细胞还表达炎症特征，即所谓的衰老相关分泌表型(SASP)。通过SASP，衰老细胞产生广泛范围的炎性细胞因子(IL-6、IL-8)、生长因子(TGF-β)、趋化因子(CCL-2)和基质金属蛋白酶(MMP-3、MMP-9)，其以细胞自主方式运作以增强衰老(自分泌作用)，并且与微环境通信并改变微环境(旁分泌作用)。SASP因子可通过触发衰老监视，即免疫介导的衰老细胞清除来促进肿瘤抑制。但是，慢性炎症也是肿瘤发生的已知驱动因素，并且越来越多的证据表明，慢性SASP也可促进癌症和与老化相关的疾病。

衰老细胞的分泌概况取决于环境。例如，人成纤维细胞中不同的线粒体功能障碍诱导的线粒体功能障碍相关衰老(MiDAS)引起缺乏IL-1依赖性炎症因子的SASP出现。NAD+/NADH比率的降低激活AMPK信号传导，其通过激活p53诱导MiDAS。结果，p53抑制NF-κB信号传导，其为促炎性SASP的关键诱导因素。相反，由人细胞中持续性DNA损伤引起的细胞衰老诱导炎性SASP，其依赖于共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶的激活，而不依赖于p53的激活。特别地，IL-6和IL-8的表达和分泌水平提高。还展现了由异位表达p16INK4a和p21CIP1引起的细胞衰老诱导人成纤维细胞的衰老表型，且不存在炎性SASP，表明生长停滞本身并不刺激SASP。

衰老的最主要特征之一是稳定生长停滞。这是通过两个重要路径，即p16/Rb和p53/p21实现的，这两个路径均为肿瘤抑制的关键。DNA损伤引起：(1)染色质中γH2Ax(组蛋白编码基因)和53BP1(DNA损伤反应中涉及)的高沉积：这引起激酶级联反应的激活，最终引起p53激活，和(2)p16INK4a和ARF(均由CDKN2A编码)和P15INK4b(由CDKN2B编码)的激活：p53诱导细胞周期蛋白依赖性激酶抑制子(p21)的转录，并且与p16INK4a和p15INK4b两者一起阻断细胞周期进展的基因(CDK4和CDK6)。这最终引起成视网膜细胞瘤蛋白(Rb)磷酸化不足，并且使细胞周期停滞在G1期。

在正常老化的情况下，选择性杀死衰老细胞已显示可显著改善小鼠的健康寿命，并且改善与年龄相关的疾病或癌症疗法的结果(Ovadya,《临床研究杂志(J ClinInvest.)》128(4):1247-1254,2018)。在自然界中，衰老细胞通常被先天免疫细胞去除。衰老的诱导不仅阻止了受损/改变的细胞的潜在增殖和转化，而且还通过产生SASP因子(主要起自然杀伤(NK)细胞的化学引诱物(如IL-15和CCL2)和巨噬细胞的化学引诱物(如CFS-1和CCL2)的作用)促进组织修复。这些先天免疫细胞介导消除应激细胞的免疫监视机制。衰老细胞通常上调NK细胞激活受体NKG2D和DNAM-1配体，其属于应激诱导性配体家族：抵抗感染性疾病和恶性肿瘤的一线免疫防御的重要组分。受体激活后，NK细胞可接着通过其溶细胞机构特异性诱导衰老细胞的死亡。已在肝纤维化(Sagiv,《致癌基因(Oncogene)》32(15):1971-1977,2013)、肝细胞癌(Iannello,《实验医学杂志(J Exp Med)》210(10):2057-2069,2013)、多发性骨髓瘤(Soriani,《血液(Blood)》113(15):3503-3511,2009)和由甲羟戊酸路径功能异常应激的神经胶质瘤细胞(Ciaglia,《国际癌症杂志(Int J Cancer)》142(1):176-190,2018)中指出了NK细胞在衰老细胞的免疫监视中的作用。子宫内膜细胞经历急性细胞衰老，并且不会分化成蜕膜细胞。分化的蜕膜细胞分泌IL-15，并且从而募集子宫NK细胞以靶向并消除未分化的衰老细胞，因此有助于重塑和年轻化子宫内膜(Brighton,《E生命(Elife)》6:e31274,2017)。以类似的机制，在肝纤维化过程中，表达p53的衰老肝卫星细胞使驻留库普弗(Kupfer)巨噬细胞和新浸润的巨噬细胞的极化偏向促炎性M1表型，其显示衰老活性。已显示F4/80+巨噬细胞在清除小鼠子宫衰老细胞以维持产后子宫功能中起关键作用。

衰老细胞主要通过上调NKG2D(在NK细胞上表达)的配体、趋化因子和其它SASP因子来募集NK细胞。肝纤维化的体内模型已显示激活的NK细胞有效清除衰老细胞(Krizhanovsky,《细胞(Cell)》134(4):657-667,2008)。研究已描述各种模型来研究衰老，包括肝纤维化(Krizhanovsky,《细胞》134(4):657-667,2008)、骨关节炎(Xu,《老年学杂志：A系列，生物科学与医学(J Gerontol A Biol Sci Med Sci)》72(6):780-785,2017)和帕金森氏病(Chinta,《细胞报告(Cell Rep)》22(4):930-940,2018)。用于研究衰老细胞的动物模型描述于：Krizhanovsky,《细胞》134(4):657-667,2008；Baker,《自然》479(7372):232-236,2011；Farr,《自然·医学(Nat Med)》23(9):1072-1079,2017；Bourgeois,《欧洲生物化学学会联合会快报(FEBS Lett)》592(12):2083-2097,2018；Xu,《自然·医学》24(8):1246-1256,2018)。

另外的治疗剂

本文所描述的方法中的任一种的一些实施例可进一步包括向受试者(例如，本文所描述的受试者中的任一种)施用治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂。可与多链嵌合多肽(例如，本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种)或免疫细胞(例如，以单一配制物或两种或更多种配制物的形式向受试者施用)大体同时向受试者施用一种或多种另外的治疗剂。在一些实施例中，可在施用多链嵌合多肽(例如，本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种)或免疫细胞之前向受试者施用一种或多种另外的治疗剂。在一些实施例中，可在向受试者施用多链嵌合多肽(例如，本文所描述的多链嵌合多肽中的任一种)或免疫细胞后向受试者施用一种或多种另外的治疗剂。

另外的治疗剂的非限制性实例包括：抗癌药物、激活受体激动剂、免疫检查点抑制剂、用于阻断HLA特异性抑制受体的试剂、糖原合酶激酶(GSK)3抑制剂和抗体。

抗癌药的非限制性实例包括抗代谢药物(例如，5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲、甲氨蝶呤(methotrexate)、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨(cladribine)、奈拉滨(nelarabine)、喷司他汀(pentostatin)或培美曲塞(pemetrexed))、植物碱(例如，长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、喜树碱(camptothecin)、9-甲氧基喜树碱、狗牙花定碱(coronaridine)、紫杉醇(taxol)、乌檀根碱(naucleaoral)、二异戊二烯基化吲哚生物碱(diprenylated indolealkaloid)、山矢车菊碱(montamine)、希什金矢车菊碱(schischkiniin)、原小蘖碱(protoberberine)、小蘖碱(berberine)、血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelerythrine)、白屈菜碱(chelidonine)、鹅掌楸碱(liriodenine)、山岗蠹吾碱(clivorine)、β-咔啉、脱甲氧基娃儿藤碱(antofine)、娃儿藤碱(tylophorine)、白叶藤碱(cryptolepine)、新白叶藤碱(neocryptolepine)、紫堇诺灵碱(corynoline)、依兰碱(sampangine)、咔唑、文珠兰碱(crinamine)、高山网球花碱(montanine)、玫瑰树碱(ellipticine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenisopide)、伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)或吖啶酮生物碱)、蛋白酶体抑制剂(例如，乳胞素(lactacystin)、双硫仑(disulfiram)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯、马里佐米(marizomib)(盐孢菌素(salinosporamide)A)、奥普佐米(oprozomib)(ONX-0912)、地兰佐米(delanzomib)(CEP-18770)、环氧霉素(epoxomicin)、MG132、β-羟基β-甲基丁酸盐、硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)或埃沙佐米(ixazomib))、抗肿瘤抗生素(例如，阿霉素(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、伊达比星(idarubicin)、放线菌素(actinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)或博来霉素(bleomycin))、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(例如，伏立诺他(vorinostat)、帕比诺他(panobinostat)、贝林司他(belinostat)、吉韦诺他(givinostat)、阿贝辛他(abexinostat)、缩肽(depsipeptide)、恩替诺特(entinostat)、苯基丁酸盐、丙戊酸、曲古抑菌素(trichostatin)A、达西司他(dacinostat)、莫西司他(mocetinostat)、普瑞司他(pracinostat)、烟酰胺(nicotinamide)、坎比诺尔(cambinol)、替诺文(tenovin)1、替诺文6、斯汀诺(sirtinol)、利可司他(ricolinostat)、替非司他(tefinostat)、凯维林(kevetrin)、奎西司他(quisinostat)、雷米诺他(resminostat)、泰克地那林(tacedinaline)、西达本胺(chidamide)或赛利司他(selisistat))、酪氨酸激酶抑制剂(例如，阿昔替尼(axitinib)、达沙替尼(dasatinib)、恩可非尼(encorafinib)、厄洛替尼(erlotinib)、伊马替尼(imatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)和舒尼替尼(sunitinib))和化疗剂(例如，全反式维甲酸、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、去氧氟尿苷、埃博霉素(epothilone)、羟脲、伊马替尼、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星(valrubicin)、维罗非尼(vemurafenib)和来那度胺(lenalidomide))。化疗剂的另外实例包括烷化剂，例如二氯甲二乙胺、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、异环磷酰胺(ifosfamide)、噻替派(thiotepa)、六甲三聚氰胺(hexamethylmelamine)、白消安(busulfan)、六甲蜜胺(altretamine)、丙卡巴肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、卡莫司汀(carmustine)、罗莫司汀(lumustine)、链脲霉素(streptozocin)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)。

激活受体激动剂的非限制性实例包括激活和增强NK细胞的细胞毒性的激活受体的任何激动剂，包括抗CD16抗体(例如，抗CD16/CD30双特异性单克隆抗体(BiMAb))和基于Fc的融合蛋白。检查点抑制剂的非限制性实例包括抗PD-1抗体(例如，MEDI0680)、抗PD-L1抗体(例如，BCD-135、BGB-A333、CBT-502、CK-301、CS1001、FAZ053、KN035、MDX-1105、MSB2311、SHR-1316、抗PD-L1/CTLA-4双特异性抗体KN046、抗PD-L1/TGFβRII融合蛋白M7824、抗PD-L1/TIM-3双特异性抗体LY3415244、阿特珠单抗(atezolizumab)或阿维鲁单抗(avelumab))、抗TIM3抗体(例如，TSR-022、Sym023或MBG453)和抗CTLA-4抗体(例如，AGEN1884、MK-1308或抗CTLA-4/OX40双特异性抗体ATOR-1015)。用于阻断HLA特异性抑制受体的试剂的非限制性实例包括莫那力单抗(monalizumab)(例如，抗HLA-ENKG2A抑制受体单克隆抗体)。GSK3抑制剂的非限制性实例包括替格鲁西布(tideglusib)或CHIR99021。可用作另外的治疗剂的抗体的非限制性实例包括抗CD26抗体(例如，YS110)、抗CD36抗体和可结合到NK细胞上的Fc受体(例如，CD16)并激活所述受体的任何其它抗体或抗体构建体。在一些实施例中，另外的治疗剂可为胰岛素或二甲双胍(metformin)。

实例

本发明在以下实例中进行了进一步描述，所述实例不限制权利要求中所描述的本发明的范围。

生成两个多链嵌合多肽并且评估其特性。两个多链嵌合多肽中的每一个均包括第一嵌合多肽，其包括与第一靶标结合结构域和结构域亲和对中的第一结构域共价连接的可溶性组织因子结构域。两个多链嵌合多肽中的每一个中的第二嵌合多肽包括结构域亲和对中的第二结构域和第二靶标结合结构域。

多链嵌合多肽的逻辑基础构建的描述

组织因子(TF)是一种稳定的跨膜蛋白，含有236个氨基酸残基。组织因子的截短的重组219个氨基酸的胞外域是可溶的，并且已知在细菌或哺乳动物细胞中以高水平表达。在不希望受特定理论束缚的情况下，申请人推测219-aa组织因子可用作产生独特多链嵌合多肽的连接接头。

由在发酵液中生长的CHO细胞以高水平产生包括可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽。通过在固体基质上偶联的抗组织因子单克隆抗体(mAb)纯化这些第一嵌合多肽。值得注意的是，组织因子含有FVIIa和FX的结合位点。当组织因子未锚定到磷脂双层时，组织因子-FVIIa复合物对FX的催化活性低约100万倍。因此，在不希望受特定理论束缚的情况下，申请人推测在第一嵌合多肽的构建中使用不跨膜的组织因子的219-aa胞外域可消除第一嵌合多肽中组织因子的促凝活性。为了进一步降低或消除219-aa组织因子的促凝活性，可在组织因子中进行选择突变，具体来说在已知有助于FVIIa结合位点结合能的七个氨基酸残基上。

所描述的嵌合多肽的结合相互作用的表征

为了确定第一和第二嵌合多肽是否彼此结合以形成多链嵌合多肽，进行体外结合分析。为了确定包含可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽是否由抗TF mAb识别并结合，进行体外结合分析。值得注意的是，数据表明突变组织因子蛋白仍由已知与组织因子上的FX结合位点结合的抗TF mAb识别并选择性结合。为了确定包含与scFv或细胞因子共价连接的可溶性组织因子结构域的第一嵌合多肽(参见图1和图2)是否具有功能性scFvs或细胞因子，进行体外结合分析。来自前述分析的数据与具有预期生物活性的纯化的第一嵌合多肽一致(例如，scFv选择性结合预期靶抗原或细胞因子选择性结合预期受体或结合蛋白)。

另外，使用包括彼此结合的第一和第二嵌合多肽的两个多链嵌合多肽进行的实验展现预期靶标结合活性(例如，多链嵌合多肽特异性结合到由第一靶标结合结构域特异性识别的靶标和由第二靶标结合结构域特异性识别的靶标)。

基于前述结果，申请人得出结论，可溶性组织因子连接接头提供或实现了编码scFv、白介素、细胞因子、白介素受体或细胞因子受体的多肽在三维空间中相对于可溶性组织因子结构域并且相对于彼此的适当呈现，使得各自保留预期生物特性和活性。

当第一和第二嵌合多肽两者被共表达时，异二聚复合物以高水平分泌到发酵液中。捕获复合物并且使用亲和色谱法通过缀合到固体基质的抗TF mAb容易地纯化。如通过体外结合分析所分析，这些多链嵌合多肽的第一和第二靶标结合结构域保留其预期生物活性。因此，多链嵌合多肽的组装提供适用于生物活性的结构域的空间呈现和折叠。重要的是，多链嵌合多肽的空间布置不干扰组织因子上的FX结合位点，这使得能够使用抗TF mAb进行亲和纯化。

所描述的嵌合多肽的稳定性的表征

两种纯化的多链嵌合多肽均为稳定的。这些多链嵌合多肽在人血清中在37℃下培育72小时时具有完整结构和完全生物活性。

所描述的嵌合多肽聚集倾向的表征

在4℃下在PBS中存储时，两种纯化的多链嵌合多肽均不形成聚集体。

所描述的嵌合多肽的粘度表征

当将多链嵌合多肽以高达50mg/mL的浓度在PBS中配制时，不存在粘度问题。

多链嵌合多肽平台的另外应用

来自这些研究的数据显示，本文所描述的平台技术可用于产生可以本文所描述的格式中的任一种与衍生自抗体的靶标结合结构域融合的分子，包括但不限于粘附分子、受体、细胞因子、配体和趋化因子。利用适当的靶标结合结构域，所得多链嵌合多肽可促进各种免疫效应细胞的缀合并介导靶细胞，包括癌细胞、受病毒感染的细胞或衰老细胞的破坏。多链嵌合多肽中的其它结构域刺激、激活并吸引免疫系统，以增强效应细胞对靶细胞的细胞毒性。

在非限制性实例中，产生IL-12/IL-15RαSu DNA构建体(图3)。人IL-12亚基序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列、人组织因子219序列和人IL-18序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智(Genewiz)合成。制造DNA构建体，用GS(3)接头将IL-12亚基β(p40)连接到IL-12亚基α(p35)以生成IL-12的单链形式，并且然后直接将IL-12序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-12/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

IL12/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:77)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚基β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚基α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

在非限制性实例中，制造IL-18/TF/IL-15构建体(图4)，将IL-18序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-18/TF构建体与IL-15的N端编码区连接。由金唯智合成的IL-18/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:73)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

将IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如Hughes,《人基因疗法(Hum Gene Ther)》16:457–72,2005，在此以引用的方式并入)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu蛋白复合物(称为18t15-12s；图5和图6)。使用抗TF抗体亲和色谱法和尺寸排阻色谱法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化18t15-12s蛋白，得到由IL-12/IL-15RαSu和IL-18/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

IL12/IL-15RαSu融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:76)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚基β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚基α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

IL-18/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:72)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导(信号序列)肽从完整的多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团(GE Healthcare)

18t15-12s的细胞培养物收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸，pH 2.9洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样品中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸，pH 2.5剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

将通用电气医疗集团

为了确定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的18t15-12s蛋白质样品。凝胶用InstantBlue

根据制造商的说明书，使用蛋白质去糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室(New England Biolabs))确认CHO-K1细胞中18t15-12s的糖基化。图10显示去糖基化和未去糖基化的18t15-12s的示例SDS PAGE。去糖基化降低18t15-12s的分子量，如图10泳道4所示。

使用标准夹心ELISA方法检测并定量了18t15-12s复合物(图11-14)。抗人组织因子抗体充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-12、IL-15或IL-18抗体(BAF 219、BAM 247、D045-6，所有为安迪生物公司产品)充当检测抗体。还使用抗人组织因子捕获抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体检测纯化的18t15-12s蛋白复合物中的组织因子。将I43/抗TF抗体ELISA与相似浓度下的纯化组织因子进行比较。

为了评定18t15-12s复合物的IL-15免疫刺激活性，向200μL IMDM:10％FBS培养基中32Dβ细胞(104个细胞/孔)中添加逐渐提高浓度的18t15-12s。将32Dβ细胞在37℃下培育3天。在第四天，添加WST-1增殖试剂(10μL/孔)，并且在4小时后，在450nm处测量吸光度，以基于WST-1裂解为可溶性甲臜染料来确定细胞增殖。评定人重组IL-15的生物活性作为阳性对照。如图15所示，18t15-12s展现32Dβ细胞的IL-15依赖性细胞增殖。与人重组IL-15相比，18t15-12s复合物展现降低的活性，可能是由于IL-18和组织因子与IL-15结构域的连接所致。

为了评定18t15-12s复合物中IL-12和IL-18的个别活性，将18t15-12s添加到200μLIMDM:10％热灭活的FBS培养基中HEK-Blue IL-12和HEK-Blue IL-18报告细胞(5×10

在用饱和量的IL-12(10ng/mL)、IL-15(50ng/mL)和IL-18(50ng/mL)过夜刺激纯化的NK细胞后，可离体诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞。这些记忆样特性已通过IL-2受体ɑ(IL-2Rɑ、CD25)、CD69(和其它激活标记)的表达和增加的IFN-γ产生进行测量。为了评估18t15-12s复合物促进细胞因子诱导的记忆样NK细胞生成的能力，用0.01nM至10000nM的18t15-12s复合物或个别细胞因子(重组IL-12(10ng/mL)、IL-18(50ng/mL)和IL-15(50ng/mL))的组合刺激纯化的人NK细胞(>95％CD56+)14-18小时。通过抗体染色和流式细胞术评定细胞表面CD25和CD 69表达以及细胞内IFN-γ水平。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司(StemCell Technologies))分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用对CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750具有特异性的抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以0.2×10

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以0.2×10

在存在逐渐提高浓度的18t15-12s复合物或作为对照的细胞因子混合物的情况下，将人骨髓性白血病细胞K562(CellTrace紫罗兰标记)与纯化的人NK细胞一起培育。20小时后，收获培养物，用碘化丙啶(PI)染色，并且通过流式细胞术评定。如图20所示，18t15-12s复合物以与细胞因子混合物相似或更大的水平诱导人NK对K562的细胞毒性，其中18t15-12s复合物和细胞因子混合物均诱导比培养基对照更大的细胞毒性。

在非限制性实例中，产生IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15DNA构建体(图21和图22)。人IL-12亚基序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列、人组织因子219序列和人IL-18序列由金唯智合成。制造DNA构建体，用GS(3)接头将IL-12亚基β(p40)连接到IL-12亚基α(p35)以生成IL-12的单链形式，直接将IL-12序列连接到IL-15RαSu序列，并且直接将IL-12/IL-15RαSu构建体连接到αCD16scFv的N端编码区。

IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv构建体的核酸序列如下(SEQ ID NO:123)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚基β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚基α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(抗人CD16轻链可变结构域)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCAT

(接头)

GGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCC

(抗人CD16重链可变结构域)

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

还制造构建体，将IL-18序列连接到组织因子219的N端编码区，并且将IL-18/TF构建体与IL-15的N端编码区连接(图22)。IL-18/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:73)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

将IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv和IL-18/TF/IL-15构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes，《人基因疗法》16:457–72,2005，通过引用并入本文)中，然后将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv蛋白复合物(称为18t15-12s/αCD16；图23和24)的分泌。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-18/TF/IL-15:IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv蛋白复合物(称为18t15-12s/αCD16；图23和图24)的分泌，所述复合物可通过抗TF Ab亲和力和其它色谱方法纯化。在一些情况下，将信号肽从完整多肽上裂解下来以生成成熟形式。

IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQID NO:122)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚基β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚基α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(抗人CD16轻链可变结构域)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGH

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(抗人CD16重链可变结构域)

EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

IL-18/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:72)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在非限制性实例中，产生IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15DNA构建体。人IL-18亚基序列、人IL-15RαSu序列、人IL-12序列、人组织因子219序列和人IL-15序列由金唯智合成。制造DNA构建体，将IL-18直接连接到IL-15RαSu。还制造另外的构建体，将IL-12序列连接到人组织因子219形式的N端编码区，并且进一步将IL-12/TF构建体连接到IL-15的N端编码区。如上所述，使用IL-12的单链形式(p40-接头-p35)。

IL-18/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:217)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC

(人IL-18)

TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-12/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:218)：

(信号肽)

ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC

(人IL-12亚基β(p40))

ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC

(接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人IL-12亚基α(p35))

CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

将IL-18/IL-15RαSu和IL-12/TF/IL-15构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes,《人基因疗法》16:457–72,2005，通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-12/TF/IL-15:IL-18/IL-15RαSu蛋白复合物(称为12t15/s18)的分泌，所述复合物可通过抗TF Ab亲和力和其它色谱方法纯化。

IL-18/IL-15RαSu融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:219)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-18)

YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

IL-12/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:220)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-12亚基β(p40))

IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人IL-12亚基α(p35))

RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

使用标准夹心ELISA方法检测并定量18t15-12s16复合物(包含IL-12/IL-15RαSu/αCD16scFv；IL-18/TF/IL-15)(图25)。抗人组织因子抗体/IL-2或抗TF Ab/IL-18充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-12或IL-18抗体(BAF 219、D045-6，均为安迪生物公司产品)充当检测抗体。还使用抗人组织因子抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测组织因子。

在非限制性实例中，产生TGFβRII/IL-15RαSu DNA构建体(图26)。人TGFβRII二聚体和人IL-21序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制造DNA构建体，用接头将TGFβRII连接到另一TGFβRII以生成TGFβRII的单链形式，并且然后直接将TGFβRII单链二聚体序列连接到IL-15RαSu的N端编码区。

TGFβRII/IL-15RαSu构建体(包括信号序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:93)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβRII-第1片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT

(接头)

GGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGT

(人TGFβRII-第2片段)

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATCACGTGTCCTCCTCCTATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGTATTAGA

另外，制造IL-21/TF/IL-15构建体，将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体连接到IL-15的N端编码区(图27)。IL-21/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:89)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人组织因子219)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

将TGFβRII/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(如Hughes,《人基因疗法》16:457–72,2005中所描述，其通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达引起可溶性IL-21/TF/IL-15:TGFβRII/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-TGFRs；图28和图29)的分泌。使用抗TF抗体亲和色谱法和其它色谱方法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-TGFRs复合物。

TGFβRII/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:92)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβRII-第1片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人TGFβRII-第2片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

成熟的IL-21/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ IDNO:88)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA

21t15-TGFRs的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸，pH 2.9洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后接着通过添加1M Tris碱将样品中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸，pH 2.5剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

将通用电气医疗集团

为了确定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE在还原条件下分析纯化的21t15-TGFRs复合蛋白质样品。凝胶用InstantBlue

使用蛋白质去糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室)和制造商的说明书，确认CHO细胞中21t15-TGFRs的糖基化。去糖基化降低21t15-TGFRs的分子量，如图32泳道4所示。

21t15-TGFRs复合物使用标准夹心ELISA方法检测并定量(图33-37)。抗人组织因子抗体充当捕获抗体并且生物素化抗人IL-21、IL-15或TGFβRII充当检测抗体。还使用抗人组织因子捕获抗体(I43)和抗人组织因子抗体检测抗体来检测组织因子。将I43/抗TF抗体ELISA与相似浓度下的纯化组织因子进行比较。

为了评定21t15-TGFRs复合物的IL-15免疫刺激活性，向200μL IMDM:10％FBS培养基中32Dβ细胞(10

另外，HEK-Blue TGFβ报告细胞(hkb-tgfb，英伟杰)用于测量21t15-TGFRs阻断TGFβ1活性的能力(图38)。将浓度逐渐提高的21t15-TGFRs与0.1nM TGFβ1混合并添加到200μLIMDM:10％热灭活FBS培养基中HEK-Blue TGFβ报告细胞(2.5×10

这些结果展现21t15-TGFRs复合物的TGFβRII结构域保留其捕获TGFβ1的能力。与人重组TGFβRII/Fc相比，21t15-TGFRs阻断TGFβ1活性的能力降低，可能是由于TGFβRII连接到IL-15Rα寿司结构域所致。

在用饱和量的细胞因子过夜刺激纯化的NK细胞后，可离体诱导细胞因子诱导的记忆样NK细胞。这些记忆样特性可通过IL-2受体ɑ(IL-2Rɑ、CD25)、CD69(和其它激活标记)的表达，和增加的IFN-γ产生来测量。为了评估21t15-TGFRs复合物促进细胞因子诱导的记忆样NK细胞生成的能力，用1nM至100nM的21t15-TGFRs复合物刺激纯化的人NK细胞(>95％CD56+)14-18小时。通过抗体染色和流式细胞术评定细胞表面CD25和CD 69表达以及细胞内IFN-γ水平。

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以0.2×10

从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>70％，并且通过用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以0.2×106个/mL在0.2mL完全培养基(RPMI 1640(吉毕科公司)，补充有2mM L-谷氨酰胺(Thermo Life Technologies)、青霉素(Thermo Life Technologies))、链霉素(ThermoLife Technologies)和10％FBS(Hyclone))的96孔平底板中重悬。在37℃，5％CO2下用hIL-21(50ng/mL)(Biolegend)和hIL-15(50ng/mL)(NCI)的混合细胞因子或1nM、10nM或100nM21t15-TGFRs复合物刺激细胞过夜14-18小时。然后将细胞用10μg/mL布雷菲德菌素A(西格玛)和1×莫能菌素(eBioscience)处理4小时。收获细胞，并且用CD56-BV421、CD16-BV510、CD25-PE、CD69-APCFire750特异性抗体表面染色30分钟。染色后，将细胞在FACS缓冲液(含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的1×PBS(Hyclone)中洗涤(室温下1500RPM 5分钟)，并且在室温下固定10分钟。固定后，将细胞用1×透化缓冲液(eBioscience)洗涤(室温下1500RPM，持续5分钟)，并且在室温下对细胞内IFN-γ-PE Ab(Biolegend)染色30分钟。用1×透化的缓冲液再次洗涤细胞，然后用FACS缓冲液洗涤。将细胞沉淀重悬于300μl FACS缓冲液中，并且使用BD FACSCelesta

在存在逐渐提高浓度的21t15-TGFRs复合物的情况下，将人骨髓性白血病细胞K562(CellTrace紫罗兰标记)与纯化的人NK细胞一起培育(使用StemCell人NK细胞纯化试剂盒(E:T比；2:1))。20小时后，收获培养物，用碘化丙啶(PI)染色，并且通过流式细胞术评定。如图42所示，与对照相比，21t15-TGFRs复合物诱导人NK对K562的细胞毒性。

