一种蓝莓复合多肽的制备方法

技术领域

本发明属于食品工业技术领域，具体地说，涉及一种蓝莓复合多肽的制备方法。

背景技术

蓝莓(Vaccinium Spp)为杜鹃花科越桔属多年生小浆果果树，果实表皮为深蓝色，果肉软糯酸甜，香气怡人。蓝莓具有丰富的营养成分，如糖、有机酸、Vc、花青素、多种氨基酸及微量元素，尤其富含花青素。蓝莓因含有这些营养成分具有很多养生功能，如增强人体免疫力、抗癌、软化血管、防止脑神经老化等。蓝莓的营养价值也反映在食疗方面，如抗氧化、缓解视力，延缓衰老和改善记忆，还有利于控制胆固醇水平和心血管疾病，还能减少脂肪堆积，对塑身、美容美体也有一定功效。

研究表明蓝莓能够起到解酒护肝的作用。其机理可能是：(1)蓝莓能够提高ADH活性，促进酒精排出体外；(2)蓝莓提高肝组织的抗氧化能力，消除氧自由基，调控酒精代谢过程中的关键酶，下调CYP2E1的表达，上调HO-1的表达，降低机体由于长期大量饮酒造成的氧化应激反应，降低氧化应激对机体的损伤；(3)蓝莓提高肝脏功能，降低酒精代谢过程中的炎症免疫反应，降低炎症信号分子TLR4、NF-κB的表运。但目前关于蓝莓提取的多肽的效果研究甚少，我们推测蓝莓提取出来的复合多肽可能具有抗氧化的作用。

发明内容

1、要解决的问题

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种蓝莓复合多肽的制备方法，经测试，羟自由基清除率高达96.1％、超氧阴离子清除率高达92.5％、DPPH清除率高达94.7％。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)沉淀处理：将步骤(4)离心处理的上层溶液，转移至沉淀槽中处理，得到上层清液；

(6)纯化处理：将步骤(5)沉淀处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶、胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.30g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.20g/L，其中氯化钠的质量浓度为8.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.1g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为15mg/L，其中胰蛋白酶的质量浓度为20mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h；

步骤(5)中沉淀槽内沉淀液为丙酮与乙酸乙酯的混合液，其中丙酮与乙酸乙酯之间的质量比为3：1；

步骤(5)中上层溶液与沉淀液之间的体积为1：2；

步骤(5)中沉淀液的温度为8℃。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(6)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(6)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明制备的蓝莓复合多肽，经测试，羟自由基清除率高达96.1％、超氧阴离子清除率高达92.5％、DPPH清除率高达94.7％。具体来说，在现有技术的基础上，引入新的酶解液和沉淀液，其中酶解液中优化了两种酶的混合比例、磷酸盐缓冲液组分比例，其中沉淀液设置丙酮和乙酸乙酯的用量比，与大孔吸附树脂配合，从而得到了高品质的蓝莓复合多肽。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

实施例1

本实施例的蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)沉淀处理：将步骤(4)离心处理的上层溶液，转移至沉淀槽中处理，得到上层清液；

(6)纯化处理：将步骤(5)沉淀处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶、胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.30g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.20g/L，其中氯化钠的质量浓度为8.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.1g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为15mg/L，其中胰蛋白酶的质量浓度为20mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h；

步骤(5)中沉淀槽内沉淀液为丙酮与乙酸乙酯的混合液，其中丙酮与乙酸乙酯之间的质量比为3：1；

步骤(5)中上层溶液与沉淀液之间的体积为1：2；

步骤(5)中沉淀液的温度为8℃。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(6)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(6)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

对比例1

本实施例的蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)纯化处理：将步骤(4)离心处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶、胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.30g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.20g/L，其中氯化钠的质量浓度为8.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.1g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为15mg/L，其中胰蛋白酶的质量浓度为20mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(5)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(5)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

对比例2

本实施例的蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)沉淀处理：将步骤(4)离心处理的上层溶液，转移至沉淀槽中处理，得到上层清液；

(6)纯化处理：将步骤(5)沉淀处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶、胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.20g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.00g/L，其中氯化钠的质量浓度为5.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.2g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为20mg/L，其中胰蛋白酶的质量浓度为20mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h；

步骤(5)中沉淀槽内沉淀液为丙酮与乙酸乙酯的混合液，其中丙酮与乙酸乙酯之间的质量比为3：1；

步骤(5)中上层溶液与沉淀液之间的体积为1：2；

步骤(5)中沉淀液的温度为8℃。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(6)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(6)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

对比例3

本实施例的蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)沉淀处理：将步骤(4)离心处理的上层溶液，转移至沉淀槽中处理，得到上层清液；

