P300抑制剂及其在医药上的应用

本发明涉及医药技术领域，具体涉及式I化合物、互变异构体、氘代物或其可药用盐，其制备方法，含有该化合物的药用组合物，及其作为治疗癌症药物的用途。

组蛋白翻译后的乙酰化修饰在基因转录调控、细胞分化、细胞增殖、细胞周期调控、细胞凋亡等方面具有重要的生物学功能。组蛋白的乙酰化修饰是由组蛋白乙酰化转移酶(HAT)完成，其可催化从乙酰辅酶A到特异性赖氨酸的乙酰基转移反应。p300是细胞主要的组蛋白乙酰化转移酶。高水平的p300在一些肿瘤中被观察到，而敲除p300基因后，肿瘤细胞的增殖会受到抑制。因此，研发强效和高选择性的组蛋白乙酰化转移酶抑制剂对治疗癌症具有非常重要的意义。

发明内容

本发明提供一种通式(I)所示的化合物、其互变异构体、氘代物或可药用盐：

其中，

R

R

X选自键、O、S、NR

R

R

R

R

一些实施方式中，式(I)中的R

一些实施方式中，式(I)中的R

一些实施方式中，式(I)中的R

一些实施方式中，式(I)中的X选自键或亚甲基，优选为键。

一些实施方式中，式(I)中的R

一些实施方式中，式(I)中的R

一些实施方式中，式(I)中的R

一些实施方式中，式(I)中的化合物，其中R

R

R

R

R

X选自键或亚甲基。

一些实施方式中，式(I)化合物、其互变异构体、氘代物或可药用盐选自式(I-1)或式(I-2)化合物、互变异构体、氘代物或其可药用盐：

其中，取代基如上述所定义。

一些实施方式中，本发明提供下述化合物、其互变异构体、氘代物或可药用盐：

本发明还提供了一种药物组合物，其包括(I)所示化合物、其互变异构体、氘代物或可药用盐，任选地进一步包括药学上可接受的辅料。

本发明提供了结构式(I)所示化合物、其互变异构体、氘代物或可药用盐、或其药物组合物在制备药物中的应用。

本发明进一步提供了所述应用的优选技术方案：

作为优选，所述应用为制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。

作为优选，所述癌症选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。

本发明还提供了一种治疗和/或预防的疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物或含其的药物组合物。

本发明还提供了一种治疗癌症的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物或含其的药物组合物。

除非另有说明，所述结构通式中使用的一般化学术语具有通常的含义。

例如，除非另有说明，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

在本发明中，除非另有说明，“烷基”包括直链或支链的一价饱和烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。类似的，“基

“C

在本发明中，“一”、“一个”、“该”、“至少一个”和“一个或多个”可互换使用。因此，例如，包含“一种”药学上可接受的赋形剂的组合物可以被解释为表示该组合物包括“一种或多种”药学上可接受的赋形剂。

术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括碳环的原子的单环或稠环芳香基团，具有完全共轭的π电子体系。优选芳基为6到10元的单环或双环的芳香环基团。优选为苯基、萘基。最优选为苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。

术语“杂环基”，在本发明中，除非另有说明，是指由碳原子和1-3个选自N、O或S的杂原子组成的未取代或取代的3-8元稳定单环系统，其为饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个碳原子，其中氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，并且氮杂原子可以选择性地被季铵化。该杂环基可以被连接到任何的杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。这些杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、 氧代哌嗪基、氧代哌啶基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜基和四氢恶二唑基。所述杂环基可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。

术语“杂芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的稳定的5元或6元单环芳族环系统或未取代或取代的9元或10元苯并稠合杂芳族环系统或双环杂芳族环系统，其由碳原子和1-4个选自N、O或S的杂原子组成，并且其中所述氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，所述氮杂原子可以选择性地被季铵化。杂芳基可以连接在任何杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤、喹啉基或异喹啉基。所述杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。

术语“环烷基”是指具有3-10个碳原子的环状饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基。所述环烷基可以稠合于芳基、杂环基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基。

