一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法。

背景技术

目前对于外阴阴道假丝酵母菌病及滴虫性阴道炎的诊断，主要采用镜检的方式，但是检测人员的经验，还有阴道分泌物涂片质量，检测数量过多等等因素都会对诊断结果的准确性造成影响。因此近年来市面上出现了不少干化学酶法的试纸，但都或多或少存在一些问题，如制备复杂，一些试纸需要添加终止液等等，导致试纸的使用范围小。

发明内容

本发明的目的在于提供一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法，扩大试纸的使用范围。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：

将底物溶解于浓度为0.05M-3M的无机盐溶液，并加入10g/L-50g/L稳定剂、10g/L-50g/L反应促进剂、1g/L-15g/L显色剂形成N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液；

其中，将浸入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸之前，所述方法还包括：

将获取的滤纸浸入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶中浸泡2秒。

其中，将浸入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，包括：

将进入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶中的所述滤纸取出自然沥干成滴，并转动所述滤纸270°使所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在所述滤纸上流匀；

将所述滤纸平铺在干燥托板上，并放入55±5℃的电热鼓风干燥箱中干燥25-30min，并将烘干形成的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸在室温下进行密封保存。

第二方面，本发明提供了一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，适用于如第一方面所述的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的制备方法，所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸包括滤纸、底物、1g/L-15g/L显色剂、0.05M-3M的无机盐溶液、10g/L-50g/L稳定剂和10g/L-50g/L反应促进剂，所述滤纸为棉纤维滤纸。

其中，所述底物为人工合成物5-(4-(3-甲基-苯乙烯)-绕丹宁-3-乙酸氨基-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷或者为4-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷以及其衍生物。

其中，所述显色剂为碳酸盐类试剂、硼酸盐类试剂、磷酸盐类试剂中的一种或多种。

第三方面，本发明提供了一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶测试纸的检测方法，应用于如第二方面所述的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，包括以下步骤：

将获取稀释后的阴道分泌物样本，并滴加一滴至所述检测试纸上，在37℃下反应5min，根据所述检测试纸的颜色变化，得到所述检测试纸的检测结果。

本发明的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法，所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸包括滤纸、底物、1g/L-15g/L显色剂、0.05M-3M的无机盐溶液、10g/L-50g/L稳定剂和10g/L-50g/L反应促进剂，所述滤纸为棉纤维滤纸，将底物溶解于浓度为0.05M-3M的无机盐溶液，并加入10g/L-50g/L稳定剂、10g/L-50g/L反应促进剂、1g/L-15g/L显色剂形成N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液；将浸入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，制备工艺简单、检测速度快、成本低，便于扩大试纸的使用范围。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明提供的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的制备方法的步骤示意图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

请参阅图1，本发明提供一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的制备方法，包括以下步骤：

S101、将底物溶解于浓度为0.05M-3M的无机盐溶液，并加入10g/L-50g/L稳定剂、10g/L-50g/L反应促进剂、1g/L-15g/L显色剂形成N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液。

具体的，将底物溶解于浓度为0.05M-3M的无机盐溶液并加入10g/L-50g/L稳定剂，10g/L-50g/L反应促进剂，1g/L-15g/L显色剂形成N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液，所述的底物为人工合成物5-(4-(3-甲基-苯乙烯)-绕丹宁-3-乙酸氨基-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷或者为4-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷以及其衍生物；所述无机盐溶液为氯化钾溶液、氯化钠溶液、硫酸钾溶液或硫酸钠溶液；所述稳定剂为乙二胺四乙二酸钠盐或是钾盐、蔗糖、钨酸钠中的一种或一种以上组合而成；所述反应促进剂为胶原蛋白，蚕丝蛋白，牛血清白蛋白，植物蛋白中的一种或一种以上组合而成；所述显色剂为碳酸盐类试剂、硼酸盐类试剂、磷酸盐类试剂中的一种或一种以上组合而成。

