乙肝疫苗的经鼻给药系统

技术领域

本发明涉及一种用于预防和治疗乙肝的与医用喷嘴装置组合使用的向鼻粘膜施用乙肝疫苗组合物的经鼻接种系统。

背景技术

乙肝是由乙肝病毒(HBV)感染引起的肝炎，它通过血液或体液感染。HBV持续感染肝细胞会引起慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌。

现在主要通过使用干扰素制剂(IFN)或核苷类似物制剂(NA)作为一线治疗来进行慢性乙肝(CHB)的治疗。在IFN疗法中，已经报道了一些有效的实例，其增加免疫力以有效地维持对病毒的生长抑制，但是总的来说，IFN疗法具有低的HBV清除率和强的副作用，这已经是一个大问题。另一方面，NA疗法具有约95％的高的HBV清除率，但是治疗效果是暂时的并且不能完全治愈。因此，有必要终身接受给药。因此，NA疗法也存在依从性和医疗经济性方面的大问题，并且已经报道了长期使用后出现耐药性病毒。因此，需要一种针对CHB的新疗法。

日本批准的乙肝疫苗只是通过皮下或肌肉内施用乙肝病毒的HBs抗原(乙肝表面抗原)的方法，其在大幅度减少HBV携带者方面取得了良好的效果。对于CHB的治疗，过去也尝试了用HBV疫苗的免疫疗法，但是在治疗中还没有完全成功。

对于上述乙肝疫苗接种问题，迄今为止已经进行了大量试验，其中经鼻施用的疫苗作为新的乙肝接种已经受到关注。然而，据报道，即使将在当前临床实践中广泛使用的用于皮下或肌肉内接种的疫苗向实验的动物或人类直接经鼻施用，也不可能诱导对乙肝病毒的高度免疫反应且不能带来充分的治疗效果。

经过一定的时间，古巴的基因工程和生物技术中心(CIGB)开发了一种用于治疗乙肝的鼻腔疫苗，其包括两种抗原，即，HBs抗原和HBc抗原，然后在孟加拉国进行临床试验后在产品的商业化上已经成功，其商品名称：HeberNasvac(非专利文献1)。但是，在其施用中，需要与皮下注射疫苗结合使用以获得充分的免疫反应，即，其为两轮疫苗接种，不是用于鼻粘膜给药的完整疫苗。

如上所述，期望开发鼻腔施用的乙肝疫苗作为下一代乙肝疫苗接种并使其实用化，可以代替用于皮下或肌肉内施用的常规乙肝疫苗。但是，尚未发现任何用于鼻腔施用的有效乙肝疫苗接种。即，实际使用中存在各种问题。

现有技术

[专利文献1]WO2010/114169

[专利文献2]WO2007/012319

发明内容

(技术问题)

本发明的一个目的是提供一种用于施用乙肝疫苗的系统，该系统与施用装置结合使用，该系统预期能完全治愈乙肝。

(问题的解决方案)

本发明人对上述问题进行了广泛的研究，然后发现以下(i)和(ii)的组合可增强对人的免疫诱导而无需佐剂：(i)用于向鼻粘膜喷雾给药的包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂，其通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能，和(ii)HBs抗原和HBc抗原的；并且通过将上述组合设置于具有优化的形状/配置的喷嘴的定量注射器型喷射器而制成给药系统，可以增加针对乙肝病毒的抗体效价，从而为乙肝提供优异的治疗效果。基于该新发现，完成了本发明。本发明可以提供以下实施方式。

[1]一种乙肝疫苗的经鼻接种系统，包括填充有乙肝疫苗组合物的注射器型喷射器，乙肝疫苗组合物包括：(i)乙肝表面抗原(HBs抗原)和/或乙肝核衣壳抗原(HBc抗原)，和(ii)包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂，其通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能。

[2]根据[1]的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，注射器型喷射器是具有与注射器筒流体连通的尖端开口的医用注射器，该医用注射器配备有鼻用喷雾喷嘴，其包括：

