一种无菌蜂蜜凝胶及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种无菌蜂蜜凝胶及其制备方法和应用。

背景技术

干眼症通常是因为泪膜动态平衡丧失而导致的泪膜不稳定、高渗性、眼表炎症甚至损伤，一开始会出现干眼症状，如眼部刺激感、视线模糊、刺痛等，重则进展为永久性失明。会触发眼表面炎症级联反应和损伤，若不干预治疗，将会进入干眼症的不良循环。

我国干眼症用药选择较少，以玻璃酸钠等人工泪液为主，国内14款临床主要用于干眼症的药品中，11款药品属于人工泪液，2款润滑剂，1款角膜修复。虽然被称之为“人工泪液”，但这类产品却没有存在于天然泪液中的生物活性成分，大多只是发挥润滑剂的功效。临床上需要更多有效的药物用于干眼症的治疗，这也是目前眼科药物研发的热点领域之一。

基于目前的干眼症的药品大多只发挥润滑剂的功效，并无实际治疗干眼症的效果，有必要对此进行改进。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种无菌蜂蜜凝胶及其制备方法和应用，以解决或至少部分解决现有技术中存在的技术问题。

第一方面，本发明提供了一种无菌蜂蜜凝胶，包括以下原料：蜂蜜和水。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述的无菌蜂蜜凝胶，还包括苯扎溴铵。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述的无菌蜂蜜凝胶，蜂蜜和水的体积比为(120～250):500。

进一步优选的，所述的无菌蜂蜜凝胶，所述苯扎溴铵、所述蜂蜜和水的质量体积比为(0.025～0.05)g:(125～250)ml:500ml。

第二方面，本发明还提供了一种所述的无菌蜂蜜凝胶的制备方法，包括以下步骤：

将蜂蜜溶于水中即得无菌蜂蜜凝胶；

或者包括以下步骤：

将蜂蜜溶于水中得到蜂蜜溶液，备用；

将苯扎溴铵溶于水中，得到苯扎溴铵溶液，备用；

将蜂蜜溶液与苯扎溴铵溶液混合即得无菌蜂蜜凝胶。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述的无菌蜂蜜凝胶的制备方法，将蜂蜜溶液与苯扎溴铵溶液混合之前还包括：将蜂蜜溶液置于压力为0.4～0.8kg/cm

在以上技术方案的基础上，优选的，所述的无菌蜂蜜凝胶的制备方法，将蜂蜜溶于水中后置于压力为0.4～0.8kg/cm

第三方面，本发明还提供了一种所述的无菌蜂蜜凝胶在制备治疗干眼症药物中的应用。

本发明的一种无菌蜂蜜凝胶相对于现具有以下有益效果：

(1)本发明的无菌蜂蜜凝胶，包括蜂蜜，蜂蜜中含有大量的葡萄糖、果糖蔗糖，可以向角膜上皮细胞供能，促进增值，使用含有蜂蜜成分的凝胶后可使患者眼表产生脂质层，减少泪液蒸发；还包括苯扎溴铵，苯扎溴铵作为表面活性剂，易溶于水，性质稳定，可用于皮肤，粘膜，伤口等地方的消毒；实验表明，本发明的无菌蜂蜜凝胶对治疗干眼症具有良好的效果，本发明的凝胶能起到粘附性作用，能粘附在角膜和结膜表面，使药物的作用时间更加持久，相对减少药物的滴用次数，增加人的依从性，使用相对更为便利。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的SIT值的平均值柱状图；

图2为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的FL值的平均值柱状图；

图3为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的神经纤维密度值的平均值柱状图；

图4为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的纤维分支值的平均值柱状图；

图5为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的曲率评分值的平均值柱状图；

图6为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的炎症细胞计数值的平均值柱状图；

图7为表1～3中A、B、C三组中的8个小鼠的基底细胞计数值的平均值柱状图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。

本申请实施例提供了一种无菌蜂蜜凝胶，包括以下原料：蜂蜜和水。

需要说明的是，本申请的无菌蜂蜜凝胶，蜂蜜中含有大量的葡萄糖、果糖蔗糖，可以向角膜上皮细胞供能，促进增值，使用含有蜂蜜成分的凝胶后可使患者眼表产生脂质层，减少泪液蒸发，进而用于治疗干眼症。

在一些实施例中，还包括苯扎溴铵，作为表面活性剂，易溶于水，性质稳定，可用于皮肤，粘膜，伤口等地方的消毒，还能起到防腐的作用，然而本申请中苯扎溴铵含量低，使用时不会增加眼表面氧化应激；本申请的无菌蜂蜜凝胶，能起到粘附性作用，能粘附在角膜和结膜表面，使药物的作用时间更加持久，相对减少药物的滴用次数，增加人的依从性。

