治疗血色素异常及地中海型贫血的组合物及方法

相关申请

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背景技术

血色素异常，诸如镰状细胞疾病，为广泛流行的遗传性红血球病症，其在全世界引起显著的健康负担。血色素异常涵盖多种遗传性起源的贫血，其中红血球的产量降低及/或溶血增加。特别地，镰状细胞疾病为一组体现为产生镰状红血球的遗传病症且除剧烈疼痛期、器官衰竭及早期死亡以外，亦由溶血性贫血及血管阻塞表征。镰状细胞贫血为镰状细胞疾病(SCD)的最常见及严重形式，其在美国影响约100,000人且在全世界影响440万人。对于许多患者，SCD是由伴有急性并发症的慢性器官衰竭及早期死亡定义。当前用于SCD的疗法限于并发症的支持性治疗、红血球输注、羟基尿素及干细胞移植。

鉴于缺乏可用的疗法，仍需要用于治疗对象中的血色素异常(诸如SCD)的药剂，例如膳食组合物及治疗剂。

发明内容

本发明提供一种组合物(例如活性部分)，其包括氨基酸实体，该氨基酸实体适用于改善对象，例如患有血色素异常(hemoglobinopathy)(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(thalassemia)(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)的对象中的红血球及/或血色素功能、转化及合成；血管功能；发炎；及/或氧化应激。组合物可用于治疗(例如逆转、减少、改善或预防)有需要的对象(例如人类)中的血色素异常或地中海型贫血的一种或多种症状的方法中。方法可进一步包括在施用组合物之后，监测对象中的血色素异常或地中海型贫血的一种或多种症状的改善。

在一个方面，本发明的特征在于一种改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种(例如全部)的方法：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；或血管功能，该方法包含向有需要的对象施用有效量的组合物(例如活性部分)，该组合物包含：

a)亮氨酸氨基酸实体，

b)精氨酸氨基酸实体，

c)谷氨酰胺氨基酸实体；及

d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体；

组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％；

从而改善对象中的以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种(例如全部)：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；或血管功能。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善红血球功能的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善红血球转化的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善红血球合成的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善血色素功能的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善血色素转化的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善血色素合成的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善血管功能的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。在另一方面，本发明的特征在于一种治疗血色素异常或地中海型贫血的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的组合物(例如活性部分)，该组合物包含：

a)亮氨酸氨基酸实体，

b)精氨酸氨基酸实体，

c)谷氨酰胺氨基酸实体；及

d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体；

组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％；

从而治疗对象中的血色素异常或地中海型贫血。

在另一方面，本发明的特征在于一种降低氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种)或发炎的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的方面或实施例中的任一种的组合物(例如活性部分)。在一些实施例中，对象具有罹患血色素异常(例如β-血色素异常)或地中海型贫血的风险或已诊断患有血色素异常或地中海型贫血。在某些实施例中，血色素异常为镰状细胞疾病。在另一实施例中，α-地中海型贫血为α-地中海型贫血或β-地中海型贫血。

在另一方面，本发明的特征在于一种组合物，其用于改善有需要的对象中的以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种(例如全部)的方法中：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；或血管功能，其中该组合物包含有效量的：

a)亮氨酸氨基酸实体，

b)精氨酸氨基酸实体，

c)谷氨酰胺氨基酸实体；及

d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体，

其中组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)全部组分总重量的10重量％。

在另一方面，本发明的特征在于一种治疗有需要的对象中的血色素异常或地中海型贫血的方法，其中组合物包含有效量的：

a)亮氨酸氨基酸实体，

b)精氨酸氨基酸实体，

c)谷氨酰胺氨基酸实体；及

d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体，

其中组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)全部组分的10重量％。在一些实施例中，镰状细胞疾病选自：镰状细胞贫血(HbSS)、血色素SC疾病(HbSC)、镰状β

在一些实施例中，施用组合物可引起以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)：活性氧产量降低；血浆精氨酸酶的含量或活性降低；谷胱甘肽合成增加；黏着至内皮及其他细胞的红血球减少；红血球对镰状化的抗性增加；红血球钙流入增加；合成代谢增加；一氧化氮合成增加；或血色素合成增加。

在一些实施例中，施用组合物可引起以下中的一种、两种、三种、四种或更多种(例如全部)的改善：贫血；溶血；血管阻塞；局部缺血；或疼痛。

在一些实施例中，组合物进一步包含：(e)甘氨酸氨基酸实体或肉碱实体中的一种或两种。

在另一方面，本发明的特征在于一种组合物，其包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)亮氨酸氨基酸实体，

b)精氨酸氨基酸实体，

c)谷氨酰胺氨基酸实体；

d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)实体；及

e)甘氨酸氨基酸实体或肉碱实体中的一种或两种。

在一些实施例中，肉碱实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％。

在一些实施例中，甘氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少3重量％。

在一些实施例中，组合物中不存在异亮氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物进一步包含以下中的一种、两种或更多种(例如全部)：(f)缬氨酸氨基酸实体，(g)组氨酸氨基酸实体，或(h)赖氨酸氨基酸实体。

在一些实施例中，(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)是选自表1。

在一些实施例中，组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)全部组分总重量的10重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)在组合物中呈游离氨基酸形式，例如组合物中的呈游离氨基酸形式的(a)-(f)中的一种、两种、三种、四种、五种或更多种(例如全部)占组合物(例如在干燥形式)的总重量的至少42重量％、75重量％、90重量％或更多。

在一些实施例中，(a)-(d)、(a)-(e)、(a)-(f)或(a)-(h)的总重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的非氨基酸实体蛋白质组分(例如乳清蛋白)或非蛋白质组分(或其两者)的总重量％，例如(a)-(d)、(a)-(e)、(a)-(f)或(a)-(h)占组合物(例如在干燥形式)中的全部组分的总重量的至少50重量％、75重量％或90重量％。

在一些实施例中，组合物包含18种或更少、15种或更少或12种或更少的氨基酸实体的组合，例如组合包含组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的总重量的至少42重量％、75重量％或90重量％。

在一些实施例中，组合物中不存在色氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。在一些实施例中，色氨酸(若存在)以游离形式存在。在一些实施例中，色氨酸(若存在)以盐形式存在。

在一些实施例中，色氨酸(若存在)可存在于寡肽、多肽或蛋白质中，其限制条件为蛋白质不为乳清、酪蛋白、乳白蛋白质或任何其他用作营养补充剂、医疗食品或类似产品的蛋白质(无论是否以完整蛋白质或蛋白质水解产物形式存在)。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及NAC实体的重量比率为3.6+/-20％:4.5+/-20％:11+/-20％:1.2+/-20％。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体及甘氨酸氨基酸实体的重量比率为3.6+/-20％:4.5+/-20％:11+/-20％:1.2+/-20％:1+/-20％:2.7+/-20％。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)亮氨酸氨基酸实体，其选自：

i)L-亮氨酸或其盐，

ii)包含L-亮氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐，或

iii)β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)或其盐；

b)精氨酸氨基酸实体，其选自：

i)L-精氨酸或其盐，

ii)包含L-精氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐，

iii)肌酸或其盐，或

v)包含肌酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

c)谷氨酰胺氨基酸实体，其为L-谷氨酰胺或其盐或包含L-谷氨酰胺的二肽或其盐，或三肽或其盐；

d)NAC实体，其为NAC或其盐或包含NAC的二肽或其盐；及

e)以下中的一种或两种：

i)甘氨酸氨基酸实体，其为L-甘氨酸或其盐或包含L-甘氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；或

ii)肉碱实体，其为L-肉碱或其盐，或包含L-肉碱的二肽或其盐。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)进一步包含以下中的一种、两种或更多种(例如全部)：

(f)缬氨酸氨基酸实体，其为L-缬氨酸或其盐或包含L-缬氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

(g)组氨酸氨基酸实体，其为L-组氨酸或其盐或包含L-组氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；或

(h)赖氨酸氨基酸实体，其为L-赖氨酸或其盐或包含L-赖氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)亮氨酸氨基酸实体，其为L-亮氨酸或其盐；

b)精氨酸氨基酸实体，其为L-精氨酸或其盐；

c)谷氨酰胺氨基酸实体，其为L-谷氨酰胺或其盐；

d)NAC实体，其为NAC或其盐；及

e)以下中的一种或两种：甘氨酸氨基酸实体，其为L-甘氨酸或其盐，或肉碱实体，其为L-肉碱或其盐。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)亮氨酸氨基酸实体，其为L-亮氨酸或其盐；

b)精氨酸氨基酸实体，其为L-精氨酸或其盐；

c)谷氨酰胺氨基酸实体，其为L-谷氨酰胺或其盐；

d)NAC实体，其为NAC或其盐；

e)以下中的一种或两种：甘氨酸氨基酸实体，其为L-甘氨酸或其盐，或肉碱实体，其为L-肉碱或其盐；

f)缬氨酸氨基酸实体，其为L-缬氨酸或其盐；

g)组氨酸氨基酸实体，其为L-组氨酸或其盐；及

h)赖氨酸氨基酸实体，其为L-赖氨酸或其盐。

在另一方面，本发明的特征在于一种组合物，其包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)亮氨酸氨基酸实体，

b)精氨酸氨基酸实体，

c)谷氨酰胺氨基酸实体，

d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)实体，

e)瓜氨酸氨基酸实体，

f)肉碱实体，

g)丝氨酸氨基酸实体，

h)缬氨酸氨基酸实体，

i)组氨酸氨基酸实体，及

j)赖氨酸氨基酸实体。

在一些实施例中，组合物中不存在异亮氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％、9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)选自表1。

在一些实施例中，组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)全部组分总重量的10重量％、9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)在组合物中呈游离氨基酸形式，例如组合物中的呈游离氨基酸形式的(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)占组合物(例如在干燥形式)的总重量的至少42重量％、45重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、97重量％、98重量％或更多。

在一些实施例中，(a)-(j)的总重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的非氨基酸实体蛋白质组分(例如乳清蛋白)或非蛋白质组分(或其两者)的总重量％，例如(a)-(j)占组合物(例如在干燥形式)中的全部组分的总重量的至少50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、97重量％、98重量％或更多。

在一些实施例中，组合物包含18种或更少、17种或更少、16种或更少、15种或更少、14种或更少、13种或更少、12种或更少或11种或更少的氨基酸实体的组合。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)亮氨酸氨基酸实体，其选自：

i)L-亮氨酸或其盐，

ii)包含L-亮氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐，或

iii)β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)或其盐；

b)精氨酸氨基酸实体，其选自：

i)L-精氨酸或其盐，

ii)包含L-精氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐，

iii)肌酸或其盐，或

v)包含肌酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

c)谷氨酰胺氨基酸实体，其为L-谷氨酰胺或其盐或包含L-谷氨酰胺的二肽或其盐，或三肽或其盐；

d)NAC实体，其为NAC或其盐或包含NAC的二肽或其盐；

e)瓜氨酸氨基酸实体，其为L-瓜氨酸或其盐或包含L-瓜氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

f)肉碱实体，其为L-肉碱或其盐，或包含L-肉碱的二肽或其盐；

g)丝氨酸氨基酸实体，其为L-丝氨酸或其盐或包含L-丝氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

h)缬氨酸氨基酸实体，其为L-缬氨酸或其盐或包含L-缬氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

i)组氨酸氨基酸实体，其为L-组氨酸或其盐或包含L-组氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；及

j)赖氨酸氨基酸实体，其为L-赖氨酸或其盐或包含L-赖氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

a)L-亮氨酸或其盐，

b)L-精氨酸或其盐，

c)L-谷氨酰胺或其盐，

d)NAC或其盐，

e)L-瓜氨酸或其盐，

f)L-肉碱或其盐，

g)L-丝氨酸或其盐，

h)L-缬氨酸或其盐，

i)L-组氨酸或其盐，及

j)L-赖氨酸或其盐。

在另一方面，本发明的特征在于一种改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)的方法：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液或全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎，该方法包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的方面或实施例中的任一种的组合物(例如活性部分)，从而改善对象中的以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能、氧化应激(例如血液或全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎。

在另一方面，本发明的特征在于一种治疗血色素异常或地中海型贫血的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的方面或实施例中的任一种的组合物(例如活性部分)，从而治疗对象中的血色素异常或地中海型贫血。

在另一方面，本发明的特征在于一种在改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)的方法中使用的组合物：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液或全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎，其包含有效量的本文中所描述的方面或实施例中的任一种的组合物(例如活性部分)。

在另一方面，本发明的特征在于一种在治疗血色素异常或地中海型贫血的方法中使用的组合物，其包含有效量的本文中所描述的方面或实施例中的任一种的组合物(例如活性部分)。

在一些实施例中，对象具有罹患血色素异常(例如β-血色素异常)或地中海型贫血的风险或已诊断患有血色素异常或地中海型贫血。在某些实施例中，血色素异常为镰状细胞疾病。在另一实施例中，α-地中海型贫血为α-地中海型贫血或β-地中海型贫血。

在一些实施例中，镰状细胞疾病选自：镰状细胞贫血(HbSS)、血色素SC疾病(HbSC)、镰状β

在一些实施例中，施用组合物可引起以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)：活性氧产量降低；血浆精氨酸酶的含量或活性降低；谷胱甘肽合成增加；黏着至内皮及其他细胞的红血球减少；红血球对镰状化的抗性增加；红血球钙流入增加；合成代谢增加；一氧化氮合成增加；或血色素合成增加。

在一些实施例中，施用组合物可引起以下中的一种、两种、三种、四种或更多种(例如全部)的改善：贫血、溶血、血管阻塞、局部缺血或疼痛。

在一些实施例中，组合物(活性部分)使用药学上可接受的载剂调配。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)以膳食组合物形式调配。在一些实施例中，膳食组合物选自医疗食品、功能性食品或补充剂。

在一些实施例中，组合物为干燥掺合制剂，例如药物级干燥掺合制剂(PGDBP)。

在另一方面，本发明的特征在于一种制备包含至少4种药物级氨基酸实体的干燥掺合制剂(例如PGDBP)的方法，该方法包含：

形成含至少4种药物级氨基酸实体的组合且将该组合掺合一段足以获得干燥掺合制剂例如PGDBP的时间，

其中干燥掺合制剂例如PGDBP包含：a)亮氨酸氨基酸实体，b)精氨酸氨基酸实体，c)谷氨酰胺氨基酸实体；及d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体。

在一些实施例中，干燥掺合制剂，例如PGDBP，进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种、五种或更多种(例如全部)：e)瓜氨酸氨基酸实体，f)肉碱实体，g)丝氨酸氨基酸实体，h)缬氨酸氨基酸实体，i)组氨酸氨基酸实体，及j)赖氨酸氨基酸实体。

在一些实施例中，以下中的一种、两种或三种：(i)在低于40℃的温度下进行掺合；(ii)掺合法包含在掺合器或混合器中，在小于1000rpm的速度下掺合或混合；或(iii)该方法进一步包含对干燥掺合制剂(例如PGDBP)进行直接掺合、辊压或湿式造粒中的一种、两种或三种。

在另一方面，本发明的特征在于一种制备包含至少4种药物级氨基酸实体的干燥掺合制剂(例如PGDBP)的方法，该方法包含：

形成含至少4种药物级氨基酸实体的组合且将该组合掺合一段足以获得干燥掺合制剂例如PGDBP的时间，

其中干燥掺合制剂例如PGDBP包含：

a)精氨酸氨基酸实体，

b)瓜氨酸氨基酸实体，及

c)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)实体。

在一些实施例中，干燥掺合制剂，例如PGDBP，进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种：a)亮氨酸氨基酸实体，b)谷氨酰胺氨基酸实体，c)肉碱实体，d)丝氨酸氨基酸实体，e)缬氨酸氨基酸实体，f)组氨酸氨基酸实体及g)赖氨酸氨基酸实体。

在另一方面，本发明的特征在于一种组合物，其包含：

a)精氨酸氨基酸实体，

b)瓜氨酸氨基酸实体；及

c)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体，

其中以下中的一种、两种或三种：

(i)组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％；

(ii)一种或多种呈游离形式的氨基酸实体占组合物(例如在干燥形式)的总重量的至少50重量％；或

(iii)瓜氨酸氨基酸实体的重量％高于NAC实体的重量％。

在一些实施例中，组合物具有以下特征中的一种、两种或三种：

(i)组合物(例如在干燥形式)中的瓜氨酸氨基酸实体的重量％比NAC实体的重量％高出至少50％，例如瓜氨酸氨基酸实体的重量％比NAC实体的重量％高出至少60％、65％、70％、75％或80％；

(ii)亮氨酸氨基酸实体、瓜氨酸氨基酸实体及NAC实体的重量％占组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少20重量％、25重量％、30重量％或35重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的80重量％；或

(iii)瓜氨酸氨基酸实体的重量％占组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分的至少5重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％或更多，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分的60重量％。

在一些实施例中，组合物进一步包含以下中的一种或两种：(d)肉碱氨基酸实体；或(e)谷氨酰胺氨基酸实体。

在一些实施例中，组合物包含：

a)精氨酸氨基酸实体，其选自：

i)L-精氨酸或其盐，

ii)包含L-精氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐，

iii)肌酸或其盐，或

v)包含肌酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

b)瓜氨酸氨基酸实体，其为L-瓜氨酸或其盐或包含L-瓜氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；及

c)NAC实体，其为NAC或其盐或包含NAC的二肽或其盐。

在另一方面，本发明的特征在于一种组合物，其包含：

a)精氨酸氨基酸实体，

b)瓜氨酸氨基酸实体；

c)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)-实体；

(d)肉碱氨基酸实体；及

(e)谷氨酰胺氨基酸实体，

其中以下中的一种、两种或三种：

(i)组合物不包含长度超过20个氨基酸残基的肽(例如乳清蛋白)，或若存在长度超过20个氨基酸残基的肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％；