空心喷嘴主体，其上具有限定喷嘴孔的尖端部分；

布置在喷嘴主体内的实心填充杆；以及

限定在填充杆和喷嘴主体之间的喷嘴腔室，以允许尖端开口和喷嘴孔之间流体连通，

其中，喷嘴孔具有在0.25mm和0.30mm之间的范围内的直径。

[3]根据[1]或[2]的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，(i)乙肝疫苗的量为每种抗原0.01mg/mL至10mg/mL。

[4]根据[1]至[3]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，乙肝疫苗组合物包括0.1w/v％至1.0w/v％的羧基乙烯基聚合物。

[5]根据[1]至[4]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，喷雾性能是控制(1)喷雾组合物的粒径分布，(2)喷雾密度的均匀性，和/或(3)喷雾角度。

[6]根据[1]至[3]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，乙肝疫苗组合物如下制备：通过通过增加外部剪切力处理包括0.5w/v％至2.0w/v％的羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂，以控制作为喷雾性能的(1)喷雾组合物的粒径分布，(2)喷雾密度的均匀性和/或(3)喷雾角度，以得到凝胶基剂，然后

将所得的凝胶基剂与包括乙肝表面抗原(HBs抗原)和/或乙肝核衣壳抗原(HBc抗原)的病毒原液在短时间内无应力地均匀混合。

[7]根据[1]至[6]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，乙肝疫苗组合物由包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂制备，凝胶基剂通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能，所述喷雾性能是控制：

(1)关于喷雾组合物的粒径分布，平均粒径在30μm至80μm的范围内，且10μm至100μm之间的粒径分布占80％以上，

(2)喷雾密度是均匀的，以形成均匀的全锥形状，并且

(3)喷雾角度在30°至70°的范围内调节。

[8]根据[1]至[6]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，乙肝疫苗组合物由包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂制备，凝胶基剂通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能，即控制：

(1)对于喷雾组合物的粒径分布，平均粒径在40μm至70μm的范围内，且10μm至100μm之间的粒径分布占90％以上，

(2)喷雾密度均匀，以形成均匀的全锥形状，并且

(3)喷雾角度在40°至60°的范围内调节。

[9]根据[2]至[8]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，喷嘴孔基本上不包括弯曲部分。

[10]根据[2]至[9]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，限定喷嘴孔的尖端部分沿制剂的注射方向的厚度在0.20mm至0.30mm之间的范围内。

[11]根据[2]至[10]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，

其中，喷嘴主体的内壁的至少一部分形成为圆筒形，并且填充杆的外壁的至少一部分形成为具有多个周向间隔的沟槽的圆筒形，

其中，喷嘴腔室被限定在喷嘴主体的内壁的上述至少一部分与填充杆的外壁的上述至少一部分之间，并且

其中，填充杆包括与喷嘴主体的尖端部分相对的涡流生成构件。

[12]根据[11]的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，形成涡流生成构件，使得制剂从填充杆的沟槽的流动方向偏离中心轴从而生成制剂的涡流。

[13]根据[11]或[12]的乙肝疫苗的经鼻接种系统，其中，喷嘴主体的内壁的上述至少一部分形成为具有与注射方向基本上垂直的横截面，横截面朝向注射方向连续或阶梯状减小。

[14]根据[1]至[13]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，用于预防和/或治疗乙肝。

[15]一种用于预防和/或治疗乙肝的方法，包括用根据[1]至[13]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统向有需要的患者施用乙肝疫苗组合物。

[16]根据[1]至[13]中任一项的乙肝疫苗的经鼻接种系统，用于在预防和/或治疗乙肝中使用。

(发明的效果)

本发明使得可以提供包括乙肝表面抗原(HBs抗原)和乙肝核衣壳抗原(HBc抗原)作为活性成分但不需要佐剂的经鼻乙肝疫苗组合物，其尽管抗原水平低，但能诱导高的免疫反应，以及因为该组合物不包括佐剂，所以副作用低。通过使用配备有具有优化形状的鼻用喷雾喷嘴的定量注射器型喷射器的给药系统，该乙肝疫苗组合物预期适用于治疗和预防乙肝。

本发明的用于经鼻给药的乙肝疫苗组合物可以在鼻粘膜中广泛地分散、附着和长时间保留，因为该组合物包括含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂，该凝胶基剂通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能。因此，本发明的乙肝疫苗组合物尽管具有较小的抗原水平，但仍诱导高的免疫反应。