术语“氧代”或“氧代基”指“＝O”，指氧原子通过双键与被取代的原子相连。

术语“取代的”是指基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限于卤素(F、Cl、Br或I)、C

取代烷基的实例包括但不限于2,3-二羟基丙基、2-氨基乙基、2-羟乙基、五氯乙基、三氟甲基、甲氧基甲基、五氟乙基、苯基甲基、二恶茂基甲基和哌嗪基甲基。

取代烷氧基的实例包括但不限于2-羟基乙氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2-甲氧基乙氧基、2-氨基乙氧基、2,3-二羟基丙氧基、环丙基甲氧基、氨基甲氧基、三氟甲氧基、2-二乙基氨基乙氧基、2-乙氧基羰基乙氧基、3-羟基丙氧基。

术语“可药用盐”是指从药学上可接受的无毒的碱或酸制备的盐。

本发明化合物的药物前体包含在本发明的保护范围内。通常，所述药物前体是指很容易在体内转化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本申请化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本申请的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。特别优选的衍生物或前药是在施用于患者时可以提高本申请化合物生物利用度的那些化合物(例如，可以使口服的化合物更易于被吸收到血液中)，或者促进母体化合物向生物器官或作用位点(例如脑部或淋巴系统)递送的那些化合物。因此，本发明提供的治疗方法中的术语“给药”是指施用能治疗不同疾病的本发明公开的化合物，或虽未明确公开但对受试者给药后能够在体内转化为本发明公开的化合物的化合物。

本发明所述化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可能由此产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有可能的非对映异构体及其外消旋混合物、其基本上纯的拆分对映异构体、所有可能的几何异构体及其药学上可接受的盐。

当式(I)所示化合物存在互变异构体时，除非特别声明，本发明包括任何可能的互变异构体和其药学上可接受的盐，及它们的混合物。

当式(I)所示化合物用较重的同位素(例如氘)替代可能提供某些治疗优势，这是由于更大的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或减少剂量要求。

当式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐存在溶剂化物或多晶型时，本发明包括任何可能的溶剂化物和多晶型。形成溶剂化物的溶剂类型没有特别的限定，只要该溶剂是药学上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等类似的溶剂都可以采用。

术语“组合物”，在本发明中，是指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接地由指定量的各指定成分的组合生产的任何产品。因此，含有本发明的化合物作为活性成分的药物组合物以及制备本发明化合物的方法也是本发明的一部分。此外，化合物的一些结晶形式可以多晶型存在，并且此多晶型包括在本发明中。另外，一些化合物可以与水(即水合物)或常见的有机溶剂形成溶剂化物，并且此类溶剂化物也落入本发明的范围内。

本发明提供的药物组合物包括作为活性组分的式(I)所示化合物(互变异构体、氘代物或其可药用盐)、一种药学上可接受的赋形剂及其他可选的治疗组分或辅料。尽管任何给定的情况下，最适合的活性组分给药方式取决于接受给药的特定的主体、主体性质和病情严重程度。本发明的药物组合物可以方便地以本领域公知的单位剂型存在和药学领域公知的任何制备方法制备。

合成方案：

步骤A：化合物I-1结构中的羧基在草酰氯的作用下生成酰氯即化合物I-2；

步骤B：化合物I-2在三甲基硅烷化重氮甲烷的作用下生成重氮化物I-3；

步骤C：化合物I-3在HBr作用下生成溴代化物即化合物I-4；

步骤D：化合物I-4与

步骤E：化合物I-5与

步骤F：化合物I-6在三溴吡啶的作用下引入溴取代基得到化合物I-7；

步骤G：化合物I-7与

为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。

除非另有说明，本发明所有温度均指摄氏度。

实施例中使用了下列缩略语：

DCM：二氯甲烷；

MeOH：甲醇；

DIEA：二异丙基乙胺；

DME：二甲醚；

DMF：N,N-二甲基甲酰胺；

DMSO：二甲亚砜；

EA：乙酸乙酯；

PE：石油醚；

Pd/C：钯碳：

Cy

THF：四氢呋喃；

NaBH

TFA：三氟乙酸；

pre-TLC:制备薄层层析硅胶板；

pre-HPLC：制备高效液相色谱；

Ir(ppy)

实施例1：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(1,2,5,6-四氢吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