(ii)一种或多种呈游离形式的氨基酸实体占组合物(例如在干燥形式)的总重量的至少50重量％；或

(iii)瓜氨酸氨基酸实体的重量％高于NAC实体的重量％。

在一些实施例中，组合物具有以下特征中的一种、两种、三种或四种：

(i)亮氨酸氨基酸实体、瓜氨酸氨基酸实体、NAC实体、肉碱氨基酸实体及谷氨酰胺氨基酸实体的重量％占组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少40重量％、45重量％、50重量％、55重量％或60重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的90重量％；

(ii)组合物(例如在干燥形式)中的瓜氨酸氨基酸实体的重量％高于肉碱氨基酸实体的重量％，例如组合物(例如在干燥形式)中的瓜氨酸氨基酸实体的重量％比肉碱氨基酸实体的重量％高出至少50％，例如瓜氨酸氨基酸实体的重量％比肉碱氨基酸实体的重量％高出至少60％、65％、70％、75％或80％；

(iii)组合物(例如在干燥形式)中的谷氨酰胺氨基酸实体的重量％高于瓜氨酸氨基酸实体的重量％，例如组合物(例如在干燥形式)中的谷氨酰胺氨基酸实体的重量％比瓜氨酸氨基酸实体的重量％高出至少40％，例如谷氨酰胺氨基酸实体的重量％比瓜氨酸氨基酸实体的重量％高出至少60％、45％、50％、55％、60％或65％；或

(iv)组合物(例如在干燥形式)中的瓜氨酸氨基酸实体及精氨酸氨基酸实体的组合的重量％高于谷氨酰胺氨基酸实体的重量％，例如组合物(例如在干燥形式)中的瓜氨酸氨基酸实体的重量％比肉碱氨基酸实体的重量％高出至少20％，例如瓜氨酸氨基酸实体的重量％比肉碱氨基酸实体的重量％高出至少30％、35％、40％、45％或50％。

在一些实施例中，组合物进一步包含以下中的一种、两种或三种：(f)亮氨酸氨基酸实体，(g)丝氨酸氨基酸实体，(h)缬氨酸氨基酸实体，(i)组氨酸氨基酸实体，或(j)赖氨酸氨基酸实体。

在一些实施例中，组合物包含：

a)精氨酸氨基酸实体，其选自：

i)L-精氨酸或其盐，

ii)包含L-精氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐，

iii)肌酸或其盐，或

v)包含肌酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；

b)瓜氨酸氨基酸实体，其为L-瓜氨酸或其盐或包含L-瓜氨酸的二肽或其盐，或三肽或其盐；及

c)NAC实体，其为NAC或其盐或包含NAC的二肽或其盐；

d)肉碱实体，其为L-肉碱或其盐，或包含L-肉碱的二肽或其盐；及

e)谷氨酰胺氨基酸实体，其为L-谷氨酰胺或其盐或包含L-谷氨酰胺的二肽或其盐，或三肽或其盐。

附图说明

图1展示在存在及不存在叔丁基过氧化氢及用载体或氨基酸进行的预处理的情况下，在全血(供体1)的离体氧化后的RBC变形性概况。

图2A展示在递增的PGDBP掺合时间(0、4、8、12、16及20分钟)下采集的NIR谱图的比对。

图2B为展示来自20分钟PGDBP(图1A的PGDBP)掺合时间的4种随机样本中的氨基酸的平均量及标准差的图。

图3示意性展示特征在于向患有镰状细胞疾病的对象施用氨基酸组合物的临床研究的设计。

具体实施方式

红细胞(RBC)的物理及代谢功能异常可促进几乎每个器官系统中的急性及慢性并发症，诸如在血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)中。RBC功能异常及溶解可促进多种临床后遗症，诸如血管阻塞、器官衰竭及感染。RBC功能异常的特征可在于细胞镰状化、氧化应激、脱水及黏着至内皮，其可使RBC经由微血管的传递复杂化。慢性并发症可由终生贫血及进入成人期的累积性器官损伤引起，且可伴有急性事件，诸如血管阻塞及突发性器官衰竭。

镰状细胞疾病(SCD)描述一组严重的血液病症，其在美国影响约85,000名成年人及15,000名儿童，且在全世界影响440万个体。作为SCD的标志的镰状红细胞仅展示由血液及血管系统的正常功能紊乱引起的复杂及多因子病理生理学的一小部分。当前护理手段在范畴及作用程度方面皆有限，仍具有未满足的对有助于缓解由血液及血管功能异常引起的多方面并发症的药剂的需求。

本发明的组合物经设计以靶向与重要系统(血管、RBC)相关的多个通路(血液产生及完整性、血管功能以及血浆及RBC氨基酸不平衡)，以维持血液健康及功能。

本文中所揭示的组合物中的氨基酸实体及氨基酸实体的相对量已经优化例如以在需要协调多种生物学、细胞及分子过程的对象中[1]降低血管黏着，[2]缓解血管发炎的呈现，[3]保护对红细胞(RBC)变形性及功能的损害，及减少与SCD相关的并发症(例如溶血、血管黏着、血管发炎、血管功能降低、急性及慢性器官衰竭)。不受任何理论约束，应理解，本发明的组合物可重新编码[1]RBC刚性及脆弱性，[2]溶血，[3]血管黏着，[4]血管发炎及[5]血管功能异常的无序多因子生物学。

本文中所描述的组合物提供一种多模式及组合型方法，其用于改善红细胞功能异常、溶血(例如包括贫血、慢性缺氧、氧化应激、一氧化氮耗尽及/或血管功能异常)、血管阻塞(例如包括缺血性损伤、发炎、凝血及/或急性器官损伤)、改变造血及/或镰状细胞疾病病理生理学。在一些实施例中，施用组合物可引起改善的血管张力、血管扩张及/或血管阻塞(例如改善的NO可用性、NO依赖性内皮功能及/或血压)。在一些实施例中，施用组合物可引起改善的RBC变形性、溶血降低及/或血管发炎降低(例如通过谷胱甘肽(例如血浆或RBC谷胱甘肽)的含量、氧化应激标记物、溶血性标记物、细胞介素及/或黏着标记物所测定)。在一些实施例中，施用组合物可引起蛋白质合成增加及/或血色素的蛋白质性受质增加，以支持血红素合成。在一些实施例中，施用组合物可引起改善的造血及/或改善的红细胞群(例如改善的网状红血球、血色素、胚胎血色素及/或密集或不可逆的镰状细胞)。本文中所描述的组合物经优化以在对象，例如患有血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)的对象中靶向以下中的一种、两种或三种：(i)恢复血浆精氨酸及一氧化氮以改善血管损伤；(i i)改善红细胞、血浆及全部系统中的抗氧化剂防御；或(i i i)对造血需求增加的合成代谢及能量支持。

在一些实施例中，组合物(例如活性部分)能够改善NO介导的血管功能、蛋白质合成、细胞能量、发炎或血红素合成中的一种、两种、三种、四种或更多种(例如全部)。在一些实施例中，组合物能够恢复NO依赖性内皮功能、降低血管阻塞事件的风险、改善血管健康、减少溶血及/或降低氧化应激。在一些实施例中，组合物能够提供增加的用于NO合成的精氨酸生物可用性。在一些实施例中，组合物能够增加RBC转化、蛋白质合成(例如血色素合成，例如在造血祖细胞及/或网状红血球中)及/或血红素合成。在一些实施例中，组合物能够提供用于高增殖性细胞(例如造血前驱体及/或免疫细胞)的能量支持。

本文中部分描述包含氨基酸实体的组合物(活性部分)及通过施用有效量的组合物来改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)的方法：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎。可施用组合物以治疗有需要的对象中的血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)。已谨慎选择组合物中的氨基酸实体及氨基酸实体的相对量，例如以改善需要协调多种生物学、细胞及分子过程的对象(例如患有血色素异常(例如SCD)或地中海型贫血的对象)中的红血球及/或血色素功能、转化或合成。组合物对血色素异常或地中海型贫血的系统级病变实现多通路有利作用。特别地，组合物经特定定制以治疗氧化应激、血管疾病、发炎以及红血球及血色素的增加的转化、合成及功能异常。

复杂的疾病，诸如血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)，影响多个生物学通路。健康损伤可为无法维持或支持代谢通路及功能的直接结果。因此，恢复稳衡及保持健康需要多因子方法。本文中所描述的组合物为用于解决代谢失调的全系统影响以支持及维持稳衡的介入性候选物，该稳衡帮助支持身体的正常结构及功能。

本文中所描述的组合物经优化以直接及同时靶向复杂疾病(例如患有血色素异常(例如SCD)或地中海型贫血的对象)及整体健康中涉及的多个代谢通路。组合物中的氨基酸实体中的每一种的不同比率经设计以靶向及最大化组合物在调节多种代谢功能(例如以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种))中的基本作用。特别地，本文中所描述的组合物可支持及维持血液健康，其对于整个身体的多种代谢功能为重要的。本文中所描述的组合物经设计以靶向多个生物学通路，目的是支持血液的正常结构及功能。特别地，施用本文中所描述的组合物可改善及/或治疗以下中的一种、两种、三种或更多种：血液产量降低、血液完整性降低、血浆及/或RBC氨基酸不平衡、血管健康降低或发炎，例如在患有血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)的对象中。在一些实施例中，向对象施用组合物改善或维持以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种：(a)在造血需求期间血细胞的增殖及/或成熟；(b)针对脱水的RBC形式及/或功能；(c)刚性；(d)氧传送；(e)用于支持RBC代谢的氨基酸平衡(例如用于谷胱甘肽及一氧化氮合成的受质)；(f)产生ROS；(g)向周边组织递送氨基酸；(h)针对血管黏着的防御；(i)发炎；或(j)稳定。

定义

除非另外说明，否则在权利要求及说明书中所用的术语定义如下。

必须指出，除非上下文另外清楚指定，否则如本说明书及随附权利要求中所使用的单数形式“一(a)”、“一(an)”及“该”包括复数个指示物。

如本文中所使用，术语“氨基酸实体”是指呈游离形式或盐形式(或其两者)的左(L)-氨基酸，小于20个氨基酸残基的肽(例如寡肽，例如二肽或三肽)中的L-氨基酸残基、氨基酸的衍生物、氨基酸的前驱体或氨基酸的代谢物(参见例如表1)。氨基酸实体包括能够实现游离L-氨基酸的生物学功能性的氨基酸的衍生物、氨基酸的前驱体、氨基酸的代谢物或氨基酸的盐形式。氨基酸实体不包括天然存在的具有超过20个氨基酸残基的多肽或蛋白质，无论完全或经修饰的形式，例如水解形式。

氨基酸的盐包括任何可摄取的盐。对于药物组合物，存在于组合物(例如活性部分)中的氨基酸的盐形式应为药学上可接受的盐。在特定实施例中，盐形式为氨基酸的盐酸盐(HCl)盐形式。

在一些实施例中，氨基酸实体的衍生物包含氨基酸酯(例如烷基酯，例如氨基酸实体的乙酯或甲酯)或酮酸。

表1.氨基酸实体包括本文中所描述的组合物的氨基酸、前驱体、代谢物及衍生物。

“约”及“近似”通常应是指鉴于测量值的性质或精确度，所测量的量的可接受的误差程度。示例性误差程度在既定值或值范围的百分(％)的15以内，典型地在10％以内，且更典型地在5％以内。

“氨基酸”是指具有氨基(-NH

如本文中所使用，术语“活性部分”是指两种或更多种氨基酸实体的呈聚集物形式的组合，该两种或更多种氨基酸实体能够具有如本文中所描述的生物学或治疗性作用，例如对红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；或血管功能的作用。举例而言，活性部分可使患有疾病或病症的对象中的代谢功能异常再平衡。本发明的活性部分可含有其他生物活性成分。在一些实施例中，活性部分包含四种或更多种氨基酸实体的既定组合，如下文中详细阐述。在其他实施例中，活性部分由氨基酸实体的既定组合组成，如下文中详细阐述。

个别氨基酸实体以各种量或比率存在于组合物(例如活性部分)中，该量或比率可呈现为以重量(例如克)计的量、彼此以氨基酸实体的重量计的比率、以摩尔计的量、以组合物的重量％计的量、以组合物的摩尔百分比计的量、热量含量、对组合物的热量贡献百分比等。通常，本发明将提供剂型中氨基酸实体的克数、相对于组合物的重量的氨基酸实体的重量百分比，亦即存在于组合物中的所有氨基酸实体及任何其他生物活性成分的重量，或比率。在一些实施例中，组合物(例如活性部分)以药学上可接受的制剂(例如药物产品)形式提供。

如本文中所使用，术语“有效量”是指本发明的组合物，特别地，本发明的药物组合物中本发明的活性剂的量，其足以减少症状及/或改善所治疗的病状(例如提供所需临床反应)。用于组合物中的活性剂的有效量将随所治疗的特定病状、病状严重度、治疗持续时间、并用疗法性质、所使用的特定活性剂、特定药学上可接受的一个或多个赋形剂及/或所利用的一个或多个载剂以及与主治医师的知识及专门知识类似的因素而变化。

本文中所描述的“药物组合物”包含至少一个“活性部分”及药学上可接受的载剂或赋形剂。在一些实施例中，药物组合物用作治疗剂。其他组合物，其无需符合药物标准(GMP；药物级组分)，可用作营养保健品、医疗食品或用作补充剂，其称为“消费者健康组合物”。

如本文中所使用，术语“药学上可接受的”是指在合理医学判断的范畴内，适用于与人类及动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，符合合理的效益/风险比率的氨基酸、材料、赋形剂、组合物及/或剂型。在特定实施例中，“药学上可接受的”是指不含可侦测的内毒素或内毒素含量低于药物产品中可接受的含量。

在特定实施例中，“药学上可接受的”是指一种标准，其由药物行业或由监管药物行业的机构或实体(例如政府或贸易机构或实体)使用以确保一种或多种产品质量参数在药品、药物组合物、治疗或其他治疗剂的可接受范围内。产品质量参数可为由药物行业或由机构或实体(例如政府或贸易机构或实体)监管的任何参数，包括(但不限于)组合物；组合物均匀度；剂量；剂量均匀度；污染物或杂质的存在、不存在及/或含量；及无菌等级(例如微生物的存在、不存在及/或含量)。示例性政府监管机构包括：联邦药品管理局(FederalDrug Administration；FDA)、欧洲药品管理局(European Medicines Agency；EMA)、瑞士药品管理局(SwissMedic)、中国食品药品监督管理局(China Food and DrugAdministration；CFDA)或日本药品医疗器械局(Japanese Pharmaceuticals and MedicalDevices Agency；PMDA)。

术语“药学上可接受的赋形剂”是指药物配方中除活性剂以外的成分，其为生理学上可兼容的。药学上可接受的赋形剂可包括(但不限于)缓冲剂、甜味剂、分散增强剂、调味剂、苦味遮蔽剂、天然色素、人工色素、稳定剂、溶剂或防腐剂。在特定实施例中，药学上可接受的赋形剂包括柠檬酸或卵磷脂中的一种或两种。

如本文中所使用，术语“非氨基酸实体蛋白质组分”是指肽(例如多肽或寡肽)、其片段或降解肽。示例性非氨基酸实体蛋白质组分包括(但不限于)乳清蛋白、卵白蛋白质、大豆蛋白质、酪蛋白、大麻籽蛋白质、豌豆蛋白质、糙米蛋白质或其片段或降解肽。

如本文中所使用，术语“非蛋白质组分”是指组合物中除蛋白质组分以外的任何组分。示例性非蛋白质组分可以包括(但不限于)糖(例如单糖(例如右旋糖、葡萄糖或果糖)、二糖、寡糖或多糖)；脂质(例如含硫脂质(例如α-硫辛酸)、长链三酸甘油酯、ω3脂肪酸(例如EPA、DHA、STA、DPA或ALA)、ω6脂肪酸(GLA、DGLA或LA)、中链三酸甘油酯或中链脂肪酸)；维生素(例如维生素A、维生素E、维生素C、维生素D、维生素B6、维生素B12、生物素或泛酸)；矿物质(锌、硒、铁、铜、叶酸、磷、钾、锰、铬、钙或镁)；或固醇(例如胆固醇)。

若组合物、配方或产品提供所需临床作用，则其为“治疗剂”。所需临床作用可由减轻疾病进程及/或缓解疾病的一种或多种症状证实。

“单位剂量(unit dose/unit dosage)”包含药物产品或满足以下条件的药物产品：呈供出售使用的形式、具有活性及非活性组分(赋形剂)的特定混合物、在特定组态(例如胶囊壳)中及分摊成特定剂量(例如在多个棒状包中)。

如本文中所使用，术语血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血的“治疗(treat/treating/treatment)”是指改善血色素异常或地中海型贫血(例如减缓、抑制或减少血色素异常或地中海型贫血或其至少一种临床症状的发展)；缓解或改善至少一种物理参数，包括患者可能不能辨别的参数；及/或预防或推迟血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血的发作或发展或进程。