在非限制性实例中，通过将IL-21直接连接到组织因子219突变体的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF突变体连接到IL-15的N端编码区来制造IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体。

IL-21/TF突变体/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:221，加阴影的核苷酸是突变体，并且突变密码子带有下划线)：

(信号序列)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人组织因子219突变体)

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-21/TF突变体/IL-15构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:222，取代的残基加阴影)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

在一些实施例中，IL-21/TF突变体/IL-15DNA构建体可与TGFβRII/IL-15RαSu DNA构建体组合，使用如上所述的逆转录病毒载体转染到细胞中，并且表达为IL-21/TF突变体/IL-15和TGFβRII/IL-15RαSu融合蛋白。TGFβRII/IL-15RαSu融合蛋白的IL-15RαSu结构域结合到IL-21/TF突变体/IL-15融合蛋白的IL-15结构域，产生IL-21/TF突变体/IL-15:TGFβRII/IL-15RαSu复合物。

在非限制性实例中，通过将IL-21直接连接到IL-15RαSu亚基序列来制造IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。IL-21/IL-15RαSu构建体(包括信号序列)的核酸序列如下(SEQ IDNO:111)：

(信号序列)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-21/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:110)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

在一些实施例中，IL-21/IL-15RαSu DNA构建体可与TGFβRII/TF/IL-15DNA构建体组合，转染到如上所述的逆转录病毒载体中，并且表达为IL-21/IL-15RαSu和TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白。IL-21/IL-15RαSu融合蛋白的IL-15RαSu结构域结合到TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白的IL-15结构域，产生TGFβRII/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu复合物。

通过将TGFβRII序列连接到人组织因子219形式的N端编码区，并且然后将TGFβRII/TF构建体连接到IL-15的N端编码区，产生TGFβRII/TF/IL-15RαSu DNA构建体。如上所述，使用TGFβRII的单链形式(TGFβRII-接头-TGFβRII)。TGFβRII/TF/IL-15构建体(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:136)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβRII-第1片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT

(接头)

GGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGT

(人TGFβRII-第2片段)

ATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβRII/TF/IL-15融合蛋白(包括信号肽)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:135)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβRII-第1片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人TGFβRII-第2片段)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在非限制性实例中，产生IL-7/IL-15RαSu DNA构建体(参见图43)。人IL-7序列、人IL-15RαSu序列、人IL-15序列和人组织因子219序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制造DNA构建体，将IL-7序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-7/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

编码IL-7/IL-15RαSu构建体的第二嵌合多肽(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:103)：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL-7)

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA

IL-7/IL-15RαSu构建体的第二嵌合多肽(包括信号肽序列)如下(SEQ ID NO:102)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

在非限制性实例中，通过将IL-21序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-21/TF构建体与IL-15的N端编码区连接，制造IL-21/TF/IL-15构建体(图44)。

由金唯智合成的编码IL-21/TF/IL-15构建体的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:89)：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL-21片段)

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC

(人组织因子219)

TCAGGCACTACAAATACTGTGGCAGCATATAATTTAACTTGGAAATCAACTAATTTCAAGACAATTTTGGAGTGGGAACCCAAACCCGTCAATCAAGTCTACACTGTTCAAATAAGCACTAAGTCAGGAGATTGGAAAAGCAAATGCTTTTACACAACAGACACAGAGTGTGACCTCACCGACGAGATTGTGAAGGATGTGAAGCAGACGTACTTGGCACGGGTCTTCTCCTACCCGGCAGGGAATGTGGAGAGCACCGGTTCTGCTGGGGAGCCTCTGTATGAGAACTCCCCAGAGTTCACACCTTACCTGGAGACAAACCTCGGACAGCCAACAATTCAGAGTTTTGAACAGGTGGGAACAAAAGTGAATGTGACCGTAGAAGATGAACGGACTTTAGTCAGAAGGAACAACACTTTCCTAAGCCTCCGGGATGTTTTTGGCAAGGACTTAATTTATACACTTTATTATTGGAAATCTTCAAGTTCAGGAAAGAAAACAGCCAAAACAAACACTAATGAGTTTTTGATTGATGTGGATAAAGGAGAAAACTACTGTTTCAGTGTTCAAGCAGTGATTCCCTCCCGAACAGTTAACCGGAAGAGTACAGACAGCCCGGTAGAGTGTATGGGCCAGGAGAAAGGGGAATTCAGAGAA

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

包括前导序列的IL-21/TF/IL-15构建体的第一嵌合多肽是SEQ ID NO:88：

(信号肽)

MGVKVLFALICIAVAEA(SEQ ID NO:223)

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

将IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes,《人基因疗法》16:457–72,2005，通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性IL-21/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物(称为21t15-7s；图45和图46)。使用抗TF抗体亲和色谱法和尺寸排阻色谱法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化21t15-7s蛋白，得到由IL-7/IL-15RαSu和IL-21/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。

在一些情况下，将前导(信号序列)肽从完整的多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团

21t15-7s的细胞培养收获物用1M Tris碱调节到pH 7.4，并且加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸，pH 2.9洗脱。收集280nm处的吸光度，并且然后通过添加1M Tris碱将样品中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的

每次洗脱后，接着使用6个柱体积的0.1M甘氨酸，pH 2.5剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用10个柱体积的PBS、0.05％叠氮化钠中和所述柱，并且存储在2-8℃下。

将通用电气医疗集团

为了确定纯度和蛋白质分子量，使用4-12％NuPage Bis-Tris蛋白质凝胶SDS-PAGE分析纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白质样品。凝胶将用InstantBlue

根据制造商的说明书，使用蛋白质去糖基化混合物II试剂盒(新英格兰生物实验室)确认CHO-K1细胞中21t15-7s的糖基化或CHO-K1细胞中21t15-TGFRs的糖基化。

使用标准夹心ELISA方法检测并定量21t15-7s复合物或21t15-TGFRs复合物。抗人组织因子抗体(IgG1)充当捕获抗体，并且生物素化抗人IL-21、IL-15或IL-7抗体(21t15-7s)或生物素化抗人IL-21、IL-15或TGF-βRII抗体(21t15-TGFRs)充当检测抗体。使用抗人组织因子捕获抗体和抗人组织因子抗体(IgG1)检测抗体检测纯化的21t15-7s或21t15-TGFRs蛋白复合物中的组织因子。将抗TF抗体ELISA与相似浓度下的纯化的组织因子进行比较。

为了评定21t15-7s复合物扩增原代自然杀伤(NK)细胞的能力，将21t15-7s复合物和21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样品获得的NK细胞中。在37℃和5％CO

用21t15-7s复合物+抗TF IgG1抗体过夜刺激纯化的NK细胞后，可离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以1×10

从血库获得新鲜的人血白细胞层。使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)通过阴性选择分离NK细胞。在37℃和5％CO

在非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu DNA构建体。人IL-21序列和人IL-15RαSu序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制造DNA构建体，将IL-21序列连接到IL-15RαSu序列。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。参见图50。

在非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制造IL-7/TF/IL-15构建体。参见图51。

在非限制性实例中，产生IL-21/IL-15RαSu的第二嵌合多肽。人IL-21和人IL-15Rα寿司序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。制造DNA构建体，将IL-21序列连接到IL-15Rα寿司序列。最终的IL-21/IL-15RαSu DNA构建体序列由金唯智合成。

由金唯智合成的编码IL-21/IL-15RαSu结构域的第二嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:111)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

IL-21/IL-15Rα寿司结构域的第二嵌合多肽(包括前导序列)如下(SEQ ID NO:110)：

(信号序列)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

在非限制性实例中，通过将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，并且进一步将IL-7/TF构建体与IL-15的N端编码区连接来制造IL-7/TF/IL-15的示例性第一嵌合多肽。由金唯智合成的编码IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:107)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-7片段)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-7/TF/IL-15的第一嵌合多肽(包括前导序列)如下(SEQ ID NO:106)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

将IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15DNA构建体克隆到pMSGV-1修饰的逆转录病毒表达载体(Hughes,《人基因疗法》16:457–72,2005，通过引用并入本文)中，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu蛋白复合物(称为7t15-21s)。使用抗TF抗体(IgG1)亲和色谱法和尺寸排阻色谱法从CHO-K1细胞培养上清液中纯化7t15-21s蛋白，得到由IL-21/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白组成的可溶性(非聚集)蛋白复合物。参见图52和图53。

为了确定抗组织因子单克隆抗体和7t15-21s是否可形成抗体-融合-分子复合物，进行分析尺寸排阻色谱法(SEC)。将Superdex 200增加10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTA Avant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。抗TF mAb(1mg/mL)、7t15-21s(1mg/mL)和以1:1比混合的混合物的样品，因此每种蛋白质的最终浓度为0.5mg/mL)处于PBS中。使用毛细管环将每个样品注入Superdex 200色谱柱，并且通过SEC分析所述样品。每个样品的SEC色谱图如图55所示。SEC结果表明7t15-21s有两个蛋白峰，可能代表7t15-21s二聚体(表观分子量为199.2kDa)和更高的低聚物，并且抗TF mAb有一个峰(表观分子量为206.8kDa)。但是，如所预期，在含有抗TF mAb和7t15-21s的混合物样品中形成了更高分子量的新蛋白质峰(表观分子量为576.9kDa)，表明抗TF mAb和7t15-21s通过抗TF mAb与融合蛋白复合物中的TF结合形成抗体-抗原复合物。

为了评定7t15-21s复合物扩增原代自然杀伤(NK)细胞的能力，将7t15-21s复合物和7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体添加到从新鲜人白细胞样品获得的NK细胞中。在37℃和5％CO

用7t15-21s复合物+抗TF IgG1抗体过夜刺激纯化的NK细胞后，离体诱导原代NK细胞。从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56+NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性抗体(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以1×10

进行了一组实验以确定18t15-12s的构建体(图6)对从人血中纯化的NK细胞的耗氧率和细胞外酸化率(ECAR)的影响。

在这些实验中，从血库中两个不同的人供体获得新鲜的人白细胞，并且使用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)通过阴性选择分离NK细胞。NK细胞的纯度>80％，并且通过用CD56-BV421和CD16-BV510特异性Ab(BioLegend)染色得到证实。对细胞进行计数，并且将其以2×10

数据显示，与用重组人IL-12、重组人IL-15和重组人IL-18的组合激活的相同细胞相比，18t15-12s引起显著提高的耗氧率(图56)和细胞外酸化率(ECAR)(图57)。

生成融合蛋白复合物，其包含抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和IL-7/TF/IL-15融合蛋白。人IL-7和IL-21序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

IL-7/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

IL-7/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将人CD16scFv序列连接到IL-15RαSu链的N端编码区，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制造构建体。以下显示包含抗CD16scFv连接到IL-15RαSu链的N端，后接IL-21的N端编码区的构建体的核酸和蛋白质序列。

抗CD16SscFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

((抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能(Transfer of a TCR gene derived from a patient with a marked antitumorresponse conveys highly active T-cell effector functions)》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为7t15-16s21；图58和图59)，其可通过基于抗TF IgG1的亲和力和其它色谱方法纯化。

7t15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞结合

用pMC质粒中的人CD16b转染CHO细胞，并且用10μg/mL杀稻瘟菌素选择10天。将稳定表达CD16b的CHO细胞用1.2μg/mL的含有抗人CD16 scFv的18t15-12s或作为阴性对照的不含抗人CD16 scFv的7t15-16s21进行染色，并且然后用生物素化抗人组织因子Ab和PE缀合的链霉亲和素染色。如图60A所示，仅有含有抗人CD16scFv的7t15-16s21使细胞染色。如图60B所示，18t15-12s没有染色表达人CD16b的CHO细胞。

使用ELISA检测7t15-16s21中的IL-15、IL-21和IL-7

将96孔板用R5(包被缓冲液)中的100μL(8μg/mL)抗TF IgG1包被，并且在室温(RT)下培育2小时。将板洗涤3次，并且用100μL 1％BSA的PBS溶液阻断。将7t15-16s21的连续稀释液(以1:3的比)添加到孔中，并且在RT下培育60min。洗涤3次后，将50ng/mL的生物素化抗IL15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL-21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL-7抗体(506602，安迪生物公司)添加到孔中并且在RT下培育60min。将板洗涤3次，并且与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch)以每孔100μL在RT下培育30min，接着洗涤4次并与100μl的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图61A-61C所示，通过个别抗体检测7t15-16s21中的IL-15、IL-21和IL-7结构域。

7t15-16s21中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了分析7t15-16s21中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞，将7t15-16s21的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

来自抗TF抗体亲和柱的7t15-16s21的纯化洗脱色谱。

将从细胞培养物中收获的7t15-16s21加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。然后用5个柱体积的PBS洗涤所述柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。图63是显示在抗TF抗体树脂上结合和洗脱后，含有7t15-16s21蛋白的细胞培养上清液的色谱图的线图。如图63所示，抗TF抗体亲和柱结合含有TF的7t15-16s21。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

7t15-16s21的分析尺寸排阻色谱(SEC)分析

为了对7t15-16s21进行尺寸排阻色谱(SEC)分析，使用与AKTA Avant系统(通用电气医疗集团)连接的Superdex 200增加10/300GL凝胶过滤柱(通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管环将在PBS中含有7t15-16s21的样品注入Superdex 200色谱柱，并且通过SEC进行分析。如图64所示，SEC结果显示7t15-16s21有两个蛋白质峰。

生成包含抗人CD16scFv/IL-15RαSu/IL21和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图65和66)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以生成TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

两个TGFβ受体II/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将抗人CD16scFv序列连接到IL-15RαSu链的N端编码区，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制造构建体。以下显示包含抗人CD16scFv连接到IL-15RαSu的N端，后接IL-21的N端编码区的构建体的核酸和蛋白质序列。

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将抗CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:CD16scFv/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为TGFRt15-16s21)，其可通过基于抗TF IgG1的亲和力和其它色谱方法纯化。

TGFRt15-16s21与表达人CD16b的CHO细胞之间的相互作用

用pMC质粒中的人CD16b转染CHO细胞，并且用10μg/mL杀稻瘟菌素选择10天。将稳定表达CD16b的细胞用1.2μg/mL含有抗人CD16 scFv的TGFRt15-16s21，或作为阴性对照的不含抗人CD16 scFv的7t15-21s，并且用生物素化抗人组织因子抗体染色和PE缀合链霉亲和素染色。如图67A和67B所示，含有抗人CD16scFv的TGFRt15-16s21显示正结合，而7t15-21s不显示结合。

TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。

为了评估TGFRt15-16s21中TGFβRII的活性，分析TGFRt15-16s21对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(英伟杰)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10

TGFRt15-16s21中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了分析TGFRt15-16s21中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞将TGFRt15-16s21的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

使用ELISA检测TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII

将96孔板用R5(包被缓冲液)中的100μL(8μg/mL)抗TF IgG1包被，并且在室温(RT)下培育2小时。将板洗涤3次，并且用100μL 1％BSA的PBS溶液阻断。添加以1:3的比连续稀释的TGFRt15-16s21，并且在RT下培育60min。洗涤三次后，每孔施加50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL-21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或200ng/mL的生物素化抗TGFβRII抗体(BAF241，安迪生物公司)，并且在RT下培育60min。洗涤三次后，进行与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch以每孔100μL在RT下培育30min，接着进行4次洗涤，并且与100μL的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。数据如图69所示。如图70A-70C所示，TGFRt15-16s21中的IL-15、IL-21和TGFβRII结构域由对应的抗体检测。

使用抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-16s21的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-16s21加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图71所示，抗TF抗体亲和柱与TGFRt15-16s21结合，其含有组织因子作为融合伴侣。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

TGFRt15-16s21的还原SDS-PAGE

为了确定TGFRt15-16s21蛋白的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)分析用抗TF抗体亲和柱纯化的蛋白质样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证TGFRt15-16s21蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，根据制造商的说明书，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒进行去糖基化实验。图72显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下样品的还原SDS-PAGE分析的结果。结果显示，当在CHO细胞中表达时，TGFRt15-16s21蛋白被糖基化。去糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和48kDa)。泳道M装有10μL SeeBlue Plus2预染标准液。

生成包含IL-7/TF/IL-15和IL-7/IL-15RαSu融合蛋白的融合蛋白复合物(图73和图74)。人IL-7、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将IL-7序列连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链的N端编码区来制造构建体。以下显示包含IL-7连接到IL-15RαSu链的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7s构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGGGAGTGAAAGTTCTTTTTGCCCTTATTTGTATTGCTGTGGCCGAGGCC

(人IL7)

GATTGTGATATTGAAGGTAAAGATGGCAAACAATATGAGAGTGTTCTAATGGTCAGCATCGATCAATTATTGGACAGCATGAAAGAAATTGGTAGCAATTGCCTGAATAATGAATTTAACTTTTTTAAAAGACATATCTGTGATGCTAATAAGGAAGGTATGTTTTTATTCCGTGCTGCTCGCAAGTTGAGGCAATTTCTTAAAATGAATAGCACTGGTGATTTTGATCTCCACTTATTAAAAGTTTCAGAAGGCACAACAATACTGTTGAACTGCACTGGCCAGGTTAAAGGAAGAAAACCAGCTGCCCTGGGTGAAGCCCAACCAACAAAGAGTTTGGAAGAAAATAAATCTTTAAAGGAACAGAAAAAACTGAATGACTTGTGTTTCCTAAAGAGACTATTACAAGAGATAAAAACTTGTTGGAATAAAATTTTGATGGGCACTAAAGAACAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATCACGTGCCCTCCCCCCATGTCCGTGGAACACGCAGACATCTGGGTCAAGAGCTACAGCTTGTACTCCAGGGAGCGGTACATTTGTAACTCTGGTTTCAAGCGTAAAGCCGGCACGTCCAGCCTGACGGAGTGCGTGTTGAACAAGGCCACGAATGTCGCCCACTGGACAACCCCCAGTCTCAAATGCATTAGA

7s融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MGVKVLFALICIAVAEA

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

将抗IL-7/TF/IL-15和IL-7/IL-15RαSu构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌称为7t15-7s的可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-7/IL-15RαSu蛋白复合物，其可通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱纯化7t15-7s的洗脱色谱图

将从细胞培养物中收获的7t15-7s加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图75所示，抗TF抗体亲和柱与含有组织因子(TF)作为融合伴侣的7t15-7s结合。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

C57BL/6小鼠中7t15-7s的免疫刺激

7t15-7s是多链多肽(本文所描述的A型多链多肽)，包括作为人IL-7、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽(7t15)，和作为人IL-7和人IL-15受体α链的寿司结构域的可溶性融合物的第二多肽(7s)。

CHO细胞用IL7-TF-IL15(7t15)和IL7-IL15Ra寿司结构域(7s)载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化7t15-7s复合物。通过ELISA在复合物中展现IL-7、IL-15和组织因子(TF)组分，如图76所示。将人源化抗TF单克隆抗体(抗TF IgG1)用作捕获抗体来确定7t15-7s中的TF，并且将生物素化抗人IL-15抗体(安迪生物公司)和生物素化抗人IL-7抗体(安迪生物公司)用作检测抗体，分别检测7t15-7s中的IL-15和IL-7，后接过氧化物酶缀合的链霉亲和素(Jackson ImmunoResearch Lab)和ABTS底物(Surmodics IVD,Inc.)。

生成融合蛋白复合物，其包含TGFβ受体II/IL-15RαSu和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(图77和图78)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以生成TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

两个TGFβ受体II/TF/IL-15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链来构建构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFβ受体II/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(两个人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

两个TGFβ受体II/IL-15RαSu构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(两个人TGFβ受体II细胞外结构域)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFβR/IL-15RαSu和TGFβR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性TGFβR/TF/IL-15:TGFβR/IL-15RαSu蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs)，其可通过抗-TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

TGFRt15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估TGFRt15-TGFRs中TGFβRII的活性，分析TGFRt15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(英伟杰)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10

TGFRt15-TGFRs中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估TGFRt15-TGFRs中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞将TGFRt15-TGFRs的IL-15活性与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

使用ELISA用对应抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII结构域

将96孔板用R5(包被缓冲液)中的100μL(8μg/mL)抗TF IgG1包被，并且在室温(RT)下培育2小时。将板洗涤3次，并且用100μL 1％BSA的PBS溶液阻断。TGFRt15-TGFRs以1:3连续稀释添加，并且在RT下培育60min。洗涤3次后，将50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)或200ng/mL的生物素化抗TGFβRII抗体(BAF241，安迪生物公司)添加到孔中并且在RT下培育60min。接着将板洗涤3次，并且以每孔100μL添加0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch)，并且在RT下培育30min，接着洗涤4次并与100μL的ABTS在RT下培育2min。读取405nm处的吸光度。如图81A和81B所示，由个别抗体检测TGFRt15-TGFRs中的IL-15和TGFβRII结构域。

来自抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-TGFRs的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-TGFRs加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图82所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的TGFRt15-TGFRs结合。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

TGFRt15-TGFRs的分析尺寸排阻色谱(SEC)分析

将Superdex 200增加10/300GL凝胶过滤柱(来自通用电气医疗集团)连接到AKTAAvant系统(来自通用电气医疗集团)。用2个柱体积的PBS平衡所述柱。流速为0.7mL/min。使用毛细管环将含有PBS中TGFRt15-TGFRs的样品注入Superdex 200色谱柱，并且通过SEC分析。样品的SEC色谱图如图83所示。SEC结果显示TGFRt15-TGFRs的四个蛋白质峰。

TGFRt15-TGFRs的还原SDS-PAGE分析

为了确定TGFRt15-TGFRs蛋白的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的蛋白质样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证TGFRt15-TGFRs蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商的说明书进行去糖基化实验。图84显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态下样品的还原SDS-PAGE分析。结果显示，当在CHO细胞中表达时，TGFRt15-TGFRs蛋白被糖基化。去糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和39kDa)。泳道M上装有10ulSeeBlue Plus2预染标准液。

TGFRt15-TGFRs在C57BL/6小鼠中的免疫刺激活性

TGFRt15-TGFRs是多链多肽(本文所描述的A型多链多肽)，其包括作为两个TGFβRII结构域、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽，和作为两个TGFβRII结构域和人IL-15受体α链的寿司结构域的可溶性融合物的第二多肽。

将野生型C57BL/6小鼠用对照溶液或0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kgTGFRt15-TGFRs皮下处理。处理后四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。如图85A所示，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。此外，分别用1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量分别比用对照溶液处理的小鼠高。另外，评估在对照处理和TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

在野生型C57BL/6小鼠中评估TGFRt15-TGFRs分子的药代动力学。用3mg/kg剂量下的TGFRt15-TGFRs皮下处理小鼠。在各个时间点从尾静脉排出小鼠血液，并且制备血清。用ELISA测定小鼠血清中的TGFRt15-TGFRs浓度(捕获：抗人组织因子抗体；检测：生物素化抗人TGFβ受体抗体，后接过氧化物酶缀合的链霉亲和素和ABTS底物)。结果显示，TGFRt15-TGFRs在C57BL/6小鼠中的半衰期为12.66小时。

制备小鼠脾细胞以便评估随时间推移TGFRt15-TGFRs在小鼠中的免疫刺激活性。如图86A所示，用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量在处理后48小时增加，并且随时间持续增加。另外，评估在对照处理和TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

此外，在单剂量(3mg/kg)TGFRt15-TGFRs后从小鼠分离的脾细胞中，评估基于脾细胞Ki67表达的免疫细胞的动态增殖和基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。如图87A和87B所示，在用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，在处理后24小时NK细胞的Ki67和颗粒酶B的表达增加，并且CD8

还评估来自用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。用CellTrace紫罗兰标记小莫洛尼(Moloney)白血病细胞(Yac-1)，并且将其用作肿瘤靶细胞。在处理后的各个时间点，由TGFRt15-TGFRs(3mg/kg)处理的小鼠脾脏制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比＝10:1混合，并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、紫罗兰标记的Yac-1细胞来评定靶细胞活力。使用以下公式计算Yac-1肿瘤抑制的百分比：(1-[实验样品中的Yac-1活细胞数]/[不含脾细胞的样品中的Yac-1活细胞数])×100。如图88所示，来自TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性比对照小鼠脾细胞强。

响应于化疗和/或TGFRt15-TGFRs的肿瘤尺寸分析

将胰腺癌细胞(SW1990，

体外衰老B16F10黑色素瘤模型

接下来，评估激活的小鼠NK细胞在体外杀死衰老的B16F10黑色素瘤细胞。用CellTrace紫罗兰标记B16F10衰老细胞(B16F10-SNC)细胞，并且与不同E:T比的体外2t2激活的小鼠NK细胞(从用TGFRt15-TGFRs10 mg/kg注射4天的C57BL/6的小鼠脾脏中分离)一起培育16小时。将细胞用胰蛋白酶消化，洗涤并重悬在含有碘化丙啶(PI)溶液的完全培养基中。通过流式细胞术评定细胞毒性(图90)。

产生包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图91和图92)。具体来说，制造构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L的核酸和蛋白质序列。21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为7t15-21s137L)，其可通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱的7t15-21s137L的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-21s137L加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图93所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的7t15-21s137L结合。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。图94显示7t15-21s137L的分析SEC曲线。

生成包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物。具体来说，制造构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L(短版)的核酸和蛋白质序列。21s137L(短版)构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137配体短版)

GATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATC

21s137L(短版)构建体(包括信号肽序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137配体短版)

DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEI

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L(短版)和IL-7/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。CHO-K1细胞中两种构建体的共表达使得可形成和分泌可溶性IL-7/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为7t15-21s137L(短版))，其可通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

7t15-21s137L(短版)与CD137(4.1BB)的结合

在第1天，将96孔板用R5(包被缓冲液)中的100μL(2.5μg/mL)的GAH IgG Fc(G-102-C，安迪生物公司)或仅R5包被，并且在4℃下培育过夜。在第2天，将板洗涤三次，并且在37℃下用300μL PBS中的1％BSA阻断2小时。以100μL/孔添加10ng/mL的4.1BB/Fc(838-4B，安迪生物公司)，并且将其在RT下培育2小时。洗涤三次后，将7t15-21s137L或7t15-21s以1/3的比(从10nM开始)连续稀释，并且在4℃下培育过夜。在第3天，在3次洗涤后，将300ng/mL的生物素化抗hTF抗体(BAF2339，安迪生物公司)以每孔100μL添加，并且在RT下培育2小时。然后将板洗涤三次，并且与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmuneResearch)以每孔100μL培育30min，接着洗涤3次并与100μL的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图95所示，与7t15-21s相比，7t15-21s137L(短版)显示与4.1BB/Fc(蓝线)的显著相互作用。

用ELISA检测7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL-21和IL-7

将96孔板用R5(包被缓冲液)中的100μL(8μg/mL)抗TF IgG1包被，并且在室温下培育2小时。将板洗涤3次，并且用100μL的1％BSA的PBS溶液阻断。添加以1:3的比连续稀释的7t15-21s137L(短版)，并且在RT下培育60min。洗涤三次后，将50ng/mL的生物素化抗IL15抗体(BAM247，安迪生物公司)、500ng/mL的生物素化抗IL21抗体(13-7218-81，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL7抗体(506602，安迪生物公司)添加到孔中，并且在RT下培育60min。洗涤三次并且与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch)以每孔100μL在RT下培育进行30min后，接着进行四次洗涤，并且与100μL的ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。如图96A-96C所示，通过对应的抗体检测到7t15-21s137L(短版)中的IL-15、IL-21和IL-7结构域。

7t15-1s137L(短版)中的IL-15促进含IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖

为了评估7t15-21s137L(短版)中IL-15的活性，将7t15-21s137L(短版)与重组IL15在促进表达IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖的方面进行比较。将IL-15依赖性CTLL2细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

7t15-1s137L(短版)中的IL-21促进含IL21R的B9细胞增殖

为了评估7t15-21s137L(短版)的IL-21活性，将7t15-21s137L(短版)与重组IL-21在促进表达IL-21R的B9细胞增殖的方面进行比较。将含有IL-21R的B9细胞用RPMI-10％FBS洗涤5次，并且以1×10

生成包含TGFβ受体II/IL-15RαSu和IL-7/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图99和图100)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、IL-15和IL-7序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将IL-7序列连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。以下显示包含IL-7连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到由金唯智合成的IL-15RαSu链来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

TGFRs融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

7t15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响

为了评估7t15-TGFRs中TGFβR的活性，分析7t15-TGFRs对HEK-Blue TGFβ细胞中TGFβ1活性的影响。将HEK-Blue TGFβ细胞(英伟杰)用预温热的PBS洗涤两次，并且以5×10

