一种抗抑郁的ACD药物组合物及其制剂与应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抗抑郁的ACD药物组合物及其制剂与应用。

背景技术

抑郁症（Depression）又称抑郁障碍，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，自卑抑郁，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为；甚至发生木僵；部分病例有明显的焦虑和运动性激越；严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。每次发作持续至少2周以上、长者甚或数年，多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。迄今，抑郁症的病因并不非常清楚，但可以肯定的是，生物、心理与社会环境诸多方面因素参与了抑郁症的发病过程。生物学因素主要涉及遗传、神经生化、神经内分泌、神经再生等方面；与抑郁症关系密切的心理学易患素质是病前性格特征，如抑郁气质。成年期遭遇应激性的生活事件，是导致出现具有临床意义的抑郁发作的重要触发条件。

抑郁症的治疗主要是抗抑郁药物，目前临床上一线的抗抑郁药主要包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI，代表药物氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰和艾司西酞普兰）、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂（SNRI，代表药物文拉法辛和度洛西汀）、去甲肾上腺素和特异性5-羟色胺能抗抑郁药（NaSSA，代表药物米氮平）等。传统的三环类、四环类抗抑郁药和单胺氧化酶抑制剂由于不良反应较大，应用明显减少。近年来发现了许多有抗抑郁作用的天然药物。如巴戟天寡糖胶囊已在北京同仁堂作为抗抑郁药物上市。贯叶连翘的提取物是德国威玛舒培博士药厂上市的抗抑郁药路优泰的主要成分。四川济生堂药业有限公司生产的舒肝解郁胶囊是由贯叶金丝桃、刺五加复方制成的中成药胶囊制剂。因而，从植物中寻找天然的抗抑郁药物前景广阔。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗抑郁的ACD药物组合物；第二目的在于提供所述的抗抑郁的ACD药物组合物的制剂；第三目的在于提供所述的抗抑郁的ACD药物组合物的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述的抗抑郁的ACD药物组合物是由虾青素和大麻二酚组成。

本发明的第二目的是这样实现的，所述的抗抑郁的ACD药物组合物的制剂是在所述的ACD药物组合物中加入辅料制备成片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、丸剂或注射剂。

本发明的第三目的是这样实现的，所述的抗抑郁的ACD药物组合物在制备预防/抗抑郁的产品中的应用。

本发明研究表明，从植物中提取的营养物质，比如乳源活性肽、 桔梗、茯苓多糖、小分子化合物（CXZ-123）等都对抑郁症有缓解作用。

虾青素(Astaxanthin)是目前最强的抗氧化剂，近年来的研究表明，虾青素具有防治心血管疾病、降低血压、防治动脉粥样硬化、保护神经系统、缓解炎症、防治癌症、治疗肝损伤、减轻肥胖、防治糖尿病、保护皮肤、保护视力、减少运动损伤和增强免疫力等多方面的药理活性。虾青素也是目前发现唯一能穿透血-脑、血-视网膜屏障的类胡萝卜素，对中枢神经系统和大脑功能可产生积极的影响。因此若将虾青素开发为对神经系统疾病有治疗效果的药物，将对改善人类健康产生积极效果。

大麻二酚(Cannabidiol, CBD)是最早于1940 年从桑科植物大麻(Cannabissativa)中分离得到的一种纯天然大麻素，为大麻中的非精神类成分。由于CBD具有良好的安全性和生理活性，在膳食补充剂、食品等领域的应用日渐增多。此外，CBD在抗焦虑、抗精神病、抗抑郁、抗惊厥、抗炎、抗风湿和抗肿瘤等方面也表现出明显的药理活性，成为国际生物制药领域最受关注的大麻素。本研究首次研究了虾青素及CBD组合药物对抑郁症的疗效。

附图说明

图1为本发明所述的ACD药物组合物糖水偏好对比试验效果示意图；

图2为本发明所述的ACD药物组合物高价迷宫对比试验效果示意图；

图3为本发明所述的ACD药物组合物小鼠悬尾对比试验效果示意图；

图4为本发明所述的ACD药物组合物小鼠强迫游泳试验效果示意图；

图5为本发明所述的ACD药物组合物对小鼠大脑中炎症因子水平的对比测试效果示意图；

图6为本发明所述的ACD药物组合物对BDNF的水平的测试效果示意图；

图7为本发明所述的ACD药物组合物对5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)的水平的测试效果示意图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的抗抑郁的ACD药物组合物是由虾青素和大麻二酚组成。

