一种海洋低分子量多肽组合物及其制备方法和应用

【技术领域】

本发明涉及天然药物技术领域，具体涉及一种海洋低分子量多肽组合物及其制备方法和应用。

【背景技术】

海洋生物的多样性、海洋环境的独特性以及海洋生物活性物质结构的新颖性使海洋成为创新与功能性/保健食品的资源宝库。自上世纪70年代以来，人们已经从海洋生物中分离出数万种新型活性物质，包括肽类、蛋白质类、多糖类、生物碱类、萜类、大环聚酯类等多种类型。其中，肽类是数量最庞大的一类化合物。现已证明，多种海洋肽类具有抗肿瘤、抗艾滋病、抗真菌、抗病毒及免疫调节等生理活性。

根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)近日发布的2020年全球最新癌症负担数据，中国已经成为了名副其实的“癌症大国”。2020年中国新发癌症病例457万例，其中男性248万例，女性209万例，2020年中国癌症死亡病例300万例，其中男性182万例，女性118万例。中国新发病例和死亡人数全球第一。癌症的高死亡率给个人和家庭带来的巨大损失、痛苦和医疗负担，更严重消耗了社会资源。目前，我国每年用于癌症患者的治疗费用高达1000亿元，占全国卫生费用总额的20％。

肿瘤的早期诊断和早期治疗是提高肿瘤治愈率的关键。现在临床常用的诊断手段有胸透、B超、CT、核磁共振等，常常是伴随着穿刺、抽血等加重病人痛苦甚至有可能发生交叉感染的手段，而且价格昂贵，更重要的是通过这些手段能检测出的肿瘤一般都处于中晚期，治愈率大大降低。癌细胞的核苷酸代谢异常会产生一种单羟酚类代谢物，其中对羟基苯丙氨酸的含量远高于正常人，而这种物质能够通过尿液排放。因此检测其尿液中的对羟基苯丙氨酸是一种无创、无痛、快速、便捷的筛查恶性肿瘤方法，在恶性肿瘤的早发现、早诊断、早治疗及预后判断方面具有重要意义。已有研究显示，恶性肿瘤中的对羟基苯丙氨酸及其代谢衍生物含量显著高于健康人和良性肿瘤患者；检查对羟基苯丙氨酸及其代谢衍生物在诊断恶性肿瘤的敏感性为89.8％，阴性预测值为91.4％，提示对羟基苯丙氨酸在恶性肿瘤(尤其是未经治疗的恶性肿瘤)的筛查中具有重要价值，可以推断人体是否患有癌症，能够及早的发现肿瘤，挽救生命，无需额外的开支，免去病人的恐惧和痛苦。

基于此，本申请提出一种组合物，根据现代医药理论研发，以期达到未病先防的效果，减少癌症疾病的发生。

【发明内容】

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种海洋低分子量多肽组合物及其制备方法和应用，具有工艺简单、易于操作等优点，本申请海洋低分子量多肽组合物，对癌症的预防有着积极意义。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种海洋低分子量多肽组合物，其特征在于，所述组合物主要由以下重量份的原料组成：白参多肽20-30份、青钱柳叶提取物15-20份、珍珠螺多肽10-15份、近江牡蛎多肽5-10份和螺旋藻藻蓝蛋白5-10份。

本发明中，进一步地，所述组合物主要由以下重量份的原料组成：白参多肽25份、青钱柳叶提取物17份、珍珠螺多肽13份、近江牡蛎多肽8份和螺旋藻藻蓝蛋白8份。

本发明中，进一步地，所述白参多肽为涠洲岛白参多肽。

具体的，所述涠洲岛白参多肽通过如下方法得到：将涠洲岛白参进行粉碎后，加入其重量15倍，且浓度为10％的NaCl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/L的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到涠洲岛白参的蛋白提取液，调节涠洲岛白参的蛋白提取液的pH值为6.5，按每克涠洲岛白参加入10mg的胰蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa和1kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量1-3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到涠洲岛白参多肽；并测定多肽结构和等电点；所述涠洲岛白参多肽N-末端序列如SEQ ID NO.1所示，具体为GGVGTDRIDTNMFEIQNTR，其分子量为2.12KDa，等电点为8.90。