如本文中在掺合的情形下所使用，“时间足够”或“足够时间”是指足以实现掺合物及组合物均匀度而不产生杂质或诱导非均质性的时间。

本文中所描述的干燥掺合制剂，例如PGDBP，可调配为“药物组合物”。如本文中所描述的药物组合物包含至少一种氨基酸实体，例如活性部分，及药学上可接受的载剂或赋形剂。在一些实施例中，药物组合物用作治疗剂或医疗食品。在一些实施例中，药物组合物用作营养制剂或补充剂。

如本文中所使用，术语“药物级”是指在合理医学判断的范畴内，适用于与人类及动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，符合合理的效益/风险比率的氨基酸、材料、赋形剂、组合物及/或剂型。在一些实施例中，药物级是指氨基酸、材料或赋形剂符合详细描述测试及接受准则的专论的规格，例如美国药典(United StatesPharmacopeia；USP)、官定处方集(National Formulary；NF)、英国药典(BritishPharmacopeia；BP)、欧洲药典(European Pharmacopeia；EP)或日本药典(JapanesePharmacopeia；JP)的专论。在一些实施例中，药物级的含义包含氨基酸、赋形剂或材料为至少99％纯度。

如本文中所使用，干燥掺合制剂是指实质上不含水的多种氨基酸实体的组合。在一些实施例中，干燥掺合制剂为粉末。在一些实施例中，以重量计，干燥掺合制剂包含小于或等于10、9、8、7、6、5、4、3、2或1％的水。在一些实施例中，干燥掺合制剂包含至少4种氨基酸实体，例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种氨基酸实体。

如本文中所使用，药物级干燥掺合制剂(PGDBP)为符合参考标准(例如一种或多种参考标准)且包含多种药物级氨基酸实体的干燥掺合制剂。PGDBP可调配为药物组合物，例如PGDBP可进一步包含一种或多种赋形剂及/或口服施用组分。在一些实施例中，PGDBP符合的参考标准为组合物均匀度。

如本文中所使用，组合物均匀度为关于组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)的组分的均质性的标准，其包含掺合物均匀度、部分均匀度或其两者。在一些实施例中，若组合中取样点处的组分(例如药物级氨基酸实体、赋形剂或口服施用组分)的量与参考值的差值小于预定量，则组合符合组合物均匀度(例如掺合物均匀度)的标准。在一些实施例中，参考值为组合中第二取样点处的组分的量。在一些实施例中，参考值为存在于组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中的组分(例如药物级氨基酸实体、赋形剂或口服施用组分)的量。

在一些实施例中，其中组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)分成部分，若部分中组分(例如药物级氨基酸实体、赋形剂或口服施用组分)的量与参考值的差值小于预定量，则组合的该部分符合组合物均匀度(例如部分均匀度)的标准。在一些实施例中，参考值为第二部分中组分的量。在一些实施例中，参考值包含N个其他部分中组分的量，其中N为至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100。在一些实施例中，参考值为存在于组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中的组分(例如药物级氨基酸实体、赋形剂或口服施用组分)的量。量可为绝对值(例如质量或重量)或相对值(例如全部组分的百分比)。在一些实施例中，预定量可为例如参考值的20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1％。在一些实施例中，预定量为10％(例如组分的量与参考值的差值小于10％)。

如本文中所使用，分装是指将所有或一部分干燥掺合制剂(例如PGDBP)分成用于向患者或对象施用的部分。由分装产生的部分可在药囊、小瓶或其他容器(例如棒状包)中提供。在一个实施例中，由分装产生的部分为单位剂量的量，例如一个单位剂量或单位剂量的一部分(例如棒状包可包含一半的单位剂量，使得两个棒状包一起使用以提供单一单位剂量)。在一些实施例中，仅PGDBP(例如符合参考标准的PGDBP)经由分装分成部分。在一些实施例中，由分装产生的部分亦符合参考标准。

包含氨基酸实体的组合物(例如活性部分)

如本文中所描述的本发明的组合物(活性部分)包含氨基酸实体，例如表1中展示的氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包含：a)亮氨酸氨基酸实体，b)精氨酸氨基酸实体，c)谷氨酰胺氨基酸实体；d)N-乙酰基半胱氨酸(NAC)实体；及e)甘氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包含：a)亮氨酸氨基酸实体，b)精氨酸氨基酸实体，c)谷氨酰胺氨基酸实体；d)NAC实体；及e)肉碱实体。在一些实施例中，组合物包含：a)亮氨酸氨基酸实体，b)精氨酸氨基酸实体，c)谷氨酰胺氨基酸实体；d)NAC实体；及e)甘氨酸氨基酸实体及肉碱实体。在一些实施例中，组合物进一步包含以下中的一种、两种或更多种(例如全部)：(f)缬氨酸氨基酸实体，(g)组氨酸氨基酸实体，或(h)赖氨酸氨基酸实体。

在一些实施例中，组合物包含：(a)瓜氨酸氨基酸实体或精氨酸氨基酸实体中的一种或两种，及(b)NAC实体。在一些实施例中，组合物进一步包含肉碱实体或谷氨酰胺氨基酸实体中的一种或两种。在一些实施例中，组合物进一步包含以下中的一种、两种、三种、四种或更多种(例如全部)：亮氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体、赖氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体或丝氨酸氨基酸实体。

在某些实施例中，亮氨酸氨基酸实体选自L-亮氨酸、β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)、氧代-亮氨酸(α-酮异己酸(KIC))、异戊酰基-CoA、N-乙酰基-亮氨酸或其组合。

在某些实施例中，精氨酸氨基酸实体选自L-精氨酸、肌酸、精氨基丁二酸、天冬氨酸、谷氨酸、胍丁胺、N-乙酰基-精氨酸或其组合。

在某些实施例中，谷氨酰胺氨基酸实体选自L-谷氨酰胺、谷氨酸、氨甲酰基-P、N-乙酰谷氨酰胺或其组合。

在某些实施例中，NAC-氨基酸实体选自NAC、丝氨酸、乙酰基丝氨酸、胱硫醚、高半胱氨酸、谷胱甘肽或其组合。

在某些实施例中，瓜氨酸氨基酸实体选自L-瓜氨酸、鸟氨酸、氨甲酰基-P、氨甲酰基-P和鸟氨酸、N-羟基-精氨酸、精氨基丁二酸、一氧化氮或其组合。

在某些实施例中，肉碱实体选自L-肉碱、6-N-三甲基赖氨酸、N6-三甲基-3-OH-赖氨酸、乙酰基-L-肉碱、丙酰基-L-肉碱、L-肉碱L-酒石酸或其组合。

在某些实施例中，丝氨酸氨基酸实体选自L-丝氨酸、磷酸丝氨酸、P-羟基丙酮酸、L-甘氨酸、乙酰基丝氨酸、胱硫醚、磷脂酰丝氨酸或其组合。

在某些实施例中，甘氨酸氨基酸实体选自L-甘氨酸、L-丝氨酸、肌氨酸、甜菜碱、二甲基甘氨酸、谷胱甘肽、肌酸或其组合。

在某些实施例中，缬氨酸氨基酸实体选自L-缬氨酸、2-氧代-戊酸、异丁酰基-CoA、N-乙酰基-缬氨酸或其组合。

在某些实施例中，组氨酸氨基酸实体选自L-组氨酸、组氨醇、组氨醛、核糖-5-磷酸、肌肽、组织胺、尿刊酸盐、N-乙酰基-组氨酸或其组合。

在某些实施例中，赖氨酸氨基酸实体选自L-赖氨酸、二氨基庚二酸、天冬氨酸、三甲基赖氨酸、酵母氨酸、N-乙酰基-赖氨酸或其组合。

在一些实施例中，(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)在组合物中呈游离氨基酸形式，例如组合物(例如在干燥形式)中的呈游离氨基酸形式的(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)占氨基酸实体组分或全部组分的总重量的至少42重量％、75重量％、或90重量％。

在一些实施例中，(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)在组合物中呈盐形式，例如组合物中的呈盐形式的(a)-(f)中的一种、两种、三种、四种、五种或更多种(例如全部)占氨基酸实体组分或全部组分的总重量的至少0.01重量％、0.1重量％、0.5重量％、1重量％、5重量％或10重量％或更多。

在一些实施例中，(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)以二肽或三肽的一部分的形式提供，例如以组合物的氨基酸实体组分或全部组分的至少0.01重量％、0.1重量％、0.5重量％、1重量％、5重量％或10重量％或更多的量。

在一些实施例中，(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)在组合物中呈游离氨基酸形式，例如组合物中的呈游离氨基酸形式的(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)占组合物(例如在干燥形式)的总重量的至少42重量％、45重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、97重量％、98重量％或更多。

在一些实施例中，(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)在组合物中呈盐形式，例如组合物中的呈盐形式的(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)占组合物(例如在干燥形式)的总重量的至少0.01重量％、0.1重量％、0.5重量％、1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％或10重量％或更多。

在一些实施例中，(a)-(j)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或更多种(例如全部)以二肽或三肽的一部分的形式提供，例如以组合物的氨基酸实体组分或全部组分的至少0.01重量％、0.1重量％、0.5重量％、1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％或10重量％或更多的量。

在某些实施例中，组合物(例如活性部分)能够使发炎降低或使发炎降低至少60％、75％或90％，如使用IL-6的测定检测，例如在巨噬细胞中，例如使用抗体基检测测定，例如ELISA，例如实施例1中所描述，例如相对于参考组合物(例如载体对照物；包含L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸的氨基酸组合物；包含L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-精氨酸及L-谷氨酰胺的氨基酸组合物；单独的L-精氨酸；单独的L-谷氨酰胺；单独的L-亮氨酸；或单独的L-缬氨酸)。

在某些实施例中，组合物(例如活性部分)能够使发炎降低或使发炎降低至少60％、75％或90％，如使用TNFα的测定检测，例如在巨噬细胞中，例如使用抗体基检测测定，例如ELISA，例如实施例1中所描述，例如相对于参考组合物(例如载体对照物；包含L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸的氨基酸组合物；包含L-精氨酸、L-谷氨酰胺及NAC的氨基酸组合物；包含L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸、L-精氨酸及L-谷氨酰胺的氨基酸组合物；缬氨酸；谷氨酰胺；精氨酸；异亮氨酸；亮氨酸；或NAC)。

i.量

示例性组合物(例如活性部分)可包括1.2g亮氨酸氨基酸实体；1.5g精氨酸氨基酸实体；3.67g谷氨酰胺氨基酸实体；0.4g NAC实体；0.33g肉碱实体；0.9g甘氨酸氨基酸实体；0.6g缬氨酸氨基酸实体；0.6g组氨酸氨基酸实体；及0.6g赖氨酸氨基酸实体(参见例如表2中的每剂量的克数)。示例性组合物可包括0.6g亮氨酸氨基酸实体；0.75g精氨酸氨基酸实体；1.83g谷氨酰胺氨基酸实体；0.2g NAC实体；0.17g肉碱实体；0.45g甘氨酸氨基酸实体；0.3g缬氨酸氨基酸实体；0.3g组氨酸氨基酸实体；及0.3g赖氨酸氨基酸实体。

表2.包含氨基酸的示例性组合物(例如活性部分)。

在一些实施例中，组合物包括1.2g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体；1.5g+/-20％的精氨酸氨基酸实体；3.67g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.4g NAC实体；0.33g+/-20％的肉碱实体；0.9g+/-20％的甘氨酸氨基酸实体；0.6g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体；0.6g+/-20％的组氨酸氨基酸实体；及0.6g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包括1.2g+/-15％的亮氨酸氨基酸实体；1.5g+/-15％的精氨酸氨基酸实体；3.67g+/-15％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.4g NAC实体；0.33g+/-15％的肉碱实体；0.9g+/-15％的甘氨酸氨基酸实体；0.6g+/-15％的缬氨酸氨基酸实体；0.6g+/-15％的组氨酸氨基酸实体；及0.6g+/-15％的赖氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包括1.2g+/-10％的亮氨酸氨基酸实体；1.5g+/-10％的精氨酸氨基酸实体；3.67g+/-10％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.4g NAC实体；0.33g+/-10％的肉碱实体；0.9g+/-10％的甘氨酸氨基酸实体；0.6g+/-10％的缬氨酸氨基酸实体；0.6g+/-10％的组氨酸氨基酸实体；及0.6g+/-10％的赖氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包括1.2g+/-5％的亮氨酸氨基酸实体；1.5g+/-5％的精氨酸氨基酸实体；3.67g+/-5％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.4g NAC实体；0.33g+/-5％的肉碱实体；0.9g+/-5％的甘氨酸氨基酸实体；0.6g+/-5％的缬氨酸氨基酸实体；0.6g+/-5％的组氨酸氨基酸实体；及0.6g+/-5％的赖氨酸氨基酸实体。

在一些实施例中，组合物包括0.6g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体；0.75g+/-20％的精氨酸氨基酸实体；1.83g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.2g+/-20％的NAC实体；0.17g+/-20％的肉碱实体；0.45g+/-20％的甘氨酸氨基酸实体；0.3g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体；0.3g+/-20％的组氨酸氨基酸实体；及0.3g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包括0.6g+/-15％的亮氨酸氨基酸实体；0.75g+/-15％的精氨酸氨基酸实体；1.83g+/-15％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.2g+/-15％的NAC实体；0.17g+/-15％的肉碱实体；0.45g+/-15％的甘氨酸氨基酸实体；0.3g+/-15％的缬氨酸氨基酸实体；0.3g+/-15％的组氨酸氨基酸实体；及0.3g+/-15％的赖氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包括0.6g+/-10％的亮氨酸氨基酸实体；0.75g+/-10％的精氨酸氨基酸实体；1.83g+/-10％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.2g+/-10％的NAC实体；0.17g+/-10％的肉碱实体；0.45g+/-10％的甘氨酸氨基酸实体；0.3g+/-10％的缬氨酸氨基酸实体；0.3g+/-10％的组氨酸氨基酸实体；及0.3g+/-10％的赖氨酸氨基酸实体。在一些实施例中，组合物包括0.6g+/-5％的亮氨酸氨基酸实体；0.75g+/-5％的精氨酸氨基酸实体；1.83g+/-5％的谷氨酰胺氨基酸实体；0.2g+/-5％的NAC实体；0.17g+/-5％的肉碱实体；0.45g+/-5％的甘氨酸氨基酸实体；0.3g+/-5％的缬氨酸氨基酸实体；0.3g+/-5％的组氨酸氨基酸实体；及0.3g+/-5％的赖氨酸氨基酸实体。

ii.比率

示例性组合物可包括3.6:4.5:11:1.2的重量(wt.)比率的亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及NAC实体。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及NAC实体的重量比率为3.6+/-15％:4.5+/-15％:11+/-15％:1.2+/-15％。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及NAC实体的重量比率为3.6+/-10％:4.5+/-10％:11+/-10％:1.2+/-10％。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及NAC实体的重量比率为3.6+/-5％:4.5+/-5％:11+/-5％:1.2+/-5％。

示例性组合物可包括亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体及甘氨酸氨基酸实体的重量(wt.)比率为3.6:4.5:11:1.2:1:2.7。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体及甘氨酸氨基酸实体的重量比率为3.6+/-15％:4.5+/-15％:11+/-15％:1.2+/-15％:1+/-15％:2.7+/-15％。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体及甘氨酸氨基酸实体的重量比率为3.6+/-10％:4.5+/-10％:11+/-10％:1.2+/-10％:1+/-10％:2.7+/-10％。在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体及甘氨酸氨基酸实体的重量比率为3.6+/-5％:4.5+/-5％:11+/-5％:1.2+/-5％:1+/-5％:2.7+/-5％。

iii.氨基酸实体的关系

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及NAC实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少40重量％、50重量％或60重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的80重量％。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体及甘氨酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少50重量％、60重量％或70重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的95重量％。

在一些实施例中，NAC实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少2重量％、3重量％或4重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的10重量％。

在一些实施例中，谷氨酰胺氨基酸实体以比组合物(例如在干燥形式)中的任何其他氨基酸实体、非氨基酸实体蛋白质组分或非蛋白质组分中的一种、两种或更多种(例如全部)更大的重量％存在。在一些实施例中，谷氨酰胺氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少20重量％、30重量％或35重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的70重量％。

在一些实施例中，肉碱实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％或3重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的10重量％。

在一些实施例中，甘氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少3重量％、5重量％或7重量％，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的20重量％。

在一些实施例中，组合物(例如在干燥形式)中的谷氨酰胺氨基酸实体的重量％高于亮氨酸氨基酸实体的重量％，例如组合物(例如在干燥形式)中的谷氨酰胺氨基酸实体的重量％比亮氨酸氨基酸实体的重量％高出至少30％，例如谷氨酰胺氨基酸实体的重量％比亮氨酸氨基酸实体的重量％高出至少40％、50％或60％。

在一些实施例中，组合物(例如在干燥形式)中的谷氨酰胺氨基酸实体的重量％高于精氨酸氨基酸实体的重量％，例如组合物(例如在干燥形式)中的谷氨酰胺氨基酸实体的重量％比精氨酸氨基酸实体的重量％高出至少25％，例如谷氨酰胺氨基酸实体的重量％比精氨酸氨基酸实体的重量％高出至少35％、45％或55％。

