一种利用拟青霉降低农药残留和联合杀虫的方法

技术领域

本发明属于生物修复和害虫防治领域，具体涉及用拟青霉来降低化学农药残留的同时发挥联合控制害虫虫口密度的方法。

背景技术

目前，化学农药仍然是世界各国使用的主要杀虫剂，但由于化学农药的三“R”问题（农药残留、害虫抗药、害虫再生猖獗），世界各国都在努力使用生物农药，其中，真菌生物农药主要从害虫体表入侵，防治的害虫种类多，目前应用呈快速增长趋势，然而，真菌杀虫剂的杀虫速度还不尽人意，特别是虫口密度过大时，真菌杀虫剂虽然能够使害虫逐渐死亡，但在害虫死亡过程中，其对农作物的危害还在持续，导致农作物歉收。为减少农作物损失，人们不得不在害虫虫口密度大时仍应用化学农药防治，也有将化学农药和生物农药混合使用，这样可在一定程度上减少化学农药的用量，如：目前已有将白僵菌和有机磷类农药混合后应用于农作物、林业和草场的蝗虫防治。但是，该混合使用方法仍有很多问题：首先化学农药的浓度降低后不能完全压制高密度的害虫虫口；第二，化学农药所造成的三“R”问题没有解决；第三，有些农药与白僵菌等杀虫真菌杀虫剂不相容，会导致真菌死亡，实际上起不到真菌生物防治作用。

本发明申请的前期研究发现，有些拟青霉能够分解化学农药，因此发明了一种先用化学农药降低虫口密度，后用拟青霉低农药残留，同时，用拟青霉杀死具有抗药性的害虫，由于真菌能够在土壤中定殖，因此可持续将害虫虫口控制在较低的范围，从而可减少化学农药的施用频度，降低害虫防治成本。

发明内容

为了解决化学农药存在的三“R”问题（农药残留、害虫抗药、害虫再生猖獗），本发明提供一种利用拟青霉降低农药残留和联合杀虫的方法。

一种利用拟青霉降低农药残留和联合杀虫的操作步骤如下：

（1）菌种活化

将拟青霉接种到SDAY斜面培养基中，温度20-30℃、培养8-16天，得到斜面菌种；

（2）扩大培养

将所述斜面菌种接种到SDY液体培养基中，每支斜面菌种接种到300-1000mL的液体培养基，温度20-30℃、转速110-250rpm/分钟条件下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积重量比（V/W）接种到小麦固体培养基、或大米固体培养基、或麦麸固体培养基、或谷糠固体培养基中，20-35℃培养培养8-16天，得到扩大培养物；

（3）收集孢子

将扩大培养物在-50-40℃干燥，用收孢机收取孢子；用含0.05%吐温的水将孢子配制成浓度1×10

（4）化学农药杀虫和拟青霉联合处理

在害虫爆发的农田，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待18-60h；在植物上喷洒所述拟青霉溶液，喷洒量为每hm

喷洒化学农药一周，农残降低80%及以上；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低90%及以上。

步骤（1）中，所述SDAY培养基配方为：40g葡萄糖、10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g琼脂，加水至1000mL。

步骤（1）中，所述PDA培养基配方为：200g去皮马铃薯、20g葡萄糖和15g琼脂，加水至1000mL。

步骤（2）中，按重量比1：0.2-1.0将小麦、或大米、或麦麸、或谷糠加水浸泡0.5小时，常规高压灭菌，得到小麦固体培养基、或大米固体培养基、或麦麸固体培养基、或谷糠固体培养基。

另一种利用拟青霉降低农药残留和联合杀虫的操作步骤如下：

（1）菌种活化

将拟青霉接种到PDA斜面培养基中，温度20-30℃、培养8-16天，得到斜面菌种；

（2）扩大培养

将所述斜面菌种接种到PDB培养基中，每支斜面菌种接种到300-1000mL的液体培养基，温度20-30℃、转速110-250rpm/分钟条件下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积比（V/V）接种到SDY或PDB液体培养基中，于温度20-30℃、在转速为110-250rpm/分钟的摇床中或在通气量为体积比1:1（v/v）的发酵罐中培养5-12天，或者，得到液体培养物；

（3）化学农药杀虫和拟青霉联合处理

在害虫爆发的农田，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待18-60h时；将所述液体培养物匀浆稀释50-500倍均匀喷洒到喷洒过化学农药的植物上，喷洒量为50-800L/hm

喷洒化学农药一周，农残降低80%及以上；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低90%及以上。

步骤（1）中，所述SDY液体培养基配方为：葡萄糖40g、酵母浸粉10g、蛋白胨10g加水至1000mL。

步骤（1）中，所述PDB培养基配方为：去皮马铃薯200g、葡萄糖20.0g加水至1000mL。

所述拟青霉 (

本发明的有益技术效果体现在下述几个方面：

1.本发明采用先喷化学农药，可快速降低虫口，将害虫的危害降低到最低点。同时，本发明发现有些拟青霉可以有效降解化学农药，因而，在化学农药杀虫后及时施用拟青霉，降解化学农药，避免农药残留。本发明的拟青霉不仅可以有效降解化学农药，更主要的是可以杀虫，特别是可将有抗药的害虫杀死，从而避免了抗药害虫的产生以及害虫再生猖獗。