本发明中，进一步地，所述珍珠螺多肽为涠洲岛珍珠螺多肽。

具体的，所述涠洲岛珍珠螺多肽通过如下方法得到：将涠洲岛珍珠螺进行打碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到涠洲岛珍珠螺蛋白悬浮浆液，调节该白参悬浮浆液的pH值为7，按每克涠洲岛珍珠螺蛋白加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到涠洲岛珍珠螺多肽，并测定多肽结构和等电点；所述涠洲岛珍珠螺多肽N-末端序列如SEQ ID NO.2所示，具体为GGVGTDRIDTNMFEIQNTR，其分子量为3.0KDa，等电点为8.60。

本发明中，进一步地，所述近江牡蛎多肽通过如下方法得到：将近江牡蛎进行粉碎后，加入其重量10倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到近江牡蛎浆；加入0.05mol/L的盐酸调节该近江牡蛎浆的pH值为5，按每克近江牡蛎加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到近江牡蛎多肽，并测定多肽结构和等电点；所述近江牡蛎多肽N-末端序列如SEQ IDNO.3所示，具体为GEAPLKKLLGDHNAGLSKAGGLIPDTTDAVYIPRA，其分子量为3.56KDa，等电点为8.85。

本发明中，进一步地，所述螺旋藻藻蓝蛋白为高纯度螺旋藻藻蓝蛋白，其制备方法如下：将藻蓝蛋白精提液通过凝胶层析柱进一步纯化精制，使用pH为6.8的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液冲洗吸附柱。同时取样溶液检测藻蓝蛋白纯度A620/A280＝3.2-3.5。最后将上述所得溶液通过钠滤、浓缩、脱盐，再经喷雾干燥，即可得到高纯度的螺旋藻藻蓝蛋白。

本发明中，进一步地，所述青钱柳叶提取物是通过将青钱柳叶粉碎后，采用60-80℃热水提取三次，料液比为1:5-20，将得到提取物进行减压浓缩，真空冷冻干燥，最终获得所述青钱柳叶提取物。

本发明还提供上述组合物的制备方法，具体如下：将白参多肽粉、珍珠螺多肽、近江牡蛎多肽、青钱柳叶提取物和螺旋藻藻蓝蛋白加入到1000重量份的水中，搅拌至完全溶解后加热至90℃，即得到所述组合物。

本发明的组合物加入制剂工艺上接受的辅料可制成饮液，辅料包括蜂蜜、果胶和/或木糖醇。

应用本申请的组合物制备一种饮液，具体方法如下：取青钱柳叶提取物、螺旋藻藻蓝蛋白、木糖醇和果胶加入水中，搅拌溶解完全，再加入涠洲岛白参多肽粉、涠洲岛珍珠螺多肽粉以及近江牡蛎多肽粉，继续搅拌30min后，加热至80℃，保温10min后，进行灌装，得到所述饮液。所述饮液可用于肿瘤的预防，所述肿瘤为肺癌或结直肠癌。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明首次提出结构明确的涠洲岛白参多肽粉、涠洲岛珍珠螺多肽、近江牡蛎多肽等用于制备组合物饮液，该组合物能够用于癌症的预防，在使用国家二类医疗器械尿液对羟基苯丙氨酸检测中，阴性为正常，阳性为癌症，弱阳性为体内已有一定量的癌变细胞，弱阳性患者在使用本申请的组合物之后，可转为阴性，该组合物制备方法简单，且成分安全无副作用，具有十分广阔的应用前景。

【附图说明】

图1为小鼠模型建立附图；

图中，A为每次循环结束时收集小鼠组织和血液的示意图；B为收集到的组织进行病理切片验证，癌细胞扩增过程图；C为小鼠肠上皮正常情况下和肿瘤长出的对比图。

【具体实施方式】

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。

实施例1

本实施例提供一种海洋低分子量多肽组合物，所述组合物主要由以下重量份的原料组成：涠洲岛白参多肽20份、青钱柳叶提取物15份、涠洲岛珍珠螺多肽10份、近江牡蛎多肽5份和螺旋藻藻蓝蛋白5份。

所述涠洲岛白参多肽通过如下方法得到：将涠洲岛白参进行粉碎后，加入其重量15倍，且浓度为10％的NaCl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/L的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到涠洲岛白参的蛋白提取液，调节涠洲岛白参的蛋白提取液的pH值为6.5，按每克涠洲岛白参加入10mg的胰蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa和1kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量1kDa的溶液，冷冻干燥后，得到涠洲岛白参多肽；并测定多肽结构和等电点；所述涠洲岛白参多肽N-末端序列为GGVGTDRIDTNMFEIQNTR，其分子量为2.12KDa，等电点为8.90。

