植物甾酮的新型用途

技术领域

本发明涉及植物甾酮的新型用途。

背景技术

据说脂肪的过度蓄积是由于摄取营养过多、运动不足等所致的能量消耗不足、压力、激素平衡的异常、疾病的后遗症等各种原因而引起的。脂肪的蓄积部位为肝脏等脏器、肠系膜组织、皮下组织等。特别是皮下组织占据了较大面积作为脂肪的蓄积场所。其中从上臂部、腹部和腰部到大腿部为止的部位容易蓄积大量脂肪，从美观的观点出发也被视为问题。

为了减轻皮下脂肪的过度蓄积而进行了许多尝试，包括医疗中的治疗、预防和通过日常摄取的饮食、各种饮料品的预防。例如提出了旨在通过L-肉碱或包含其的肉类肽、藻类的提取物、类胡萝卜素、花青素类、绿茶儿茶素等食品材料来调节所摄取的卵脂质的代谢、或促进体脂肪的燃烧、或抑制体脂肪的蓄积的食品材料。

然而，目前的现状是能够有效地预防和改善肥胖症状的材料的数量很少，能令人充分满意的材料也几乎未发现。因此，需要阻碍饮食中的脂肪的吸收、在体内抑制脂肪的蓄积、或促进体脂肪的燃烧、或促进体脂肪的代谢的材料。

对于作为植物甾醇(植物甾醇，日文：フィトステロール，phytosterol)发酵物的植物甾酮(植物甾酮，日文：フィトステノン，phytostenone)而言，报道了：添加于高脂饮食中进行喂食时，减少内脏脂肪和皮下脂肪(例如，非专利文献1～3)。可认为：由植物甾酮的经口给予带来的内脏脂肪和皮下脂肪的减少效果是由包括β氧化所致的脂肪代谢的增强、脂肪酸合成抑制和脂质的体外排出在内的各作用机制所实现的(例如，非专利文献1和非专利文献2)。然而，尚不知晓在将植物甾酮适用于对象的皮肤时能够减少对象的皮下脂肪。

此处，提出了将植物甾酮用作饮食品的添加剂、药物等(例如，专利文献1～3)。另外，提出了收率良好地制造甾醇的5-烯-3-酮体(植物甾酮的一种)的方法(例如，专利文献4)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-240544号公报

专利文献2：日本特开2003-48837号公报

专利文献3：日本特开2011-51939号公报

专利文献4：日本特开2007-284348号公报

非专利文献

非专利文献1：铃木邦夫等人,Nippon Rinsho(2003),61,Suppl.6,p.698-703

非专利文献2：Kunio Suzuki,et al.,J.Nutr.Sci.Vitaminol.(2007),53,p.63-67

非专利文献3：肥胖研究(2007),13(3),p.244-249

发明内容

在上述情况下，进一步需要减少皮下脂肪的方法等。

本发明人等进行了深入研究，结果发现：通过将植物甾酮适用于对象的皮肤，从而能够减少对象的皮下脂肪等，以至完成了本发明。

即，提供以下所示的经皮吸收剂等。

[1-1]一种用于减少皮下脂肪的经皮吸收剂，其含有植物甾酮。

[1-2]根据上述[1-1]所述的经皮吸收剂，其中，植物甾酮为含有植物甾酮的组合物。

[1-3]根据上述[1-2]所述的经皮吸收剂，其中，含有植物甾酮的组合物包含植物甾醇的5-烯-3-酮体、植物甾醇的4-烯-3-酮体和植物甾醇的4-烯-3,6-二酮体。

[1-4]根据上述[1-1]所述的经皮吸收剂，其中，植物甾酮为菜油甾-5-烯-3-酮。

[1-5]根据上述[1-1]～[1-4]中任一项所述的经皮吸收剂，其为化妆品。

[1-6]根据上述[1-1]～[1-4]中任一项所述的经皮吸收剂，其为药物。

[2-1]一种用于减少皮下脂肪的植物甾酮，其以适用于皮肤的方式使用。

[2-2]根据上述[2-1]所述的植物甾酮，其中，植物甾酮为含有植物甾酮的组合物。

[2-3]根据上述[2-3]所述的植物甾酮，其中，含有植物甾酮的组合物包含植物甾醇的5-烯-3-酮体、植物甾醇的4-烯-3-酮体和植物甾醇的4-烯-3,6-二酮体。