本发明的用于经鼻给药的乙肝疫苗组合物预期可以通过使用配备有具有优化形状的鼻用喷雾喷嘴的定量注射器型喷射器的给药系统来预防而且治疗乙肝。

附图说明

图1是根据本发明的一个实施方式的包括鼻用喷雾喷嘴的医用注射器的总体结构的局部分解的侧视图。

图2(a)和图2(b)是本发明的一个实施方式的鼻用喷雾喷嘴的总体结构的局部分解透视图，其分别示出了在将填充杆插入喷嘴主体之前和之后的配置。

图3(a)是图2(b)的鼻用喷雾喷嘴的竖向剖视图。图3(b)、3(c)和3(d)分别是沿图3(a)的B-B线、C-C线和D-D线截取的鼻用喷雾喷嘴的水平剖视图。

图4(a)和图4(b)是喷嘴主体的尖端部分的放大剖视图，其中，尖端部分在图4(a)中设有弯曲部分，而在图4(b)中未设有弯曲部分。

图5示出了用激光衍射粒径分析仪测量实施例4中制剂的粒径分布的结果，其是用本发明的注射器型喷射器喷雾的。

图6示出了用高速显微镜测量实施例4中制剂的喷雾角度的结果，其是从本发明的注射器型喷射器中的喷嘴的尖端喷雾的。喷雾制剂的喷雾角度为52.27°。

图7示出了用喷雾图案试验片测量实施例4中制剂的喷雾行为的结果，其是用本发明的注射器型喷射器喷雾的。它是均匀的全锥圆形。

具体实施方式

本发明提供了一种乙肝疫苗的经鼻接种系统，包括

具有与注射器筒流体连通的尖端开口的医用注射器，该医用注射器配备有鼻用喷雾喷嘴，该鼻用喷雾喷嘴包括空心的喷嘴主体，该空心的喷嘴主体具有在其上限定喷嘴孔的尖端部分，布置在喷嘴主体内的实心填充杆，以及限定在填充杆和喷嘴主体之间的喷嘴腔室，以允许尖端开口和喷嘴孔之间流体连通，其中，喷嘴孔的直径在0.25mm和0.30mm之间的范围内，

该医用注射器填充有经鼻乙肝疫苗组合物，该乙肝疫苗组合物包括(i)包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂，该凝胶基剂通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能，和(ii)乙肝表面抗原(HBs抗原)和乙肝核衣壳抗原(HBc抗原)，其特征是不需要佐剂。

在此使用的“乙肝疫苗的经鼻接种系统”是指疫苗组合物和给药装置的组合，即，填充有本发明的乙肝疫苗组合物的本发明的注射器型喷射器。

本文所用的“包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂，其通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能”是指，例如，WO2007/123193中所公开的“包括皮肤/粘膜粘合剂的凝胶基剂”，其为包括羧基乙烯基聚合物并任选地包括结冷胶的基剂，其粘度通过增加外部剪切力来调节。在WO2007/123193中公开的实际的外部剪切力不是简单的搅拌或摇动，即，此处给予剪切力的操作可以用技术人员已知的装置来进行，例如高速回转型乳化装置、胶体磨型乳化装置、高压乳化装置、辊磨型乳化装置、超声波型乳化装置、和膜型乳化装置可以用作获得外部剪切力的装置。特别地，均质混合型、梳齿型和间歇喷射流发生型的高速回转型的乳化装置是优选的。基剂的特征在于，可以通过增加外部剪切力来将其粘度调节为各种粘度，并且可以控制来自喷雾容器的喷雾展开角和喷雾密度以满足该目的。另外，使用配备有具有优化形状的鼻用喷雾喷嘴的定量注射器型喷射器的经鼻接种系统可以实现制剂的良好喷雾适用性(喷雾分散性，制剂粒径的均匀性等)，如无气喷雾装置(例如WO2007/123193中公开的无气喷雾装置)的情况一样，因此该应用可使乙肝抗原颗粒在鼻粘膜中广泛长时间的散布，以增强疫苗的免疫原性。

