局部用组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年3月23日提交的美国临时专利申请62/647436和2019年1月31日提交的美国临时专利申请62/799528的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。

背景技术

A.技术领域

本发明一般地涉及可以用于清洁、滋润、提亮、美白皮肤和/或用于改善皮肤状态和/或视觉外观的局部皮肤用组合物。组合物包含皮肤用活性成分的组合以达到这些效果。该组合包含用于皮肤的东当归(Angelica acutiloba)根提取物和草绿盐角草(Salicorniaherbacea)提取物，已经发现其在美白皮肤、降低皮肤炎症和增加皮肤水分方面特别有效。

B.相关技术说明

衰老、长期暴露于不利的环境因素、营养失调、疲劳等会以视觉上不期望的方式改变皮肤和组织的视觉外观、物理性能或生理功能。最显著和明显的改变包括细纹和皱纹的发展、弹性的损失、下垂的增加、紧实度的损失、颜色均匀性或色调的损失、粗糙的表面纹理和斑驳的色素沉着。随着皮肤和组织老化或经历长期的环境损害而发生的不太明显但可测量的改变包含细胞和组织活力的普遍降低、细胞复制速率的降低、皮肤血流量的减少、水分含量的降低、结构和功能的累积错误、普通生化途径正常调节的改变以及皮肤和组织重建和修复自身的能力降低。皮肤的外观和功能的许多变化由皮肤的外表皮层的改变导致，而其他的变化由下面真皮的改变导致。

人类皮肤的颜色是由黑色素导致的。黑色素在特殊的树突细胞，即黑色素细胞中生成，所述黑色素细胞存在于皮肤表皮的基底细胞下方或之间。当暴露于有害的环境因素，例如太阳的紫外线(UV)辐射、刺激物和污染时，角质细胞(皮肤的最外层细胞)释放出信号分子，例如α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)和炎性细胞因子，每一个都会导致不希望的皮肤色素沉着(例如色素沉着过度的皮肤)和/或经常分别以皮肤发红或皮肤红斑为特征的皮肤炎症。关于α-MSH，这个激素会触发黑色素细胞产生过量黑色素，从而产生不希望的皮肤色素沉着。许多人具有过量的黑色素沉着或色素沉着过度斑，其可以导致皮肤的色素变化或异常色素沉着。这会导致不希望的雀斑或暗斑，例如老年性雀斑样痣、肝斑、黄褐斑、棕斑或老年斑、白癜风、日晒形成的色素沉着、由于擦伤、灼伤、刀伤或皮炎、光毒性反应导致的炎症后色素沉着过度和其它小的固定的色素沉着病变。通常希望使这些区域变亮或使皮肤的不规则色素沉着区域的外观均匀，以提供更好看的皮肤色调/肤色。人们还可能希望增白或降低皮肤中色素沉着的总体水平。在每种情况下，色素沉着过度通常都被看作是美容方面不希望的，并且人们通常希望使皮肤提亮。

在一些情况下，使用一种皮肤提亮成分对有显著的色素沉着过度，例如雀斑或老年斑的人可能没有效果。另外，先前组合不同皮肤提亮成分的尝试是无效的，并且在某些情况下，造成了负面结果，例如刺激炎症细胞因子的产生。

此外，先前利用已知皮肤活性成分改善皮肤视觉外观的尝试已经显示出具有各种缺点，例如皮肤刺激性和较长的恢复期。保持皮肤水分可以有助于克服皮肤中的一些不被期望的改变。但是，保持皮肤水分会很困难(例如，比平均水平更加干燥)。暴露于化学品、溶剂、洗涤剂、化妆品、织物或干燥环境是皮肤可以失去水分的很多途径中的一些。

皮肤会由于皮肤的清洗和/或清洁而失去水分。皮肤清洗剂和/或清洁剂可以施用于皮肤并用水(例如冲洗产品)冲洗掉，从而去除皮肤上的天然油脂。此外，清洗剂和/或清洁剂常常具有会对皮肤有腐蚀性的成分。例如，很多类型的清洁剂和清新剂使用了可以导致皮肤刺激性的某些表面活性剂，这会导致皮肤炎症。

皮肤也会通过使用化妆品而失去水分。包括粉底和面膜的化妆品可以导致皮肤干燥。通常将粉底施用于皮肤并留在皮肤上，以使得可以施用额外的化妆品或掩盖不希望的瑕疵或颜色的外观。与粉底相关的一些问题包括皮肤刺激性、稳定性、缺乏足够的效力、难以施用于皮肤和皮肤干燥。通常将面膜施用于皮肤并留在皮肤上一段时间，以产生面膜所声称的益处。与面膜相关的问题包括皮肤刺激性、稳定性、缺乏足够的效力、难以应用于皮肤和干燥皮肤。许多面膜还会使皮肤去角质，这可能会导致或加剧刺激性、敏感性和干燥。

为了解决皮肤干燥，开发了保湿剂。保湿剂是化学试剂的复杂混合物，专门设计用来使皮肤的外层(表皮)更柔软和更柔韧。它们通过减少蒸发来增加皮肤的水合作用(含水量)。天然存在的皮肤脂质和甾醇以及人造油或天然油、湿润剂、润肤剂、润滑剂等可以是市售皮肤保湿剂组合物的一部分。它们通常作为用于美容和治疗用途的市售产品是可以买到的，但是也可以使用常用的药学成分自制。然而，保湿剂不是完美的。一些与保湿剂相关的问题包括：令人不愉快的触觉特性(例如厚重感、油腻感或黏腻感)、不稳定性、皮肤刺激性或保湿能力不足。

发明内容

发明人已经找到与皮肤色素沉着过度、皮肤炎症和/或需要增加滋润性的皮肤(例如干性皮肤)有关的至少一些问题的解决方案。该解决方案的前提是发现能够共同作用的成分的组合，以改变皮肤中某些生化途径，以减少皮肤色素沉着过度、减少皮肤炎症和提高皮肤水分的水平。所述组合可以包含来自东当归根的提取物和来自草绿盐角草的提取物，东当归根提取物优选其中水作为提取溶剂的水提取物，草绿盐角草提取物优选以二氧化碳(CO

在本发明的一个方面中公开了一种局部皮肤用组合物，包含有效量的东当归根提取物、草绿盐角草提取物或烟酰胺的任意一种、任意组合或全部以及化妆品载剂。所述组合物内成分的量可以改变(例如，该量可以低至0.000001重量％到高如98重量％，或是其间的任意范围)。在一些方面，局部用组合物包含0.001重量％到5重量％、优选0.001重量％到2重量％、或更优选0.001重量％到1重量％、或甚至更优选0.001重量％到0.1重量％的东当归根提取物，0.001重量％到5重量％、优选0.001重量％到2重量％、或更优选0.001重量％到1重量％、或甚至更优选0.001重量％到0.1重量％的草绿盐角草提取物，任选地0.001重量％到5重量％、优选0.001重量％到2重量％、或更优选0.001重量％到1重量％、或甚至更优选0.001重量％到0.5重量％的烟酰胺和任选地99.3重量％到99.997重量％的化妆品载剂。在一些情况下，东当归根提取物是水提取物，草绿盐角草提取物是超临界二氧化碳(CO

在一些情况下，局部用组合物包含水。在一些情況下，组合物包含25重量％到90重量％的水。在一些情况下，局部用组合物是溶液、乳液、精华素、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华素。在一些情况下，局部用组合物是润肤露、霜、黄油状物、洗剂或磨砂膏。在一些情况下，局部用组合物是适用于眼部区域下方的霜凝胶。本发明的其他局部用组合物可以用于清洗和/或清洁皮肤而不使皮肤干燥。在一些情况下，将组合物施用至干燥或有红斑的皮肤。在一些情况下，将组合物施用至色素沉着过度的皮肤或黄褐斑。在一些情况下，色素沉着过度的皮肤或黄褐斑是雀斑或黑斑。在一些情况下，将组合物施用至需要滋润和需要美白的皮肤。

