用于预防或治疗失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛的组合物和方法

背景技术

在全球范围内，约800万人患有尿失禁(UI)，70％是女性。急迫性尿失禁(UUI)是UI的一种形式。膀胱过度活动症(OAB)可以包括膀胱肌肉的肌肉痉挛，这可以使人感觉到他们需要排尿，但可能不会有尿液漏出。在一些患有UUI或OAB的患者中可能会经历无论膀胱是否充满都需要立即排尿的感觉。膀胱被充满的感觉可能涉及人的神经系统的各个部分，并且最终可能导致在排尿期间膀胱肌肉(尤其是逼尿肌)的收缩。

尽管患有UI的人数很多，但缺乏足够的长期治疗。存在各种产品以提供可能减少或管理失禁症状的能力而无需医疗干预，然而，这些产品可能涉及在人体膀胱附近插入各种物理产品或提供各种刺激。

此外，作为女性经期的一部分，月经痉挛是很大一部分女性定期面临的状况。月经痉挛是由于子宫收缩引起的，并且痉挛的量和严重程度可以基于各种激素失衡而变化。存在各种治疗方案以减少月经痉挛，然而，仍然存在改善的机会和更自然的解决方案。

因此，需要用于预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛的组合物和方法。

发明内容

现在令人惊讶地发现，乳杆菌细菌菌株或其发酵物或代谢物可以用作改性剂，所述改性剂可通过上调可导致肌肉的收缩性降低的特异性酶和基因来提供神经调节活性。此类改性剂还可以减少目标环境中细胞外ATP的量，这可以帮助降低肌肉和器官(诸如膀胱)的收缩性。因此，可以在组合物中利用某些乳杆菌或其发酵物或代谢物的改性剂的意外发现，以预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛。

在一个方面，提供了一种预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活跃或月经痉挛的方法。该方法可包括提供组合物。组合物可包括包含乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物的改性剂。改性剂可以通过上调maoA酶、maoB酶和grin-1基因中的至少一种来提供神经调节活性。方法还可以包括将组合物施用于受试者以预防或治疗失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛。

在另一方面，提供了一种预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛的方法。该方法可包括提供组合物。组合物可包括包含乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物的改性剂。改性剂可以降低目标环境中ATP的量。方法还可以包括将组合物施用于受试者以预防或治疗失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛。

在又一方面，组合物可以包括载体和改性剂。改性可以包括选自由以下项组成的组的格氏乳杆菌或其发酵物或代谢物：格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)ATCC指定编号PTA-125162、格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125163及其组合。

附图说明

呈现给本领域普通技术人员的本发明的完整且能够实现的公开内容在说明书的剩余部分中参照附图更具体地阐述，在附图中：

图1A是描绘第一组样品的maoA表达的倍数变化的图。

图1B是描绘第二组样品的maoA表达的倍数变化的图。

图2A是描绘第一组样品的maoB表达的倍数变化的图。

图2B是描绘第二组样品的maoB表达的倍数变化的图。

图3A是描绘第一组样品的grin-1表达的倍数变化的图。

图3B是描绘第二组样品的grin-1表达的倍数变化的图。

图4是描绘来自乳杆菌或乳球菌(Lactococcus)属的各种样品的钙流入的图像强度的图。

图5A是描绘包括格氏乳杆菌和/或大肠杆菌(Escherichia coli)和DMEM的样品的肌肉收缩与时间的图。

图5B是描绘包括格氏乳杆菌和/或奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)和DMEM的样品的肌肉收缩与时间的图。

图6A是描绘包括LPS的各种样品的钙流入的图像强度的图。

图6B是描绘随着时间的推移的大肠杆菌的钙流入的图像强度的图。

图6C是描绘随着时间的推移的粪肠球菌(E.faecalis)的钙流入的图像强度的图。

图7A是描绘大肠杆菌和/或卷曲乳杆菌(L.crispatus)的样品的钙流入的图像强度的图。

图7B是描绘大肠杆菌和/或格氏乳杆菌的样品的钙流入的图像强度的图。

图7C是描绘人工尿液(AU)/大肠杆菌和卷曲乳杆菌/大肠杆菌的续稀释液样品的钙流入的图像强度的图。

图8A是描绘与AU相比来自大肠杆菌和粪肠球菌上清液的细胞外ATP的定量的图。

图8B是描绘与AU相比来自上清液的来自大肠杆菌、卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌和阴道加德纳菌(G.vaginalis)的细胞外ATP的定量的图。

图8C是描绘与AU相比来自上清液的来自卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌和阴道乳杆菌(L.vaginalis)的细胞外ATP的定量的图。

图8D是描绘与补充有ATP的AU相比来自在AU中生长的卷曲乳杆菌的细胞外ATP的定量的图。

图8E是描绘以不同浓度的ATP培养的卷曲乳杆菌的定量的图。

图8F是描绘以不同浓度的ATP培养的大肠杆菌的定量的图。

图8G是描绘与AU中的卷曲乳杆菌相比补充有大肠杆菌的AU中的卷曲乳杆菌的定量的图。

图8H是描绘与AU中的卷曲乳杆菌相比补充有阴道加德纳菌的AU中的卷曲乳杆菌的定量的图。

图8I是描绘来自AU中的大肠杆菌和卷曲乳杆菌及其组合的各种样品的细胞外ATP的定量的图。

图8J是描绘来自AU中的阴道加德纳菌和卷曲乳杆菌及其组合的各种样品的细胞外ATP的定量的图。

图8K是描绘与阴道加德纳菌的上清液和AU中的卷曲乳杆菌相比来自AU中卷曲乳杆菌的样品的pH的图。

图8L是描绘来自尿路上皮细胞的各种样品的细胞外ATP的定量的图。

图9A是描绘以各种浓度的环丙沙星(Cip)培养的大肠杆菌的定量的图。

图9B是描绘来自大肠杆菌和环丙沙星的各种样品的细胞外ATP的定量的图。

图10A是描绘与ATP相比神经递质γ-氨基丁酸(GABA)和包括有ATP的GABA的样品的钙流入的图像强度的图。

图10B是描绘与大肠杆菌相比GABA和包括有大肠杆菌的GABA的样品的钙流入的图像强度的图。

图11A是描绘大肠杆菌和卷曲乳杆菌中的maoA的基因表达的倍数变化的图。

图11B是描绘大肠杆菌和卷曲乳杆菌中的maoB的基因表达的倍数变化的图。

图12A是描绘针对包括卷曲乳杆菌和/或大肠杆菌的各种细菌样品进行测试的接种在胶原蛋白基质顶部的肌成纤维细胞的收缩百分比的图。

图12B是描绘针对包括格氏乳杆菌和/或大肠杆菌的各种细菌样品进行测试的接种在胶原蛋白基质顶部的肌成纤维细胞的收缩百分比的图。

图12C是描绘针对包括GABA的各种样品进行测试的接种在胶原蛋白基质顶部的肌成纤维细胞的收缩百分比的图。

图12D是描绘针对包括大肠杆菌和含有GABA的大肠杆菌的各种细菌样本进行测试的接种在胶原蛋白基质顶部的肌成纤维细胞的收缩百分比的图。

图12E是描绘针对LPS进行测试的接种在胶原蛋白基质顶部的肌成纤维细胞的收缩百分比的图。

图13A是描绘与含有FBS的DMEM样本相比大肠杆菌和卷曲乳杆菌样本的α-SMA的图像强度的图。

图13B是描绘与含有FBS的DMEM样本相比卷曲乳杆菌和/或大肠杆菌的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的倍数变化的图。

图13C是描绘与含有FBS的DMEM样本相比卷曲乳杆菌和/或大肠杆菌的TNF-α的倍数变化的图。

如本文所用，术语“吸收制品”是指这样的制品：它可以紧贴或靠近穿戴者的身体(即，与身体邻接)放置，以吸收和容纳从身体排出的各种液态、固态和半固态流出物。应当理解，在不脱离本公开范围的情况下，本公开适用于各种一次性吸收制品，包括但不限于尿布、尿裤、训练裤、较大儿童裤、泳裤、女性卫生产品(包括但不限于月经垫或月经裤)、失禁用产品、医疗服装、手术垫和绷带、其他个人护理或保健服装等。