作为本发明的凝胶基剂的材料成分的羧基乙烯基聚合物是通过使作为主要成分的丙烯酸聚合而制备的亲水性聚合物。可以向凝胶基剂中添加任何选自通常用于制备水性凝胶剂的药物添加剂的成分，而没有任何限制。

通过增加外部剪切力进行处理以增加喷雾性能的包括羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂中羧基乙烯基聚合物的含量为0.1-1.0w/v％，优选为0.3-0.7w/v％。

本发明的疫苗的特征在于包括乙肝表面抗原(HBs抗原)和乙肝核衣壳抗原(HBc抗原)作为抗原。在此使用的乙肝抗原是指通过重组DNA技术在酵母中制备的乙肝表面抗原和乙型核衣壳抗原。

作为上述乙肝抗原，本文使用其病毒原液，其是纯化或浓缩的以与凝胶基剂混合以用于鼻粘膜喷雾给药。关于本发明的疫苗，每种乙肝病毒抗原的浓度优选为0.01-10mg/mL，更优选0.05-5mg/mL。

乙肝表面抗原(HBs抗原)呈颗粒形式(直径：约50-60nm)，其中脂质膜上有许多抗原蛋白。抗原蛋白最初由三个结构域(S，Pre-S1，Pre-S2)组成。抗原蛋白之间的不同之处如下：具有所有三个结构域的抗原是HBsAg L蛋白，缺少Pre-S1的抗原是HBsAg M蛋白，缺少Pre-S1和Pre-S2的抗原是HBsAg S蛋白。所有抗原可以通过使用重组酵母来制备。

佐剂是具有诸如增强和抑制之类的免疫反应的调节活性的物质的通用术语，并且被用作要添加到疫苗中以增强抗原的免疫原性的免疫增强剂。迄今为止，已经研究了许多佐剂。佐剂的使用增强了疫苗的免疫效果，但是它具有副作用(例如炎症)的缺点。可以选择一些佐剂作为经鼻给药的疫苗中所用的候选者，但是由于没有具有普遍安全性的佐剂，所以尚无任何批准的包括佐剂的经鼻给药疫苗。

本发明人已经发现，尽管无佐剂和较低的抗原水平，但仍可以制备具有高效和低副作用的疫苗，当凝胶基剂(对鼻粘膜具有上述有用的喷雾性能，例如，高粘附性能)与上述乙肝疫苗一起使用时，不需要与诸如皮下接种之类的另一种给药结合使用。另外，本发明人还发现，使用甚至对具有高粘度的凝胶基剂也可以喷雾的装置，可以将乙肝疫苗组合物喷雾到鼻粘膜，其中，喷雾的组合物的平均粒径在50μm至120μm(优选70μm至100μm的范围)的适当的范围内，在10μm和100μm之间的粒径分布占50％以上(优选地，60％以上)，从装置的喷雾角度设定在30°至70°的范围内(优选在40°至60°的范围内)，使得可以将组合物给药于鼻腔中的所需部位，并且喷雾密度均匀以形成均匀的全锥形。此外，本发明人还发现了使用该组合物的预防和治疗乙肝的工艺和方法。基于该新发现，完成了本发明。

用于表示无偏置且均匀的喷雾密度的“全锥形状”是喷雾形状图案中的一种，并且全锥形状是指均匀的整个圆。相反的词汇是具有甜甜圈形状的“空心锥”。

除了乙肝病毒抗原和用于鼻粘膜喷雾给药的凝胶基剂外，本发明的疫苗还可包括另外的药学上可接受的载体。本文所用的载体可以是通常用于制备疫苗或用于鼻腔给药的制剂的载体，其包括例如生理盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、等渗缓冲水溶液和它们的组合。本发明的疫苗可以任选地包括防腐剂(例如硫柳汞)、等渗剂、pH调节剂、表面活性剂、稳定剂(例如乙二胺四乙酸二钠水合物)和失活剂(例如福尔马林)。

