一种精浆生化锌离子快速检测试剂条

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种精浆生化锌离子快速检测试剂条。

背景技术

随着自然环境的恶化，男性精子质量普遍下降，精浆生化检查对评估附属性腺的功能以及研究附属性腺对男性生育的影响有重要意义。精浆锌离子可与蛋白质结合，分布在精子表面，起到保护生物膜的作用，有利于延缓膜的脂质过氧化及保持精子活力，而且锌还是抗病菌因子及酶活性的辅助因子。另外锌具有稳定精子核染色体的作用。长期锌缺乏会导致性腺发育不全，性腺功能减退，精子活力和精子密度下降。目前各大医院生殖中心测试精浆生化采用传统的酶标仪测试，操作繁琐、费时费力，而且出报告时间长达1周，不能满足及时诊断的需求。

专利CN103760331A公开了一种精浆联检试剂盒，但是这种联合检测试剂盒只能通过颜色进行半定量的判读，不能给出准确的定量检测结果。

发明内容

针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种精浆生化锌离子快速检测试剂条。

本发明的技术方案概述如下：

一方面，本发明提供一种精浆生化锌离子快速检测试剂条，制备方法包括：

配置点胶液；其中，点胶液至少包括碱性的缓冲液、显色剂、增稠剂、表面活性剂；

将点胶液点胶到高分子膜上，得到显色层；

将显色层粘贴于塑料基材上。

进一步地，制备方法还包括：

在所述显色层上覆盖聚酯膜；

在所述聚酯膜上设置过滤层。

进一步地，制备方法还包括：在所述聚酯膜上粘贴一层尼龙网格膜。

进一步地，所述增稠剂包括琼脂糖、海藻糖、海藻酸钠中的至少一种。

进一步地，100ml的点胶液中包括：

pH值为9-11的缓冲液5-8g；

显色剂0.05-0.5g；所述显色剂包括硝基PAPS、5-溴PAPS中的至少之一；

增稠剂0.5-2g；

表面活性剂1-2g。

进一步地，所述点胶液还包括掩蔽剂、防腐剂。

进一步地，100ml的点胶液中包括：

掩蔽剂0.9-2g；

防腐剂0.4-1g。

进一步地，所述高分子膜包括硝酸纤维素膜、聚醚砜膜、聚酯膜中的至少之一。

进一步地，所述塑料基材上设有直径小于7mm的孔，所述塑料基材包括聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯中的至少之一。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明提供的试剂条的制备方法制备的精浆生化锌离子快速检测试剂条，在碱性条件下，精浆锌离子能够与试纸条种的硝基PAPS迅速发生反应，产物颜色深浅与锌离子浓度成正比，试纸呈现颜色深浅，配合干化学分析仪，能够准确得到结果，且不受精浆中其他物质的干扰。试纸制备方法简单，易操作，测试快速，性能稳定，测定结果准确。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。本发明的具体实施方式由以下实施例及其附图详细给出。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1为本发明的一种实施例的精浆生化锌离子标准曲线图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，本发明的前述和其它目的、特征、方面和优点将变得更加明显，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

接下来，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

本实施例提供一种精浆生化锌离子快速检测试剂条，制备方法包括以下步骤：

S1、配置点胶液；其中，点胶液至少包括碱性的缓冲液、显色剂、增稠剂、表面活性剂；点胶液还包括掩蔽剂、防腐剂。

S2、将点胶液点胶到高分子膜上，膜尺寸约7mm*7mm,干燥5-30分钟，得到显色层。

S3、将显色层粘贴于塑料基材上；其中，塑料基材为上设有孔，孔的直径小于7mm。

S4、在显色层上覆盖聚酯膜；聚酯薄膜是以聚对苯二甲酸乙二醇酯为原料制成的薄膜材料，将聚酯膜粘贴在高分子膜上，并覆盖显色层(即点胶液)，有利于显色层均匀显色。

S5、在聚酯膜上设置过滤层，制得试剂条；其中过滤层是粘结在聚酯膜上，有助于减少干扰和样本均匀分布。优选地，在聚酯膜上还可以粘贴一层尼龙网格膜，即在步骤S4之后在聚酯膜上粘贴一层尼龙网格膜，实现样品快速均匀的扩散，最后再粘贴过滤层，过滤层为玻璃纤维膜，之后切割成特定尺寸，固定于卡壳中。

在步骤S1中，点胶液的配比方法是：100ml的点胶液中包括：

pH值为9-11的缓冲液5-8g；其中，缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷(Tris)。

显色剂0.05-0.5g；其中，显色剂包括硝基PAPS、5-溴PAPS中的至少之一；本发明使用5-溴PAPS时，将pH值设置为9.2时显色效果最佳。

增稠剂0.5-2g；其中，增稠剂包括琼脂糖、海藻糖、海藻酸钠中的至少一种。

表面活性剂1-2g；其中，表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚氧乙烯月桂酸醚(Brij35)，聚乙二醇中的其中之一。表面活性剂可防止反应体系浑浊，增强显色物质的稳定性，且试验表明PVP的加入可提高了试剂的灵敏度和稳定性。

