7-脱氢胆固醇-半甲醇合物

技术领域

本发明涉及7-脱氢胆固醇领域。

背景技术

7-脱氢胆固醇是在胆钙化醇(＝维生素D3)的合成中使用的关键中间体。

然而，7-脱氢胆固醇具有有限的存储稳定性，并且在延长的存储期间降解。

发明内容

因此，本发明要解决的问题是增加7-脱氢胆固醇的存储稳定性，或减少7-脱氢胆固醇在存储时的降解。令人惊讶的是已经发现7-脱氢胆固醇-半甲醇合物显示出多态性。7-脱氢胆固醇-半甲醇合物为这个问题提供了解决方案。7-脱氢胆固醇-半甲醇合物可以容易地由7-脱氢胆固醇形成。此外，7-脱氢胆固醇可以容易地从7-脱氢胆固醇-半甲醇合物以高产率再生。已经发现，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物显示出显著增加的存储稳定性，或显示出显著降低的降解。

本发明的其他方面是其他独立权利要求的主题。特别优选的实施方式是从属权利要求的主题。

具体实施方式

在第一方面中，本发明涉及7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。

一种物质以多于一种结晶形式存在的能力通常被称为多态性，并且这些不同的结晶形式通常被称为“多晶型”并且可以通过某些分析特性(例如它们的X射线粉末衍射(X-ray powder diffraction,XRD)图案)来参考。一般来说，多态性反映了分子改变其构象或形成不同分子间和分子内相互作用的能力。这可能导致不同的原子排列，所述不同的原子排列反映于不同多晶型的晶格中。然而，多态性不是固体的普遍特征，因为一些分子能够以一种或多种晶体形式存在，而其他分子不能。因此，给定化合物的多态性的存在或存在程度是不可预测的。

物质的不同多晶型表现出不同的晶格能量，并且因此每种多晶型通常在固态下表现出一种或多种不同的物理特性，例如密度、熔点、颜色、稳定性、溶解速率、流动性、与研磨、制粒和压实的相容性和/或分布的均匀性[参见例如，P.DiMartino等人，J.ThermalAnal.48:447-458(1997)]。任何给定化合物以一种或多种结晶形式(即，多晶型)出现的能力是不可预测的，任何单晶形式的物理特性也是不可预测的。多晶型的物理特性可能影响其在药物制剂中的适用性。例如，这些特性可积极或消极地影响固态制剂的稳定性、溶出度和生物利用度，这随后影响这种制剂在治疗疾病中的适用性或功效。同样，多晶型的物理特性也可能影响化合物的可加工性。

具有一种或多种所需特性的单独多晶型可适用于开发具有一种或多种所需特性的药物制剂。具有非期望特性的多晶型形式的化合物的存在可阻碍或阻止开发多晶型形式作为药剂。

已经首次发现7-脱氢胆固醇(＝DHC)显示出多态性。具体地，已经发现7-脱氢胆固醇-半甲醇合物是7-脱氢胆固醇的特定多晶型物。7-脱氢胆固醇-半甲醇合物是一种结晶化合物，在所述结晶化合物中甲醇与7-脱氢胆固醇以化学计量量相结合。事实上，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物在其结晶结构中每两个7-脱氢胆固醇分子包含一个甲醇分子(＝“结合甲醇”)。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物可以由式(I)表示

已经发现7-脱氢胆固醇-半甲醇合物使用X射线粉末衍射(XRD)测量时在以下2西塔(2θ)范围中显示出强度的最大值(以每秒计数计)

4.98-5.28°、

8.93-9.23°、

10.14-10.44°、

12.46-12.76°，以及

16.78-17.28°。

所述X射线粉末衍射(XRD)使用CuKα1作为辐射源在295K下以反射模式进行测量。已经在2-50°的2θ范围中进行测量。

最大值的最重要特征是其位置，而不是强度值。因此，最大值在下文中被称为2θ最大值。

上述最大值的精确强度(以每秒计数计)可在每次单独的XRD测量之间变化。然而，2θ最大值的强度(以每秒计数计)可用于进一步表征7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。