本发明的疫苗用于喷雾给药到鼻腔内。

本发明的疫苗可以预防或治疗乙肝。

对于疫苗的给药，用本发明的优化的鼻喷雾喷嘴(其可以用作一次性装置)对一个或两个鼻孔进行喷雾。

疫苗的剂量应考虑患者的年龄、性别和体重或其他因素来决定，每种乙肝病毒抗原的浓度优选为0.01-10mg/mL，更优选为0.05-5mg/mL。每种待给药的抗原的用量优选为0.1-5mg/mL，更优选0.5-2mg/mL。

参考附图，下文将描述用于根据本发明的具有鼻用喷雾喷嘴的定量注射器型喷射器的鼻用喷雾喷嘴的实施例。在以下描述中，为了更好地理解，方便地使用诸如“前”，“后”，“近侧”和“远侧”之类的方向性术语，但是，这些术语并不旨在限制本发明的范围。在整个附图中，用相同的参考标记表示相同的部件。

(医用注射器)

图1是根据本发明的实施方式的包括鼻用喷雾喷嘴10的医用注射器1的局部分解的侧视图。如图1所示，医用注射器1通常包括由合成树脂或玻璃制成的注射器主体4，其具有能够在其中存储药物制剂的注射器筒3，以及插入在注射器主体4的注射器筒3内的柱塞杆5。医用注射器1还包括活塞7，活塞7具有固定件5a，该固定件5a设置在柱塞杆5的远端并且在注射器筒3内滑动以将注射器筒3内的制剂从注射器主体4的远尖端开口6中泵出；设置在注射器主体4的近端周围的指凸缘8；和将由医生等操作者施加的力传递到柱塞杆5的柱塞端构件9。医用注射器1可以类似于WO2013/145789中公开的定量注射器型喷射器。

应当注意，本发明的鼻用喷雾喷嘴10可适用于通过推动柱塞杆5(和活塞7)将制剂泵入注射器筒3中的任何类型的医用注射器1，因此，本发明将不限于医用注射器的已知配置。因此，本公开将不对医用注射器(或定量注射器型喷射器)1的详细结构进一步描述，而更详细地讨论用于医用注射器的鼻用喷雾喷嘴10的结构和功能。应当注意，WO2013/145789的公开内容通过引用并入本文。

(鼻用喷雾喷嘴)

如图1所示，医用注射器1还包括与注射器主体4的尖端开口6相对的鼻用喷雾喷嘴10，以及用于保护鼻用喷雾喷嘴10的无菌尖端部分22免受污染物和机械冲击的保护帽50。图2(a)和2(b)是局部分解的透视图，示出了本发明的实施例的鼻用喷雾喷嘴10的总体结构。如所示出的，鼻用喷雾喷嘴10总体上包括空心喷嘴主体20，该空心喷嘴主体20具有带喷嘴孔21的尖端部分22和设置在喷嘴主体20内的实心填充杆(填充杆)30。图2(a)和2(b)分别示出了在填充杆30被布置或插入到喷嘴主体20内之前和之后的鼻用喷雾喷嘴10。喷嘴主体20的尖端部分22具有圆形形状，在其中央设有喷嘴孔21。

图3(a)是图2(b)的鼻用喷雾喷嘴10的竖向剖视图。图3(b)、3(c)和3(d)分别是沿图3(a)的B-B线、C-C线和D-D线截取的鼻用喷雾喷嘴的水平剖视图。空心的喷嘴主体20限定了基本上圆筒形的内部空间24。如图3(c)和3(d)所示，内部空间24包括：更靠近空心喷嘴主体20的喷嘴孔21的喷嘴小直径部分25，与注射器主体4的尖端开口6相对的喷嘴大直径部分26，以及设计成直径从喷嘴大直径部分26到喷嘴小直径部分25连续或阶梯状减小的喷嘴肩部27。

另一方面，待插入喷嘴主体20内的实心填充杆30具有外壁33，该外壁33的配置与喷嘴主体20的内壁23(内部空间24)基本互补。如图2(a)、3(c)和3(d)所示，杆小直径部分35和杆大直径部分36包括杆肩部37，杆肩部37被设计为具有从杆大直径部分36向杆小直径部分35连续或阶梯状减小的直径。