在一些实施例中，组合物(例如在干燥形式)中的甘氨酸氨基酸实体的重量％高于肉碱实体的重量％，例如组合物(例如在干燥形式)中的甘氨酸氨基酸实体的重量％比肉碱实体的重量％高出至少30％，例如甘氨酸氨基酸实体的重量％比肉碱实体的重量％高出至少40％、50％或60％。

iv.组合物中不包括或有限制的氨基酸分子

在一些实施例中，组合物不包含选自或来源于以下中的一种、两种、三种、四种、五种或更多种(例如全部)的长度超过20个氨基酸残基的肽(例如蛋白补充剂)：卵白蛋白、大豆蛋白、酪蛋白、大麻蛋白、豌豆蛋白或糙米蛋白，或若存在该肽，则该肽的含量低于组合物(例如在干燥形式)中的非氨基酸实体蛋白质组分或全部组分的总重量的10重量(wt.)％、5重量％、1重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％。

在一些实施例中，组合物包含3至18、3至16或3至14个不同氨基酸实体的组合，例如该组合占组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的总重量％的至少42重量％、75重量％或90重量％。

在一些实施例中，二肽或其盐或三肽或其盐的含量低于组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的总重量的10重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分的总克数的至少50％、60％、70％或更多是来自(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)。

在一些实施例中，来自组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的热量的至少50％、60％、70％或更多是来自(a)-(h)中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种(例如全部)。

在一些实施例中，组合物中不存在色氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(例如在干燥形式)总重量的10重量％、9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。在一些实施例中，色氨酸(若存在)以游离形式存在。在一些实施例中，色氨酸(若存在)以盐形式存在。在一些实施例中，色氨酸(若存在)可存在于寡肽、多肽或蛋白质中，其限制条件为蛋白质不为乳清、酪蛋白、乳白蛋白或任何其他用作营养补充剂、医疗食品或类似产品的蛋白质(无论是否以完整蛋白质或蛋白质水解产物形式存在)。在一些实施例中，组合物中不存在甲硫氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。在一些实施例中，组合物中不存在脯氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。在一些实施例中，组合物中不存在甲硫氨酸、脯氨酸或色氨酸中的一种、两种或三种，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在碳水化合物(例如右旋糖、麦芽右旋糖、蔗糖、糊精、果糖、半乳糖、葡萄糖、糖原、高果糖玉米糊浆、蜂蜜、肌醇、转化糖、乳糖、左旋糖、麦芽糖、糖蜜、甘蔗或木糖中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种或18种)，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在维生素(例如维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、维生素C或维生素D中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种)，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在硝酸盐或亚硝酸盐中的一种或两种，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在4-羟基异亮氨酸，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在益生菌(例如芽孢杆菌(Bacillus)益生菌)，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在乙酸苯酯，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在明胶(例如明胶胶囊)，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

在一些实施例中，组合物中不存在S-烯丙基半胱氨酸、S-烯丙基巯基半胱氨酸或果糖基-精氨酸中的一种、两种或三种，或若存在，则其含量低于例如组合物(在干燥形式)的总重量的10重量％、5重量％、1重量％、0.5重量％、0.1重量％、0.05重量％、0.01重量％、0.001重量％或更少量。

v.量及比率

示例性组合物(例如活性部分)可包括0.6g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、1.4g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、1.5g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.26g+/-20％的NAC实体、0.2g+/-20％的肉碱实体、0.75g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.3g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.3g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.3g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及0.9g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表3中每天施用两次的5个棒状包中的每个棒状包的克数)。

表3.包含氨基酸的示例性组合物(例如活性部分)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括0.75g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、1.75g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、1.875g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.325g+/-20％的NAC实体、0.25g+/-20％的肉碱实体、0.9375g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.375g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.375g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.375g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及1.125g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表3中每天施用两次的4个棒状包中的每个棒状包的克数)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括1g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、2.33g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、2.5g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.43g+/-20％的NAC实体、0.33g+/-20％的肉碱实体、1.25g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.5g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.5g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.5g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及1.5g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表3中每天施用两次的3个棒状包中的每个棒状包的克数)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括3g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、7g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、7.5g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、1.3g+/-20％的NAC实体、1g+/-20％的肉碱实体、3.75g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、1.5g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、1.5g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、1.5g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及4.5g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表3中每天施用两次的每剂量的克数)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括6g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、14g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、15g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、2.6g+/-20％的NAC实体、2g+/-20％的肉碱实体、7.5g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、3g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、3g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、3g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及9g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表3中的每天总剂量)。

示例性组合物可包括3+/-15％:7+/-15％:7.5+/-15％:1.3+/-15％:1+/-15％:3.75+/-15％:1.5+/-15％:1.5+/-15％:1.5+/-15％:4.5+/-15％的重量(wt.)比率的亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、丝氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体、赖氨酸氨基酸实体及瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表3中的重量比率)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括0.35g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、0.8g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、1g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.18+/-20％的NAC实体、0.2g+/-20％的肉碱实体、0.43g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.18g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.18g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.18g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及0.52g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4A中每天施用两次的5个棒状包中的每个棒状包的克数)。

表4A.包含氨基酸的示例性组合物(例如活性部分)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括0.44g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、1g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、1.25g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.23g+/-20％的NAC实体、0.25g+/-20％的肉碱实体、0.54g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.23g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.23g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.23g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及0.65g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4A中每天施用两次的4个棒状包中的每个棒状包的克数)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括0.58g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、1.33g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、1.67g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.3g+/-20％的NAC实体、0.33g+/-20％的肉碱实体、0.72g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.3g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.3g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.3g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及0.87g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4A中每天施用两次的3个棒状包中的每个棒状包的克数)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括1.75g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、4g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、5g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、0.9g+/-20％的NAC实体、1g+/-20％的肉碱实体、2.15g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、0.9g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、0.9g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、0.9g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及2.6g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4A中每剂量的克数)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括3.5g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、8g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、10g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、1.8g+/-20％的NAC实体、2g+/-20％的肉碱实体、4.3g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、1.8g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、1.8g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、1.8g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及5.2g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4A中的每天总剂量)。

示例性组合物可包括1.94+/-15％:4.44+/-15％:5.56+/-15％:1+/-15％:1.11+/-15％:2.39+/-15％:1+/-15％:1+/-15％:1+/-15％:2.89+/-15％的重量(wt.)比率的亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、丝氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体、赖氨酸氨基酸实体及瓜氨酸氨基酸实体。

表4B.包含氨基酸的示例性组合物(例如活性部分)。

示例性组合物(例如活性部分)可包括3g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、6g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、5g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、1.3g+/-20％的NAC实体、1g+/-20％的肉碱实体、2.5g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、1g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、1g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、1.5g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及4g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4B中每剂量的克数)。示例性组合物(例如活性部分)可包括6g+/-20％的亮氨酸氨基酸实体、12g+/-20％的精氨酸氨基酸实体、10g+/-20％的谷氨酰胺氨基酸实体、2.6g+/-20％的NAC实体、2g+/-20％的肉碱实体、5g+/-20％的丝氨酸氨基酸实体、2g+/-20％的缬氨酸氨基酸实体、2g+/-20％的组氨酸氨基酸实体、3g+/-20％的赖氨酸氨基酸实体及8g+/-20％的瓜氨酸氨基酸实体(参见例如表4B中的每天总剂量)。

示例性组合物可包括3+/-15％:6+/-15％:5+/-15％:1.3+/-15％:1+/-15％:2.5+/-15％:1+/-15％:1+/-15％:1.5+/-15％:4+/-15％的重量(wt.)比率的亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、丝氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体、赖氨酸氨基酸实体及瓜氨酸氨基酸实体。

v.氨基酸实体的关系

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、丝氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体、赖氨酸氨基酸实体及瓜氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％、97重量％、98重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、丝氨酸氨基酸实体及瓜氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、76重量％、77重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体及丝氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少40重量％、45重量％、50重量％、55重量％、60重量％、61重量％、62重量％、63重量％、65重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、丝氨酸氨基酸实体、瓜氨酸氨基酸及肉碱实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、81重量％、82重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体、瓜氨酸氨基酸及谷氨酰胺氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少50重量％、55重量％、60重量％、61重量％、62重量％、63重量％、64重量％、65重量％、66重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体及谷氨酰胺氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少30重量％、35重量％、40重量％、45重量％、50重量％、51重量％、52重量％、53重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体的重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的NAC实体、肉碱实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体或赖氨酸氨基酸实体中的一种、两种、三种、四种或五种的重量％，例如高出至少50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、71重量％、72重量％、73重量％、74重量％、75重量％或更高。

在一些实施例中，精氨酸氨基酸实体或谷氨酰胺氨基酸实体(单独或呈组合形式)的重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的亮氨酸氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体或赖氨酸氨基酸实体中的一种、两种、三种、四种、五种或六种的重量％，例如高出至少50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％或更高。

在一些实施例中，NAC实体的重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的肉碱实体的重量％，例如高出至少5重量％、10重量％、15重量％、20重量％、25重量％、25重量％、28重量％、29重量％、30重量％或更高。

在一些实施例中，肉碱实体的重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的NAC实体的重量％，例如高出至少2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％或更高。

在一些实施例中，瓜氨酸氨基酸或丝氨酸氨基酸(单独或呈组合形式)的重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的亮氨酸氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体或赖氨酸氨基酸实体中的一种、两种、三种、四种、五种或六种的重量％，例如高出至少5重量％、10重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％、20重量％、21重量％、22重量％或更高。

在一些实施例中，呈组合形式的缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体及赖氨酸氨基酸实体的重量％高于组合物(例如在干燥形式)中的亮氨酸氨基酸实体、NAC实体或肉碱实体中的一种、两种或三种的重量％，例如高出至少20重量％、25重量％、30重量％、35重量％、40重量％、45重量％、47重量％、48重量％、50重量％或更高。

在一些实施例中，呈组合形式的亮氨酸氨基酸实体、精氨酸氨基酸实体及谷氨酰胺氨基酸实体的重量％高于NAC实体、肉碱实体、丝氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体、赖氨酸氨基酸实体或瓜氨酸氨基酸实体中的一种、两种、三种、四种、五种、六种或七种的重量％，例如高出至少30重量％、35重量％、40重量％、45重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％或更高。

在一些实施例中，呈组合形式的精氨酸氨基酸实体及瓜氨酸氨基酸实体的重量％高于亮氨酸氨基酸实体、谷氨酰胺氨基酸实体、NAC实体、肉碱实体、丝氨酸氨基酸实体、缬氨酸氨基酸实体、组氨酸氨基酸实体或赖氨酸氨基酸实体中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或八种的重量％，例如高出至少5重量％、10重量％、15重量％、20重量％、25重量％、25重量％、28重量％、29重量％、30重量％或更高。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的40重量％。在某些实施例中，亮氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少9重量％。

在一些实施例中，精氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的60重量％。在一些实施例中，精氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少20重量％。

在一些实施例中，谷氨酰胺氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、10重量％、15重量％、20重量％、21重量％、22重量％、23重量％、24重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的60重量％。

在一些实施例中，NAC实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％、3重量％、4重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的30重量％。

在一些实施例中，肉碱实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％、3重量％、4重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的30重量％。

在一些实施例中，丝氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的50重量％。在一些实施例中，丝氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少11重量％或更高。

在一些实施例中，缬氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％、3重量％、4重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的35重量％。

在一些实施例中，组氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％、3重量％、4重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的35重量％。

在一些实施例中，赖氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％、3重量％、4重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的35重量％。

在一些实施例中，瓜氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的60重量％。

在一些实施例中，亮氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的40重量％。

在一些实施例中，精氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少10重量％、11重量％、12重量％、13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％、20重量％、21重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的60重量％。

在一些实施例中，谷氨酰胺氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、10重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的50重量％。

在一些实施例中，赖氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的35重量％。

在一些实施例中，瓜氨酸氨基酸实体的重量％为组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的至少5重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％、14重量％、15重量％或更高，但不超过组合物(例如在干燥形式)中的氨基酸实体组分或全部组分的60重量％。

用途，例如治疗方法

本公开提供一种用于改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)的方法：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎，该方法包含向有需要的对象施用有效量的本文中所揭示的组合物(活性部分)。可根据本文中所描述的剂量方案施用组合物以改善对象(例如人类)中的以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎。

本公开提供一种用于在对象中治疗血色素异常或地中海型贫血中的一种或两种或预防血色素异常或地中海型贫血的一种或多种症状的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所揭示的组合物(例如活性部分)。可根据本文中所描述的剂量方案施用组合物以治疗对象(例如人类)中的血色素异常或地中海型贫血及/或预防血色素异常或地中海型贫血的一种或多种症状。

在一些实施例中，对象已诊断患有血色素异常或地中海型贫血。在一些实施例中，对象尚未诊断患有血色素异常或地中海型贫血。在一些实施例中，对象为人类(例如儿童对象或成年人对象)。

在一些实施例中，对象为婴儿、儿童、青年或成年人。在某些实施例中，对象为青年，例如对象为12+/-20％周岁至16+/-20％周岁。在某些实施例中，对象的体重为40kg+/-20％至60kg+/-20％。在某些实施例中，对象的体重高于60kg+/-20％。

在一些实施例中，对象尚未接受用本文中所描述的组合物进行的先前治疗(例如初次治疗的对象(

在一些实施例中，本文中所描述的组合物(活性部分)适用作用于改善对象(例如患有血色素异常或地中海型贫血的对象)中的以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种(例如全部)：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；或血管功能的药物的用途。在一些实施例中，组合物适用作用于治疗(例如逆转、减少或改善)对象中的血色素异常或地中海型贫血的药物的用途。在一些实施例中，组合物适用作用于预防对象中的血色素异常或地中海型贫血的一种或多种症状的药物的用途。

在一些实施例中，本文中所描述的组合物(活性部分)用于制造用于改善对象(例如患有血色素异常或地中海型贫血的对象)中的以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种(例如全部)：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；或血管功能的药物、补充剂、医疗食品或功能性食品的用途。在一些实施例中，组合物(例如活性部分)用于制造用于治疗(例如逆转、减少或改善)对象中的血色素异常或地中海型贫血的药物、补充剂、医疗食品或功能性食品的用途。在一些实施例中，组合物(例如活性部分)用于制造用于预防对象中的血色素异常或地中海型贫血的一种或多种症状的药物的用途。

在一些实施例中，对象具有罹患血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血的风险。在某些实施例中，对象具有HBB基因中的突变。

在一个实施例中，血色素异常为β-血色素异常。在另一实施例中，血色素异常为α-血色素异常。

在一些实施例中，对象呈现选自以下的一种或多种与血色素异常相关的症状：贫血、组织缺氧、器官功能异常、血管阻塞性危机(vaso-occlusive crisis)、血容比值(hematocrit value)异常、无效红细胞生成、网状红血球(reticulocyte)计数异常、铁负荷(iron load)异常、存在环状含铁胚血球(ring sideroblast)、脾肿大(splenomegaly)、肝肿大(hepatomegaly)、外周血液流动减弱、呼吸困难(dyspnea)、溶血增加、黄疸(jaundice)、贫血性疼痛危机(anemic pain crisis)、急性胸腔综合征(acute chestsyndrome)、脾隔离症(splenic sequestration)、异常勃起(priapism)、中风、手-足综合征(hand-foot syndrome)、疼痛(例如心绞痛(angina pectoris))或其组合。施用本文中所描述的组合物可有效治疗与血色素异常或地中海型贫血相关的症状中的一种或多种。

在一些实施例中，血色素异常为镰状细胞疾病，例如选自以下的镰状细胞疾病：镰状细胞贫血(HbSS)、血色素SC疾病(HbSC)、镰状β

在一些实施例中，对象呈现一种或多种选自以下的与镰状细胞疾病相关的症状：溶血、黄疸、胆石症(cholelithiasis)、再生障碍性危机(aplastic crisis)、溶血性危机(hemolytic crisis)、血管阻塞疾病(其引起指炎(dactylitis))、自体脾脏移除(autosplenectomy)、急性胸腔综合征、中风性异常勃起(stroke priapism)、肾乳头状坏死(renal papillary necrosis)、梗死危机(infarctive crisis)、隔离危机(sequestrationcrisis)、腿部溃疡或其组合。施用本文中所描述的组合物可有效治疗与镰状细胞疾病相关的症状中的一种或多种。

在一些实施例中，地中海型贫血为α-地中海型贫血、β-地中海型贫血、血色素CC疾病或血色素EE疾病。在某些实施例中，β-地中海型贫血选自：轻微/轻型β-地中海型贫血(β/β

在一些实施例中，对象呈现一种或多种选自以下的与β-地中海型贫血相关的症状：溶血、贫血、脾肿大、无效红细胞生成、肝-脾肿大(hepato-splenomegaly)、血液或血清中尿酸过高、腿部溃疡、感染或其组合。施用本文中所描述的组合物可有效治疗与β-地中海型贫血相关的症状中的一种或多种。

剂量方案

可根据本文中所描述的剂量方案施用组合物(例如活性部分)以改善对象中的红血球及/或血色素功能、转化及/或合成；血管功能；发炎；及/或氧化应激，例如减轻或治疗血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血。举例而言，可以每天2g+/-20％g至每天90g+/-20％g的剂量向对象施用组合物保持例如两周、三周、四周、五周、六周、七周、八周、九周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周或更长的治疗期。在某些实施例中，每天三次以40g+/-20％至80g+/-20％的全部氨基酸实体(例如每天59g+/-20％的全部氨基酸实体)的剂量施用组合物。

在某些实施例中，以每天30g+/-20％至80g+/-20％的全部氨基酸实体(例如每天65.1g+/-20％的全部氨基酸实体)的剂量向对象(例如成年人对象)施用组合物。在某些实施例中，每天两次以15g+/-20％至60g+/-20％的全部氨基酸实体(例如32.55g+/-20％的全部氨基酸实体，每天两次)的剂量向对象(例如成年人对象)施用组合物。