如本文所用，术语“发酵物”和“代谢物”是指因培养细菌(包括上清液)加上任何剩余细菌(死的或活的)而产生的任何输出、副产物或物质。可以通过提取、过滤和/或其他程序进一步加工发酵物或代谢物。

具体实施方式

本发明涉及可用于预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛的组合物和方法。所述组合物可以被构造成通过以各种形式(包括但不限于液体、霜膏、凝胶或喷雾)局部应用施用于受试者。组合物可以替代地或另外地通过递送机构(例如擦拭物基材)或通过施用于可以将组合物递送至受试者的吸收制品来施用于受试者。可以将组合物构造成施用于受试者的另一种方式可以是通过将组合物构造成可以被受试者摄入的药丸形式。

虽然难以想象，但是据信控制排尿的逼尿肌可能受到存在于尿路上皮层的细菌影响。尿路上皮仅3-5mm厚，并且已知尿路致病菌损坏并侵入该层。尿路上皮细胞通过释放一些兴奋性化合物，与包含神经系统和肌成纤维细胞的尿路下组织以及平滑肌细胞进行通讯。据信，细菌化合物可以诱导尿路上皮细胞进一步将兴奋性化合物释放到尿路下空间中，并错误地向大脑发送信号，表明胞腔处于与整个膀胱相关的张力下，从而引起平滑肌收缩和排尿，从而导致UUI或OAB。据信，某些共生细菌以可能更好地控制膀胱肌肉收缩的方式在干扰UUI发病机理方面起作用。

收集、鉴定并测试了多种细菌菌株的神经调节活性。通过寻找单胺氧化酶A和B酶(maoA和maoB)的倍数变化的增加和grin-1基因的增加来测试神经调节活性。选择这些特定的酶和基因进行测试是因为maoA和maoB是降解生物胺的酶，包括神经递质血清素、去甲肾上腺素、苯乙胺和多巴胺。已知这些神经递质在排尿频率、膀胱最大尿量和膀胱肌肉收缩方面起作用。Grin-1是形成门控离子通道的谷氨酸受体的关键亚基。离子通道控制Ca2+的流动，Ca2+是膀胱肌肉收缩所需的关键二价阳离子。

对于神经调节活性测试，测试了两组细菌样品。关于图1A、图2A和图3A的测试结果将描述的第一组细菌样品包括大肠杆菌、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、粪肠球菌、卷曲乳杆菌。这些细菌样品以及上清液中的样品(参考图1A、图2A和图3A中的S名称)在人工尿液中进行测试。在该测试中使用的人工尿液在本文的材料和测试方法部分中描述。细菌样品是Roswell Park Memorial Institute培养基(RPMI)，也作为对照(在尿液中以及单独)进行了测试。

从来自研究中的各个受试者的尿液中收集第二组细菌。在研究中包括患UUI的受试者，以及没有患UUI的受试者。通过导管收集尿液，因此，用于测试的第二组细菌中收集的细菌来自膀胱，而不是来自尿道或泌尿生殖器外部位。使用扩展的定量培养技术对尿液中的活菌进行培养，如Hill等人的期刊文章所述(Hilt,E.E.,Mckinley,K.,Pearce,M.M.,Rosenfeld,A.B.,Zilliox,M.J.,Mueller,E.R.,Brubaker,L.,Gai,X.,Wolfe,A.J.,andSchreckenberger,P.C.(2013).Urine Is Not Sterile:Use of Enhanced Urine CultureTechniques To Detect Resident Bacterial Flora in the Adult FemaleBladder.Journal of Clinical Microbiology,52(3),871-876.Retrieved March 1,2016)。关于图1B、图2B和图3B的测试结果将描述第二组细菌，且其包括人葡萄球菌(Staphylococcus hominis)7134-1、人葡萄球菌7134-7、人葡萄球菌7144-1、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)7171-2、粪肠球菌7171-3、化脓链球菌(Streptococcuspyogenes)7171-4、大肠杆菌7171-8、缓症链球菌(Streptococcus mitis)7317-1A、广栖别样斯卡多维氏菌(Alloscardovia Omnicolens)7317-2、短双岐杆菌(BifidobacteriumBreve)7317-3、短双岐杆菌7317-4、格氏乳杆菌7135-1和格氏乳杆菌7171-1。在第二组细菌测试中还测试了脑心浸液培养基(BHI)与RPMI 1、BHI与RPMI 2、德曼罗戈沙夏普(DE MAN,ROGOSA,and Sharpe)琼脂(MRS)与RPMI，RPMI 1和RPMI 2是作为对照进行测试的。通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)来鉴定来自第二组的细菌。将第二组细菌与人膀胱细胞系(5637和T24)一起温育。

现在转向图1A和图1B，进行基因表达研究以确定第一组细菌样品(图1A)和第二组细菌样品(图1B)的maoA表达的倍数变化。如图1A和图1B所示，与其他膀胱细菌菌株相比，图1B中的格氏乳杆菌菌株显示出maoA中倍数变化的显着增加。图2A和图2B分别测试了第一组细菌样品和第二组细菌样品的maoB的基因表达，并且类似于图1A和图1B，与其他测试的细菌菌株相比，格氏乳杆菌菌株显示出maoB的上调。

图3A和图3B分别描绘了第一组细菌样品和第二组细菌样品的grin-1基因表达的倍数变化。与其他细菌样品相比，图3B所示的第二组细菌样品的格氏乳杆菌细菌菌株再次显示出grin-1表达的显着上调。图1A至图3B中使用的星号显示出显著增加或差异。

回顾图1A至图3B的酶和基因表达测试结果，值得注意的是，包括卷曲乳杆菌的细菌样品还提供了maoB(图2A)和grin-1(图3A)一定程度的上调，然而，不能达到与格氏乳杆菌菌株相同的maoB和grin-1上调水平。另外，如图1A所示，卷曲乳杆菌细菌样品未上调maoA酶。这提供了出人意料的结果，即测试的格氏乳杆菌细菌菌株上调了所有三个maoA、maoB和grin-1，而来自同一属的卷曲乳杆菌的细菌仅略微上调了maoB和grin-1并下调了maoA酶。

进行进一步测试以确定抑制各种细菌样品的钙流入。在该测试中测试的细菌样品是离子霉素、MRS、卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌KE-1(ATCC指定编号PTA-125162)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)ATCC 393、干酪乳杆菌Shirota、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ATCC 15917、植物乳杆菌ATCC 14917、淀粉乳杆菌(Lactobacillusamylovorous)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)GG、鼠李糖乳杆菌GR-1、鼠李糖乳杆菌ATCC 21052、约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)和罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)RC-14。抑制钙流入的结果在图4中示出。图4中的虚线表示抑制钙的流入，而实线表示刺激钙的流入。如图4所示，尽管增加了grin-1的表达量，但格氏乳杆菌并未刺激钙在尿路上皮中的流入。事实上，格氏乳杆菌抑制了钙的流入。相比之下，被测试的乳杆菌属的许多其他细菌菌种出人意料地具有更高水平的钙强度水平，或对钙流入更低的抑制作用。如前所述，Ca2+离子是膀胱肌肉收缩所需的关键二价阳离子，因此，人们认为格氏乳杆菌能够抑制钙流入，所述细菌或其发酵物可以帮助减少与UUI和OAB相关的收缩。

现在转向图5A和图5B，与来自尿路致病菌大肠杆菌和奇异变形杆菌的上清液相比，在胶原蛋白凝胶收缩测定中证明了格氏乳杆菌上清液减慢了收缩。此外，当格氏乳杆菌上清液与来自大肠杆菌和奇异变形杆菌的上清液组合测试时，也减慢了收缩。