[2-4]根据上述[2-1]所述的植物甾酮，其中，植物甾酮为菜油甾-5-烯-3-酮。

[2-5]根据上述[2-1]～[2-4]中任一项所述的植物甾酮，其用作化妆品。

[2-6]根据上述[2-1]～[2-4]中任一项所述的植物甾酮，其用作药物。

[3-1]一种减少对象中的皮下脂肪的方法，其包括将植物甾酮适用于需要减少皮下脂肪的对象的皮肤。

[3-2]根据上述[3-1]所述的方法，其中，植物甾酮为含有植物甾酮的组合物。

[3-3]根据上述[3-2]所述的方法，其中，含有植物甾酮的组合物包含植物甾醇的5-烯-3-酮体、植物甾醇的4-烯-3-酮体和植物甾醇的4-烯-3,6-二酮体。

[3-4]根据上述[3-1]所述的方法，其中，植物甾酮为菜油甾-5-烯-3-酮。

[3-5]根据上述[3-1]～[3-4]中任一项所述的方法，其为化妆方法。

[3-6]根据上述[3-1]～[3-4]中任一项所述的方法，其为治疗方法。

根据本发明，进一步提供皮下脂肪的减少方法。

优选的方式的经皮吸收剂通过适用于对象的皮肤而能够减少对象的皮下脂肪。另一优选的方式的经皮吸收剂通过适用于对象的皮肤而能使过度蓄积于对象的皮下的脂肪代谢减少。进而另一优选的方式的经皮吸收剂能够减少被局部或广范围地过度蓄积于对象的皮下且从健康或美观的观点出发存在问题的脂肪，能够改善对象的健康或美容。

附图说明

图1是示出植物甾酮对皮下脂肪的效果的图。E：乙醇溶液(对照)、C：菜油甾-5-烯-3-酮、P：含有植物甾酮的组合物。

图2是示出植物甾酮对肠系膜脂肪的效果的图。E：乙醇溶液(对照)、C：菜油甾-5-烯-3-酮、P：含有植物甾酮的组合物。

图3是示出植物甾酮对精巢周围脂肪的效果的图。E：乙醇溶液(对照)、C：菜油甾-5-烯-3-酮、P：含有植物甾酮的组合物。

图4是示出植物甾酮对肾周围脂肪的效果的图。E：乙醇溶液(对照)、C：菜油甾-5-烯-3-酮、P：含有植物甾酮的组合物。

图5是示出植物甾酮对肝脏的效果的图。E：乙醇溶液(对照)、C：菜油甾-5-烯-3-酮、P：含有植物甾酮的组合物。

具体实施方式

以下对本发明进行详细地说明。

一些方式提供用于减少皮下脂肪的经皮吸收剂，其含有植物甾酮。植物甾酮可以单独使用1种，或组合使用两种以上。

“植物甾酮”是具有植物甾醇的3位的碳上的羟基被氧代基取代的结构、即在3位上具有羰基的烯酮类化合物。本说明书中，有时将“植物甾酮”称为“植物甾酮，日文：植物ステノン”或“植物甾醇的3-酮体”，和将“植物甾醇”称为“植物甾醇，日文：植物ステロール”。

本说明书中，术语“植物甾酮”以包含植物甾酮及其类似物的含义来使用。另外，本说明书中，术语“植物甾醇”以包含植物甾醇及其类似物的含义来使用。

植物甾酮只要在甾醇骨架的3位具有羰基，其结构就没有特别限定。植物甾酮还可以具有其它取代基。植物甾酮还可以在甾醇骨架的除3位以外的位置具有1个以上的羰基。作为除3位以外的位置具有羰基的植物甾酮，例如可列举出植物甾醇的3,6-二酮体(在甾醇骨架的3位和6位具有羰基)。另外，植物甾酮还可以在甾醇骨架或其侧链具有烷基(例如，甲基和乙基)、羟基等官能团。另外，植物甾酮还可以在结构中具有双键。对于双键的数量而言，也没有特别限定，还可以在甾醇骨架或其侧链中具有1个以上、优选具有1～4个、进一步优选具有1～2个其它双键。

作为植物甾酮，例如可列举出植物甾醇的5-烯-3-酮体、植物甾醇的4-烯-3-酮体和植物甾醇的4-烯-3,6-二酮体。

作为植物甾醇的5-烯-3-酮体，例如可列举出菜油甾-5-烯-3-酮、谷甾-5-烯-3-酮、豆甾-5-烯-3-酮、菜子甾-5-烯-3-酮、24-烷基胆甾-5-烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,7-二烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,8-二烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,9(11)-二烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,22-二烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,7,22-三烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,8,22-三烯-3-酮、24-烷基胆甾-5,9(11),22-三烯-3-酮和24-烷基胆甾-5,25(27)-二烯-3-酮。