用ELISA检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFβRII和IL-7

将96孔板用R5(包被缓冲液)中的100μL(8μg/mL)抗TF IgG1包被，并且在室温(RT)下培育2小时。将板洗涤三次，并且用100μL 1％BSA的PBS溶液阻断。添加7t15-TGFRs的连续稀释液(1:3的比)，并且在RT下培育60min。洗涤3次后，添加50ng/mL的生物素化抗IL-15抗体(BAM247，安迪生物公司)、200ng/mL的生物素化抗TGFbRII抗体(BAF241，安迪生物公司)或500ng/mL的生物素化抗IL-7抗体(506602，安迪生物公司)并在RT下培育60min。洗涤三次后，与0.25μg/mL的HRP-SA(Jackson ImmunoResearch)以每孔100μL在RT下培育进行30min，接着进行4次洗涤，并且与100μL ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取吸光度。数据如图101所示。如图102A-102C所示，通过对应的抗体检测7t15-TGFRs中的IL-15、TGFR和IL-7。

7t15-TGFRs中的IL-15促进含IL-2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞增殖

为了评估7t15-TGFRs中IL-15的活性，使用表达IL2Rβ和共同γ链的32Dβ细胞，将7t15-TGFRs与重组IL-15进行比较，并且评估其对促进细胞增殖的作用。将IL-15依赖性32Dβ细胞用IMDM-10％FBS洗涤5次，并且以2×10

使用抗TF抗体亲和柱的7t15-TGFRs的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的7t15-TGFRs加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图104所示，抗TF抗体亲和柱可结合含有TF作为7t15-TGFRs的融合伴侣的7t15-TGFRs。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTAAvant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

减少7t15-TGFRs的SDS-PAGE分析

为了确定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的7t15-TGFRs蛋白样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证7t15-TGFRs蛋白在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商的说明书进行去糖基化实验。图105显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样品的还原SDS-PAGE分析。这些结果显示所述蛋白在CHO细胞中表达时被糖基化。去糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(55kDa和39kDa)。泳道M上装有10ul SeeBluePlus2预染标准液。

7t15-TGFRs的表征

7t15-TGFRs是多链多肽(本文所描述的A型多链多肽)，其包括作为人IL-7、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽(7t15)，和作为单链的两个TGFβRII结构域和人IL-15受体α链寿司结构域的可溶性融合物的第二多肽(TGFRs)。

CHO细胞用7t15和TGFRs载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化7t15-TGFRs复合物。如图106所示，通过ELISA证明复合物中的IL-7、IL-15、TGFβ受体和组织因子(TF)组分。使用人源化抗TF单克隆抗体(anti-TF IgG1)作为捕获抗体来确定7t15-TGFRs中的TF，并且使用针对人IL-15抗体(安迪生物公司)、人IL-7(Biolegend)、抗-TGFβ受体(安迪生物公司)的生物素化抗体作为检测抗体，以分别确定7t15-TGFRs中的IL-7、IL-15和TGFβ受体。然后使用过氧化物酶缀合的链霉亲和素(Jackson ImmunoResearch Lab)和ABTS底物(Surmodics IVD，Inc.)以检测结合的生物素化抗体。通过ELISA分析结果(图106)。

C57BL/6小鼠中7t15-TGFRs的体内表征

为了确定体内7t15-TGFRs的免疫刺激活性，将C57BL/6小鼠用对照溶液(PBS)或7t15-TGFRs以0.3、1、3和10mg/kg进行皮下处理。使经过处理的小鼠安乐死。在处理后第4天收集小鼠脾脏并称重。制备单个脾细胞悬浮液，并且用荧光染料缀合的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1抗体染色，并且通过流式细胞术分析CD4

CD4+和CD8+T细胞的CD44表达

已知IL-15诱导T细胞上的CD44表达和记忆T细胞的发育。评定在7t15-TGFRs处理的小鼠中CD4

此外，还评估在小鼠单剂量处理后，7t15-TGFRs诱导的脾细胞基于Ki67表达的免疫细胞的动态增殖，和脾细胞基于颗粒酶B表达的细胞毒性潜力。用7t15-TGFRs以3mg/kg皮下处理C57BL/6小鼠。使经过处理的小鼠安乐死并制备脾细胞。制备的脾细胞用荧光染料缀合的抗CD4、抗CD8和抗–NK1.1(NK)抗体针对免疫细胞亚群进行染色，并且然后用抗Ki67抗体针对细胞增殖进行细胞内染色，并且用抗颗粒酶B抗体针对细胞毒性标记进行细胞内染色。通过流式细胞术分析对应免疫细胞亚群的Ki67和颗粒酶B的平均荧光强度(MFI)。如图109A和109B所示，在用7t15-TGFRs处理的小鼠的脾脏中，与PBS对照处理相比，CD8

另外，还评估小鼠脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将小鼠Yac-1细胞用CellTrace紫罗兰标记，并且用作肿瘤靶细胞。从7t15-TGFRs处理的小鼠制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比＝10:1在RPMI-10培养基中在具有或不具有100nM的7t15-TGFRs的情况下混合，并且在37℃下培育20小时。通过使用流式细胞术分析活的紫罗兰标记的Yac-1细胞来评定靶标Yac-1细胞抑制。使用以下公式计算Yac-1抑制的百分比：(1-实验样品中的Yac-1活细胞数/不含脾细胞的样品中的Yac-1活细胞数)×100。如图110所示，7t15-TGFRs处理的小鼠脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性强于对照小鼠脾细胞，并且在细胞毒性分析过程中添加7t15-TGFRs进一步增强脾细胞对Yac-1靶细胞的细胞毒性。

生成包含IL-21/IL-15RαSu/CD137L和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图111和图112)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将两个TGFβ受体II序列连接到G4S(3)接头以生成TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

以下显示21s137L的核酸和蛋白质序列。21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将IL-21/IL-15RαSu/CD137L和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:IL-21/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为TGFRt15-21s137L)，其可通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-21s137L的纯化洗脱色谱

将从细胞培养物中收获的TGFRt15-21s137L加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图113所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为TGFRt15-21s137L的融合伴侣的TGFRt15-21s137L结合。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

生成包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/IL-21和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图114和图115)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、IL-21和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以生成TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到由金唯智合成的IL-21的N端编码区来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接IL-21的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs21构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(人IL-21)

CAAGGTCAAGATCGCCACATGATTAGAATGCGTCAACTTATAGATATTGTTGATCAGCTGAAAAATTATGTGAATGACTTGGTCCCTGAATTTCTGCCAGCTCCAGAAGATGTAGAGACAAACTGTGAGTGGTCAGCTTTTTCCTGTTTTCAGAAGGCCCAACTAAAGTCAGCAAATACAGGAAACAATGAAAGGATAATCAATGTATCAATTAAAAAGCTGAAGAGGAAACCACCTTCCACAAATGCAGGGAGAAGACAGAAACACAGACTAACATGCCCTTCATGTGATTCTTATGAGAAAAAACCACCCAAAGAATTCCTAGAAAGATTCAAATCACTTCTCCAAAAGATGATTCATCAGCATCTGTCCTCTAGAACACACGGAAGTGAAGATTCC

TGFRs21融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/IL-21和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/IL-21蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs21)，其可通过抗TF抗体IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

使用抗TF抗体亲和柱的TGFRt15-TGFRs21的纯化洗脱色谱

从细胞培养物中收获的TGFRt15-TGFRs21被加载到用5个柱体积的PBS平衡的抗TF抗体亲和柱上。加载样品后，用5个柱体积的PBS洗涤色谱柱，接着用6个柱体积的0.1M乙酸(pH 2.9)洗脱。收集A280洗脱峰，并且然后用1M Tris碱中和到pH 7.5-8.0。然后使用具有30KDa分子量截断值的Amicon离心过滤器将中和的样品缓冲液交换到PBS中。如图116所示，抗TF抗体亲和柱与含有TF作为融合伴侣的TGFRt15-TGFRs21结合。将缓冲液交换的蛋白质样品存储在2-8℃下，以用于进一步生化分析和生物活性测试。每次洗脱后，使用6个柱体积的0.1M甘氨酸(pH 2.5)剥离抗TF抗体亲和柱。然后使用5个柱体积的PBS和7个柱体积的20％乙醇中和所述柱，以进行存储。抗TF抗体亲和柱连接到通用电气医疗集团AKTA Avant系统。除洗脱步骤外，所有步骤的流速均为4mL/min，洗脱步骤的流速为2mL/min。

TGFRt15-TGFRs21的还原SDS-PAGE分析

为了确定蛋白质的纯度和分子量，在还原条件下通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(4-12％NuPage Bis-Tris凝胶)电泳(SDS-PAGE)方法分析用抗TF抗体亲和柱纯化的TGFRt15-TGFRs21蛋白样品。电泳后，将凝胶用InstantBlue染色约30min，接着在纯化水中脱色过夜。

为了验证TGFRt15-TGFRs21蛋白质在CHO细胞中翻译后经历糖基化，使用来自新英格兰生物实验室的蛋白质去糖基化混合物II试剂盒和制造商的说明书进行去糖基化实验。图117显示未去糖基化(红色轮廓的泳道1)和去糖基化(黄色轮廓的泳道2)状态的样品的还原SDS-PAGE分析。清楚的是，当蛋白质在CHO细胞中表达时，所述蛋白质被糖基化。去糖基化后，纯化的样品在还原SDS凝胶中显示预期的分子量(69kDa和55kDa)。泳道M装有10ulSeeBlue Plus2预染标准液。

TGFRt15-TGFRs21在C57BL/6小鼠中的免疫刺激

TGFRt15-TGFRs21是多链多肽(本文所描述的A型多链多肽)，其包括作为单链的两个TGFβRII结构域、人组织因子219片段和人IL-15的可溶性融合物的第一多肽(TGFRt15)，和作为单链的两个TGFβRII结构域、人IL-15受体α链的寿司结构域和人IL-21的可溶性融合物的第二多肽(TGFRs21)。

CHO细胞用TGFRt15和TGFRs21载体共转染。从转染的CHO细胞培养上清液中纯化TGFRt15-TGFRs21复合物。如图118A-B所示，通过ELISA在复合物中证明TGFβ受体、IL-15、IL-21和组织因子(TF)组分。使用人源化抗TF单克隆抗体(抗TF IgG1)作为捕获抗体以确定TGFRt15-TGFRs21中的TF，使用生物素化抗人IL-15抗体(安迪生物公司)、生物素化抗人TGFβ受体抗体(安迪生物公司)和生物素化抗人IL-21抗体(安迪生物公司)作为检测抗体以分别确定TGFRt15-TGFRs21中的IL-15、TGFβ受体和IL-21。为了检测，使用过氧化物酶缀合的链霉亲和素(Jackson ImmunoResearch Lab)和ABTS。

用对照溶液(PBS)或TGFRt15-TGFRs21以3mg/kg皮下处理野生型C57BL/6小鼠。处理后四天，评估脾脏重量和脾脏中存在的各种免疫细胞类型的百分比。如图119A所示，评估在对照处理和TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中存在的CD4

如图119A所示，在用TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠的脾脏中，在单次TGFRt15-TGFRs21处理后第4天，CD8

另外，还评估小鼠脾细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将小鼠Yac-1细胞用CellTrace紫罗兰标记，并且用作肿瘤靶细胞。从TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠制备脾细胞，并且将其用作效应细胞。将靶细胞与效应细胞以E:T比＝10:1在RPMI-10培养基中在具有或不具有100nM的TGFRt15-TGFRs21的情况下混合，并且在37℃下培育24小时。通过使用流式细胞术分析活的紫罗兰标记的Yac-1细胞来评定靶标Yac-1细胞抑制。使用以下公式计算Yac-1抑制的百分比：(1-[实验样品中Yac-1活细胞数]/[不含脾细胞的样品中Yac-1活细胞数])×100。如图121所示，在细胞毒性分析期间，在存在TGFRt15-TGFRs21的情况下，TGFRt15-TGFRs21处理的小鼠脾细胞对Yac-1细胞的细胞毒性强于对照小鼠细胞(图121)。

生成包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/抗CD16scFv和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图122和图123)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以生成TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到由金唯智合成的抗CD16scFv序列来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接抗CD16scFv序列的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs16构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

(抗人CD16scFv)

TCCGAGCTGACCCAGGACCCTGCTGTGTCCGTGGCTCTGGGCCAGACCGTGAGGATCACCTGCCAGGGCGACTCCCTGAGGTCCTACTACGCCTCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGCTGGTGATCTACGGCAAGAACAACAGGCCCTCCGGCATCCCTGACAGGTTCTCCGGATCCTCCTCCGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCACAGGCGCTCAGGCCGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCAACTCCAGGGACTCCTCCGGCAACCATGTGGTGTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGACCGTGGGCCATGGCGGCGGCGGCTCCGGAGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGAGGATCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGAGGCCTGGAGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGTGCTGCCTCCGGCTTCACCTTCGACGACTACGGCATGTCCTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCGGCATCAACTGGAACGGCGGATCCACCGGCTACGCCGATTCCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCAGGTCCCTGCTGTTCGACTACTGGGGACAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCAGG

TGFRs16融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

(抗人CD16scFv)

SELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHVVFGGGTKLTVGHGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRSLLFDYWGQGTLVTVSR

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/抗CD16scFv和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/抗CD16scFv蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs16)，其通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

生成包含TGFβ受体II/IL-15RαSu/CD137L和TGFβ受体II/TF/IL-15融合蛋白的融合蛋白复合物(图124和图125)。人TGFβ受体II(Ile24-Asp159)、组织因子219、CD137L和IL-15序列从UniProt网站获得，并且这些序列的DNA由金唯智合成。具体来说，制造构建体，将两个TGFβ受体II序列与G4S(3)接头连接以生成TGFβ受体II的单链形式，并且然后直接连接到组织因子219的N端编码区，接着连接到IL-15的N端编码区。

以下显示包含两个TGFβ受体II连接到组织因子219的N端，后接IL-15的N端的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRt15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

TGFRt15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

还通过将两个TGFβ受体II直接连接到IL-15RαSu链，接着连接到(G4S)3接头和由金唯智合成的CD137L序列来制造构建体。以下显示包含TGFβ受体II连接到IL-15RαSu的N端，后接(G4S)3接头和CD137L序列的构建体的核酸和蛋白质序列。

TGFRs137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人TGFβ受体II片段)

ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCTCCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

TGFRs137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人TGFβ受体II)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

在一些情况下，将前导肽从完整多肽上裂解下来以生成可能可溶或分泌的成熟形式。

将TGFR/IL-15RαSu/CD137L和TGFR/TF/IL-15构建体克隆到修饰的逆转录病毒表达载体中，如前所述(Hughes MS,Yu YY,Dudley ME,Zheng Z,Robbins PF,Li Y等人.《衍生自具有明显抗肿瘤反应的患者的TCR基因的转移传送高度活性T细胞效应功能》.《人基因疗法》2005；16:457–72)，并且将表达载体转染到CHO-K1细胞中。两种构建体在CHO-K1细胞中的共表达使得可形成和分泌可溶性TGFR/TF/IL-15:TGFR/IL-15RαSu/CD137L蛋白复合物(称为TGFRt15-TGFRs137L)，其可通过抗TF IgG1亲和力和其它色谱方法纯化。

进行了一组实验，以评定用18t15-12s、18t15-12s16和7t15-21s刺激后淋巴细胞群体的表面表型的变化。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞。用Ficoll-PAQUEPlus(通用电气医疗集团)密度梯度培养基分离外周血淋巴细胞。对细胞进行计数并将其以0.2×10

进行一组实验以确定在用18t15-12s刺激后NK细胞中磷酸化STAT4和磷酸化STAT5水平的提高。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

进行一组实验来确定TGFRt15-TGFRs构建体对以西方饮食喂养的ApoE

进行一组实验以确定TGFRt15-TGFRs构建体对C57BL/6小鼠免疫刺激的作用。在这些实验中，用0.1、0.3、1、3和10mg/kg对照溶液(PBS)或TGFRt15-TGFRs皮下处理C57BL/6小鼠。在处理后4天使经过处理的小鼠安乐死。测量脾脏重量并制备脾细胞悬浮液。将脾细胞悬浮液用缀合的抗CD4、抗CD8和抗NK1.1(NK)抗体染色。另外针对增殖标记Ki67对细胞进行染色。图129A显示用TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量随TGFRt15-TGFRs剂量的增加而增加。另外，与仅用对照溶液处理的小鼠相比，用1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg TGFRt15-TGFRs处理的小鼠的脾脏重量更高。CD8

进行一组实验来确定TGFRt15-TGFRs构建体对以西方饮食喂养的ApoE

进行一组实验以确定用TGFRt15-TGFRs处理NK细胞是否增强NK细胞的细胞毒性。在这些实验中，将人道迪(Daudi)B淋巴瘤细胞用CellTrace紫罗兰(CTV)标记，并且用作肿瘤靶细胞。3mg/kg的TGFRt15-TGFRs皮下处理后4天，对C57BL/6雌性小鼠脾脏使用磁性细胞分选方法(美天旎生物技术(Miltenyi Biotec))，用NK1.1阳性选择分离小鼠NK效应细胞。用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)从衍生自人血白细胞层的外周血单核细胞中分离人NK效应细胞。将靶细胞(人道迪B淋巴瘤细胞)与效应细胞(小鼠NK效应细胞或人NK效应细胞)在存在50nM TGFRt15-TGFRs或不存在TGFRt15-TGFRs(对照)的情况下混合，并且在37℃下对于小鼠NK细胞培育44小时，且对于人NK细胞培育20小时。通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、CTV标记的细胞来评定靶细胞(道迪)活力。使用公式(1-实验样品中活肿瘤细胞数/不含NK细胞的样品中的活肿瘤细胞数)×100计算道迪抑制的百分比。图131显示相比于不存在TGFRt15-TGFRs激活的情况，用TGFRt15-TGFRs激活NK细胞后，小鼠(图131A)和人(图131B)NK细胞对道迪B细胞的细胞毒性显著增强。

进行一组实验以确定用TGFRt15-TGFRs处理后的小鼠和人NK细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在这些实验中，将人道迪B淋巴瘤细胞用CellTrace紫罗兰(CTV)标记，并且用作肿瘤靶细胞。3mg/kg的TGFRt15-TGFRs皮下处理后4天，对C57BL/6雌性小鼠脾脏使用磁性细胞分选方法(美天旎生物技术)，用NK1.1阳性选择分离小鼠NK效应细胞。用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)从衍生自人血白细胞层的外周血单核细胞中分离人NK效应细胞。将靶细胞(道迪B细胞)与效应细胞(小鼠NK效应细胞或人NK效应细胞)在存在抗CD20抗体(10nM利妥昔单抗(Rituximab)，基因泰克(Genentech))并且存在50nM TGFRt15-TGFRs或不存在TGFRt15-TGFRs(对照)的情况下混合，并且在37℃下对于小鼠NK细胞培育44小时，且对于人NK细胞培育20小时。道迪B细胞表达抗CD20抗体的CD20靶标。培育后通过使用流式细胞术分析碘化丙啶阳性、CTV标记的靶细胞来评定靶细胞活力。使用公式(1-实验样品中活肿瘤细胞数/不含NK细胞的样品中的活肿瘤细胞数)×100计算道迪抑制的百分比。图132显示相比于不存在TGFRt15-TGFRs激活的情况，用TGFRt15-TGFRs激活NK细胞后，小鼠NK细胞(图132A)和人NK细胞(图132B)对道迪B细胞的ADCC活性更强。

进行一组实验，以评定在黑色素瘤小鼠模型中TGFRt15-TGFRs加抗TRP1抗体(TA99)与化疗组合的抗肿瘤活性。在这些实验中，将C57BL/6小鼠用0.5×10

为了评定B16F10肿瘤模型中的免疫细胞亚群，进行外周血分析。在这些实验中，将C57BL/6小鼠用B16F10细胞注射，并且用DTX、DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99或盐水处理。对于DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99组免疫疗法后第2、5、8天，并且对于DTX和盐水组肿瘤注射后第11天，从荷B16F10瘤小鼠的下颌下静脉采血。在ACK溶解缓冲液中溶解RBC，并且将淋巴细胞洗涤并用抗NK1.1、抗CD8和抗CD4抗体染色。通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图133C-133E显示与盐水和DTX处理组相比，DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99处理诱导肿瘤中NK细胞和CD8

在第17天，使用Trizol从用盐水、DTX或DTX+TGFRt15-TGFRs+TA99处理的小鼠的肿瘤中提取总RNA。使用QuantiTect逆转录试剂盒(凯杰(Qiagen))将总RNA(1μg)用于cDNA合成。使用FAM标记的衰老细胞标记(F)p21(G)DPP4和(H)IL6预先设计的引物，用CFX96检测系统(伯乐(Bio-Rad))进行实时PCR。将管家基因18S核糖体RNA用作内部对照，以将表达水平的变异性归一化。相对于18S rRNA，每个靶标mRNA的表达基于Ct计算为2

进行一组实验以研究通过TGFRt15-TGFRs改善ApoE

进行一组实验，以评定用18t15-12s刺激后NK细胞分化成细胞因子诱导的记忆样NK细胞(CIMK-NK细胞)。在这些实验中，从血库获得新鲜的人白细胞，并且用RosetteSep/人NK细胞试剂(干细胞技术有限公司)分离CD56

为了评定第7天NK细胞记忆表型的变化，将细胞用针对细胞表面CD56、CD16、CD27、CD62L、NKp30和NKp44的抗体染色(BioLegend)。表面染色后，将细胞在含0.5％BSA(EMD密理博)和0.001％叠氮化钠(西格玛)的FACS缓冲液(1×PBS(Hyclone))中洗涤(室温下1500RPM5分钟)。两次洗涤后，通过流式细胞术(Celesta-BD Bioscience)分析细胞。图135显示将NK细胞与18t15-12s一起培育引起表达CD27、CD62L和NKp44的CD16

进行一组实验以评定用TGFRt15-TGFRs处理后CD44记忆T细胞的上调。在这些实验中，将C57BL/6小鼠用TGFRt15-TGFR皮下注射。使经过处理的小鼠安乐死并在处理后4天(TGFRt15-TGFRs)制备单个脾细胞悬浮液。将制备的脾细胞用荧光染料缀合的抗CD4、抗CD8和抗CD44抗体染色，并且通过流式细胞术分析CD4

在用单链或多链嵌合多肽处理后，进行一组实验以评定凝血。为了引发凝血级联路径，组织因子(TF)与因子VIIa(FVIIa)结合以形成TF/FVIIa复合物。然后，TF/FVIIa复合物结合因子X(FX)，并且将FX转化为FXa。

因子VIIa(FVIIa)活性分析

一种测量凝血的分析涉及测量因子VIIa(FVIIa)活性。这类分析需要组织因子和钙的存在。TF/FVIIa复合物活性可通过小的底物或天然蛋白质底物，例如因子X(FX)进行测量。当FX用作底物时，磷脂也是TF/FVIIa活性所需的。在这一分析中，用FVIIa特异性发色底物S-2288(Diapharma，俄亥俄州西切斯特(West Chester,OH))确定FVIIa活性。S-2288底物的颜色变化可通过分光光度法测量，并且与FVIIa(例如，TF/FVIIa复合物)的蛋白水解活性成比例。

在这些实验中，比较以下组的FVIIa活性：组织因子结构域的219个氨基酸的胞外域(TF

为了评定FVIIa的活性，将FVIIa和TF

表1.FVIIa活性

WT：野生型TF

表2.FVIIa活性

WT：野生型TF

因子X(FX)激活分析

测量凝血的另一分析涉及测量因子X(FX)的激活。简单来说，在钙和磷脂的存在下，TF/VIIa将凝血因子X(FX)激活为因子Xa(FXa)。与不含跨膜结构域的TF

在这些实验中，将多链嵌合多肽(18t15-12s、小鼠(m)21t15、21t15-TGFRs和21t15-7s)的FX激活与阳性对照(因诺维)或TF

凝血酶原时间测试

测量凝血的第三种分析是凝血酶原时间(PT)测试，其测量凝血活性。此处，PT测试使用市售正常人血浆(Ci-Trol凝血对照，I级)进行。对于标准PT测试，在钙的存在下，通过添加脂化重组人TF

如图138所示，将不同量的因诺维(例如，用纯化水重构，等效于10nM脂化重组人TF

在另一实验中，对TF

还进行研究以评估在存在携带多链嵌合多肽(32Dβ或人PBMC)的细胞因子组分的受体的其它细胞存在下，培育多链嵌合多肽是否会影响PT分析中的凝血时间。为了检查表达IL-15受体的细胞(32Dβ细胞)或表达IL-15和IL-21受体的细胞(PBMC)是否会结合含IL-15的多链嵌合多肽以模拟天然TF作为细胞FVIIa受体，将含TF

7t15构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:107)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL7)

GATTGCGACATCGAGGGCAAGGACGGCAAGCAGTACGAGAGCGTGCTGATGGTGTCCATCGACCAGCTGCTGGACAGCATGAAGGAGATCGGCTCCAACTGCCTCAACAACGAGTTCAACTTCTTCAAGCGGCACATCTGCGACGCCAACAAGGAGGGCATGTTCCTGTTCAGGGCCGCCAGGAAACTGCGGCAGTTCCTGAAGATGAACTCCACCGGCGACTTCGACCTGCACCTGCTGAAGGTGTCCGAGGGCACCACCATCCTGCTGAACTGCACCGGACAGGTGAAGGGCCGGAAACCTGCTGCTCTGGGAGAGGCCCAACCCACCAAGAGCCTGGAGGAGAACAAGTCCCTGAAGGAGCAGAAGAAGCTGAACGACCTGTGCTTCCTGAAGAGGCTGCTGCAGGAGATCAAGACCTGCTGGAACAAGATCCTGATGGGCACCAAGGAGCAT

(人组织因子219)

AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG

(人IL-15)

AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC

7t15融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:106)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL7)

DCDIEGKDGKQYESVLMVSIDQLLDSMKEIGSNCLNNEFNFFKRHICDANKEGMFLFRAARKLRQFLKMNSTGDFDLHLLKVSEGTTILLNCTGQVKGRKPAALGEAQPTKSLEENKSLKEQKKLNDLCFLKRLLQEIKTCWNKILMGTKEH

(人组织因子219)

SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE

(人IL-15)

NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIH

DTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS

21s137L构建体(包括信号肽序列)的核酸序列如下(SEQ ID NO:225)：

(信号肽)

ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC

(人IL-21)

CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC

(人IL-15Rα寿司结构域)

ATTACATGCCCCCCTCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTATAGCCTCTACAGCCGGGAGAGGTATATCTGTAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTCACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCTACCAACGTGGCTCACTGGACAACACCCTCTTTAAAGTGCATCCGG

((G4S)3接头)

GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT

(人CD137L)

CGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA

21s137L融合蛋白(包括前导序列)的氨基酸序列如下(SEQ ID NO:226)：

(信号肽)

MKWVTFISLLFLFSSAYS

(人IL-21)

QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS

(人IL-15Rα寿司结构域)

ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPS

LKCIR

((G4S)3接头)

GGGGSGGGGSGGGGS

(人CD137L)

REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE

进行以下实验以评估7t15-21s137L中的CD137L部分是否完整以结合到CD137(4.1BB)。在第1天，将96孔板用的100μL(2.5μg/mL)R5(包被缓冲液)中GAH IgG Fc(G-102-C，安迪生物公司)包被过夜。在第2天，将板洗涤三次并用300μL PBS中的1％BSA 37℃下阻断2小时。以100μL的量添加10ng/mL的4.1BB/Fc(838-4B，安迪生物公司)在RT下培育2小时。洗涤三次后，以10nM开始添加7t15-21s137L(长版)或7t15-21s137Ls(短版)，或以1/3稀释度从180ng/mL开始添加重组人4.1BBL，接着在4℃下培育过夜。在第3天，将板洗涤三次，并且以每孔100μL施加500ng/mL的生物素化山羊抗人4.1BBL(BAF2295，安迪生物公司)，接着在RT下培育2小时。将板洗涤三次，并且与0.25μg/mL HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL培育30min。然后将板洗涤三次，并且与100μL ABTS在RT下培育2min。在405nm处读取结果。如图142所示，与重组人4.1BB配体(rhCD137L，浅灰色星)相比，7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)均可与4.1BB/Fc(深色菱形和灰色方块)相互作用。与7t15-21s137L(短版)(灰色方块)相比，7t15-21s137L(长版)(深色菱形)与4.1BB/Fc更好地相互作用。

