Gemcitabine HCl化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用

技术领域

本发明抗病毒药物技术领域，具体涉及一种Gemcitabine HCl化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用。

背景技术

肠道病毒71型(EV71)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)成员，是引起婴幼儿手足口病的最主要病原体之一，有时伴有严重的中枢神经系统并发症，包括无菌性脑膜炎，脑炎，脊髓灰质炎样麻痹，神经性心肺衰竭等，甚至导致死亡。自1974年首次报道以来，EV71感染性疾病已在世界范围内多次爆发与流行，在亚太地区尤其是我国形势严峻。鉴于手足口病的传播流行给我国人民生命和健康带来的极大危害，我国政府已于2008年将手足口病列为丙类传染病纳入管理，并制定一系列相关法律法规，严控手足口病的流行传播。目前对于由EV71感染的疾病治疗没有特效药物，相关的疫苗于2015年才上市，其预防效果还有待进一步调查。因此开发特异有效的抗EV71药物势在必行。

Gemcitabine HCl是一种DNA synthesis抑制剂，作用于PANC1，MIAPaCa2，BxPC3和Capan2细胞，IC

发明内容

针对上述现状，本发明的目的是对Gemcitabine HCl关于EV71病毒的抑制活性进行了评估，旨在提供一种Gemcitabine HCl作为抗EV71病毒筛选化合物，即DNA synthesis抑制剂Gemcitabine HCl在制备抗EV71病毒药物中的应用。

为实现上述目的，本发明提供一种Gemcitabine HCl化合物在制备抗EV71病毒药物中的应用，其特征在于：所述Gemcitabine HCl化合物具有抗EV71活性，其化学结构式如下所示：

作为优选方案，所述Gemcitabine HCl化合物在3.125μM时对EV71的抑制率接近100％。

进一步地，所述应用是指Gemcitabine HCl化合物添加药剂学能接受的辅料和载体，用于制备抗EV71病毒的制剂。

更进一步地，所述制剂为颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中任一种。

本发明目的的实现方式为，Gemcitabine HCl通过标准的病毒活性测试方法来对其进行活性测试。

本发明的优点及有益效果如下：

本发明通过大量的生物学实验，发现Gemcitabine HCl具有抗EV71病毒的活性。具体表现为可以抑制EV71病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率，抑制EV71病毒在细胞内的复制增殖，降低子代病毒产量。由此表明这种化合物有潜力制备抗EV71感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

附图说明

图1是Gemcitabine HCl对于EV71作用的RD细胞存活率的影响。

图2是Gemcitabine HCl对于EV71引起的RD细胞CPE的抑制效应。

图3是Gemcitabine HCl对于EV71子代病毒产量的抑制作用。

图4是Gemcitabine HCl的化学结构式图。

具体实施方式

以下结合具体实施例及附图对本发明的技术方案作进一步地详细阐述。

本发明所用的Gemcitabine HCl自试剂公司。

本发明涉及Gemcitabine HCl在制备抗EV71病毒药物中的应用。

应用是指Gemcitabine HCl添加药剂学可接受的辅料和载体，用于制备抗EV71病毒的制剂。

制剂是颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂。

本发明的Gemcitabine HCl有以下的化学结构式。

本发明Gemcitabine HCl作为抗EV71病毒的应用，发现Gemcitabine HCl抗EV71病毒效果明显。由此表明这种化合物有潜力制备抗EV71感染的特异治疗药物，具有大的临床应用前景。

实施例1

本实施例对上述化合物进行了抗EV71活性研究实验，实验情况如下：在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

1、试验内容：

化合物抗EV71活性分析：本发明将结合细胞病变效应分析和MTT测定细胞存活率检测方法，对Gemcitabine HCl抗EV71活性进行评估。

2、试验方法：

2.1.1化合物对于宿主RD细胞的毒性

将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO

2.1.2化合物对于EV71的抑制活性

将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO

CPE观察完毕后，利用MTT方法检测药物对EV71的抑制率。具体步骤为：每孔加入MTT 50μL(5mg·mL-

2.1.3药物的治疗指数(TI)

TI＝CC50/EC50。治疗指数越高，说明抗病毒潜力越大。

3、实验结果

表1 Gemcitabine HCl细胞毒性及抗EV71活性

化合物细胞毒性及抗EV71活性测试结果如表1所示。浓度依赖的化合物(Gemcitabine HCl)对于EV71作用的RD细胞存活率的影响如图1所示，浓度依赖的化合物(Gemcitabine HCl)对于EV71引起的RD细胞CPE的抑制效应如图2所示。发现GemcitabineHCl在3.125μM时，最大抑制率接近100％。

实施例2

本实施例对Gemcitabine HCl进行了抗EV71活性的深入研究，实施了化合物对于EV71子代病毒产量的抑制作用试验，试验情况如下：

1、试验内容

检测在EV71感染RD细胞后，化合物对于EV71子代病毒产量的抑制作用。

2、试验方法

对数生长期的RD细胞铺板24孔板，长满单层后100TCID

3、试验结果

如图3所示，化合物处理的RD细胞相对于病毒对照组，其病毒滴度都有明显下降，相对于病毒对照下降超过6.5log。

综上所述，Gemcitabine HCl具有较强的抑制EV71活性，能够抑制EV71病毒引起的RD细胞病变效应，能制备成临床上有效对抗EV71感染的药物。