作为植物甾醇的4-烯-3-酮体，例如可列举出菜油甾-4-烯-3-酮、谷甾-4-烯-3-酮、豆甾-4-烯-3-酮、菜子甾-4-烯-3-酮。

作为植物甾醇的4-烯-3,6-二酮体，例如可列举出菜油甾-4-烯-3,6-二酮、谷甾-4-烯-3,6-二酮、豆甾-4-烯-3,6-二酮、菜子甾-4-烯-3,6-二酮、6-羟基-谷甾-4-烯-3,6-二酮、4-胆甾烯-3,6-二酮、菜油甾-4-烯-3,6-二酮和24-烷基胆甾-4-烯-3,6-二酮。

需要说明的是，作为各化合物中的“烷基”，可列举出甲基、乙基等。

作为植物甾酮，可以使用市售的植物甾酮，还可以使用利用公知的化学或生物学方法或依据其的方法制造出的植物甾酮。生物学方法是利用酶、发酵等的方法。作为市售的植物甾酮，例如可以列举出Sigma-Aldrich公司制的豆甾-4-烯-3-酮等。

在一些方式中，作为植物甾酮，使用含有植物甾酮的组合物。含有植物甾酮的组合物例如可以通过包括用培养基培养微生物进行发酵的方法得到，所述培养基包含植物甾醇或含有植物甾醇的植物体。这种方法例如记载于日本特开2007-284348号公报和J.Nutr.Sci.Vitaminol

此处，含有植物甾酮的组合物中的除植物甾酮以外的成分例如是作为基质的植物甾醇(即，谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和菜子甾醇)。

作为植物甾醇，例如可列举出菜油甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇、菜子甾醇和24-烷基胆甾醇。植物甾醇可以获得市售者而使用，还可以利用公知的方法或依据其的方法进行制造而使用。

“含有植物甾醇的植物体”可以是含有植物甾醇的植物体的整体，或者可以是植物体的一部分(例如，茎、叶、根、花、果实和种子)。作为含有植物甾醇的植物体，可列举出例如大豆、向日葵、油菜籽、沙棘和松等所有的植物。

培养中使用的微生物例如可列举出示出胆甾醇氧化酶活性的微生物。作为微生物，例如可列举出担子菌类(例如，伞菌(agaricus)属和杂色云芝(Trametesversicolor))、丝状真菌类(例如，曲霉属(aspergillosis)和红曲霉属(Monascus))、及细菌(例如，节杆菌(Arthrobacter)属、链霉菌(Streptomyces)属、短杆菌(Brevibacteriumu)属、红球菌(Rhodococcus)属、及芽孢杆菌(Bacillus)属)。在一些方式中，作为微生物，具体可列举出例如，简单节杆菌(Arthrobacter Simplex、别名诺卡氏菌(NocardioidosSimplex))等。

作为微生物，可以使用市售的微生物，或者可以使用利用人工诱变手段(例如，化学物质(例如，EMS(甲磺酸乙酯)、硫酸二乙酯、NTG(N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍)和亚硝基胍)、X射线、γ射线和紫外线)而得到的菌学性质发生了改变的微生物。或者，作为微生物，可以使用利用适合的载体将编码胆甾醇氧化酶的基因导入微生物(例如，大肠杆菌)内并进行转化而能够表达胆甾醇氧化酶的转化微生物。

经皮吸收剂中的植物甾酮的配混量可以进行适宜设定，例如为0.1～20重量％，优选为0.5～10重量％。

经皮吸收剂中，除植物甾酮之外根据需要可以配混药物、化妆品中使用的成分、即醇类(例如，乙醇、异硬脂醇、鲸蜡醇和苯氧基乙醇等)、乳化剂(例如，聚甘油脂肪酸酯、卵磷脂衍生物、聚乙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐脂肪酸酯和高分子乳化剂)、经皮吸收促进剂(例如，脂肪酸、脂肪族醇、脂肪酸酯、烷基醚、芳香族系有机酸、芳香族系醇、芳香族系有机酸酯、芳基醚和核糖体制剂)、水(例如，纯化水、温泉水和深层水)、油剂、表面活性剂、金属皂、凝胶化剂、粉体、水溶性高分子、成膜剂、树脂、紫外线防御剂、包接化合物、抗菌剂、香料、消臭剂、盐类、pH调节剂、清凉剂、源自动物/微生物的提取物、植物提取物、血行促进剂、收敛剂、抗皮脂溢剂、美白剂、抗炎药、活性氧清除剂、细胞活化剂、保湿剂、螯合剂、角质层分离剂、酶、激素类、维生素类等。根据经皮吸收剂的剂型，这些成分可以单独使用1种，或者可以适宜组合两种以上来使用。例如，由于植物甾酮不溶于水，因此可以溶解于醇类(例如，乙醇)中而制成液态，或者可以使用乳化剂制成膏状。一些方式的经皮吸收剂含有经皮吸收促进剂。