在一些情况下，局部用组合物可以滋润和/或提亮或美白皮肤。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的：(1)东当归根提取物，以降低酪氨酸酶的表达，降低自由基对皮肤造成的氧化损伤和/或降低皮肤中IL-6的表达，从而减少皮肤炎症；(2)草绿盐角草提取物，以增加水孔蛋白3(AQP3)在皮肤中的表达，从而增加需要滋润的皮肤中的皮肤水分；和任选地(3)烟酰胺，以减少黑色素在黑色素细胞中的产生。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的东当归根提取物、草绿盐角草提取物和烟酰胺，能够增加皮肤水分、增加闭合蛋白产生、抑制TNF-α产生、增加聚丝蛋白/尿素产生和/或防止氧化损伤。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的草绿盐角草提取物以抑制酪氨酸酶活性和减少黑色素产生。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的东当归根提取物以促进胶原蛋白合成和抑制胶原蛋白降解。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的烟酰胺以减少黑色素产生。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的抗坏血酸化合物(例如抗坏血酸磷酸酯钠或抗坏血酸葡糖苷)，以抑制黑色素细胞中的黑色素产生，减少皮肤中的酪氨酸酶活性，减少自由基对皮肤造成的氧化损伤，增加皮肤中胶原蛋白-1的表达，增加皮肤中赖氨酰氧化酶的表达和/或减少皮肤中TNF-α和脂肪氧合酶的表达，增加胶原蛋白-1的表达可以有助于减少皱纹和细纹出现并且减少下垂和无弹性皮肤的出现，增加赖氨酰氧化酶的表达可以有助于减少皱纹和细纹的出现，并且通过增加胶原蛋白和弹性蛋白的交联减少下垂和无弹性皮肤的出现，减少皮肤中TNF-α和脂肪氧合酶的表达可以有助于减少皮肤炎症(例如皮肤发红或红斑、敏感等)。在一些情况下，组合物包含有效量的抗坏血酸磷酸酯钠和/或抗坏血酸葡糖苷以减少皮肤中酪氨酸酶的活性，降低皮肤中黑色素的产生，减少皮肤氧化，增加皮肤中胶原蛋白-1的表达，增加皮肤中赖氨酰氧化酶的表达和/或减少皮肤中TNF-α和脂肪氧合酶的活性。在一些情况下，组合物包含0.0001重量％到5重量％、优选0.0001重量％到3重量％、或更优选0.001重量％到2重量％的抗坏血酸磷酸酯钠和/或抗坏血酸葡糖苷。在一些情况下，组合物包含其他皮肤美白或提亮剂(例如苯乙基间苯二酚和/或植物氨基酸，例如海军豆提取物)，以减少酪氨酸酶活性和减少黑色素细胞中黑色素的产生。在一些情况下，组合物可以包含0.0001重量％到5重量％，优选0.0001重量％到2重量％，更优选0.001重量％到1重量％的来自海军豆的植物氨基酸。在一些情况下，局部用组合物包含有效量的水解珍珠提取物，以促进瑕疵修复和其他皮肤问题，和/或通过降低酪氨酸酶活性和黑色素细胞中黑色素的生成来减少老年斑、雀斑、色斑和粉刺以有助于均匀肤色。水解珍珠提取物也可以用于抑制皮肤中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的产生，这有助于减少细纹或皱纹的出现。MMP-9酶是胞外蛋白酶，可以降解重要的皮肤结构蛋白如胶原蛋白VII、纤维连接蛋白和层粘连蛋白。在一些情况下，组合物包含0.0001重量％到5重量％，优选0.0001重量％到2重量％，更优选0.001重量％到1重量％的水解珍珠提取物。在一些情况下，组合物包含10重量％到99重量％，优选20重量％到95重量％，更优选25重量％到90重量％的水。

本文公开的局部用组合物还可以包含本文所述的一种或多于一种成分。例如，组合物可以包含选自调理剂、保湿剂、pH调节剂、结构化剂、无机盐和防腐剂的一种或多于一种附加成分。在一些情况下，组合物还包含甘油、丁二醇、辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸酯/丙烯酸C

在一些实施方案中，局部皮肤用组合物可以包含水、东当归根水提取物、草绿盐角草提取物、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠、苯乙基间苯二酚、水解珍珠提取物、甘油、丙二醇、丁二醇、辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸酯/丙烯酸C

在一些实施方案中，局部皮肤用组合物可以包含水、东当归根水提取物、草绿盐角草提取物、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠、植物氨基酸(例如海军豆提取物)、甘油、丙二醇、丁二醇、辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸酯/丙烯酸C

在另一方面，局部皮肤用组合物可以包含水、东当归根水提取物、草绿盐角草提取物、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠和/或抗坏血酸葡糖苷、植物氨基酸(例如海军豆提取物)、水解珍珠提取物、甘油、丁二醇、辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸酯/丙烯酸C

在本发明的另一方面，局部皮肤用组合物可以包含水、东当归根水提取物、草绿盐角草提取物、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钾、植物氨基酸(例如海军豆提取物)、水解珍珠提取物、甘油、丁二醇、聚乙二醇-75、丙二醇、戊二醇、辛酸/癸酸甘油三酯、丙烯酸酯/丙烯酸C

再一方面，局部皮肤用组合物可以包含水、东当归根水提取物、草绿盐角草提取物、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钾、氨基酸(例如海军豆提取物)、水解珍珠提取物、甘油、硬脂酸钾、二丙二醇、山梨醇、肉豆蔻酸钾、肉豆蔻酸、甘油硬脂酸酯SE、PEG-60甘油异硬脂酸酯、硬脂酸、甲基椰油基牛磺酸钠、PEG-32、月桂酸钾、硬脂酸乙二醇、丁二醇、聚(丙烯酰胺-co-二烯丙基二甲基氯化铵)和月桂酸。该局部皮肤用组合物可以配制为皮肤清洁剂。

还公开了本文公开的组合物的使用方法。在一些方面，公开了改善皮肤状况或外观的方法，其包括将本发明的任意一种组合物施用于有需要的皮肤和/或脸部。在一个方面，将本文公开的任何一种组合物局部施用，并将组合物留在施用区域上，在一段时间后从施用区域除去(例如润肤露、精华素、爽肤水或霜)，和/或在施用后直接除去(例如清洁剂或爽肤水)。

在一些方面，本发明的组合物用于促进水合作用、清洁和/或美白或提亮皮肤。在一些方面，本文公开的组合物用于调理皮肤(例如使皮肤补水)。在一些情况下，本文公开的组合物用于减少皮肤中黑色素产生、减少皮肤中酪氨酸酶的产生，增加皮肤中水孔蛋白3的产生、减少活性氧(ROS)对皮肤成分的氧化、增加皮肤中胶原蛋白1的产生、减少皮肤中MMP-9的产生、增加皮肤中赖氨酰氧化酶的产生、减少皮肤中TNF-α的产生、减少皮肤中脂肪氧合酶的产生和/或减少皮肤(例如表皮角质形成细胞、黑色素细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)中IL-6的产生。

在具体的方面，本发明的组合物配制为局部皮肤用组合物。组合物可以具有用于所述化合物和提取物的可用于皮肤的载剂或载体。组合物还可以包含保湿剂或湿润剂、表面活性剂、含硅酮的化合物、UV剂、油和/或本说明书所确定的其他成分或本领域中已知的成分。组合物可以是润肤露、霜、身体乳、面膜、磨砂膏、清洗剂、凝胶、精华素、乳液(例如，水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(如水溶液或水醇溶液)、无水基底(如，口红或散粉)、软膏、乳、糊状物、气溶胶、固体形式、眼部凝胶、凝胶精华素、凝胶乳液等。该组合物可以配制成用于局部皮肤施用，在使用期间每天施用至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次或多于7次。在本发明的其它方面中，该组合物可以是储存稳定或颜色稳定的，或是两者。还期望可以选择组合物的黏度以达到希望的结果，例如根据所需的组合物类型，该组合物的黏度可以从约1cp到远超过1百万cp，或者是其中可得到的任意范围或整数(例如，在25℃下在布氏黏度计上用TC转子以2.5rpm的转速进行测量的2cp、3cp、4cp、5cp、6cp、7cp、8cp、9cp、10cp、20cp、30cp、40cp、50cp、60cp、70cp、80cp、90cp、100cp、200cp、300cp、400cp、500cp、600cp、700cp、800cp、900cp、1000cp、2000cp、3000cp、4000cp、5000cp、6000cp、7000cp、8000cp、9000cp、10000cp、20000cp、30000cp、40000cp、50000cp、60000cp、70000cp、80000cp、90000cp、100000cp、200000cp、300000cp、400000cp、500000cp、600000cp、700000cp、800000cp、900000cp、1000000cp、2000000cp、3000000cp、4000000cp、5000000cp、10000000cp等)。

在非限制性方面中，组合物可以具有约6至约9的pH值。在其它方面，pH可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。组合物可以包含甘油三酸酯。非限制性实例包含短链、中链和长链甘油三酸酯。在一些方面，甘油三酸酯是中链甘油三酸酯(例如辛酸癸酸甘油酯)。组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括苯甲酸钾、山梨酸、山梨酸钾、对苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或其任何混合物。在一些实施方案中，组合物不含对羟基苯甲酸酯。