所述的虾青素和大麻二酚的质量配比为1：（2~5）。

所述的虾青素和大麻二酚的质量配比为1:3。

本发明所述的抗抑郁的ACD药物组合物的制剂为所述的抗抑郁的ACD药物组合物的制剂是在所述的ACD药物组合物中加入辅料制备成片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、丸剂或注射剂。

本发明所述的抗抑郁的ACD药物组合物的应用为所述的抗抑郁的ACD药物组合物在制备预防/抗抑郁的产品中的应用。

所述的产品为食品、药品或保健食品。

下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：

实施例1

按质量比为1:2的比例称量虾青素和水溶性大麻二酚，然后混匀得到目标物抗抑郁的ACD药物组合物。

实施例2

按质量比为1: 3的比例称量虾青素和水溶性大麻二酚，然后混匀得到目标物抗抑郁的ACD药物组合物。

实施例3

按质量比为1: 4的比例称量虾青素和水溶性大麻二酚，然后混匀得到目标物抗抑郁的ACD药物组合物。

实施例4

按质量比为1: 5的比例称量虾青素和水溶性大麻二酚，然后混匀得到目标物抗抑郁的ACD药物组合物。

实施例5

以实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成片剂。

实施例6

以实施例1制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成口服液。

实施例7

以实施例4制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成胶囊剂。

实施例8

以实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成颗粒剂。

实施例9

以实施例3制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成粉剂。

实施例10

以实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成丸剂。

实施例11

以实施例3制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成注射剂。

实施例12

以实施例4制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成丸剂。

实施例13

以实施例1制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物中加入药学上可接受的辅料制备成胶囊剂。

实施例14

以实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物进行试验，具体如下：

1、抑郁症模型的建立

本研究采用经典的抗抑郁模型方法，即慢性不可预知温和应激（CUMS）模型，对小鼠进行抑郁造模，该方法与人抑郁症发病原因机理相似，通过恶劣的环境和其他不利因素的控制来诱发抑郁，在机制研究及药物筛选方面十分适用。

本实验所使用的动物为3-4周龄的，SPF级昆明小鼠，雌雄各半，动物及饲料均购自昆明医科大学实验动物中心，实验动物饲养于普通级动物室干燥、通风、安静的环境，适应性饲养1周后，进行行为学实验：糖水偏好测试（SPT）、悬尾测试（TST）、强迫游泳测试（FST），获取行为学基数，剔除不正常小鼠。然后将剩余的小鼠分为小鼠正常组（WT）和模型组, WT组不施加任何刺激，在原适应性饲养条件下继续饲养。模型组开始造模，暴露于不同的应激源，包括昼夜持续光照、食物剥夺、身体束缚4小时，配合孤养。刺激每天随机给予，持续一个月。造模其间，每种刺激平均实施。每周进行糖水偏好实验，确认造模进度；预计造模时间达到后再次进行行为学检测。四周后，两组小鼠都进行行为学测试：糖水偏好测试（SPT）、悬尾测试（TST）、高架十字迷宫测试（EPMT）、强迫游泳测试FST），造模成功小鼠的选取参照第一次行为学基数，同时比对抑郁模型组小鼠与正常空白对照组（WT）的行为学数据。

糖水偏好测试

糖水偏好测试（Sucrose preference test，SPT）原理是使抑郁小鼠不能像正常小鼠那样表现出对糖水的偏好，体现出快感的缺失。为保证糖水偏好测试的准确度，测试前对小鼠糖水适应，适应时间为24 h后，鼠禁食禁水12 h，随后准备清水和糖水各一瓶，称重，置于鼠笼上，计算统计清水和糖水消耗量。计算糖水偏好度：糖水偏好度（%）= 糖水消耗量（g）/总液体消耗量（g）×100%。

高架十字迷宫测试

高架十字迷宫测试（Elevated plus-maze test，EPMT）就是由于动物对新环境的探究和对高悬开放臂的恐惧而形成的矛盾冲突状态，从而反映出动物的焦虑情绪，所以高架十字迷宫既可以建立非条件反射焦虑动物模型，也可以作为测量动物焦虑反应的方法。实验开始时保持外部环境安静，将小鼠放入高架迷宫中心，记录300s内的开闭臂活动情况及时间。以中心格面累积经过次数、中心格面累积经过时间、开臂累积进入次数，开臂累积停留时间，闭臂累积进入次数，闭臂累积停留时间作为观察指标。计算开闭臂停留时间比例，开闭臂进入次数比例，高架十字迷宫中累积总进入次数。实验完成后将小鼠取出，喷洒酒精除去小鼠气味。小鼠的焦虑情绪与进入闭臂次数及停留时间呈现正相关关系，进入闭臂次数越多，停留时间越长，表明小鼠的焦虑抑郁情绪越严重。