用ATCC沉积在本文中收集、培养和测试的特定的格氏乳杆菌菌株。上面讨论的格氏乳杆菌7135-1获得了美国典型培养物保藏中心(ATCC)的指定编号PTA-125163(菌株DK1)。对格氏乳杆菌7135-1(ATCC指定编号PTA-125163)的基因组测序已完成并公布，获得了美国国家生物技术信息中心(NCBI)的BioSample登录号：SAMN11332831(样品名称：LGASSERI-7135)和BioProject登录号：PRJNA530717。上面讨论的格氏乳杆菌7171-1获得了ATCC指定编号PTA-125162(菌株KE1)。对格氏乳杆菌7171-1(ATCC指定编号PTA-125162)的基因组测序已完成并公布，获得了NCBI的BioSample登录号：SAMN11332833(样品名称：LGASSERI-7171)和BioProject登录号：PRJNA530718。最佳地，在厌氧条件下，格氏乳杆菌菌株在MRS琼脂或肉汤中生长。

关于细菌在细胞外释放三磷酸腺苷(ATP)的作用及其在膀胱肌肉(诸如逼尿肌)的收缩性方面的作用，还完成了其他测试。对于该测试，通过使用尿路上皮膀胱细胞系，然后使用肌成纤维细胞收缩测定，来模拟宿主对各种泌尿生殖器细菌的反应。通过钙流入、基因表达和α平滑肌肌动蛋白沉积测定来测量反应。

通过细菌上清液使

细胞内钙在细胞内具有许多作用，并调节诸如基因表达、代谢和增殖等重要机制。可以在ATP存在下快速诱导这种流入，并且先前已证明该流入是由体外某些细菌在细胞外产生的。在尿路感染患者中，通常施用抗生素。这减少了胞腔中暴露于治疗浓度的抗生素的细菌数量。然而，细菌也可以嵌入尿路上皮细胞的细胞内，只有亚治疗浓度的抗生素可能会达到。

转到图6A，大肠杆菌1A2的上清液能够诱导CA

另外的测试钙流入测试也用来自卷曲乳杆菌ATCC 33820和格氏乳杆菌菌株KE-1(ATCC指定编号PTA-125162)的上清液完成。如图7A至图7C所示，添加卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌上清液表明由大肠杆菌上清液引起的钙流入减少了多达50％。在图7A至图7C中，每个点表示时间点的平均图像强度。使用图基检验测定统计显着性(P≤0.05)，并用三个星号表示。

图8A至图8D、图8I、图8J和图8L描绘了与没有细菌的AU的对照相比，各种细菌样品释放的细胞外ATP的量的定量。使用发光测定来定量细菌上清液释放的细胞外ATP的量。如图8A所示，来自过夜培养物的大肠杆菌和粪肠球菌上清液分别含有10000±900nM和8333±557nM ATP，这高于含有111±10nM的人工尿液(AU)的对照。因此，尿路致病性大肠杆菌可以将ATP释放到AU中并引起钙的流入。如图8B所示，来自过夜培养物的大肠杆菌、卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌上清液分别含有0.11±0.01uM、0.025±0.001uM和0.023uM，这高于含有0.0071±0.0002uM的AU。此外，如图8B和图8C所示，尿微生物群成分阴道加德纳菌ATCC14018和阴道乳杆菌NCFB 2810的上清液分别含有1.36±0.24uM和0.33±0.032uM ATP，这高于0.000071±0.000029uM的AU对照。

如图8D所示，当卷曲乳杆菌在补充有0.1mM ATP的AU中生长24小时时，剩余的ATP量为22.89±0.98uM，这低于对照的一半(49.2±6.3uM)(P≤0.0005)。为进一步调查ATP减少，卷曲乳杆菌在补充有不同浓度的ATP(图8E)的AU中以及在补充有50％大肠杆菌上清液(图8G)和25％阴道加德纳菌上清液(图8H和图8J)的AU中培养，作为ATP的潜在天然来源。通过增加ATP浓度(图8E)(包括来自大肠杆菌和阴道加德纳菌上清液(图8H和8J)的ATP浓度)来增加卷曲乳杆菌的生长。卷曲乳杆菌还减少了在单独补充有25％的大肠杆菌上清液(图8I)和25％的阴道加德纳菌上清液(图8J)的AU中过夜培养后ATP的量。如图8F所示，用ATP补充大肠杆菌对其生长有一定的抑制作用。如图8K所示，在ATP或来自阴道加德纳菌的上清液存在下，卷曲乳杆菌的pH进一步降低。最后，如图8L所示，显示尿路上皮细胞(5637ATCC)的测试含有含有0.0047±0.0008uM ATP，并且在用0.009uM ATP处理2分钟后，尿路上皮细胞释放的ATP增加至9.3±0.07uM。在图8A至图8L中，使用图基检测测定统计显着性(p≤0.05)，并用三个星号表示(p小于0.05*，0.01**，0.001***)。

对大肠杆菌及其ATP释放完成进一步测试。进行测试以确定暴露于抗生素环丙沙星(Cip)的最小抑制浓度(MIC)和亚治疗浓度。在用从10ug/mL到0.031ug/mL的不同浓度的Cip培养大肠杆菌细菌后，针对大肠杆菌的抗生素的MIC是1至1.5ug/mL，如图9A所示。如图9B所示，使用低于0.25、0.125、0.0625ug/mL的MIC的MIC浓度的环丙沙星诱导大肠杆菌释放更多的ATP，高达0.0261±0.003uM。(p小于0.05*，0.01**，0.001***)。

根据图8L、图9A和图9B所示的结果，已经显示，亚治疗暴露于环丙沙星会诱导大肠杆菌释放更多的ATP，这反过来可能影响泌尿神经系统病症并增加膀胱收缩。此外，通过发现大量微生物群，即阴道加德纳菌释放相对大量的ATP(1.36±0.24uM)，进一步支持了失禁患者的尿微生物群在无法控制的排尿中可能具有的作用。(参见图8B)。如果这些量是体内产生的，则它们可能会导致尿路上皮细胞在尿道下空间中释放更多，可能导致线粒体功能障碍和细胞凋亡。

为了评估神经递质γ-氨基丁酸(GABA)抑制由ATP引起的钙流入刺激的能力，将包含1uM GABA的AU与ATP混合在AU中。如图10A所示，发现GABA减少由ATP引起的钙流入刺激。类似地，为了测试GABA减少由细菌上清液引起的钙流入刺激的能力，将GABA与大肠杆菌上清液混合，并且如图10B所示，还显示GABA抑制由大肠杆菌上清液引起的钙流入刺激的能力。使用图基检验测定统计显着性(P≤0.05)，并用三个星号表示。

通过增加细胞内钙的水平，ATP可导致线粒体功能障碍。由于线粒体酶moaA和moaB降解神经递质(诸如血清素、去甲肾上腺素、苯乙烯和多巴胺)的潜在能力，因此测量了它们的基因表达。如前所述，已知这些神经递质在排尿频率、膀胱最大尿容量和膀胱肌肉收缩方面起作用。将来自纯培养物和大肠杆菌与卷曲乳杆菌混合物两者的上清液添加至5637细胞培养物中3小时。通过定量PCR相对于GAPDH测量编码maoA和maoB的基因的表达(图11A中示出的A和BA，大肠杆菌上清液引起maoA基因表达水平的边际(1.63±0.05倍)下调，而卷曲乳杆菌上清液引起上调(1.912±0.093倍))。如图11B所示，大肠杆菌上清液对maoB基因表达没有作用，而卷曲乳杆菌上清液将其表达上调为60倍。