一些方式的经皮吸收剂是用于减少皮下脂肪的药物。作为药物，能适用于皮肤即可，可以是液态或半固态状(例如，凝胶状、糊剂状和膏状)中的任一者。作为药物，例如可以列举出凝胶剂、膏剂、液体制剂、贴剂、气溶胶剂、水性软膏剂和包覆剂。

其它方式的经皮吸收剂是用于减少皮下脂肪的化妆品。作为化妆品，能适用于皮肤即可，可以是液态或半固态状(例如，凝胶状、糊剂状和膏状)中的任一者。作为化妆品，例如可以列举出基础化妆品(例如，化妆水、膏、乳液和美容液)、毛发化妆品(洗发水、护发素和护理液)、彩妆化妆品(例如，粉底液和基底乳液)和防晒化妆品。

一些方式的用于减少皮下脂肪的经皮吸收剂在需要减少皮下脂肪的对象中以适用于对象的皮肤的方式使用。

另外，此处，提供减少对象中的皮下脂肪的方法，其包括将植物甾酮适用于需要减少皮下脂肪的对象的皮肤。或者，提供用于减少皮下脂肪的植物甾酮，其以适用于皮肤的方式使用。

“对象”为人、或除人以外的生物、例如鸟和非人哺乳动物(例如，牛、猴、猫、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、猪、狗、兔子、绵羊和马)。“对象”优选为人。

“适用”是指将植物甾酮以足以减少对象的皮下脂肪的量施用于对象的皮肤。在一些方式中，将植物甾酮适用于对象中蓄积有需要减少的皮下脂肪的皮下组织上的皮肤。优选将植物甾酮适用于对象中容易蓄积皮下脂肪的部位、例如选自从上臂部、腹部和腰部到大腿部为止的部位中的部位的皮肤。经皮吸收剂或植物甾酮根据其剂型可以利用涂布、粘贴、喷雾等适用于皮肤。

植物甾酮的用量根据年龄、性别、症状、给予次数、剂型等而不同。植物甾酮的用量以1天1次至多次的给予次数计例如使用5mg/天～1000mg/天、或50mg/天～500mg/天。

一些优选的方式中，经皮吸收剂、方法、或植物甾酮可以优于内脏脂肪先减少皮下脂肪。

在一些方式中，经皮吸收剂、方法、或植物甾酮可以与植物甾酮的经口给予组合使用。

在一些方式中，经皮吸收剂、方法、或植物甾酮可以与其它药物有效成分、或其它化妆品有效成分组合使用。

需要说明的是，本说明书中记载的全部文献和出版物无论其目的如何，均通过参照将其整体组入本说明书中。本说明书包括成为本申请的优先权主张基础的作为日本专利申请的特愿2018-161943号(2018年8月30日申请)的权利要求书、说明书和附图的公开内容。

另外，对于本发明的目的、特征、优点及方案，根据本说明书的记载对于本领域技术人员而言是显而易见的，根据本说明书的记载，本领域技术人员能够容易地实施本发明。用于实施发明的方式和具体的实施例等是示出本发明的优选的实施方式的例子，是用于示例或说明而示出的，并非将本发明限定于这些。在本说明书中公开的本发明的意图和范围内基于本说明书的记载可以进行各种修饰，对于本领域技术人员而言是显而易见的。

实施例

实施例1：作为皮下脂肪代谢促进剂的植物甾酮的制备法

作为被检物质的含有植物甾酮的组合物通过依据日本特开2007-284348号公报中记载的发酵法的方法而制造。具体而言，预先用包含植物甾醇的培养基培养革兰氏阳性菌，制备了培养液。在制备的培养液中添加植物甾醇，进而使有机溶剂分层后，利用搅拌叶片进行剧烈搅拌。然后，通过双层分离而回收上层使其干固，得到含有植物甾酮的组合物。得到的含有植物甾酮的组合物中包含50重量％以上的各种甾酮类。