在某些实施例中，以每天20g+/-20％至60g+/-20％的全部氨基酸实体(例如每天40.2g+/-20％的全部氨基酸实体)的剂量向对象(例如小儿对象)施用组合物。在某些实施例中，每天两次以10g+/-20％至30g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量(例如20.1g+/-20％的全部氨基酸实体，每天两次)向对象(例如小儿对象)施用组合物。

在一些实施例中，可以单一或多重剂量方案向患有血色素异常(例如镰状细胞疾病)的对象提供组合物。在一些实施例中，每天两次、每天三次、每天四次、每天五次、每天六次、每天七次或更多次施用剂量。在某些实施例中，每天一次、两次或三次施用组合物。在一些实施例中，施用组合物保持至少2天、3天、4天、5天、6天、7天或2周。在一些实施例中，长期施用组合物(例如超过30天，例如31天、40天、50天、60天、3个月、6个月、9个月、一年、两年或三年)。

在一些实施例中，在用餐(例如早餐、午餐或晚餐)之前施用组合物。在其他实施例中，在用餐(例如早餐、午餐或晚餐)时施用组合物。在其他实施例中，在用餐(例如早餐、午餐或晚餐)之后施用组合物。在某些实施例中，组合物与早餐及晚餐一起施用。

可每2小时、每3小时、每4小时、每5小时、每6小时、每7小时、每8小时、每9小时、每10小时、每11小时或每12小时一次施用组合物以改善对象(例如患有血色素异常(例如镰状细胞疾病)的对象)中的红血球功能。

在一些实施例中，组合物包含三个棒状包，例如各棒状包包含33.3％+/-15％的数量的本文中所描述的组合物中所包括的各氨基酸实体。在某些实施例中，每天两次施用三个棒状包。

在一些实施例中，组合物包含五个棒状包，例如各棒状包包含20％+/-15％的数量的本文中所描述的组合物中所包括的各氨基酸实体。在某些实施例中，每天两次施用五个棒状包。

在一些实施例中，组合物包含四个棒状包，例如各棒状包包含25％+/-15％的数量的本文中所描述的组合物中所包括的各氨基酸实体。在某些实施例中，每天两次施用四个棒状包。

在一些实施例中，以约2g+/-20％至80g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量施用组合物，例如每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次或每天六次(例如每天两次)。在一些实施例中，以2g+/-20％至10g+/-20％、20g+/-20％至50g+/-20％或50g+/-20％至80g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量施用组合物，例如每天一次、每天两次或每天三次(例如每天两次)。在某些实施例中，每天两次以20g+/-20％至50g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量施用组合物，例如29g+/-20％的全部氨基酸实体，每天两次。在一些实施例中，以约2g+/-20％至80g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量施用组合物，例如每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次或每天六次(例如每天两次)。在一些实施例中，以10g+/-20％至30g+/-20％、20g+/-20％至60g+/-20％或40g+/-20％至80g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量施用组合物，例如每天一次、每天两次或每天三次(例如每天两次)。在某些实施例中，每天两次以20g+/-20％至60g+/-20％的全部氨基酸实体(例如32.55g+/-20％的全部氨基酸实体，每天两次)的剂量向对象(例如成年人对象)施用组合物。在某些实施例中，每天两次以10g+/-20％至30g+/-20％的全部氨基酸实体的剂量(例如20.1g+/-20％的全部氨基酸实体，每天两次)向对象(例如小儿对象)施用组合物。

在一些实施例中，组合物以包含2g+/-20％至15g+/-20％的氨基酸实体(例如2g+/-20％、3g+/-20％、4g+/-20％、5g+/-20％、6g+/-20％、7g+/-20％、8g+/-20％、9g+/-20％、10g+/-20％、11g+/-20％、12g+/-20％、13g+/-20％、14g+/-20％或15g+/-20％的氨基酸实体)的单位剂型形式存在中。在某些实施例中，组合物以包含6.51g+/-20％的氨基酸实体的单位剂型形式存在。在某些实施例中，组合物以包含8.14g+/-20％的氨基酸实体的单位剂型形式存在。在某些实施例中，组合物以包含10.85g+/-20％的氨基酸实体的单位剂型形式存在。在某些实施例中，组合物以包含4.02g+/-20％的氨基酸实体的单位剂型形式存在。在某些实施例中，组合物以包含5.03g+/-20％的氨基酸实体的单位剂型形式存在。在某些实施例中，组合物以包含6.7g+/-20％的氨基酸实体的单位剂型形式存在。

生产活性部分及药物组合物

本发明的特征在于一种制备或制造前述发明的组合物(例如活性部分)的方法。用于制造组合物的氨基酸实体可聚结及/或速溶以帮助分散及/或溶解。

组合物可使用来自以下来源的氨基酸实体制造，或可使用其他来源：例如FUSI-BCAA

为了生产本发明的组合物，可使用以下一般步骤：可在掺合单元中掺合起始物料(个别氨基酸实体及赋形剂)，接着检验掺合物均匀度及氨基酸实体内含物，及将经掺合的粉末填充至棒状包或其他单位剂型中。棒状包或其他单位剂型的内含物可在用于口服施用时分散于水中。

本发明的食品补充剂及医学营养组合物将呈适用于口服施用的形式。

当将原料(例如药物级氨基酸实体及/或赋形剂)组合成组合物时，组合物中可能存在污染物。当组合物不实质上包含(例如包含小于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.15、0.1、0.05、0.01或0.001％(w/w))污染物时，组合物符合污染等级标准。在一些实施例中，本文中的方法中描述的组合物不包含污染物。污染物包括任何并非有意地存在于组合物中的物质(例如，药物级氨基酸实体及赋形剂，例如口服施用组分可有意地存在)或任何对组合物的产品质量参数具有不利影响(例如对象中的副作用、效能降低、稳定性/存放期降低、褪色、异味、风味不好、质地/口感不好或组合物的组分的分离增加)的物质。在一些实施例中，污染物包括微生物、内毒素、金属或其组合。在一些实施例中，污染等级(例如由组合物的各部分的金属、卵磷脂、胆碱、内毒素、微生物或其他污染物(例如来自原料的污染物)引起)低于食品中准许的等级。

赋形剂

本发明的氨基酸组合物可与一种或多种赋形剂一起混配或调配。适合的赋形剂的非限制性实例包括促味剂、矫味剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、黏合剂、致密剂、润滑剂、分散增强剂、崩解剂、调味剂、甜味剂及着色剂。

在一些实施例中，赋形剂包含缓冲剂。适合的缓冲剂的非限制性实例包括柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸镁、碳酸氢镁、碳酸钙及碳酸氢钙。

在一些实施例中，赋形剂包含防腐剂。适合的防腐剂的非限制性实例包括抗氧化剂，诸如α-生育酚及抗坏血酸，及抗微生物剂，诸如对羟苯甲酸酯、氯丁醇及苯酚。

在一些实施例中，组合物包含黏合剂作为赋形剂。适合的黏合剂的非限制性实例包括淀粉、预胶化淀粉、明胶、聚乙烯吡咯啶酮、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚丙烯酰胺、聚乙烯唑烷酮、聚乙烯醇、C12-C18脂肪酸醇、聚乙二醇、多元醇、糖、寡糖及其组合。

在一些实施例中，组合物包含润滑剂作为赋形剂。适合的润滑剂的非限制性实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、氢化植物油、史提若特、聚氧乙烯单硬脂酸酯、滑石、聚乙二醇、苯甲酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁及轻质矿物油。

在一些实施例中，组合物包含分散增强剂作为赋形剂。适合的分散剂的非限制性实例包括淀粉、海藻酸、聚乙烯吡咯啶酮、瓜尔胶、高岭土、黄原胶、膨润土、纯化木浆纤维素、羟基乙酸淀粉钠、同晶形硅酸盐及微晶纤维素作为高HLB乳化剂表面活性剂。

在一些实施例中，组合物包含崩解剂作为赋形剂。在一些实施例中，崩解剂为非泡腾崩解剂。适合的非泡腾崩解剂的非限制性实例包括淀粉，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、预胶化及其经改质的淀粉；甜味剂；黏土，诸如膨润土；微晶纤维素；海藻酸盐；羟基乙酸淀粉钠；胶类，诸如琼脂、瓜尔胶、刺槐豆胶、刺梧桐树胶(karaya)、果胶及黄蓍胶。在一些实施例中，崩解剂为泡腾崩解剂。适合的泡腾崩解剂的非限制性实例包括碳酸氢钠与柠檬酸的组合，及碳酸氢钠与酒石酸的组合。

在一些实施例中，赋形剂包含调味剂。调味剂可选自合成调味油及调味芳族化合物；天然油；来自植物、叶子、花及果实的提取物；及其组合。在一些实施例中，调味剂选自肉桂油；冬青油；胡椒薄荷油；三叶草油；干草油；大茴香油；桉树；香草；橘皮油，诸如柠檬油、橙油、葡萄及葡萄柚油；及水果香精，包括苹果、桃子、梨、草莓、覆盆子、樱桃、李子、菠萝及杏子。

在一些实施例中，赋形剂包含甜味剂。适合的甜味剂的非限制性实例包括葡萄糖(玉米糖浆)、右旋糖、转化糖、果糖及其混合物(当不用作载剂时)；糖精及其各种盐，诸如钠盐；二肽甜味剂，诸如阿斯巴甜糖(aspartame)；二氢查尔酮(dihydrochalcone)化合物、甘草素；甜菊(Stevia Rebaudiana)(甜菊苷(Stevioside))；蔗糖的氯衍生物，诸如蔗糖素；及糖醇，诸如山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇及其类似物。亦涵盖氢化淀粉水解产物及合成甜味剂3,6-二氢-6-甲基-1,2,3-恶噻嗪-4-酮-2,2-二氧化物，尤其钾盐(乙酰磺氨酸盐K)及其钠及钙盐。

在一些实施例中，组合物包含着色剂。适合的着色剂的非限制性实例包括食品、药物及化妆品色素(FD&C)、药物及化妆品色素(D&C)及外部药物及化妆品色素(Ext.D&C)。着色剂可用作染料或其对应的色淀。

特定赋形剂可包括以下中的一种或多种：柠檬酸、卵磷脂(例如Alcolec F100)、甜味剂(例如蔗糖素、蔗糖素微粉化NF、乙酰磺胺酸钾(例如Ace-K))、分散增强剂(例如黄原胶(例如Ticaxan Rapid-3))、调味剂(例如香草卡士#4306、NatOrange WONF#1326、酸橙865.0032U及柠檬862.2169U)、苦味遮蔽剂(例如936.2160U)及天然或人工色素(例如FD&C黄色6号)。各棒状包的示例性成分内含物展示于表5中。

表5.各棒状包中的成分内含物。

在另一实施例中，赋形剂限于柠檬酸、甜味剂(例如蔗糖素)、黄原胶、香味剂(例如香草卡士#4036)、调味剂(例如Nat orange WONF#1362)及着色剂(例如FD&C黄色6号)，例如赋形剂特定不包括卵磷脂(表6)。

表6.各棒状包中的示例性内含物。

生产干燥掺合制剂

为了生产本发明的干燥掺合制剂，可使用以下一般步骤：可将个别药物级氨基酸实体(及可选地一种或多种赋形剂及/或口服施用组分)组合成组合且经历一种或多种掺合条件(例如掺合及混合)。在一些实施例中，掺合条件持续至组合符合一种或多种参考标准。在一些实施例中，所得PGDBP分成多个部分。在一些实施例中，多个部分中的至少某一百分比的部分亦符合一种或多种参考标准，例如PGDBP符合的参考标准。在一些实施例中，多个部分中的至少某一百分比的部分符合一种或多种参考标准。

在一些实施例中，干燥掺合制剂(例如PGDBP)亦为大规模制剂。如本文中所使用，大规模描述比参考值更大(例如以重量、质量或体积计)的制剂。在一些实施例中，参考值为典型实验(例如非制造)制剂的尺寸。在一些实施例中，参考值为10、11、12、13、14或15kg。在一些实施例中，大规模制剂包含至少25、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000或10000kg。在一些实施例中，大规模制剂包含不超过10000、5000、1000、900、800、700、600、500、400或300kg。在一些实施例中，大规模制剂包含100-500kg、100-400kg、100-300kg、100-200kg、200-300kg、200-400kg、200-500kg、300-400kg、300-500kg、400-500或500-1000kg。

掺合技术

本文中所揭示的方法包含掺合步骤，其掺合及混合药物级氨基酸实体的组合以产生符合参考标准的PGDBP。由本文中所描述的方法使用的掺合条件可利用任何已知的掺合机制或掺合机制的组合。掺合机制包括对流、扩散及剪切。对流掺合利用粒子的整体运动，例如通过在掺合器/混合器内平缓旋转。扩散为粒子的缓慢、被动掺合。剪切掺合沿相同平行平面将一部分粒子的组合朝向一个方向推动，且将另一部分粒子的组合朝向另一个方向推动。由本文中所描述的方法使用的掺合条件可进一步包含使用粒化机或其他仪器调节组合组分(例如药物级氨基酸实体)的粒子的尺寸及/或形状。

在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含对流掺合。在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含扩散掺合。在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含剪切掺合。在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含对流及扩散掺合。在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含对流及剪切掺合。在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含扩散及剪切掺合。在一些实施例中，由本文中所揭示的方法使用的掺合或掺合条件包含对流、扩散及剪切掺合。

由本文中所描述的方法使用的掺合条件可利用任何已知的掺合或混合仪器；掺合或混合仪器可基于一种或多种掺合机制来操作。存在四种主要类型的掺合或混合仪器：对流、漏斗(亦即，重力)、转筒及流体化。在一些实施例中，本文中所描述的方法的掺合条件或掺合步骤可利用一种或多种(例如1、2、3或4种)类型的掺合或混合仪器。在一些实施例中，分批次制备干燥掺合制剂(例如PGDBP)。在一些实施例中，以连续方式制备干燥掺合制剂(例如PGDBP)，例如在不中断掺合或混合的情况下收集掺合/混合制剂。

本文中所揭示的方法的掺合或混合步骤具有足以产生符合参考标准的干燥掺合制剂(例如PGDBP)的持续时间。在一些实施例中，掺合条件的持续时间为至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、75、90、105或120分钟。在一些实施例中，掺合条件的持续时间不超过180、165、150、135、120、105、90、75、60、55、50、45、40、35、30、25或20分钟。在一些实施例中，掺合条件的持续时间为20-90、20-60、20-50、20-40、20-30、30-90、30-60、30-50、30-40、40-90、40-60、40-50、50-90、50-60或60-90分钟。在一些实施例中，掺合条件的持续时间为20-40分钟，例如20分钟、30分钟或40分钟。在一些实施例中，掺合条件的持续时间为充足的，使得掺合及混合不会将非均质性引入(例如通过过度混合)组合或干燥掺合制剂中。在一些实施例中，通过评估是否已符合参考标准来测定掺合条件的持续时间。举例而言，掺合条件可持续直至评估表明已符合参考标准。在其中参考标准为组合物均匀度(例如掺合物均匀度)的一些实施例中，评估是否符合参考标准包含使用近红外线光谱学(NIR)。在一个实施例中，维持掺合条件直至所观测到的NIR谱图表明已符合组合物均匀度(例如掺合物均匀度)的标准。

在一些实施例中，本文中所揭示的方法包含掺合步骤，其中掺合及混合药物级氨基酸实体的组合以产生PGDBP，其中掺合步骤在室温下，例如在15与35℃之间，例如在20与30℃之间，例如在约25℃下进行。在一些实施例中，掺合步骤在低于20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40℃的温度下(且可选地在至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25℃的温度下)进行。在一些实施例中，掺合步骤在约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30℃的温度下进行。

在一些实施例中，本文中所揭示的方法包含掺合步骤，其中掺合及混合药物级氨基酸实体的组合以产生PGDBP，其中掺合步骤包含使用小于10,000、9,000、8,000、7,000、6,000、5,000、4,000、3,000、2,000、1,000、500、250、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10次旋转/分钟(rpm)(及可选地至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90或100rpm)的掺合器或混合器转速(例如掺合器或混合器转子转速)。在一些实施例中，掺合步骤包含使用约20、30、40、50、60、70、80、90或100rpm的掺合器或混合器转速(例如掺合器或混合器转子转速)。在一些实施例中，掺合步骤包含使用在5-50、5-45、5-40、5-35、5-30、5-25、5-20、5-15、5-10、10-50、10-45、10-40、10-35、10-30、10-25、10-20、10-15、15-50、15-45、15-40、15-35、15-30、15-25、15-20、20-50、20-45、20-40、20-35、20-30、20-25、25-50、25-45、25-40、25-35、25-30、30-50、30-45、30-40、30-35、35-50、35-45、35-40、40-50、40-45或45-50rpm之间的掺合器或混合器转速(例如掺合器或混合器转子转速)。

在一些实施例中，该方法进一步包含辊压及/或湿式造粒。在一些实施例中，该方法进一步包含自动填充，例如其合并有直接掺合、辊压或湿式造粒。

在掺合或混合、划分部分或下游处理期间分离组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中不同种类的粒子为符合及保持参考标准(例如组合物均匀度的标准)的障碍。两种或更多种粒子的任何混合物可因分离而受损。可通过若干种机制中的一种或多种进行分离，包括筛分、流体化及粉尘化(例如参见Purutyan,H及Carson,J.W.Predicting,diagnosing,and solving mixture segregation problems.Jenike&Johnson,CSCPublishing,Powder and Bulk Engineering,2013)。