所述涠洲岛珍珠螺多肽通过如下方法得到：将涠洲岛珍珠螺进行打碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到涠洲岛珍珠螺蛋白悬浮浆液，调节该白参悬浮浆液的pH值为7，按每克涠洲岛珍珠螺蛋白加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到涠洲岛珍珠螺多肽，并测定多肽结构和等电点；所述涠洲岛珍珠螺多肽N-末端序列为GGVGTDRIDTNMFEIQNTR，其分子量为3.0KDa，等电点为8.60。

所述近江牡蛎多肽通过如下方法得到：将近江牡蛎进行粉碎后，加入其重量10倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到近江牡蛎浆；加入0.05mol/L的盐酸调节该近江牡蛎浆的pH值为5，按每克近江牡蛎加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到近江牡蛎多肽，并测定多肽结构和等电点；所述近江牡蛎多肽N-末端序列为GEAPLKKLLGDHNAGLSKAGGLIPDTTDAVYIPRA，其分子量为3.56KDa，等电点为8.85。

所述螺旋藻藻蓝蛋白为高纯度螺旋藻藻蓝蛋白，其制备方法如下：将藻蓝蛋白精提液通过凝胶层析柱进一步纯化精制，使用pH为6.8的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液冲洗吸附柱。同时取样溶液检测藻蓝蛋白纯度A620/A280＝3.2。最后将上述所得溶液通过钠滤、浓缩、脱盐，再经喷雾干燥，即可得到高纯度的螺旋藻藻蓝蛋白；

所述青钱柳叶提取物是通过将青钱柳叶粉碎后，采用60℃热水提取三次，料液比为1:5，将得到提取物进行减压浓缩，真空冷冻干燥，最终获得所述青钱柳叶提取物。

实施例2

本实施例提供一种海洋低分子量多肽组合物，所述组合物主要由以下重量份的原料组成：涠洲岛白参多肽25份、青钱柳叶提取物17份、涠洲岛珍珠螺多肽13份、近江牡蛎多肽8份和螺旋藻藻蓝蛋白8份。

所述涠洲岛白参多肽通过如下方法得到：将涠洲岛白参进行粉碎后，加入其重量15倍，且浓度为10％的NaCl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/L的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到涠洲岛白参的蛋白提取液，调节涠洲岛白参的蛋白提取液的pH值为6.5，按每克涠洲岛白参加入10mg的胰蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa和1kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量2kDa的溶液，冷冻干燥后，得到涠洲岛白参多肽；并测定多肽结构和等电点；所述涠洲岛白参多肽N-末端序列为GGVGTDRIDTNMFEIQNTR，其分子量为2.12KDa，等电点为8.90。

所述涠洲岛珍珠螺多肽通过如下方法得到：将涠洲岛珍珠螺进行打碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到涠洲岛珍珠螺蛋白悬浮浆液，调节该白参悬浮浆液的pH值为7，按每克涠洲岛珍珠螺蛋白加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到涠洲岛珍珠螺多肽，并测定多肽结构和等电点；所述涠洲岛珍珠螺多肽N-末端序列为GGVGTDRIDTNMFEIQNTR，其分子量为3.0KDa，等电点为8.60。

所述近江牡蛎多肽通过如下方法得到：将近江牡蛎进行粉碎后，加入其重量10倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到近江牡蛎浆；加入0.05mol/L的盐酸调节该近江牡蛎浆的pH值为5，按每克近江牡蛎加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kDa的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kDa的溶液，冷冻干燥后，得到近江牡蛎多肽，并测定多肽结构和等电点；所述近江牡蛎多肽N-末端序列为GEAPLKKLLGDHNAGLSKAGGLIPDTTDAVYIPRA，其分子量为3.56KDa，等电点为8.85。

所述螺旋藻藻蓝蛋白为高纯度螺旋藻藻蓝蛋白，其制备方法如下：将藻蓝蛋白精提液通过凝胶层析柱进一步纯化精制，使用pH为6.8的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液冲洗吸附柱。同时取样溶液检测藻蓝蛋白纯度A620/A280＝3.3。最后将上述所得溶液通过钠滤、浓缩、脱盐，再经喷雾干燥，即可得到高纯度的螺旋藻藻蓝蛋白；