悬尾测试

悬尾测试（Tail suspension test，TST）是一种经典而又能快速评价抗抑郁药物、兴奋药物、镇静药物药效的方法。其原理是利用小鼠悬尾后企图逃脱但又无法逃脱，从而放弃挣扎，进入特有的抑郁不动状态，实验过程中记录动物不动时间来反映抑郁状态，抗抑郁药物、兴奋药物能明显地缩短改变其状态。实验开始前排除外部因素干扰，用美术胶带将小鼠尾部末端固定于悬绳，悬挂于支架上，头部与地面的距离要保证小鼠无法接触地面，一般不少于15cm，打开背光灯，使摄像背景与小鼠呈明显反差，便于软件对比和动态分析，开始摄像，记录360 s内小鼠挣扎和静止活动情况，利用小动物行为学分析软件进行数据整理，对小鼠后静止时间、挣扎时间进行统计分析。小鼠的抑郁情绪与静止时间呈现正相关，静止时间越长，表明小鼠的焦虑抑郁情绪越严重。

强迫游泳测试

强迫游泳测试（Forced swimming test , FST）主要用于抗抑郁、镇静以及止痛类药物的研究，该实验方法是一种行为绝望实验法，其基本原理是当大鼠或小鼠放进一个有限的空间使之游泳，开始时拼命游泳力图逃脱，很快就变成漂浮不动状态，仅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶尔划动以保持身体不至于沉下去，实际是动物放弃逃脱的希望，属于行为绝望。正常小鼠会表现出积极的求生挣扎，而抑郁症小鼠则表现出“行为绝望”—瞬间放弃，进入悬浮不动的状态。准备长宽高适用倒入2/3左右的水的圆柱形透明玻璃容器备用，将小鼠放进去后使小鼠沉底也无法爬出，打开背光灯使摄像背景与小鼠毛色呈明显反差，开始摄像。用动物行为学软件记录在360 s内小鼠的静止时间和挣扎时间。调好动态捕捉标准，小鼠无运动痕迹仅头部露出作为静止的判定标准。小鼠的抑郁情绪与静止时间呈现正相关，静止时间越长，表明小鼠的焦虑抑郁情绪越严重。

2、动物分组及给药

根据糖水偏好实验、饮食摄水量、小鼠质量及自主运动能力，共筛选出72只小鼠，根据体重随机分成5组，每组12只，雌雄各半，实验具体分组如下：正常对照组（WT，正常生理盐水灌胃）,抑郁模型对照组（Con，正常生理盐水灌胃） 虾青素治疗组（Ast，50-100mg/kg的AstaMAZ®虾青素微囊粉溶于正常生理盐水灌胃）,大麻二酚治疗组（CBD，250-500mg/kg的水溶性大麻二酚微囊粉溶于正常生理盐水灌胃），实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物治疗组（ACD，50-100mg/kg的AstaMAZ®虾青素微囊粉与250-500mg/kg的水溶性大麻二酚CBD按照1:3的比例进行组合（药物组合物由云南维他源生物科技有限公司提供），并溶于正常生理盐水中灌胃，阳性药物氟西汀治疗组（FLX，20mg/kg溶于正常生理盐水灌胃，礼来苏州制药有限公司），以上灌胃在抑郁症模型造模开始两周前进行，持续至造模结束后的两周，给药时间持续两个月，造模前24h和全部灌胃完成后24h内进行行为学实验检测。小鼠行为学测试均安排在早上进行，以确保小鼠实验的准确性。

3、实验结果

糖水偏好实验，见图1，结果说明，虾青素（Ast）、大麻二酚(CBD)及实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）与阳性药物氟西汀治疗组（FLX）和正常对照组的小鼠相比的糖水偏好率之间无显著性差异（P>0.05），但与抑郁症模型组（Con）相比有显著性差异，说明所有药物治疗组都有效改善了小鼠抑郁。

高架迷宫实验，见图2，结果说明，虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)及实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）和模型对照组（Con）的小鼠相比，小鼠开闭时间有显著差异（P<0.05），阳性药物氟西汀治疗组（FLX）相比无显著性差异(p>0.05)，即所有治疗组都显示出了良好抗抑郁效果.而且实施例4制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）的小鼠开臂停留时间时间明显高于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独治疗组的时间，呈现显著性差异（P<0.05），即虾青素和大麻二酚（1:3）实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物（ACD）组的疗效优于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独治疗组。