取样及测量

本文中所描述的用于制备符合参考标准的干燥掺合制剂(例如PGDBP)的方法可进一步包含评估是否符合参考标准。在一些实施例中，本文中所描述的方法包含自干燥掺合制剂(例如PGDBP)中的一个或多个取样点获取数值，例如药物级氨基酸实体的量的数值。取样点为干燥掺合制剂(例如PGDBP)内的一个位置，例如以空间及时间方式定义。在一些实施例中，为了获取数值，可以进入取样点。进入取样点可包含对取样点的干燥掺合制剂使用诊断技术。在一些实施例中，进入(例如使用诊断技术)包含停止或暂停掺合或混合或掺合条件以进入取样点。在一些实施例中，进入(例如使用诊断技术)不包含停止或暂停掺合或混合或掺合条件以进入取样点。可通过本领域中已知的方法指定及/或进入取样点。

在一些实施例中，可使用近红外线(NIR)光谱学来分析自组合或干燥掺合制剂(例如PGDBP)的取样点或干燥掺合制剂(例如PGDBP)的部分获取的样本以获取数值(例如关于组合物均匀度，例如掺合物均匀度)。NIR光谱学分析NIR波长范围(780-2500nm)中化合物的吸收光谱。通过分类为两种类型的分子振动产生化合物(例如药物级氨基酸实体)的吸收波峰：谐波及组合。可使用NIR分析包含CH、OH或NH键的化合物。解释NIR谱图的方法为本领域中已知的。在一些实施例中，使用NIR光谱学测定多个取样点处的氨基酸实体的量是否类似，例如是否已符合均质性(例如组合物均匀度，例如掺合物均匀度)的标准。在一些实施例中，该方法进一步包含响应于测定而选择及/或执行步骤，例如选择及使用掺合或混合技术或掺合条件或终止掺合、混合或掺合条件。

在一些实施例中，可使用高效液相层析(HPLC，亦称为高压液相层析)分析自组合或干燥掺合制剂(例如PGDBP)的取样点或干燥掺合制剂(例如PGDBP)的部分获得的样本以获取数值(例如药物级氨基酸实体的量的数值)。

在一些实施例中，可使用液相层析质谱(LC-MS)分析自组合或干燥掺合制剂(例如PGDBP)的取样点或干燥掺合制剂(例如PGDBP)的部分获取的样本。在一些实施例中，使用LC-MS测定存在于取样点处或部分中的药物级氨基酸实体的一致性及/或量。在一些实施例中，使用LC-MS测定干燥掺合制剂是否符合组合物均匀度的标准，例如部分或掺合物均匀度。在一些实施例中，该方法进一步包含响应于所存在的药物级氨基酸实体的一个或多个量而选择及/或执行步骤，例如选择及使用掺合或混合技术或掺合条件或终止掺合、混合或掺合条件。

参考标准

本文中所描述的方法产生干燥掺合制剂，例如PGDBP，其符合一种或多种参考标准。如本文中所使用，参考标准是指由以下使用或制定的标准：

(1)组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)的制造商，例如由政府机构批准销售PGDBP的制造商，或

(2)药物行业或监管药物行业的机构或实体(例如政府或贸易机构或实体)，

以确保一种或多种产品质量参数在药品、药物组合物、治疗或其他治疗剂的可接受的范围内。产品质量参数可为由制造商、药物行业或由机构或实体(例如政府或贸易机构或实体)监管的任何参数，包括(但不限于)组合物；组合物均匀度；剂量；剂量均匀度；污染物或杂质的存在、不存在及/或含量；及无菌等级(例如微生物的存在、不存在及/或含量)。示例性政府监管机构包括：联邦药品管理局(FDA)、欧洲药品管理局(EMA)、瑞士药品管理局、中国食品药品监督管理局(CFDA)或日本药品医疗器械局(PMDA)、加拿大卫生部(HealthCanada)以及药物与保健产品法规管理局(Medicines and Healthcare ProductsRegulatory Agency；MHRA)。产品质量参数亦可为由国家或地区药典或处方集指定的参数，包括美国药典(U.S.Pharmacopeia；USP)、英国药典(British Pharmacopeia；BP)、官定处方集(National Formulary；NF)、欧洲药典(European Pharmacopeia；EP)、日本药典(Japanese Pharmacopeia；JP)或国际药物法规协和会(International Council forHarmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use；ICH)。

一种或多种参考标准可为由药物行业或由监管药物行业的机构或实体(例如政府或贸易机构或实体)使用或颁布，以确保一种或多种产品质量参数在药品、药物组合物、治疗或其他治疗剂的可接受的范围内的标准。一种或多种参考标准可为由组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)的制造商(例如由政府机构批准销售PGDBP的制造商)使用或制定，以确保一种或多种产品质量参数在补充剂、营养制剂、药品、药物组合物、治疗或其他治疗剂的可接受的范围内的标准。产品质量参数可为由制造商或由药物行业或由机构或实体(例如政府或贸易机构或实体)监管的任何参数，包括(但不限于)组合物；组合物均匀度；剂量；剂量均匀度；污染物或杂质的存在、不存在及/或含量；无菌等级(例如微生物的存在、不存在及/或含量)；色彩；或粒子形态(例如尺寸或形状)。

组合物均匀度

在一些实施例中，参考标准为组合物均匀度。组合物均匀度通常为均质性的标准。组合物均匀度可分类为两种不同但相关的均匀度类型：掺合物均匀度及部分均匀度(部分均匀度在本文中可与内含物均匀度及剂量均匀度互换使用)。视用途及上下文而定，组合物均匀度可包含一种或两种类型。组合物均匀度可包含关于一种或多种组分的组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)的均质性的标准。在一些实施例中，符合组合物均匀度的标准的组合在一种、两种、三种、四种或更多种(例如全部)组分(例如药物级氨基酸实体)方面符合标准。

掺合物均匀度

掺合物均匀度是指组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中组分的分布均质性的水平。在一些实施例中，当组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中第一取样点处的组分(例如药物级氨基酸实体)的量与参考值的差值不超过预定量时，符合组合物均匀度(例如掺合物均匀度)的标准。量可为绝对值，例如克数，或相对值，例如重量/重量(例如Y g取样点中的X g组分)。量可为任意值，如在比较吸亮度值与吸亮度值的情况下或在曲线(例如谱图)的统计比较中。在一些实施例中，获取掺合物均匀度的数值包含通过获取组合中第一取样点处的组分的量的数值且将其与参考值进行比较来评估组合物均匀度(例如掺合物均匀度)的标准。

在一些实施例中，使用NIR测定组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中第一取样点处的组分(例如药物级氨基酸实体)的量是否与来自第二或其他取样的差值不超过预定量。使用NIR，可获取取样点的近红外线光谱且与第二或其他取样点(例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及/或第十取样点)的近红外线光谱或已知符合参考标准(例如组合物均匀度(例如掺合物均匀度)的标准)的样本的近红外线光谱进行比较。若该比较表明谱图彼此足够类似，则符合掺合物均匀度的标准。可通过比较取样点的一致性指数来评估NIR谱图的类似性。一致性指数为由所得NIR谱图产生的数值，且所描述的一致性指数的实例不为所有可能的一致性指数的详尽清单。一致性指数可为近红外线范围内的特定波长或波长范围下的吸亮度。一致性指数可为在多个取样点处，在近红外线范围内的特定波长或波长范围下的平均吸亮度的标准差。无论选择哪个数值，一致性指数的关键特征为所进入取样点的一致性指数随掺合/混合时间延长而收敛(在特定波长下的吸亮度的情况下)或降低(在标准差的情况下)。举例而言，可选择一致性指数为近红外线范围内X nm的波长。将在掺合期间的时间点时，在多个取样点处测量在X nm下的吸亮度。随着掺合继续，在各取样点处在X nm下的吸亮度将变得彼此更加类似。

在一些实施例中，参考值为组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中第二取样点或其他取样点(例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及/或第十取样点)处组分的量。第二取样点或其他取样点(例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及/或第十取样点)可为组合中的不同空间位置，举例而言，可自一组预定、分散的空间位置收集样本，例如具有预定取样位点的分层取样计划，例如以获得代表掺合器或混合器中的多个位置的样本。

在一些实施例中，第二取样点为在第一取样点之后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分钟或更长时间。在一些实施例中，在制备干燥掺合制剂(例如PGDBP)的过程期间采用在时间上分隔的多个取样点。在一些实施例中，在时间上分隔的取样点在制备干燥掺合制剂(例如PGDBP)的过程期间间隔，例如每1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分钟。在一些实施例中，将多个取样点彼此进行比较(例如将最近的取样点彼此进行比较)。

在一些实施例中，当第一取样点处组分的量与参考值(例如第二或其他取样点(例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及/或第十取样点)处组分的量)的差值小于或等于1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％(例如10％)时，符合组合物均匀度(掺合物均匀度)的标准。在一些实施例中，当第一取样处组分的量与第二或其他取样点(例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及/或第十取样点)处组分的量的差值不超过10％时，符合组合物均匀度的标准。在一些实施例中，当第一次取样时组分的量与组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中存在的组分的量的差值不超过10％时，符合组合物均匀度的标准。在一些实施例中，当最近取样点处组分的量与下一个最近取样点处组分的量的差值不超过10％时，符合组合物均匀度的标准。取样点处组分的量的数值可包含NIR谱图。第一、第二或其他取样点处组分的量的数值的比较可包含NIR谱图的比较，例如重叠NIR谱图或比较第一、第二或其他取样点的一致性指数。当NIR谱图(例如一致性指数)达到类似性或重叠的临限值时，可符合掺合物均匀度。

部分均匀度

部分均匀度是指与组分(例如药物级氨基酸实体)的量相关的干燥掺合制剂(例如PGDBP)的部分的均质性。在一些实施例中，本文中所描述的方法包含将干燥掺合制剂(例如PGDBP)分成多个部分。在一些实施例中，当第一部分中组分(例如药物级氨基酸实体)的量与参考值的差值不超过预定量时，符合组合物均匀度(例如部分均匀度)的标准。量可为绝对值，例如克数，或相对值，例如重量/重量(例如Y g取样点中的X g组分)。在一些实施例中，使用HPLC测定第一、第二或其他部分(例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十部分)中组分(例如药物级氨基酸实体)的量。

在一些实施例中，参考值为第二部分中组分的量。在一些实施例中，参考值为多个部分(例如多个测试部分)中组分的一个或多个量(例如比较第一部分与多个测试部分)。在一个实施例中，参考值为多个测试部分中组分的平均量或中值量。

在一些实施例中，当多个测试部分中组分(例如药物级氨基酸实体)的量与参考值的差值不超过预定量时，符合组合物均匀度(例如部分均匀度)的标准。量可为绝对值，例如克数，或相对值，例如重量/重量(例如Y g取样点中的X g组分)。在一些实施例中，参考值为多个测试部分中组分的平均量或中值量。

在一些实施例中，参考值为组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中组分的量。举例而言，参考值可为全部组合中组分的整体重量/重量。在一些实施例中，评估是否符合组合物均匀度的标准包含比较第一取样点处组分的相对量(例如Y g取样点中的X g组分)与组合中组分的相对量(例如总共Z g组合中的W g组分)；换言之，评估组合物均匀度的标准可包含比较X/Y与W/Z。

在一个实施例中，干燥掺合制剂(例如PGDBP)的多个部分中的至少X％的部分为测试部分，其中X为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45或50。在一些实施例中，干燥掺合制剂(例如PGDBP)的多个部分中的不超过X％的部分为测试部分，其中X为50、45、40、35、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1。在一个实施例中，测试部分为与参考值比较的部分，例如彼此比较或与干燥掺合制剂(例如PGDBP)中组分的量比较，以测定是否符合参考标准(例如关于组合物均匀度，例如部分均匀度)。在一些实施例中，当至少X％的测试部分中组分的量与参考值的差值不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％时，符合组合物均匀度(例如部分均匀度)的标准，其中X为50、60、70、80、85、90、95、99或100％，且其中参考值选自测试部分中组分的平均量、测试部分中组分的中值量或干燥掺合制剂(例如PGDBP)中组分的量。

在一些实施例中，干燥掺合制剂(例如PGDBP)的部分可为棒状包或其他单位剂型。

污染等级

在一些实施例中，参考标准为污染等级。当将原料(例如药物级氨基酸实体及/或赋形剂)组合成组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)时，组合中可能存在污染物。当组合不实质上包含(例如包含小于10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.15、0.1、0.05、0.01或0.001％(w/w)的)污染物时，组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)符合污染等级的标准。在一些实施例中，组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)包含小于0.15％(w/w)的污染物。在一些实施例中，组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)包含低于食品中容许的含量(例如由本领域中已知的适合的监管组织定义)的污染物含量。在一些实施例中，本文中的方法中描述的组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)不包含污染物。污染物包括任何并非有意地存在于组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)中的物质(例如，药物级氨基酸实体及赋形剂(例如口服施用组分)为有意地存在)或任何对PGDBP的产品质量参数或PGDBP的多个部分具有不希望的不良作用(例如对象中的副作用、效能降低、稳定性/存放期降低、褪色、异味、风味不好、质地/口感不好或PGDBP的组分的分离增加)的物质。在一些实施例中，污染物包括微生物、内毒素、金属(例如重金属)、残余溶剂、原料杂质、可提取物及/或沥滤物。在一些实施例中，组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)包含符合参考标准(例如由本领域技术人员已知或本文中所描述的机构颁布的标准)的污染物含量(例如不实质上包含污染物)。在一些实施例中，组合(例如干燥掺合制剂，例如PGDBP)包含符合ICH的标准(例如新颖药物物质中的ICH Q3A杂质(ICH Q3A Impurities in New Drug Substances)标准)的污染物含量(例如不实质上包含污染物)。

在一些实施例中，本文中所描述的方法进一步包含获取组合或PGDBP中的一种或两种中的取样点处的污染物含量的数值。在一些实施例中，本文中所描述的方法进一步包含获取组合或PGDBP中的一种或两种中或测试部分(例如组合或PGDBP的测试部分)中的多个点中的每一点的污染物含量的数值。在一些实施例中，本文中所描述的方法进一步包含获取多个部分中的一个部分(例如测试部分)中的污染物含量的数值。在一些实施例中，响应于污染物含量的数值，例如及测定符合污染等级的标准，本文中所描述的方法进一步包含选择及执行下游处理步骤，例如将PGDBP分成部分(例如分装)及填充-修整(例如配方(例如与赋形剂一起)、封包及标记)及配送。在一些实施例中，响应于污染物含量的数值，例如及测定不符合污染等级的标准，本文中所描述的方法进一步包含选择及执行不同的下游处理步骤，例如纯化及/或移除污染物或处理部分、多个部分或PGDBP。

膳食组合物

包括氨基酸实体的组合物(例如活性部分)可调配及用作膳食组合物，例如选自医疗食品、功能性食品或补充剂。在此类实施例中，原料及最终产品应符合食物产品的标准。

本文中所揭示的任一方面及实施例的组合物可用作膳食组合物，例如选自医疗食品、功能性食品或补充剂。在一些实施例中，膳食组合物用于包含向对象施用组合物的方法中。组合物可出于改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)的目的而用于膳食组合物中：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎。

在一些实施例中，膳食组合物选自医疗食品、功能性食品或补充剂。在一些实施例中，组合物呈包含本文中所描述的组合物的营养补充剂、膳食调配物、功能性食品、医疗食品、食品或饮料形式。在一些实施例中，包含本文中所描述的组合物的营养补充剂、膳食调配物、功能性食品、医疗食品、食品或饮料用于管理血色素异常(例如患有镰状细胞疾病的对象)或地中海型贫血。

本发明的特色在于一种改善以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种(例如全部)的方法：红血球功能、转化或合成；血色素功能、转化或合成；血管功能；氧化应激(例如血液及全身性氧化应激中的一种或两种)；或发炎，其包含向对象施用有效量的本文中所描述的膳食组合物。

本发明的特色在于一种向患有血色素异常(例如患有镰状细胞疾病的对象)或地中海型贫血的对象提供营养支持或补充的方法，其包含向对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

本发明的特色在于一种提供有助于管理血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血的营养支持或补充的方法，其包含向有需要的对象施用有效量的本文中所描述的组合物。

在一些实施例中，该方法为非治疗性方法。在一些实施例中，包含本文中所描述的活性部分的组合物以非治疗性方式使用，诸如用于提供营养、保持健康或改善健康对象中的美容外观。实例包括(但不限于)使用本文中所描述的组合物作为膳食补充剂或食品。本申请案的组合物可用于滋养或维持循环系统中的各种组件的健康，诸如血管、血液、红血球、血色素及/或血管系统中。

组合物可用于对象(例如未罹患血色素异常或地中海型贫血的对象)的膳食管理的方法中。在一些实施例中，对象未罹患血色素异常或地中海型贫血。

在一些实施例中，对象具有罹患血色素异常(例如β-血色素异常)或地中海型贫血的风险或已诊断患有血色素异常或地中海型贫血。在某些实施例中，血色素异常为镰状细胞疾病。在某些实施例中，地中海型贫血为β-地中海型贫血。