所述青钱柳叶提取物是通过将青钱柳叶粉碎后，采用70℃热水提取三次，料液比为1:12，将得到提取物进行减压浓缩，真空冷冻干燥，最终获得所述青钱柳叶提取物。

实施例3

本实施例提供一种组合物的制备方法，所述组合物的组成组分同实施例2所述；

所述组合物的制备方法如下：

将白参多肽粉、珍珠螺多肽、近江牡蛎多肽、青钱柳叶提取物和螺旋藻藻蓝蛋白加入到1000重量份的水中，搅拌至完全溶解后加热至90℃，即得到所述组合物。

实施例4

本实施例提供一种饮液，所述饮液包括如下重量份的原料：涠洲岛白参多肽25份、青钱柳叶提取物17份、涠洲岛珍珠螺多肽13份、近江牡蛎多肽8份、螺旋藻藻蓝蛋白8份、木糖醇50份、果胶0.5份和水1000份；

上述原料的获取方式与实施例2相同，所述饮液的制备方法如下：取青钱柳叶提取物、螺旋藻藻蓝蛋白、木糖醇和果胶加入水中，搅拌溶解完全，再加入涠洲岛白参多肽粉、涠洲岛珍珠螺多肽粉以及近江牡蛎多肽粉，继续搅拌30min后，加热至80℃，保温10min后，进行灌装，得到所述饮液。

试验例

申请人进行如下试验，以验证本申请的实用价值：

1.1小鼠肺癌发生模型的构建

实验动物分组及处理：8周龄SPF级C57BL/6小鼠，雌雄各半，共180只。购买后适应喂养2周，用气体麻醉剂异氟烷麻醉小鼠，采用吸入式气管滴注法染毒小鼠，将小鼠随机分为3组：①CTPE组小鼠60只，经气管滴注50μL CTPE(溶于DMSO与玉米油的混合溶液，VDMSO:V玉米油＝1:4)溶液，1mg/只，每周1次，连续4周后停止；②溶剂对照(vehicle control，VC)组小鼠60只，和实验组等体积DMSO与玉米油混合液气管滴注；③正常对照(normalcontrol，NC)组小鼠60只，不作任何处理。小鼠在相同条件下进行饲养，自由饮食，观察小鼠的精神状态和饮食情况并记录。

1.2分阶段观察

首次染毒后3个月、6个月、9个月与12个月分批解刨小鼠，解刨前称量体重，用1％戊巴比妥钠麻醉，每次每组解刨15只；解刨后暴露小鼠腹主静脉取血，并置于含EDTA抗凝剂的采血管中，4℃、1500r/min条件下，离心5min，抽取上层血浆置于-80℃保存；观察各组小鼠肺部成瘤情况，并用游标卡尺测量其大小，计数各阶段小鼠肺部肉眼成瘤数：肿瘤数＝每组小鼠肺部肿瘤总数/该组小鼠总数；小鼠各阶段成瘤率计算用以下公式：肺部成瘤率(％)＝每组观察到发生肿瘤的小鼠数/该组小鼠总数×100％。

1.3小鼠基本情况

CTPE气管滴注后，小鼠精神不振，食欲稍有下降，进食量减少，活动量减少，一段时间后缓解，小鼠精神状态、饮食情况及活动量等恢复正常；在整个实验过程中，各组小鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.4煤焦沥青烟提取物诱导小鼠肺部肿瘤的发生情况

在首次染毒结束后3个月、6个月分批解剖小鼠，观察小鼠肺部肿瘤形成情况。在CTPE染毒后6个月小鼠肺部均观察到肉眼可见的瘤体，多为多发、少数为单发，瘤体呈圆形、灰白色半透明，与周围组织界限清楚。正常对照组与溶剂对照组在染毒后各个阶段均未观察到肉眼可见的瘤体。CTPE组在3个月时未观察到肉眼可见的肿瘤，而在染毒后6个月的成瘤率为26.67％，瘤体大小不等，直径均小于4mm。病理结果显示，CTPE染毒后，在早期肺组织中观察到粘液分泌与大量炎细胞浸润，而在晚期炎性改变明显减弱；在6个月时可观察到大量乳头状增生。肺癌类型主要为肺腺癌、肺鳞癌、肺腺鳞癌；整个实验过程中，CTPE组发现腺癌14例、鳞癌6例、腺鳞癌6例，其中肺腺癌所占百分比53.85％，肺鳞癌所占百分比23.08％，肺腺鳞癌所占百分比23.07％。

