一种以海洋药材为君药的方剂及制备方法

技术领域

本发明涉及一种以海洋药材为君药的治疗崩漏的方剂及制备方法，属于中药临床应用技术领域。

背景技术

功能失调性子宫出血(Dysfunctional Uterine Bleeding，DUB)简称功血，是指由神经内分泌失调引起，而不是由妊娠、子宫内膜肿瘤、感染或血液病等全身或女性生殖道器质性疾病引起。常发生于青春期或围绝经期，多为无排卵型功能失调性子宫出血。西医治疗功能失调性子宫出血多选取避孕药、孕酮、雌激素、手术等治疗方法，虽有疗效但是副作用大，安全性低，并且存在激素乱用的现象。该病多属中医的“崩漏”、“月经量多”等病证，病机错综复杂，病本在肾，而中医药治疗DUB有其独特优势，并且疗效已得到认证肯定。

发明内容

本发明旨在提出一种以海洋药材为君药的治疗崩漏的方剂，以中药材为原料，标本兼治，安全有效。

本发明解决上述技术问题所采取的技术方案如下：一种以海洋药材为君药的方剂，该方剂由以下重量份的组分制备而成：珍珠母8-12份、牡蛎8-12份、海螵蛸8-12份、山茱萸3-6份、黄芪8-12份、白术4-8份、人参4-8份、升麻2-4份、甘草2-4份、白芍4-8份、当归2-4份、蒲黄4-8份、鹿角霜4-8份、墨旱莲4-8份、紫珠草3-8份。

所述方剂进一步优化的重量份比例为：珍珠母10份、牡蛎10份、海螵蛸10份、山茱萸3份、黄芪10份、白术4份、人参4份、升麻2份、甘草2份、白芍4份、当归2份、蒲黄4份、鹿角霜4份、墨旱莲4份、紫珠草3份。

所述方剂的制备方法是：

(1)先分别将珍珠母、牡蛎、海螵蛸、鹿角霜粉碎后混合得细粉；

(2)后将山茱萸、黄芪、白术、人参、升麻、甘草、白芍、当归、蒲黄、墨旱莲、紫珠草粉碎，用水煎煮过滤并冷却浓缩后，加乙醇沉淀，浓缩得稠膏，稠膏经低温干燥研粉，过筛，得细粉；

(3)最后将步骤(1)、(2)所得细粉合并混匀，即得混合粉剂。

所述制备方法进一步优化为：步骤(2)水煎煮的具体方法为：水煎煮2次，每次2小时，再合并煎液；所述稠膏浓缩至85℃时相对密度为1.30；所述干燥温度为80℃以下。

更进一步地，所述混合粉剂采用一次性非回收医药或食品用的玻璃瓶包装，贴标，得成品；所述玻璃瓶预先采用115℃高温消毒杀菌30mim，药瓶容积可视病情用药估量情况选用；所述成品无需再经过高温消毒，以免破坏药性，经实验证明，成品的保质期可以达到两年。

本发明的用法为：服用时取方剂20g，加蜂蜜20ml、40-60℃温开水200ml搅拌15min后服下，每天服3次，出血量特别多时每晚睡前加服1次。

本发明各组分功效如下：

珍珠母、牡蛎、海螵蛸、山茱萸：补益肝肾、敛精固涩；

黄芪、白术、人参、升麻、甘草：补气健脾、升阳止漏；

白芍、当归、蒲黄：滋阴补血、柔肝调经；

鹿角霜、墨旱莲、紫珠草：温肾助阳、养肝止血。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明方剂中重用珍珠母，将珍珠母与黄芪、白术为伍，可补气健脾，止血，使气旺摄血；人参、升麻补脾益气，升举阳气，牡蛎功专补肾，收敛固涩，以增止血之功；山茱萸、白芍补益肝肾以调冲任，并能养血敛阴，鹿角霜温补肾阳；阿胶、当归补血调经，海螵蛸收敛止血、蒲黄化瘀止血二者相配伍使血止而不留淤；墨旱莲、紫珠草补肾止血；蜂蜜、炙甘草调和药性，诸药合用，共奏补肾健脾、固冲摄血之功。本发明配方严谨、科学，严格采用中医配伍理论及网络药理学的研究方法得纯中药方剂，其制备简单、药源广，经临床应用验证，本发明治疗崩漏临床疗效显著，标本兼治，药性平和，安全。

