植物提取物、提升男性功能和免疫力的制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及保健领域，特别是一种植物提取物、提升男性功能和免疫力的制剂及其制备方法。

背景技术

性功能是人类进行活动的本能，是生育，繁衍后代的基础，男性性功能是男性进行性活动的保证，男性性功能出现障碍就是性疾病。具体而言之，男性性功能障碍是指男性在性欲、阴茎勃起、性交、性高潮以及射精等性活动的五个阶段中，其中，某个阶段或几个阶段或整个阶段发生异常而影响性活动正常进行。

现有技术中，常规市场销售的宣称具有缓解体力疲劳、改善男性性功能的保健品中，作为改善男性性功能及抗疲劳的保健品及药物种类很多，而专为男性用的滋阴壮阳用的其种类则为数有限，它们都是以强壮身体、增强性功能为表征。在现有的男性保健品及药物中为了追求其快速显效，一般都含有多少不同或种类不同的激素，若长期服用必然引起内分泌紊乱；有的虽不含激素，但在配剂中大都使用了增加穿透力的载体物质，凡是使用穿透力强的物质时间过长的必将损害机体。

相对于西药来说，中药具有安全、副作用少、对胃肠道无损伤、对肝肾刺激小的优点，受到人们的关注，本发明研发了一种植物提取物，具有显著提升男性功能的功效，同时以植物提取物为基础，辅以生物发酵技术，开发出一种制剂，不仅改善男性功能更佳，同时还具有提高免疫力的作用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种提升男性功能和免疫力的植物提取物及其制备方法，以解决上述技术背景中提出的问题。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：

第一方面的，本发明提供了一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子10～15份、黄精10～15份、肉苁蓉12～18份、党参8～12份、黄芪8～12份、山药6～8份、玉竹3～5份、川牛膝2～4份。

作为优选的，一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、黄精12份、肉苁蓉15份、党参10份、黄芪10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

作为优选的，所述植物提取物为所含成分按比例混合后进行水提取、并浓缩得到的生药浓度0.8～1.2g/ml的浓缩液。

第二方面的，本发明提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，包含复合益生菌悬液和上述所述的植物提取物，所述制剂是植物提取物经复合益生菌悬液发酵而得。

作为优选的，所述复合益生菌悬液的用量为植物提取物的1～5v/v％。

作为优选的，所述复合益生菌悬液的用量为植物提取物的3v/v％。

作为优选的，所述复合益生菌悬液包含嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液，所述嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液的体积比为1:1。

作为优选的，所述复合益生菌悬液中所含菌株的浓度为10

中国专利201711444295.1(申请人为江南大学)公开了一株长双歧杆菌及其应用，该长双歧杆菌CCFM760保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.15032；该长双歧杆菌CCFM760应用于制作缓解便秘的食品和药品中。本发明所用长双歧杆菌CCFM760来自江南大学研究人员赠送。本发明所用嗜酸乳杆菌As1.2686，购于上海北诺生物科技有限公司。本发明团队在研究和实践过程中，单独使用嗜酸乳杆菌As1.2686和长双歧杆菌CCFM760对植物提取物进行发酵均无明显的改善植物提取物所具有的改善男性功能的功效，且其提高免疫力的效果也不佳，但是联合使用嗜酸乳杆菌As1.2686和长双歧杆菌CCFM760对植物提取物进行发酵可以显著提高植物提取物所具有的改善男性功能的功效，与此同时还能增强免疫力。推测植物提取物经过该复合益生菌(嗜酸乳杆菌As1.2686和长双歧杆菌CCFM760)代谢后制备的中药生物制剂，可以最大限度的保护中药有效成分免遭破坏，使某些有效成分含量增加及产生新的药物成分，中草药和益生菌或可相互增益，产生更加强大的治疗效果，从而提高药物疗效、扩大适应症、减少服用剂量，从而进一步提高其改善男性功能的功效，同时还有效提高免疫力。

第三方面的，本发明提供了上述所述制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)配料：按相应的植物提取物的配方进行配料；