步骤1：化合物1-1的合成

化合物(2S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-氧代哌啶-2-羧酸(0.7000g)的DCM(14.0000mL)溶液，用冰水浴降温，向其中加入草酰氯(0.4178g)，再滴加2滴无水DMF，升温至20℃下反应2h。将反应液减压浓缩，残留物中加入无水DCM(2*5mL)蒸馏2次，即得到目标产物1-1(0.7000g，产率93.2597％)。

步骤2：化合物1-2的合成

将化合物1-1(0.7506g)溶于四氢呋喃(5.0000mL)和乙腈(5.0000mL)的混合溶剂中，冰水浴降温至0℃，向其中滴加三甲基硅烷化重氮甲烷(0.9398g)，然后20℃反应4h。将反应液直接浓缩，得到粗品目标产物1-2，直接投入下一步反应。ESI-MS m/z:280.1[M+H]

步骤3：化合物1-3的合成

将化合物1-2(0.7687g)溶于四氢呋喃(5.0000mL)和乙腈(5.0000mL)的混合溶液中，0℃下滴加氢溴酸水溶液(0.8890g)，然后20℃反应1h。反应液缓慢加入饱和碳酸氢钠中，调PH至8.0，加入15mL EA，分出有机相，有机相干燥，过滤，减压浓缩得到目标产物1-3(0.6420g，产率70.4733％)。ESI-MS m/z:332.0[M+H]

步骤4：化合物1-4的合成

在室温下，将4-溴吡啶-2-胺(0.86g)，化合物1-3(1.10g)，碳酸氢钠(0.56g)溶于乙醇(8.00mL)中，氮气保护下，50℃搅拌过夜。恢复室温，旋干乙醇，硅胶拌样，经硅胶柱纯 化(3％MeOH/DCM)，得到目标产物1-4(1.00g，产率74.33％)。ESI-MS m/z:406.0[M+H]

步骤5：化合物1-5的合成

在室温下，将化合物1-4(1.30g)，(3,5-二甲基1,2-恶唑-4-基)硼酸(0.54g)，四三苯基膦钯(0.37g)，碳酸钾(0.88g)溶于1,4-二氧六环(15.00mL)和水(3.00mL)中，氮气置换后，75度搅拌3小时。恢复室温，加水50mL稀释，EA萃取(3x30mL)，饱和食盐水反洗，有机相用无水硫酸钠干燥后，真空浓缩，浓缩物经正相柱(100％EA除去杂质，5％MeOH/DCM分离目标产物)纯化得到目标产物1-5(1.10g，产率81.37％)。ESI-MS m/z:423.2[M+H]

步骤6：化合物1-6的合成

在室温下，将化合物1-5(1.10g)，碳酸钠(0.41g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(13.00mL)中，室温加入三溴吡啶(1.00g)，升温至35度搅拌2小时。恢复室温，加水100mL稀释，EA萃取(3x40mL)，有机相干燥后，真空浓缩，浓缩物经正相柱(3％MeOH/DCM)纯化得到目标产物1-6(1.20g，产率91.93％)。ESI-MS m/z:501.1[M+H]

步骤7：化合物1-7的合成

在室温下，将化合物1-6(0.20g)，叔丁基3-(4,4,5,5)-四甲基-1,3,2-二氧硼环-2-基)-5,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸盐(0.25g)，碳酸铯(0.26g)，四三苯基膦钯(0.05g)溶于1,4-二氧六环(5.00mL)和水(1.00mL)中，氮气置换后，85度搅拌3小时。恢复室温，加水20mL稀释，EA萃取(3x10mL)，饱和食盐水反洗，有机相干燥后，真空浓缩，浓缩物经Pre-TLC纯化得到目标产物1-7(0.22g，产率91.36％)。ESI-MS m/z:604.3[M+H]

步骤8：化合物1的合成

在室温下，将化合物1-7(240.00mg)溶于二氯甲烷(6.00mL)中，室温加入三氟乙酸(2.00mL)，室温搅拌1小时。真空浓缩，旋干TFA，加入甲苯5ml，旋干溶剂。浓缩物经Pre-TLC纯化(MeOH:DCM＝1:5)得到目标产物1(95.00mg，产率47.45％)。ESI-MS m/z:504.2[M+H]