在16.78-17.28°范围中的2θ最大值在所述组合物的测量的整个粉末X射线衍射图(XRD)中尤其具有最高强度(以每秒计数计)。

此外，在4.98-5.28°范围中的所述2θ最大值的强度(以每秒计数计)通常是在16.78-17.28°范围中的所述2θ最大值的强度(以每秒计数计)的至少10％，特别地是至少20％。

此外，在12.46-12.76°范围中的所述2θ最大值的强度(以每秒计数计)通常是在4.98-5.28°范围中的所述2θ最大值的强度(以每秒计数计)的至少10％，优选地是至少20％。

所测量的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的粉末X射线衍射图(X-ray diffractogram,XRD)如图1所示。关于进一步细节参见实验部分。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的结构已经通过7-脱氢胆固醇-半甲醇合物单晶在123K下的X射线衍射进一步表征。这些测量表明，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物以空间群P1结晶为三斜晶系，并且四个7-脱氢胆固醇分子与两个甲醇分子一起存在于不对称单元中。具体地，已经发现了以下晶体参数：

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物尤其可由7-脱氢胆固醇形成。具体地，它可以通过从含甲醇的7-脱氢胆固醇溶液中结晶或沉淀而形成。具体地，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物是通过从7-脱氢胆固醇在合适的烃(特别是烷烃，优选己烷或庚烷)和甲醇中的溶液中结晶获得的。结晶具体地是通过冷却7-脱氢胆固醇在庚烷或己烷和甲醇中的热(即，在介于35℃至60℃之间的范围中)溶液而实现的。

已经发现，即使在过量的甲醇中也会形成7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。具体地，已经观察到，在所进行的实验的所有条件变型下，都没有观察到7-脱氢胆固醇-甲醇合物(DHC·CH

尽管事实上即使在过量的甲醇中也形成7-脱氢胆固醇-半甲醇合物，但是去除过量的甲醇以获得没有过量(即未结合的)甲醇的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物是非常有利的。

具体地，已经观察到7-脱氢胆固醇-半甲醇合物可以通过包括以下步骤的方法制备：

a)提供基本上由7-脱氢胆固醇和甲醇的混合物组成的初始组合物，其中7-脱氢胆固醇与醇的摩尔比介于1.8:1与0.1:1之间

b)从步骤a)的所述混合物中去除甲醇到形成组合物的程度，在所述组合物中7-脱氢胆固醇与甲醇的摩尔比严格地介于2.1:1与1.9:1之间，优选2:1。

本文件中提到的7-脱氢胆固醇的任何量都是通过高效液相色谱法(High-Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定的。

具体地，DHC的量是通过高效液相色谱法(HPLC)，使用HPLC Agilent 1200测定的，该HPLC Agilent 1200具有长度为250mm、内部直径为4.6mm、粒度为5微米的HPLC柱Supelcosil ABZ+/Sigma，是在30℃下使用检测器DAD在212nm、270nm和300nm波长进行测量的。洗脱液是处于以下梯度程序中的乙腈(A)/甲基叔丁醚(B)：

通过将在5个精确称量的1mg至20mg范围内的晶体样品溶于由乙腈/甲基叔丁醚60/40组成的溶剂中执行校准。

在上述测量条件下，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物离解成7-脱氢胆固醇和甲醇。

本文件中提到的任何甲醇量均通过气相色谱法(Gas Chromatography,GC)测定。

具体地，甲醇的量是通过气相色谱法，使用GC Agilent Technologies 1890测定的，所述GC Agilent Technologies 1890具有长度为30m、内部直径为0.32mm、膜厚度为5微米的GC柱Rtx-1,Restek，使用氢气作为载气和2.5ml/min的恒定流量、注射器300℃分流进样模式(split injection)模式(比率1/40)、1微升的进样体积(injection volume)，使用处于250℃的FID检测器、20mL/min的氮气流率，并且用N-甲基-2-吡咯烷酮(N-Methyl-2-pyrrolidone,NMP)进行校准。烘箱温度最初为40℃，保持2分钟，在12.5分钟内升至140℃，然后在1.6分钟内升至220℃并保持10分钟。