(2)植物提取物制备：将女贞子、黄精、肉苁蓉、党参、黄芪、山药、玉竹、川牛膝按比例混合后进行水提取、并浓缩得到的生药浓度0.8～1.2g/ml的浓缩液；

(3)在步骤(2)所得浓缩液中按比例加入复合益生菌悬液，于32～37℃下发酵24～48h，得到发酵物，发酵物灭菌处理后即得所述提升男性功能和免疫力的制剂。

本发明创新之一在于，本发明提供的中药组合物，配伍合理，方中女贞子有滋补肝肾之功，黄精补气养阴、健脾润肺、益肾，肉苁蓉更具补肾阳、益精血之效；党参、黄芪，具有补中养血、益气固表的作用，共为臣药；山药益气养阴、补脾肺肾、涩精止带为佐药；玉竹、川牛膝为使药。八药协同，对提高男性功能起到了协同增效的作用；

本发明创新之二在于，制剂是植物提取物经复合益生菌悬液发酵而得，复合益生菌悬液联合使用嗜酸乳杆菌As1.2686和长双歧杆菌CCFM760，所制得的制剂不仅具有显著改善男性功能的功效，同时还能提高免疫力，且植物提取物经单一菌剂或嗜酸乳杆菌As1.2686菌液+普通长双歧杆菌CCFM760菌液所得制剂或复合益生菌菌液，其改善男性功能均有所不如，且其提升免疫力的效果也不佳。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明提供的植物提取物，配伍合理，特别是党参、黄芪；山药一起协助女贞子、黄精、肉苁蓉，对提高男性功能起到了协同增效的作用；

2、本发明的植物提取物经过该复合益生菌代谢后制备的中药生物制剂，可以最大限度的保护中药有效成分免遭破坏，使某些有效成分含量增加及产生新的药物成分，中草药和益生菌或可相互增益，产生更加强大的治疗效果，从而提高药物疗效、扩大适应症、减少服用剂量，从而进一步提高其改善男性功能的功效，同时还有效提高免疫力。

附图说明

图1为本发明不同植物提取物和制剂对大鼠血清中睾酮影响的柱状图；

图2为本发明不同植物提取物和制剂对大鼠血清中黄体生成素影响的柱状图；

图3为本发明不同植物提取物和制剂对大鼠血清中卵泡刺激素影响的柱状图。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。术语“份”表示任意质量，仅用于区分不同组分之间的质量配比，可以是0.1g，1g，1kg，1000kg等等。

植物提取物

实施例1

一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子10份、黄精15份、肉苁蓉18份、党参8份、黄芪12份、山药6份、玉竹3份、川牛膝4份。

本发明中，女贞子苦甘凉，入肝肾经，主要功效是滋补肝肾，明目乌发；

黄精味甘、性平，归肺经、脾经、肾经，具有补气养阴、健脾润肺、益肾的功能；

肉苁蓉性温、味甘、咸，归肾经、大肠经，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效；

党参其药性甘、平，归于肺、脾经，具有补中益气、生津、养血的功效；

黄芪的性味,甘,微温,归脾经和肺经,功效是补气升阳、益气固表、脱毒生肌、利水消肿；

山药性味甘、平，归于脾、肺、肾。具有益气养阴、补脾肺肾、涩精止带的功效。

实施例2

一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、黄精12份、肉苁蓉15份、党参10份、黄芪10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

实施例3

一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子15份、黄精10份、肉苁蓉12份、党参12份、黄芪8份、山药8份、玉竹5份、川牛膝2份。

对比例1

本对比例与实施例2相似，区别在于删去女贞子，具体为：一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：黄精12份、肉苁蓉15份、党参10份、黄芪10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

对比例2

本对比例与实施例2相似，区别在于删去黄精，具体为：一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、肉苁蓉15份、党参10份、黄芪10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

对比例3

本对比例与实施例2相似，区别在于删去肉苁蓉，具体为：一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、黄精12份、党参10份、黄芪10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