在一些实施例中，镰状细胞疾病选自：镰状细胞贫血(HbSS)、血色素SC疾病(HbSC)、镰状β

实施例

阐述以下实例以帮助理解本发明，但不意欲且不应理解为以任何方式限制其范畴。

说明

在正常及疾病特异性人类原代细胞模型中测试了包含氨基酸实体的组合物。在旨在模拟生物流体及营养物的生理学含量的环境中进行模型系统。这些模型包括疾病条件(例如发炎)以分离及更好地理解组合物对代谢通路的子集的作用。这些模型的高通量性质使得能够探索可能在患有血色素异常(例如镰状细胞疾病)或地中海型贫血(例如α-地中海型贫血或β-地中海型贫血)的对象具有有利、多通路作用的氨基酸实体的特定组合。

实施例1.原代人类巨噬细胞中的细胞介素分泌。

分离末梢血液单核细胞(PBMC)

小心地将未经纯化的白血球层(buffy coat)(Research Blood Components)倒入50mL离心管中且用具有钙及镁(Gibco)的室温杜贝卡氏磷酸盐缓冲盐水(dPBS)稀释。经稀释的白血球层进一步分到四个总计50mL离心管中，每个管20mL。小心地将淋巴细胞分离培养基(Corning)吸取至各离心管的底部。在20℃下，在850×g下离心混合物32分钟，减速度及加速度为0。

在离心之后使PBMC层与其他组分分离且添加至含有25mL dPBS的新的50mL离心管中。用dPBS使总体积达到50mL且在600×g下，在20℃下离心10分钟，其中加速度为9，减速度为5。自细胞集结粒小心地移除上清液。使用10mL dPBS使细胞集结粒再悬浮。接着，使用dPBS使总体积达到50mL且在450×g下，在20℃下离心5分钟，其中加速度为9，减速度为9。再次重复上清液移除及细胞集结粒再悬浮。

接着自细胞集结粒小心地移除上清液。使细胞集结粒再悬浮于不具有钙或镁的10mL dPBS中且经由70μM细胞过滤器过滤。使用Cellometer K2自动化细胞计数器测定总PBMC数目。保存总共5E6个细胞以用于流动式细胞测量分析。在490×g下，在20℃下离心剩余细胞5分钟，其中加速度为9，减速度为9。

CD14+细胞选择

使用EasySep

阴性及阳性部分在490×g下，在20℃下离心5分钟(其中加速度为9，减速度为9)，且再悬浮于DMEM(Gibco)及10％热不活化胎牛血清(Atlanta Bio)及青霉素/链霉素中。对细胞进行计数且在490×g下，在20℃下再离心5分钟，其中加速度为9，减速度为9。在离心之后，使细胞再悬浮于含有500U/mL的GM的DMEM(Gibco)及10％热不活化胎牛血清(AtlantaBio)及青霉素/链霉素中且以1-2×10

CD14+细胞供应

通过移除培养基及未附着的细胞，在490×g下在20C下离心5分钟(其中加速度为9，减速度为9)，且再悬浮于含有GM-CSF的新鲜DMEM(Gibco)及10％热不活化胎牛血清(Atlanta Bio)及青霉素/链霉素中来每隔3-4天供应细胞。将再悬浮细胞接种于10cm组织培养盘上且在37℃，5％CO2下培育。分化的巨噬细胞用于后续实验。

筛检

在第0天，以每孔3.0E4个细胞，在96孔微量培养盘(ThermoFisher)中，将原代人类PMBC衍生的巨噬细胞接种于补充有青霉素-链霉素(Hyclone)及10％热不活化胎牛血清(HI-FBS)(Atlanta Bio)的杜贝卡氏改良依格培养基(DMEM)(Gibco)中且在37℃，5％CO2下培育隔夜。在第1天，细胞用150μL/孔的DPBS(Gibco)洗涤一次且用75μL以下处理：

a.基于血液中的平均生理学浓度，基于人类代谢组数据库(Human MetabolomeDatabase,HMDB)中公布的数值，含有限定的定制氨基酸浓度的不含氨基酸的DMEM(USBiologicals)，其具有6mM葡萄糖、1mM丙酮酸钠、10mM HEPES、0.2％primocin(InVivoGen)；或

b.具有一种各种浓度的氨基酸的上文所描述的相同培养基，其包括全部丢弃。

在第2天，细胞用补充有0.30ng/mL的脂多糖(LPS)(Sigma)的75μL的上文所描述的相同培养基处理，达到0.15ng/mL的LPS的最终浓度。对照孔用1μM BX-795(Tocis)、1μMTAK242(Sigma)、0.15ng/mL的LPS或磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理。

在第3天，采集上清液且紧接着在-80℃冷冻器中冷冻。用150μL DPBS洗涤细胞一次且使用WST-8细胞增殖细胞毒性测定(Dojindo)评估存活力。在测定之后，细胞用150μLPBS洗涤两次且用4％多聚甲醛固定5分钟，接着用150μL PBS再洗涤两次。通过IL-6及TNFa的ELISA，使用可商购的试剂盒(R&D Systems)，根据制造商供应方案，分析上清液样本中的蛋白质含量。结果展示于以下表7-12中。

表7.IL-6测量值：供体1

LIVRQNAC、LIVRQNAC+G、LIVRQNAC+S、RQNAC及NAC处理明显减少原代人类单核细胞衍生的巨噬细胞中的LPS诱导的IL-6分泌。LIVRQ处理明显增加IL-6分泌，而LIV无作用。单独施用的精氨酸及谷氨酰胺增加IL-6分泌，而其他单独的氨基酸不影响IL-6分泌。进行双向方差分析邓奈特多重比较(Two Way ANOVA Dunnett Multiple Comparison)以便进行统计分析。平均值表示为减去基线的数值。

表8.IL-6测量值：供体2

LIVRQNAC、LIVRQNAC+G、LIVRQNAC+S、RQNAC及NAC处理明显减少原代人类单核细胞衍生的巨噬细胞中的LPS诱导的IL-6分泌。LIVRQ及LIV处理明显增加IL-6分泌。单独施用的谷氨酰胺及亮氨酸增加IL-6分泌，而其他单独的氨基酸无作用。进行双向方差分析邓奈特多重比较以便进行统计分析。平均值表示为减去基线的数值。

表9.IL-6测量值：供体3

LIVRQNAC+G、LIVRQNAC+S、RQNAC及NAC处理明显减少原代人类单核细胞衍生的巨噬细胞中的LPS诱导的IL-6分泌。LIVRQ处理增加IL-6分泌，而LIV及LIVRQNAC对IL-6分泌无统计显著作用。单独施用的谷氨酰胺明显增加IL-6分泌，而其他单独的氨基酸无作用。进行双向方差分析邓奈特多重比较以便进行统计分析。平均值表示为减去基线的数值。

表10.TNFα测量值：供体1

LIVRQNAC、LIVRQNAC+G、LIVRQNAC+S、RQNAC及NAC处理明显减少原代人类单核细胞衍生的巨噬细胞中的LPS诱导的TNFa分泌。LIV处理增加TNFa分泌，而LIVRQ对TNFa分泌无显著作用。单独地施用的氨基酸中无一种对TNFa分泌起作用。进行双向方差分析邓奈特多重比较以便进行统计分析。平均值表示为减去基线的数值。

表11.TNFα测量值：供体2

LIVRQNAC、LIVRQNAC+G、LIVRQNAC+S、RQNAC及NAC处理明显减少原代人类单核细胞衍生的巨噬细胞中的LPS诱导的TNFa分泌。LIV及LIVRQ处理增加TNFa分泌。单独施用的亮氨酸、异亮氨酸及谷氨酰胺增加TNFa分泌，而其他氨基酸无作用。进行双向方差分析邓奈特多重比较以便进行统计分析。平均值表示为减去基线的数值。

表12.TNFα测量值：供体3

#归因于技术误差，在实验3中未测量亮氨酸

LIVRQNAC、LIVRQNAC+G、LIVRQNAC+S、RQNAC及NAC处理明显减少原代人类单核细胞衍生的巨噬细胞中的LPS诱导的TNFa分泌。LIV及LIVRQ处理增加TNFa分泌。除了增加TNFa分泌的谷氨酰胺以外，单独施用的氨基酸对TNFa分泌无显著作用。进行双向方差分析邓奈特多重比较以便进行统计分析。平均值表示为减去基线的数值。

已提出促发炎及消炎细胞介素生产的不平衡与血管阻塞危机(VOC)的发展及其在镰状细胞疾病中的严重度相关(Sarray等人2015；其以全文引用的方式并入本文中)。VOC为引起缺血性损伤及严重疼痛的镰状细胞疾病的标志性并发症。Sarray等人(2015)证明促发炎细胞介素IL-6的升高与VOC的持续时间以及VOC群体中高IL-6及TNFα四分位数(quartile)的富集相关，且降低的促发炎IL-10与VOC频率、类型、严重度及持续时间相关。其结果共同强调促发炎及消炎平衡在镰状细胞疾病病变中的重要性。

实施例2.镰状细胞疾病患者中的活性氧。

血色素的脱氧引起超氧化物生产，该超氧化物生产在氧戒断增加时扩增，诸如在缺氧、血流降低或贫血期间发生(Rogers等人2009)。因此，红血球需要稳定的抗氧化剂防御系统且充当全身性活性氧(ROS)的储集器(Rogers等人2009)。已报导与健康对照者相比，ROS在镰状细胞疾病患者中的全血及红血球中以更高的速率产生，且经降低的谷胱甘肽(GSH)的丰度以及再循环GSH的能力减弱，引起膜蛋白质氧化、膜脆弱性及血管功能异常(Amer等人2003,2004,2005，Rogers等人2013)。

根据自Amer等人2004调适的方案，使用过氧化氢(H

接着，细胞在经预热的37℃DPBS或自Wesseling等人(2016)调适的HEPES缓冲生理溶液(HPS)中稀释至1×10

N-乙酰基半胱氨酸(谱图)及半胱氨酸以剂量反应性方式降低用H

实施例3.红血球的氨基酸图谱分析(Profiling)。

已描述镰状细胞疾病中的血浆及红血球氨基酸中的浓度差异且认为其促进内皮功能障碍。举例而言，已描述经由溶血进行的红血球精氨酸酶的释放可促进血浆精氨酸降低，促进此氨基酸的生物可用性受限及一氧化氮(NO)抗性的病理状态(Morris等人2005)。代谢组学研究亦鉴别假设有助于疾病病变的氨基酸含量及通路失调(Darghouth等人2011)。

在镰状细胞疾病患者全血样本(IRB批准，Boston Children's Hospital)以及来自人种匹配健康对照者的全血中分析血浆及红血球氨基酸，以及经氧化及经还原的谷胱甘肽。尽管不能控制在采集样本时的进食或空腹状态，但认为患者及健康对照者中红血球及血浆氨基酸浓度之间的统计差异表示疾病状态中代谢的稳定差异且可有助于疾病病变。在健康对照者与镰状细胞疾病患者之间观测到的具有任一趋势水平或统计显著性的差异的氨基酸将优先用于其他测定中的筛检，诸如在缺氧下对镰状化的抗性及黏着标记物(诸如磷脂酰丝氨酸)的暴露。

实施例4.黏着生物标记物。

镰状细胞疾病的标志为「镰状细胞危机」，其由引起缺血性损伤及严重疼痛的小型血管的血管阻塞引起。多种因素促成血管阻塞：镰状RBC的增加的刚性及黏着力使其更可能黏着至循环WBC及血管内皮；增加的来自溶血的精氨酸酶将产生一氧化氮(NO)所需的游离血浆精氨酸耗尽，损害血管扩张。镰状细胞危机为患者寻求医学护理的主要原因且可危及生命，因为其可在任何器官中发生且持续若干天。肺部脉管系统中的危机表现为「急性胸腔综合征」；脑部中的这些危机可引起中风或「沉默的(silent)」大脑梗死；骨骼中的这些危机可引起骨坏死(osteonecrosis)；且其他地方的危机可引起几乎任何器官中的损伤及衰竭。镰状化引起物理损坏及红血球膜的转化增加、细胞刚性增加、由于损失钾而导致的细胞脱水及经由磷脂酰丝氨酸的外部化(externalization)引起的增加的RBC黏着。由增加的磷脂酰丝氨酸暴露介导的红细胞与白血球及血管内皮细胞的黏着属于镰状细胞疾病中血管阻塞的机制，且磷脂酰丝氨酸暴露的测量值与黏着的其他测定(诸如红血球与人类脐静脉上皮细胞的黏着)良好相关。

将在未经处理的镰状细胞疾病患者血液(IRB批准，Boston Children'sHospital)中、在未经处理的条件下或在用已知刺激磷脂酰丝氨酸暴露的疾病病变相关刺激(诸如缺氧或钙离子载体4-br A23187(Millipore Sigma))处理时在健康对照供体血液(Research Blood Components)中，通过与荧光探针Alexa 488(Life Technologies)缀合的磷脂结合蛋白V(Annexin V)的结合来测量磷脂酰丝氨酸暴露。将在这些条件下观测到，在数倍的在HMDB(人类代谢组数据库(Wishart DS,Tzur D,Knox C等人,HMDB:the HumanMetabolome Database.Nucleic Acids Res.2007年1月；35(Database issue):D521-6.17202168))中发现的基础含量下，氨基酸处理修饰磷脂酰丝氨酸暴露的能力。能够降低黏着标记物磷脂酰丝氨酸的暴露的个别氨基酸或氨基酸的组合将为用于降低血管阻塞的潜在治疗剂。

实施例5.红血球对镰状化的抗性。

在缺氧条件下，诸如在周边组织中，或在贫血期间，镰状细胞疾病红血球的形态由于镰状血色素(HbS)的聚合而变成特征「镰状」形状。此增加细胞刚性且有助于血管阻塞(Du等人2015)。通过降低在缺氧下镰状化的细胞比例(如已关于羟基尿素所展示)或增加细胞镰状化所需的时间来提供对镰状化的抗性的潜在治疗可减少血管阻塞病变。

将测试单一氨基酸及组合在数倍的在HMDB(人类代谢组数据库(Wishart DS,TzurD,Knox C等人,HMDB:the Human Metabolome Database.Nucleic Acids Res.2007年1月；35(Database issue):D521-6.17202168))中发现的基础含量下，在缺氧气体混合物(2％O

实施例6.红血球的钙流入。

镰状细胞红血球描述为具有持续性钙泄漏，在缺氧及镰状化下加剧，引起黏着标记物(诸如磷脂酰丝氨酸)的暴露及促进疾病病变。

通过根据制造商说明将镰状细胞疾病患者全血预先加载细胞内钙探针Fluo-4 AM(Life Technologies)来测量镰状细胞中的钙流入。将测试单一氨基酸及组合在数倍的在HMDB(人类代谢组数据库(Wishart DS,Tzur D,Knox C等人,HMDB:the Human MetabolomeDatabase.Nucleic Acids Res.2007年1月；35(Database issue):D521-6.17202168))中发现的基础含量下，在缺氧气体混合物(2％O

实施例7.镰状细胞贫血的伯克利(Berkeley)小鼠模型

已研发若干基因转殖小鼠模型以检验镰状细胞疾病的系统-天然病变及治疗。研发一种称为伯克利小鼠(BERK)的此类模型以独占地表现人类血色素链，其包括镰状血色素变异体(HbS)，其引起这些小鼠中的镰状细胞贫血(Paszty C等人,1997.Science)。该BERK模型与疾病的多种不同方面充分类似，包括：贫血、网状红血球增多症(reticulocytosis)、不可逆镰状细胞、红细胞转化增加及多器官病变(de Jong K等人,2001.Blood)。

将针对安慰剂及多种L-谷氨酰胺含量，测试氨基酸组合在数倍的在HMDB(人类代谢组数据库(Wishart DS,Tzur D,Knox C等人,HMDB:the Human MetabolomeDatabase.Nucleic Acids Res.2007年1月；35(Database issue):D521-6.17202168))中发现的基础含量下，在BERK小鼠模型中的系统-治疗作用。在六个处理组中的一个组中，每天两次(BID)强饲动物保持4周：(1)载体，(2)低剂量L-谷氨酰胺，(3)高剂量L-谷氨酰胺，(4)低剂量由L R Q NAC G Car H K V组成的组合物，(5)高剂量由L R Q NAC G Car H K V组成的组合物，或(6)高剂量由L R Q NAC组成的组合物。分析每周自尾部静脉穿刺抽取的血液的血液参数(全血球计数)，其包括(但不限于)血容比、血色素、红血球体积、网状红血球计数、WBC计数及血小板计数。亦分析所抽取的血液的血浆及RBC氨基酸概况、细胞介素图、ROS、PS暴露以及其他相关细胞或分子标记物。在血液抽取及通过流动式细胞测量术进行的分析之前，红细胞的生物素标记(biotinylation)将实现红细胞转化的定量。病理组织学将实现对照组及处理组中器官损伤的对比。改善血液参数、红血球健康及转化以及限制器官损伤的氨基酸的组合将提供镰状细胞贫血中的疗法的支持。

实施例8.具有氨基酸预处理的溶血的离体诱导模型中的RBC变形性研究

基于以下供体选择准则，自Research Blood Components,LLC获得来自健康的非洲裔美国人及/或拉丁裔供体的全血：成年人年龄(在18与50周岁之间)，正常BMI(<30)，且不存在其他混淆临床病状。基于以下供体选择准则自BioIVT获得来自SCD供体的全血：具有基因型HbSS、HbSC、HbS/β

在温控环境(37℃)中，用来自RR Mechatronics的雷射光学旋转红血球分析仪(LORRCA)进行RBC变形性测量。简言之，悬浮于聚乙烯吡咯啶酮(PVP)中的均匀的RBC层经由两个同心圆筒经历剪应力梯度(0.3至30Pa)，且通过激光束绕射图案测量所得RBC形状或变形性的变化。接着，通过LORRCA程序分析所捕捉的响应于增加的剪应力的RBC形状的影像，以计算伸长指数(Elongation Index,EI)。

