一种通过添加纤维素酶来提高小疣刺参幼体成活率和附着率的方法及其应用

技术领域

本发明属于海水养殖生物技术领域，具体涉及一种通过添加纤维素酶来提高小疣刺参幼体成活率和附着率的方法及其应用。

背景技术

小疣刺参俗称“黄肉参”，因其营养价值高和口感好，使其成为我国热带海参中具有代表性的高经济价值种类。

小疣刺参的人工育苗近几年获得初步成功，小疣刺参的发育主要经历了囊胚、原肠胚、小耳幼体、大耳幼体、樽形幼体、五触手幼体和稚参等发育阶段。我们前期的研究表明，小疣刺参从大耳幼体(浮游幼体)变态到樽形幼体(浮游幼体)以及从樽形幼体变态到五触手幼体(附着幼体)的死亡率极高，仅有2-3％的浮游幼体可成功变态到五触手幼体并成功附着。因此，如何提高小疣刺参幼体的成活率和附着率成为小疣刺参人工育苗迫切需要解决的关键问题。

纤维素酶是一种重要的复合酶产品，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。纤维素不容易被动物吸收利用，通过添加纤维素酶可帮助动物消化含有纤维素的食物。目前没有关于使用纤维素酶提高小疣刺参幼体的成活率和附着率的相关研究。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种提高小疣刺参幼体成活率和附着率的方法，该方法是从小疣刺参发育成大耳幼体初期开始将一定剂量的纤维素酶添加到小疣刺参幼体饵料中，以提高小疣刺参幼体的成活率和附着率，从而解决小疣刺参人工育苗过程中幼体死亡率高的瓶颈问题。

本发明通过实验证明，添加终浓度为200U/L和100U/L的纤维素酶的小疣刺参浮游幼体成活率分别为75.02％和59.07％，比未添加纤维素酶的对照组(成活率为45％)分别提高了30.02％和14.07％。

添加终浓度为100U/L的纤维素酶的小疣刺参幼体附着率(7.09％)显著高于未添加纤维素酶的对照组(附着率为2.48％)以及添加其他浓度纤维素酶的实验组，其附着率比对照组提高了1.9倍。

因此，优选的，所述的纤维素酶添加的终浓度为50U/L～200U/L。

优选的，所述的提高小疣刺参幼体成活率和附着率的方法，是从小疣刺参发育成大耳幼体初期开始，前10天在养殖水体中添加终浓度为50～200U/L的纤维素酶，后10天添加终浓度为50～100U/L的纤维素酶用以提高小疣刺参幼体的成活率和附着率。

更优选的，所述的提高小疣刺参幼体成活率和附着率的方法，是从小疣刺参发育成大耳幼体初期开始，前10天在养殖水体中添加终浓度为200U/L的纤维素酶，后10天添加终浓度为100U/L的纤维素酶用以提高小疣刺参幼体的成活率和附着率。

优选的，所述的饵料包含藻粉、酵母和稚参饲料。

优选的，所述的藻粉包含小球藻粉、鼠尾藻粉和马尾藻粉。

本发明的第二个目的是提供纤维素酶在制备提高小疣刺参幼体成活率和附着率的制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种提高小疣刺参幼体成活率和附着率的制剂，该制剂含有纤维素酶。

本发明具有如下有益效果：

本发明提供了一种通过添加纤维素酶来提高小疣刺参幼体成活率和附着率的方法。该方法是从小疣刺参发育成大耳幼体初期开始将一定剂量的纤维素酶添加到小疣刺参幼体饵料中，相较于未添加纤维素酶的对照组，本发明实验组小疣刺参浮游幼体成活率提高了30.02％，小疣刺参幼体附着率提高了1.9倍，显著提高了小疣刺参幼体的成活率和附着率，从而解决了小疣刺参人工育苗过程中幼体死亡率高的瓶颈问题。

附图说明

图1是不同浓度纤维素酶对小疣刺参浮游幼体成活率的影响。注：图中实验组间的不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示无显著差异。

图2是不同浓度纤维素酶对小疣刺参幼体附着率的影响。注：图中实验组间的不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示无显著差异。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。实施例中除特殊说明外，均为本领域常规试剂和方法步骤。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1

1、不同浓度纤维素酶对小疣刺参幼体成活率的影响

(1)小疣刺参大耳幼体的收集和转移

利用光学显微镜抽样观察养殖池中的小疣刺参幼体，当养殖池中80％的小疣刺参处于大耳幼体时期时，用筛绢网收集小疣刺参大耳幼体，并将其随机转移至6个装有100L盐度为35‰过滤海水的大白桶中，使每个桶中大耳幼体的密度为100个/L。

(2)纤维素酶添加实验

在实验前5天，每天向每个桶投喂0.05g小球藻粉和0.05g酵母，并在2-6号桶里分别添加纤维素酶至终浓度为50U/L、100U/L、200U/L、500U/L和1000U/L。从第6天开始，每天向每个桶投喂小球藻粉、酵母、鼠尾藻粉、马尾藻粉和稚参饲料(大连蛟龙水产饵料开发中心)各0.05g，并在2-6号桶里分别添加纤维素酶至终浓度为50U/L、100U/L、200U/L、500U/L和1000U/L。

(3)小疣刺参幼体成活率统计

在实验的第10天，从大白桶中随机用烧杯取100mL水体，用肉眼计数烧杯中浮游幼体的数量，每个桶计数5次。用当前浮游幼体密度除以初始浮游幼体密度来计算每个桶中的浮游幼体成活率。结果如图1所示，添加终浓度为200U/L纤维素酶的实验组的小疣刺参浮游幼体成活率最高(75.02％)，其次为添加终浓度为100U/L纤维素酶的实验组(成活率为59.07％)，比未添加纤维素酶的对照组(成活率为45％)分别提高了30.02％和14.07％。

2、不同浓度纤维素酶对小疣刺参幼体附着率的影响

将计数过的小疣刺参幼体放回桶中继续饲养，每天继续向每个桶里投喂小球藻粉、酵母、鼠尾藻粉、马尾藻粉和稚参饲料(大连蛟龙水产饵料开发中心)各0.05g，并在2-6号桶里分别添加纤维素酶至终浓度为50U/L、100U/L、200U/L、500U/L和1000U/L。在实验的第20天，当大白桶中的浮游幼体全部变态为附着幼体时，收集大白桶中的所有小疣刺参附着幼体，全部转移至100mL水体中，吹打均匀后，取1mL，在显微镜下观察和计数附着幼体数量，重复5次。用附着幼体的总数除以初始浮游幼体数量来计算每个大白桶中小疣刺参幼体的附着率。结果如图2所示，添加终浓度为100U/L纤维素酶的实验组的小疣刺参幼体附着率最高(7.09％)，显著高于未添加纤维素酶的对照组(附着率为2.48％)(P<0.001)和添加其他浓度纤维素酶的实验组，其附着率比对照组提高了1.9倍。因此，可在小疣刺参幼体时期在养殖水体中添加终浓度为100U/L的纤维素酶来提高小疣刺参幼体的成活率和附着率。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。