实施例2：化合物甲基(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸盐的合成

在室温下，将化合物1(15.00mg)溶于四氢呋喃(0.50mL)中，氮气保护，冰浴下加入三乙胺(0.02mL)，再缓慢滴加甲氧羰基碳酸甲酯(5.99mg)的THF溶液0.2mL，加毕，恢复室温继续搅拌2小时。加入5mL EA稀释，再加入5滴水淬灭，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液真空浓缩，浓缩物经Pre-TLC纯化(MeOH:DCM＝1:10)得到目标产物2(7.10mg，99.23％，42.10％)。ESI-MS m/z:562.2[M+H]

实施例3：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-甲基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺的合成

在室温下，将化合物1(15.00mg)溶于四氢呋喃(0.50mL)中，氮气保护，冰浴下，加入三乙胺(0.02mL)，再缓慢滴加甲氨基甲酰氯(3.35mg)的THF溶液0.2mL，加毕，室温继续搅拌1小时。加入5mL EA稀释，再加入5滴水淬灭，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液真空浓缩，浓缩物经Pre-TLC纯化(MeOH:DCM＝1:10)得到目标产物3(5.50mg，99.31％，32.70％)。ESI-MS m/z:561.2[M+H]

实施例4：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N，N-二甲基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺的合成

在室温下，将化合物1(15.00mg)溶于四氢呋喃(0.50mL)中，氮气保护，在冰浴下，加入三乙胺(0.02mL)，再缓慢滴加二甲氨基甲酰氯(4.81mg)的THF溶液0.2mL，加毕，恢复室温继续搅拌1小时。加入5mL EA稀释，再加入5滴水淬灭，无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液真空浓缩，浓缩物经Pre-TLC(MeOH:DCM＝1:10)得到目标产物4(7.60mg，99.99％，44.38％)。ESI-MS m/z:575.3[M+H]

实施例5：化合物3-(2-((R)-1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸的合成

步骤1：化合物5-1的合成

在室温下，将化合物1-6(0.10g)，甲基3-(4,4,5,5)-环己-3-烯-1-羧酸四甲基-1,3,2-二氧硼环-2-基)(0.11g)，四三苯基膦钯(0.02g)，碳酸铯(0.10g)溶于1,4-二氧六环(4.00mL)与水(0.80mL)的混合物中，氮气条件下90度搅拌13h。将反应液用EA/饱和氯化铵水溶液(30mL*2)萃取两次，然后用无水硫酸钠干燥，再减压旋干，制备得目标产物5-1(0.03g，产率26.83％)。ESI-MS m/z:561.2[M+H]

步骤2：化合物5的合成

在室温下，将化合物5-1(10.00mg)，一水合氢氧化锂(2.24mg)溶于四氢呋喃(1.00mL)和水(1.00mL)中，室温搅拌过夜。将反应液旋干，用甲醇溶解，过滤，滤液经Pre-HPLC得目标产物5(1.10mg，产率11.31％)。ESI-MS m/z:547.2[M+H]

实施例6：化合物(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻唑-4-羧酸的合成

步骤1：化合物6-1的合成

在室温下，将化合物1-5(90.00mg)，2-溴-4-甲酸甲酯噻唑(94.64mg)，Cy

步骤2：化合物6的合成

在室温下，将化合物6-1(70.00mg)溶于甲醇(1.50mL)和水(0.30mL)中，加入一水合氢氧化锂(7.83mg)，室温搅拌1小时。旋干甲醇，加水5mL稀释，EA(3x5mL)萃取两次，收集水相，水相用3N HCl调节PH＝3，EA萃取(3x5mL)，有机相干燥后，真空浓缩，浓缩物经Pre-HPLC制备纯化得到目标产物6(3.00mg，纯度99.19％，产率14.52％)。ESI-MS m/z:550.1[M+H]

实施例7：化合物(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻唑-5-羧酸的合成

化合物7的具体合成步骤参考实施例6。ESI-MS m/z:550.1[M+H]