优选地，如图3(a)所示，喷嘴主体20的内壁23设置有突起23a，而填充杆30的外壁33设置有用于接纳突起23a的凹槽33a。当填充杆30完全插入喷嘴主体20的内部空间24内时，突起23a可以紧密地配合在凹槽33a中以确保填充杆30与喷嘴主体20之间的连接。

如图2(a)-2(b)和3(a)-3(d)所示，填充杆30还包括在杆小直径部分35和杆大直径部分36上彼此周向间隔开的多个沟槽38和39。并且，填充杆30插入喷嘴主体20内后在喷嘴肩部27和杆肩部37之间限定间隙40(图3(a))。因此，如图2(b)所示组装的鼻用喷雾喷嘴10具有由沟槽38、39和间隙40限定的喷嘴腔室42，其允许制剂2从注射器主体4的尖端开口6通过喷嘴腔室42输送到鼻用喷雾喷嘴10的尖端部分22的流体连通。

此外，如图3(b)所示，填充杆30包括与鼻用喷雾喷嘴10的尖端部分22相对的涡流生成构件44。涡流生成构件44配置用于从杆小直径部分35的每个沟槽38输送的制剂2在从喷嘴主体20的喷嘴孔21注射之前生成制剂2的涡流。更具体地，限定涡流生成构件44的杆小直径部分35的端部形成为偏离喷嘴孔21的竖向中心轴线延伸。由于制剂2在从喷嘴孔21注射之前生成涡流，因此，可以扩大制剂2的喷雾角度以更均匀的方式对其进行喷雾。

如图3(c)-3(d)所示，杆小直径部分35的沟槽38优选设计成少于杆大直径部分36的沟槽39，以增加制剂2在从喷嘴孔21注射之前在涡流生成构件44中的压力。此外，由于杆大直径部分36和杆小直径部分35的直径被设计成从前者到后者连续地或阶梯状地减小，所以更容易将鼻用喷雾喷嘴10深深地插入鼻腔中并将制剂喷向患者的下鼻甲甚至更深部分。因此，优选地，杆小直径部分35的直径足够小于患者的鼻腔开口，而不会增加患者的恐惧。

实施例

在下文，基于实施例对本发明进行说明，但本发明不限于此。

根据以下所示的方法，制备用于喷雾给药的凝胶基剂和乙肝病毒原液，并如下所示将每种凝胶基剂和每种病毒原液混合以制备用于向鼻粘膜给药的乙肝疫苗组合物。

<凝胶基剂的制备>

<包括乙肝病毒抗原的病毒原液的制备>

<凝胶基剂与病毒原液的混合物>

在搅拌下，以1:1的比例混合上述的凝胶基剂示例(1)和病毒原液示例(1)，得到用于向鼻粘膜给药的均质的乙肝疫苗组合物(实施例1)。以同样的方式，在搅拌下，以2:8的比例混合上述凝胶基剂示例(2)和病毒原液示例(2)，得到用于向鼻粘膜给药的均质的乙肝疫苗组合物(实施例2)。搅拌下的混合可以在短时间内温和地完成，而不会给乙肝疫苗抗原带来应力，例如热量和压力。下面还示出了用于向鼻粘膜给药的所得的乙肝疫苗组合物中每种成分的量，其物理性质以及通过用合适的装置将所述组合物喷雾而获得的喷雾性能。

实施例2

因此，通过填充具有与注射器筒流体连通的尖端开口的医用注射器，其配备有：包括空心喷嘴主体的鼻用喷雾喷嘴，该空心喷嘴主体具有在其上限定喷嘴孔的尖端部分；布置在喷嘴主体内的实心填充杆；以及限定在填充杆和喷嘴主体之间以允许尖端开口和喷嘴孔之间流体连通的喷嘴腔室，其中喷嘴孔的直径在0.25mm和0.30mm之间的范围内，即通过在上述医用注射器中填充用通过增加外部剪切力制备的凝胶基剂来制备的实施例2的经鼻给药乙肝疫苗的制剂，能够制备具有以下喷雾性能的乙肝疫苗的经鼻接种系统：控制(1)对于喷雾组合物的粒径分布，平均粒径在30μm至80μm的范围内[59.7μm]，在10μm至100μm之间的粒径分布占80％以上[88.8％]，(2)喷雾密度是均匀的，以形成均质的全锥形状，(3)喷雾角度在30°至70°的范围内[55°]调节。