小鼠悬尾试验，见图3，结果说明，虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)及实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）和模型对照组（Con）的小鼠相比，小鼠静止不动时间都有明显下降，有显著差异（P<0.05），和阳性药物氟西汀治疗组（FLX）相比无显著性差异（P>0.05），说明所有治疗组都显示出了良好抗抑郁效果. 而且实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）的小鼠静止不动时间明显低于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独治疗组的时间，呈现显著性差异（P<0.05），即虾青素和大麻二酚（1:3）实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物（ACD）的疗效优于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独用药的疗效。

小鼠强迫游泳实验，见图4，结果说明，虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)及实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）和模型对照组（Con）的小鼠相比，小鼠静止不动时间都有明显下降，有显著差异（P<0.05），和阳性药物氟西汀治疗组（FLX）相比无显著性差异（P>0.05），说明所有治疗组都显示出了良好抗抑郁效果. 而且实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）的小鼠静止不动时间明显低于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独治疗组的时间，呈现显著性差异（P<0.05），即虾青素和大麻二酚（1:3）实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物（ACD）的抗炎效果疗效优于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独用药的疗效。

ELISA试剂盒检测小鼠大脑内促炎性细胞因子、5-HT和BDNF的表达

血清的提取

所有组的大鼠用4%水合氯醛腹腔麻醉后，断头取脑组织放入液氮罐速冻后再放入-80℃冰箱储存。

小鼠脑组织总蛋白的提取

称取5mg大鼠脑组织，置于预冷的研钵中剪碎，加入RIPA总蛋白提取液匀浆，将匀浆吸入0.2mL离心管中，冰上裂解30 min后，1200 rpm、4℃离心10 min。 将各管上清移至新的离心管中，根据BCA试剂盒(索莱宝，北京)指南检测待测样品的蛋白浓度。最后根据ELISA商用试剂盒的指南检测小鼠大脑中 BDNF（Abbexa, Cambridge, UK)）、IL-1、IL-6和TNF-α的水平（Bio-Rad, Hercules, CA, USA ）和5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT上海康丁生物科技有限公司）水平。

小鼠大脑中炎症因子水平的测试结果说明，虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)及实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）和模型对照组（Con）的小鼠相比，小鼠大脑中IL-1、IL-6和TNF-α的水平都有明显下降，且有显著差异（P<0.05），和阳性药物氟西汀治疗组（FLX）相比无显著性差异（P >0.05），说明所有治疗组都显示出了良好抗抑郁效果. 而且实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）的小鼠静止不动时间明显低于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独治疗组的时间，呈现显著性差异（P<0.05），即虾青素和大麻二酚（1:3）实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物（ACD）的抗炎效果优于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独使用的效果。

5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）和BDNF的水平的测试结果说明，虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)及实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）和模型对照组（Con）的小鼠相比，小鼠大脑中BDNF的水平都有明显提升，且有显著差异（P<0.05），和阳性药物氟西汀治疗组（FLX）相比无显著性差异（P>0.05），说明所有治疗组都显示出了良好抗抑郁效果，且实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组对BDNF的提升比虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独用药组明显。

虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)及组合用药组（ACD）和模型对照组（Con）的小鼠相比，小鼠大脑中5-羟色胺（5-HT）的水平都有明显提升，且有显著差异（P<0.05），和阳性药物氟西汀治疗组（FLX）相比无显著性差异（P>0.05），说明所有治疗组都显示出了良好抗抑郁效果. 而且实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物组（ACD）的小鼠5-羟色胺（5-HT）的水平明显高于虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独治疗组的时间，呈现显著性差异（P<0.05），即虾青素和大麻二酚（1:3）实施例2制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物（ACD）对5-羟色胺（5-HT）的水平提升明显超过虾青素（Ast）和大麻二酚(CBD)单独使用的效果。

结论：本发明发现上述两种成分之间具有相互协同作用，可以明显改善抑郁行为，抗炎、提高血小鼠大脑中5-HT及BDNF的水平，抗抑郁效果远优于单一成分的药物。该药物组合物表现出了较好的抗抑郁的作用且没有依赖性，副作用极少，安全可靠、成本低、原料易得，易于推广应用。

实施例15

分别以实施例1、实施例3和实施例4制备得到的抗抑郁的ACD药物组合物进行试验，方法同实施例14，结果均表明，本发明所述的抗抑郁的ACD药物组合物抗抑郁疗效显著。