对比例4

本对比例与实施例2相似，区别在于删去党参，具体为：一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、黄精12份、肉苁蓉15份、黄芪10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

对比例5

本对比例与实施例2相似，区别在于删去黄芪，具体为：一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、黄精12份、肉苁蓉15份、党参10份、山药7份、玉竹4份、川牛膝3份。

对比例6

本对比例与实施例2相似，区别在于删去山药，具体为：一种植物提取物，按重量份数计，包含下述成分：女贞子12份、黄精12份、肉苁蓉15份、党参10份、黄芪10份、玉竹4份、川牛膝3份。

在分别以本申请实施例1-3、对比例1-6的原料制备植物提取物的配方如表1所示，且均按下述方法进行制备：首先按照各原料组分(实施例1-3、对比例1-6所提供的原料配方)称取各味药材，粉碎成中药粉末，加入相当于药材总重量8倍量的水，浸泡20min，煎煮1h，过滤，收集滤液，药渣再加入同样倍量的水，煎煮1h，过滤，收集滤液，重复一次，合并三次滤液浓缩得到生药浓度1.0g/ml的浓缩液，即制得植物提取物。

表1

制剂

本申请实施例4提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，包含复合益生菌悬液和实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经复合益生菌悬液发酵而得。

本实施例中，所述复合益生菌悬液的用量为植物提取物的3v/v％。所述复合益生菌悬液包含嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液，其中，嗜酸乳杆菌As1.2686，购于上海北诺生物科技有限公司；长双歧杆菌CCFM760，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.15032，本发明所用长双歧杆菌CCFM760来自江南大学研究人员赠送。将嗜酸乳杆菌As1.2686、长双歧杆菌CCFM760按照常规方法活化培养，培养基调整菌液浓度到不低于2×10

本申请实施例5提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，包含复合益生菌悬液和实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经复合益生菌悬液发酵而得，所述复合益生菌悬液包含嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液。所述复合益生菌悬液的用量为植物提取物的1v/v％。

本申请实施例6提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，包含复合益生菌悬液和实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经复合益生菌悬液发酵而得，所述复合益生菌悬液包含嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液。所述复合益生菌悬液的用量为植物提取物的5v/v％。

本申请对比例7提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，区别在于复合益生菌悬液不同，具体的，制剂包含复合益生菌悬液和实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经复合益生菌悬液发酵而得；其中，所述复合益生菌悬液包含所述复合益生菌悬液包含嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和普通长双歧杆菌菌液，普通长双歧杆菌，货号GIM1.520，购于上海沪峥生物科技有限公司。

本申请对比例8提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，区别在于复合益生菌悬液替换为单个益生菌，具体的，制剂包含嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经嗜酸乳杆菌As1.2686菌液发酵而得。

本申请对比例9提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，区别在于复合益生菌悬液替换为单个益生菌，具体的，制剂包含长双歧杆菌CCFM760菌液和实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经长双歧杆菌CCFM760菌液发酵而得。

本申请对比例10提供了一种提升男性功能和免疫力的制剂，区别在于去除复合益生菌悬液，具体的，制剂包含实施例2所得的植物提取物，所述制剂是植物提取物经直接发酵而得。

实施例4～6的制剂的制备方法参照下述方法制备：

(1)配料：按相应的植物提取物的配方进行配料；

(2)植物提取物制备：将女贞子、黄精、肉苁蓉、党参、黄芪、山药、玉竹、川牛膝按比例混合后进行水提取、并浓缩得到的生药浓度1.0g/ml的浓缩液；

其中，水提取具体为：按照各原料组分(实施例2所提供的原料配方)称取各味药材，粉碎成中药粉末，加入相当于药材总重量8倍量的水，浸泡20min，煎煮1h，过滤，收集滤液，药渣再加入同样倍量的水，煎煮1h，过滤，收集滤液，重复一次，合并三次滤液浓缩得到生药浓度1.0g/ml的浓缩液，即制得植物提取物。