(受试者)

关于预防效果的评价，受试者对于皮下和肌肉内接种疫苗的免疫反应预先进行测试，并分为以下三组：(1)不能抗体诱导的疫苗无反应者，(2)被抗体诱导的疫苗反应者，和(3)作为对照的未接种的人。关于治疗效果的评价，将受试者分为以下两组：(4)没有发展为肝炎的无症状HBV血症携带者，和(5)NA治疗的CHB患者。

<预防效果的评价>

将实施例2中制备的用于向鼻粘膜给药的乙肝疫苗组合物用配备有鼻用喷雾喷嘴的注射器型喷射器以一个鼻孔0.5mL的量(总计，两个鼻孔1.0mL)对各个组的受试者经鼻喷雾给药。(1)疫苗无反应者、(2)疫苗反应者和(3)未接种者每两周接受一次经鼻给药，总计三次。

(对皮下和肌肉内接种的疫苗无反应者的功效)

对13名对皮下和肌肉内接种无免疫反应的疫苗无反应者进行3次疫苗的经鼻给药。最后一次给药后一个月，测量HBs抗体效价和HBc抗体效价。所有13人中HBs和HBc的抗体水平均升高(表1)。

≥500*:超标高

(对皮下和肌肉内接种的疫苗反应者的功效)

对19名疫苗反应者，进行3次疫苗的经鼻给药。最后给药后一个月，测量HBs抗体效价和HBc抗体效价。在这19个人中，HBs的抗体水平超过了测量灵敏度(即超标高)，并且HBc的抗体水平增加(表2)。

≥500*:超标高

(对未接种疫苗的人的功效)

对7名未接种疫苗的人，进行3次疫苗的经鼻接种。最后一次给药后一个月，测量HBs抗体效价和HBc抗体效价。6人中的HBs和HBc抗体水平升高(表3)。

<疗效的评价>

将实施例2中制备的用于向鼻粘膜给药的乙肝疫苗组合物通过配备有鼻用喷雾喷嘴的注射器型喷射器以一个鼻孔0.5mL的量(总计，两个鼻孔1.0mL)向各个组的受试者经鼻喷雾剂给药。NA治疗中的(4)无症状携带者和(5)CHB患者每两周接受一次经鼻给药，总计十次。

(对无症状携带者的功效)

对41个无症状携带者，进行10次疫苗的经鼻给药。给药前和最终给药后6个月，评价HBV-DNA水平、HBs抗原水平的变化率和HBs抗体的阳性转化率。最终给药后六个月，HBV-DNA水平没有明显变化，但HBs抗原水平从给药前的100％降至78.6％。在总共41个中的20个中，HBs抗体增加，因此阳性转化率为48.8％(表4)。

(NA治疗中的CHB患者)

对NA治疗中的29位CHB患者，进行10次疫苗的经鼻给药。最后一次给药后的六个月，评价HBV-DNA水平、HBs抗原水平的变化率和HBs抗体的阳性转化率。

因为患者正在NA治疗，给药前评价的HBV-DNA水平低于所有患者的检测水平，并且最终给药后6个月评价的水平仍低于检测水平。对于给药前100％，HBs抗原水平为79.3％。在总计29位中的11位中，HBs抗体增加，因此阳性转化率为37.9％(表5)。

附图标记的含义

1：医用注射器，2：药物制剂，3：注射器筒，4：注射器主体，5：柱塞杆，5a：固定件，6：开口，7：活塞，8：指凸缘，9：柱塞端构件，10：鼻用喷雾喷嘴，20：喷嘴主体，21：喷嘴孔，22：尖端部分，23：内壁，23a：突起，24：内部空间，25：喷嘴小直径部分，26：喷嘴大直径部分，27：喷嘴肩部，30：填充杆，33：外壁，33a：凹槽，35：杆小直径部分，36：杆大直径部分，37：杆肩部，38,39：沟槽，40：间隙，42：喷嘴腔室；44：涡流生成构件；46：弯曲部分；50：保护帽。