本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。该组合物可以具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或大于60的防晒指数(SPF)，或是其中可以得到的任意整数或数。该组合物可以是防晒乳液、喷雾或霜。

本发明的组合物还可以包含以下附加成分的任何一种、任意组合或全部：水、螯合剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、结构化剂、维生素、药物成分或抗氧化剂，或这类成分的任意组合或这类成分的混合物。在特定的方面，该组合物可以包含在之前句子中确定的这些附加成分中的至少二、三、四、五、六、七、八、九、十种或全部。这些附加成分的非限制性实例在本说明书全文确定，并通过引用并入本章节。这类成分的量的范围以组合物的重量或体积计可以为0.0001％至99.9％，或者是在如本说明书其它部分中所公开的范围之间的任何整数或范围，其通过引用并入本段。

也考虑了包含本发明的组合物的试剂盒。在特定的实施方案中，组合物包含在容器中。容器可以是瓶子、分配器或包装。容器可以分配预定量的组合物。在特定的方面，组合物以喷雾、薄雾、团块或液体分配。容器可以在其表面上包含标记。该标记可以是词、缩写、图片或符号。

还考虑了在本说明书全文中所公开的组合物可以用作免洗或洗去型组合物。举例来说，免洗型组合物可以局部地施用至皮肤并在皮肤上保留一段时间(例如，至少5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟或30分钟，或至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时或24小时，或者整夜或整个白天)的组合物。或者，洗去型组合物可以是打算施用于皮肤，然后在一段时间内，如小于5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟，(比如用水)从皮肤去除或洗去的产品。洗去型组合物的实例可以是洗面奶、洗发水、护发素或肥皂。免洗型组合物的实例可以是皮肤保湿剂、防晒霜、面膜、晚霜、精华素或日霜。

预期本说明书中所讨论的任何实施方案可以针对本发明的任何方法或组合物来实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。

在一个实施方案中，本发明的组合物可以是可药用的或可化妆用的，或可以具有舒适的触觉性质。“可药用的”、“可化妆用的”和/或“舒适的触觉性质”描述具有令皮肤感觉舒适的特定的触觉性质的组合物(例如，不是太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非黏性或粘性的组合物等)。可药用的或可化妆用的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能，或组合物的水分保留性能。

还预期了包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面，产品可以是化妆品。化妆品可以是本说明书其他部分所述的那些，或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿剂、霜、润肤露、柔肤水、凝胶、清洗剂、身体乳、磨砂膏、粉底、晚霜、口红、清洁剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。

还公开了本发明的以下实施方案1至54。实施方案1是滋润皮肤或美白皮肤的方法，该方法包括将包含有效量的东当归根提取物和有效量的草绿盐角草提取物的组合物局部施用至有需要的皮肤，有效量的东当归根提取物用以减少皮肤中酪氨酸酶活性以美白皮肤，并任选地减少皮肤中细胞介素-6(IL-6)活性以减少皮肤炎症，有效量的草绿盐角草提取物用以增加皮肤中水孔蛋白3(AQP3)的表达以滋润皮肤。实施方案2是实施方案1的方法，其中东当归根提取物是水提取物，草绿盐角草提取物是超临界二氧化碳(CO

“局部施用”是指将组合物施用或涂敷到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包含适合在皮肤和/或角质组织局部施用的组合物。这类组合物一般为皮肤学上可接受的，这是因为当施用到皮肤和/或角质组织时，其不具有过度毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部护肤组合物可以具有选定的黏度以避免施用到皮肤和/或角质组织后明显的滴落或淤积。

“角质组织”包含作为哺乳类最外保护层的含有角质的层，并且包含但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。

术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中，术语定义为10％以内，优选5％以内，更优选1％以内，最优选0.5％以内。

术语“基本上”及其变体是指为包含10％以内、5％以内、1％以内、或0.5％以内的范围。

术语“抑制”或“减少”或这些术语的任何变体包含为了达到预期结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”或这些术语的任何变体包含为了达到预期结果的任何可测量的增加，例如蛋白质或分子(举例来说，基质蛋白，例如纤连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白，或者分子，例如透明质酸)的可测量的增加。

如本说明书和/或权利要求所使用的术语，术语“有效”表示足以实现期望的、预期的或想要的结果。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”、“包括”、“含有”或“具有”或这些术语的任何变体的一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

如本说明书和权利要求所使用的，词“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。

使用的组合物和方法可以“包含”、“主要包含”或“只包含”本说明书全文所公开的任何成分或步骤。关于短语“基本上由……组成”，本发明的组合物和方法的基本和新颖性质是既补水/滋润皮肤又美白/提亮皮肤并且任选地减少皮肤炎症的组合物能力。补水/滋润皮肤的方面可以通过草绿盐角草提取物增加皮肤中水孔蛋白3(AQP3)产生的能力来获得，并且皮肤美白和抗炎性的方面可以通过东当归根提取物的以下能力来获得：在皮肤中减少酪氨酸酶活性和减少IL-6的表达，并且任选地减少由于自由基例如活性氧造成的皮肤中的氧化损伤。

通过下面的详细描述，本发明的其他目的、特征和优点会变得明显。然而，应理解详细的描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明给出。另外，预期通过该详细描述，本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员会变得明显。

具体实施方式

如以上所述，本发明提供与皮肤缺水和/或不均匀肤色相关的至少一些问题的解决方案。该解决方法的前提是使用成分的组合以促进皮肤滋润以及提供提亮或美白皮肤的效果。该成分的组合包含东当归根提取物和草绿盐角草提取物以及任选地其他成分，例如烟酰胺、水解珍珠提取物、来自白海军豆的植物氨基酸和抗坏血酸的化学改性衍生物(例如抗坏血酸磷酸酯钠或抗坏血酸葡糖苷)。值得注意的是，如实例中所表明的，该成分的组合对皮肤可以具有双重皮肤水合作用和皮肤提亮效果，并且它对皮肤也可以具有抗炎效果。还确定化妆品配方使得成分的组合稳定共存并且维持它们的功效。不希望被理论所束缚，认为化妆品制剂帮助减少或避免上述成分的交叉反应，从而使得它们在单一制剂中共存，并且保持它们的功效。

在以下部分中描述本发明的这些和其他非限制性方面。

A.活性成分的组合

东当归主要产于日本(例如北海道)。这种植物的根可以通过水作为提取溶剂来提取以获得本发明的东当归根提取物。该提取物可以是液体形式，优选还可以包含丁二醇。这样的提取物以商品名称Angelys商购获得，其由Barnet Products Corporation(美国)销售。其他提取溶剂也可以使用例如醇、二醇、醇/水混合物或醇/二醇混合物。本发明中发现该提取物可以减少皮肤中酪氨酸酶的活性，其可以导致减少黑色素产生，并且最后美白或提亮皮肤。还发现该提取物有抗自由基或活性氧的抗氧化性能。还发现了该提取物有减少皮肤中IL-6活性的能力，考虑到IL-6是炎症途径的一部分，其可以有益于皮肤。

草绿盐角草主要存在于北美的沿海地区、欧洲、南非和南亚。草绿盐角草的提取物可以通过使用二氧化碳(CO

水解珍珠提取物是碱性水解黑珍珠粉的提取物。该珍珠粉是可以从黑唇牡蛎(黑蝶贝(Pinctada margaritifera))中形成的基于海洋的矿物，其可以在法属玻里尼西亚，塔希提岛附近发现。该提取物可以通过从黑唇牡蛎中培养珍珠并且捣碎珍珠以形成粉末产生。然后该粉末可以经受碱性水解过程，之后是中和步骤，然后在甘油/水混合物中溶解。这样的提取物以商品名称

本发明的植物氨基酸从海军(扁)豆(菜豆(Phaseolus vulgaris)(“海军豆”)中获得。海军豆是具有白色外观的小的椭圆形的豆。北美、欧洲、非洲、亚洲的世界各地都有产出。海军豆不同于绿豆、阿纳萨奇豆、黑豆、蔓越莓豆或芸豆、鹰嘴豆、小扁豆、粉豆、花豆、红腰豆、贝壳豆和黄豆。已经发现海军豆中的植物氨基酸明显改善皮肤的亮度。还已经表明它们改善肤色的整体均匀性和减少皮肤上暗斑的可见差别，这是因为其以黑色素产生为目标。通过将海军豆粉(已经碾碎的干海军豆)与作为提取溶剂的水接触，可以产生植物氨基酸。产生的提取物是海军豆的液体水提取物，具有来自海军豆的氨基酸。这样的提取物可以从Carrubba Inc.(美国康涅狄格州米尔福德)商购获得。可以用于生产提取物的干海军豆粉也可以从InfraReady Products Ltd.(加拿大)获得。本发明发现来自海军豆的植物氨基酸可以用于减少黑色素细胞中的黑色素产生和减少酪氨酸酶活性，这可以有益于处理皮肤上黑素生成或色素沉着过度。