将来自大肠杆菌、卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌菌株KE-1(ATCC指定编号PTA-125162)的细菌上清液添加到肌成纤维细胞填充的胶原蛋白基质中，均来自纯培养物和与含有2％FBS的DMEM的混合物。此外，包括GABA、ATP和LPS作为对照。对细菌产物测试了使用在胶原蛋白基质顶部接种的原代肌成纤维细胞的胶原蛋白收缩分析。如图12A和图12B所示，来自大肠杆菌培养物的上清液能够在24小时后诱导肌成纤维细胞系中的最大收缩量(72.67％)，并且当添加卷曲乳杆菌或格氏乳杆菌上清液(分别为48.56％、29.8％)时该收缩量减小。如图12C所示，纯ATP在第一个小时(30.37％)内引起肌成纤维细胞的收缩，并持续24小时(68.56％)。但是，GABA在肌成纤维细胞测定中不引起收缩，它抑制了由大肠杆菌引起的收缩，如图12D所示。根据以前的文献，据信收缩可能是由大肠杆菌引起的，这是由LPS所致。但是，如图12E所示，在LPS暴露于肌成纤维细胞五小时后，收缩为由ATP诱导的收缩的一半(27.2％与57.5％)。

为了进一步确认在细菌化合物存在下的肌成纤维细胞收缩能力，评估了对α-SMA的作用。已经提出α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在伤口愈合和纤维收缩疾病期间在收缩力的生产中发挥作用。来自大肠杆菌、卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌KE-1(ATCC指定编号PTA-125162)且结合在一起的细菌上清液与肌成纤维细胞共同培养1小时。大肠杆菌上清液增加了与α-SMA相关的细胞内图像强度(38.3±2.5)(参见图13A和图13B)，而卷曲乳杆菌减小了该图像强度(8.2±0.3)。

将与图13A中测试的那些相同的细菌上清液添加到在胶原蛋白基质中生长的肌成纤维细胞中，然后在37℃与5％CO

对于图13A至图13C，使用图基检验确定统计显着性(p≤0.05)，并用三个星号表示(p小于0.05，用一个星号表示)。

从本文进行的测试中，支持卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌并未释放大量的ATP(参见图8B)，并且发现卷曲乳杆菌能够降低补充有ATP 0.1mM的AU中的ATP水平(参见图8D)。此外，卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌抑制了由大肠杆菌衍生的化合物引起的钙流入的刺激，如图6A至图6C所示。获得了初步证据，即一些共生细菌可能降解或利用ATP，其中卷曲乳杆菌降低其在AU中的水平。测试的卷曲乳杆菌细菌菌株显示出上调或增加maoA、moaB和grin-1表达的能力，从而编码可以降解生物胺神经活性化学物质的酶(参见图1A至图3B)。卷曲乳杆菌显示出上调或增加maoA的能力(参见图11B)，但没有显示出以统计显著方式上调MaoA或grin-1基因表达的能力(参见图1A、图3A、图11A)。已经假定这些线粒体酶的水平降低使神经疾病恶化，也可能是共生细菌减轻这些化学物质影响的另一种机制。

乳杆菌通常仅限于糖酵解途径和发酵途径，这些途径比通过其他细菌使用的呼吸道途径产生更少的ATP。如果存在于膀胱微生物群或甚至阴道中的乳杆菌可以清除ATP，那么它可能不仅可能为细菌提供额外的能源，而且可以将它与上皮层隔离，从而促进内衡环境。这些是重要发现，因为显示出ATP引起肌成纤维细胞的收缩(参见图12C至图12E)，表明过早排尿的潜在机制，以及乳杆菌菌株干扰该过程的可能性。然而，并非所有的乳杆菌菌株都必须针对ATP的影响进行保护。常见于口腔、阴道和肠道中的阴道乳杆菌已与中等程度的细菌性阴道炎相关，并发现其释放0.33±0.032uM ATP(参见图8C)，是大肠杆菌的几倍。尽管不受理论束缚，但这表明某些乳杆菌实际上可能是疾病过程的一部分。

神经递质GABA可以由细菌(包括某些乳杆菌属)产生，尽管它没有引起肌成纤维细胞的收缩，但它可以通过大肠杆菌抑制收缩(参见图12C、图12D)。细胞内钙水平的增加可导致尿路上皮细胞分泌ATP(参见图8L)，可能有两种潜在的机制。ATP可以通过通道释放，诸如连接蛋白半通道、泛连接蛋白通道以及多个阴离子通道。尿路上皮细胞中钙流入的刺激可能会导致细胞中的囊泡核苷酸转运蛋白(VNUT)的表达增加，并随后将ATP释放到导致膀胱收缩的尿道下和肌肉层中。替代方案用于连续激活的钙通道，导致线粒体钙过载、细胞凋亡和来自尿路上皮细胞的ATP释放。

如前所述，已经提出α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在伤口愈合和纤维收缩疾病期间在收缩力的产生中发挥作用。本文共聚焦和qPCR结果的结果显示α-SMA的收缩与胶原蛋白凝胶收缩模型的尿路致病细菌诱导的收缩之间的直接相关性，如图13A所示。α-SMA松弛和α-SMA表达的下调与卷曲乳杆菌诱导的松弛之间也存在直接相关性。增加的细胞内钙水平可以驱动尿路上皮细胞进入凋亡期。TNF-α可以是细胞凋亡的诱导剂[22]，因此卷曲乳杆菌减少在肌成纤维细胞中大肠杆菌刺激的该基因的上调的能力可能是显着的(参见图13B)。

总之，尿微生物群的共生成员，特别是卷曲乳杆菌和格氏乳杆菌，可以减轻尿路致病大肠杆菌刺激与诸如UUI等病症相关的途径的能力。

组合物可以采取多种形式，例如简单溶液剂(水基或油基)、固体形式(例如凝胶剂或棒剂)、洗剂、混悬剂、霜剂、凝胶乳剂、药膏剂、软膏剂、喷雾剂、乳剂、油性树脂、气雾剂等等。组合物可以是各种粘度的液体形式。优选地，可在本公开中使用的组合物是可溶的，以方便其配制物施用给使用者。

组合物可以包含载剂。载剂可以是任何皮肤可接受的载剂。如本文所用，“皮肤病学可接受的载剂”通常是指适用于对受试者局部施用的载体，并且与包括乳杆菌或其发酵物的改性剂的组合物相容。适用于本公开的液体载剂材料包括熟知的在化妆品领域、药物领域和医学领域用作软膏剂、洗剂、霜剂、药膏剂、气雾剂、凝胶剂、混悬剂、喷雾剂、泡沫剂、洗涤剂等等的基料的那些，并且可以按照已建立的水平使用。在一些实施方案中，载剂可以占约0.01％至约99.98％(按组合物的总重量计)，具体取决于所用的载剂。

优选的载剂材料包括极性溶剂材料，诸如水。其他潜在的载剂包括润肤剂、湿润剂、多元醇、表面活性剂、酯、全氟化碳、有机硅和其他药学上可接受的载剂材料。在一个实施方案中，载剂是挥发性的，从而允许抗微生物成分立即沉积到所需的表面，同时通过缩短干性时间来改善产品的总体使用体验。这些挥发性载剂的非限制性实例包括5c5t聚二甲基硅氧烷、环状聚甲基硅氧烷(Cyclomethicone)、甲基全氟异丁基醚、甲基全氟丁基醚、乙基全氟异丁基醚和乙基全氟丁基醚。

在组合物形成润湿组合物的情况下，诸如下文描述的与湿擦拭物一起使用，该组合物典型地将包含水。这些组合物可以适当地包含水，其中水的量为约0.01％(按该组合物的总重量计)至约99.98％(按该组合物的总重量计)、或约1.00％(按该组合物的总重量计)至约99.98％(按该组合物的总重量计)、或约50.00％(按该组合物的总重量计)至约99.98％(按该组合物的总重量计)、或约75.00％(按该组合物的总重量计)至约99.98％(按该组合物的总重量计)。在一些实施方案中，水的量可以占约50.00％(按该组合物的总重量计)至约70.00％(按该组合物的总重量计)。在一些实施方案中，水的量所占的比例可以大于90.00％(按该组合物的总重量计)。