进行以下实验以评估7t15-21s137L(长版)中的组分IL7、IL21、IL15和4.1BBL是否完整，以使用ELISA通过个别抗体检测。将96孔板用100μL(4μg/mL)R5(包被缓冲液)中的抗TF(人IgG1)包被，并且在RT下培育2小时。将板洗涤三次，并且用100μL PBS中的1％BSA阻断。以10nM起始并且以1/3稀释度添加纯化的7t15-21s137L(长版)，接着在RT下培育60min。将板洗涤三次，并且每孔添加500ng/mL生物素化抗IL7(506602，安迪生物公司)、500ng/mL生物化抗IL21(13-7218-81，安迪生物公司)、50ng/mL生物素化抗IL15(BAM247，安迪生物公司)或500ng/ml生物素化山羊抗人4.1BBL(BAF2295，安迪生物公司)并在室温下培育60min。将板洗涤三次并在RT下与0.25μg/mL的HRP-SA(杰克逊免疫研究)以每孔100μL培育30min。将板洗涤四次，并且与100μL ABTS在室温下培育2min。在405nm处读取吸光度结果。如图143A-143D所示，通过个别抗体检测到7t15-21s137L(长版)中包括IL7、IL21、IL15和4.1BBL的组分。

进行以下实验以评估IL15在7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)中的活性。将7t15-21s137L(长版)和7t15-21s137L(短版)促进表达IL2Rαβγ的CTLL2细胞增殖的能力与重组IL15进行比较。将IL15依赖性CTLL2细胞用IMDM-10％FBS洗涤五次，并且以2×10

其它实施例

应理解，虽然已结合其具体描述对本发明进行了描述，但前面的描述旨在说明而非限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其它方面、优点以及修改均处于以下权利要求书的范围内。

示例性实施例

实施例A1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合。

实施例A2.根据实施例A1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例A3.根据实施例A1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例A4.根据实施例A1至A3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例A5.根据实施例A1至A3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例A6.根据实施例A1至A5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例A7.根据实施例A1至A5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例A8.根据实施例A1至A7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例A9.根据实施例A8所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例A10.根据实施例A9所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例A11.根据实施例A1至A7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例A12.根据实施例A1至A11中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例A13.根据实施例A12所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例A14.根据实施例A12或A13所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例A15.根据实施例A1至A14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例A16.根据实施例A1至A14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例A17.根据实施例A16所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。

实施例A18.根据实施例A1-A14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例A19.根据实施例A18所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例A20.根据实施例A1至A19中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例A21.根据实施例A20所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个之间的接头序列，和/或在所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例A22.根据实施例A1至A19中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽在所述第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例A23.根据实施例A22所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例A24.根据实施例A22所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例A25.根据实施例A22所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个直接邻接所述第一靶标结合结构域。

实施例A26.根据实施例A22所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例A27.根据实施例A22所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于所述第一嵌合多肽的N和/或C端，并且所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于所述第一嵌合多肽中所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例A28.根据实施例A27所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于N端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例A29.根据实施例A27所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例A30.根据实施例A27所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于C端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例A31.根据实施例A27所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例A32.根据实施例A27所述的多链嵌合多肽，其中位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个，直接邻接所述可溶性组织因子结构域和/或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例A33.根据实施例A27所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间，和/或(ii)所述一对亲和结构域中的所述第一结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例A34.根据实施例A1至A33中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽在所述第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例A35.根据实施例A34所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第二结构域。

实施例A36.根据实施例A34所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第二结构域之间的接头序列。

实施例A37.根据实施例A34所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述第二靶标结合结构域。

实施例A38.根据实施例A34所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例A39.根据实施例A20至A38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例A40.根据实施例A39所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例A41.根据实施例A40所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例A42.根据实施例A39所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例A43.根据实施例A42所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例A44.根据实施例A43所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例A45.根据实施例A20至A38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例A46.根据实施例A20至A45中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例A47.根据实施例A46所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例A48.根据实施例A47所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv。

实施例A49.根据实施例A20至A48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例A50.根据实施例A20至A48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例A51.根据实施例A50所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。

实施例A52.根据实施例A20至A48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例A53.根据实施例A52所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例A54.根据实施例A1至A53中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例A55.根据实施例A1至A53中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含在所述第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例A56.根据实施例A1至A55中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例A57.根据实施例A56所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例A58.根据实施例A57所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例A59.根据实施例A58所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例A60.根据实施例A56至A59中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一种或多种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例A61.根据实施例A60所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例A62.根据实施例A1至A61中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例A63.根据实施例A1至A62中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例A64.根据实施例A1至A63中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的凝血。

实施例A65.根据实施例A1至A64中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例A66.根据实施例A65所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例A67.根据实施例A65或A66所述的多链嵌合多肽，其中所述人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。

实施例A68.根据实施例A1至A64中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例A69.根据实施例A1至A68中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例A70.一种组合物，其包含根据实施例A1至A69所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例A71.根据实施例A70所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。

实施例A72.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例A70或A71所述的组合物。

实施例A73.一种刺激免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例A1至A69所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例A70或A71所述的组合物接触。

实施例A74.根据实施例A73所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例A75.根据实施例A74所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例A76.根据实施例A75所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例A77.根据实施例A73所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例A78.根据实施例A73至A77中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

实施例A79.根据实施例A73至A78中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例A80.根据实施例A73至A78中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例A81.根据实施例A73至A80中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例A82.根据实施例A81所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例A83.根据实施例A82所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例A84.根据实施例A81所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例A85.根据实施例A84所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例A86.根据实施例A81所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例A87.根据实施例A86所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例A88.一种诱导或增加免疫细胞增殖的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例A1至A69所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例A70或A71所述的组合物接触。

实施例A89.根据实施例A88所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例A90.根据实施例A89所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例A91.根据实施例A90所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例A92.根据实施例A88所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例A93.根据实施例A88至A92中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

实施例A94.根据实施例A88至A93中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例A95.根据实施例A88至A93中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例A96.根据实施例A88至A95中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例A97.根据实施例A96所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例A98.根据实施例A97所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例A99.根据实施例A96所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例A100.根据实施例A99所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例A101.根据实施例A96所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例A102.根据实施例A96所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例A103.一种诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例A1至A69所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例A70或A71所述的组合物接触。

实施例A104.根据实施例A103所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例A105.根据实施例A104所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例A106.根据实施例A105所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例A107.根据实施例A103所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例A108.根据实施例A103至A107中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例A109.根据实施例A103至A108中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例A110.根据实施例A103至A108中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例A111.根据实施例A103至A110中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例A112.根据实施例A111所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例A113.根据实施例A112所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例A114.根据实施例A111所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例A115.根据实施例A114所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例A116.根据实施例A111所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例A117.根据实施例A116所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例A118.一种在有需要的受试者中杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例A1至A69所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例A70或A71所述的组合物。

实施例A119.根据实施例A118所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例A120.根据实施例A119所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例A121.根据实施例A118所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例A122.根据实施例A121所述的方法，其中所述与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例A123.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例A1至A69所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例A70或A71所述的组合物。

实施例A124.根据实施例A123所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例A125.根据实施例A124所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例A126.根据实施例A123所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例A127.根据实施例A126所述的方法，其中所述与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例A128.根据实施例A123所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例A129.根据实施例A128所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例A130.核酸，其编码根据实施例A1至A69中任一项所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例A131.一种载体，其包含根据实施例A130所述的核酸。

实施例A132.根据实施例A131所述的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例A133.一种细胞，其包含根据实施例A130所述的核酸或根据实施例A131或A132所述的载体。

实施例A134.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生所述多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例A133所述的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例A135.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例A134所述的方法产生。

实施例A136.根据实施例A56所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少80％相同的序列。

实施例A137.根据实施例A136所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少90％相同的序列。

实施例A138.根据实施例A137所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少95％相同的序列。

实施例A139.根据实施例A138所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3100％相同的序列。

实施例A140.根据实施例A56所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少80％相同的序列。

实施例A141.根据实施例A140所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少90％相同的序列。

实施例A142.根据实施例A141所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少95％相同的序列。

实施例A143.根据实施例A142所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4100％相同的序列。

实施例A144.根据实施例56所述的多链嵌合多肽，其中人可溶性组织因子结构域不引发凝结。

实施例A145.根据权利要求1至59中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域包含来自野生型可溶性人组织因子的序列或由来自野生型可溶性人组织因子的序列组成。

B.示例性实施例

实施例B1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合；

所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。

实施例B2.根据实施例B1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例B3.根据实施例B1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例B4.根据实施例B1至B3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例B5.根据实施例B1至B3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例B6.根据实施例B1至B5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例B7.根据实施例B1至B5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例B8.根据实施例B1至B7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例B9.根据实施例B8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例B10.根据实施例B9所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例B11.根据实施例B10所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例B12.根据实施例B8至B11中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一种或多种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例B13.根据实施例B12所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例B14.根据实施例B1至B13中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例B15.根据实施例B1至B14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例B16.根据实施例B1至B15中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物中的凝结。

实施例B17.根据实施例B1至B16中任一项的所述多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例B18.根据实施例B1至B17中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含在所述第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例B19.根据实施例B1至18中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例B20.根据实施例B19所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ IDNO:31。

实施例B21.根据实施例B20所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ IDNO:31。

实施例B22.根据实施例B1至B21中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例B23.根据实施例B22所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例B24.根据实施例B22所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少80％相同的序列。

实施例B25.根据实施例B24所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少90％相同的序列。

实施例B26.根据实施例B25所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少95％相同的序列。

实施例B27.根据实施例B26所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQID NO:14。

实施例B28.根据实施例B22至B27中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例B29.根据实施例B28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少80％相同的序列。

实施例B30.根据实施例B29所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少90％相同的序列。

实施例B31.根据实施例B30所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少95％相同的序列。

实施例B32.根据实施例B31所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含SEQ ID NO:28。

实施例B33.根据实施例B28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例B34.根据实施例B1至B21中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例B35.根据实施例B1至B34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是激动性抗原结合结构域。

实施例B36.根据实施例B35所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。

实施例B37.根据实施例B35或B36所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例B38.根据实施例B1至B34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-15或可溶性IL-18。

实施例B39.根据实施例B38所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-15或可溶性IL-18。

实施例B40.根据实施例B1至B39中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-18的受体或IL-12的受体。

实施例B41.根据实施例B40所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例B42.根据实施例B41所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例B43.根据实施例B1至B39中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体。

实施例B44.根据实施例B1至B39中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到IL-18的受体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-12的受体。

实施例B45.根据实施例B44所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域包含可溶性IL-18。

实施例B46.根据实施例B45所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-18是可溶性人IL-18。

实施例B47.根据实施例B46所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-18包含与SEQ ID NO:16至少80％相同的序列。

实施例B48.根据实施例B47所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-18包含与SEQ ID NO:16至少90％相同的序列。

实施例B49.根据实施例B48所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-18包含与SEQ ID NO:16至少95％相同的序列。

实施例B50.根据实施例B49所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-18包含SEQ ID NO:16的序列。

实施例B51.根据实施例B44至B50中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性IL-12。

实施例B52.根据实施例B51所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-18是可溶性人IL-12。

实施例B53.根据实施例B52所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-15包含可溶性人IL-12β(p40)的序列和可溶性人IL-12α(p35)的序列。

实施例B54.根据实施例B53所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-15进一步包含在所述可溶性IL-12β(p40)的序列与所述可溶性人IL-12α(p35)的序列之间的接头序列。

实施例B55.根据实施例B54所述的多链嵌合多肽，其中所述接头序列包含SEQ IDNO:7。

实施例B56.根据实施例B53至B55中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:66至少80％相同的序列。

实施例B57.根据实施例B56所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:66至少90％相同的序列。

实施例B58.根据实施例B57所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12β(p40)的序列包含与SEQ ID NO:66至少95％相同的序列。

实施例B59.根据实施例B58所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12β(p40)的序列包含SEQ ID NO:66。

实施例B60.根据实施例B53至B59中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:68至少80％相同的序列。

实施例B61.根据实施例B60所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:68至少90％相同的序列。

实施例B62.根据实施例B61所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12α(p35)的序列包含与SEQ ID NO:68至少95％相同的序列。

实施例B63.根据实施例B62所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-12α(p35)的序列包含SEQ ID NO:68。

实施例B64.根据实施例B1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:70至少80％相同的序列。

实施例B65.根据实施例B64所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:70至少90％相同的序列。

实施例B66.根据实施例B65所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:70至少95％相同的序列。

实施例B67.根据实施例B66所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:70。

实施例B68.根据实施例B67所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:72。

实施例B69.根据实施例B1和B64至B68中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:74至少80％相同的序列。

实施例B70.根据实施例B69所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:74至少90％相同的序列。

实施例B71.根据实施例B70所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:74至少95％相同的序列。

实施例B72.根据实施例B71所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:74。

实施例B73.根据实施例B72所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:74。

实施例B74.根据实施例B1至B63中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例B75.根据实施例B74所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个之间的接头序列，和/或在所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例B76.根据实施例B1至B63中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽在所述第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例B77.根据实施例B76所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例B78.根据实施例B76所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例B79.根据实施例B76所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个直接邻接所述第一靶标结合结构域。

实施例B80.根据实施例B76所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例B81.根据实施例B76所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于所述第一嵌合多肽的N和/或C端，并且所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于所述第一嵌合多肽中所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例B82.根据实施例B81所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于N端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例B83.根据实施例B81所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例B84.根据实施例B81所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于C端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例B85.根据实施例B81所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例B86.根据实施例B81所述的多链嵌合多肽，其中位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个，直接邻接所述可溶性组织因子结构域和/或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例B87.根据实施例B81所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间，和/或(ii)所述一对亲和结构域中的所述第一结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例B88.根据实施例B1至B63和B74至B87中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽在所述第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例B89.根据实施例B88所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第二结构域。

实施例B90.根据实施例B88所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第二结构域之间的接头序列。

实施例B91.根据实施例B88所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述第二靶标结合结构域。

实施例B92.根据实施例B88所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例B93.根据实施例B74至B92中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例B94.根据实施例B93所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例B95.根据实施例B94所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例B96.根据实施例B74至B92中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例B97.根据实施例B74至B96中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKP30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例B98.根据实施例B74至B96中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例B99.根据实施例B98所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。

实施例B100.根据实施例B74至B96中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例B101.根据实施例B100所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122或可溶性CD28。

实施例B102.一种组合物，其包含根据实施例B1至B101所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例B103.根据实施例B102所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。

实施例B104.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例B102或B103所述的组合物。

实施例B105.一种刺激免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例B1至B101所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例B102或B103所述的组合物接触。

实施例B106.根据实施例B105所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例B107.根据实施例B106所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例B108.根据实施例B107所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例B109.根据实施例B105所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例B110.根据实施例B105至B109中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

实施例B111.根据实施例B105至B110中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例B112.根据实施例B105至B110中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例B113.根据实施例B105至B112中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例B114.根据实施例B113所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例B115.根据实施例B114所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例B116.根据实施例B113所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例B117.根据实施例B116所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例B118.根据实施例B113所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例B119.根据实施例B118所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例B120.一种诱导或增加免疫细胞增殖的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例B1至B101所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例B102或B103所述的组合物接触。

实施例B121.根据实施例B120所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例B122.根据实施例B121所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例B123.根据实施例B122所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例B124.根据实施例B120所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例B125.根据实施例B120至B124中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例B126.根据实施例B120至B125中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例B127.根据实施例B120至B125中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例B128.根据实施例B120至B127中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例B129.根据实施例B128所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例B130.根据实施例B129所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例B131.根据实施例B128所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例B132.根据实施例B131所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例B133.根据实施例B128所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例B134.根据实施例B128所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例B135.一种诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例B1至B101所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例B102或B103所述的组合物接触。

实施例B136.根据实施例B135所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例B137.根据实施例B136所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例B138.根据实施例B137所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例B139.根据实施例B135所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例B140.根据实施例B135至B139中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例B141.根据实施例B135至B140中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例B142.根据实施例B135至B140中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例B143.根据实施例B135至B142中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例B144.根据实施例B143所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例B145.根据实施例B144所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例B146.根据实施例B143所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例B147.根据实施例B146所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例B148.根据实施例B143所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例B149.根据实施例B148所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例B150.一种在有需要的受试者中杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例B1至B101所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例B102或B103所述的组合物。

实施例B151.根据实施例B150所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例B152.根据实施例B151所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例B153.根据实施例B150所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例B154.根据实施例B153所述的方法，其中所述与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例B155.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例B1至B101所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例B102或B103所述的组合物。

实施例B156.根据实施例B155所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症或感染性疾病。

实施例B157.根据实施例B156所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例B158.根据实施例B155所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例B159.根据实施例B158所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例B160.根据实施例B155所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例B161.根据实施例B160所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例B162.核酸，其编码根据实施例B1至B101中任一项所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例B163.一种载体，其包含根据实施例B162所述的核酸。

实施例B164.根据实施例B163所述的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例B165.一种细胞，其包含根据实施例B162所述的核酸或根据实施例B163或B164所述的载体。

实施例B166.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生所述多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例B165所述的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例B167.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例B166所述的方法产生。

实施例B168.根据实施例B8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少80％相同的序列。

实施例B169.根据实施例B168所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少90％相同的序列。

实施例B170.根据实施例B169所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少95％相同的序列。

实施例B171.根据实施例B170所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3100％相同的序列。

实施例B172.根据实施例B8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少80％相同的序列。

实施例B173.根据实施例B172所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少90％相同的序列。

实施例B174.根据实施例B173所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少95％相同的序列。

实施例B175.根据实施例B174所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4100％相同的序列。

C.示例性实施例

实施例C1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合；和

所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或肿瘤生长因子受体βII(TGFβRII)的配体。

实施例C2.根据实施例C1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C3.根据实施例C1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例C4.根据实施例C1至C3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C5.根据实施例C1至C3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例C6.根据实施例C1至C5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例C7.根据实施例C1至C5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例C8.根据实施例C1至C7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例C9.根据实施例C8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例C10.根据实施例C9所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例C11.根据实施例C10所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例C12.根据实施例C8至C11中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一种或多种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例C13.根据实施例C12所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例C14.根据实施例C1至C13中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例C15.根据实施例C1至C14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例C16.根据实施例C1至C15中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的凝血。

实施例C17.根据实施例C1至C16中任一项的所述多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例C18.根据实施例C1至C17中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含在所述第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例C19.根据实施例C1至C18中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例C20.根据实施例C19所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ IDNO:31。

实施例C21.根据实施例C20所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ IDNO:31。

实施例C22.根据实施例C1至C21中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例C23.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例C24.根据实施例C22所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少80％相同的序列。

实施例C25.根据实施例C24所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少90％相同的序列。

实施例C26.根据实施例C25所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少95％相同的序列。

实施例C27.根据实施例C26所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQID NO:14。

实施例C28.根据实施例C22至C27中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例C29.根据实施例C28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少80％相同的序列。

实施例C30.根据实施例C29所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少90％相同的序列。

实施例C31.根据实施例C30所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少95％相同的序列。

实施例C32.根据实施例C31所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含SEQ ID NO:28。

实施例C33.根据实施例C28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例C34.根据实施例C1至C21中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例C35.根据实施例C1至C34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例C36.根据实施例C35所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域是抗原结合结构域。

实施例C37.根据实施例C35或C36所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例C38.根据实施例C1至C34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21或可溶性TGFβRII。

实施例C39.根据实施例C1至C38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-21的受体或TGFβRII的配体。

实施例C40.根据实施例C39所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例C41.根据实施例C40所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例C42.根据实施例C1至C38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到TGFβRII的配体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例C43.根据实施例C1至C38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到TGFβRII的配体。

实施例C44.根据实施例C43所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例C45.根据实施例C44所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例C46.根据实施例C45所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含与SEQ ID NO:78至少80％相同的序列。

实施例C47.根据实施例C46所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含与SEQ ID NO:78至少90％相同的序列。

实施例C48.根据实施例C47所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含与SEQ ID NO:78至少95％相同的序列。

实施例C49.根据实施例C48所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含SEQ ID NO:78的序列。

实施例C50.根据实施例C43至C49中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性TGFβRII。

实施例C51.根据实施例C50所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性TGFβRII是可溶性人TGFβRII。

实施例C52.根据实施例C51所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人TGFβRII包含可溶性人TGFβRII的第一序列和可溶性人TGFβRII的第二序列。

实施例C53.根据实施例C52所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人TGFβRII进一步包含在可溶性人TGFβRII的所述第一序列与可溶性人TGFβRII的所述第二序列之间的接头序列。

实施例C54.根据实施例C53所述的多链嵌合多肽，其中所述接头序列包含SEQ IDNO:7。

实施例C55.根据实施例C52至C54中任一项所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第一序列包含与SEQ ID NO:80至少80％相同的序列。

实施例C56.根据实施例C55所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第一序列包含与SEQ ID NO:80至少90％相同的序列。

实施例C57.根据实施例C56所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第一序列包含与SEQ ID NO:80至少95％相同的序列。

实施例C58.根据实施例C57所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第一序列包含SEQ ID NO:80。

实施例C59.根据实施例C52至C58中任一项所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第二序列包含与SEQ ID NO:81至少80％相同的序列。

实施例C60.根据实施例C59所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人TGFβRII的第二序列包含与SEQ ID NO:81至少90％相同的序列。

实施例C61.根据实施例C60所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第二序列包含与SEQ ID NO:81至少95％相同的序列。

实施例C62.根据实施例C61所述的多链嵌合多肽，其中可溶性人TGFβRII的所述第二序列包含SEQ ID NO:81。

实施例C63.根据实施例C1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:86至少80％相同的序列。

实施例C64.根据实施例C63所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:86至少90％相同的序列。

实施例C65.根据实施例C64所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:86至少95％相同的序列。

实施例C66.根据实施例C65所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:86。

实施例C67.根据实施例C66所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:88。

实施例C68.根据实施例C1和C63至C67中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:90至少80％相同的序列。

实施例C69.根据实施例C68所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:90至少90％相同的序列。

实施例C70.根据实施例C69所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:90至少95％相同的序列。

实施例C71.根据实施例C70所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:90。

实施例C72.根据实施例C71所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:92。

实施例C73.根据实施例C1至C62中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例C74.根据实施例C73所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个之间的接头序列，和/或在所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例C75.根据实施例C1至C62中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽在所述第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例C76.根据实施例C75所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例C77.根据实施例C75所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例C78.根据实施例C75所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个直接邻接所述第一靶标结合结构域。

实施例C79.根据实施例C75所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例C80.根据实施例C75所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于所述第一嵌合多肽的N和/或C端，并且所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于所述第一嵌合多肽中所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例C81.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于N端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例C82.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例C83.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于C端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例C84.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例C85.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个，直接邻接所述可溶性组织因子结构域和/或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例C86.根据实施例C80所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间，和/或(ii)所述一对亲和结构域中的所述第一结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例C87.根据实施例C1至C62和C73至C86中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽在所述第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例C88.根据实施例C87所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第二结构域。

实施例C89.根据实施例C87所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第二结构域之间的接头序列。

实施例C90.根据实施例C87所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述第二靶标结合结构域。

实施例C91.根据实施例C87所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例C92.根据实施例C73至C91中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例C93.根据实施例C92所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例C94.根据实施例C93所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例C95.根据实施例C73至C91中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例C96.根据实施例C73至C95中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-D、TGF-β受体II(TGF-RII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例C97.根据实施例C73至C95中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例C98.根据实施例C97所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。

实施例C99.根据实施例C73至C95中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例C100.根据实施例C99所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例C101.一种组合物，其包含根据实施例C1至C100所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例C102.根据实施例C101所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。

实施例C103.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例C101或C102所述的组合物。

实施例C104.一种刺激免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例C1至C100所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例C101或C102所述的组合物接触。

实施例C105.根据实施例C104所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例C106.根据实施例C105所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例C107.根据实施例C106所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例C108.根据实施例C104所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例C109.根据实施例C104至C108中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

实施例C110.根据实施例C104至C109中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例C111.根据实施例C104至C109中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例C112.根据实施例C104至C111中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例C113.根据实施例C112所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例C114.根据实施例C113所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例C115.根据实施例C112所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例C116.根据实施例C115所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例C117.根据实施例C112所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例C118.根据实施例C117所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例C119.一种诱导或增加免疫细胞增殖的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例C1至C100所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例C101或C102所述的组合物接触。

实施例C120.根据实施例C119所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例C121.根据实施例C120所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例C122.根据实施例C121所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例C123.根据实施例C119所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例C124.根据实施例C119至C123中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例C125.根据实施例C119至C124中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例C126.根据实施例C119至C124中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例C127.根据实施例C119至C126中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例C128.根据实施例C127所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例C129.根据实施例C128所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例C130.根据实施例C127所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例C131.根据实施例C130所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例C132.根据实施例C127所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例C133.根据实施例C127所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例C134.一种诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例C1至C100所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例C101或C102所述的组合物接触。

实施例C135.根据实施例C134所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例C136.根据实施例C135所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例C137.根据实施例C136所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例C138.根据实施例C134所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例C139.根据实施例C134至C138中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例C140.根据实施例C134至C139中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例C141.根据实施例C134至C139中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例C142.根据实施例C134至C141中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例C143.根据实施例C142所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例C144.根据实施例C143所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例C145.根据实施例C142所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例C146.根据实施例C145所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例C147.根据实施例C142所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例C148.根据实施例C147所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例C149.一种在有需要的受试者中杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例C1至C100所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例C101或C102所述的组合物。

实施例C150.根据实施例C149所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例C151.根据实施例C150所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例C152.根据实施例C149所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例C153.根据实施例C152所述的方法，其中所述与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例C154.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例C1至C100所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例C101或C102所述的组合物。

实施例C155.根据实施例C154所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症或感染性疾病。

实施例C156.根据实施例C157所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例C157.根据实施例C154所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例C158.根据实施例C157所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例C159.根据实施例C154所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例C160.根据实施例C159所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例C161.核酸，其编码根据实施例C1至C100中任一项所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例C162.一种载体，其包含根据实施例C161所述的核酸。

实施例C163.根据实施例C162所述的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例C164.一种细胞，其包含根据实施例C161所述的核酸或根据实施例C162或C163所述的载体。

实施例C165.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生所述多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例C164所述的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例C166.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例C165所述的方法产生。

实施例C167.根据实施例C12所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少80％相同的序列。

实施例C168.根据实施例C167所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少90％相同的序列。

实施例C169.根据实施例C168所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少95％相同的序列。

实施例C170.根据实施例C169所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3100％相同的序列。

实施例C171.根据实施例C12所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少80％相同的序列。

实施例C172.根据实施例C171所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少90％相同的序列。

实施例C173.根据实施例C172所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少95％相同的序列。

实施例C174.根据实施例C173所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4100％相同的序列。

D.示例性实施例

实施例D1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(c)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(d)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合；

所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。

实施例D2.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D3.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例D4.根据实施例D1至D3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D5.根据实施例D1至D3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例D6.根据实施例D1至D5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例D7.根据实施例D1至D5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例D8.根据实施例D1至D7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例D9.根据实施例D8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例D10.根据实施例D9所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例D11.根据实施例D10所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例D12.根据实施例D11所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含SEQ ID NO:1。

实施例D13.根据实施例D8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少80％相同的序列。

实施例D14.根据实施例D13所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少90％相同的序列。

实施例D15.根据实施例D14所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少95％相同的序列。

实施例D16.根据实施例D15所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含SEQ ID NO:3。

实施例D17.根据实施例D8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少80％相同的序列。

实施例D18.根据实施例D17所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少90％相同的序列。

实施例D19.根据实施例D18所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少95％相同的序列。

实施例D20.根据实施例D19所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含SEQ ID NO:4。

实施例D21.根据实施例D8至D11、D13至D15和D17至D19中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一种或多种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例D22.根据实施例D21所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例D23.根据实施例D1至D22中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例D24.根据实施例D1至D23中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例D25.根据实施例D1至D24中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物中的凝结。

实施例D26.根据实施例D1至D25中任一项的所述多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例D27.根据实施例D1至D26中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含在所述第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例D28.根据实施例D1至D27中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例D29.根据实施例D28所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ IDNO:31。

实施例D30.根据实施例D28所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ IDNO:223。

实施例D31.根据实施例D1至D30中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例D32.根据实施例D31所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例D33.根据实施例D31所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少80％相同的序列。

实施例D34.根据实施例D33所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少90％相同的序列。

实施例D35.根据实施例D34所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少95％相同的序列。

实施例D36.根据实施例D35所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQID NO:14。

实施例D37.根据实施例D31至D36中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例D38.根据实施例D37所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少80％相同的序列。

实施例D39.根据实施例D38所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少90％相同的序列。

实施例D40.根据实施例D39所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少95％相同的序列。

实施例D41.根据实施例D40所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含SEQ ID NO:28。

实施例D42.根据实施例D37所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例D43.根据实施例D1至D30中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例D44.根据实施例D1至D43中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是激动性抗原结合结构域。

实施例D45.根据实施例D44所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自是激动性抗原结合结构域。