实施例8：化合物(S)-4-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸的合成

步骤1：化合物8-1的合成

在室温下，将化合物1-6(130.00mg)，4-甲酸甲酯苯硼酯(101.96mg)，碳酸铯(168.97mg)，四三苯基膦钯(29.93mg)溶于1,4-二氧六环(3.00mL)和水(0.50mL)中，氮气置换后，85度搅拌2h。恢复室温，加水10mL稀释，EA萃取(3x5mL)，有机相干燥后，真空浓缩。浓缩物经Pre-TLC纯化(MeOH:DCM＝1:15)得到化合物8-1(109.00mg，产率75.53％)。ESI-MS m/z:557.2[M+H]

步骤2：化合物8的合成

在室温下，将化合物8-1(109.00mg)溶于甲醇(6.00mL)和水(0.60mL)中，室温下搅拌6小时。将反应混合物浓缩除去甲醇，加水5mL稀释，EA萃取2次除去杂质，水相用3N HCl调节PH＝3-4，EA萃取(3x5mL)，饱和食盐水反洗，有机相干燥后，真空浓缩即得目标化合物8(58.00mg，产率54.60％)。ESI-MS m/z:543.2[M+H]

实施例9：化合物(S)-4-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酰胺的合成

在室温下，将化合物8(25.00mg)溶于四氢呋喃(1.00mL)中，加热至50℃，滴加氯化亚砜(0.02mL)，加毕，保持该温度继续搅拌1小时。冰浴下，加入氨水(2.00mL)，搅拌5分钟。反应液直接用EA萃取(3x3mL)，有机相干燥后，真空浓缩，浓缩物经Pre-TLC纯 化(MeOH:DCM＝1:10)得到目标产物9(12.30mg，纯度96.60％，产率47.59％)。ESI-MS m/z:542.2[M+H]

实施例10：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物10的具体合成步骤参考实施例1。目标产物10ESI-MS m/z:504.2[M+H]

实施例11：化合物(S)-4-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-甲基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺的合成

化合物11的具体合成步骤参考实施例4。目标产物11ESI-MS m/z:561.2[M+H]

实施例12：化合物甲基(S)-4-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸盐的合成

化合物12的具体合成步骤参考实施例4。目标产物12ESI-MS m/z:562.2[M+H]

实施例13：化合物(S)-4-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶 唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N，N-二甲基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺的合成

化合物13的具体合成步骤参考实施例4。目标产物13ESI-MS m/z:490.4[M+H]

实施例14：化合物(6S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-甲氧基环己-1-烯-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物14的具体合成步骤参考实施例1。目标产物14ESI-MS m/z:533.2[M+H]

实施例15：化合物甲基5-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-2-(5-氟-2-甲氧基苄基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸盐的合成

步骤1：化合物15-1的合成

在室温下，将化合物2-(5-氟-2-甲氧基苯基)乙酸(4.0000g)溶于二氯甲烷(40.0000mL)中，氮气保护，冰浴下加入草酰氯(3.3082g)和DMF(0.1681mL)，加毕，恢复室温继续搅拌2小时。将反应液直接浓缩，即得到目标产物15-1的粗品，直接进行下一步反应。ESI-MS m/z:203.0[M+H]

步骤2：化合物15-2的合成

在室温下，将化合物15-1(4.4000g)溶于四氢呋喃(16.0000mL)和乙腈(16.0000mL)中，氮气保护下，冰浴滴加叠氮基三甲基硅烷(32.0000mL)，加毕，恢复室温继续搅拌2小时即得到目标产物15-2的反应液，直接进行下一步反应。ESI-MS m/z:209.1[M+H]

步骤3：化合物15-3的合成

在冰浴下，将40％HBr(14.6000mL)水溶液滴加如上述15-2的反应液中，加毕，恢复室温继续搅拌2小时。冰浴下，加入饱和碳酸钠水溶液至PH7-8，EA萃取(3x30mL)，有机相干燥后真空浓缩。浓缩物经正相柱(10％EA/PE)纯化即得到目标产物15-3(3.0000g，产率52.9106％)。

后续具体合成步骤参考实施例1和实施例2。目标产物15ESI-MS m/z:491.2[M+H]

实施例16：化合物3-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-2-(5-氟-2-甲氧基苄基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸的合成

化合物16具体合成步骤参考实施例10。目标产物16ESI-MS m/z:476.2[M+H]

实施例17：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-(羟甲基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物17的具体合成步骤参考实施例6。目标产物17ESI-MS m/z:536.2[M+H]