烟酰胺(也被称为维生素B

烟酰胺可以从各种来源商购获得。烟酰胺商业供应商的非限制性实例是DSM(瑞士)，其商品名称为Niacinamide PC。在本发明中，发现烟酰胺可以用于减少黑色素细胞中黑色素的产生，这可以有益于处理皮肤中的黑素生成或色素沉着过度。

两种不同类型的抗坏血酸(维生素C)衍生物可以用于本发明。一种是抗坏血酸磷酸酯钠，其具有以下化学结构：

抗坏血酸磷酸酯钠可以从各种来源商购获得。抗坏血酸磷酸酯钠商业供应商的非限制实例是DSM(瑞士)

在特定实例中，抗坏血酸葡糖苷可以以商品名称AA2G

本文描述的提取物可以是通过本领域已知的萃取方法及其组合制得的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液提取、固相提取、水提取、乙酸乙酯、醇、丙酮、油、超临界二氧化碳、热、压力、压降提取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、干燥液体、再悬浮固体等。用于从植物中获得提取物的提取溶剂可以是水、醇、乙二醇或以上任意组合。将提取溶剂于整株植物或植株部分(根、茎、叶、花、芽、种子等)接触，然后提取出溶于提取溶剂中的化合物和物质。如果使用亲水的提取溶剂例如水，那么产生的提取物可以描述为亲水提取物。如果使用疏水的提取溶剂例如油，那么产生的提取物可以描述为疏水提取物。提取溶剂可以表明提取物的类型，该提取物基于提取溶剂中的植物化合物和材料的溶解度产生。

B.成分的量

期望本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论的成分。该组合物还可以包含任意数目的在本说明书全文中所描述的附加成分的组合(例如，颜料或附加的化妆品或药物成分)。在该组合物中任意成分的浓度可以改变。例如在非限制性实施方案中，组合物可以在其最终形式中包含、主要组成为或组成为，例如，至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％，或者是其中可得到的任意范围的在本说明书全文和权利要求书中提到的至少一种成分。在非限制性方面，该百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解，给定组合物中的浓度可以根据成分的添加、替换和/或减少而改变。

C.载剂

本发明的组合物可以包含所有类型的载剂和载体，或并入到所有类型的载剂和载体中。载剂或载体可以是药学或皮肤病学上可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包含水、甘油、酒精、油、含硅化合物、硅酮化合物和蜡。变化方案和其他合适的载剂对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。在一些方面，化合物、成分和试剂的浓度和组合以这样的方式进行挑选，使得组合是化学相容的并且不形成从最终产品中析出的络合物。

D.构建

本发明的组合物可以被构建或配制为多种不同形式。非限制性实例包括乳液(例如，油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳液)、霜、润肤露、溶液(水溶液或者水-乙醇溶液)、无水基底(例如口红和散粉)、清洁剂、爽肤水、精华素、凝胶、面膜、磨砂膏、身体乳、撕拉式面膜和软膏。适用于本发明的变体和其它的结构对于熟练技术人员是明显的。润肤露和霜一般地构建为油包水乳液。爽肤水、精华素和清洁剂可以是水溶液、凝胶或水包油乳液。当与润肤露和霜比较时，爽肤水、精华素和清洁剂的一个区别是前者趋向具有比后者更低的黏性。

E.附加成分

除了本说明书全文所公开成分的组合之外，组合物还可以包含附加成分，例如化妆品成分和药物活性成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子章节中进行描述。

1.化妆品成分

CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的环境下使用的非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括：香味剂(人造的和天然的；例如葡萄糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如Blue 1、Blue 1Lake、Red 40、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、调味剂/芳香剂(例如甜叶菊(Stevia rebaudiana)(甜叶)提取物和薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、紫外吸收剂(物理和化学吸收剂，例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非固醇类抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloe vera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸四钠)、防腐剂(例如苯甲酸钾、山梨酸、山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛烯琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和提亮剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20、异构寡糖和甘露醇)、剥离剂、阻水剂(例如氢氧化钠镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调节剂(例如芦荟提取物、尿囊素、红没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、辛基十二醇油酸酯和甘草酸二钾)。这些成分中的一些的非限制性实例在以下子章节中提供。

a.UV吸收剂和/或反射剂

可以与本发明的组合物组合使用的UV吸收剂和/或反射剂包含化学和物理防晒物质。可以使用的化学防晒霜的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(如PABA甘油酯、戊基二甲醇PABA酯和辛基二甲醇PABA酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、乙基二羟基丙醇PABA酯、二苯甲酮(例如羟苯甲酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1到二苯甲酮-12)、肉桂酸盐/酯(例如甲氧基肉桂酸辛酯(桂皮酸盐)、对甲氧基肉桂酸异戊酯、肉桂酸辛基甲氧基酯、西诺沙酯、二异丙基肉桂酸甲酯、甲氧基肉桂酸DEA盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸酯(例如均甲基水杨酸酯、水杨酸苄酯、乙二醇水杨酸酯、异丙基苄醇水杨酸酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、原膜散酯、水杨酸异辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、含二羟基丙酮的指甲花醌、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸脂聚二甲基硅氧烷、对苯二亚甲基二莰酮磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并

b.保湿剂

可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包含氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、糖类同分异构体、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、脲和木糖醇。

其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻提取物、翠叶芦荟(Aloebarbadensis)、翠叶芦荟提取物、翠叶芦荟凝胶、药蜀葵(Althea officinalis)提取物、杏子(杏，Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸酯、山金车(Arnica montana)提取物、天冬氨酸、鳄梨(酪梨，Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、白桦(垂枝桦，Betula alba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花(Calendula officinalis)提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、小豆蔻(Elettariacardamomum)油、巴西棕榈Ccopernicia erifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、洋甘菊(白花春黄菊，Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(欧丹参，Salvia sclarea)油、可可(Theobromacacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptus globulus)油、夜来香(月见草，(Oenothera biennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草(Geranium maculatum)油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚氧乙烯醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、乙二醇硬酯酸酯、乙二醇硬酯酸酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、榛子(美洲榛，Corylus americana)坚果油、榛子(欧洲榛，Corylus americana)坚果油、己二醇、透明质酸、混合红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、硬脂酸异鲸蜡醇酯、异鲸蜡醇硬脂酰基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(素方花，Jasminumofficinale)油、霍霍巴(Buxus chinensis)油、巨藻、石栗(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚氧乙烯醚乙酸酯-10、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrusmedica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果(Macadamia ternifolia)油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA、矿物油、貂油、黄褐色被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基月桂醇、辛基月桂醇肉豆蔻酸酯、辛基月桂醇硬脂酰基硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrusaurantium dulcis)油、棕榈(Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(prunus persica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酯、PEG-15椰油烷基胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油异硬脂酸酯、PEG-5甘油硬脂酸酯、PEG-30甘油硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五酸内酯、胡椒薄荷(辣薄荷，Menthapiperita)油、凡士林、磷脂、多氨基酸多糖缩合物、聚甘油二异硬脂酸酯-3、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(稻，Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salvia officinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、牛油果(Butyrospermum parkii)脂、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原、失水山梨醇月桂酸酯、失水山梨醇油酸酯、失水山梨醇棕榈酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜杏仁(Prunusamygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛酸甘油酯、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂酸甘油酯、脲、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Cananga odorata)油。

c.抗氧化剂

可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包含乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚氧乙烯醚-5、生育酚聚氧乙烯醚-10、生育酚聚氧乙烯醚-12、生育酚聚氧乙烯醚-18、生育酚聚氧乙烯醚-50、生育酚、托可索伦、乙酸生育酚酯、亚油酸生育酚酯、烟酸生育酚酯、琥珀酸生育酚酯和亚磷酸三(壬基酚)酯。

d.结构化剂

在其它非限制性方面，本发明的组合物可以包含结构化剂。在特定的方面，结构化剂帮助给组合物提供流变学特征以有助于组合物的稳定性。在其它方面，结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1到约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1到约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。

e.乳化剂

在本发明的一些方面，组合物不包含乳化剂。然而，在其它方面，组合物可以包含一种或更多种乳化剂。乳化剂可以降低相间表面张力并改善乳状液的配制和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见例如美国专利第5,011,681号；第4,421,769号和第3,755,560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、丙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷基酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、酰基乳酸酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚氧乙烯(3)醚磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯(20))、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚氧乙烯(2)醚、硬脂醇聚氧乙烯(20)醚、硬脂醇聚氧乙烯(21)醚、十六/十八醇聚氧乙烯(20)醚、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚(3)醚、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚(20)醚、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚氧乙烯(10)醚、聚山梨醇酯(80)、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯(60)、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生基葡萄糖苷及其混合物。

f.含有硅酮的化合物

在非限制性方面，含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合物产品家族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联，硅酮可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体到凝胶到固体改变。