在一些实施例中，蜂蜜和水的体积比为(120～250):500。

在一些实施例中，苯扎溴铵、所述蜂蜜和水的质量体积比为(0.025～0.05)g:(125～250)ml:500ml。

基于同一发明构思，本申请实施例还提供了上述无菌蜂蜜凝胶的制备方法，包括以下步骤：

将蜂蜜溶于水中即得无菌蜂蜜凝胶；

或者包括以下步骤：

将蜂蜜溶于水中得到蜂蜜溶液，备用；

将苯扎溴铵溶于水中，得到苯扎溴铵溶液，备用；

将蜂蜜溶液与苯扎溴铵溶液混合即得无菌蜂蜜凝胶。

在一些实施例中，将蜂蜜溶液与苯扎溴铵溶液混合之前还包括：将蜂蜜溶液置于压力为0.4～0.8kg/cm

在一些实施例中，将蜂蜜溶于水中后置于压力为0.4～0.8kg/cm

基于同一发明构思，本申请还提供了上述制备得到的无菌蜂蜜凝胶在制备治疗干眼症药物中的应用。

以下进一步以具体实施例说明本申请的无菌蜂蜜凝胶的制备方法。

实施例1

本申请实施例提供了一种无菌蜂蜜凝胶的制备方法，包括以下步骤：

S1、取250ml的蜂蜜加入至250ml的灭菌蒸馏水中，得到蜂蜜溶液；然后再将蜂蜜溶液置于0.6kg/cm

S2、取0.025g的苯扎溴铵溶于250ml的灭菌蒸馏水中，得到苯扎溴铵溶液，备用；

S3、将灭菌的蜂蜜溶液与苯扎溴铵溶液混合搅拌均匀，即得无菌蜂蜜凝胶。

实施例2

本申请实施例提供了一种无菌蜂蜜凝胶的制备方法，包括以下步骤：

S1、取250ml的蜂蜜加入至250ml的灭菌蒸馏水中，得到蜂蜜溶液；然后再将蜂蜜溶液置于0.6kg/cm2的压力、110℃的蒸汽下灭菌处理30min，冷却后，即得到无菌蜂蜜凝胶。

应用案例

谢杰毅，男，24岁，江西省南昌人，2020年5月就诊，主诉双眼干涩，有异物感并伴有畏光流泪症状，进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查诊断为干眼症，嘱患者一日6次，每次2-3滴，连续使用本申请实施例1制备得到的无菌蜂蜜凝胶1个月，再次随访，干眼症状明显缓解，同时再次进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查，对比结果发现角膜的炎症细胞浸润显著减少和角膜上皮基底细胞萎缩，泪液蛋白、SIT改善，证实本产品治疗有效。

徐平云，女，57岁，江西省上饶人，2020年8月就诊，主诉眼疼痛、不适、视物模糊进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查诊断为干眼症，嘱患者一日6次，每次2-3滴，连续使用本申请实施例1制备得到的无菌蜂蜜凝胶1个月，再次随访，干眼症状明显缓解，同时再次进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查，对比结果发现角膜的炎症细胞浸润显著减少和角膜上皮基底细胞萎缩，泪液蛋白、SIT改善，证实本产品治疗有效。

张四英，女，53岁，江西省赣州人，2020年11月就诊，主诉眼部干涩和异物感，其他症状有烧灼感、痒感、畏光、充血、痛、视物模糊易疲劳、黏丝状分泌物等。进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查诊断为干眼症，嘱患者一日6次，每次2-3滴，连续使用本申请实施例1制备得到的无菌蜂蜜凝胶1个月，再次随访，干眼症状明显缓解，同时再次进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查，对比结果发现角膜的炎症细胞浸润显著减少和角膜上皮基底细胞萎缩，泪液蛋白、SIT改善，证实本产品治疗有效。

陈军，男，56岁，2020年5月就诊，主诉眼睛灼痛刺痛并伴有眼部酸胀，球结膜有局部充血，进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查诊断为干眼症，嘱患者一日6次，每次2-3滴，连续使用本申请实施例2制备得到的无菌蜂蜜凝胶1个月，再次随访，干眼症状明显缓解，同时再次进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查，对比结果发现角膜的炎症细胞浸润显著减少和角膜上皮基底细胞萎缩，泪液蛋白、SIT改善，未发现眼表损害，证实本产品治疗有效。