实施例18：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(5-(羟甲基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物18的具体合成步骤参考实施例6。目标产物18ESI-MS m/z:536.2[M+H]

实施例19：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-(2-羟乙基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物19的具体合成步骤参考实施例6。目标产物19ESI-MS m/z:550.2[M+H]

实施例20：化合物(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻唑-4-腈的合成

化合物20的具体合成步骤参考实施例6。目标产物20ESI-MS m/z:531.2[M+H]

实施例21：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(1,3,4-噻二唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物21的具体合成步骤参考实施例6。目标产物21ESI-MS m/z:507.2[M+H]

实施例22：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-羟基噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物22的具体合成步骤参考实施例6。目标产物22ESI-MS m/z:522.2[M+H]

实施例23：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-(1-羟基环丙基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物23的具体合成步骤参考实施例6。目标产物23ESI-MS m/z:562.2[M+H]

实施例24：化合物(S)-6-(3-(4-氨基噻唑-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-1-(3,4-二氟苯基)哌啶-2-酮的合成

化合物24的具体合成步骤参考实施例6。目标产物24ESI-MS m/z:521.2[M+H]

实施例25：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(恶唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物25的具体合成步骤参考实施例6。目标产物25ESI-MS m/z:490.2[M+H]

实施例26：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(1H-咪唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物26的具体合成步骤参考实施例6。目标产物26ESI-MS m/z:489.2[M+H]

实施例27：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-((甲基磺酰基)甲基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物27的具体合成步骤参考实施例6。目标产物27ESI-MS m/z:598.2[M+H]

实施例28：化合物(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺的合成

化合物28的具体合成步骤参考实施例6。目标产物28ESI-MS m/z:563.2[M+H]

实施例29：化合物(R)-2-(2-(4-(3,4-二氟苯基)-5-氧代吗啉-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-甲基噻唑-5-甲酰胺的合成

化合物29的具体合成步骤参考实施例6。目标产物29ESI-MS m/z:565.2[M+H]

实施例30：化合物(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-5-氧吡咯烷-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-甲基噻唑-5-甲酰胺的合成

化合物30的具体合成步骤参考实施例18。目标产物30ESI-MS m/z:549.2[M+H]

实施例31：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物31的具体合成步骤参考实施例8。目标产物31ESI-MS m/z:500.2[M+H]

实施例32：化合物(S)-1-(3,4-二氟苯基)-6-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-(4-(甲胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成

化合物32的具体合成步骤参考实施例8。目标产物32ESI-MS m/z:528.2[M+H]

实施例33：化合物甲基(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)异噻唑-3-羧酸盐的合成

化合物33的具体合成步骤参考实施例6。目标产物33ESI-MS m/z:564.2[M+H]

实施例34：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)异噻唑-3-羧酸的合成

化合物34的具体合成步骤参考实施例20。目标产物34ESI-MS m/z:550.2[M+H]

实施例35：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-甲基异噻唑-3-甲酰胺的合成

化合物35的具体合成步骤参考实施例6。目标产物35ESI-MS m/z:563.2[M+H]

实施例36：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N，N-二甲基异噻唑-3-甲酰胺的合成

化合物36的具体合成步骤参考实施例6。目标产物36ESI-MS m/z:577.2[M+H]

实施例37：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-3-(4-(羟甲基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮的合成

步骤1：化合物37-1的合成

在室温下，将化合物2-溴-1,3-噻唑-4-羧酸甲酯(300.00mg)溶于甲醇(10.00mL)中，冰浴下，每隔1个小时加入2当量的NaBH

步骤2：化合物37-2的合成

在室温下，将化合物1-5(400.00mg)，1,3-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2)-二氧杂环戊烷-2-基)吡啶-2-酮(294.35mg)，四三苯基膦钯(113.82mg)，碳酸钾(272.19mg)溶于1,4-二氧六环(20.00mL)，水(2.00mL)中，氮气保护条件下80℃搅拌13h。硅藻土将反应液过滤，然后旋干，再用EA/饱和食盐水(100mL*2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经硅胶柱(DCM/MeOH＝94/6)纯化即得到目标产物37-2(170.00mg，产率38.50％)。ESI-MS m/z:449.2[M+H]