(6)纯化处理：将步骤(5)沉淀处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.30g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.20g/L，其中氯化钠的质量浓度为8.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.1g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为15mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h；

步骤(5)中沉淀槽内沉淀液为丙酮与乙酸乙酯的混合液，其中丙酮与乙酸乙酯之间的质量比为3：1；

步骤(5)中上层溶液与沉淀液之间的体积为1：2；

步骤(5)中沉淀液的温度为8℃。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(6)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(6)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

对比例4

本实施例的蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)沉淀处理：将步骤(4)离心处理的上层溶液，转移至沉淀槽中处理，得到上层清液；

(6)纯化处理：将步骤(5)沉淀处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶、胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.30g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.20g/L，其中氯化钠的质量浓度为8.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.1g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为15mg/L，其中胰蛋白酶的质量浓度为20mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h；

步骤(5)中沉淀槽内沉淀液为丙酮与乙酸乙酯的混合液，其中丙酮与乙酸乙酯之间的质量比为1：1；

步骤(5)中上层溶液与沉淀液之间的体积为1：2；

步骤(5)中沉淀液的温度为8℃。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(6)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(6)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

对比例5

本实施例的蓝莓复合多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：筛选蓝莓；

(2)破碎处理：将步骤(1)预处理后的蓝莓，转移至食品破碎机中处理，得到碎蓝莓；

(3)酶解处理：将步骤(2)破碎处理后的碎蓝莓，转移至食品料液槽中处理，得到混合液；

(4)离心处理：将步骤(3)酶解处理的混合液，转移至高速离心机中处理，得到上层溶液；

(5)沉淀处理：将步骤(4)离心处理的上层溶液，转移至沉淀槽中处理，得到上层清液；

(6)纯化处理：将步骤(5)沉淀处理后的上层清液，转移至大孔吸附树脂中处理，回收洗脱液，并真空冷冻干燥，即可。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(1)蓝莓的筛选方法如下：

整体圆润、表面无杂质、无霉腐坏点、无机械损伤的蓝莓。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(2)中破碎处理的温度为4℃；

步骤(2)中破碎处理后碎蓝莓的平均粒径为2mm。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解处理的温度为45℃；

步骤(3)中酶解处理的时间为3h；

步骤(3)中碎蓝莓与酶解液之间的质量比为1：22。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(3)中酶解液为含有中性蛋白酶、胰蛋白酶的磷酸盐缓冲液；其中磷酸盐缓冲液为含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾的溶液，其中磷酸二氢钾的质量浓度为0.30g/L，其中磷酸氢二钠的质量浓度为1.20g/L，其中氯化钠的质量浓度为8.0g/L，其中氯化钾的质量浓度为0.1g/L；其中中性蛋白酶的质量浓度为15mg/L，其中胰蛋白酶的质量浓度为20mg/L。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(4)中离心处理的转速为20000rpm；

步骤(4)中离心处理的温度为4℃；

步骤(4)中离心处理的时间为1h；

步骤(5)中沉淀槽内沉淀液为丙酮；

步骤(5)中上层溶液与沉淀液之间的体积为1：2；

步骤(5)中沉淀液的温度为8℃。

上述所述的蓝莓复合多肽的制备方法中，

步骤(6)中大孔吸附树脂的洗脱液为生理盐水；

步骤(6)中大孔吸附树脂的骨架为聚乙烯与丙烯酰胺的混合物，其中聚乙烯与丙烯酰胺之间的质量比为1：3。

对比例6

中国发明专利，申请号：CN201910337909.9，公开号：CN109913521A，公开从柚子核中提取多肽的方法、应用、提取得到的多肽及响应面分析法的应用，如其说明书所述：

“本实施例提供了一种从柚子核中提取多肽的方法，包括如下步骤：

(1)原料：梅州金柚柚子核。

(2)捣碎：称取一定量已风干的柚子核，经组织捣碎机粉碎后，用20目筛子过筛，得柚子核粉末。

(3)接种：将已进行预处理的柚子核粉末精密称取1g于锥形瓶中，按1：15的料液比用超纯水将其浸湿，于121℃灭菌20min后，以30％的接种量将乳杆菌接种于柚子核粉末表面。

(4)发酵：将锥形瓶放置于26℃的培养箱中培养20小时。发酵完成后立即将样品放置在60℃烘箱中干燥48h，并立即储存在4℃以备用。

(5)提取多肽：用超纯水调整锥形瓶中发酵培养的产物的浓度为70g/L，在30℃温度，200rpm转速下用恒温摇床提取0.8h。提取后倒入离心管以5500r/min的转速离心15min，取上清液定容至50ml，并立即储存在4℃以备用。