所述初始组合物由被甲醇润湿的晶体组成。本文中的“经润湿的”是指在晶体表面处可观察到一些游离的液态甲醇(＝“未结合的甲醇”)。

因此，在步骤a)中，如前所述通过HPLC或GC测定的7-脱氢胆固醇与甲醇的摩尔比介于1.8:1与0.1:1之间。这对应于甲醇的重量级分介于4.4重量％与45重量％之间。

然后在步骤b)中去除未结合的甲醇。

在步骤b)中，从7-脱氢胆固醇-半甲醇合物中去除未结合的甲醇。7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的晶体结构中的甲醇通过晶格内的氢键结合(＝“结合的甲醇”)。然而，在7-脱氢胆固醇-半甲醇合物中，甲醇与7-脱氢胆固醇的结合力水平是受限的。重要的是需注意，出于本发明的目的，正是甲醇与DHC结合的这种可逆性是重要的。因此，为了获得最佳结果，过量(即未结合的)甲醇的去除优选在非常温和的去除条件下去除，以避免去除结合甲醇。

例如，可以通过简单的干燥，即暴露于环境压力下的空气中，来去除甲醇。这通常通过在晶体上吹气体混合物，特别是空气来执行。去除可以通过使用热气体或空气来加速。具体地，甲醇去除步骤b)可以通过在滤纸上、或在Nutsche过滤器(布氏漏斗)上或在玻璃料(烧结玻璃)过滤器上过滤晶体后干燥晶体来执行。

在另一个实施方式中，通过在减压下加热来去除甲醇。

通常，通过加热到介于50℃与80℃之间，特别是介于60℃与70℃之间的温度，和介于0.1毫巴与15毫巴之间，特别是介于1毫巴与10毫巴之间的压力来去除甲醇。

重要的是要强调，特别是当在高温和/或减压下执行时，需要小心确保去除甲醇的操作不会使得太多的甲醇(即结合的甲醇的一部分)被去除。因此，至关重要的是，在步骤b)中甲醇的去除进行值使得过量的甲醇(即未结合的甲醇，即润湿晶体的甲醇)被去除的程度，

在更进一步的实施方式中，如上所述通过HPLC和GC测定的7-脱氢胆固醇和甲醇的摩尔比的量介于2.0:1与1.9:1之间，特别是介于2.0:1与1.95:1之间，优选2.0:1.0。这对应于甲醇的重量级分介于0.040与0.042之间，特别是介于0.040与0.041之间，优选为0.040。

已经观察到，当7-脱氢胆固醇与甲醇的比率高于2.1时，存储稳定性大大降低。换句话说，当7-脱氢胆固醇与甲醇的比率高于2.1时，存储期间的降解强烈增加，即7-脱氢胆固醇显著降解成降解产物。7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的分解可以通过粉末X射线衍射图(XRD)中的变化来证明。

在本发明中已经观察到，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的形成是减少7-脱氢胆固醇在存储时的降解，或增加7-脱氢胆固醇的存储稳定性的非常有效的方法。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的形成已在上文详细描述。

本申请中的术语“稳定化”在本文件中被理解为7-脱氢胆固醇在存储期间被针对降解而稳定化。换句话说，低降解导致高稳定性，反之亦然。这反映为存储稳定性的增加，或存储时降解的减少，其特征在于重量比DHC

DHC

特别有用的是，通过测定在4℃下与空气接触存储20周的样品的所述重量比DHC

7-脱氢胆固醇的量是如前所述通过HPLC测定的。

因此，在另一方面中，本发明涉及一种减少7-脱氢胆固醇在存储至少1周后的降解的方法，所述方法包括以下步骤

α)形成7-脱氢胆固醇-半甲醇合物；

β)在从7-脱氢胆固醇-半甲醇合物中释放7-脱氢胆固醇之前，将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物存储至少1周，优选至少4周，更优选至少20周的延长时间段。