附图说明

图1为实施例补益肝肾、敛精固涩组的共同基因靶点数示意图；

附图标记：“234”区为药物靶点，“1127”区为疾病靶点，“105”区为共同基因靶点。

图2为实施例补益肝肾、敛精固涩组的中药-成分-疾病-靶点网络图。

图3为实施例补气健脾、升阳止漏组的共同基因靶点数示意图；

附图标记：“107”区为药物靶点，“1095”区为疾病靶点，“137”区为共同基因靶点。

图4为实施例补气健脾、升阳止漏组的中药-成分-疾病-靶点网络图。

图5为实施例滋阴补血、柔肝调经组的共同基因靶点数示意图；

附图标记：“177”区为药物靶点，“1092”区为疾病靶点，“140”区为共同基因靶点。

图6为实施例滋阴补血、柔肝调经组的中药-成分-疾病-靶点网络图。

图7为实施例温肾助阳、养肝止血组的共同基因靶点数示意图；

附图标记：“268”区为药物靶点，“1042”区为疾病靶点，“190”区为共同基因靶点。

图8为实施例温肾助阳、养肝止血组的中药-成分-疾病-靶点网络图。

图9为实施例全方组的共同基因靶点数示意图；

附图标记：“385”区为药物靶点，“992”区为疾病靶点，“240”区为共同基因靶点。

图10为实施例全方组的中药-成分-疾病-靶点网络图。

图11为实施例全方组+拆方组的共同基因靶点数示意图；

附图标记：A-补益肝肾、敛精固涩组，B-补气健脾、升阳止漏组，C-滋阴补血、柔肝调经组，D-温肾助阳、养肝止血组，E-全方组。

图12为实施例全方+拆方组的PPI网络图。

图13为实施例全方+拆方组的共同靶点的GO富集分析气泡图；形状越大，富集基因数目越多；P值越小，颜色越深。

图14为实施例全方+拆方组的共同靶点的KEGG通路富集分析气泡图；圆点越大，富集基因数目越多；P值越小，圆点颜色越深。

具体实施方式

为使得本发明的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本发明部分实施例，而非全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

一、实施例的制备

一种以海洋药材为君药的治疗崩漏的方剂，该方剂由以下重量份的组分制备而成：珍珠母10份、牡蛎10份、海螵蛸10份、山茱萸3份、黄芪10份、白术4份、人参4份、升麻2份、甘草2份、白芍4份、当归2份、蒲黄4份、鹿角霜4份、墨旱莲4份、紫珠草3份。

该方剂的制备方法是：

(1)先分别将珍珠母、牡蛎、海螵蛸、鹿角霜粉碎后，过270目筛，得细粉后混合；

(2)后将山茱萸、黄芪、白术、人参、升麻、甘草、白芍、当归、蒲黄、墨旱莲、紫珠草粉碎，用水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，过滤并冷却浓缩后，加乙醇沉淀，浓缩至相对密度为1.30(85℃)的稠膏，80℃以下干燥研粉，过筛，得细粉(每1000克药材约得细粉300克)；

(3)最后将步骤(1)、(2)所得细粉合并混匀，即得混合粉剂；采用经过115℃、30mim的高温消毒杀菌后的一次性非回收医药或食品用的玻璃瓶及瓶盖装瓶，贴标，得成品。