谷甾-5-烯-3-酮、谷甾-4-烯-3-酮、菜油甾-5-烯-3-酮、菜油甾-4-烯-3-酮和植物甾-4-烯-3,6-二酮。

此处，“植物甾-4-烯-3,6-二酮”为菜油甾-4-烯-3,6-二酮、谷甾-4-烯-3,6-二酮、豆甾-4-烯-3,6-二酮和菜子甾-4-烯-3,6-二酮的混合物。

各种植物甾酮和植物甾醇的分析依据日本特开2007-284348号公报中记载的方法通过高效液相色谱法进行分析。分析数值如下所述。

5-烯-3-酮体(12.5重量％)、4-烯-3酮体(36.6重量％)和4-烯-3,6-二酮体(2.8重量％)。(总计：51.9重量％)

需要说明的是，含有植物甾酮的组合物中的剩余成分是作为基质的植物甾醇(即，谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和菜子甾醇)等。

作为被检物质的菜油甾-5-烯-3-酮可以通过以菜油甾醇(TAMA BIOCHEMICALCO.,LTD.)作为原料利用Parish等人的选择性氧化法或Swern氧化法进行合成而得到(Parish E.J.,et al：Synthetic communications(1992)22，p.2839-)。

使用预先给予2周标准纯化试样AIN-93G(Oriental Yeast Co.,Ltd.)而增肥的SD大鼠(Oriental Yeast Co.,Ltd.)。将肥大的大鼠的腹部的毛剔除20mm见方，在此，将如下物质用棉棒轻轻地涂布于如下分组的各个体(各组的n＝3)：作为被检物质的含有植物甾酮的组合物(30mg/ml乙醇溶液)2ml、作为被检物质的菜油甾-5-烯-3-酮(5mg/ml乙醇溶液)2ml、或作为对照的乙醇溶液2ml。将该操作持续2周。涂布试验结束后，将大鼠解剖，谨慎地回收肝脏的脂肪、精巢周围脂肪、肾周围脂肪、肠系膜脂肪和皮下脂肪，测定了各自的重量。

其结果，对于皮下脂肪量而言，与涂布了对照(E)的情况相比，涂布了含有植物甾酮的组合物(P)的情况显著地减少(p<0.05)，减少约40％(图1)。另外，对于皮下脂肪量而言，与涂布了对照(E)的情况相比，涂布了菜油甾-5-烯-3-酮(C)的情况皮下脂肪也显著地减少(p<0.05)，皮下脂肪减少约16％。

由此，涂布含有植物甾酮的组合物或菜油甾-5-烯-3-酮时的皮下脂肪与对照相比分别减少了40％和16％。使用含有植物甾酮的组合物时的基于经皮给予的植物甾酮的给予量约为每天31mg(30mg/ml×2ml×0.519)，2周总计约434mg。另外，使用菜油甾-5-烯-3-酮时的基于经皮给予的给予量约为每天10mg(5mg/ml×2ml)，2周总计仅为约140mg。

另一方面，报道了在8周内以约120mg/天时经口给予使内脏脂肪大幅减少的菜油甾-5-烯-3-酮的皮下脂肪减少率为26％(肥胖研究(2007),13(3),p.244-249)。基于经口给予的菜油甾-5-烯-3-酮的给予量约为每天120mg，因此8周总计也约为6720mg。

由这些结果可知：将植物甾酮经皮给予时，与经口给予的情况相比，在短期内且以少量的给予减少皮下脂肪。

此处，通常已知内脏脂肪容易减少，而皮下脂肪不易减少。进而还已知皮下脂肪的代谢在内脏脂肪被代谢后进行的情况校多，优先代谢皮下脂肪的的情况是进行有氧运动时。肠系膜周围、肾脏周围、精巢周围、肝脏等部位的脂肪被称为是内脏脂肪。然而，对于该部位的脂肪，与涂布了对照的情况相比，涂布了被检物质的情况下脂肪量并未显著减少(图2～5)。即，可知：在涂布了被检物质时，优于内脏脂肪先减少皮下脂肪。

此处，本实施例中的显著差异检验如下进行，首先，计算出各组的平均值±标准误差，进行方差检验。此外，同方差性的情况利用t检验、及异方差性的情况利用Welch法进行了显著差异检验。

根据本实施例，证实了：将植物甾酮经皮给予时，与经口给予的情况相比，在短期内且以少量的给予减少皮下脂肪。