实施例D46.根据实施例D44或D45所述的多链嵌合多肽，其中抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例D47.根据实施例D1至D43中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性IL-21或可溶性IL-7。

实施例D48.根据实施例D47所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地为可溶性IL-21或可溶性IL-7。

实施例D49.根据实施例D1至D48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域均特异性结合到IL-21的受体或IL-7的受体。

实施例D50.根据实施例D49所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例D51.根据实施例D50所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例D52.根据实施例D1至D48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体。

实施例D53.根据实施例D1至D48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例D54.根据实施例D53所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例D55.根据实施例D54所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例D56.根据实施例D55所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含与SEQ ID NO:78至少80％相同的序列。

实施例D57.根据实施例D56所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含与SEQ ID NO:78至少90％相同的序列。

实施例D58.根据实施例D57所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含与SEQ ID NO:78至少95％相同的序列。

实施例D59.根据实施例D58所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-21包含SEQ ID NO:78的序列。

实施例D60.根据实施例D53至D59中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性IL-7。

实施例D61.根据实施例D60所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例D62.根据实施例D61所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-7包含与SEQ ID NO:11至少80％相同的序列。

实施例D63.根据实施例D62所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-7包含与SEQ ID NO:11至少90％相同的序列。

实施例D64.根据实施例D63所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-7包含与SEQ ID NO:11至少95％相同的序列。

实施例D65.根据实施例D64所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人IL-7包含SEQID NO:11的序列。

实施例D66.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:104至少80％相同的序列。

实施例D67.根据实施例D66所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:104至少90％相同的序列。

实施例D68.根据实施例D67所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:104至少95％相同的序列。

实施例D69.根据实施例D68所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:104。

实施例D70.根据实施例D69所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:106。

实施例D71.根据实施例D1和D66至D70中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:108至少80％相同的序列。

实施例D72.根据实施例D71所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:108至少90％相同的序列。

实施例D73.根据实施例D72所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:108至少95％相同的序列。

实施例D74.根据实施例D73所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:108。

实施例D75.根据实施例D74所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:110。

实施例D76.根据实施例D1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:96至少80％相同的序列。

实施例D77.根据实施例D76所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:96至少90％相同的序列。

实施例D78.根据实施例D77所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:96至少95％相同的序列。

实施例D79.根据实施例D68所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:96。

实施例D80.根据实施例D69所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:98。

实施例D81.根据实施例D1和D76至D80中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:100至少80％相同的序列。

实施例D82.根据实施例D81所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:100至少90％相同的序列。

实施例D83.根据实施例D82所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:100至少95％相同的序列。

实施例D84.根据实施例D83所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:100。

实施例D85.根据实施例D84所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQID NO:106。

实施例D86.根据实施例D1至D65中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例D87.根据实施例D86所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个之间的接头序列，和/或在所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例D88.根据实施例D1至D65中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽在所述第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例D89.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例D90.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例D91.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个直接邻接所述第一靶标结合结构域。

实施例D92.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例D93.根据实施例D88所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于所述第一嵌合多肽的N和/或C端，并且所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于所述第一嵌合多肽中所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例D94.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于N端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例D95.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例D96.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于C端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例D97.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例D98.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个，直接邻接所述可溶性组织因子结构域和/或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例D99.根据实施例D93所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间，和/或(ii)所述一对亲和结构域中的所述第一结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例D100.根据实施例D1至D65和D86至D99中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽在所述第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例D101.根据实施例D100所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第二结构域。

实施例D102.根据实施例D100所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第二结构域之间的接头序列。

实施例D103.根据实施例D100所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述第二靶标结合结构域。

实施例D104.根据实施例D100所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例D105.根据实施例D86至D104中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例D106.根据实施例D105所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例D107.根据实施例D106所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例D108.根据实施例D86至D104中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例D109.根据实施例D86至D108中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体和CD28的受体。

实施例D110.根据实施例D86至D108中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例D111.根据实施例D110所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。

实施例D112.根据实施例D86至D108中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例D113.根据实施例D112所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122或可溶性CD28。

实施例D114.一种组合物，其包含根据实施例D1至D113所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例D115.根据实施例D114所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。

实施例D116.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例D114或D115所述的组合物。

实施例D117.一种刺激免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例D1至D113所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例D114或D115所述的组合物接触。

实施例D118.根据实施例D117所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例D119.根据实施例D118所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例D120.根据实施例D119所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例D121.根据实施例D117所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例D122.根据实施例D117至D121中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

实施例D123.根据实施例D117至D122中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例D124.根据实施例D117至D122中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例D125.根据实施例D117至D124中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例D126.根据实施例D125所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例D127.根据实施例D126所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例D128.根据实施例D125所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例D129.根据实施例D128所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例D130.根据实施例D125所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例D131.根据实施例D130所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

实施例D132.一种诱导或增加免疫细胞增殖的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例D1至D113所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例D114或D115所述的组合物接触。

实施例D133.根据实施例D132所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例D134.根据实施例D133所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例D135.根据实施例D134所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例D136.根据实施例D132所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例D137.根据实施例D132至D136中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例D138.根据实施例D132至D137中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例D139.根据实施例D132至D137中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例D140.根据实施例D132至D139中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例D141.根据实施例D140所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例D142.根据实施例D141所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例D143.根据实施例D140所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例D144.根据实施例D143所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例D145.根据实施例D140所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例D146.根据实施例D140所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

实施例D147.一种诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例D1至D113所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例D114或D115所述的组合物接触。

实施例D148.根据实施例D147所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例D149.根据实施例D148所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例D150.根据实施例D149所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例D151.根据实施例D147所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例D152.根据实施例D147至D151中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例D153.根据实施例D147至D152中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例D154.根据实施例D147至D152中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例D155：根据实施例D147至D153中任一项所述的方法，其中使所述免疫细胞与抗TF IgG抗体接触以产生记忆或记忆样免疫细胞。

实施例D156.根据实施例D147至D155中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例D157.根据实施例D156所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例D158.根据实施例D156所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例D159.根据实施例D156所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例D160.根据实施例D159所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例D161.根据实施例D156所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例D162.根据实施例D161所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

实施例D163.一种在有需要的受试者中杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例D1至D113所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例D114或D115所述的组合物。

实施例D164.根据实施例D163所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例D165.根据实施例D164所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例D166.根据实施例D163所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例D167.根据实施例D166所述的方法，其中所述与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例D168.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例D1至D113所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例D114或D115所述的组合物。

实施例D169.根据实施例D168所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症或感染性疾病。

实施例D170.根据实施例D169所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例D171.根据实施例D168所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例D172.根据实施例D171所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例D173.根据实施例D168所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例D174.根据实施例D173所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒或流感病毒。

实施例D175.核酸，其编码根据实施例D1至D113中任一项所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例D176.一种载体，其包含根据实施例D174所述的核酸。

实施例D177.根据实施例D176所述的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例D178.一种细胞，其包含根据实施例D175所述的核酸或根据实施例D175或D176所述的载体。

实施例D179.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生所述多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例D177所述的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例D180.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例D179所述的方法产生。

E.示例性实施例

实施例E1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(e)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)可溶性组织因子结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(f)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中：

所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合；和

所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到：IL-7的受体、CD16、IL-21的受体、TGF-β或CD137L的受体。

实施例E2.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述可溶性组织因子结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E3.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述可溶性组织因子结构域之间的接头序列。

实施例E4.根据实施例E1至E3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E5.根据实施例E1至E3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例E6.根据实施例E1至E5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例E7.根据实施例E1至E5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例E8.根据实施例E1至E7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例E9.根据实施例E8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例E10.根据实施例E9所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例E11.根据实施例E10所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例E12.根据实施例E8至E11中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一种或多种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例E13.根据实施例E12所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例E14.根据实施例E1至E13中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例E15.根据实施例E1至E14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例E16.根据实施例E1至E15中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物中的凝结。

实施例E17.根据实施例E1至E16中任一项的所述多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例E18.根据实施例E1至E17中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含在所述第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例E19.根据实施例E1至E18中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例E20.根据实施例E19所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列包含SEQ IDNO:31。

实施例E21.根据实施例E20所述的多链嵌合多肽，其中所述信号序列是SEQ IDNO:31。

实施例E22.根据实施例E1-E21中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例E23.根据实施例E22所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例E24.根据实施例E22所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少80％相同的序列。

实施例E25.根据实施例E24所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少90％相同的序列。

实施例E26.根据实施例E25所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含与SEQ ID NO:14至少95％相同的序列。

实施例E27.根据实施例E26所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-15包含SEQID NO:14。

实施例E28.根据实施例E22至E27中任一项所述的多链嵌合多肽，其中IL15Rα的寿司结构域包含来自人IL15Rα的寿司结构域。

实施例E29.根据实施例E28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少80％相同的序列。

实施例E30.根据实施例E29所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少90％相同的序列。

实施例E31.根据实施例E30所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含与SEQ ID NO:28至少95％相同的序列。

实施例E32.根据实施例E31所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域包含SEQ ID NO:28。

实施例E33.根据实施例E28所述的多链嵌合多肽，其中来自人IL15Rα的所述寿司结构域是成熟全长IL15Rα。

实施例E34.根据实施例E1至E21中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例E35.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、CD16或IL-21的受体。

实施例E36.根据实施例E35所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到受体IL-7，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21受体。

实施例E37.根据实施例E36所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域包含可溶性IL-7蛋白。

实施例E38.根据实施例E37所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7蛋白是可溶性人IL-7。

实施例E39.根据实施例E36至E38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的抗原结合结构域。

实施例E40.根据实施例E39所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例E41.根据实施例E36至E38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E42.根据实施例E41所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E43.根据实施例E42所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例E44.根据实施例E36至E40中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到IL-21的受体的另外的靶标结合结构域。

实施例E45.根据实施例E44所述的多链嵌合多肽，其中所述另外的靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E46.根据实施例E45所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是可溶性人IL-12。

实施例E47.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、CD16或IL-21的受体。

实施例E48.根据实施例E47所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到CD16或IL-21的受体。

实施例E49.根据实施例E48的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E50.根据实施例E49所述的多特异性嵌合多肽，其中可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E51.根据实施例E48至E50中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到CD16。

实施例E52.根据实施例E51所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的抗原结合结构域。

实施例E53.根据实施例E52所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例E54.根据实施例E48至E50中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E55.根据实施例E54所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E56.根据实施例E55所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性人IL-21。

实施例E57.根据实施例E48至E53中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到IL-21的受体的另外的靶标结合结构域。

实施例E58.根据实施例E57所述的多链嵌合多肽，其中所述另外的靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E59.根据实施例E58所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例E60.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体。

实施例E61.根据实施例E60所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域包括可溶性IL-7。

实施例E62.根据实施例E61所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例E63.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β。

实施例E64.根据实施例E63的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E65.根据实施例E64所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E66.根据实施例E1至E34中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体、IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例E67.根据实施例E66所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到IL-7的受体，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例E68.根据实施例E67的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性IL-7。

实施例E69.根据实施例E68所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7是可溶性人IL-7。

实施例E70.根据实施例E67至E69中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E71.根据实施例E70所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域是可溶性IL-21。

实施例E72.根据实施例E71所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-21是可溶性人IL-21。

实施例E73.根据实施例E67至E69中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域特异性结合到CD137L的受体。

实施例E74.根据实施例E73所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域是可溶性CD137L。

实施例E75.根据实施例E74所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L是可溶性人CD137L。

实施例E76.根据实施例E67至E72中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到CD137L的受体的另外的靶标结合结构域。

实施例E77.根据实施例E76所述的多链嵌合多肽，其中所述另外的靶标结合结构域包含可溶性CD137L。

实施例E78.根据实施例E77所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L是可溶性人CD137L。

实施例E79.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到IL-7的受体或TGF-β。

实施例E80.根据实施例E79所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到受体IL-7，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。

实施例E81.根据实施例E80所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域包含可溶性IL-7蛋白。

实施例E82.根据实施例E81所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL-7蛋白是可溶性人IL-7。

实施例E83.根据实施例E80至E82中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到TGF-β的抗原结合结构域。

实施例E84.根据实施例E83的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E85.根据实施例E84所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E86.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶向结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β、IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例E87.根据实施例E86所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体或CD137L的受体。

实施例E88.根据实施例E87的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E89.根据实施例E88所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E90.根据实施例E87至E89中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E91.根据实施例E90所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E92.根据实施例E91所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性人IL-21。

实施例E93.根据实施例E87至E89中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。

实施例E94.根据实施例E93所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性CD137L。

实施例E95.根据实施例E94所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性人CD137L。

实施例E96.根据实施例E87至E92中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到CD137L的受体的另外的靶标结合结构域。

实施例E97.根据实施例E96所述的多链嵌合多肽，其中所述另外的靶标结合结构域包含可溶性CD137L。

实施例E98.根据实施例E97所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L是可溶性人CD137L。

实施例E99.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。

实施例E100.根据实施例E99所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或IL-21的受体。

实施例E101.根据实施例E100的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E102.根据实施例E101所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E103.根据实施例E100至E102中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-21的受体。

实施例E104.根据实施例E103所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性IL-21。

实施例E105.根据实施例E104所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性人IL-21。

实施例E106.根据实施例E100至E102中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。

实施例E107.根据实施例E106所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E108.根据实施例E107所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E109.根据实施例E100至E105中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二多肽进一步包含特异性结合到TGF-β的另外的靶标结合结构域。

实施例E110.根据实施例E109所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E111.根据实施例E110所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E112.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶向结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或IL-16。

实施例E113.根据实施例E112所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β或IL-16。

实施例E114.根据实施例E113的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E115.根据实施例E114所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E116.根据实施例E113至E115中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到IL-16。

实施例E117.根据实施例E116所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的抗原结合结构域。

实施例E118.根据实施例E117所述的多链嵌合多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含特异性结合到CD16的scFv。

实施例E119.根据实施例E113至E115中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域特异性结合到TGF-β。

实施例E120.根据实施例E119所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E121.根据实施例E120所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E122.根据实施例E113至E118中任一项所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到TGF-β的另外的靶标结合结构域。

实施例E123.根据实施例E122所述的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E124.根据实施例E123所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E125.根据实施例E1至E34中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自独立地特异性结合到TGF-β或CD137L的受体。

实施例E126.根据实施例E125所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域特异性结合到TGF-β，并且所述第二靶标结合结构域特异性结合到CD137L的受体。

实施例E127.根据实施例E126的多特异性嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E128.根据实施例E127所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E129.根据实施例E128所述的多链嵌合多肽，其中所述第二靶标结合结构域包含可溶性CD137L蛋白。

实施例E130.根据实施例E129所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性CD137L蛋白是可溶性人CD137L。

实施例E131.根据实施例E126至E130中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含特异性结合到TGF-β的另外的靶标结合结构域。

实施例E132.根据实施例E131的多特异性嵌合多肽，其中所述另外的靶标结合结构域是可溶性TGF-β受体。

实施例E133.根据实施例E132所述的多特异性嵌合多肽，其中所述可溶性TGF-β受体是可溶性TGFβRII受体。

实施例E134.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:104至少80％相同的序列。

实施例E135.根据实施例E134所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:104至少90％相同的序列。

实施例E136.根据实施例E135所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:104至少95％相同的序列。

实施例E137.根据实施例E136所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:104。

实施例E138.根据实施例E137所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:106。

实施例E139.根据实施例E1和E134至E138中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:129至少80％相同的序列。

实施例E140.根据实施例E139所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:129至少90％相同的序列。

实施例E141.根据实施例E140所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:129至少95％相同的序列。

实施例E142.根据实施例E141所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:129。

实施例E143.根据实施例E142所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:131。

实施例E144.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:133至少80％相同的序列。

实施例E145.根据实施例E144所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:133至少90％相同的序列。

实施例E146.根据实施例E145所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:133至少95％相同的序列。

实施例E147.根据实施例E146所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:133。

实施例E148.根据实施例E147所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:135。

实施例E149.根据实施例E1和E144至E148中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:137至少80％相同的序列。

实施例E150.根据实施例E149所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:137至少90％相同的序列。

实施例E151.根据实施例E150所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:137至少95％相同的序列。

实施例E152.根据实施例E151所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:137。

实施例E153.根据实施例E152所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:139。

实施例E154.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:141至少80％相同的序列。

实施例E155.根据实施例E154所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:141至少90％相同的序列。

实施例E156.根据实施例E155所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:141至少95％相同的序列。

实施例E157.根据实施例E156所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:141。

实施例E158.根据实施例E157所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:143。

实施例E159.根据实施例E1和E154至E158中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:145至少80％相同的序列。

实施例E160.根据实施例E159所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:145至少90％相同的序列。

实施例E161.根据实施例E160所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:145至少95％相同的序列。

实施例E162.根据实施例E161所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:145。

实施例E163.根据实施例E162所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:147。

实施例E164.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:149至少80％相同的序列。

实施例E165.根据实施例E164所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:149至少90％相同的序列。

实施例E166.根据实施例E165所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:149至少95％相同的序列。

实施例E167.根据实施例E166所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:149。

实施例E168.根据实施例E167所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:151。

实施例E169.根据实施例E1和E164至E168中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:153至少80％相同的序列。

实施例E170.根据实施例E169所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:153至少90％相同的序列。

实施例E171.根据实施例E170所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:153至少95％相同的序列。

实施例E172.根据实施例E171所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:153。

实施例E173.根据实施例E172所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:155。

实施例E174.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:161至少80％相同的序列。

实施例E175.根据实施例E174所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:161至少90％相同的序列。

实施例E176.根据实施例E175所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:161至少95％相同的序列。

实施例E177.根据实施例E176所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:161。

实施例E178.根据实施例E177所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:163。

实施例E179.根据实施例E1和E174至E178中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:165至少80％相同的序列。

实施例E180.根据实施例E179所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:165至少90％相同的序列。

实施例E181.根据实施例E180所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:165至少95％相同的序列。

实施例E182.根据实施例E181所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:165。

实施例E183.根据实施例E182所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:167。

实施例E184.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少80％相同的序列。

实施例E185.根据实施例E184所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少90％相同的序列。

实施例E186.根据实施例E185所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少95％相同的序列。

实施例E187.根据实施例E186的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:173。

实施例E188.根据实施例E187的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:175。

实施例E189.根据实施例E1和E184-E188中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:189至少80％相同的序列。

实施例E190.根据实施例E189所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:189至少90％相同的序列。

实施例E191.根据实施例E190所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:189至少95％相同的序列。

实施例E192.根据实施例E191所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:189。

实施例E193.根据实施例E192所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:191。

实施例E194.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少80％相同的序列。

实施例E195.根据实施例E194所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少90％相同的序列。

实施例E196.根据实施例E195所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:173至少95％相同的序列。

实施例E197.根据实施例E196所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:173。

实施例E198.根据实施例E197所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:175。

实施例E199.根据实施例E1和E194至E198中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:177至少80％相同的序列。

实施例E200.根据实施例E199所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:177至少90％相同的序列。

实施例E201.根据实施例E200所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:177至少95％相同的序列。

实施例E202.根据实施例E201所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:177。

实施例E203.根据实施例E202所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:179。

实施例E204.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:181至少80％相同的序列。

实施例E205.根据实施例E204所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:181至少90％相同的序列。

实施例E206.根据实施例E205所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:181至少95％相同的序列。

实施例E207.根据实施例E206的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:181。

实施例E208.根据实施例E207的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQID NO:183。

实施例E209.根据实施例E1和E204至E208中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:185至少80％相同的序列。

实施例E210.根据实施例E209所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:185至少90％相同的序列。

实施例E211.根据实施例E210所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:185至少95％相同的序列。

实施例E212.根据实施例E211所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:185。

实施例E213.根据实施例E212所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:187。

实施例E214.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少80％相同的序列。

实施例E215.根据实施例E214所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少90％相同的序列。

实施例E216.根据实施例E215所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:193至少95％相同的序列。

实施例E217.根据实施例E216所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:193。

实施例E218.根据实施例E217所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:195。

实施例E219.根据实施例E1和E214至E218中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:197至少80％相同的序列。

实施例E220.根据实施例E219所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:197至少90％相同的序列。

实施例E221.根据实施例E220所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:197至少95％相同的序列。

实施例E222.根据实施例E221所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:197。

实施例E223.根据实施例E222所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:199。

实施例E224.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:201至少80％相同的序列。

实施例E225.根据实施例E224所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:201至少90％相同的序列。

实施例E226.根据实施例E225所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:201至少95％相同的序列。

实施例E227.根据实施例E226所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:201。

实施例E228.根据实施例E227所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:203。

实施例E229.根据实施例E1和E224至E228中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:205至少80％相同的序列。

实施例E230.根据实施例E229所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:205至少90％相同的序列。

实施例E231.根据实施例E230所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:205至少95％相同的序列。

实施例E232.根据实施例E231所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:205。

实施例E233.根据实施例E232所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:207。

实施例E234.根据实施例E1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:209至少80％相同的序列。

实施例E235.根据实施例E234所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:209至少90％相同的序列。

实施例E236.根据实施例E235所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含与SEQ ID NO:209至少95％相同的序列。

实施例E237.根据实施例E236所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:209。

实施例E238.根据实施例E237所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽包含SEQ ID NO:211。

实施例E239.根据实施例E1和E234-E238中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:213至少80％相同的序列。

实施例E240.根据实施例E239所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:213至少90％相同的序列。

实施例E241.根据实施例E240所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含与SEQ ID NO:213至少95％相同的序列。

实施例E242.根据实施例E241所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:213。

实施例E243.根据实施例E242所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽包含SEQ ID NO:215。

实施例E244.根据实施例E1至E133中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例E245.根据实施例E244所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个之间的接头序列，和/或在所述一个或多个另外的抗原结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例E246.根据实施例E1至E133中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽在所述第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例E247.根据实施例E246所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例E248.根据实施例E246所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例E249.根据实施例E246的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个直接邻接所述第一靶标结合结构域。

实施例E250.根据实施例E246所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例E251.根据实施例E246所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于所述第一嵌合多肽的N和/或C端，并且所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于所述第一嵌合多肽中所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例E252.根据实施例E251所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于N端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例E253.根据实施例E251所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例E254.根据实施例E251所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于C端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例E255.根据实施例E251所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例E256.根据实施例E251所述的多链嵌合多肽，其中位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个，直接邻接所述可溶性组织因子结构域和/或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例E257.根据实施例E251所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)所述可溶性组织因子结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间，和/或(ii)所述一对亲和结构域中的所述第一结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述可溶性组织因子结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例E258.根据实施例E44至E46、E57至E59、E76至E78、E96至E98、E109至E111、E122至E124和E131至E133中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽在所述第二嵌合多肽的N端或C端进一步包含所述另外的靶标结合结构域。

实施例E259.根据实施例E258所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述另外的靶标结合结构域直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第二结构域。

实施例E260.根据实施例E258所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述另外的靶标结合结构域与所述一对亲和结构域中的所述第二结构域之间的接头序列。

实施例E261.根据实施例E258所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述另外的靶标结合结构域直接邻接所述第二靶标结合结构域。

实施例E262.根据实施例E258所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述另外的靶标结合结构域与另外靶标第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例E263.一种组合物，其包含根据实施例E1至E262所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例E264.根据实施例E263所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。

实施例E265.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例E263或E264所述的组合物。

实施例E266.一种刺激免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例E1至E262所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例E263或E264所述的组合物接触。

实施例E267.根据实施例E266所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例E268.根据实施例E267所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例E269.根据实施例E268所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例E270.根据实施例E266所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例E271.根据实施例E266至E270中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8

实施例E272.根据实施例E266至E271中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例E273.根据实施例E266至E271中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例E274.根据实施例E266至E273中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例E275.根据实施例E274所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例E276.根据实施例E275所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例E277.根据实施例E274所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例E278.根据实施例E277所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例E279.根据实施例E274所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例E280.根据实施例E279所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例E281.一种诱导或增加免疫细胞增殖的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例E1至E262所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例E263或E264所述的组合物接触。

实施例E282.根据实施例E281所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例E283.根据实施例E282所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例E284.根据实施例E283所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例E285.根据实施例E281所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例E286.根据实施例E281至E285中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、记忆T细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例E287.根据实施例E281至E286中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例E288.根据实施例E281至E286中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例E289.根据实施例E281至E288中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例E290.根据实施例E289所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例E291.根据实施例E290所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例E292.根据实施例E289所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例E293.根据实施例E292所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例E294.根据实施例E289所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例E295.根据实施例E289所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例E296.一种诱导免疫细胞分化成记忆或记忆样免疫细胞的方法，所述方法包含：

使免疫细胞与有效量的根据实施例E1至E262所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例E263或E264所述的组合物接触。

实施例E297.根据实施例E296所述的方法，其中所述免疫细胞在体外接触。

实施例E298.根据实施例E297所述的方法，其中所述免疫细胞先前获自受试者。

实施例E299.根据实施例E298所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之前从所述受试者获得所述免疫细胞。

实施例E300.根据实施例E296所述的方法，其中所述免疫细胞在体内接触。

实施例E301.根据实施例E296至E300中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞选自以下组成的组：未成熟胸腺细胞、外周血淋巴细胞、初始T细胞、多能Th细胞前体、淋巴祖细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th22细胞、Th9细胞、Th2细胞、Th1细胞、Th3细胞、γδT细胞、αβT细胞、肿瘤浸润性T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤T细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和自然杀伤细胞。

实施例E302.根据实施例E296至E301中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞先前已经过基因修饰以表达嵌合抗原受体或重组T细胞受体。

实施例E303.根据实施例E296至E301中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含在接触步骤之后，将编码嵌合抗原受体或重组T细胞受体的核酸引入到所述免疫细胞中。

实施例E304.根据实施例E296至E303中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包含向有需要的受试者施用所述免疫细胞。

实施例E305.根据实施例E304所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例E306.根据实施例E305所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例E307.根据实施例E304所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例E308.根据实施例E307所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例E309.根据实施例E304所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例E310.根据实施例E309所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例E311.一种在有需要的受试者中杀死癌细胞、受感染细胞或衰老细胞的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例E1至E262所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例E263或E264所述的组合物。

实施例E312.根据实施例E311所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症。

实施例E313.根据实施例E312所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例E314.根据实施例E311所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与老化相关的疾病或病况。

实施例E315.根据实施例E314所述的方法，其中所述与老化相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例E316.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例E1至E262所述的多链嵌合多肽中的任一种或根据实施例E263或E264所述的组合物。

实施例E317.根据实施例E316所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有癌症或感染性疾病。

实施例E318.根据实施例E317所述的方法，其中所述癌症选自以下组成的组：实体肿瘤、血液肿瘤、肉瘤、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、皮肤T细胞淋巴瘤、成视网膜细胞瘤、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、肾细胞癌、胃和食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肝癌和肝细胞癌。

实施例E319.根据实施例E316所述的方法，其中所述受试者已被鉴别或诊断为患有与年龄相关的疾病或病况。

实施例E320.根据实施例E319所述的方法，其中所述与年龄相关的疾病或病况选自以下组成的组：阿尔茨海默氏病、动脉瘤、囊性纤维化、胰腺炎纤维化、青光眼、高血压、特发性肺纤维化、炎性肠病、椎间盘退变、黄斑变性、骨关节炎、2型糖尿病、脂肪萎缩、脂肪营养不良、动脉粥样硬化、白内障、COPD、特发性肺纤维化、肾移植失败、肝纤维化、骨量损失、心肌梗死、肌肉减少症、伤口愈合、脱发、心肌细胞肥大、骨关节炎、帕金森氏病、与年龄相关的肺组织弹性丧失、黄斑变性、恶病质、肾小球硬化、肝硬化、NAFLD、骨质疏松症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、多发性硬化症和肾功能不全。

实施例E321.根据实施例E316所述的方法，其中所述受试者已被诊断或鉴别为患有感染性疾病。

实施例E322.根据实施例E321所述的方法，其中所述感染性疾病是感染人免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、腺病毒、冠状病毒、鼻病毒、轮状病毒、天花、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、乳头瘤病毒和流感病毒。

实施例E323.核酸，其编码根据实施例E1至E262中任一项所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例E324.一种载体，其包含根据实施例E323所述的核酸。

实施例E325.根据实施例E324所述的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例E326.一种细胞，其包含根据实施例E323所述的核酸或根据实施例E324或E325所述的载体。

实施例E327.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生所述多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例E326所述的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例E328.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例E327所述的方法产生。

实施例E329.根据实施例E8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少80％相同的序列。

实施例E330.根据实施例E329所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少90％相同的序列。

实施例E331.根据实施例E330所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3至少95％相同的序列。

实施例E332.根据实施例E331所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:3100％相同的序列。

实施例E333.根据实施例E8所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少80％相同的序列。

实施例E334.根据实施例E333所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少90％相同的序列。

实施例E335.根据实施例E334所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4至少95％相同的序列。