2.本发明既利用了化学农药的优秀杀虫活性，又避免了三“R”问题，其效果超过目前任何所有害虫防治策略。首先，优于将化学农药与拟青霉混合喷洒的方法，因为该方法不能解决农残问题。第二，优于喷洒化学农药后用芽孢杆菌等微生物降低农残的方法，因为该方法不能解决抗药虫的产生以及害虫再生猖獗的问题。

3.由于拟青霉可以在环境中自行生存和繁殖，因此可持续控制害虫，降低化学农药的施用频度，并持续降低环境农药污染，修复污染土地，降低害虫防治成本，提高农林产品质量。

具体实施方式

下面结合实施例，对发明作进一步描述。

实施例1

一种利用蛹拟青霉降低农药残留和联合杀虫的操作步骤如下：

1.1菌种活化

将蛹拟青霉（

SDAY斜面培养基配方为：40g葡萄糖、10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g琼脂，加水至1000mL。

1.2扩大培养

将所述斜面菌种接种到SDY液体培养基中，每支斜面菌种接种到300mL液体培养基，于三角瓶中在20℃、110rpm/分钟摇瓶培养3天，然后，按照1%体积重量比（V/W）接种到小麦固体培养基基中进行培养。小麦预先按重量比1：0.2加水浸泡0.5小时后常规高压灭菌。

SDY液体培养基，即葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白胨10g加水至1000mL。

1.3收集孢子

接种到小麦培养基后继续培养8天，将小麦培养物在-50℃干燥，然后用收孢机收取孢子。用含0.05%吐温的水将孢子配制成浓度1×10

1.4化学农药杀虫和蛹拟青霉联合处理

在害虫爆发的农田，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待18h，将浓度1×10

喷农药一周后，农残降低80%；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低90%。

实施例2

一种利用细脚拟青霉降低农药残留和联合杀虫的操作步骤如下：

2.1菌种活化

将细脚拟青霉（

SDAY斜面培养基配方为：40g葡萄糖，10g蛋白胨，10g酵母浸粉和15g琼脂，加水至1000mL。

2.2扩大培养

将上述的活化的细脚拟青霉斜面菌种接种到SDY液体培养基中，每支斜面菌种接种到1000mL液体培养基，于三角瓶中在30℃、250rpm/分钟摇瓶培养5天，然后，按照10%体积重量比（V/W）接种到大米固体培养基基中进行培养。大米预先按重量比1：1.0加水浸泡12小时后常规高压灭菌。

2.3收集孢子

接种到小麦培养基后继续培养16天，将小麦培养物在40℃干燥，然后用收孢机收取孢子。用含0.05%吐温的水将孢子配制成浓度1×10

2.4化学农药杀虫和细脚棒束孢联合处理

在害虫爆发的农田，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待60h，将浓度1×10

喷农药一周后农残降低90%；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低98%。

实施例3

一种利用古尼拟青霉降低农药残留和联合杀虫的操作步骤如下：

3.1菌种活化

将古尼拟青霉（

PDA斜面培养基配方为：200g去皮马铃薯，20g葡萄糖和15g琼脂，加水至1000mL。

3.2扩大培养

将上述的活化的古尼拟青霉斜面菌种接种到PDB液体培养基中，每支斜面菌种接种到600mL液体培养基，于三角瓶中在25℃、180rpm/分钟摇瓶培养4天，然后，按照1%体积比（V/V）接种到SDY液体培养基中，温度20℃在转速为110rpm/分钟的摇床中培养5天，得到液体培养物，即降低农残和杀虫的生物制剂。

PDB液体培养基配方为：去皮马铃薯200g及葡萄糖20.0g加水至1000mL。

SDY液体培养基配方为：葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白胨10g加水至1000mL。

3.3化学农药杀虫和古尼拟青霉联合处理

对虫口密度大的害虫首先喷洒化学农药杀虫，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待48h，将前面收取的液体培养物匀浆后稀释50倍均匀喷洒到喷洒过农药的植物上。液体发酵物匀浆稀释液的用量为50L/hm

喷农药一周后农残降低85%；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低95%。

实施例4

一种利用粉拟青霉降低农药残留和联合杀虫的操作步骤如下：

4.1菌种活化

将粉拟青霉（

PDA斜面培养基配方为：200g去皮马铃薯，20g葡萄糖和15g琼脂，加水至1000mL。

4.2扩大培养

将上述的活化的粉拟青霉斜面菌种接种到PDB液体培养基中，每支斜面菌种接种到600mL液体培养基，于三角瓶中在26℃、200rpm/分钟摇瓶培养3天，然后，按照10%体积比（V/V）接种到SDY液体培养基中，温度30℃在通气量为体积比1:1（v/v）的发酵罐中培养12天，得到液体培养物，即用于降低农残和杀虫的生物制剂。

PDB液体培养基配方为：去皮马铃薯200g及葡萄糖20.0g加水至1000mL。

SDY液体培养基，即葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白胨10g加水至1000mL。

4.3化学农药杀虫和粉棒束孢联合处理

对虫口密度大的害虫首先喷洒化学农药杀虫，根据化学农药使用剂量说明，将化学农药均匀喷洒在害虫爆发的植物上，待36h后，将前面收取液体培养物匀浆后稀释500倍，均匀喷洒到喷洒过农药的植物上。液体发酵物匀浆稀释液的用量为800L/hm

喷农药一周后农残降低87%；联合防治的田地中抗药虫的产生和害虫再生猖獗的几率降低96%。