在一个实施方案中，该组合物可以任选地包含一种或多种润肤剂，所述润肤剂典型地起到软化、抚慰和以其他方式润滑和/或润湿皮肤的作用。可以掺入到该组合物中的合适润肤剂包括油，诸如烷基聚二甲基硅氧烷、烷基聚甲基硅氧烷、烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇、苯基有机硅、烷基三甲基硅烷、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷交联聚合物、环状聚甲基硅氧烷、羊毛脂及其衍生物、脂肪酯、脂肪酸、甘油酯和衍生物、丙二醇酯和衍生物、烷氧基化羧酸、烷氧基化醇、脂肪醇，以及它们的组合。

该组合物的一些实施方案可以包含一种或多种润肤剂，其中润肤剂的量为约0.01％(按该组合物的总重量计)至约20％(按该组合物的总重量计)、或约0.05％(按该组合物的总重量计)至约10％(按该组合物的总重量计)、或约0.10％(按该组合物的总重量计)至约5％(按该组合物的总重量计)。

在一些实施方案中，组合物包含一种或多种酯。这些酯可以选自棕榈酸鲸蜡酯、棕榈酸硬脂酯、硬脂酸鲸蜡酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯，以及它们的组合。脂肪醇包括辛基十二烷醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇、山嵛醇，以及它们的组合。脂肪酸可以包括但不限于癸酸、十一碳烯酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸和山嵛酸。醚诸如桉叶脑、鲸蜡硬脂基葡糖苷、二甲基异山梨聚甘油基-3鲸蜡基醚、聚甘油基-3癸基十四烷醇、丙二醇肉豆蔻基醚以及它们的组合也可以适合用作润肤剂。在抗微生物组合物或本公开中使用的其他合适的酯化合物列于以下文献中：

适合作为本公开的组合物中的载剂的湿润剂包括例如甘油、甘油衍生物、透明质酸、透明质酸衍生物、甜菜碱、甜菜碱衍生物、氨基酸、氨基酸衍生物、糖胺聚糖、二醇、多元醇、糖、糖醇、氢化淀粉水解物、羟基酸、羟基酸衍生物、PCA的盐等，以及它们的组合。合适的湿润剂的具体实例包括蜂蜜、山梨醇、透明质酸、透明质酸钠、甜菜碱、乳酸、柠檬酸、柠檬酸钠、乙醇酸、乙醇酸钠、乳酰钠、尿素、丙二醇、丁二醇、戊二醇、乙氧基二甘醇、甲基葡糖醇聚醚-10、甲基葡糖醇聚醚-20、聚乙二醇(如

本公开的组合物可以包含一种或多种湿润剂，其中湿润剂的量为约0.01％(按该组合物的总重量计)至约20％(按该组合物的总重量计)、或约0.05％(按该组合物的总重量计)至约10％(按该组合物的总重量计)、或约0.1％(按该组合物的总重量计)至约5.0％(按该组合物的总重量计)。

在一些实施方案中，组合物可以包含一种或多种表面活性剂。在组合物被包含在擦拭物中的一个实施方案中，该组合物还可能包含一种或多种表面活性剂。这些表面活性剂可以选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和两性表面活性剂。表面活性剂的量按组合物的总重量计可以在0.01％至30％、或10％至30％、或0.05％至20％、或0.10％至15％的范围内。在一些实施方案中，诸如当润湿组合物与擦拭物一起使用时，表面活性剂可以占润湿组合物总重量的小于5％。

合适的阴离子表面活性剂包括但不限于C

合适的阳离子表面活性剂包括但不限于烷基二甲基胺、烷基酰胺基丙基胺、烷基咪唑啉衍生物、季铵化胺乙氧基化物和季铵化合物。

合适的非离子表面活性剂包括但不限于与环氧烷，特别是与单独的环氧乙烷或与环氧乙烷和环氧丙烷一起反应的醇、酸、酰胺或烷基酚。具体的非离子表面活性剂是C

合适的两性离子表面活性剂包括例如烷基氧化胺、烷基羟基磺基甜菜碱、有机硅氧化胺，以及它们的组合。合适的两性离子表面活性剂的具体实例包括例如4-[N,N-二(2-羟乙基)-N-十八烷基铵]-丁烷-1-羧酸盐、S-[S-3-羟丙基-S-十六烷基锍]-3-羟基戊烷-1-硫酸盐、3-[P,P-二乙基-P-3,6,9-三氧杂十四烷基磷鎓]-2-羟基丙烷-1-磷酸盐、3-[N,N-二丙基-N-3-十二烷氧基-2-羟丙基铵]-丙烷-1-膦酸盐、3-(N,N-二甲基-N-十六烷基铵)丙烷-1-磺酸盐、3-(N,N-二甲基-N-十六烷基铵)-2-羟基丙烷-1-磺酸盐、4-[N,N-二(2-羟乙基)-N-(2-羟基十二烷基)铵]-丁烷-1-羧酸盐、3-[S-乙基-S-(3-十二烷氧基-2-羟丙基)锍]-丙烷-1-磷酸盐、3-[P,P-二甲基-P-十二烷基磷鎓]-丙烷-1-膦酸盐、5-[N,N-二(3-羟丙基)-N-十六烷基铵]-2-羟基-戊烷-1-硫酸盐、月桂基羟基磺基甜菜碱，以及它们的组合。

合适的两性表面活性剂包括但不限于脂族季铵化合物、鏻鎓化合物和锍化合物的衍生物，其中脂族基团可以是直链或支链，并且其中脂族取代基之一含有约8至约18个碳原子，并且一个取代基含有阴离子基团，例如，羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。说明性的两性表面活性剂是椰油二甲基羧甲基甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱、椰油基甜菜碱、油基甜菜碱、鲸蜡基二甲基羧甲基甜菜碱、月桂基双-(2-羟乙基)羧甲基甜菜碱、硬脂酰双-(2-羟丙基)羧甲基甜菜碱、油基二甲基γ-羧基丙基甜菜碱、月桂基双-(2-羟丙基)α-羧乙基甜菜碱、椰油酰两性基乙酸盐，以及它们的组合。磺基甜菜碱可以包括硬脂酰二甲基磺基丙基甜菜碱、月桂基二甲基磺基乙基甜菜碱、月桂基双-(2-羟乙基)磺基丙基甜菜碱，以及它们的组合。

任选地，可以向组合物中添加一种或多种流变改性剂，诸如增稠剂。合适的流变改性剂与皮肤微生物群平衡剂相容。如本文所用，“相容”是指当与皮肤微生物群平衡剂混合时不会不利地影响皮肤微生物群平衡剂的性质的化合物。

在组合物中使用增稠体系来调节组合物的粘性和稳定性。具体地，增稠体系防止组合物在分配和使用该组合物期间从手或身体流走。当组合物与擦拭物产品一起使用时，可以使用较稠的制剂来防止该组合物从擦拭物基材迁移。

该增稠体系应当与本公开中所使用的化合物相容；也就是说，该增稠体系在与皮肤微生物群平衡剂组合使用时，不应当沉淀出来、不应当形成凝聚层，也不应当阻止使用者感知即将从该组合物获得的调理有益效果(或其他所需的有益效果)。该增稠体系可以包含增稠剂，增稠剂既可以提供该增稠体系所需的增稠效果，又可以提供对使用者皮肤的调理效果。

增稠剂可以包括纤维素、树胶、丙烯酸酯、淀粉和各种聚合物。合适的实例包括但不限于羟乙基纤维素、黄原胶、瓜尔胶、马铃薯淀粉和玉米淀粉。在一些实施方案中，PEG-150硬脂酸酯、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-175二异硬脂酸酯、聚甘油基-10山嵛酸酯二十烷二酸酯、二硬脂醇聚醚-100IPDI、聚丙烯酰胺基甲基丙烷磺酸、丁基化PVP以及它们的组合可能是合适的。

虽然组合物的粘度典型地将取决于所使用的增稠剂和组合物的其他组分，但组合物的增稠剂适当地提供粘度在大于1cP至约30,000cP或更高范围内的组合物。在另一个实施方案中，增稠剂提供粘度为约100cP至约20,000cP的组合物。在又一个实施方案中，增稠剂提供粘度为约200cP至约15,000cP的组合物。在组合物被包含在擦拭物中的实施方案中，粘度可以在约1cP至约2000cP范围内。在一些实施方案中，优选使组合物的粘度小于500cP。