二、各中药组分的药理理论及研究方法

1.对方剂中各中药组分根据药理进行分组

(1)第一拆方组(补益肝肾、敛精固涩组)：珍珠母、牡蛎、海螵蛸、山茱萸；

(2)第二拆方组(补气健脾、升阳止漏组)：黄芪、白术、人参、升麻、甘草；

(3)第三拆方组(滋阴补血、柔肝调经组)：白芍、当归、蒲黄；

(4)第四拆方组(温肾助阳、养肝止血组)：鹿角霜、墨旱莲、紫珠草。

(5)全方组：珍珠母、牡蛎、海螵蛸、山茱萸、黄芪、白术、人参、升麻、甘草、白芍、当归、蒲黄、鹿角霜、墨旱莲、紫珠草。

2、各组药理特点分析

以下采用中医配伍理论及网络药理学的研究方法，对全方及其四个拆方组进行了分析，发现四组药物化学成分出现频次较高的有槲皮素、山奈酚、毛蕊异黄酮等，这些化学成分可调控血管生成、减轻子宫出血，并且该方通过调节PI3K-Akt信号通路、P53信号通路、TNF信号通路、HIF-1信号通路、VEGF信号通路的关键蛋白AKTI、TP53、TNF、VEGFA的表达，从而减少出血，具有治疗功能失调性子宫出血的效果。通过以上分析，阐释了全方及其拆方各组相互配伍的合理性，探讨了该方补益肝肾、敛精固涩，补气健脾、升阳止漏，滋阴补血、柔肝调经，温肾助阳、养肝止血各组的作用机制。

(1)补益肝肾、敛精固涩组特点分析

通过检索数据库和文献查询，总共搜集了补益肝肾、敛精固涩组(珍珠母、牡蛎、海螵蛸、山茱萸)57个(删除重复后)有效化学成分，(筛选后)674个靶点，其中珍珠母21个活性成分，186个靶点，牡蛎31个活性成分，272个靶点，海螵蛸18个活性成分，153个靶点，山茱萸20个活性成分，63个靶点。将筛选后的674个靶点祛除重复靶点后与GeneCards数据库和OMIM数据库搜集到的DUB疾病靶点导入Draw Venn Diagram相互映射取得105个交集靶点，见图1。将筛选出的105个交集靶点与编号的化学成分导入Cytoscape3.7.2软件中，构建中药-成分-疾病-靶点网络图，见图2，图中紫色代表中药，蓝色代表中药的化学成分，橙色代表疾病，黄色代表药物与疾病的交集靶点，网络图包含154个节点，402条边，从图中可以看出一味中药可对应多个成分，每个不同的成分可对应多个靶点，每个不同的靶点也可对应多个成分，与疾病相呼应。可见补益肝肾、敛精固涩组治疗DUB具有多成分、多靶点的特点，又与疾病相联系。将105个交集靶点导入STRING数据库后，构建PPI相互作用关系。使用Cytoscape3.7.2绘制PPI网络图，图中包括105个节点，1057条边，而节点越大表示degree值越大，线越粗表示节点联系就越紧密，degree值排名在前5位的靶蛋白为白蛋白(ALB)、血管内皮生长因子(VEGFA)、My原癌基因蛋白(MYC)、肿瘤坏死因子(TNF)、凋亡蛋白酶-3(CASP3)。再将105个交集靶点进行GO富集分析得到516个GO富集结果，选取P＜0.05排名前10的GO富集功能信息进行分析，补益肝肾、敛精固涩组治疗DUB的生物过程(BP)390个条目，主要涉及到对药物的反应、对缺氧的反应、老化、凋亡过程负调节等生物过程。细胞组分(CC)42个条目，主要涉及到胞浆、细胞外间隙、细胞质等方面。分子功能(MF)84个条目，主要涉及到蛋白质同二聚体化活性、类固醇激素受体活性、蛋白质结合等。选取P＜0.05排名前20的KEGG富集功能信息进行分析，结果提示主要富集在PI3K-Akt信号通路、p53信号通路、VEGF信号通路等。