朱美英，女，40岁，2020年8月就诊，主诉眼睛灼痛刺痛并伴有眼部干涩，视物模糊，结膜有局部充血，进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查诊断为干眼症，嘱患者一日6次，每次2-3滴，连续使用本申请实施例2制备得到的无菌蜂蜜凝胶1个月，再次随访，干眼症状明显缓解，同时再次进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查，对比结果发现角膜的炎症细胞浸润显著减少和角膜上皮基底细胞萎缩，泪液蛋白、SIT改善，未发现眼表损害，证实本产品治疗有效。

刘乐根，男，71岁，2020年12月就诊，主诉眼睛灼痛刺痛并伴有眼部酸胀，视物模糊，畏光流泪进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查诊断为干眼症，嘱患者一日6次，每次2-3滴，连续使用本申请实施例2制备得到的无菌蜂蜜凝胶1个月，再次随访，干眼症状明显缓解，同时再次进行基础泪眼分泌SIT检查、泪液蛋白检查、共聚焦显微镜检查，对比结果发现角膜的炎症细胞浸润显著减少和角膜上皮基底细胞萎缩，泪液蛋白、SIT改善，证实本产品治疗有效。

干眼小鼠试验：随机选取32只具有干眼症症状的小鼠，随机均分为A、B、C、D四组，每组八只小鼠；其中A组使用实施例1中制备得到的无菌蜂蜜凝胶、B组使用玻璃酸钠滴眼液、C组为空白对照组(不使用任何药物)、D组为使用实施例2中制备得到的无菌蜂蜜凝胶；分别统计A组、B组和D组中使用蜂蜜凝胶或玻璃酸钠滴眼液前(即干预前)、以及使用蜂蜜凝胶或玻璃酸钠滴眼液1周(即干预后1周)、2周(即干预后2周)后SIT(泪液分泌试验)、FL(角膜荧光染色)、神经纤维密度、纤维分支、曲率评分、基底细胞计数和炎症细胞计数；对应的，在统计A组、B组和D组干预前、1周、2周的数据同时统计C组同样的数据，分别记为实验前、实验1周、实验2周，结果如表1～4所示。

其中，泪液分泌实验具体方法为：用眼科持针器夹酚红棉线轻轻插入小鼠内眦部结膜囊处，25秒后，取下酚红棉线测量变色长度。

角膜荧光染色具体方法为：用移液枪将0.5μL荧光素钠染色溶液滴入小鼠下结膜囊内，手动瞬目，1分钟后用1mL生理盐水冲洗结膜囊，活体荧光显微镜下观察并拍摄角膜上皮荧光染色情况。

角膜共聚焦显微镜观察：将小鼠麻醉后，用眼部表面麻醉滴双眼，卡波姆凝胶涂布眼表后，置于角膜共聚焦显微镜下观察，分析并统计各组小鼠角膜神经纤维密度、神经纤维分支、角膜曲率评分、角膜上皮基底细胞数量和炎症细胞数量。

表1-A组中的小鼠使用实施例1中制备得到的无菌蜂蜜凝胶的结果统计

表2-B组中的小鼠使用玻璃酸钠滴眼液的结果统计

表3-C组中空白对照组的小鼠的结果统计

表4-D组中的小鼠使用实施例2中制备得到的无菌蜂蜜凝胶的结果统计

由上表1～4中可知，本申请制备得到的无菌蜂蜜凝胶可有效减少炎症细胞、基底细胞，促进泪腺分泌功能、修复角膜上皮磨损和神经纤维及分支的异常分布，同时显著提高泪膜稳定性，从而缓解干眼症状，达到一定的治疗效果。

实验表明上述实施例1制备得到的无菌蜂蜜凝胶保质时长可达24个月，而实施例2中制备得到的无菌蜂蜜凝胶保质时长可达20个月；由此可知，在加入苯扎溴铵后可进一步提高无菌蜂蜜凝胶的保质期。

将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的SIT值求平均值，结果如图1所示；将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的FL值求平均值，结果如图2所示；将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的神经纤维密度值求平均值，结果如图3所示；将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的纤维分支值求平均值，结果如图4所示；将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的曲率评分值求平均值，结果如图5所示；将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的炎症细胞计数值求平均值，结果如图6所示；将上述A、B、C三组，每组中的8个小鼠的基底细胞计数值求平均值，结果如图7所示。

从图1～7中可知，以空白对照组为基础，将市场现有治疗干眼症的玻璃酸钠滴眼液和本申请制备得到的无菌蜂蜜凝胶对比，通过统计学分析，可知无菌蜂蜜凝胶可有效减少炎症细胞、基底细胞，促进泪腺分泌功能、修复角膜上皮磨损和神经纤维及分支的异常分布，同时显著提高泪膜稳定性。

以上述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。