掩蔽剂0.9-2g；其中，掩蔽剂包括柠檬酸钠、丁二酮肟中的至少之一，掩蔽剂包括还包括氟化钠或其他氟化物。其中，加入丁二酮肟对屏蔽有机物的效果最佳，加入氟化钠对屏蔽无机物的效果最佳。此外，屏蔽剂中还可以加入新铜试剂—2,9-二甲基-1,10-菲咯啉去除铜离子的干扰，添加抗坏血酸和亚铁氰化钾等消除铁离子的干扰，添加柠檬酸三钠等消除钙、镁等碱土金属的干扰。

防腐剂0.4-1g；其中，防腐剂包括叠氮钠、proclin300的至少之一。

在本发明中，增稠剂相对于其他添加剂的重量配比相对较小，在形成试剂条时，只需要将点胶液点在高分子模上，制造过程更加简单，且由于本发明采用点胶方法制备试剂条，显色层较为集中，所需的显色剂也有减小。且显色剂采用硝基PAPS、5-溴PAPS中的至少之一，显色剂与锌离子结合后，产物颜色深浅与锌离子浓度成正比。再结合本发明中掩蔽剂可以屏蔽有机物以及屏蔽无机物。

优选地，高分子膜包括硝酸纤维素膜、聚醚砜膜、聚酯膜中的至少之一。

优选地，塑料基材上设有直径小于7mm的孔，塑料基材包括聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯中的至少之一。

本发明还提供一种精浆生化锌离子快速检测试剂条，采用如上述制备方法进行制备而成。

以下提供具体的实施例，以对本发明进行进一步说明。

实施例1：

1)配置溶液A，溶液A中含有：

硝基PAPS：0.25g

海藻糖：12g，

聚乙二醇：1.5g，

柠檬酸钠：1.0g，

丁二酮肟：0.1g

叠氮钠：0.9g

Tris缓冲液(pH＝9.0)定容至100mL。

2)溶液A均匀点胶于7mm×7mm聚醚砜膜；

3)40℃干燥后20分钟；

4)将干燥后的聚醚砜膜用双面胶粘贴于聚氯乙烯塑料膜上；

5)聚醚砜膜上粘贴一层聚酯膜；

6)在聚酯膜上再粘贴一层尼龙网格膜。

实施例2：

1)配置溶液A，溶液A中含有：

硝基PAPS：0.20g

海藻酸钠：11g，

聚乙烯吡咯烷酮：1.3g，

柠檬酸钠：1.2g，

丁二酮肟：0.15g

Proclin300：0.7g

Tris缓冲液(pH＝9.3)定容至100mL。

2)溶液A均匀点胶于7mm×7mm聚醚砜膜；

3)45℃真空干燥后15分钟；

4)将干燥后的聚醚砜膜用双面胶粘贴于聚对苯二甲酸乙二醇酯塑料片上；

5)聚醚砜膜上粘贴一层聚酯膜；

6)在聚酯膜上再粘贴一层玻璃纤维膜；

7)切割成特定尺寸，固定于卡壳中。

实施例3：

仪器测试方法：

配置0mmol/L，1.25mmol/L，2.5mmol/L,5.0mmol/L,10mmol/L的锌离子标准溶液；

将上述5种标准溶液分别滴加到实施例2制备好的精浆锌离子试剂片；

使用手持式干化学分析仪测定1分钟的反射吸光度，根据4个点绘制标准曲线(0点作为背景扣除了)，如图1所示。

使用时，将样本加入到按照实施例2制备好的精浆生化试纸条，1分钟后使用手持式干化学分析仪测定反射吸光度，利用标准曲线即可计算得到待测样本液锌离子浓度。

实施例4：

分别配置含有Ca

具体地，Ca2+(2.5mmol/L)干扰测试数据如下：

表1 Ca2+(2.5mmol/L)干扰测试

具体地，Mg

表2 Mg

具体地，BSA(15g/L)干扰测试数据如下：

表3 BSA(15g/L)干扰测试

结果表明样本中含有Ca

本发明提供的试剂条的制备方法制备的精浆生化锌离子快速检测试剂条，在碱性条件下，精浆锌离子能够与试纸条种的硝基PAPS迅速发生反应，产物颜色深浅与锌离子浓度成正比，试纸呈现颜色深浅，配合干化学分析仪，能够准确得到结果，且不受精浆中其他物质的干扰。试纸制备方法简单，易操作，测试快速，性能稳定，测定结果准确。

上述说明已经充分揭露了本发明的具体实施方式。需要指出的是，熟悉该领域的技术人员对本发明的具体实施方式所做的任何改动均不脱离本发明的权利要求书的范围。相应地，本发明的保护范围也并不仅仅局限于前述具体实施方式。