S102、将浸入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸。

具体的，拿住滤纸的一端，把滤纸浸入配制好的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液中，在溶液中保持约2s后取出，让溶液自然沥干成滴后，转动滤纸270°使溶液在滤纸上流匀,然后把滤纸正面标记朝上平铺在干燥托板上，铺好后平稳地放入(55±5)℃的电热鼓风干燥箱中干燥(25-30)min。烘干形成N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，室温密封保存。

本发明提供一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的检测方法，应用于所述的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸应用于阴道分泌物N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测，包括以下步骤：

将获取稀释后的阴道分泌物样本，并滴加一滴至所述检测试纸上，在37℃下反应5min，根据所述检测试纸的颜色变化，得到所述检测试纸的检测结果。

N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸上，底物经N-乙酰氨基葡萄糖苷酶水解，在碱性环境下生成橙红色或红色化合物，呈色深度与N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比。这一步须要在反应结束时添加碱性物质才能达到反应检测要求，操作比较繁琐。若在N-乙酰氨基葡萄糖苷酶试剂液中加入碱性无机盐，反应产物在碱性环境下发生显色反应，阳性反应呈橙红色，阴性为淡黄色，检测操作步骤简化。

在试剂液配方中，无机盐的碱性决定试剂液以及检测试纸的稳定性，若碱性过强，检测试纸不稳定，容易变色，若碱性太弱，反应灵敏度达不到要求。本发明通过对碱性无机盐的筛选以及添加稳定剂的作用，提高检测试纸的稳定性以及灵敏度。

阴道感染假丝酵母菌以及滴虫会引起炎症，危害女性生殖系统健康，假丝酵母菌和滴虫对阴道分泌物中N-乙酰氨基葡萄糖苷酶具有特异性，N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸可用于检测女性阴道分泌物中N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，可作为阴道炎症辅助评判指标。

本发明提供一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，适用于所述的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的制备方法，所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸包括滤纸、底物、1g/L-15g/L显色剂、0.05M-3M的无机盐溶液、10g/L-50g/L稳定剂和10g/L-50g/L反应促进剂，所述滤纸为棉纤维滤纸。

在本实施方式中，所述的底物为人工合成物5-(4-(3-甲基-苯乙烯)-绕丹宁-3-乙酸氨基-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷或者为4-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷以及其衍生物；所述无机盐溶液为氯化钾溶液、氯化钠溶液、硫酸钾溶液或硫酸钠溶液；所述稳定剂为乙二胺四乙二酸钠盐或是钾盐、蔗糖、钨酸钠中的一种或一种以上组合而成；所述反应促进剂为胶原蛋白，蚕丝蛋白，牛血清白蛋白，植物蛋白中的一种或一种以上组合而成；所述显色剂为碳酸盐类试剂、硼酸盐类试剂、磷酸盐类试剂中的一种或一种以上组合而成，所述滤纸为棉纤维滤纸。

有益效果

1.本发明提供的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶快速检测试纸可用于检测女性阴道分泌物中N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，结合pH值可作为外阴阴道假丝酵母菌病及滴虫性阴道炎症辅助评判指标，适用于门诊筛查和个人健康监测。

2.本发明提供的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸的制备方法，试剂液配制简便，制备工艺简单。在5min左右即可出结果，检测速度快，灵敏度高，特异性好，操作简单，成本低，扩大试纸的使用范围。

本发明的一种N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸及其制备方法，所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸包括滤纸、底物、1g/L-15g/L显色剂、0.05M-3M的无机盐溶液、10g/L-50g/L稳定剂和10g/L-50g/L反应促进剂，所述滤纸为棉纤维滤纸，将底物溶解于浓度为0.05M-3M的无机盐溶液，并加入10g/L-50g/L稳定剂、10g/L-50g/L反应促进剂、1g/L-15g/L显色剂形成N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液；将浸入所述N-乙酰氨基葡萄糖苷酶溶液的滤纸进行沥干和转动流匀，并利用电热鼓风干燥箱对平铺在干燥托板上的所述滤纸进行烘干、裁剪和密封保存，得到N-乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试纸，制备工艺简单、检测速度快、成本低，便于扩大试纸的使用范围。

以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。