可以在本发明的环境下使用的含硅酮的化合物包含在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包含硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在一些方面，含硅的化合物包含硅油，例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包含聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅酮-11、苯基聚三甲基硅氧烷、聚三甲基硅氨基二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或它们的混合物和其它任何给定比例的有机硅氧烷材料，以根据预期的应用(例如，对特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包含具有低气化热的硅油，即通常低于约50卡每克硅油。挥发性硅油的非限制性实例包含：环聚二甲基硅氧烷，例如Dow Corning 344Fluid、Dow Corning345Fluid、Dow Corning 244Fluid和Dow Corning 245Fluid、Volatile Silicon 7207(康涅狄格州丹伯里的Union Carbide Corp.)；低黏度聚二甲基硅氧烷，即黏度大约为50cst或更低的聚二甲基硅氧烷(例如聚二甲基硅氧烷，例如Dow Corning 200-0.5cst Fluid)。DowCorning Fluid可以从密歇根州米德兰的Dow Corning Corporation购得。在CTFA化妆品成分词典的第三版中(通过引用并入)，环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷混合物。可以在本发明的环境下使用的其它非限制性挥发性硅油包含从纽约州沃特福德的GeneralElectric Co.,Silicone Products Div.和密歇根州艾德里安的SWS Silicones Div.ofStauffer Chemical Co.获得的那些。

g.去角质剂

去角质剂包括去除皮肤外表面上的死皮细胞的成分。这些试剂可以通过机械、化学和/或其他方式起作用。机械去角质剂的非限制性实例包括研磨剂，例如浮石、二氧化硅、织物、纸、贝壳、珠、固体晶体、固体聚合物等。化学去角质剂的非限制性实例包括酸和酶去角质剂。可用作去角质剂的酸包括但不限于乙醇酸、乳酸、柠檬酸、α羟基酸、β羟基酸等。本领域技术人员已知的其他去角质剂也可考虑为在本发明的范围内有用。

h.精油

精油包括来自药草、花朵、树木和其它植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在，并可以用本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如，蒸气蒸馏、脂吸法(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露于空气时，其趋于挥发(即挥发性油)。因此，虽然许多精油是无色的，但是随着时间其被氧化并且颜色变得更深。精油不溶于水，但溶于醇、醚、非挥发油(植物油)和其他有机溶剂。在精油中发现的一般物理特征包括从约160℃到240℃变化的沸点和从约0.759到约1.096的密度。

精油一般通过油被发现的来源植物命名。例如，玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明的环境下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、多香果油、玫瑰油、大茴香油、香脂花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、梨莓油、橘子油、甘牛至油、没药油、苦橙花油、橙油、绿叶油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油、依兰依兰。还预期本领域技术人员已知的其它精油在本发明的环境下是有用的。

i.增稠剂

包括增稠剂或凝胶剂在内的增稠剂，包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的一些方面，增稠剂包含氢化聚异丁烯、三羟基硬脂酸甘油酯、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或其混合物。

可以在本发明的环境下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或更多种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、取代的丙烯酸和这些丙烯酸和取代的丙烯酸的盐和酯，其中所述交联剂含有两个或更多个碳-碳双键，并衍生自多元醇(参见例如美国专利第5,087,445号；第4,509,949号；第2,798,053号和CTFA International CosmeticIngredient Dictionary，第四版，1991，第12和80页)。市售羧酸聚合物的实例包括卡波姆，其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如，购自Lubrizol AdvancedMaterials,Inc.的Carbopol

交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。非限制性实例描述于美国专利第5,100,660号；第4,849,484号；第4,835,206号；第4,628,078号和第4,599,379号)。

聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物，其包含取代支化的或未支化的聚合物)的非限制性实例包含聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺和经取代的丙烯酰胺与丙烯酸和经取代的丙烯酸的多嵌段共聚物。

多糖的非限制性实例包含纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素，其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选地羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素，其然后用C10-C30直链或支链烷基基团通过醚键进行进一步改性。一般这些聚合物为C10-C30直链或支链醇与羟烷基纤维素的醚。其它有用的多糖包含硬葡聚糖类，其包含每三个单元具有一个(1-6)连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。

本发明可以使用的胶的非限制性实例包含阿拉伯树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支化淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合硅石、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、刺槐角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。

j.防腐剂

可以在本发明的环境下使用的防腐剂的非限制性实例包含季铵盐防腐剂(例如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵))、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧基乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。

2.药物成分

还预期药物活性剂对本发明的组合物是有用的。药物活性剂的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、肛门直肠药、抗组胺药、包括非甾族消炎药在内的消炎剂、抗生素、抗菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌活性剂、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物在内的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性物、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性剂、鼻活性剂、阴道活性剂、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。

F.试剂盒

还预期了用于本发明的一些方面的试剂盒。例如，本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、高压容器、屏障容器、袋、分室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其它类型的容器，例如注射或吹塑成型的塑料容器，其中保存分散体或组合物或期望的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面可包含标记。举例来说，标记可以是字词、短语、缩写、图片或符号。

所述容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中，可以挤压容器(例如金属、层压或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸机构或挤压机构。试剂盒还可以包含使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的组合物的说明书。说明书可以包含如何施用、使用和保存组合物的解释。

实施例

列出以下实施例以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解，以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，并因此可以被认为为其实践建立优选的模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，在所公开的具体实施方案中可以做许多改变，并仍获得类似或相似的结果。

本文所公开和要求保护的所有组合物和方法根据本公开可以不需要过多实验而做出和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述，但是对于本领域技术人员明显的是，可以对所述组合物和方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序进行改变，而不脱离本发明的构思、精神和范围。更具体地，明显地，化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的构思、范围和概念内。

表1中的皮肤活性成分用于取得在实施例1中的体外数据和实施例2至6中描述的制剂。

表1

实施例1

(体外数据)

B16色素沉着分析：黑素生成是黑色素细胞产生黑色素的过程，黑色素是天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑素生成有益于预防与老化有关的皮肤暗沉和减轻黑斑。该生物分析采用B16-F1黑素细胞(ATCC)，一种永生化的小鼠黑色素瘤细胞系，以分析化合物对黑素生产的效果。该分析的终点是黑色素产生和细胞活力的分光光度测量。在37℃下10％的CO

表2(B16黑素生成数据)

蘑菇酪氨酸酶活性分析：在哺乳动物细胞中，酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素的生物多步合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中，并产生给予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香醌化合物)。在表3中所示量的每种提取物的存在下，利用其底物L-多巴(Fisher)培养纯化的蘑菇酪氨酸酶(Sigma)。可以在490nm处通过比色板读数来评估色素形成。计算蘑菇酪氨酸酶活性的抑制百分比并将其与未处理的对照物进行比较，以确定测试成分抑制纯化酶活性的能力。

表3(蘑菇酪氨酸酶抑制)

水孔蛋白3mRNA表达:将1％的Saliporine-8施用于重组人类表皮的表面。通过RT-PCR通过基因表达(mRNA)测量Saliporine对水孔蛋白3(AQP3)的效果，并且通过蛋白质免疫印迹法来定量蛋白质的表达。如表4所示，发现1％的Saliporine-8以30％促进了水孔蛋白3mRNA的表达。这可以有益于处理干性皮肤或需要增加水分的皮肤。特别是，在角质形成细胞中缺少充分的AQP3表达可以呈现出特征为干性皮肤、皮肤弹性降低和伤口愈合的屏障修复延迟的表皮表型。认为这是由于AQP3作为水和甘油的膜转运体，并表达在表皮角质形成细胞的基底层的质膜上。

表4(水孔蛋白3蛋白质的表达)

抗氧化(AO)分析：使用测量表5中所示量的成分的总抗氧化能力的体外生物分析。所述分析依赖于样品中抗氧化剂的能力来抑制

表5(抗氧化能力)