具体地，已经观察到当去除超过未结合甲醇的量时，稳定性显著下降。当基本上完全去除任何未结合的和结合的甲醇时，获得了7-脱氢胆固醇非溶剂化物(ansolvate)(DHC非溶剂化物)，其已被证实非常不稳定并且易于化学降解。所述7-脱氢胆固醇非溶剂化物具有粉末X射线衍射图(XRD)，其具有明显不同的晶体结构，如通过明显不同的粉末X射线衍射图(XRD)所证明的。

DHC非溶剂化物的粉末X射线衍射图(XRD)如图2所示。关于更多细节参见实验部分。

所述7-脱氢胆固醇非溶剂化物显示出在以下范围中的特征性2θ最大值

2.61-2.91°

4.55-4.85°、

9.19-9.49°、

12.37-12.67°，以及

16.33-16.63°。

在16.33-16.63°范围中的2θ最大值在7-脱氢胆固醇非溶剂化物的整个粉末X射线衍射图(XRD)中具有最高的强度(以每秒计数计)。所述X射线粉末衍射(XRD)在2-50°的2θ范围中使用CuKα1作为辐射源在295K下以反射模式进行测量。

因此，在另一个方面中，本发明涉及一种组合物，所述组合物是通过从基本上由7-脱氢胆固醇和甲醇的混合物组成的初始组合物中去除甲醇而获得的，

其中7-脱氢胆固醇和甲醇的所述混合物具有的7-脱氢胆固醇与甲醇的初始摩尔比为1.8:1和0.1:1，

去除甲醇直至7-脱氢胆固醇与甲醇的最终摩尔比介于2.1:1与1.9:1之间，优选2:1

其中7-脱氢胆固醇的量是通过高效液相色谱法(HPLC)测定的，并且甲醇的量是通过气相色谱法(GC)测定的，其特征在于所述组合物的粉X射线衍射图(XRD)显示出在以下范围中的2θ最大值

4.98-5.28°、

8.93-9.23°、

10.14-10.44°、

12.46-12.76°，以及

16.78-17.28°。

所述X射线粉末衍射(XRD)已经在2-50°的2西塔范围中使用CuKα1作为辐射源在295K下以反射模式进行测量。

上面已经非常详细地讨论了7-脱氢胆固醇-半甲醇合物形成的所有细节。

所述组合物尤其不含7-脱氢胆固醇非溶剂化物。因此，在所述组合物的粉末X射线衍射图(XRD)中，在以下范围内尤其

2.61-2.91°、

4.55-4.85°、

9.19-9.49°，以及

16.33-16.63°

被检测到。

如上所述，与7-脱氢胆固醇相比，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物显示出增加的存储稳定性，或减少的降解。

因此，存储和运输7-脱氢胆固醇-半甲醇合物而不是7-脱氢胆固醇非常有利。

如在本文件中定义的“包装件”(在德语中为“Packung”)是由包装和经包装的货物组成的组合物理对象。

如在本文件中定义的“包装”(在德语中为“Verpackung”)，也称为“容器”，是具有内部中空空间的物理对象，该内部中空空间用于容纳经包装的货物，并且是朝向包装的外部空间和包装或包装件周围环境的物理屏障。“运输包装”是适用于运输目的的任何包装。

如在本文件中定义的“经包装的货物”(在德语中为“Packgut”)是指存储在包装的中空空间中的材料。

因此，在另一个方面中，本发明涉及一种包装件(1)，所述包装件由运输包装(2)和作为经包装的货物(3)或经包装的货物(3)的一部分的如上面已经非常详细描述的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物组成，所述经包装的货物(3)定位于运输包装(2)的内部空间中。

运输包装是用于运输的任何包装。这种包装的示例有袋、大袋、筒、罐、圆桶、罐子、瓶子、容器、储槽。运输包装优选是密封的，更优选由塑料或金属或复合材料，特别是金属化的聚合物材料(例如箔或涂有金属膜或塑料膜的纸或硬纸板)制成。