实施例E336.根据实施例E335所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:4 100％相同的序列。

F.示例性实施例

实施例F1.一种多链嵌合多肽，其包含：

(a)第一嵌合多肽，其包含：

(i)第一靶标结合结构域；

(ii)接头结构域；和

(iii)一对亲和结构域中的第一结构域；

(b)第二嵌合多肽，其包含：

(i)一对亲和结构域中的第二结构域；和

(ii)第二靶标结合结构域，

其中所述第一嵌合多肽和所述第二嵌合多肽通过所述一对亲和结构域中的所述第一结构域和所述第二结构域的结合而缔合。

实施例F2.根据实施例F1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述接头结构域在所述第一嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F3.根据实施例F1所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述第一靶标结合结构域与所述接头结构域之间的接头序列。

实施例F4.根据实施例F1至F3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽中的所述接头结构域和所述一对亲和结构域中的所述第一结构域直接直接邻接。

实施例F5.根据实施例F1至F3中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含所述第一嵌合多肽中的所述接头结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例F6.根据实施例F1至F5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域中的所述第二结构域和所述第二靶标结合结构域在所述第二嵌合多肽中彼此直接邻接。

实施例F7.根据实施例F1至F5中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一对亲和结构域中的所述第二结构域与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例F8.根据实施例F1至F7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的抗原。

实施例F9.根据实施例F8所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到相同的表位。

实施例F10.根据实施例F9所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域包含相同的氨基酸序列。

实施例F11.根据实施例F1至F7中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例F12.根据实施例F1至F11中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是抗原结合结构域。

实施例F13.根据实施例F12所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例F14.根据实施例F12或F13的多链嵌合多肽，其中所述抗原结合结构域包含scFv或单结构域抗体。

实施例F15.根据实施例F1至F14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD28的受体。

实施例F16.根据实施例F1至F14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例F17.根据实施例F16所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性白介素、细胞因子或配体蛋白选自以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-3、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、PDGF-DD、SCF和FLT3L。

实施例F18.根据实施例F1至F14中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域和所述第二靶标结合结构域中的一个或两个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例F19.根据实施例F18所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155或可溶性CD28。

实施例F20.根据实施例F1至F19中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域，其中一个或多个靶标结合结构域中的至少一个位于接头结构域与所述一对亲和结构域对中的所述第一结构域之间。

实施例F21.根据实施例F20所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述接头结构域与一个或多个靶抗原结合结构域中的至少一个之间的接头序列，和/或在一个或多个靶抗原结合结构域中的至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例F22.根据实施例F1至F19中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽在所述第一嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例F23.根据实施例F22所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例F24.根据实施例F22所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例F25.根据实施例F22所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个直接邻接所述第一靶标结合结构域。

实施例F26.根据实施例F22所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个与所述第一靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例F27.根据实施例F22所述的多链嵌合多肽，其中所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个安置于所述第一嵌合多肽的N和/或C端，并且所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个位于所述第一嵌合多肽中所述接头结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例F28.根据实施例F27所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于N端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例F29.根据实施例F27所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例F30.根据实施例F27所述的多链嵌合多肽，其中在所述第一嵌合多肽中，安置于C端的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个另外的靶标结合结构域直接邻接所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例F31.根据实施例F27所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于所述第一嵌合多肽中的所述至少一个另外的靶标结合结构域与所述第一靶标结合结构域或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的接头序列。

实施例F32.根据实施例F27所述的多链嵌合多肽，其中位于所述接头结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个，直接邻接所述接头结构域和/或所述一对亲和结构域中的所述第一结构域。

实施例F33.根据实施例F27所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含安置于以下的接头序列：(i)所述接头结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述接头结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间，和/或(ii)所述一对亲和结构域中的所述第一结构域与所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个之间，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的所述至少一个位于所述接头结构域与所述一对亲和结构域中的所述第一结构域之间。

实施例F34.根据实施例F1至F33中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽在所述第二嵌合多肽的N端和/或C端进一步包含一个或多个另外的靶标结合结构域。

实施例F35.根据实施例F34所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述一对亲和结构域中的所述第二结构域。

实施例F36.根据实施例F34所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述一对亲和结构域中的所述第二结构域之间的接头序列。

实施例F37.根据实施例F34所述的多链嵌合多肽，其中在所述第二嵌合多肽中，所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个直接邻接所述第二靶标结合结构域。

实施例F38.根据实施例F34所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含所述第二嵌合多肽中的所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的至少一个与所述第二靶标结合结构域之间的接头序列。

实施例F39.根据实施例F20至F38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的抗原。

实施例F40.根据实施例F39所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个特异性结合到相同的表位。

实施例F41.根据实施例F40所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的两个或更多个包含相同的氨基酸序列。

实施例F42.根据实施例F39所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的抗原。

实施例F43.根据实施例F42所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自特异性结合到相同的表位。

实施例F44.根据实施例F43所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自包含相同的氨基酸序列。

实施例F45.根据实施例F20至F38中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域特异性结合到不同的抗原。

实施例F46.根据实施例F20至F45中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个是抗原结合结构域。

实施例F47.根据实施例F46所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域各自是抗原结合结构域。

实施例F48.根据实施例F46或F47的多链嵌合多肽，其中所述抗原结合结构域包含scFv。

实施例F49.根据实施例F20-F48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和一个或多个靶标结合结构域中的一个或多个特异性结合到选自以下组成的组的靶标：CD16a、CD28、CD3、CD33、CD20、CD19、CD22、CD123、IL-1R、IL-1、VEGF、IL-6R、IL-4、IL-10、PDL-1、TIGIT、PD-1、TIM3、CTLA4、MICA、MICB、IL-6、IL-8、TNFα、CD26a、CD36、ULBP2、CD30、CD200、CD80、CD86、PD-L2、B7-H4、HVEM、ILT3、ILT4、TIGIT、MHCII、LAG3、CD272、VISTA、CD137、CD40、CD47、CD70、OX40、IGF-1R、MUC4AC、MUC5AC、Trop-2、CMET、EGFR、HER1、HER2、HER3、PSMA、CEA、B7H3、EPCAM、BCMA、P-钙黏着蛋白、CEACAM5、UL16结合蛋白、HLA-DR、DLL4、TYRO3、AXL、MER、CD122、CD155、PDGF-DD、TGF-β受体II(TGF-βRII)的配体、TGF-βRIII的配体、DNAM-1的配体、NKp46的配体、NKp44的配体、NKG2D的配体、NKp30的配体、scMHCI的配体、scMHCII的配体、scTCR的配体、IL-1的受体、IL-2的受体、IL-3的受体、IL-7的受体、IL-8的受体、IL-10的受体、IL-12的受体、IL-15的受体、IL-17的受体、IL-18的受体、IL-21的受体、PDGF-DD的受体、干细胞因子(SCF)的受体、干细胞样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的受体、MICA的受体、MICB的受体、ULP16结合蛋白的受体、CD155的受体、CD122的受体和CD3的受体以及CD28的受体。

实施例F50.根据实施例F20至F48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子蛋白。

实施例F52.根据实施例F20至F48中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一靶标结合结构域、所述第二靶标结合结构域和所述一个或多个另外的靶标结合结构域中的一个或多个是可溶性白介素或细胞因子受体。

实施例F53.根据实施例F52所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性受体是可溶性TGF-β受体II(TGF-βRII)、可溶性TGF-βRIII、可溶性NKG2D、可溶性NKp30、可溶性NKp44、可溶性NKp46、可溶性DNAM-1、scMHCI、scMHCII、scTCR、可溶性CD155、可溶性CD122、可溶性CD3或可溶性CD28。

实施例F54.根据实施例F1至F53中任一项的所述多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽进一步包含在所述第一嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例F55.根据实施例F1至F53中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第二嵌合多肽进一步包含在所述第二嵌合多肽的N端或C端的肽标签。

实施例F56.根据实施例F1至F55中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述接头结构域是可溶性组织因子结构域。

实施例F57.根据实施例F56的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域是可溶性人组织因子结构域。

实施例F58.根据实施例F57所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少80％相同的序列。

实施例F59.根据实施例F58所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的序列。

实施例F60.根据实施例F59所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域包含与SEQ ID NO:1至少95％相同的序列。

实施例F61.根据实施例F57至F60中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的一种或多种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例F62.根据实施例F61所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性人组织因子结构域不包含以下中的任一种：

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置20的氨基酸位置处的赖氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置22的氨基酸位置处的异亮氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置45的氨基酸位置处的色氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置58的氨基酸位置处的天冬氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置94的氨基酸位置处的酪氨酸；

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置135的氨基酸位置处的精氨酸；和

在对应于成熟野生型人组织因子蛋白的氨基酸位置140的氨基酸位置处的苯丙氨酸。

实施例F63.根据实施例F56至F62中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不能结合到因子VIIa。

实施例F64.根据实施例F56至F63中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性组织因子结构域不将非活性因子X转化为因子Xa。

实施例F65.根据实施例F56至F64中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述多链嵌合多肽不刺激哺乳动物的凝血。

实施例F66.根据实施例F1至F55中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述接头结构域选自以下组成的组：κ链和λ链。

实施例F67.根据实施例F1至F66中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域是来自人IL-15受体的α链(IL15Rα)的寿司结构域和可溶性IL-15。

实施例F68.根据实施例F67所述的多链嵌合多肽，其中所述可溶性IL15具有D8N或D8A氨基酸取代。

实施例F69.根据实施例F67或F68所述的多链嵌合多肽，其中所述人IL15Rα是成熟全长IL15Rα。

实施例F70.根据实施例F1至F66中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述一对亲和结构域选自以下组成的组：芽胞杆菌RNA酶和芽胞杆菌RNA酶抑制子、PKA和AKAP、基于突变核糖核酸酶I片段的衔接子/对接标签模块以及基于蛋白质突触蛋白、突触结合蛋白、突触泡蛋白和SNAP25的相互作用的SNARE模块。

实施例F71.根据实施例F1至F70中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端进一步包含信号序列。

实施例F72.根据实施例F1至F70中任一项所述的多链嵌合多肽，其中所述第一嵌合多肽和/或所述第二嵌合多肽在其N端缺少信号序列。

实施例F73.一种组合物，其包含根据实施例F1至F72所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例F74.根据实施例F73所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。

实施例F75.一种试剂盒，其包含至少一个剂量的根据实施例F73或F74所述的组合物。

实施例F76.核酸，其编码根据实施例F1至F72中任一项所述的多链嵌合多肽中的任一种。

实施例F77.一种载体，其包含根据实施例F76所述的核酸。

实施例F78.根据实施例F77所述的载体，其中所述载体是表达载体。

实施例F79.一种细胞，其包含根据实施例F76所述的核酸或根据实施例F77或F78所述的载体。

实施例F80.一种产生多链嵌合多肽的方法，所述方法包含：

在足以引起产生所述多链嵌合多肽的条件下在培养基中培养根据实施例F79所述的细胞；和

从所述细胞和/或所述培养基中回收所述多链嵌合多肽。

实施例F81.一种多链嵌合多肽，其通过根据实施例F80所述的方法产生。

序列表

<110> HCW生物制剂公司（HCW BIOLOGICS, INC.）

<120> 多链嵌合多肽和其用途

<130> 47039-0005WO1

<140>

<141>

<150> 62/881,088

<151> 2019-07-31

<150> 62/817,241

<151> 2019-03-12

<150> 62/817,230

<151> 2019-03-12

<150> 62/816,683

<151> 2019-03-11

<150> 62/749,506

<151> 2018-10-23

<150> 62/749,007

<151> 2018-10-22

<150> 62/746,832

<151> 2018-10-17

<150> 62/725,043

<151> 2018-08-30

<150> 62/725,010

<151> 2018-08-30

<150> 62/724,969

<151> 2018-08-30

<160> 226

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 1

Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

20 25 30

Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys

35 40 45

Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val

50 55 60

Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn

85 90 95

Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

115 120 125

Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

<210> 2

<211> 657

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 2

agcggcacaa ccaacacagt cgctgcctat aacctcactt ggaagagcac caacttcaaa 60

accatcctcg aatgggaacc caaacccgtt aaccaagttt acaccgtgca gatcagcacc 120

aagtccggcg actggaagtc caaatgtttc tataccaccg acaccgagtg cgatctcacc 180

gatgagatcg tgaaagatgt gaaacagacc tacctcgccc gggtgtttag ctaccccgcc 240

ggcaatgtgg agagcactgg ttccgctggc gagcctttat acgagaacag ccccgaattt 300

accccttacc tcgagaccaa tttaggacag cccaccatcc aaagctttga gcaagttggc 360

acaaaggtga atgtgacagt ggaggacgag cggactttag tgcggcggaa caacaccttt 420

ctcagcctcc gggatgtgtt cggcaaagat ttaatctaca cactgtatta ctggaagtcc 480

tcttcctccg gcaagaagac agctaaaacc aacacaaacg agtttttaat cgacgtggat 540

aaaggcgaaa actactgttt cagcgtgcaa gctgtgatcc cctcccggac cgtgaatagg 600

aaaagcaccg atagccccgt tgagtgcatg ggccaagaaa agggcgagtt ccgggag 657

<210> 3

<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 3

Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

20 25 30

Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys

35 40 45

Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val

50 55 60

Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn

85 90 95

Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

115 120 125

Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

<210> 4

<211> 219

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 4

Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser

1 5 10 15

Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln

20 25 30

Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Ala Lys Ser Lys

35 40 45

Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val

50 55 60

Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala

65 70 75 80

Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Ala Glu Asn

85 90 95

Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr

100 105 110

Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu

115 120 125

Asp Glu Arg Thr Leu Val Ala Arg Asn Asn Thr Ala Leu Ser Leu Arg

130 135 140

Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser

145 150 155 160

Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu

165 170 175

Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val

180 185 190

Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu

195 200 205

Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

210 215

<210> 5

<211> 223

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 5

Ala Gly Ile Pro Glu Lys Ala Phe Asn Leu Thr Trp Ile Ser Thr Asp

1 5 10 15

Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr Tyr

20 25 30

Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Asn Lys Cys Phe

35 40 45

Ser Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp

50 55 60

Val Thr Trp Ala Tyr Glu Ala Lys Val Leu Ser Val Pro Arg Arg Asn

65 70 75 80

Ser Val His Gly Asp Gly Asp Gln Leu Val Ile His Gly Glu Glu Pro

85 90 95

Pro Phe Thr Asn Ala Pro Lys Phe Leu Pro Tyr Arg Asp Thr Asn Leu

100 105 110

Gly Gln Pro Val Ile Gln Gln Phe Glu Gln Asp Gly Arg Lys Leu Asn

115 120 125

Val Val Val Lys Asp Ser Leu Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr Phe

130 135 140

Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Lys Asp Leu Gly Tyr Ile Ile Thr

145 150 155 160

Tyr Arg Lys Gly Ser Ser Thr Gly Lys Lys Thr Asn Ile Thr Asn Thr

165 170 175

Asn Glu Phe Ser Ile Asp Val Glu Glu Gly Val Ser Tyr Cys Phe Phe

180 185 190

Val Gln Ala Met Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn Gln Asn Ser Pro Gly

195 200 205

Ser Ser Thr Val Cys Thr Glu Gln Trp Lys Ser Phe Leu Gly Glu

210 215 220

<210> 6

<211> 224

<212> PRT

<213> 大鼠

<220>

<221> source

<223> /标注=“组织因子”

<400> 6

Ala Gly Thr Pro Pro Gly Lys Ala Phe Asn Leu Thr Trp Ile Ser Thr

1 5 10 15

Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr

20 25 30

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Tyr Lys Cys

35 40 45

Thr Gly Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

50 55 60

Asp Val Asn Trp Thr Tyr Glu Ala Arg Val Leu Ser Val Pro Trp Arg

65 70 75 80

Asn Ser Thr His Gly Lys Glu Thr Leu Phe Gly Thr His Gly Glu Glu

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Pro Pro Phe Thr Asn Ala Arg Lys Phe Leu Pro Tyr Arg Asp Thr Lys

100 105 110

Ile Gly Gln Pro Val Ile Gln Lys Tyr Glu Gln Gly Gly Thr Lys Leu

115 120 125

Lys Val Thr Val Lys Asp Ser Phe Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr

130 135 140

Phe Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Asn Asp Leu Gly Tyr Ile Leu

145 150 155 160

Thr Tyr Arg Lys Asp Ser Ser Thr Gly Arg Lys Thr Asn Thr Thr His

165 170 175

Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Glu Lys Gly Val Ser Tyr Cys Phe

180 185 190

Phe Ala Gln Ala Val Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn His Lys Ser Pro

195 200 205

Glu Ser Ile Thr Lys Cys Thr Glu Gln Trp Lys Ser Val Leu Gly Glu

210 215 220

<210> 7

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成接头序列”

<400> 7

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 8

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成接头序列”

<400> 8

ggcggtggag gatccggagg aggtggctcc ggcggcggag gatct 45

<210> 9

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-2”

<400> 9

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 10

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-3”

<400> 10

Ala Pro Met Thr Gln Thr Thr Pro Leu Lys Thr Ser Trp Val Asn Cys

1 5 10 15

Ser Asn Met Ile Asp Glu Ile Ile Thr His Leu Lys Gln Pro Pro Leu

20 25 30

Pro Leu Leu Asp Phe Asn Asn Leu Asn Gly Glu Asp Gln Asp Ile Leu

35 40 45

Met Glu Asn Asn Leu Arg Arg Pro Asn Leu Glu Ala Phe Asn Arg Ala

50 55 60

Val Lys Ser Leu Gln Asn Ala Ser Ala Ile Glu Ser Ile Leu Lys Asn

65 70 75 80

Leu Leu Pro Cys Leu Pro Leu Ala Thr Ala Ala Pro Thr Arg His Pro

85 90 95

Ile His Ile Lys Asp Gly Asp Trp Asn Glu Phe Arg Arg Lys Leu Thr

100 105 110

Phe Tyr Leu Lys Thr Leu Glu Asn Ala Gln Ala Gln Gln Thr Thr Leu

115 120 125

Ser Leu Ala Ile Phe

130

<210> 11

<211> 152

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-7”

<400> 11

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150

<210> 12

<211> 79

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-8”

<400> 12

Glu Gly Ala Val Leu Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys

1 5 10 15

Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu

20 25 30

Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro His Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val

35 40 45

Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp

50 55 60

Val Gln Arg Val Val Glu Lys Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser

65 70 75

<210> 13

<211> 160

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-10”

<400> 13

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

<210> 14

<211> 114

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-15”

<400> 14

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

1 5 10 15

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

20 25 30

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

35 40 45

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

50 55 60

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

65 70 75 80

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

85 90 95

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

100 105 110

Thr Ser

<210> 15

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-17”

<400> 15

Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys

1 5 10 15

Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn

20 25 30

Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr

35 40 45

Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser

50 55 60

Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp

65 70 75 80

Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile

85 90 95

Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu

100 105 110

Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val

115 120 125

His His Val Ala

130

<210> 16

<211> 157

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-18”

<400> 16

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp

145 150 155

<210> 17

<211> 352

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“PDGF-DD”

<400> 17

Arg Asp Thr Ser Ala Thr Pro Gln Ser Ala Ser Ile Lys Ala Leu Arg

1 5 10 15

Asn Ala Asn Leu Arg Arg Asp Glu Ser Asn His Leu Thr Asp Leu Tyr

20 25 30

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<213> 智人

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Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met

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<213> 智人

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Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile

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Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met

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Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser

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Gly

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<212> PRT

<213> 智人

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Arg

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<212> DNA

<213> 智人

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agcctcaccg agtgcgtgct gaataaggct accaacgtgg ctcactggac aacaccctct 180

ttaaagtgca tccgg 195

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<212> DNA

<213> 智人

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aaatgttttt tactggagct gcaagttatc tctttagaga gcggagacgc tagcatccac 180

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acagagtccg gctgcaagga gtgcgaagag ctggaggaga agaacatcaa ggagtttctg 300

caatcctttg tgcacattgt ccagatgttc atcaatacct cc 342

<210> 31

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 31

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<400> 32

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<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”

<400> 33

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagc 54

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<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成寡核苷酸”

<400> 34

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctcc 54

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成肽”

<400> 35

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<211> 58

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 36

Met Gly Gln Ile Val Thr Met Phe Glu Ala Leu Pro His Ile Ile Asp

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Phe Leu Phe Leu Ala Gly Arg Ser Cys Gly

50 55

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<211> 97

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 37

Met Pro Asn His Gln Ser Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ser Asp Leu Leu

1 5 10 15

Leu Ser Gly Lys Lys Gln Arg Pro His Leu Ala Leu Arg Arg Lys Arg

20 25 30

Arg Arg Glu Met Arg Lys Ile Asn Arg Lys Val Arg Arg Met Asn Leu

35 40 45

Ala Pro Ile Lys Glu Lys Thr Ala Trp Gln His Leu Gln Ala Leu Ile

50 55 60

Ser Glu Ala Glu Glu Val Leu Lys Thr Ser Gln Thr Pro Gln Asn Ser

65 70 75 80

Leu Thr Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Val Leu Gly Pro Pro Val Thr

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Gly

<210> 38

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 38

Met Asp Ser Lys Gly Ser Ser Gln Lys Gly Ser Arg Leu Leu Leu Leu

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Leu Val Val Ser Asn Leu Leu Leu Cys Gln Gly Val Val Ser

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<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成AviTag序列”

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Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Lys Arg Arg Trp Lys Lys Asn Phe Ile Ala Val Ser Ala Ala Asn Arg

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<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 41

Glu Glu Glu Glu Glu Glu Thr

1 5

<210> 42

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 42

Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg

1 5 10

<210> 43

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 43

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 44

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala

1 5

<210> 45

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 45

His His His His His

1 5

<210> 46

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<400> 46

His His His His His His

1 5

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 47

His His His His His His His

1 5

<210> 48

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 48

His His His His His His His His

1 5

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 49

His His His His His His His His His

1 5

<210> 50

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 50

His His His His His His His His His His

1 5 10

<210> 51

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 51

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 10

<210> 52

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 52

Thr Lys Glu Asn Pro Arg Ser Asn Gln Glu Glu Ser Tyr Asp Asp Asn

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Glu Ser

<210> 53

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 53

Lys Glu Thr Ala Ala Ala Lys Phe Glu Arg Gln His Met Asp Ser

1 5 10 15

<210> 54

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 54

Met Asp Glu Lys Thr Thr Gly Trp Arg Gly Gly His Val Val Glu Gly

1 5 10 15

Leu Ala Gly Glu Leu Glu Gln Leu Arg Ala Arg Leu Glu His His Pro

20 25 30

Gln Gly Gln Arg Glu Pro

35

<210> 55

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 55

Ser Leu Ala Glu Leu Leu Asn Ala Gly Leu Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 56

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 56

Thr Gln Asp Pro Ser Arg Val Gly

1 5

<210> 57

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 57

Pro Asp Arg Val Arg Ala Val Ser His Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 58

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 58

Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys

1 5

<210> 59

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 59

Cys Cys Pro Gly Cys Cys

1 5

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<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 60

Glu Val His Thr Asn Gln Asp Pro Leu Asp

1 5 10

<210> 61

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 61

Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr

1 5 10

<210> 62

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 62

Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys

1 5 10

<210> 63

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 63

Asp Leu Tyr Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 64

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成标签序列”

<400> 64

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 10

<210> 65

<211> 471

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-18”

<400> 65

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

aatgcccccc ggaccatctt cattatctcc atgtacaagg acagccagcc ccggggcatg 180

gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga t 471

<210> 66

<211> 306

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-12β”

<400> 66

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser

305

<210> 67

<211> 918

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-12β”

<400> 67

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

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gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

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tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

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<210> 68

<211> 197

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-12α”

<400> 68

Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu

1 5 10 15

His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys

20 25 30

Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp

35 40 45

His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu

50 55 60

Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr

65 70 75 80

Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe

85 90 95

Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr

100 105 110

Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys

115 120 125

Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu

130 135 140

Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser

145 150 155 160

Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu

165 170 175

Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser

180 185 190

Tyr Leu Asn Ala Ser

195

<210> 69

<211> 591

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-12α”

<400> 69

cgtaacctcc ccgtggctac ccccgatccc ggaatgttcc cttgtttaca ccacagccag 60

aatttactga gggccgtgag caacatgctg cagaaagcta ggcagacttt agaattttac 120

ccttgcacca gcgaggagat cgaccatgaa gatatcacca aggacaagac atccaccgtg 180

gaggcttgtt tacctctgga gctgacaaag aacgagtctt gtctcaactc tcgtgaaacc 240

agcttcatca caaatggctc ttgtttagct tcccggaaga cctcctttat gatggcttta 300

tgcctcagct ccatctacga ggatttaaag atgtaccaag tggagttcaa gaccatgaac 360

gccaagctgc tcatggaccc taaacggcag atctttttag accagaacat gctggctgtg 420

attgatgagc tgatgcaagc tttaaacttc aactccgaga ccgtccctca gaagtcctcc 480

ctcgaggagc ccgattttta caagacaaag atcaaactgt gcattttact ccacgccttt 540

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<210> 70

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 70

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

1 5 10 15

Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser Gly Thr

145 150 155 160

Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe

165 170 175

Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr

180 185 190

Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr

195 200 205

Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val

210 215 220

Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val

225 230 235 240

Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu

245 250 255

Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser

260 265 270

Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg

275 280 285

Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe

290 295 300

Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser

305 310 315 320

Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val

325 330 335

Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser

340 345 350

Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly

355 360 365

Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp

370 375 380

Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr

385 390 395 400

Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met

405 410 415

Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp

420 425 430

Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn

435 440 445

Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys

450 455 460

Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val

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His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

485 490

<210> 71

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 71

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

aatgcccccc ggaccatctt cattatctcc atgtacaagg acagccagcc ccggggcatg 180

gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga tagcggcaca 480

accaacacag tcgctgccta taacctcact tggaagagca ccaacttcaa aaccatcctc 540

gaatgggaac ccaaacccgt taaccaagtt tacaccgtgc agatcagcac caagtccggc 600

gactggaagt ccaaatgttt ctataccacc gacaccgagt gcgatctcac cgatgagatc 660

gtgaaagatg tgaaacagac ctacctcgcc cgggtgttta gctaccccgc cggcaatgtg 720

gagagcactg gttccgctgg cgagccttta tacgagaaca gccccgaatt taccccttac 780

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aatgtgacag tggaggacga gcggacttta gtgcggcgga acaacacctt tctcagcctc 900

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ggcaagaaga cagctaaaac caacacaaac gagtttttaa tcgacgtgga taaaggcgaa 1020

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ttatacacag aatccgacgt gcacccctct tgtaaggtga ccgccatgaa atgtttttta 1260

ctggagctgc aagttatctc tttagagagc ggagacgcta gcatccacga caccgtggag 1320

aatttaatca ttttagccaa taactcttta tccagcaacg gcaacgtgac agagtccggc 1380

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<210> 72

<211> 508

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 72

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

20 25 30

Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe

35 40 45

Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile

50 55 60

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

65 70 75 80

Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn

85 90 95

Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp

100 105 110

Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp

115 120 125

Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala

130 135 140

Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp

145 150 155 160

Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser

165 170 175

Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr

180 185 190

Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val

195 200 205

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys

210 215 220

Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

225 230 235 240

Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly

245 250 255

Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

260 265 270

Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile

275 280 285

Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp

290 295 300

Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp

305 310 315 320

Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser

325 330 335

Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile

340 345 350

Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile

355 360 365

Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys

370 375 380

Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile

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Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp

405 410 415

Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr

420 425 430

Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser

435 440 445

Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala

450 455 460

Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys

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Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser

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Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