1.5测试本申请饮液对肺肿瘤定植前(弱阳性)鼠的转阴活性

采用染毒结束后1个月的老鼠设置测试组，设置组鼠为8只，雌雄各半，每天采用实施例4所述的饮液灌胃0.5mL，分别收集灌胃后0天、第10天、第20天和第30天和第40天的尿液。运用对羟基苯丙氨酸试剂盒进行检测，检测结果发现第0天，所有被试组都为弱阳性，随着灌胃的进行，逐渐转为阴性，具体见下表。

2.1建立AOM/DSS小鼠结直肠癌模型

选择BALB/c小鼠培养，将小鼠分为正常组(PBS)和结直肠癌症(AOM/DSS)组，AOM单剂量(12.5mg/kg)腹腔注射后，1周后饲喂含2.5％DSS水溶液饮用7天，之后改为正常饮水14天，为1个循环，共循环3次，收集不同循环的小鼠尿液和组织。用无菌管收集的尿液冷冻在-20℃、将器官和肿瘤组织用福尔马林溶液中固定后，把组织放入磷酸盐缓冲液(PBS)中浸泡过夜，然后进行脱水和包埋，随后制成5μm厚的切片。将切片放入烘箱中烘烤至石蜡融化(60℃)，取出后将切片根据传统染色步骤将切片，依次经过脱蜡、染色、脱水、封片后，在显微镜下观察组织病理。

2.2模型建立

将小鼠分为PBS组和AOM组，AOM单剂量(12.5mg/kg)腹腔注射后，1周后饲喂含2.5％DSS水溶液饮用7天，之后改为正常饮水14天为1个循环，共循环2次，每次循环结束时收集小鼠组织和血液(参见图1A)。将收集到的组织进行病理切片验证，可以看到小鼠的直肠组织发生了变化，癌细胞在不断扩增(参见图1B)，由图1C可以直接观察到小鼠肠上皮的肿瘤已经长出，说明了模型建造成功。

2.3测试本申请饮液对结直肠癌前期肿瘤(弱阳性)鼠的转阴活性

采用染毒结束后第1个周期的老鼠设置测试组，设置组鼠为8只，雌雄各半，每天采用实施例3所述的组合物灌胃0.5mL，分别收集灌胃后0天、第10天、第20天和第30天和第40天的尿液。运用对羟基苯丙氨酸试剂盒进行检测，检测结果发现第0天，所有被试组都为弱阳性，随着灌胃的进行，逐渐转为阴性，具体见下表。

申请人采用实施例4所得饮液替换上述组合物进行测试，能够得到相同的检测结果，饮液在口感上比较容易被志愿者所接受，因此在进行下文的试验时，换用饮液进行测试。

3.1选择标准

征集有意参加参加研究的志愿者，在进行初步筛选的基础上，以医院的肿瘤标志物14项检查中任意单一指标升高为正常值为2倍以上，且未发生实体瘤作为本研究的健康被试者。

3.2纳入标准

①符合上述标准的男性或女性；②无基础性疾病如糖尿病、艾滋病和高血压等；③签署知情同意书；④检测为弱阳性人群。

3.3样本

本研究共纳入8例被试者，男女各半，为保证一致性，采用同一批被试者，每个每天定时服用本申请实施例4所述的饮液100ml，每隔7天采集被试者清晨第一次新鲜清洁尿样，用吸尿管吸取新鲜尿液，加入一滴尿液到测试管中，在10分钟内，观察测试管与比色卡的颜色，测试结果如下表。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明首次提出结构明确的涠洲岛白参多肽粉、涠洲岛珍珠螺多肽、近江牡蛎多肽等用于制备组合物饮品，该组合物能够用于癌症的预防，在使用国家二类医疗器械尿液对羟基苯丙氨酸检测中，阴性为正常，阳性为癌症，弱阳性为体内已有一定量的癌变细胞，弱阳性患者在使用本申请的组合物之后，可转为阴性，该组合物制备方法简单，且成分安全无副作用，具有十分广阔的应用前景。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。