(2)补气健脾、升阳止漏组特点分析

通过检索数据库和文献查询，总共搜集了补气健脾、升阳止漏组(黄芪、白术、人参、升麻、甘草)147个(删除重复后)有效化学成分，(筛选后)576个靶点，其中黄芪20个活性成分，198个靶点，白术7个活性成分，18个靶点，人参22个活性成分，107个靶点，升麻15个活性成分，32个靶点，甘草92个活性成分，221个靶点。将筛选后的576个靶点祛除重复靶点后与GeneCards数据库和OMIM数据库搜集到的DUB疾病靶点相互映射取得137个交集靶点，见图3。将筛选出的137个交集靶点与编号的化学成分导入Cytoscape3.7.2软件中，构建中药-成分-疾病-靶点网络图，见图4，图中紫色代表中药，蓝色代表中药的化学成分，橙色代表疾病，黄色代表药物与疾病的交集靶点，网络图包含262个节点，1351条边，从图中可以看出一味中药可对应多个成分，每个不同的成分可对应多个靶点，每个不同的靶点也可对应多个成分，与疾病相呼应。可见补气健脾、升阳止漏组治疗DUB具有多成分、多靶点的特点，又与疾病相联系。将137个交集靶点导入STRING数据库后，构建PPI相互作用关系。使用Cytoscape3.7.2绘制PPI网络图，图中包括137个节点，3158条边，而节点越大表示degree值越大，线越粗表示节点联系就越紧密，degree值排名在前5位的靶蛋白为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、白介素-6(IL6)、肿瘤蛋白P53(TP53)、血管内皮生长因子(VEGFA)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)。再将137个交集靶点进行GO富集分析得到815个GO富集结果，选取P＜0.05排名前10的GO富集功能信息进行分析，补气健脾、升阳止漏组治疗DUB的生物过程(BP)638个条目，主要涉及到对药物的反应、对缺氧的反应、老化、基因表达正调控、凋亡过程负调节等生物过程。细胞组分(CC)方面63个条目，主要涉及到细胞外间隙、胞浆、膜筏等方面。分子功能(MF)114个条目，主要涉及到酶结合、相同蛋白结合、蛋白质结合等方面。选取P＜0.05排名前20的KEGG富集功能信息进行分析，结果提示主要富集在TNF信号通路、p53信号通路、PI3K-Akt信号通路等。

(3)滋阴补血、柔肝调经组特点分析

通过检索数据库和文献查询，总共搜集了滋阴补血、柔肝调经组(阿胶、白芍、当归、蒲黄)41个(删除重复后)有效化学成分，(筛选后)477个靶点，其中阿胶18个活性成分，132个靶点，白芍13个活性成分，86个靶点，当归2个活性成分，49个靶点，蒲黄8个活性成分，210个靶点。将筛选后的477个靶点祛除重复靶点后与GeneCards数据库和OMIM数据库搜集到的DUB疾病靶点相互映射取得140个交集靶点，见图5。将筛选出的140个交集靶点与编号的化学成分导入Cytoscape3.7.2软件中，构建中药-成分-疾病-靶点网络图，见图6，图中紫色代表中药，蓝色代表中药的化学成分，橙色代表疾病，黄色代表药物与疾病的交集靶点，网络图包含173个节点，389条边，从图中可以看出一味中药可对应多个成分，每个不同的成分可对应多个靶点，每个不同的靶点也可对应多个成分，与疾病相呼应。可见滋阴补血、柔肝调经组治疗DUB具有多成分、多靶点的特点，又与疾病相联系。将140个交集靶点导入STRING数据库后，构建PPI相互作用关系。使用Cytoscape3.7.2绘制PPI网络图，图中包括140个节点，2936条边，而节点越大表示degree值越大，线越粗表示节点联系就越紧密，degree值排名在前5位的靶蛋白为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、白介素-6(IL6)、血管内皮生长因子(VEGFA)、肿瘤蛋白P53(TP53)、凋亡蛋白酶-3(CASP3)。再将140个交集靶点进行GO富集分析得到763个GO富集结果，选取P＜0.05排名前10的GO富集功能信息进行分析，滋阴补血、柔肝调经组治疗DUB的生物过程(BP)596个条目，主要涉及到对药物的反应、对缺氧的反应、老化等。细胞组分(CC)56个条目，主要涉及到细胞外间隙、膜筏、线粒体等方面。分子功能(MF)111个条目，主要涉及到酶结合、相同蛋白质结合、血红素结合等方面。选取P＜0.05排名前20的KEGG富集功能信息进行分析，结果提示主要富集TNF信号通路、HIF-1信号通路、p53信号通路等。