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<210> 73

<211> 1524

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 73

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagctacttc 60

ggcaaactgg aatccaagct gagcgtgatc cggaatttaa acgaccaagt tctgtttatc 120

gatcaaggta accggcctct gttcgaggac atgaccgact ccgattgccg ggacaatgcc 180

ccccggacca tcttcattat ctccatgtac aaggacagcc agccccgggg catggctgtg 240

acaattagcg tgaagtgtga gaaaatcagc actttatctt gtgagaacaa gatcatctcc 300

tttaaggaaa tgaacccccc cgataacatc aaggacacca agtccgatat catcttcttc 360

cagcggtccg tgcccggtca cgataacaag atgcagttcg aatcctcctc ctacgagggc 420

tactttttag cttgtgaaaa ggagagggat ttattcaagc tgatcctcaa gaaggaggac 480

gagctgggcg atcgttccat catgttcacc gtccaaaacg aggatagcgg cacaaccaac 540

acagtcgctg cctataacct cacttggaag agcaccaact tcaaaaccat cctcgaatgg 600

gaacccaaac ccgttaacca agtttacacc gtgcagatca gcaccaagtc cggcgactgg 660

aagtccaaat gtttctatac caccgacacc gagtgcgatc tcaccgatga gatcgtgaaa 720

gatgtgaaac agacctacct cgcccgggtg tttagctacc ccgccggcaa tgtggagagc 780

actggttccg ctggcgagcc tttatacgag aacagccccg aatttacccc ttacctcgag 840

accaatttag gacagcccac catccaaagc tttgagcaag ttggcacaaa ggtgaatgtg 900

acagtggagg acgagcggac tttagtgcgg cggaacaaca cctttctcag cctccgggat 960

gtgttcggca aagatttaat ctacacactg tattactgga agtcctcttc ctccggcaag 1020

aagacagcta aaaccaacac aaacgagttt ttaatcgacg tggataaagg cgaaaactac 1080

tgtttcagcg tgcaagctgt gatcccctcc cggaccgtga ataggaaaag caccgatagc 1140

cccgttgagt gcatgggcca agaaaagggc gagttccggg agaactgggt gaacgtcatc 1200

agcgatttaa agaagatcga agatttaatt cagtccatgc atatcgacgc cactttatac 1260

acagaatccg acgtgcaccc ctcttgtaag gtgaccgcca tgaaatgttt tttactggag 1320

ctgcaagtta tctctttaga gagcggagac gctagcatcc acgacaccgt ggagaattta 1380

atcattttag ccaataactc tttatccagc aacggcaacg tgacagagtc cggctgcaag 1440

gagtgcgaag agctggagga gaagaacatc aaggagtttc tgcaatcctt tgtgcacatt 1500

gtccagatgt tcatcaatac ctcc 1524

<210> 74

<211> 583

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 74

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu

515 520 525

His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg

530 535 540

Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu

545 550 555 560

Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr

565 570 575

Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

580

<210> 75

<211> 1749

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 75

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttccgg cggtggagga tccggaggag gtggctccgg cggcggagga 960

tctcgtaacc tccccgtggc tacccccgat cccggaatgt tcccttgttt acaccacagc 1020

cagaatttac tgagggccgt gagcaacatg ctgcagaaag ctaggcagac tttagaattt 1080

tacccttgca ccagcgagga gatcgaccat gaagatatca ccaaggacaa gacatccacc 1140

gtggaggctt gtttacctct ggagctgaca aagaacgagt cttgtctcaa ctctcgtgaa 1200

accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260

ttatgcctca gctccatcta cgaggattta aagatgtacc aagtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctcatgga ccctaaacgg cagatctttt tagaccagaa catgctggct 1380

gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440

tccctcgagg agcccgattt ttacaagaca aagatcaaac tgtgcatttt actccacgcc 1500

tttaggatcc gggccgtgac cattgaccgg gtcatgagct atttaaacgc cagcattaca 1560

tgcccccctc ccatgagcgt ggagcacgcc gacatctggg tgaagagcta tagcctctac 1620

agccgggaga ggtatatctg taacagcggc ttcaagagga aggccggcac cagcagcctc 1680

accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 1740

tgcatccgg 1749

<210> 76

<211> 601

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 76

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

20 25 30

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

305 310 315 320

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

325 330 335

Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

385 390 395 400

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

405 410 415

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

420 425 430

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

435 440 445

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

450 455 460

Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile

465 470 475 480

Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

485 490 495

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

500 505 510

Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

515 520 525

Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

530 535 540

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

545 550 555 560

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

565 570 575

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

580 585 590

Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

595 600

<210> 77

<211> 1803

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s序列”

<400> 77

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctccatttgg 60

gaactgaaga aggacgtcta cgtggtcgaa ctggactggt atcccgatgc tcccggcgaa 120

atggtggtgc tcacttgtga cacccccgaa gaagacggca tcacttggac cctcgatcag 180

agcagcgagg tgctgggctc cggaaagacc ctcacaatcc aagttaagga gttcggagac 240

gctggccaat acacatgcca caagggaggc gaggtgctca gccattcctt attattatta 300

cacaagaagg aagacggaat ctggtccacc gacattttaa aagatcagaa ggagcccaag 360

aataagacct ttttaaggtg tgaggccaaa aactacagcg gtcgtttcac ttgttggtgg 420

ctgaccacca tttccaccga tttaaccttc tccgtgaaaa gcagccgggg aagctccgac 480

cctcaaggtg tgacatgtgg agccgctacc ctcagcgctg agagggttcg tggcgataac 540

aaggaatacg agtacagcgt ggagtgccaa gaagatagcg cttgtcccgc tgccgaagaa 600

tctttaccca ttgaggtgat ggtggacgcc gtgcacaaac tcaagtacga gaactacacc 660

tcctccttct ttatccggga catcattaag cccgatcctc ctaagaattt acagctgaag 720

cctctcaaaa atagccggca agttgaggtc tcttgggaat atcccgacac ttggagcaca 780

ccccacagct acttctcttt aaccttttgt gtgcaagttc aaggtaaaag caagcgggag 840

aagaaagacc gggtgtttac cgacaaaacc agcgccaccg tcatctgtcg gaagaacgcc 900

tccatcagcg tgagggctca agatcgttat tactccagca gctggtccga gtgggccagc 960

gtgccttgtt ccggcggtgg aggatccgga ggaggtggct ccggcggcgg aggatctcgt 1020

aacctccccg tggctacccc cgatcccgga atgttccctt gtttacacca cagccagaat 1080

ttactgaggg ccgtgagcaa catgctgcag aaagctaggc agactttaga attttaccct 1140

tgcaccagcg aggagatcga ccatgaagat atcaccaagg acaagacatc caccgtggag 1200

gcttgtttac ctctggagct gacaaagaac gagtcttgtc tcaactctcg tgaaaccagc 1260

ttcatcacaa atggctcttg tttagcttcc cggaagacct cctttatgat ggctttatgc 1320

ctcagctcca tctacgagga tttaaagatg taccaagtgg agttcaagac catgaacgcc 1380

aagctgctca tggaccctaa acggcagatc tttttagacc agaacatgct ggctgtgatt 1440

gatgagctga tgcaagcttt aaacttcaac tccgagaccg tccctcagaa gtcctccctc 1500

gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcat tacatgcccc 1620

cctcccatga gcgtggagca cgccgacatc tgggtgaaga gctatagcct ctacagccgg 1680

gagaggtata tctgtaacag cggcttcaag aggaaggccg gcaccagcag cctcaccgag 1740

tgcgtgctga ataaggctac caacgtggct cactggacaa caccctcttt aaagtgcatc 1800

cgg 1803

<210> 78

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-21”

<400> 78

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser

130

<210> 79

<211> 399

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL7RA MCP插入序列”

<400> 79

cagggccagg acaggcacat gatccggatg aggcagctca tcgacatcgt cgaccagctg 60

aagaactacg tgaacgacct ggtgcccgag tttctgcctg cccccgagga cgtggagacc 120

aactgcgagt ggtccgcctt ctcctgcttt cagaaggccc agctgaagtc cgccaacacc 180

ggcaacaacg agcggatcat caacgtgagc atcaagaagc tgaagcggaa gcctccctcc 240

acaaacgccg gcaggaggca gaagcacagg ctgacctgcc ccagctgtga ctcctacgag 300

aagaagcccc ccaaggagtt cctggagagg ttcaagtccc tgctgcagaa gatgatccat 360

cagcacctgt cctccaggac ccacggctcc gaggactcc 399

<210> 80

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 80

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp

130 135

<210> 81

<211> 136

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 81

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp

130 135

<210> 82

<211> 408

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 82

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgat 408

<210> 83

<211> 408

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 83

attcctcccc acgtgcagaa gagcgtgaat aatgacatga tcgtgaccga taacaatggc 60

gccgtgaaat ttccccagct gtgcaaattc tgcgatgtga ggttttccac ctgcgacaac 120

cagaagtcct gtatgagcaa ctgcacaatc acctccatct gtgagaagcc tcaggaggtg 180

tgcgtggctg tctggcggaa gaatgacgag aatatcaccc tggaaaccgt ctgccacgat 240

cccaagctgc cctaccacga tttcatcctg gaagacgccg ccagccctaa gtgcatcatg 300

aaagagaaaa agaagcctgg cgagaccttt ttcatgtgct cctgcagcag cgacgaatgc 360

aacgacaata tcatctttag cgaggaatac aataccagca accccgac 408

<210> 84

<211> 960

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 84

aactgggtga atgtgatcag cgacctgaag aagatcgagg atctgatcca gagcatgcac 60

attgatgcca ccctgtacac agaatctgat gtgcacccta tcccccccca tgtgcaaaag 120

agcgtgaaca acgatatgat cgtgaccgac aacaacggcg ccgtgaagtt tccccagctc 180

tgcaagttct gcgatgtcag gttcagcacc tgcgataatc agaagtcctg catgtccaac 240

tgcacgatca cctccatctg cgagaagccc caagaagtgt gcgtggccgt gtggcggaaa 300

aatgacgaga acatcaccct ggagaccgtg tgtcacgacc ccaagctccc ttatcacgac 360

ttcattctgg aggacgctgc ctcccccaaa tgcatcatga aggagaagaa gaagcccgga 420

gagaccttct ttatgtgttc ctgtagcagc gacgagtgta acgacaacat catcttcagc 480

gaagagtaca acaccagcaa ccctgatgga ggtggcggat ccggaggtgg aggttctggt 540

ggaggtggga gtattcctcc ccacgtgcag aagagcgtga ataatgacat gatcgtgacc 600

gataacaatg gcgccgtgaa atttccccag ctgtgcaaat tctgcgatgt gaggttttcc 660

acctgcgaca accagaagtc ctgtatgagc aactgcacaa tcacctccat ctgtgagaag 720

cctcaggagg tgtgcgtggc tgtctggcgg aagaatgacg agaatatcac cctggaaacc 780

gtctgccacg atcccaagct gccctaccac gatttcatcc tggaagacgc cgccagccct 840

aagtgcatca tgaaagagaa aaagaagcct ggcgagacct ttttcatgtg ctcctgcagc 900

agcgacgaat gcaacgacaa tatcatcttt agcgaggaat acaataccag caaccccgac 960

<210> 85

<211> 287

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“TGFRβRII”

<400> 85

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp

275 280 285

<210> 86

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 86

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn

130 135 140

Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro

145 150 155 160

Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu

180 185 190

Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val

195 200 205

Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu

210 215 220

Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn

225 230 235 240

Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val

245 250 255

Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu

275 280 285

Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn

290 295 300

Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe

305 310 315 320

Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr

325 330 335

Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

340 345 350

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

355 360 365

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

370 375 380

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

385 390 395 400

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

405 410 415

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

420 425 430

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

435 440 445

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

450 455 460

Thr Ser

465

<210> 87

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 87

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aagcccgtca atcaagttta caccgtgcag atctccacca aatccggaga ctggaagagc 540

aagtgcttct acacaacaga caccgagtgt gatttaaccg acgaaatcgt caaggacgtc 600

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tccgctggcg agcctctcta cgagaattcc cccgaattca ccccttattt agagaccaat 720

ttaggccagc ctaccatcca gagcttcgag caagttggca ccaaggtgaa cgtcaccgtc 780

gaggatgaaa ggactttagt gcggcggaat aacacatttt tatccctccg ggatgtgttc 840

ggcaaagacc tcatctacac actgtactat tggaagtcca gctcctccgg caaaaagacc 900

gctaagacca acaccaacga gtttttaatt gacgtggaca aaggcgagaa ctactgcttc 960

agcgtgcaag ccgtgatccc ttctcgtacc gtcaaccgga agagcacaga ttcccccgtt 1020

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tccgacgtgc acccctcttg taaggtgacc gccatgaaat gttttttact ggagctgcaa 1200

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ttagccaata actctttatc cagcaacggc aacgtgacag agtccggctg caaggagtgc 1320

gaagagctgg aggagaagaa catcaaggag tttctgcaat cctttgtgca cattgtccag 1380

atgttcatca atacctcc 1398

<210> 88

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 88

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp

165 170 175

Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys

180 185 190

Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys

195 200 205

Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala

210 215 220

Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala

225 230 235 240

Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu

245 250 255

Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr

260 265 270

Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn

275 280 285

Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr

290 295 300

Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys

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Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr

325 330 335

Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys

340 345 350

Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe

355 360 365

Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp

370 375 380

Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp

385 390 395 400

Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu

405 410 415

Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr

420 425 430

Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly

435 440 445

Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys

450 455 460

Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe

465 470 475 480

Ile Asn Thr Ser

<210> 89

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 89

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

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gaaaggactt tagtgcggcg gaataacaca tttttatccc tccgggatgt gttcggcaaa 900

gacctcatct acacactgta ctattggaag tccagctcct ccggcaaaaa gaccgctaag 960

accaacacca acgagttttt aattgacgtg gacaaaggcg agaactactg cttcagcgtg 1020

caagccgtga tcccttctcg taccgtcaac cggaagagca cagattcccc cgttgagtgc 1080

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aagatcgaag atttaattca gtccatgcat atcgacgcca ctttatacac agaatccgac 1200

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<210> 90

<211> 352

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 90

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

1 5 10 15

Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

20 25 30

Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

35 40 45

Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

50 55 60

Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

65 70 75 80

Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

85 90 95

Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

100 105 110

Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ile

275 280 285

Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys

290 295 300

Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe

305 310 315 320

Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

340 345 350

<210> 91

<211> 1056

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 91

atcccccccc atgtgcaaaa gagcgtgaac aacgatatga tcgtgaccga caacaacggc 60

gccgtgaagt ttccccagct ctgcaagttc tgcgatgtca ggttcagcac ctgcgataat 120

cagaagtcct gcatgtccaa ctgcacgatc acctccatct gcgagaagcc ccaagaagtg 180

tgcgtggccg tgtggcggaa aaatgacgag aacatcaccc tggagaccgt gtgtcacgac 240

cccaagctcc cttatcacga cttcattctg gaggacgctg cctcccccaa atgcatcatg 300

aaggagaaga agaagcccgg agagaccttc tttatgtgtt cctgtagcag cgacgagtgt 360

aacgacaaca tcatcttcag cgaagagtac aacaccagca accctgatgg aggtggcgga 420

tccggaggtg gaggttctgg tggaggtggg agtattcctc cccacgtgca gaagagcgtg 480

aataatgaca tgatcgtgac cgataacaat ggcgccgtga aatttcccca gctgtgcaaa 540

ttctgcgatg tgaggttttc cacctgcgac aaccagaagt cctgtatgag caactgcaca 600

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gagaatatca ccctggaaac cgtctgccac gatcccaagc tgccctacca cgatttcatc 720

ctggaagacg ccgccagccc taagtgcatc atgaaagaga aaaagaagcc tggcgagacc 780

tttttcatgt gctcctgcag cagcgacgaa tgcaacgaca atatcatctt tagcgaggaa 840

tacaatacca gcaaccccga catcacgtgt cctcctccta tgtccgtgga acacgcagac 900

atctgggtca agagctacag cttgtactcc agggagcggt acatttgtaa ctctggtttc 960

aagcgtaaag ccggcacgtc cagcctgacg gagtgcgtgt tgaacaaggc cacgaatgtc 1020

gcccactgga caacccccag tctcaaatgt attaga 1056

<210> 92

<211> 370

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 92

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile

20 25 30

Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe

35 40 45

Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser

50 55 60

Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val

65 70 75 80

Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys

85 90 95

His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala

100 105 110

Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe

115 120 125

Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe

130 135 140

Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys

165 170 175

Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys

180 185 190

Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp

195 200 205

Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu

210 215 220

Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp

245 250 255

Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys

260 265 270

Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu

275 280 285

Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro

290 295 300

Asp Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp

305 310 315 320

Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser

325 330 335

Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu

340 345 350

Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys

355 360 365

Ile Arg

370

<210> 93

<211> 1110

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-TGFRs序列”

<400> 93

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccatcccc 60

ccccatgtgc aaaagagcgt gaacaacgat atgatcgtga ccgacaacaa cggcgccgtg 120

aagtttcccc agctctgcaa gttctgcgat gtcaggttca gcacctgcga taatcagaag 180

tcctgcatgt ccaactgcac gatcacctcc atctgcgaga agccccaaga agtgtgcgtg 240

gccgtgtggc ggaaaaatga cgagaacatc accctggaga ccgtgtgtca cgaccccaag 300

ctcccttatc acgacttcat tctggaggac gctgcctccc ccaaatgcat catgaaggag 360

aagaagaagc ccggagagac cttctttatg tgttcctgta gcagcgacga gtgtaacgac 420

aacatcatct tcagcgaaga gtacaacacc agcaaccctg atggaggtgg cggatccgga 480

ggtggaggtt ctggtggagg tgggagtatt cctccccacg tgcagaagag cgtgaataat 540

gacatgatcg tgaccgataa caatggcgcc gtgaaatttc cccagctgtg caaattctgc 600

gatgtgaggt tttccacctg cgacaaccag aagtcctgta tgagcaactg cacaatcacc 660

tccatctgtg agaagcctca ggaggtgtgc gtggctgtct ggcggaagaa tgacgagaat 720

atcaccctgg aaaccgtctg ccacgatccc aagctgccct accacgattt catcctggaa 780

gacgccgcca gccctaagtg catcatgaaa gagaaaaaga agcctggcga gacctttttc 840

atgtgctcct gcagcagcga cgaatgcaac gacaatatca tctttagcga ggaatacaat 900

accagcaacc ccgacatcac gtgtcctcct cctatgtccg tggaacacgc agacatctgg 960

gtcaagagct acagcttgta ctccagggag cggtacattt gtaactctgg tttcaagcgt 1020

aaagccggca cgtccagcct gacggagtgc gtgttgaaca aggccacgaa tgtcgcccac 1080

tggacaaccc ccagtctcaa atgtattaga 1110

<210> 94

<211> 399

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> source

<223> /标注=“IL-21”

<400> 94

caaggtcaag atcgccacat gattagaatg cgtcaactta tagatattgt tgatcagctg 60

aaaaattatg tgaatgactt ggtccctgaa tttctgccag ctccagaaga tgtagagaca 120

aactgtgagt ggtcagcttt ttcctgtttt cagaaggccc aactaaagtc agcaaataca 180

ggaaacaatg aaaggataat caatgtatca attaaaaagc tgaagaggaa accaccttcc 240

acaaatgcag ggagaagaca gaaacacaga ctaacatgcc cttcatgtga ttcttatgag 300

aaaaaaccac ccaaagaatt cctagaaaga ttcaaatcac ttctccaaaa gatgattcat 360

cagcatctgt cctctagaac acacggaagt gaagattcc 399

<210> 95

<211> 456

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-7序列”

<400> 95

gattgtgata ttgaaggtaa agatggcaaa caatatgaga gtgttctaat ggtcagcatc 60

gatcaattat tggacagcat gaaagaaatt ggtagcaatt gcctgaataa tgaatttaac 120

ttttttaaaa gacatatctg tgatgctaat aaggaaggta tgtttttatt ccgtgctgct 180

cgcaagttga ggcaatttct taaaatgaat agcactggtg attttgatct ccacttatta 240

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gaacagaaaa aactgaatga cttgtgtttc ctaaagagac tattacaaga gataaaaact 420

tgttggaata aaattttgat gggcactaaa gaacac 456

<210> 96

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成多肽”

<400> 96

Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

1 5 10 15

Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

20 25 30

Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn

130 135 140

Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro

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Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly

165 170 175

Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu

180 185 190

Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val

195 200 205

Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu

210 215 220

Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn

225 230 235 240

Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val

245 250 255

Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu

275 280 285

Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn

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Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe

305 310 315 320

Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr

325 330 335

Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu

340 345 350

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

355 360 365

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

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Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

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Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

405 410 415

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

420 425 430

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

435 440 445

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

450 455 460

Thr Ser

465

<210> 97

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 97

caaggtcaag atcgccacat gattagaatg cgtcaactta tagatattgt tgatcagctg 60

aaaaattatg tgaatgactt ggtccctgaa tttctgccag ctccagaaga tgtagagaca 120

aactgtgagt ggtcagcttt ttcctgtttt cagaaggccc aactaaagtc agcaaataca 180

ggaaacaatg aaaggataat caatgtatca attaaaaagc tgaagaggaa accaccttcc 240

acaaatgcag ggagaagaca gaaacacaga ctaacatgcc cttcatgtga ttcttatgag 300

aaaaaaccac ccaaagaatt cctagaaaga ttcaaatcac ttctccaaaa gatgattcat 360

cagcatctgt cctctagaac acacggaagt gaagattcct caggcactac aaatactgtg 420

gcagcatata atttaacttg gaaatcaact aatttcaaga caattttgga gtgggaaccc 480

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 98

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

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Ala Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp

20 25 30

Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe

35 40 45

Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe

50 55 60

Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn

65 70 75 80

Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro

85 90 95

Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser

100 105 110

Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe

115 120 125

Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr

130 135 140

His Gly Ser Glu Asp Ser Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr

145 150 155 160

Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu

165 170 175

Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser

180 185 190

Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp

195 200 205

Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg

210 215 220

Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly

225 230 235 240

Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr

245 250 255

Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys

260 265 270

Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn

275 280 285

Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr

290 295 300

Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr

305 310 315 320

Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys

325 330 335

Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser

340 345 350

Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg

355 360 365

Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu

370 375 380

Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val

385 390 395 400

His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu

405 410 415

Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val

420 425 430

Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn

435 440 445

Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn

450 455 460

Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile

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Asn Thr Ser

<210> 99

<211> 1449

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 99

atgggagtga aagttctttt tgcccttatt tgtattgctg tggccgaggc ccaaggtcaa 60

gatcgccaca tgattagaat gcgtcaactt atagatattg ttgatcagct gaaaaattat 120

gtgaatgact tggtccctga atttctgcca gctccagaag atgtagagac aaactgtgag 180

tggtcagctt tttcctgttt tcagaaggcc caactaaagt cagcaaatac aggaaacaat 240

gaaaggataa tcaatgtatc aattaaaaag ctgaagagga aaccaccttc cacaaatgca 300

gggagaagac agaaacacag actaacatgc ccttcatgtg attcttatga gaaaaaacca 360

cccaaagaat tcctagaaag attcaaatca cttctccaaa agatgattca tcagcatctg 420

tcctctagaa cacacggaag tgaagattcc tcaggcacta caaatactgt ggcagcatat 480

aatttaactt ggaaatcaac taatttcaag acaattttgg agtgggaacc caaacccgtc 540

aatcaagtct acactgttca aataagcact aagtcaggag attggaaaag caaatgcttt 600

tacacaacag acacagagtg tgacctcacc gacgagattg tgaaggatgt gaagcagacg 660

tacttggcac gggtcttctc ctacccggca gggaatgtgg agagcaccgg ttctgctggg 720

gagcctctgt atgagaactc cccagagttc acaccttacc tggagacaaa cctcggacag 780

ccaacaattc agagttttga acaggtggga acaaaagtga atgtgaccgt agaagatgaa 840

cggactttag tcagaaggaa caacactttc ctaagcctcc gggatgtttt tggcaaggac 900

ttaatttata cactttatta ttggaaatct tcaagttcag gaaagaaaac agccaaaaca 960

aacactaatg agtttttgat tgatgtggat aaaggagaaa actactgttt cagtgttcaa 1020

gcagtgattc cctcccgaac agttaaccgg aagagtacag acagcccggt agagtgtatg 1080

ggccaggaga aaggggaatt cagagaaaac tgggtgaacg tcatcagcga tttaaagaag 1140

atcgaagatt taattcagtc catgcatatc gacgccactt tatacacaga atccgacgtg 1200

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<210> 100

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 100

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

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Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

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Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

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65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

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Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

145 150 155 160

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

165 170 175

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

180 185 190

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

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Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

210 215

<210> 101

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 101

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gatcaattat tggacagcat gaaagaaatt ggtagcaatt gcctgaataa tgaatttaac 120

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cgcaagttga ggcaatttct taaaatgaat agcactggtg attttgatct ccacttatta 240

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ccagctgccc tgggtgaagc ccaaccaaca aagagtttgg aagaaaataa atctttaaag 360

gaacagaaaa aactgaatga cttgtgtttc ctaaagagac tattacaaga gataaaaact 420

tgttggaata aaattttgat gggcactaaa gaacacatca cgtgccctcc ccccatgtcc 480

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<210> 102

<211> 234

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

<400> 102

Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu

1 5 10 15

Ala Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val

20 25 30

Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly

35 40 45

Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys

50 55 60

Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu

65 70 75 80

Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu

85 90 95

Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln

100 105 110

Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys

115 120 125

Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp

130 135 140

Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn

145 150 155 160

Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met

165 170 175

Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser

180 185 190

Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr

195 200 205

Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His

210 215 220

Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

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<210> 103

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成21t15-7s序列”

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attgaaggta aagatggcaa acaatatgag agtgttctaa tggtcagcat cgatcaatta 120

ttggacagca tgaaagaaat tggtagcaat tgcctgaata atgaatttaa cttttttaaa 180

agacatatct gtgatgctaa taaggaaggt atgtttttat tccgtgctgc tcgcaagttg 240

aggcaatttc ttaaaatgaa tagcactggt gattttgatc tccacttatt aaaagtttca 300

gaaggcacaa caatactgtt gaactgcact ggccaggtta aaggaagaaa accagctgcc 360

ctgggtgaag cccaaccaac aaagagtttg gaagaaaata aatctttaaa ggaacagaaa 420

aaactgaatg acttgtgttt cctaaagaga ctattacaag agataaaaac ttgttggaat 480

aaaattttga tgggcactaa agaacacatc acgtgccctc cccccatgtc cgtggaacac 540

gcagacatct gggtcaagag ctacagcttg tactccaggg agcggtacat ttgtaactct 600

ggtttcaagc gtaaagccgg cacgtccagc ctgacggagt gcgtgttgaa caaggccacg 660

aatgtcgccc actggacaac ccccagtctc aaatgcatta ga 702

<210> 104

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 104

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

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Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

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Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala

145 150 155 160

Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu

165 170 175

Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr

180 185 190

Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu

195 200 205

Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu

210 215 220

Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser

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Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu

245 250 255

Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly

260 265 270

Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg

275 280 285

Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile

290 295 300

Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala

305 310 315 320

Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn

325 330 335

Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg

340 345 350

Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu

355 360 365

Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu

370 375 380

Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser

385 390 395 400

Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu

405 410 415

Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp

420 425 430

Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn

435 440 445

Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu

450 455 460

Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met

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Phe Ile Asn Thr Ser

485

<210> 105

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 105

gattgcgaca tcgagggcaa ggacggcaag cagtacgaga gcgtgctgat ggtgtccatc 60

gaccagctgc tggacagcat gaaggagatc ggctccaact gcctcaacaa cgagttcaac 120

ttcttcaagc ggcacatctg cgacgccaac aaggagggca tgttcctgtt cagggccgcc 180

aggaaactgc ggcagttcct gaagatgaac tccaccggcg acttcgacct gcacctgctg 240

aaggtgtccg agggcaccac catcctgctg aactgcaccg gacaggtgaa gggccggaaa 300

cctgctgctc tgggagaggc ccaacccacc aagagcctgg aggagaacaa gtccctgaag 360

gagcagaaga agctgaacga cctgtgcttc ctgaagaggc tgctgcagga gatcaagacc 420

tgctggaaca agatcctgat gggcaccaag gagcatagcg gcacaaccaa cacagtcgct 480

gcctataacc tcacttggaa gagcaccaac ttcaaaacca tcctcgaatg ggaacccaaa 540

cccgttaacc aagtttacac cgtgcagatc agcaccaagt ccggcgactg gaagtccaaa 600

tgtttctata ccaccgacac cgagtgcgat ctcaccgatg agatcgtgaa agatgtgaaa 660

cagacctacc tcgcccgggt gtttagctac cccgccggca atgtggagag cactggttcc 720

gctggcgagc ctttatacga gaacagcccc gaatttaccc cttacctcga gaccaattta 780

ggacagccca ccatccaaag ctttgagcaa gttggcacaa aggtgaatgt gacagtggag 840

gacgagcgga ctttagtgcg gcggaacaac acctttctca gcctccggga tgtgttcggc 900

aaagatttaa tctacacact gtattactgg aagtcctctt cctccggcaa gaagacagct 960

aaaaccaaca caaacgagtt tttaatcgac gtggataaag gcgaaaacta ctgtttcagc 1020

gtgcaagctg tgatcccctc ccggaccgtg aataggaaaa gcaccgatag ccccgttgag 1080

tgcatgggcc aagaaaaggg cgagttccgg gagaactggg tgaacgtcat cagcgattta 1140

aagaagatcg aagatttaat tcagtccatg catatcgacg ccactttata cacagaatcc 1200

gacgtgcacc cctcttgtaa ggtgaccgcc atgaaatgtt ttttactgga gctgcaagtt 1260

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<210> 106

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 106

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

20 25 30

Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

35 40 45

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

50 55 60

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

65 70 75 80

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

85 90 95

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

100 105 110

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

115 120 125

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

130 135 140

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

145 150 155 160

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr

165 170 175

Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile

180 185 190

Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile

195 200 205

Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp

210 215 220

Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr

225 230 235 240

Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr

245 250 255

Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro

260 265 270

Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln

275 280 285

Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val

290 295 300

Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp

305 310 315 320

Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys

325 330 335

Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly

340 345 350

Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val

355 360 365

Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys

370 375 380

Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys

385 390 395 400

Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr

405 410 415

Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe

420 425 430

Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile

435 440 445

His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser

450 455 460

Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu

465 470 475 480

Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val

485 490 495

Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-21s序列”