(3)在步骤(2)所得浓缩液中按比例加入复合益生菌悬液，于37℃下发酵24h，得到发酵物，发酵物灭菌处理后即得所述提升男性功能和免疫力的制剂。

对比例7～10的养生茶制备方法参照上述制备方法的步骤进行适当增减。

试验例1提升男性功能研究

1、动物分组和给药：雄性300～350g的SD大鼠100只，随机分为20组，分别为1个空白组、1个模型组、1个阳性对照组和17个处理组，处理组包含：实施例1-3和对比例1-6所得的植物提取物、实施例4-6和对比例7-10所得的制剂、复合益生菌悬液。SD大鼠，货号hnslkjd001，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

空白组和模型组灌胃剂量为：生理盐水10mL·Kg

除空白组外，其余各组每天腹腔注射环磷酰胺(CP)20mg·Kg

2、检测指标：禁食1d后，采用眼眶采血法收集大鼠血液，3000rpm离心20min后收集血清，ELISA法测定大鼠血清中睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)的浓度，结果见表2和图1-3所示。

表2不同植物提取物和制剂对大鼠血清中睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素的影响

由表2和图1-3可知，相较于空白组，模型组显著降低了大鼠血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)的浓度，表明造模成功。相较于模型组，阳性组和实施例1-6组、对比例7-10均能显著提升血清睾酮浓度，而对比例1-6组提升血清睾酮浓度的作用并不明显；相较于实施例1-3，实施例4-6显著提升了大鼠血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)的浓度。这说明：1、植物提取物中各组分协同作用能显著提升了大鼠血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)的浓度，具有改善男性功能的功效。2、植物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂对改善男性功能具有更显著的效果。

试验例2提升免疫力研究

氢化可的松(HY)是一种免疫抑制剂，它可以抑制巨噬细胞吞噬作用，能够损坏淋巴细胞等，因此对机体的细胞免疫和体液免疫均有抑制作用，本申请在构建氢化可的松致免疫低下小鼠模型基础上，探究植物提取物或制剂对小鼠非特异性免疫和特异性免疫功能的影响，可为生产具有提高免疫功能的保健食品或药物提供实验依据。

1、动物分组和给药：取250只体重22～26g的SPF级BALB/c雄性小鼠，分为5个大组，5个大组分别为A、B、C、D、E组，5组试验项目分别为脏器/体重比值(A组)、小鼠迟发型变态反应测定(B组)、血清溶血素测定(C组)、小鼠碳廓清试验(D组)、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(E组)。每个大组以5只小鼠为单位设置10个小组，各小组小鼠之间无统计学差异。每个大组中，10个小组分别为1个阴性对照组(正常小鼠)、1个模型组、1个阳性对照组(转移因子口服液)、7个处理组，处理组包含：实施例2处理组、实施例4处理组、对比例7-10处理组、复合益生菌悬液处理组。SPF级BALB/c雄性小鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。

阴性对照组和模型组灌胃剂量为：生理盐水10mL·Kg

所有组别连续灌胃1个月，测定各项指标；其中，每个大组中的阳性对照组、模型组、处理组在实验的第14d、21d、28d进行50mg/kg氢化可的松肌内注射造模处理。正常小鼠组作为阴性对照，给予等剂量的生理盐水，每天灌胃一次，连续灌胃30d，第30d进行各大组指标测试。具体为：

2.1A组进行脏器/体重比值测定：饲养结束后称小鼠体重，处死小鼠，取胸腺和脾脏，去尽筋膜，吸干脏器表面的血污，称其重量，计算胸腺/体重比值以及脾脏/体重比值，其结果如表3所示。

表3不同制剂对小鼠脏器/体重比值的影响

从表3可见，相对于阴性对照组，模型组的胸腺/体重和脾脏/体重比值显著降低，具有显著性差异，表明造模成功。各处理组与模型组比均有所升高，且除实施例4组胸腺/体重和脾脏/体重比值明显升高，差异显著外，其他的组别升高不太明显，说明物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂可以抵制HY对小鼠脾脏、胸腺的损伤，使脏器指数恢复到正常。