在一个实施方式中，运输包装由可密封包装(即，它具有至少一个开口)和密封件组成。密封件可以是可密封包装的一部分，例如通过柔性零件连接，或者是单独的零件。可密封包装由包装货物填充，然后密封件密封可密封包装中的开口。在将包装运输到不同的位置后，去除密封件，并且可以部分或完全地从包装中去除包装货物。优选地，密封件可以再次用于密封包装。密封件的非限制性示例是帽、盖子、阀、盖板或粘合箔。

这种优选实施方式的一个特定示例是具有盖子(“密封件”)的瓶子(“可密封包装”)。可以将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物填充到瓶子的开口中，进入瓶子的内部。将盖子盖到，优选拧到瓶子上，使得瓶子被完全密封。在将填充有7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的经密封的瓶子(“包装件”)运输(例如航运)到不同位置后，可以去除盖子，可以将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物作为经包装的货物从瓶子中取出。打开的瓶子可以通过再次将盖子盖到打开的瓶子上来再次闭合。

在另一个实施方式中，通过临时开口将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物作为经包装的货物放入包装内，然后例如通过焊接或胶粘进行密封以便运输。在将包装运输到不同的位置后，使包装件破裂，并且可以部分或完全地从包装中去除包装货物。

这种优选实施方式的具体示例是具有开口的袋子。可以将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物填充到袋子的开口中，该开口可以例如通过热塑性焊接闭合以密封包装。在将填充有7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的经密封的袋子(“包装件”)运输(例如航运)到不同位置后，可以例如通过刀打开袋，使得7-脱氢胆固醇-半甲醇合物可以作为经包装的货物从袋子中取出。

在运输前，将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物置于包装内。通常，空腔，即运输包装的内部空间，没有完全充满7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。因此，通常，运输包装的内部空间的体积的一部分(例如，高达10体积％，有时高达20体积％)充满空气。

包装适合用于运输。

运输通常是通过汽车、卡车、船或飞机运输。本发明对于长距离运输例如洲际运输非常有利。它对于几天到几个月的运输也特别有利，特别是在热带气候区中或穿过热带气候区。

当使用本发明的方法时，增加的存储稳定性或减少的降解可以是特别有利的，因为可大大减少或甚至消除运输的特殊条件需要(例如冷却)。

重要的是要认识到，当7-脱氢胆固醇-半甲醇合物溶于相应的溶剂中时，晶体溶解并解离成7-脱氢胆固醇和甲醇，并且因此释放7-脱氢胆固醇。在环境温度或升高的温度，通常高达100℃下，7-脱氢胆固醇或7-脱氢胆固醇-半甲醇合物可溶于或增溶于其中的任何溶剂均可用作相应的溶剂。

优选地，相应的溶剂选自由以下项组成的组：水；直链、支链或环状醇，优选具有少于10个碳原子；丙酮；甲基乙基酮；四氢呋喃(THF)；甲基四氢呋喃(2-MTHF)；环戊基甲基醚(CPME)；甲基叔丁醚(MTBE)；乙酸的C

因此，7-脱氢胆固醇再次可用于进一步反应。因此，通过形成7-脱氢胆固醇-半甲醇合物来稳定化或减少7-脱氢胆固醇降解的方法是一种非常有效的方式，并且也是一种非常容易地根据需要再生起始材料即7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的方法。因此，可以容易地存储7-脱氢胆固醇而在延长的时间段内没有显著降解，并且只有在以后(如果需要的话)在照射7-脱氢胆固醇时才可以进一步转化为其他化合物，例如维生素D3。

因此，如上所述的方法优选包括步骤γ)，该步骤在步骤β)之后执行

γ)从7-脱氢胆固醇-半甲醇合物中释放7-脱氢胆固醇。

从7-脱氢胆固醇-半甲醇合物中释放7-脱氢胆固醇的优选方法是加入适合用于溶解或增溶7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的溶剂，以便将7-脱氢胆固醇-半甲醇合物解离成7-脱氢胆固醇和甲醇，并由此释放7-脱氢胆固醇。用于释放的这种合适溶剂的示例在本文件的上文中给出。

本发明还提供了一种用于合成维生素D3的非常有效和经济的方式，其中关键中间体7-脱氢胆固醇在不同于7-脱氢胆固醇用于进一步化学反应的位置产生。本发明尤其允许在生产地点之间进行运输，而在运输或存储期间没有显著的降解。