(4)温肾助阳、养肝止血组特点分析

通过检索数据库和文献查询，总共搜集了温肾助阳、养肝止血组(鹿角霜、墨旱莲、紫珠草)38个(删除重复后)有效化学成分，(筛选后)536个靶点，其中鹿角霜17个活性成分，134个靶点，墨旱莲10个活性成分，172个靶点，紫珠草11个活性成分，230个靶点。将筛选后的536个靶点祛除重复靶点后与GeneCards数据库和OMIM数据库搜集到的DUB疾病靶点相互映射取得190个交集靶点，见图7。将筛选出的190个交集靶点与编号的化学成分导入Cytoscape3.7.2软件中，构建中药-成分-疾病-靶点网络图，见图8，图中紫色代表中药，蓝色代表中药的化学成分，橙色代表疾病，黄色代表药物与疾病的交集靶点，网络图包含227个节点，897条边，从图中可以看出一味中药可对应多个成分，每个不同的成分可对应多个靶点，每个不同的靶点也可对应多个成分，与疾病相呼应。可见温肾助阳、养肝止血组治疗DUB具有多成分、多靶点的特点，又与疾病相联系。将190个交集靶点导入STRING数据库后，构建PPI相互作用关系。使用Cytoscape3.7.2绘制PPI网络图，图中包括190个节点，4773条边，而节点越大表示degree值越大，线越粗表示节点联系就越紧密，degree值排名在前5位的靶蛋白为肿瘤蛋白P53(TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、血管内皮生长因子(VEGFA)、白介素-6(IL6)、凋亡蛋白酶-3(CASP3)。再将190个交集靶点进行GO富集分析得到972个GO富集结果，选取P＜0.05排名前10的GO富集功能信息进行分析，温肾助阳、养肝止血组治疗DUB的生物过程(BP)753个条目，主要涉及到对药物的反应、对缺氧的反应、老化等。细胞组分(CC)82个条目，主要涉及到细胞外间隙、胞浆、膜筏等方面。分子功能(MF)137个条目，主要涉及到酶结合、蛋白质结合、相同蛋白结合等方面。选取P＜0.05排名前20的KEGG富集功能信息进行分析，结果提示主要富集在PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路、VEGF信号通路等。

(5)全方组特点分析

通过检索数据库和文献查询，总共搜集了全方组(珍珠母、黄芪、白术、牡蛎、人参、升麻、海螵蛸、鹿角霜、山茱萸、阿胶、当归、白芍、墨旱莲、蒲黄、紫珠草、甘草)235个(删除重复后)有效化学成分，(筛选后)2263个靶点，其中珍珠母21个活性成分，186个靶点，黄芪20个活性成分，198个靶点，白术7个活性成分，18个靶点，牡蛎31个活性成分，272个靶点，人参22个活性成分，107个靶点，升麻15个活性成分，32个靶点，海螵蛸18个活性成分，153个靶点，鹿角霜17个活性成分，134个靶点，山茱萸20个活性成分，63个靶点，阿胶18个活性成分，132个靶点，当归2个活性成分，49个靶点，白芍13个活性成分，86个靶点，墨旱莲10个活性成分，172个靶点，蒲黄8个活性成分，210个靶点，紫珠草11个活性成分，230个靶点，甘草92个活性成分，221个靶点。将筛选后的2263个靶点祛除重复靶点后与GeneCards数据库和OMIM数据库搜集到的DUB疾病靶点相互映射取得240个交集靶点，见图9。将筛选出的240个交集靶点与编号的化学成分导入Cytoscape3.7.2软件中，构建中药-成分-疾病-靶点网络图，见图10，图中紫色代表中药，蓝色代表中药的化学成分，橙色代表疾病，黄色代表药物与疾病的交集靶点，网络图包含441个节点，2349条边，从图中可以看出一味中药可对应多个成分，每个不同的成分可对应多个靶点，每个不同的靶点也可对应多个成分，与疾病相呼应。可见全方治疗DUB具有多成分、多靶点的特点，又与疾病相联系。将240个交集靶点导入STRING数据库后，构建PPI相互作用关系。使用Cytoscape3.7.2绘制PPI网络图，图中包括240个节点，6720条边，而节点越大表示degree值越大，线越粗表示节点联系就越紧密，degree值排名在前5位的靶蛋白为白蛋白(ALB)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤蛋白P53(TP53)、血管内皮生长因子(VEGFA)、白介素-6(IL6)。再将240个交集靶点进行GO富集分析得到1080个GO富集结果，选取P＜0.05排名前10的GO富集功能信息进行分析，全方组治疗DUB的生物过程(BP)831个条目，主要涉及到对药物的反应、对缺氧的反应、老化、凋亡过程负调节、基因表达正调控等。细胞组分(CC)89个条目，主要涉及到细胞外间隙、胞浆、膜筏等方面。分子功能(MF)160个条目，主要涉及到酶结合、相同蛋白结合、蛋白质结合等方面。选取P＜0.05排名前20的KEGG富集功能信息进行分析，结果提示主要富集在HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、VEGF信号通路等。