胶原蛋白刺激测定：胶原蛋白是对皮肤结构关键的一种细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤坚实度和弹性。使用生物分析检验由人类表皮成纤维细胞产生原胶原蛋白肽(一种胶原蛋白的前体)的效果。该分析的终点是反映前胶原肽的存在和细胞活力的分光光度测量。该分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对前胶原肽特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。将标准品和样品移液到孔中，存在的所有原胶原蛋白肽由固定化的抗体结合。冲走所有未结合的物质后，在孔中添加对原胶原蛋白肽特异的酶联多克隆抗体。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，将底物溶液添加到孔中，以使颜色显现与最初步骤中结合的原胶原肽的量成比例。终止颜色显现，颜色的强度使用酶标仪在450nm处测量。

为了产生样品和对照，将亚汇合的正常人成熟表皮成纤维细胞(CascadeBiologics)在37℃下10％的CO

表6(胶原蛋白1的表达)

基质金属蛋白酶活性(MMP)分析：采用体外基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析，确定在表7中所示量的成分对抑制皮肤中MMP表达的效力。MMP是胞外蛋白酶，其凭借广泛的底物特异性在许多正常状态和疾病状态起作用。MMP3底物包含胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白；而MMP9底物包含胶原蛋白VII、纤连蛋白和层粘连蛋白。使用来自BioMolInternational的用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的Colorimetric Drug Discoverykits，该分析设计用于测量MMP的蛋白酶活性，使用含硫多肽作为显色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6。MMP裂解位点的肽键由含硫多肽中的硫酯键替代。该键被MMP水解产生巯基，其与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，埃尔曼试剂]反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸，可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH 6.0和高于7时，ε＝13600M

表7(MMP抑制)

赖氨酰氧化酶分析：在皮肤细胞(例如表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)上进行赖氨酰氧化酶分析以确定表8中所列成分对刺激皮肤中赖氨酰氧化酶的表达的能力。赖氨酰氧化酶可以催化弹性蛋白和胶原蛋白的交联，从而为皮肤提供在结构上更坚固的基底。通过增加赖氨酰氧化酶的表达，会发生弹性蛋白和胶原蛋白的交联的增加，这可以有益于减少细纹、皱纹、皮肤下垂和/或无弹性皮肤的出现。

表8(赖氨酰氧化酶)

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分析：TNF总科的原型配体TNF-α是在炎症中起主要作用的多效细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。使用该生物测试分析表9中所列量的成分对人类表皮角质细胞产生的TNF-α的效果。该分析的终点是反映TNF-α的存在和细胞活力的分光光度测量。该分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对TNF-α特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。标准品和样品移液到孔中，存在的所有TNF-α由固定化的抗体结合。冲走所有未结合的物质后，在孔中添加对TNF-α特异的酶联多克隆抗体。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，添加底物溶液到孔中，颜色显现与最初步骤中结合的TNF-α的量成比例，使用酶标仪在450nm处检测。终止颜色显现，测量颜色的强度。在37℃下5％的CO

表9(TNF-α表达)

IL-6分析：白介素-6(IL-6)分析在皮肤细胞(例如表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)上实施，以确定表8中所列成分对抑制皮肤中IL-6活性的能力。已知IL-6会引起皮肤炎症。减少皮肤中IL-6表达会导致皮肤炎症的减少。

表10(IL-6抑制分析)

一般步骤

可以通过在70℃至75℃加热下的烧杯中混合所述成分直到均匀来分别制备下表中所述的制剂。然后，可以将所述制剂冷却到标准室温(20℃至25℃)。进一步的，如果需要的话，例如可以添加另外的成分来改变给皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。在所有步骤中，例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变性能、改变pH或作为防腐剂。

实施例2

(润肤露制剂)

表11、表12和表13提供了本发明的皮肤润肤露制剂，其构建为水包油乳液。该制剂表现出减少皮肤色素沉着的能力，这可以均匀皮肤色调并且减少色素沉着过度的或有黑斑(例如太阳斑、老年斑、雀斑)的皮肤的出现。进一步的，该制剂也表现出增加皮肤水合作用的能力。

表11

表12

表13

*可以添加赋形剂以改变制剂的流变性能或提供另外的护肤益处，或是提供另外的防腐剂。该赋形剂可以包括聚季铵盐-51、山梨酸、山梨酸钾、柠檬酸、环己硅氧烷、植物提取物和/或油、生育酚、苯甲酸钠和/或植物提取物和/或油。如果添加赋形剂，则可以添加赋形剂以使制剂包含100重量％的成分。如果没有添加赋形剂，之后可以相应地调整水的量，使制剂包含100重量％的成分。

发现丙二醇、1,2-己二醇、羟基苯乙酮、戊二醇、苯乙基间苯二酚和红没药醇的组合导致一些皮肤刺激性问题。当除去这些成分并用植物氨基酸、羟丙基环糊精、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯和苯甲酸钾替代时，皮肤刺激性会改善。

实施例3

(精华素制剂)

表14描述了本发明的精华素制剂。该制剂表现出减少皮肤色素沉着的能力，这可以均匀皮肤色调并且减少色素沉着过度的或有黑斑(例如太阳斑、老年斑、雀斑)的皮肤的出现。进一步的，该制剂也表现出增加皮肤水合作用的能力。

表14

*可以添加赋形剂以改变制剂的流变性能或提供另外的护肤益处，或是提供另外的防腐剂。该赋形剂可以包括羟丙基环糊精、柠檬酸三乙酯、柠檬酸、山梨酸钾、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、苯甲酸钾、山梨酸、苯甲酸钠和/或植物提取物和/或油。如果添加赋形剂，则可以添加赋形剂使制剂包含100重量％的成分。如果没有添加赋形剂，之后可以相应地调整水的量，使制剂包含100重量％的成分。

实施例4

(爽肤水制剂)

表15提供了本发明的爽肤水制剂，其构建为水溶液。该制剂表现出减少皮肤色素沉着的能力，这可以均匀皮肤色调并且减少色素沉着过度的或有黑斑(例如太阳斑、老年斑、雀斑)的皮肤的出现。进一步的，该制剂也表现出增加皮肤水合作用的能力。

表15

*可以添加赋形剂以改变制剂的流变性能或提供另外的护肤益处，或是提供另外的防腐剂。该赋形剂可以包括羟丙基环糊精、卡波姆、聚山梨醇酯-20、乙基己基甘油、柠檬酸三乙酯、山梨酸钾、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、柠檬酸、苯甲酸钾、二甲硅油、透明质酸钠、山梨酸、苯甲酸钠、环己硅氧烷、生育酚和/或植物提取物和/或油。如果添加赋形剂，则可以添加赋形剂以使制剂包含100重量％的成分。如果没有添加赋形剂，之后可以相应地调整水的量，使制剂包含100重量％的成分。

实施例5

(眼霜)

表16提供了本发明的眼霜制剂，其构建为水包油乳液。该制剂表现出减少皮肤色素沉着的能力，这可以均匀皮肤色调并且减少色素沉着过度的或有黑斑(例如太阳斑、老年斑、雀斑)的皮肤的出现。进一步的，该制剂也表现出增加皮肤水合作用的能力。

表16

*可以添加赋形剂以改变制剂的流变性能或提供另外的护肤益处，或是提供另外的防腐剂。该赋形剂可以包括月桂醇聚醚-7、羟丙基环糊精、聚二甲基硅氧烷交联聚合物、环戊烷、环己硅氧烷、山梨酸钾、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、柠檬酸、苯甲酸钾、山梨酸和/或植物提取物和/或油。如果添加赋形剂，则可以添加赋形剂以使制剂包含100重量％的成分。如果没有添加赋形剂，之后可以相应地调整水的量，使制剂包含100重量％的成分。

实施例6

(皮肤清洁剂制剂)

表17提供了本发明的皮肤清洁剂制剂。该制剂表现出减少皮肤色素沉着的能力，这可以均匀皮肤色调并且减少色素沉着过度的或有黑斑(例如太阳斑、老年斑、雀斑)的皮肤的出现。进一步的，该制剂也表现出增加皮肤水合作用的能力。

表17

*可以添加赋形剂以改变制剂的流变性能或提供另外的护肤益处，或是提供另外的防腐剂。该赋形剂可以包括碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、山梨酸钾、生育酚、柠檬酸、苯甲酸钾、山梨酸和/或植物提取物和/或油。如果添加赋形剂，则可以添加赋形剂以使制剂包含100重量％的成分。如果没有添加赋形剂，之后可以相应地调整水的量，使制剂包含100重量％的成分。

实施例7

(附加分析)

可以用于确定在本说明书全文和权利要求书中所公开的任意一种成分、或成分的任意组合、或具有所述成分组合的组合物的功效的分析可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行确定。以下是可以在本发明的情况中使用的非限制性分析。应认识到，可以使用其它测试过程，包括例如客观的和主观的过程。