在一个优选的实施方式中，在步骤α)与β)之间执行附加步骤α')，并且在步骤β)中在存储之后和从7-脱氢胆固醇-半甲醇合物中释放7-脱氢胆固醇之前执行附加步骤β'

α')制备包装件(1)，所述包装件由运输包装(2)和作为经包装的货物(3)或所述经包装的货物(3)的一部分的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物组成，所述经包装的货物(3)位于所述运输包装(2)的内部空间中

β'iii')打开包装件(1)，并从运输包装(2)的内部空间去除7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。

上面已经非常详细地讨论了这些步骤的特征的细节和优选实施方式。

附图说明

图1示出了7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的XRD。

图2示出了7-脱氢胆固醇非溶剂化物的XRD。

图3示出了7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的XRD。图3与图1相同，在2-19°的2θ范围内进行了放大。

图4示出了7-脱氢胆固醇非溶剂化物的XRD。图4与图2相同，在2-19°的2θ范围内进行了放大。

图5示出了比率DHC

图6示出了通过使用X射线衍射测定的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的晶体结构的表示。

图7示出了关于通过使用X射线衍射测定的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的晶体内的键长和角度的细节。

图8示出了由运输包装(2)和经包装的货物(3)组成的包装件(1)的示意图。

经包装的货物(3)，即7-脱氢胆固醇-半甲醇合物，定位于运输包装(2)的内部空间中。内部空间没有完全充满7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。剩余体积充满了空气。

图8a示出了图8的运输包装(2)的示意图，所述运输包装具有内部空间(4)。内部空间(4)可以至少部分填充有包装货物，即7-脱氢胆固醇-半甲醇合物，以形成如图8所示的包装件(1)。

图9示出了包装件(1)的一个实施方式的示意图，所述包装件由运输包装(2)和经包装的货物(3)组成。运输包装由可密封的容器(6)和密封件(5)组成。

经包装的货物(3)，即7-脱氢胆固醇-半甲醇合物，定位于运输包装(2)的内部空间中。内部空间没有完全充满7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。剩余体积充满了空气。

图9a示出了图9的这种运输包装(2)的示意图。可密封容器(6)具有开口，通过该开口可将经包装的货物(3)，即7-脱氢胆固醇-半甲醇合物，放入可密封容器(6)的内部空间(4)中。在部分填充空腔，即内部空间(4)之后，可以将密封件(5)放置在可密封容器(6)的开口上，以密封所述包装并形成如图9所示的包装件(1)。

附图标记列表

1 包装件(德语：Packung)

2 运输包装(德语：Verpackung)

3 经包装的货物(德语：Packgut)

4 运输包装(2)的内部空间

5 密封件(德语：Verschluss)

6 可密封容器(德语；verschliessbarer

实施例

通过以下实验来进一步说明本发明。

样品中7-脱氢胆固醇的量已经通过高效液相色谱法，使用HPLC Agilent 1200测定，该HPLC Agilent 1200具有长度为250mm、内部直径为4.6mm、粒度为5微米的HPLC柱Supelcosil ABZ+/Sigma，是在30℃下使用检测器DAD在212nm、270nm和300nm波长进行测量的。洗脱液是处于以下梯度程序中的乙腈(A)/甲基叔丁醚(B)：

已经通过将在5个精确称量的1mg至20mg范围内的晶体样品溶于由乙腈/甲基叔丁醚60/40组成的溶剂中执行了校准。

样品中的甲醇已经通过气相色谱法，使用GC Agilent Technologies 1890测定，所述GC Agilent Technologies 1890具有长度为30m、内部直径为0.32mm、膜厚度为5微米的GC柱Rtx-1,Restek，使用氢气作为载气和2.5ml/min的恒定流量、注射器300℃分流进样模式(split injection)模式(比率1/40)、1微升的进样体积(injection volume)，使用处于250℃的FID检测器、20mL/min氮气流率，并且用N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)进行校准。烘箱温度最初为40℃，保持2分钟，在12.5分钟内升至140℃，然后在1.6分钟内升至220℃并保持10分钟。