健康的RBC具有较高变形性≥0.5EI且SCD RBC具有较低变形性或EI值，如由本领域中的LORRCA细胞变形计量法(ektacytometry)研究。先前文献中表明，在1/2EI

本文中所揭示的离体溶血研究涉及用作为对照物的载体及特异性氨基酸进行全血的隔夜处理，接着用TBHP进行快速氧化(5分钟)。先前文献中已使用通过叔丁基过氧化氢来氧化全血的方法(Diederich L等人,Front Physiol.2018年5月11日；9:332)。接着，通过LORRCA细胞变形计量法测量RBC变形性或形状变化。

使储存在冰箱中的全血等分试样升温至室温，同时在摇荡器上温和地低速振荡一小时以确保获得红细胞的平缓及均匀的悬浮液，随后进行变形性测量。研究中使用的载体对照物为1×杜贝卡氏磷酸盐载体且向相应的载体及氨基酸处理条件中添加本文中所揭示的氨基酸(在最终10×或2.5mM浓度下，如所指示)。接着，样本在37℃下培育隔夜。第二天，自各治疗条件获得25μL全血且添加至来自RR Mechatronics的5mL Elon ISO黏性溶液中。将样本颠倒15-20次以确保经处理的RBC与Elon ISO溶液的适当混合，接着将样本装载于LORRCA上且随所施加的剪应力梯度而捕捉RBC变形性或形状测量值。剩余的全血处理物返回培育箱(37℃)中直至所有处理物的变形性测量完成。对于剩余的全血处理样本，由100mM新近制备的原料在2.5mM最终浓度下添加TBHP溶液(5.0-6.0M于癸烷中，Sigma)且在37℃下再培育5分钟。在5分钟培育结束时，立即移出25μL此经TBHP处理的样本且添加至Elon ISO溶液中，以在氧化之后用于RBC变形性测量。表13-15中包括来自这些研究的在1/2EI

结果

离体溶血模型中的RBC变形性或伸长指数(EI)测量

图1展示关于所指示的用本文中所揭示的特异性氨基酸或DPBS载体进行的预处理，在存在及不存在全血的TBHP氧化下，来自健康供体1的健康RBC变形性的变化。就EI而言，RBC变形性测量值展示于Y轴上且所施加的剪应力(Pa)展示于X轴上。各剪应力的EI测量值为50次测量的平均值。实线表示无TBHP氧化的全血的隔夜预处理且点虚线表示在TBHP氧化之后。

表13捕获来自图1的在半最大剪应力(1.69Pa)及最大剪应力(30Pa)下的RBC变形性测量值(EI)。两种不同的倍数变化展示于表13中。在存在及不存在各预处理组的TBHP氧化情况下，在叔丁基过氧化氢下的EI倍数变化展示EI的差异。当用TBHP处理时，在1/2EI

表14的结果展示在来自健康供体2的健康全血中，在TBHP氧化后单一氨基酸处理物的变形性。对于1/2EI

来自表15的结果表明当用增加剂量的氨基酸RNacCitQCarLHKVS进行离体预处理，接着进行快速TBHP氧化时，来自SCD供体的RBC中的变形性或EI线性增加。RBC变形性或EI的倍数变化展示与载体对照物相比，5×、10×及20×RNacCitQCarLHKVS预处理的剂量反应，其中在20×预处理下观测到的最高的5.3倍变化。

来自表13-15及图1的组合结果说明本文中所揭示的特异性氨基酸组合物在减少RBC变形性或形状的损失方面的益处，如通过响应于由氧化、蛋白水解及溶血引起的损伤的EI所测量。溶血减少可潜在地最小化镰状患者中的血管阻塞疼痛危机及器官损伤。

表13.与载体相比，在TBHP氧化下，用氨基酸预处理的健康全血(健康供体1)的RBC伸长指数(EI)及倍数变化

表14.与载体相比，在TBHP氧化下，用氨基酸预处理的健康全血(健康供体2)的RBC伸长指数(EI)及倍数变化

表15.在TBHP氧化下，用不同剂量的氨基酸RNacCitQCarLHKVS预处理的镰状全血的RBC伸长指数(EI)

表16.与载体相比，在TBHP氧化下，用氨基酸预处理的健康全血(健康供体2)的RBC伸长指数(EI)及倍数变化

实施例9.内皮细胞筛检

SCD中的血管功能异常可在血管内皮细胞(VEC)黏着标记物的表现、发炎性细胞介素以及一氧化氮(NO)合成减少及NO依赖性内皮功能中显示。此多方面病变可促进降低的血液灌注及增加的急性血管阻塞事件或进行性器官损伤(progressive organ damage)的可能性。

使用VEC模型评估氨基酸影响SCD中的血管功能异常的方面的能力。健康供体HLMVEC的TNFa治疗模拟SCD疾病状态及诱导黏着标记物ICAM-1及VCAM-1的表现，及促发炎细胞介素IL-6的分泌。已确定ICAM-1、VCAM-1及IL-6的含量可促进SCD病变且与SCD患者中的并发症的发病率及严重度相关。VEC模型试图测试氨基酸通过降低黏着标记物(ICAM-1及VCAM-1)及发炎性细胞介素(IL-6)的表现，同时促进VEC健康及存活率来减少TNFa诱导的疾病表现型的能力。

在96孔盘(Thermo Fisher)中，原代人类肺微血管内皮细胞(HLMVEC；Lonza)以6,000个细胞/孔接种于补充有胎牛血清(FBS；Lonza)、人类EGF(Lonza)、人类VEGF(Lonza)、R3-类胰岛素生长因子-1(Lonza)、抗坏血酸(Lonza)、氢化可的松(hydrocortisone)(Lonza)、人类FGF-β(Lonza)及庆大霉素/两性霉素-b(Lonza)的内皮细胞生长基本培养基-2(Lonza)中。细胞在室温下培育45分钟，接着在37℃/5％CO

在隔夜培育后，细胞用150μL杜贝卡氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS；Gibco)洗涤一次，且接着用内皮基本培养基MCB-131(氨基酸、葡萄糖、丙酮酸钠且不含苯酚；US Biologicals)处理，该基本培养基含有基于具有SCD的患者血液中的生理学浓度的既定的定制氨基酸浓度(因此重述所观测到的代谢不平衡，诸如某些必需氨基酸(包括精氨酸及天冬氨酸)的耗尽及某些非必需氨基酸(包括谷氨酸及天冬酰胺)的富集)、经透析的FBS(Hyclone)、人类EGF(Lonza)、人类VEGF(Lonza)、R3-类胰岛素生长因子-1(Lonza)、抗坏血酸(Lonza)、氢化可的松(Lonza)、人类FGF-β(Lonza)及庆大霉素/两性霉素-b(Lonza)、葡萄糖、10mM HEPES、丙酮酸钠及碳酸氢钠，其补充有以下中的一种：

a.PBS(载体对照物)，

b.0.5ng/mL的肿瘤坏死因子α(TNFα)及PBS，或；

c.0.5ng/mL的TNFα及氨基酸处理物，该氨基酸处理物在血浆中的20×平均生理学浓度下，基于人类代谢组数据库(HMDB)中公开的数值，在PBS中。

在24小时处理之后，细胞用150μL DPBS(Gibco)洗涤一次，接着用4％多聚甲醛固定。在固定之后，细胞用抗ICAM-1[MEM-111](小鼠IgG2a抗人类；abcam)及抗VCAM1[1.4C3](小鼠IgG1，κ抗人类；abcam)初级抗体分别在1000倍及100倍稀释下染色。接着，细胞用山羊抗小鼠IgG2a交叉吸附二级抗体Alexa Fluor 594(Invitrogen)及山羊抗小鼠IgG1交叉吸附二级抗体Alexa Fluor 647(Invitrogen)二级抗体染色。细胞核用Hoechst 3342(LifeTechnologies)染色。

使用高含量成像器(Molecular Devices)，通过荧光显微法侦测抗体结合。使用MetaXpress 6软件分析影像，以测定对应于ICAM-1或VCAM-1的各波长的每个细胞的整合强度。

使用Human Cytokines FirePlex-HT Panel 1试剂盒(abcam)根据制造商提供的说明分析上清液的IL-6浓度。粒子在高含量成像器(Molecular Devices)上成像，且通过FirePlex Analysis Workbench软件(abcam)根据制造商建议由标准曲线内插结果。

表17.特异性氨基酸组合物减少经TNFa处理的HLMVEC中分泌的IL6的含量

用包含RCitNac或RCitNacQCar的氨基酸组合物处理的HLMVEC显著减少来自经TNF-α处理的细胞的IL-6分泌。RQNac亦减少IL-6分泌。RCitNacQLHKVS适度地减少所分泌的IL-6的含量。

表18.特异性氨基酸组合物减少经TNFa处理的HLMVEC中ICAM-1及VCAM-1细胞整合强度的水平

*[20×]对应于HMDB值

RCitNac显著减少HLMVEC细胞中的TNF-α诱导的ICAM-1表现量。Gly、CitNac及Nac亦使ICAM-1表现量减少至更少的程度。经RCitNacQCarLHKVS及RCitNacQCar处理的HLMVEC细胞适度地减少TNF-α诱导的ICAM-1表现量。RCitNac、Nac、Gly及CitNac显著减少HLMVEC细胞中的VCAM-1表现。RCitNacQCarLHKVS对这些细胞中的VCAM-1表现具有中等作用，与Cit及Car相同。

结果概述：如所描述，理想处理为通过减少疾病表现型(VCAM1、ICAM1、IL6)来解决如HLMVEC表示的SCD的多因子病变的处理。通过META等级评分测量单一氨基酸及组合同时影响这些表现型的能力(表17及18)。META等级评分为复合量度，其考虑HLMVEC模型中对全部3种表现型的最佳影响(例如降低VCAM1、ICAM1及IL6)。与次最佳处理(亦即对所有测量具有不合需要的作用的处理)相比，最佳氨基酸或组合处理(亦即对所有测量具有所需作用的处理)具有较低分数。基于META等级，RCitNac为最佳处理，且组合RCitNacQCar及RCitNacQCarLHKVS属于最佳处理条件。

实施例10.在雄性斯泼雷格-多雷大鼠(Sprague-Dawley Rat)中的口服剂量施用后，多种化合物的药物动力学的评估

概述

对通过经口强饲施用雄性斯泼雷格-多雷大鼠的氨基酸化合物的各种组合的血浆浓度进行药物动力学(PK)分析。向四只动物给药RCitNacQCarLHKVS，一种包含十种氨基酸组分的测试物品：精氨酸、瓜氨酸、N-乙酰基半胱氨酸、谷氨酰胺、肉碱、亮氨酸、组氨酸、赖氨酸、缬氨酸及丝氨酸(表19)。在剂量施用之前，使动物空腹2小时。在即将给药前以及在给药后0.5、1、2、3、4及5小时采集血浆样本。

使用LC-MS方法(章节2.1)，在Axcella Health进行关于所收集的血浆样本的氨基酸含量的生物分析。通过

仅除肉碱及N-乙酰基半胱氨酸以外，大部分作为RCitNacQCarLHKVS的一部分给药的化合物的浓度在给药之后上升，在给药后0.5与3小时之间达到最大浓度。肉碱在五小时时程内持续增加，而未在血浆中侦测到N-乙酰基半胱氨酸。将PK参数列表，诸如T

方法

样本分析程序的概述

使用LC/MS方法定量大鼠血浆中的氨基酸，该方法利用HILIC层析及高分辨率质谱。通过蛋白质沈淀来制备样本且与各分析物的稳定标记的氨基酸内标掺入。使用校准标准进行绝对值定量且各分析物的线性范围通常为10至2000μM。利用掺入大鼠血浆中的QC评估方法的准确性。

药物动力学(PK)分析

使用Phoenix

表19.测试物品组合物

结果

精氨酸

在全部动物中，精氨酸的基线浓度在74.9至112μM范围内。在给药之后，给药RCitNacQCarLHKVS的动物中的平均最大精氨酸浓度(C

瓜氨酸

在全部动物中，瓜氨酸的基线浓度在31.6至62.7μM范围内。在给药之后，给药RCitNacQCarLHKVS的动物中的平均最大瓜氨酸浓度(C

谷氨酰胺

在全部动物中，谷氨酰胺的基线浓度在401至615μM范围内。在给药之后，给药RCitNacQCarLHKVS的动物中的平均最大谷氨酰胺浓度(C

结论

在给药测试物品RCitNacQCarLHKVS之后，组分氨基酸的血浆浓度倾向于在给药之后0.5至3.0小时达到最大值且随时间推移而降低。

表20.

实施例11.使用NIR实时监测均质性-其他组合及V-掺合器掺合

图2A展示关于在使用V-掺合器的氨基酸实体的第三其他示例性组合(表3的示例性组合)的处理过程期间的掺合物均匀度的时间依赖方法。每隔四分钟采集用于产生NIR谱图的样本。NIR谱图在后期时间点崩溃表明组合已达成掺合物均匀度。图2B表示四个随机选择的独立棒状包的平均值且氨基酸恢复数据表示为标示值的90-110％。当综合在一起时，数据表明达到掺合物及内含物均匀度。

这些实验说明本文中所描述的方法可用于实现氨基酸实体的其他组合的掺合物及内含物均匀度，且多种掺合技术(包括V-掺合器掺合)适用于实现均匀度。

实施例12.用氨基酸组合物治疗镰状细胞疾病患者

本文中所描述的研究的特征在于施用包括氨基酸的组合物以治疗镰状细胞疾病(SCD)患者。此研究的目标为在患有镰状细胞疾病(SCD)的对象中经12周评估组合物的食品安全性及耐受性。

将通过以下评估安全性及耐受性：报导的临床不良事件；体检、生命特征及ECG；及临床实验室测试，包括血液学、化学、血浆氨基酸以及其他发炎及血管黏着/功能标记物的变化。将通过以下评估结构及功能变化：用于脑部及肾脏灌注的多参数磁共振成像；6分钟步行度量；及脉动式测氧法(pulse oximetry)。将评估约48名具有先前确定的SCD诊断的雄性及雌性对象(≥12周岁)。

设想以两个部分进行研究(图3)。第I部分：在约24名患有SCD的成年人(≥18周岁)对象中起始研究，进行长达12周组合物施用的双盲安慰剂对照随机(2:1活性:安慰剂)研究，每天两次26.3g(52.6克/天)。基于正在进行中的耐受性及安全性监测，可下调组合物的量及/或方案。第II部分：在等待第4周之后的中期分析的结果及/或第I部分的第12周的研究结束结果期间，第II部分可接着在约八名其他成年人(≥18周岁)及十六名(16)青年(12-17周岁)对象的单独群组中起始。在第II部分中，成年人对象的预期组合物量为每天两次17.4g(34.8克/天)；对于青年对象，将基于其体重(BW)来调节量：若BW>50kg，则每天两次26.3g且若BW≤50kg，则每天两次17.4g。在等待第I部分的结果期间，可进一步调节组合物的量及/或方案。在第II部分中将不存在单独的安慰剂组。

部分I及部分II：基线(第1天)至第12周：在第I部分中，随机分组应在第1天访问之前的约3-5天进行且将基于2:1的活性:安慰剂比率。在各对象的随机分组之后，将指定研究组合物[组合物每天两次26.3g(52.6克/天)或安慰剂]运送至临床位点。在进行随机分组之后，对象将在第1天到达研究点以进行其基线评估。在第II部分中，因为不存在单独的安慰剂组，所有对象将接受组合物，如成年人中的固定量(例如每天两次17.4g)或青年对象中的体重调节量(例如若BW>50kg，则每天两次26g且若BW≤50kg，则每天两次17.4g)。

组合物由氨基酸构成。安慰剂产品为与组合物匹配的赋形剂。研究组合物以个别棒状包中的干燥粉末形式提供。各棒状包含有约8.76克氨基酸/棒状包。在整个研究期间，指定用于每次施用的棒状包数目[例如2、3或4个棒状包，每天两次]，接着在约6oz(约180mL)水中混合，且接着每天两次在进食之前(例如在早餐及晚餐之前或若早餐不为其每天的例行事务，则在午餐及晚餐之前)约30分钟(亦即，30±5分钟)立即服用。

实施例的概述

镰状细胞疾病为复杂的且由多种独特机制引发。保持血液健康及功能需要多种生物学、细胞及分子过程的协调。如本文中的实施例中所示，本申请案中揭示的氨基酸组合物(包括LRQNacHKVSCitCar、RCitNacQCar及RCitNac)能够[1]缓解人类血管内皮细胞中的发炎性细胞介素，[2]减少人类血管内皮细胞中的细胞黏着分子表现，及[3]防止对人类RBC变形性的损害，而诸如Q、RCit及NAC的组合物仅能够影响一些，而非全部这些对于保持血液健康而言必需的重要过程。实情为，谷氨酰胺(Q)，其由FDA批准用于治疗镰状细胞疾病，在本文中的特定测定中显示不良或不合需要的作用，该等作用在组合中缓解。

尽管已参考较佳实施例及各种替代实施例特定展示及描述本发明，但应理解，在不偏离本发明的精神及范畴的情况下，相关领域技术人员可在其中作出形式及细节的各种变化。

出于所有目的，引用在本说明书的正文内的所有参考文献、颁布的专利案及专利申请案皆以全文引用的方式并入本文中。