弹性蛋白刺激分析：弹性蛋白是一种结缔组织蛋白，其帮助皮肤在伸展或收缩后恢复形状。弹性蛋白也是在需要储存机械能的位置使用的重要负载蛋白。弹性蛋白是由许多可溶性弹性蛋白原蛋白分子在由赖氨酰氧化酶催化的反应中连接而成。通过直接ELISA夹心法在培养的人成纤维细胞中监测弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维，并使用Meso ScaleDiscovery系统SECTOR 2400成像系统进行分析。

层粘连蛋白和纤连蛋白刺激分析：层粘连蛋白和纤连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也被称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮联结之间，形成叫做网脊的指状突出。表皮的细胞从真皮的血管中接收其养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织室的粘连，并控制皮肤的结构完整性。层粘连蛋白和纤连蛋白是位于DEJ中的两种糖蛋白。考虑到将细胞保持在一起的胶，真皮成纤维细胞分泌层粘连蛋白和纤连蛋白以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间粘连。

层粘连蛋白和纤连蛋白的分泌可以通过定量在培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层粘连蛋白和纤连蛋白来监测，培养的人成纤维细胞用含或不含1.0％最终浓度的测试成分的培养基处理3天。培养之后，在酶联免疫吸附测试(ELISA)中，使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体来测定层粘连蛋白和纤连蛋白含量。

ORAC分析：还可以通过测量该成分或组合物的抗氧化活性来分析本说明书公开的一种活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的氧自由基吸收(或吸收率)能力(ORAC)。抗氧化活性说明减少氧化试剂(氧化剂)的能力。该分析定量抑制氧化剂，例如已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧自由基的活动的程度及时长。可通过本领域普通技术人员已知的方法(参见美国专利公布号2004/0109905和2005/0163880，以及通常可获得的试剂盒例如Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2))来确定本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的ORAC值。Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒测定了由于AAPH(2,2'-偶氮双-2-甲基丙脒二盐酸盐)分解获得的过氧自由基的形成，荧光素荧光随时间的损失。作为水溶性维生素E的Trolox以剂量依赖的方式作为抑制荧光素衰变的阳性对照。

基质金属蛋白酶1活性(MMP1)分析：体外基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析。MMP是胞外蛋白酶，其凭借广泛的底物特异性在许多正常的和疾病状态起作用。MMP1底物包含胶原蛋白IV。分子探针Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)利用荧光明胶底物来检测MMP1蛋白酶活性。在溶蛋白性裂解后，显示亮绿色荧光，并可以使用荧光酶标仪来监测亮绿色荧光以测量酶活性。

将来自Invitrogen的Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)设计为体外分析以测量MMP1酶活性。可以分析说明书中公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物。该分析依赖于纯净的MMP1酶降解荧光明胶底物的能力。一旦底物被MMP1特异地裂解，则显示亮绿色荧光，并可以使用荧光酶标仪观测亮绿色荧光。在纯净的酶和底物存在或不存的条件下孵育测试物质以确定其蛋白酶抑制能力。

环氧合酶(COX)分析：体外环氧合酶-1和环氧合酶-2(COX-1、COX-2)抑制分析。COX是一种展现环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转化为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2；PGG2)，过氧化物酶组分将内过氧化物(前列腺素H2；PGH2)还原为相应的醇，前列腺素、凝血噁烷和环前列腺素的前体。该COX抑制剂筛选分析测量环氧合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现进行比色分析。该抑制筛选分析包含COX-1和COX-2酶两者，以筛选同工酶特异性抑制剂。可以使用比色COX(绵羊)抑制剂筛选分析(#760111，Cayman Chemical)来分析本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)活性的影响。根据制造商的指示，纯化酶、血红素和测试提取物可以在分析缓冲液中混合，并在室温下伴随摇动孵育15分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸和比色底物以开始反应。颜色显现可以通过在590nm读取的比色板进行评估。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较进行计算，以确定测试提取物抑制纯化酶活性的能力。

脂肪氧合酶(LO)分析：体外脂肪氧合酶(LO)抑制分析。LO是非血红素的含铁的加双氧酶，其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物和动物中LO的主要底物。然后，花生四烯酸可以转化为羟基二十三烯(HETE)酸衍生物，其随后转化为有效的炎症介质白三烯。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂肪氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)产生的氢过氧化物提供一种精确的和方便的用于筛选脂肪氧合酶抑制剂的方法。可以使用比色LO抑制剂筛选试剂盒(#760700，Cayman Chemical)来确定本说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种抑制酶活性的能力。纯化的15-脂肪氧合酶和测试成分可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动培育10分钟。培育之后，可以加入花生四烯酸开始反应，并且混合物可以在室温下再培育额外的10分钟。可以加入比色底物终止催化，颜色变化可以通过在490nm读取的荧光板进行评估。脂肪氧合酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较来计算，以确定说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种抑制纯化酶活性的能力。

弹性蛋白酶分析：来自Molecular Probes(俄勒冈州尤金，USA)的

控油分析：用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的分析可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。一种情况下，可以使用前额。可以将本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物，每天一次或两次地施用到前额的一部分设定天数(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天)，而前额的其他部分不用所述组合物处理。在设定天数期满后，皮脂分泌可以通过将细吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从处理过的和未处理的区域去除所有皮脂完成的。然后将吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额区域，并且绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸墨纸压到皮肤上。2小时后，吸墨纸可以移去，使其干燥，然后进行透照。颜色越深的吸墨纸对应于越多的皮脂分泌(或颜色较浅的吸墨纸对应于减少的皮脂分泌)。

红斑分析：测量皮肤发红减少的分析可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象的前臂施用0.2％的十二烷基硫酸钠溶液来诱发。该区域用封闭的贴片保护24小时。24小时后，除去贴片，可以使用Minolta Chroma Meter的a

皮肤水分/水合分析：皮肤水分/水合的益处可以通过利用以Nova Dermal PhaseMeter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时，其导电性很差。当其变得较为滋润时，产生增加的导电性。因此，皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。该仪器可以根据仪器说明针对每个测试日进行校准。还可以对温度和相对湿度进行标记。对对象可以进行如下评估：测量前使样品可以在确定湿度(例如30-50％)和温度(例如68-72℃)的室内进行平衡。在脸的每一侧获取三个单独阻抗读数，并对其进行记录和并取平均分。阻抗计可以使用T5设定，其对施用到脸上每五秒的阻抗值进行平均。变化可以以统计学方差和显著性进行报告。根据该方法可以分析本说明书中公开的活性成分、任意一个成分组合中或具有所述组合的组合物每一种。

皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的分析：使用Minolta Chromometer评估皮肤清透度和雀斑与老年斑减少。肤色改变可以使用Minolta Chroma Meter的a

皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色分析：皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色可以用临床评分技术进行评估。例如，皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligmanscale进行确定：(0)皮肤是柔软和湿润的；(1)皮肤呈现正常而没有可见的干燥；(2)皮肤触摸感觉轻微干燥而没有可见的剥落；(3)皮肤感觉干燥、粗糙并且具有有些鳞屑的发白的外观；以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有有鳞屑的发白的外观。评估可以由两个临床医师独立进行并取平均分。

肤色临床评分分析：肤色的临床评分可以通过十点模拟数值量度来实施：(10)平滑均匀的皮肤、粉红棕的颜色。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或有脱皮的斑块。皮肤的细微纹理摸上去非常均匀；(7)不用放大镜观察均匀的肤色。没有脱皮区域，但是有由于色素沉着或红斑引起的轻微变色。没有直径大于1cm的变色；(4)轻易地注意到皮肤变色和不均匀的纹理。少量脱皮。皮肤的某些区域摸上去粗糙；以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域的脱皮和变色，色素减退型、发红的或黑色的斑点。大面积的直径超过1cm的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并取平均分。

皮肤光滑度的临床评分分析：皮肤光滑度的临床评分可以通过十点模拟数值量度进行分析：(10)光滑的，皮肤是湿润的和光亮的，手指划过表面时没有阻力；(7)一定程度光滑的，微小的阻力；(4)粗糙的、可见地改变的，摩擦时有摩擦力；以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并取平均分。

用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少的分析：皮肤光滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如，每一个对象就诊时，对每一个对象的外表面线(SFL)的深度、浅度和总数量都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数，加到一起作为总的皱纹分数。

用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度分析：皮肤紧致度可以用HargensBallistometer来测量，其是通过使小物体落在皮肤上并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置。Ballistometry是使用相对钝的尖部(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探针。探针轻轻地穿透进入皮肤，获得取决于皮肤外层性质的测量值，所述皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。