(6)全方组+各个拆方组特点分析

将各个拆方组和全方组的成分靶点与DUB疾病靶点的交集靶点再次相互映射取得共有靶点47个见图11。将47个交集靶点导入STRING数据库后，构建PPI相互作用关系。使用Cytoscape3.7.2绘制PPI网络图，见图12，图中包括46个节点，358条边，而节点越大表示degree值越大，线越粗表示节点联系就越紧密，degree值排名在前5位的靶蛋白为肿瘤坏死因子(TNF)、JUN原癌基因(JUN)、血管内皮生长因子(VEGFA)、My原癌基因蛋白(MYC)、凋亡蛋白酶-3(CASP3)。再将47个交集靶点进行GO富集分析得到364个GO富集结果，选取P＜0.05排名前10的GO富集功能信息进行气泡图展示，可见图13。其中生物过程(BP)277个条目，主要涉及到对药物的反应、对缺氧的反应、老化等。细胞组分(CC)26个条目，主要涉及到细胞质、膜筏、胞浆等方面。分子功能(MF)61个条目，主要涉及到酶结合、蛋白质结合等方面。KEGG分析结果提示主要富集在TNF信号通路、PI3K-Akt信号通路、VEGF信号通路等。选取P＜0.05排名前20的KEGG富集功能信息进行气泡图展示，见图14。

三、实施例的应用

本方应用不局限于功能性子宫出血，也可用于兼有“息肉”、“子宫肌瘤”等实质性病变引起的子宫异常出血。

举典型病例如下：

病例一：

患者，女，46岁，百色人。崩漏病史十年，现阴道出血40多天，2021年1月5日初诊。十年前开始出现不规则子宫出血，需服用“宫血停”等成药后才能止血。2019年曾在外院行诊刮术，自述结果为“子宫内膜厚”、“肌瘤”、“囊肿”，本次发病起因是因腰肌劳损在外院就诊服用“散血止痛”药。崩漏发生后患者自行服用“宫血停”等成药不能止血。查：面色(白光)白，气短懒言，情绪低落。外阴血迹，月经垫血量多，血色红，脉弦，舌质淡苔薄白。查：中度贫血。诊断为崩漏，证属脾肾亏虚，肝郁血瘀，冲任不固。治以上方，每天4次服用。三天后血量减少，色暗，查B超：子宫增大，纵膈子宫，左侧宫腔稍强回声(息肉待排)，宫颈那氏囊肿，双侧附件区囊性包块。再进三剂，血止。

病例二：

患者，女，47岁，南宁人。不规则子宫出血3年，因出血量多56天于2020-07-28日就诊。面色苍白，全身无力，查：阴道流血量多，色鲜红，无血块。舌质红苔少，脉细弦。中度贫血，有“子宫肌瘤”病史，肌瘤最大径87mm×62mm×66mm。辨属肝肾阴虚，冲任不固。以上方服，每天4次，三天血止。此后坚持用中药调理，按时来经，持续时间7天，身体渐渐恢复，可正常上班及从事基本家务，已经五个月经周期。