<400> 107

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccgattgc 60

gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac gagagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag 120

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ctgcggcagt tcctgaagat gaactccacc ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg 300

tccgagggca ccaccatcct gctgaactgc accggacagg tgaagggccg gaaacctgct 360

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aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag aggctgctgc aggagatcaa gacctgctgg 480

aacaagatcc tgatgggcac caaggagcat agcggcacaa ccaacacagt cgctgcctat 540

aacctcactt ggaagagcac caacttcaaa accatcctcg aatgggaacc caaacccgtt 600

aaccaagttt acaccgtgca gatcagcacc aagtccggcg actggaagtc caaatgtttc 660

tataccaccg acaccgagtg cgatctcacc gatgagatcg tgaaagatgt gaaacagacc 720

tacctcgccc gggtgtttag ctaccccgcc ggcaatgtgg agagcactgg ttccgctggc 780

gagcctttat acgagaacag ccccgaattt accccttacc tcgagaccaa tttaggacag 840

cccaccatcc aaagctttga gcaagttggc acaaaggtga atgtgacagt ggaggacgag 900

cggactttag tgcggcggaa caacaccttt ctcagcctcc gggatgtgtt cggcaaagat 960

ttaatctaca cactgtatta ctggaagtcc tcttcctccg gcaagaagac agctaaaacc 1020

aacacaaacg agtttttaat cgacgtggat aaaggcgaaa actactgttt cagcgtgcaa 1080

gctgtgatcc cctcccggac cgtgaatagg aaaagcaccg atagccccgt tgagtgcatg 1140

ggccaagaaa agggcgagtt ccgggagaac tgggtgaacg tcatcagcga tttaaagaag 1200

atcgaagatt taattcagtc catgcatatc gacgccactt tatacacaga atccgacgtg 1260

cacccctctt gtaaggtgac cgccatgaaa tgttttttac tggagctgca agttatctct 1320

ttagagagcg gagacgctag catccacgac accgtggaga atttaatcat tttagccaat 1380

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gaggagaaga acatcaagga gtttctgcaa tcctttgtgc acattgtcca gatgttcatc 1500

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Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile

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Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu

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Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser

35 40 45

Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu

50 55 60

Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser

65 70 75 80

Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys

85 90 95

Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys

100 105 110

Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His

115 120 125

Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His

130 135 140

Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr

145 150 155 160

Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr

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Ser Leu Lys Cys Ile Arg

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<210> 110

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<212> PRT

<213> 人工序列

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Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile

20 25 30

Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu

35 40 45

Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala

50 55 60

Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn

65 70 75 80

Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro

85 90 95

Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro

100 105 110

Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg

115 120 125

Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Thr His Gly Ser Glu Asp Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val

145 150 155 160

Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu

165 170 175

Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser

180 185 190

Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr

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Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg

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<210> 111

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<400> 111

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcccagggc 60

caggacaggc acatgatccg gatgaggcag ctcatcgaca tcgtcgacca gctgaagaac 120

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<210> 112

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 LC序列”

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Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

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Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

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Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val

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Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His

100 105

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 LC序列”

<400> 113

tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc 60

tgccagggcg actccctgag gtcctactac gcctcctggt accagcagaa gcccggccag 120

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tccggatcct cctccggcaa caccgcctcc ctgaccatca caggcgctca ggccgaggac 240

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 114

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

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Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Arg

115

<210> 115

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成CD16 HC序列”

<400> 115

gaggtgcagc tggtggagtc cggaggagga gtggtgaggc ctggaggctc cctgaggctg 60

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<210> 116

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 116

Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn

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Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp

20 25 30

Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile

35 40 45

Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile

50 55 60

Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys

85 90 95

Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys

100 105 110

Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu

130 135 140

Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser Gly Thr

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Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe

165 170 175

Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr

180 185 190

Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr

195 200 205

Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val

210 215 220

Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val

225 230 235 240

Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu

245 250 255

Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser

260 265 270

Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg

275 280 285

Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe

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Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser

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Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val

325 330 335

Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser

340 345 350

Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly

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Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp

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Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr

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Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met

405 410 415

Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp

420 425 430

Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn

435 440 445

Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys

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Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val

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<210> 117

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 117

tacttcggca aactggaatc caagctgagc gtgatccgga atttaaacga ccaagttctg 60

tttatcgatc aaggtaaccg gcctctgttc gaggacatga ccgactccga ttgccgggac 120

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gctgtgacaa ttagcgtgaa gtgtgagaaa atcagcactt tatcttgtga gaacaagatc 240

atctccttta aggaaatgaa cccccccgat aacatcaagg acaccaagtc cgatatcatc 300

ttcttccagc ggtccgtgcc cggtcacgat aacaagatgc agttcgaatc ctcctcctac 360

gagggctact ttttagcttg tgaaaaggag agggatttat tcaagctgat cctcaagaag 420

gaggacgagc tgggcgatcg ttccatcatg ttcaccgtcc aaaacgagga tagcggcaca 480

accaacacag tcgctgccta taacctcact tggaagagca ccaacttcaa aaccatcctc 540

gaatgggaac ccaaacccgt taaccaagtt tacaccgtgc agatcagcac caagtccggc 600

gactggaagt ccaaatgttt ctataccacc gacaccgagt gcgatctcac cgatgagatc 660

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gagagcactg gttccgctgg cgagccttta tacgagaaca gccccgaatt taccccttac 780

ctcgagacca atttaggaca gcccaccatc caaagctttg agcaagttgg cacaaaggtg 840

aatgtgacag tggaggacga gcggacttta gtgcggcgga acaacacctt tctcagcctc 900

cgggatgtgt tcggcaaaga tttaatctac acactgtatt actggaagtc ctcttcctcc 960

ggcaagaaga cagctaaaac caacacaaac gagtttttaa tcgacgtgga taaaggcgaa 1020

aactactgtt tcagcgtgca agctgtgatc ccctcccgga ccgtgaatag gaaaagcacc 1080

gatagccccg ttgagtgcat gggccaagaa aagggcgagt tccgggagaa ctgggtgaac 1140

gtcatcagcg atttaaagaa gatcgaagat ttaattcagt ccatgcatat cgacgccact 1200

ttatacacag aatccgacgt gcacccctct tgtaaggtga ccgccatgaa atgtttttta 1260

ctggagctgc aagttatctc tttagagagc ggagacgcta gcatccacga caccgtggag 1320

aatttaatca ttttagccaa taactcttta tccagcaacg gcaacgtgac agagtccggc 1380

tgcaaggagt gcgaagagct ggaggagaag aacatcaagg agtttctgca atcctttgtg 1440

cacattgtcc agatgttcat caatacctcc 1470

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

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Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn

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Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe

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Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile

50 55 60

Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val

65 70 75 80

Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn

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Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp

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Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp

115 120 125

Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala

130 135 140

Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp

145 150 155 160

Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp Ser

165 170 175

Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr

180 185 190

Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val

195 200 205

Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys

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Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys

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Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly

245 250 255

Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

260 265 270

Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile

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Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp

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Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp

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Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser

325 330 335

Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile

340 345 350

Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile

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Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys

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Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile

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Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp

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Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr

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Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser

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Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser

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<210> 119

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 119

atgaagtggg tcacatttat ctctttactg ttcctcttct ccagcgccta cagctacttc 60

ggcaaactgg aatccaagct gagcgtgatc cggaatttaa acgaccaagt tctgtttatc 120

gatcaaggta accggcctct gttcgaggac atgaccgact ccgattgccg ggacaatgcc 180

ccccggacca tcttcattat ctccatgtac aaggacagcc agccccgggg catggctgtg 240

acaattagcg tgaagtgtga gaaaatcagc actttatctt gtgagaacaa gatcatctcc 300

tttaaggaaa tgaacccccc cgataacatc aaggacacca agtccgatat catcttcttc 360

cagcggtccg tgcccggtca cgataacaag atgcagttcg aatcctcctc ctacgagggc 420

tactttttag cttgtgaaaa ggagagggat ttattcaagc tgatcctcaa gaaggaggac 480

gagctgggcg atcgttccat catgttcacc gtccaaaacg aggatagcgg cacaaccaac 540

acagtcgctg cctataacct cacttggaag agcaccaact tcaaaaccat cctcgaatgg 600

gaacccaaac ccgttaacca agtttacacc gtgcagatca gcaccaagtc cggcgactgg 660

aagtccaaat gtttctatac caccgacacc gagtgcgatc tcaccgatga gatcgtgaaa 720

gatgtgaaac agacctacct cgcccgggtg tttagctacc ccgccggcaa tgtggagagc 780

actggttccg ctggcgagcc tttatacgag aacagccccg aatttacccc ttacctcgag 840

accaatttag gacagcccac catccaaagc tttgagcaag ttggcacaaa ggtgaatgtg 900

acagtggagg acgagcggac tttagtgcgg cggaacaaca cctttctcag cctccgggat 960

gtgttcggca aagatttaat ctacacactg tattactgga agtcctcttc ctccggcaag 1020

aagacagcta aaaccaacac aaacgagttt ttaatcgacg tggataaagg cgaaaactac 1080

tgtttcagcg tgcaagctgt gatcccctcc cggaccgtga ataggaaaag caccgatagc 1140

cccgttgagt gcatgggcca agaaaagggc gagttccggg agaactgggt gaacgtcatc 1200

agcgatttaa agaagatcga agatttaatt cagtccatgc atatcgacgc cactttatac 1260

acagaatccg acgtgcaccc ctcttgtaag gtgaccgcca tgaaatgttt tttactggag 1320

ctgcaagtta tctctttaga gagcggagac gctagcatcc acgacaccgt ggagaattta 1380

atcattttag ccaataactc tttatccagc aacggcaacg tgacagagtc cggctgcaag 1440

gagtgcgaag agctggagga gaagaacatc aaggagtttc tgcaatcctt tgtgcacatt 1500

gtccagatgt tcatcaatac ctcc 1524

<210> 120

<211> 823

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 120

Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr

1 5 10 15

Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu

20 25 30

Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly

35 40 45

Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly

50 55 60

Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu

65 70 75 80

Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys

85 90 95

Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys

100 105 110

Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr

115 120 125

Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln

130 135 140

Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly

145 150 155 160

Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala

165 170 175

Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala

180 185 190

Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg

195 200 205

Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu

210 215 220

Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp

225 230 235 240

Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln

245 250 255

Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr

260 265 270

Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala

275 280 285

Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro

290 295 300

Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

305 310 315 320

Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys

325 330 335

Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln

340 345 350

Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile

355 360 365

Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys

370 375 380

Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu

385 390 395 400

Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser

405 410 415

Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met

420 425 430

Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro

435 440 445

Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu

450 455 460

Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser

465 470 475 480

Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile

485 490 495

Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met

500 505 510

Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu

515 520 525

His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg

530 535 540

Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu

545 550 555 560

Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr

565 570 575

Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val

580 585 590

Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser

595 600 605

Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

610 615 620

Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro

625 630 635 640

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile

645 650 655

Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg

660 665 670

Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

675 680 685

Val Gly His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

690 695 700

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro

705 710 715 720

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp

725 730 735

Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

740 745 750

Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp

755 760 765

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

770 775 780

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

785 790 795 800

Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

805 810 815

Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

820

<210> 121

<211> 2469

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 121

atttgggaac tgaagaagga cgtctacgtg gtcgaactgg actggtatcc cgatgctccc 60

ggcgaaatgg tggtgctcac ttgtgacacc cccgaagaag acggcatcac ttggaccctc 120

gatcagagca gcgaggtgct gggctccgga aagaccctca caatccaagt taaggagttc 180

ggagacgctg gccaatacac atgccacaag ggaggcgagg tgctcagcca ttccttatta 240

ttattacaca agaaggaaga cggaatctgg tccaccgaca ttttaaaaga tcagaaggag 300

cccaagaata agaccttttt aaggtgtgag gccaaaaact acagcggtcg tttcacttgt 360

tggtggctga ccaccatttc caccgattta accttctccg tgaaaagcag ccggggaagc 420

tccgaccctc aaggtgtgac atgtggagcc gctaccctca gcgctgagag ggttcgtggc 480

gataacaagg aatacgagta cagcgtggag tgccaagaag atagcgcttg tcccgctgcc 540

gaagaatctt tacccattga ggtgatggtg gacgccgtgc acaaactcaa gtacgagaac 600

tacacctcct ccttctttat ccgggacatc attaagcccg atcctcctaa gaatttacag 660

ctgaagcctc tcaaaaatag ccggcaagtt gaggtctctt gggaatatcc cgacacttgg 720

agcacacccc acagctactt ctctttaacc ttttgtgtgc aagttcaagg taaaagcaag 780

cgggagaaga aagaccgggt gtttaccgac aaaaccagcg ccaccgtcat ctgtcggaag 840

aacgcctcca tcagcgtgag ggctcaagat cgttattact ccagcagctg gtccgagtgg 900

gccagcgtgc cttgttccgg cggtggagga tccggaggag gtggctccgg cggcggagga 960

tctcgtaacc tccccgtggc tacccccgat cccggaatgt tcccttgttt acaccacagc 1020

cagaatttac tgagggccgt gagcaacatg ctgcagaaag ctaggcagac tttagaattt 1080

tacccttgca ccagcgagga gatcgaccat gaagatatca ccaaggacaa gacatccacc 1140

gtggaggctt gtttacctct ggagctgaca aagaacgagt cttgtctcaa ctctcgtgaa 1200

accagcttca tcacaaatgg ctcttgttta gcttcccgga agacctcctt tatgatggct 1260

ttatgcctca gctccatcta cgaggattta aagatgtacc aagtggagtt caagaccatg 1320

aacgccaagc tgctcatgga ccctaaacgg cagatctttt tagaccagaa catgctggct 1380

gtgattgatg agctgatgca agctttaaac ttcaactccg agaccgtccc tcagaagtcc 1440

tccctcgagg agcccgattt ttacaagaca aagatcaaac tgtgcatttt actccacgcc 1500

tttaggatcc gggccgtgac cattgaccgg gtcatgagct atttaaacgc cagcattaca 1560

tgcccccctc ccatgagcgt ggagcacgcc gacatctggg tgaagagcta tagcctctac 1620

agccgggaga ggtatatctg taacagcggc ttcaagagga aggccggcac cagcagcctc 1680

accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 1740

tgcatccggt ccgagctgac ccaggaccct gctgtgtccg tggctctggg ccagaccgtg 1800

aggatcacct gccagggcga ctccctgagg tcctactacg cctcctggta ccagcagaag 1860

cccggccagg ctcctgtgct ggtgatctac ggcaagaaca acaggccctc cggcatccct 1920

gacaggttct ccggatcctc ctccggcaac accgcctccc tgaccatcac aggcgctcag 1980

gccgaggacg aggctgacta ctactgcaac tccagggact cctccggcaa ccatgtggtg 2040

ttcggcggcg gcaccaagct gaccgtgggc catggcggcg gcggctccgg aggcggcggc 2100

agcggcggag gaggatccga ggtgcagctg gtggagtccg gaggaggagt ggtgaggcct 2160

ggaggctccc tgaggctgag ctgtgctgcc tccggcttca ccttcgacga ctacggcatg 2220

tcctgggtga ggcaggctcc tggaaagggc ctggagtggg tgtccggcat caactggaac 2280

ggcggatcca ccggctacgc cgattccgtg aagggcaggt tcaccatcag cagggacaac 2340

gccaagaact ccctgtacct gcagatgaac tccctgaggg ccgaggacac cgccgtgtac 2400

tactgcgcca ggggcaggtc cctgctgttc gactactggg gacagggcac cctggtgacc 2460

gtgtccagg 2469

<210> 122

<211> 841

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 122

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp

20 25 30

Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr

35 40 45

Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val

50 55 60

Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp

65 70 75 80

Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile

100 105 110

Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu

115 120 125

Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile

130 135 140

Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val

165 170 175

Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp

180 185 190

Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val

195 200 205

Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe

210 215 220

Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys

225 230 235 240

Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp

245 250 255

Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln

260 265 270

Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp

275 280 285

Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val

290 295 300

Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser

305 310 315 320

Val Pro Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

325 330 335

Gly Gly Ser Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe

340 345 350

Pro Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met

355 360 365

Leu Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu

370 375 380

Glu Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu

385 390 395 400

Ala Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser

405 410 415

Arg Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys

420 425 430

Thr Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu

435 440 445

Lys Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met

450 455 460

Asp Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile

465 470 475 480

Asp Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln

485 490 495

Lys Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu

500 505 510

Cys Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg

515 520 525

Val Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser

530 535 540

Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg

545 550 555 560

Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser

565 570 575

Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp

580 585 590

Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro

595 600 605

Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly

610 615 620

Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

625 630 635 640

Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly

645 650 655

Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu

660 665 670

Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn

675 680 685

Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys

690 695 700

Leu Thr Val Gly His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

705 710 715 720

Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val

725 730 735

Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr

740 745 750

Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

755 760 765

Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr

770 775 780

Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys

785 790 795 800

Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala

805 810 815

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

820 825 830

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

835 840

<210> 123

<211> 2523

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成18t15-12s16序列”

<400> 123

atgaaatggg tgacctttat ttctttactg ttcctcttta gcagcgccta ctccatttgg 60

gaactgaaga aggacgtcta cgtggtcgaa ctggactggt atcccgatgc tcccggcgaa 120

atggtggtgc tcacttgtga cacccccgaa gaagacggca tcacttggac cctcgatcag 180

agcagcgagg tgctgggctc cggaaagacc ctcacaatcc aagttaagga gttcggagac 240

gctggccaat acacatgcca caagggaggc gaggtgctca gccattcctt attattatta 300

cacaagaagg aagacggaat ctggtccacc gacattttaa aagatcagaa ggagcccaag 360

aataagacct ttttaaggtg tgaggccaaa aactacagcg gtcgtttcac ttgttggtgg 420

ctgaccacca tttccaccga tttaaccttc tccgtgaaaa gcagccgggg aagctccgac 480

cctcaaggtg tgacatgtgg agccgctacc ctcagcgctg agagggttcg tggcgataac 540

aaggaatacg agtacagcgt ggagtgccaa gaagatagcg cttgtcccgc tgccgaagaa 600

tctttaccca ttgaggtgat ggtggacgcc gtgcacaaac tcaagtacga gaactacacc 660

tcctccttct ttatccggga catcattaag cccgatcctc ctaagaattt acagctgaag 720

cctctcaaaa atagccggca agttgaggtc tcttgggaat atcccgacac ttggagcaca 780

ccccacagct acttctcttt aaccttttgt gtgcaagttc aaggtaaaag caagcgggag 840

aagaaagacc gggtgtttac cgacaaaacc agcgccaccg tcatctgtcg gaagaacgcc 900

tccatcagcg tgagggctca agatcgttat tactccagca gctggtccga gtgggccagc 960

gtgccttgtt ccggcggtgg aggatccgga ggaggtggct ccggcggcgg aggatctcgt 1020

aacctccccg tggctacccc cgatcccgga atgttccctt gtttacacca cagccagaat 1080

ttactgaggg ccgtgagcaa catgctgcag aaagctaggc agactttaga attttaccct 1140

tgcaccagcg aggagatcga ccatgaagat atcaccaagg acaagacatc caccgtggag 1200

gcttgtttac ctctggagct gacaaagaac gagtcttgtc tcaactctcg tgaaaccagc 1260

ttcatcacaa atggctcttg tttagcttcc cggaagacct cctttatgat ggctttatgc 1320

ctcagctcca tctacgagga tttaaagatg taccaagtgg agttcaagac catgaacgcc 1380

aagctgctca tggaccctaa acggcagatc tttttagacc agaacatgct ggctgtgatt 1440

gatgagctga tgcaagcttt aaacttcaac tccgagaccg tccctcagaa gtcctccctc 1500

gaggagcccg atttttacaa gacaaagatc aaactgtgca ttttactcca cgcctttagg 1560

atccgggccg tgaccattga ccgggtcatg agctatttaa acgccagcat tacatgcccc 1620

cctcccatga gcgtggagca cgccgacatc tgggtgaaga gctatagcct ctacagccgg 1680

gagaggtata tctgtaacag cggcttcaag aggaaggccg gcaccagcag cctcaccgag 1740

tgcgtgctga ataaggctac caacgtggct cactggacaa caccctcttt aaagtgcatc 1800

cggtccgagc tgacccagga ccctgctgtg tccgtggctc tgggccagac cgtgaggatc 1860

acctgccagg gcgactccct gaggtcctac tacgcctcct ggtaccagca gaagcccggc 1920

caggctcctg tgctggtgat ctacggcaag aacaacaggc cctccggcat ccctgacagg 1980

ttctccggat cctcctccgg caacaccgcc tccctgacca tcacaggcgc tcaggccgag 2040

gacgaggctg actactactg caactccagg gactcctccg gcaaccatgt ggtgttcggc 2100

ggcggcacca agctgaccgt gggccatggc ggcggcggct ccggaggcgg cggcagcggc 2160

ggaggaggat ccgaggtgca gctggtggag tccggaggag gagtggtgag gcctggaggc 2220

tccctgaggc tgagctgtgc tgcctccggc ttcaccttcg acgactacgg catgtcctgg 2280

gtgaggcagg ctcctggaaa gggcctggag tgggtgtccg gcatcaactg gaacggcgga 2340

tccaccggct acgccgattc cgtgaagggc aggttcacca tcagcaggga caacgccaag 2400

aactccctgt acctgcagat gaactccctg agggccgagg acaccgccgt gtactactgc 2460

gccaggggca ggtccctgct gttcgactac tggggacagg gcaccctggt gaccgtgtcc 2520

agg 2523

<210> 124

<211> 456

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成IL-7序列”

<400> 124

gattgcgaca tcgagggcaa ggacggcaag cagtacgaga gcgtgctgat ggtgtccatc 60

gaccagctgc tggacagcat gaaggagatc ggctccaact gcctcaacaa cgagttcaac 120

ttcttcaagc ggcacatctg cgacgccaac aaggagggca tgttcctgtt cagggccgcc 180

aggaaactgc ggcagttcct gaagatgaac tccaccggcg acttcgacct gcacctgctg 240

aaggtgtccg agggcaccac catcctgctg aactgcaccg gacaggtgaa gggccggaaa 300

cctgctgctc tgggagaggc ccaacccacc aagagcctgg aggagaacaa gtccctgaag 360

gagcagaaga agctgaacga cctgtgcttc ctgaagaggc tgctgcagga gatcaagacc 420

tgctggaaca agatcctgat gggcaccaag gagcat 456

<210> 125

<211> 485

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 125

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala

145 150 155 160

Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile Leu Glu

165 170 175

Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr

180 185 190

Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu

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Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr Tyr Leu

210 215 220

Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser

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Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro Tyr Leu

245 250 255

Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly

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Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg

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Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile

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Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala

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Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn

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Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg

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Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu

355 360 365

Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu

370 375 380

Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser

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Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu

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Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp

420 425 430

Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn

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Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu

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Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met

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Phe Ile Asn Thr Ser

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 126

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 127

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

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Tyr Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

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Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

35 40 45

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

50 55 60

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

65 70 75 80

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

85 90 95

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

100 105 110

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

115 120 125

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

130 135 140

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

145 150 155 160

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ser Gly Thr Thr Asn Thr

165 170 175

Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser Thr Asn Phe Lys Thr Ile

180 185 190

Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln Val Tyr Thr Val Gln Ile

195 200 205

Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys Cys Phe Tyr Thr Thr Asp

210 215 220

Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp Val Lys Gln Thr

225 230 235 240

Tyr Leu Ala Arg Val Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Asn Val Glu Ser Thr

245 250 255

Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser Pro Glu Phe Thr Pro

260 265 270

Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln

275 280 285

Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val

290 295 300

Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp

305 310 315 320

Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys

325 330 335

Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly

340 345 350

Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val

355 360 365

Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys

370 375 380

Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys

385 390 395 400

Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr

405 410 415

Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe

420 425 430

Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile

435 440 445

His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser

450 455 460

Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu

465 470 475 480

Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val

485 490 495

Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

500

<210> 128

<211> 1509

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

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<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 128

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctccgattgc 60

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tataccaccg acaccgagtg cgatctcacc gatgagatcg tgaaagatgt gaaacagacc 720

tacctcgccc gggtgtttag ctaccccgcc ggcaatgtgg agagcactgg ttccgctggc 780

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<212> PRT

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<220>

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<400> 129

Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr

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Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly

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Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp

65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val

85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val

115 120 125

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser

130 135 140

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val

145 150 155 160

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp

165 170 175

Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

180 185 190

Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

195 200 205

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Ser

210 215 220

Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg

225 230 235 240

Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val

245 250 255

Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly

260 265 270

Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn

275 280 285

Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile

290 295 300

Arg Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp

305 310 315 320

Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe

325 330 335

Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe

340 345 350

Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn

355 360 365

Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro

370 375 380

Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser

385 390 395 400

Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe

405 410 415

Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr

420 425 430

His Gly Ser Glu Asp Ser

435

<210> 130

<211> 1314

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 130

tccgagctga cccaggaccc tgctgtgtcc gtggctctgg gccagaccgt gaggatcacc 60

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 131

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly

20 25 30

Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr

35 40 45

Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile

50 55 60

Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

65 70 75 80

Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala

85 90 95

Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn

100 105 110

His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Gly His Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

130 135 140

Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser

165 170 175

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile

180 185 190

Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

195 200 205

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met

210 215 220

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly

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Arg Ser Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

245 250 255

Ser Arg Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile

260 265 270

Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn

275 280 285

Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val

290 295 300

Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys

305 310 315 320

Cys Ile Arg Gln Gly Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu

325 330 335

Ile Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro

340 345 350

Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser

355 360 365

Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly

370 375 380

Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys

385 390 395 400

Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys

405 410 415

Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu

420 425 430

Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser

435 440 445

Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

450 455

<210> 132

<211> 1368

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成7t15-16s21序列”

<400> 132

atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcctccgag 60

ctgacccagg accctgctgt gtccgtggct ctgggccaga ccgtgaggat cacctgccag 120

ggcgactccc tgaggtccta ctacgcctcc tggtaccagc agaagcccgg ccaggctcct 180

gtgctggtga tctacggcaa gaacaacagg ccctccggca tccctgacag gttctccgga 240

tcctcctccg gcaacaccgc ctccctgacc atcacaggcg ctcaggccga ggacgaggct 300

gactactact gcaactccag ggactcctcc ggcaaccatg tggtgttcgg cggcggcacc 360

aagctgaccg tgggccatgg cggcggcggc tccggaggcg gcggcagcgg cggaggagga 420

tccgaggtgc agctggtgga gtccggagga ggagtggtga ggcctggagg ctccctgagg 480

ctgagctgtg ctgcctccgg cttcaccttc gacgactacg gcatgtcctg ggtgaggcag 540

gctcctggaa agggcctgga gtgggtgtcc ggcatcaact ggaacggcgg atccaccggc 600

tacgccgatt ccgtgaaggg caggttcacc atcagcaggg acaacgccaa gaactccctg 660

tacctgcaga tgaactccct gagggccgag gacaccgccg tgtactactg cgccaggggc 720

aggtccctgc tgttcgacta ctggggacag ggcaccctgg tgaccgtgtc caggattaca 780

tgcccccctc ccatgagcgt ggagcacgcc gacatctggg tgaagagcta tagcctctac 840

agccgggaga ggtatatctg taacagcggc ttcaagagga aggccggcac cagcagcctc 900

accgagtgcg tgctgaataa ggctaccaac gtggctcact ggacaacacc ctctttaaag 960

tgcatccggc agggccagga caggcacatg atccggatga ggcagctcat cgacatcgtc 1020

gaccagctga agaactacgt gaacgacctg gtgcccgagt ttctgcctgc ccccgaggac 1080

gtggagacca actgcgagtg gtccgccttc tcctgctttc agaaggccca gctgaagtcc 1140

gccaacaccg gcaacaacga gcggatcatc aacgtgagca tcaagaagct gaagcggaag 1200

cctccctcca caaacgccgg caggaggcag aagcacaggc tgacctgccc cagctgtgac 1260

tcctacgaga agaagccccc caaggagttc ctggagaggt tcaagtccct gctgcagaag 1320

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<210> 133

<211> 620

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> source

<223> /标注=“人工序列的描述：合成TGFRt15-16s21序列”

<400> 133

Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr

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Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp

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Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys

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Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val

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Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp

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Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro

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Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met

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Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu

115 120 125

Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

145 150 155 160

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

165 170 175

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

180 185 190

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

195 200 205

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

210 215 220

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

225 230 235 240

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

245 250 255

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

260 265 270

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Ser

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Asn Val Glu Ser Thr Gly Ser Ala Gly Glu Pro Leu Tyr Glu Asn Ser

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Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile

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Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly

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