用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性分析：皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer进行评估，其为测量皮肤应力/应变性质的仪器。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探针黏附在皮肤表面实现对脸颊区域预设位点的测量。大约3.5gm的力可以平行施加于皮肤表面，精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性，并表达为DSR(动态弹簧刚度，以gm/mm计)。

用复制品进行的纹路和皱纹的显现分析：皮肤上纹路和皱纹的显现可以使用复制品进行评估，所述复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。纹路和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析系统分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得，并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。

用表面光度仪/记录针的方法进行的皮肤表面轮廓分析：皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针的方法进行测量。这包括穿过复制品表面闪光或拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机，在扫描复制品的一定距离后，皮肤轮廓的截面分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面，并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra，其为通过积分相对于平均轮廓高度的轮廓高度计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt，其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离，以及Rz，其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准品进行归一化。Ra值可以通过下式计算：R

MELANODERM

丝聚合蛋白的产生：可测定在角质形成细胞中的由于本说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种的丝聚合蛋白产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。增加的NMF提高了皮肤中的水分含量。使用分析角质形成细胞裂解物中的丝聚合蛋白浓度的生物测试来确定在经处理和未经处理的角质形成细胞中的丝聚合蛋白的产生。可用于量化丝聚合蛋白产生的生物分析的非限制性实例为

闭合蛋白的产生：可测定由于本说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种而导致的在角质形成细胞中闭合蛋白产生的变化。闭合蛋白是对于紧密连结的形成和皮肤水分屏障功能重要的蛋白质。在处理的和未处理的角质形成细胞中如何确定闭合蛋白产生的非限制性实例为通过使用分析在角质形成细胞裂解物中的闭合蛋白浓度的生物分析。通过使用

角质形成细胞单层渗透性：可测定由于本说明书中所公开的活性成分、任意一种成分组合或具有该组合的组合物每一种而导致的角质形成细胞单层的渗透性变化。角质形成细胞单层的渗透性是皮肤屏障的完整性的量度。作为非限制性实例，可使用Millipore(ECM642)的体外血管渗透性测定法(Vascular Permeability assay)来确定经处理和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层的渗透性。该分析分析了内皮细胞吸附、输送和渗透。简略来说，来自Life Technologies的成人表皮角质形成细胞(C-005-5C)可被接种到在收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆的膜上。在37℃下和5％的CO

透明质酸的产生：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种而导致的人真皮成纤维细胞中的透明质酸产生的变化。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖，并且与向组织和细胞提供膨压有关。作为一个非限制性实例，可使用来自R&D Systems(DY3614)的Hyaluronan DuoSet ELISA试剂盒确定在经处理的和未经处理的成人真皮成纤维(HDFa)细胞中的HA的产生。在该分析中，为产生试样，在处理之前，在37℃和10％CO

简而言之，该ELISA分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对HA特异的捕获抗体可以预先涂覆在微孔板上。将标准品、来自经处理的细胞和未处理的细胞的培养基移液至微孔板中，以使存在的任何HA被固定化抗体结合。冲走所有未结合的物质后，添加对HA特异的酶联检测抗体到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，添加底物溶液到孔中，使得颜色能够与最初步骤中结合的HA的量成比例的显现。在特定的时间终止颜色显现，颜色的强度可以使用酶标仪在450nm处测量。

透明质酸酶活性的抑制：可测定由于本说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种而导致的透明质酸酶活性变化。透明质酸酶是分解HA的酶。HA是与基质结构的稳定性有关的多糖，并且与向组织和细胞提供膨压有关。作为非限制性实例，可以使用由Sigma-Aldrich方案#EC 3.2.1.35改良的体外方案测定透明质酸活性。简略来说，向含有测试化合物或对照的微孔板反应孔中添加来自Sigma-Aldrich的1-S型透明质酸(H3506)。可使用鞣酸作为阳性对照抑制剂，对照的酶不添加测试化合物，含有测试化合物或阳性对照但不含透明质酸酶的孔可以用作背景阴性对照。在底物(HA)的添加之前，孔在37℃下培养10分钟。添加底物，反应在37℃下培养45分钟。然后，将每个反应溶液的一部分转移在乙酸钠和pH为3.75的乙酸的溶液中并轻轻混合，以终止该部分反应(终止孔)。在将一部分反应溶液加入到终止孔中之后，终止孔和反应孔应该都含有相同体积的溶液。反应孔和终止的孔均在室温下培养10分钟。然后测量反应孔和终止的孔在600nm处的吸光度。抑制率可以使用以下公式来计算：抑制剂(或对照)活性＝(在600nm处的抑制剂终止孔的吸光度-在600nm处的抑制剂反应孔的吸光度)；初始活性＝在600nm处的对照酶吸光度；抑制百分数＝[(初始活性/抑制剂活性)×100]-100。

过氧化物酶体增殖剂-激活受体γ(PPAR-γ)的活性：可测定由于本说明书中所公开的活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的的每一种而导致的PPAR-γ活性变化。PPAR-γ是对皮脂产生关键的受体。作为非限制性实例，可使用分析测试的化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测试测定PPAR-γ的活性。简略来说，使用购自LifeTechnologies的荧光小分子Pan-PPAR配体FLUORMONETM Pan-PPAR Green(PV4894)来确定测试的化合物或组合物是否能够抑制配体结合至PPAR-γ。试样孔含有PPAR-γ和荧光配体，以及测试化合物或组合物(测试)；参考抑制剂；罗格列酮(阳性对照)；或者无测试化合物(阴性对照)。孔被培养设定的一段时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可测定每个试样孔的荧光偏振，并与阴性对照孔比对以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。

细胞因子阵列：人表皮角质形成细胞被培养至70％至80％的融合度。吸出板中的培养基并加入0.025％的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变得丰满时，轻轻地敲打培养皿以释放细胞。从培养皿中去除含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞在180xg下离心5分钟以形成细胞团粒。吸出上清液。在EpiLife

为了分析，将16-垫杂交腔室连接到16-垫FAST载玻片上，该载玻片一式三份，具有16种抗细胞因子抗体和实验对照(Whatman BioSciences)，并将载玻片置于FASTFrame(每帧4个载玻片)中进行处理。在室温下，使用70mlS&S蛋白质阵列阻断缓冲剂(WhatmanSchleicher and Scheull)将阵列阻断15分钟。移除阻断缓冲剂，并向每个阵列添加70ml各自的上清液试样。在轻微振动下，阵列在室温下培养3小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。使用70ml混合型抗体处理阵列，混合型抗体含有一种对应于每个阵列捕捉抗体的生物素化的抗体。在轻微振动下，阵列在室温下培养1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。在轻微振动下，在室温下使用70ml含有链霉亲和素-Cy5轭合物的溶液培养1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次，在去离子水中快速冲洗并干燥。

载玻片可以在Perkin-Elmer ScanArray 4000共焦荧光成像系统中成像。使用Imaging Research ArrayVision软件可以保存并分析阵列图像。简略来说，通过去除背景信号确定斑点强度。可以对来自每个样品条件的重复斑点进行平均，然后和适当的对照比对。

内皮细胞管形成：内皮细胞管的形成和血管形成及毛细血管形成有关。毛细血管形成和血管形成可以促成皮肤发红和红斑痤疮。在存在或不存在测试提取物和化合物的情况下，在细胞培养系统中，使用具有预成型的初代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毛细管破坏测试可以确定内皮细胞形成管的能力。

简略来说，将HUVEC在细胞外基质进行体外培养，其刺激连接物和内皮细胞的管状形态生成以形成毛细管状的内腔结构。这些体外形成的毛细血管在许多方面与人血管毛细血管相似。毛细管测试是基于该现象的，并用于评价潜在的脉管系统靶向试剂。

HUVEC培养物在5％CO

使用荧光试剂Calcein AM预标记HUVEC，并将其接种于使用其完全生长培养基的细胞外基质涂覆的96孔培养板中。在形态生成过程之后约4小时，形成内皮毛细管。然后，作为处理条件，对形成的毛细管培养物施用50μl体积的设定剂量的测试试剂。可以向未处理对照组加入测试试剂的载剂。索坦(Sutent)是FDA认证的抗血管生成药物，可以包括其一个浓度作为测定性能的对照。。在处理之后的约6小时，通过显微镜检查每个孔中的内皮小管形态、使其成像，可以定量分析处理条件下的毛细管破坏活性。每个测试条件可以在两个孔中进行，包括对照。。

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本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开不需要过度实验即可做出和实现。尽管本发明所述的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述，对于本领域技术人员而言显而易见的是，可以对所述组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序进行改变，而不脱离本发明的构思、精神和范围。更具体地，明显地，化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和构思内。