当包含增稠体系时，本公开的组合物可以包含这样的增稠体系，其中该增稠体系的量不超过约20％(按该组合物的总重量计)，或为约0.01％(按该组合物的总重量计)至约20％(按该组合物的总重量计)。在另一方面，该增稠体系在抗微生物组合物中的存在量为约0.10％(按该组合物的总重量计)至约10％(按该组合物的总重量计)、或约0.25％(按该组合物的总重量计)至约5％(按该组合物的总重量计)、或约0.5％(按该组合物的总重量计)至约2％(按该组合物的总重量计)。

在一个实施方案中，组合物可以包含疏水成分和亲水成分，诸如洗剂或霜剂。通常，这些乳剂具有分散相和连续相，并且通常利用添加表面活性剂或具有不同亲水/亲油平衡值(HLB)的表面活性剂的组合来形成。合适的乳化剂包括HLB值为0至20、或2至18的表面活性剂。合适的非限制性实例包括鲸蜡硬脂基聚氧乙烯醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、十六烷基聚氧乙烯醚-10、十六烷基聚氧乙烯醚-2、十六烷基聚氧乙烯醚-20、椰油酰胺MEA、甘油月桂酸酯、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯SE、乙二醇二硬脂酸酯、乙二醇硬脂酸酯、异硬脂醇聚醚-20、月桂基聚氧乙烯醚-23、月桂基聚氧乙烯醚-4、卵磷脂、甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、油基聚氧乙烯醚-10、油基聚氧乙烯醚-2、油基聚氧乙烯醚-20、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20杏仁甘油酯、PEG-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、PEG-25氢化蓖麻油、PEG-30二多羟基硬脂酸酯、PEG-4二月桂酸酯、PEG-40脱水山梨糖醇全油酸酯、PEG-60杏仁甘油酯、PEG-7橄榄油酸酯、PEG-7甘油基椰油酸酯、PEG-8二油酸酯、PEG-8月桂酸酯、PEG-8油酸酯、PEG-80脱水山梨糖醇月桂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、丙二醇异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇月桂酸酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇油酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、脱水山梨糖醇三油酸酯、硬脂酰胺MEA、硬脂醇聚醚-100、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21。这些组合物还可以包含产生液晶网络或脂质体网络的表面活性剂或表面活性剂组合。合适的非限制性实例包括OLIVEM 1000(INCI：鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯(和)脱水山梨糖醇橄榄油酸酯(可从HallStar Company(Chicago,IL)获得)；ARLACEL LC(INCI：脱水山梨糖醇硬脂酸酯(和)山梨醇月桂酸酯，可从Croda(Edison,NJ)商购获得)；CRYSTALCAST MM(INCI：β谷甾醇(和)蔗糖硬脂酸酯(和)蔗糖二硬脂酸酯(和)鲸蜡醇(和)硬脂醇，可从MMP Inc.(South Plainfield,NJ)商购获得)；UNIOX CRISTAL(INCI：鲸蜡硬脂醇(和)聚山梨醇酯60(和)鲸蜡硬脂基葡糖苷，可从Chemyunion(Sào Paulo,Brazil)商购获得)。其他合适的乳化剂包括卵磷脂、氢化卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂，以及它们的组合。

在其中组合物为凝胶形式的一些实施方案中，凝胶的分散相可以由多种不同胶凝剂中的任一种形成，包括温度响应性(“热胶凝”)化合物、离子响应性化合物等。例如，热胶凝系统通过从液体转变成凝胶，来对温度变化(例如温度升高)作出响应。一般来说，感兴趣的温度范围为约25℃至约40℃，在一些实施方案中为约35℃至约39℃，并且在一个特定实施方案中为人体温度(约37℃)。在一些情况下，可以使用热胶凝嵌段共聚物、接枝共聚物和/或均聚物。例如，聚氧化烯嵌段共聚物可以在本发明的一些实施方案中用来形成热胶凝组合物。合适的热胶凝组合物可以包括例如均聚物，诸如聚(N-甲基-N-正丙基丙烯酰胺)、聚(N-正丙基丙烯酰胺)、聚(N-甲基-N-异丙基丙烯酰胺)、聚(N-正丙基甲基丙烯酰胺)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(N,N-二乙基丙烯酰胺)；聚(N-异丙基甲基丙烯酰胺)、聚(N-环丙基丙烯酰胺)、聚(N-乙基甲基丙烯酰胺)、聚(N-甲基-N-乙基丙烯酰胺)、聚(N-环丙基甲基丙烯酰胺)和聚(N-乙基丙烯酰胺)。合适的热胶凝聚合物的另外其他实例可以包括纤维素醚衍生物，诸如羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和乙基羟乙基纤维素。此外，热胶凝聚合物可以通过下列方式制得：制备两种或两种以上单体的共聚物，或者将此类均聚物与其他水溶性聚合物诸如丙烯酸单体(例如，丙烯酸或甲基丙烯酸、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺、以及它们的衍生物)混合。

本发明的组合物还可以包含离子响应性化合物。此类化合物在本领域中通常是众所周知的，并且倾向于在某些离子存在下或在某个pH下形成凝胶。例如，可以在本发明中使用的一类合适的离子响应性化合物为阴离子多糖。阴离子多糖可以形成三维聚合物网络，用来充当凝胶的分散相。一般来说，阴离子多糖包括带总阴离子电荷的多糖，以及含有阴离子官能团的中性多糖。

在一些实施方案中，组合物可以包含一种或多种抗微生物剂以增加保存期。可以在本公开中使用的一些合适的抗微生物剂包括传统抗微生物剂。如本文所用，“传统抗微生物剂”是指历史上已被监管机构认可为提供抗微生物效果的化合物，诸如在欧盟附录V化妆品准用防腐剂清单中列出的那些。传统抗微生物剂包括但不限于：丙酸及其盐；水杨酸及其盐；山梨酸及其盐；苯甲酸及其盐和酯；甲醛；多聚甲醛；邻苯基苯酚及其盐；吡啶硫酮锌；无机亚硫酸盐；亚硫酸氢盐；氯代丁醇；苯甲酸对羟基苯甲酸酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸苄酯、对羟基苯甲酸甲酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠；脱氢乙酸及其盐；甲酸及其盐；二溴己脒定羟乙基磺酸盐；硫柳汞；苯汞盐；十一碳烯酸及其盐；海克替啶；5-溴-5-硝基-1,3-二氧六环；2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇；二氯苄醇；三氯卡班；对氯间甲酚；三氯生；氯二甲苯酚；咪唑烷基脲；聚氨丙基双胍；苯氧乙醇，乌洛托品；季铵盐-15；氯咪巴唑；DMDM乙内酰脲；苄醇；羟甲辛吡酮乙醇胺；溴氯芬；o-伞花烃-5-醇；甲基氯异噻唑啉酮；甲基异噻唑啉酮；苄氯酚；氯乙酰胺；洗必泰；氯己定二醋酸盐；氯己定二葡萄糖酸盐；氯己定二盐酸盐；苯氧异丙醇；烷基(C12-C22)三甲基溴化铵和氯化铵；二甲基噁唑烷；二偶氯烷基脲；己脒定；己脒定二羟乙基磺酸盐；戊二醛；7-乙基二环噁唑啉；氯苯甘醚；羟甲基甘氨酸钠；氯化银；苄索氯铵；苯扎氯铵；苯扎溴铵；甲醛苄醇半缩醛；碘代丙炔基丁基氨基甲酸酯；乙基月桂酰精氨酸盐酸盐；柠檬酸和柠檬酸银。