(6)沉淀蛋白质：为避免蛋白质对多肽含量检测的影响，取1ml样品，加入1ml的10％(w/v)的三氯乙酸(TCA)水溶液混合均匀，静置10min,于4200r/min下离心30min，取上清液，得到活性多肽”。上述柚子核换成蓝莓。

对比例7

中国发明专利，申请号：CN201710832199.8，公开号：CN107468744A，公开一种全程低温生产苦瓜多肽蛋白提取物的新方法、苦瓜多肽蛋白提取物及其应用，如其说明书所述：

“实施例提供一种苦瓜多肽蛋白提取物，其采用以下方法制得：

选用生长期较长，绿色偏黄、苦瓜籽粒较饱满的新鲜苦瓜作为原料，将苦瓜原料先经自来水清洗，再经电解式高浓度臭氧水清洗，清洗水中臭氧浓度达18mg/L，水流量350L/h。

将清洗后的苦瓜原料打浆破碎成过20目筛网的液态物料。

将破碎打浆后的苦瓜原料投入可温控的超声波辅助提取罐，加入8质量倍的净化水，使用缓冲盐调控体系pH值6.9，控制提取罐浸提液的温度在40℃以内，进行逆流循环提取3次，每次40分钟。

采用高速管式离心机进行离心，并去渣，得离心液。

将离心液经过截留分子量为0.5μm的三支并联的中空纤维微滤膜系统进行过滤，操作温度为30℃，操作压力为0.3MPa，得微滤膜透过液。

先将微滤膜透过液分别经过截留分子量为150kDa的两支并联的卷式超滤膜系统进行过滤，操作温度为30℃，压力为0.8MPa，得超滤膜透过液；再将超滤膜透过液经过截留分子量为1000Da的两支并联卷式超滤膜系统进行过滤，操作温度为30℃，压力为0.8MPa，得到超滤膜截留液。

将超滤膜截留液经过截留分子量为150Da的四支串联卷式高压反渗透膜进行浓缩，操作温度低于36℃，压力为4MPa，得到固形物含量≥30％的浓缩液。

采用真空冷冻干燥的方式将浓缩液进行干燥，得到苦瓜多肽蛋白提取物”。上述苦瓜换成蓝莓。

对比例8

中国发明专利，申请号：CN201810404642.6，公开号：CN108740278A，公开一种魔芋多肽提取物，如其说明书所述：

“一种魔芋多肽提取物的制备方法，包括魔芋粉的制备，蛋白提取液的制备，魔芋多肽的制备，超滤，具体操作步骤为：

1)魔芋粉的制备：将魔芋粉除杂，将魔芋粉置于-18℃温度下冷冻2h，用破碎机破碎至5μm以下，采用磁感强度为0.018T的电磁棒搅拌，得纯魔芋粉；

2)蛋白提取液的制备：将纯魔芋粉加入蒸馏水中，固液比为3：50，搅拌，调pH值至8.7，浸提2h，离心，离心转速为6000r/min，离心时间为7min，取上清液，得蛋白提取液；

3)魔芋多肽的制备：在蛋白提取液中置入2wt％的复合蛋白酶，复合蛋白酶中含有0.03wt％的3-氰基吡啶和0.014wt％的2-氯-3-氰基吡啶，搅拌并调pH值至8.4，于43℃条件下恒温静置3h，灭酶处理，离心，离心转速为5000r/min，离心时间为18min，取上清液，得魔芋活性多肽；复合蛋白酶由质量比为1.3：2的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成；

4)超滤：将魔芋活性多肽提取液在温度44℃，pH值为8.4的条件下选择4000Da滤膜进行分离，得魔芋多肽提取物”。上述魔芋换成蓝莓。

实施例2

选择实施例1制备的产品以及对比例1-8制备的产品，进行如下实验：

借鉴下述实验方法并依托生工生物工程(上海)股份有限公司进行测试-高岩松.黑豆多肽-蓝莓复合饮料研制及抗氧化活性的研究[D]..

在上述研究的基础上，将制备的产品(蓝莓多肽)代替上述技术中的相应的蓝莓浓缩汁，其中蓝莓多肽的用量为每100mL水中加入1g；随后进行清除羟自由基活性、清除超氧阴离子活性及清除DPPH活性的测定。

表1测试结果

如表1所示，与对比例1-8相比，实施例1制备的含蓝莓多肽的复合饮料，测定的羟自由基清除率、超氧阴离子清除率及DPPH清除率均显著性高于对比例相应的实验结果，这说明本发明的制备方法，安全成本低、较强的抗氧化性能，可作为抗氧化性功能产品，有着广泛的应用前景。

以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。