2.2B组进行小鼠迟发型变态反应测定：给药25天后腹腔注射2％(v/v)SRBC溶液(200ul/只)进行致敏，4天免疫后每鼠左右足跖部皮下注射20％(v/v)SRBC溶液(20ul/只)进行攻击，攻击24h后颈椎脱臼处死小鼠，分别测量攻击前和攻击后24h每鼠足跖同一部位厚度，多次测量取平均值。计算攻击前、后足跖厚度差值，其结果如表4所示。

表4不同制剂对小鼠迟发型变态反应的影响

由表4可以看出，相对于模型组，实施例4组足跖厚度差值明显增加，具有显著性差异，而其它处理组相较于模型组不具有显著性差异，说明物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂对小鼠的足趾厚度影响较大。

2.3C组进行血清溶血素的测定：样品小鼠在第25d时腹腔注射，注射20％(v/v)SRBC(50ul/只)，于免疫后5d摘眼球采血，收集血清倍数稀释。将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内，每孔100ul，再加入等量0.5％(v/v)SRBC悬液，混匀，于37℃温箱孵育3h进行血清溶血素测定，统计血球凝集度，计算相应抗体积数，其结果如表5所示。

抗体积数＝(S

表5不同制剂对小鼠血清溶血素水平的影响

由表5可以看出，相对于模型组，实施例4组小鼠体内血清溶血素(抗体积数)明显增加，具有显著性差异，而其它处理组相较于模型组不具有显著性差异，说明物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂能够有效提升小鼠的血清溶血素水平。

2.4D组进行碳廓清试验：实验第30d，以0.01g/mL体重向小鼠尾静脉注入稀释后的印度墨汁。2min、10min后，各于内眦静脉丛取血20μL，立即加入0.1％的2mL碳酸钠溶液中。酶标仪于600nm波长下测不同取血时间t1＝120s、t2＝600s对应的OD1和OD2值。处死小鼠，取肝脏和脾脏，除去筋膜和表面血污，称重。按以下公式计算吞噬指数，其结果如表6所示。

吞噬指数：

碳廓清指数：

表6不同制剂对小鼠碳廓清的影响

由表6可以看出，与模型组相比，实施例4组的吞噬指数明显增加，具有显著性差异，而其它处理组相较于模型组不具有显著性差异，而且植物提取物经嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液联合发酵后所得制剂的吞噬指数显著高于植物提取物经单一菌剂或嗜酸乳杆菌As1.2686菌液+普通长双歧杆菌CCFM760菌液所得制剂或复合益生菌菌液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)，说明物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂对提高小鼠免疫活性的功效起到了一定的协同作用。

2.5小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验：各组小鼠均腹腔注射20％(v/v)鸡红细胞悬液1ml/只，半小时后颈椎脱臼处死小鼠，经腹腔注入生理盐水2ml/只，转动鼠板1min后吸出腹腔洗液lml平均分滴于2片载玻片上，载玻片在37℃温育30min后，再用生理盐水漂洗、晾干。以1：1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。镜检，油镜下计数100个巨噬细胞，计按照以下公式求出吞噬率、吞噬指数，其结果如表7所示。

表7不同制剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

由表7可以看出，与模型组相比，实施例4处理组可以显著提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，差异显著，而其它处理组相较于模型组不具有显著性差异，说明植物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂对小鼠腹腔的巨噬细胞吞噬能力有积极的影响效果。

综上所述，相较于模型组，实施例4处理组的小鼠碳廓清功能、血清溶血素(抗体积数)和巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均显著提高(P＜0.05)。在免疫低下模型成立条件下，细胞免疫、体液免疫和单核-巨噬细胞功能测定，测定结果均为阳性，则表明植物提取物经复合益生菌悬液(嗜酸乳杆菌As1.2686菌液和长双歧杆菌CCFM760菌液)发酵后所得制剂具有增强小鼠免疫力的作用。

以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。