可以添加到本公开的组合物中的其他抗微生物剂包括非传统抗微生物剂，这些非传统抗微生物剂已知除了其主要功能之外还表现出抗微生物作用，但在历史上尚未被监管机构(诸如在欧盟附录V清单上)认可为抗微生物剂。这些非传统抗微生物剂的实例包括但不限于羟基苯乙酮、辛甘醇、椰油脂基PG-二甲基氯化铵磷酸酯钠、苯丙醇、乳酸及其盐、辛酰羟肟酸、乙酰丙酸及其盐、月桂酰乳酰乳酰乳酸钠、苯乙醇、脱水山梨糖醇辛酸酯、甘油癸酸酯、甘油辛酸酯、乙基己基甘油、对茴香酸及其盐、葡糖酸内酯、癸二醇、1,2-己二醇、葡萄糖氧化酶和乳过氧化物酶、明串珠菌属(leuconostoc)/萝卜根发酵产物滤液和甘油月桂酸酯。

组合物中的抗微生物剂的量取决于该组合物内存在的其他组分的相对量。例如，在一些实施方案中，该抗微生物剂在组合物中的存在量可介于约0.001％至约5％之间(按该组合物的总重量计)，在一些实施方案中介于约0.01％与约3％之间(按该组合物的总重量计)，并且在一些实施方案中介于约0.05％与约1.0％之间(按该组合物的总重量计)。在一些实施方案中，该抗微生物剂在组合物中的存在量可以小于0.2％(按该组合物的总重量计)。然而，在一些实施方案中，组合物可以基本上不含任何抗微生物剂。因此，在一些实施方案中，组合物不包含传统抗微生物剂，也不包含非传统抗微生物剂。

本公开的组合物可以附加包含以既定的方式并且以既定的水平常规地存在于化妆品、药物、医学、家庭、工业或个人护理组合物/产品中的助剂成分。例如，组合物可以包含用于联合疗法的附加的相容药物活性材料和相容材料，诸如抗氧化剂、抗寄生生物剂、止痒剂、抗真菌剂、防腐活性物质、生物活性物质、收敛剂、角质层分离活性物质、局部麻醉剂、抗刺痛剂、抗红肿剂、皮肤抚慰剂、外用止痛剂、成膜剂、皮屑脱落剂、防晒剂，以及它们的组合。

可以包括在本公开的微生物组合物中的其他合适的添加剂包括相容的着色剂、除臭剂、乳化剂、消泡剂(当不需要泡沫时)、润滑剂、皮肤调理剂、皮肤保护剂和皮肤有益剂(例如，芦荟和生育酚乙酸酯)、溶剂(例如，水溶性乙二醇和乙二醇醚、甘油、水溶性聚乙二醇、水溶性聚乙二醇醚、水溶性聚丙二醇、水溶性聚丙二醇醚、二甲基异山梨醇)、增溶剂、悬浮剂、助洗剂(例如，碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、硫酸氢盐的碱金属和碱土金属盐)、润湿剂、pH调节成分(组合物的合适pH范围可以为约3.5至约8)、螯合剂、推进剂、染料和/或颜料，以及它们的组合。

可以适合于添加到组合物中的另一种组分是芳香剂。可以使用任何相容的芳香剂。典型地，芳香剂的存在量为约0％(按该组合物的重量计)至约5％(按该组合物的重量计)，更典型地为约0.01％(按该组合物的重量计)至约3％(按该组合物的重量计)。在一个理想的实施方案中，芳香剂将具有干净、新鲜和/或中性的香味，从而产生对最终消费者有吸引力的递送媒介物。

可以存在于组合物中的有机防晒剂包括甲氧基肉桂酸乙基己酯、阿伏苯宗、氰双苯丙烯酸辛酯、二苯甲酮-4、苯基苯并咪唑磺酸、胡莫柳酯、氧苯酮、二苯甲酮-3、水杨酸乙基己酯，以及它们的混合物。

如本文之前所指出，本公开的组合物可以被施用于递送机构，诸如基材，该基材进而可以被用于将益生元组合物递送和/或施加于使用者的皮肤。合适的基材包括纤维网，诸如湿法成网薄纸网或气流成网纤维网、纱布、棉拭子、透皮贴片、容器或保持器。可以施用该组合物的各种纤维网可以提供以下形式的产品：擦拭物、面巾纸、卫生纸、纸巾、餐巾纸、尿布、尿裤、女性卫生产品(棉塞、衬垫)、手套、袜子、面罩或它们的组合。在一些实施方案中，组合物所施用的基材可以形成吸收制品的一部分。例如，组合物可以被施用于可以形成吸收制品的身体侧衬里的至少一部分的基材。特别优选的施用装置包括纤维网，包括可冲洗和不可冲洗的纤维素网以及合成纤维材料的非织造纤维网。可用的纤维网可以是湿法成网纤维网、气流成网纤维网、熔喷纤维网或纺粘纤维网。合适的合成纤维材料包括熔喷聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯和聚丙烯的共聚物、包含聚乙烯或聚丙烯的双组分纤维等。可用的非织造纤维网可以是熔喷纤维网、棵纺纤维网、纺粘纤维网、气流成网纤维网、水刺缠结非织造纤维网、水刺纤维网、粘合梳理纤维网。

在某些实施方案中，特别是将组合物施加于纤维网的那些实施方案中，可能期望的是配制物提供某些物理属性，诸如具有光滑、润滑、不油腻的质感；能够至少部分地从纤维网转移到使用者的皮肤上；能够在大约室温下保留在纤维网上；或者能够与纤维网制造工艺相容。在某些实施方案中，优选的是该组合物的至少一部分在使用时从薄纸转移到使用者的皮肤上。

可以在形成纤维网的过程中或在纤维网已经形成并干燥之后将该组合物施加于纤维网，后一种情况常称为离线处理或后处理。将该组合物施加于纤维网的合适的方法包括本领域已知的方法，诸如凹版印刷、柔版印刷、喷涂、WEKO

如果在形成纤维网的过程中并且在干燥之前将该组合物添加到纤维网，则在这些情况下，可能优选的是采用将该组合物结合到纤维网表面上的施加方法。将益生元添加到纤维网表面的一种方法是在薄纸网起绉过程中施加该组合物。令人意外的是，该组合物本身可以用作起绉组合物，或者可以与其他众所周知的起绉组合物结合以将该组合物施加于薄纸网，而不会显著削弱重要的纤维网特性，诸如强度、刚度或脱纱性(sloughing)。

在一些实施方案中，在组合物被施用于递送机构诸如基材的情况下，可以以在约1％至约500％、或约30％至约400％、或约100％至约350％的范围内的添加量施加组合物。当然，可以设想的是，该组合物可以被施用于该范围之外的递送物质，并且仍然在本公开的范围内。

包含根据本公开制得的组合物的纤维网可以结合到多层片产品中。例如，在一个方面，根据本公开制得的纤维网可以附接到一个或多个其他纤维网，以形成具有期望特征的擦拭产品。层合至本公开的纤维网的其他纤维网可以是例如湿法起绉纤维网、压延纤维网、压印纤维网、热风式干燥纤维网、起绉的热风式干燥纤维网、未起绉的热风式干燥纤维网、气流成网纤维网等，并且可以包含也可以不包含任何皮肤微生物群平衡剂。

用于生产气流成网非织造基片的方法在例如公布的美国专利申请号2006/0008621中有所描述，该专利申请以引用方式并入本文，达到与本文相符的程度。

将大肠杆菌1A2 UPEC保持在LB琼脂(DIFCO，MD)上，将格氏乳杆菌ATCC KE-1(ATCC指定编号PTA-125162)(尿液分离)、卷曲乳杆菌ATCC 33820、粪肠球菌ATCC 33186保持在MRS琼脂(DIFCO，MD)上，将阴道加德纳菌ATCC 14018、阴道乳杆菌NCFB 2810保持在CBA和加德纳菌选择性琼脂上。对于本文所讨论的研究，所有细菌菌株在人工尿液中生长，其在初步实验中显示出不刺激人细胞系存在时的钙流入。