步骤3：化合物37的合成

在室温下，将化合物37-2(50.00mg)，化合物37-1(43.27mg)，[Ir(ppy)

实施例38：化合物甲基(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻唑-5-羧酸盐的合成

化合物38的具体合成步骤参考实施例37。目标产物38ESI-MS m/z:590.2[M+H]

实施例39：化合物甲基(S)-2-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-7-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻唑-4-羧酸盐的合成

化合物39的具体合成步骤参考实施例37。目标产物39ESI-MS m/z:590.2[M+H]

实施例40：化合物(S)-5-(2-(1-(3,4-二氟苯基)-6-氧哌啶-2-基)-3-(5-(羟甲基)噻唑-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮的合成

化合物40的具体合成步骤参考实施例37。目标产物40ESI-MS m/z:562.2[M+H]

本发明实施例中对应的合成中间体如下表：

下述的化合物采用上述方法合成，或使用相应中间体的类似方法合成。

药理实验

实施例1：EP300 BRD结构域结合试验

实施例1A Alpha Screen方法

1)配制1×Assay buffer；

2)化合物浓度梯度的配制：待测化合物均1μM起始，2倍稀释，设置10个梯度浓度，每个浓度设置复孔检测。在384孔Source板中梯度稀释成相应1000倍终浓度的溶液，然后转移10nL到384孔反应板中待测。Min孔和Max孔中转移10nL的100％DMSO；

3)用1×反应溶液配制2×EP300蛋白(BRD domain)溶液；

4)在各孔中加5μL的2×EP300蛋白溶液，Min孔中加5μL的1×Assay buffer，室温孵育15min；

5)用1×反应溶液配制2×乙酰化组蛋白多肽溶液；

6)反应板各孔中加入5μL的2×乙酰化组蛋白多肽溶液，1000rpm离心1min，室温孵育60min；

7)加入15μL检测液，1000rpm离心1min，轻轻振荡混匀后，室温孵育60min。

用EnVision读数。

抑制率计算公式：

Single_max：DMSO对照孔的读值

Single_min:无蛋白孔读值

以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出化合物对蛋白结合抑制的IC

表1

实施例1B HTRF方法

(1)配制1×Assay buffer。

(2)化合物浓度梯度的配制：待测化合物均1μM起始，3倍稀释，设置10个梯度浓度，每个浓度设置复孔检测。在384孔Source板中梯度稀释成相应1000倍终浓度的溶液，然后用Echo550转移20nL到384孔反应板中待测。Min孔和Max孔中转移20nL的100％DMSO。

(3)用1×反应溶液配制4×EP300蛋白(BRD domain)溶液。

(4)在各孔中加5μL的4×EP300蛋白溶液，Min孔中加5μL的1×Assay buffer，室温孵育15min。

(5)用1×反应溶液配制4×乙酰化组蛋白多肽溶液。

(6)反应板各孔中加入5μL的4×乙酰化组蛋白多肽溶液，1000rpm离心1min，室温孵育15min。

(7)加入10μL HTRF检测体系，1000rpm离心1min，轻轻振荡混匀后，室温孵育60min。

(8)用EnVision读数。

抑制率计算公式：

Single_max：DMSO对照孔的读值

Single_min:无蛋白孔读值

以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出化合物对蛋白结合抑制的IC

表2

实施例2：细胞增殖抑制检测

将22Rv1细胞按2000细胞、180μL/孔铺96孔细胞培养板。孵育隔夜后，配制梯度浓度的化合物溶液，分别向各孔细胞中加入20μL各浓度的待测化合物DMSO溶液，化合物终浓度为20000、6666.7、2222.2、740.74、246.9、82.3、27.4、9.14、3.05、0nM(DMSO终浓度均为0.25％)。37℃，5％CO

抑制百分数＝(最大值-化合物孔读数)/(最大值-最小值)*100。

“最大值”为DMSO对照；“最小值”表示无细胞对照组。

用Graphpad Prism软件进行曲线拟合并得到IC

实施例化合物对22Rv1细胞抑制的IC

表3

虽然本发明已通过其实施方式进行了全面的描述，但是值得注意的是，各种变化和修改对于本领域技术人员都是显而易见的。这样的变化和修改都应该包括在本发明所附权利要求的范围内。