在搅拌和加热至40℃的条件下，将7-脱氢胆固醇溶于己烷和甲醇的混合物中。然后在搅拌下在数小时内将溶液冷却至0℃，从而沉淀出白色晶体。将这些晶体经Nutsche过滤器过滤。

由于过多的甲醇，滤饼具有潮湿的外观。因此，使一些空气流过滤饼以去除大部分过量的甲醇，从而产生视觉上干燥的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物晶体。

已分离出晶体的样品1，并已经使用上述方法测定了其7-脱氢胆固醇与甲醇的比率。

然后将来自滤饼的晶体放入圆底烧瓶中，并在60℃的加热温度下暴露于5毫巴的真空中。在不同的特定干燥时间后，取出单独样品(参考1-4)，并根据上述方法测定7-脱氢胆固醇的量(DHC

对于存储测试，将所有样品(1ml)填充入10ml棕色玻璃小瓶中，然后用塑料盖封闭。然后，将样品在小瓶中在4℃的温度与空气接触存储20周期间进行存储。然后使用上述方法测定7-脱氢胆固醇的量(DHC

结果汇编在表1中。

表1：7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的存储稳定性或降解。

重要的是要强调，观察到样品1在存储后显示出为2.0的DHC/MeOH摩尔比。这正好对应于7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的DHC/MeOH摩尔比。因此，可以得出的结论是，在样品1中，过量的甲醇已经在存储期间被完全去除，以形成存储稳定的7-脱氢胆固醇-半甲醇合物。

图5示出了MeOH与DHC的摩尔比对比DHC

它清楚地表明7-脱氢胆固醇-半甲醇合物是非常存储稳定的，而当获得显著低于0.5的比率MeOH/DHC时，稳定性非常强烈地下降。这意味着7-脱氢胆固醇-半甲醇合物具有非常低的降解，而当获得显著低于0.5的比率MeOH/DHC时，降解非常强烈地增加。MeOH/DHC比率为0的7-脱氢胆固醇非溶剂化物非常不稳定，即在4℃与空气接触存储20周后，仅剩余存储前存在的DHC的量的约10％，即约90％的DHC已经被降解。DHC，即以7-脱氢胆固醇非溶剂化物的形式存在时，表现出极高的降解。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物和7-脱氢胆固醇非溶剂化物(参考4)已经在存储前通过XRD进行了研究。所述X射线粉末衍射图(XRD)使用CuKα1作为辐射源在295K下以反射模式进行测量。测量在2-50°的2θ范围中进行。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的衍射图如图1和图3所示，并且7-脱氢胆固醇非溶剂化物的衍射图如图2和图4所示。

表2. 7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的XRD的特征性最大值。

表3. 7-脱氢胆固醇-非溶剂化物的XRD的特征性最大值。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的XRD在存储后保持不变。

7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的单晶已经使用X射线衍射在123K下测量。这些测量表明，7-脱氢胆固醇-半甲醇合物以空间群P1结晶为三斜晶系，并且四个7-脱氢胆固醇分子与两个甲醇分子一起存在于不对称单元中。具体地，已经发现了以下晶体参数：

图6示出了7-脱氢胆固醇-半甲醇合物的晶胞的图示，示出了由氢键形成的链。在空间群P1的情况下，晶胞与不对称单元相同。

在表4中，列出了受体(A)和供体(D)附近的原子的相应键长和键角。D...A距离介于2.656(2)埃与2.695(2)埃之间。如针对这种经典氢键所预期的，D-H...A角度介于169.0(20)度与177(2)度之间，并且可以被认为是定向的。关于氢键模式的细节可以在表4中看到，而图7示出了由氢键一个接一个地构建的两条链。具体地，示出了甲醇(参见O57和O115)在晶体体系中的位置。

表4. 7-脱氢胆固醇-半甲醇合物晶体结构中的键距和键角

图7示出了由7-脱氢胆固醇-半甲醇合物晶体的结构中的氢键形成的两条链的图示。