在达到固定相后，从在37℃下生长过夜(24小时)的培养物中收集上清液。通过以5000rpm(Eppendorf Centrifuge 5804R)离心15分钟来使培养物沉淀。用0.1摩尔HCl或NaOH将上清液的pH调节至7.0，用0.22um无菌注射器过滤器过滤灭菌，并且等分并在-20℃下储存直至使用。在大肠杆菌和粪肠球菌的情况下，用新鲜的人工尿液将过夜培养物1:100稀释，在37℃下重新温育并在T＝1、2、3、4、5和24小时时取样以用于测试。对于涉及将来自卷曲乳杆菌或格氏乳杆菌的上清液添加至来自尿路致病菌的上清液的实验，首先用卷曲乳杆菌或格氏乳杆菌上清液处理尿路上皮细胞一分钟，然后添加尿路致病性上清液。在连续稀释的情况下，将卷曲乳杆菌上清液稀释到大肠杆菌上清液的6倍。

为了研究环丙沙星的亚治疗浓度，卷曲乳杆菌在德曼罗戈沙夏普培养基(MRS，Difco，MD)中生长。使用OD600和37℃的酶标仪(EON Biotek，VT)生成这些细菌的生长曲线，以确定指数生长期。

膀胱上皮细胞(5637-ATCC HTB-9)在37℃和5％CO

按照制造商的说明，使用Ambion by Life Technologies Purelink

表1:引物序列

使用Fluo-4 DirectTM Calcium Assay试剂盒(Invitrogentm，CA)测量钙流入。根据提供的协议手册制备样品和试剂。九十六孔板以1×105个细胞/mL在补充的RPMI中接种有100μl的5637细胞，并使其达到汇合，在约48至72小时时发生。根据制造商的说明，使用Invitrogen Centess Automated Cell Counter(Thermo Fisher Scientific，MA)对细胞进行计数。将五十微升的细胞培养基从初始的100μl中除去并将50μl的Fluo-4DirectTM钙试剂添加到每个孔中。将板在室温避光下在37℃下温育30分钟。对照包括离子霉素(1uM，sigma≥98％HPLC)、ATP(1uM，sigma A1852)、GABA(1uM，Sigma Bioxtra≥99％)和LPS(0.13mg/mL，Sigma L3755)。使用尼康落射荧光Ts2R示波器在10x放大倍数下以494nm激发且以516nm发射60秒来评估治疗效果。使用ImageJ计算图像强度，并指示Ca

使用ATP比色/荧光测定试剂盒(Biovision Inc，Ca)测量来自细菌上清液的ATP的释放。根据所提供的协议制备样品和试剂。OD编号由Biotek EON酶标仪读取。发光测定试剂盒(Bacter-glo

使用1.8mg/mL无菌胶原蛋白和中和溶液产生胶原蛋白基质。通过与三份WaymouthMedia(Sigma，W1625)和2份0.34M NaOH(Sigma，221465)混合来制备中和溶液。然后将单份中和混合物添加到4份胶原蛋白中，与1x10

在μ-Slide 8Well(ibidi，80826)中培养肌成纤维细胞，使其完全汇合(90％-100％)。用1×PBS洗涤细胞培养物，并在室温下每孔用1ml 4％多聚甲醛固定10分钟，然后将PBS中1ml 0.1-0.2％的Triton X-100添加到每个载玻片中。在用Background Sniper(Biocare Medical，BS966)阻止细胞进行非特异性染色后，将它们温育8至10分钟，然后在含有Monoclonal Anti-Actin，即α-SMA(SIGMA，A2547)的1:200稀释的PBS中的1％BSA中在4℃下温育过夜。洗涤细胞，抽吸过量的液体，并在PBS中的1％BSA中添加第二抗体溶液(1-10ug/ml)(Alexa Fluar 488驴抗小鼠IgG第二抗体，ThermoFisher，A-21202)。使细胞避光并在室温下温育45分钟。用PBS洗涤后，将样品与100uL DAPI(在PBS中1:10000稀释)在黑暗中温育5分钟。用Nikon Eclipse Ti2获得共聚焦图像(X60物镜，Nikon，Canada)。从整个细胞获得荧光强度测量值并用Image J软件分析。对照标本除了暴露于无关的同种型匹配抗体外与实验标本相同。

培养和抽吸培养基后，将胶原蛋白基质收集在微量离心管中以进行高速离心5分钟，然后丢弃上清液。向每个孔中添加100uL预热的0.25mg/ml胶原蛋白酶的等分试样，并在37℃下温育15分钟。按照据后制造商的说明，使用Direct-zol RNA Miniprep Kit(ZymoResearch)从样品中分离RNA，并且使用Trizol试剂来裂解样品。使用分光光度计(nanodrop)测量RNA浓度。按照进行Applied Biosystems High Capacity cDNA ReverseTranscription Kit(Thermo-Fisher Scientific，MA)的说明制备cDNA，并使用MasterCycler梯度PCR热循环仪(Eppendorf，NY)进行PCR。如前所述，建立定量PCR，其中每个样品在每种条件下一式三份在板上运行。GAPDH也被用作管家基因。可以在补充表1中找到使用的引物清单。

本文使用的人工尿液(AU)来自根据由McLean,Robert J.C.等人撰写的CRC,Critical Reviews in Microbiology,Volume 16,Issue 1,1988制备的制剂，并示于表2中。

表2：人工尿液制剂

在形成人工尿液时，将pH调节至5.8。如果需要，可以通过用0.45-或0.2μm膜过滤器过滤将混合物灭菌。通常添加胰蛋白酶大豆肉汤以刺激细菌生长。

数据表示为平均值±SEM。使用单向ANOVA随后图基检测(GraphPad Prism 5)评估统计显着性。

鉴于前述描述和示例，本公开提供以下实施方案。

实施方案1：一种预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛的方法，所述方法包括：提供组合物，所述组合物包含含有乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物的改性剂，其中所述改性剂通过上调maoA酶、maoB酶和grin-1基因中的至少一种来提供神经调节活性；以及将所述组合物施用于所述受试者以预防或治疗尿失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛。

实施方案2：如实施方案1所述的方法，其中所述改性剂降低目标环境中的细胞外ATP水平。

实施方案3：如实施方案1或2所述的方法，其中所述改性剂包括格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物。

实施方案4：如实施方案3所述的方法，其中所述格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物选自由以下项组成的组：格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125162、格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125163及其组合。

实施方案5：如实施方案3所述的方法，其中所述格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物是格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125162。

实施方案6：如实施方案3所述的方法，其中所述格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物是格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125163。

实施方案7：如前述实施方案中任一项所述的方法，还包括：将所述组合物施加到基材上。

实施方案8：如实施方案7所述的方法，其中所述基材形成吸收制品的至少一部分。

实施方案9：如实施方案7所述的方法，其中所述基材形成擦拭物的至少一部分。

实施方案10：如实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述组合物是液体形式，其通过局部应用施用于所述受试者。

实施方案11：如实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述组合物是药丸形式，其被构造成通过摄入施用于所述受试者。

实施方案12：一种预防或治疗受试者的失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛的方法，所述方法包括：提供组合物，所述组合物包含含有乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物的改性剂，其中所述改性剂试剂降低目标环境中的ATP量；并将所述组合物施用于所述受试者以预防或治疗失禁、膀胱过度活动症或月经痉挛。

实施方案13：如实施方案12所述的方法，其中所述改性剂包括卷曲乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物。

实施方案14：一种组合物，包括：载剂；和改性剂，其包括选自由以下项组成的组的格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物。格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125162、格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125163及其组合。

实施方案15：如实施方案14所述的组合物，其中所述格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物是格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125162。

实施方案16：如实施方案14所述的组合物，其中所述格氏乳杆菌菌株或其发酵物或代谢物是格氏乳杆菌ATCC指定编号PTA-125163。

实施方案17：如实施方案14-16中任一项所述的组合物，其中所述改性剂通过上调maoA酶、maoB酶和grin-1基因中的至少一种来提供神经调节活性。

实施方案18：如实施方案14-17中任一项所述的组合物，其中所述组合物被施加到基材。

实施方案19：如实施方案14-17中任一项所述的组合物，其中所述组合物是液体形式。

实施方案20：如实施方案14-17中任一项所述的组合物，其中所述组合物是药丸形式。