作为AM2受体抑制剂的杂环螺-化合物

本发明涉及作为AM

背景技术

肾上腺髓质素(AM)是具有重要生理学功能的激素，包括调节血压。然而，在许多疾病中AM下调，并且与多种多样的癌症例如胰腺癌的发展和进展有牵连(Adrenomedullin isinduced by hypoxia and enhances pancreatic cancer cell invasion[肾上腺髓质素被缺氧诱导并增强胰腺癌细胞侵袭].Keleg S,Kayed H,Jiang X,Penzel R,Giese T,Büchler MW,Friess H,Kleeff J.Int.J.Cancer[国际癌症期刊].2007年7月1日；121(1):21-32；Adrenomedullin and cancer[肾上腺髓质素和癌症].Zudaire E,Martínez A,Cuttitta F.Regulatory Peptides[调节肽].2003年4月15日；112(1-3):175-183；Adrenomedullin,a Multifunctional Regulatory Peptide[肾上腺髓质素，一种多功能调节肽].Hinson JP,Kapas S,Smith DM.Endocrine reviews[内分泌综述].2000；21(2):138-167)。

有两种肾上腺髓质素细胞表面受体复合物：肾上腺髓质素受体亚型1(AM

虽然AM

相比之下，AM

肿瘤分泌的肾上腺髓质素导致肿瘤周围的宿主组织中AM

已显示肾上腺髓质素及其受体的靶向在动物异种移植实验中是有效的。将AM肽拮抗剂(AM22-52)直接局部注射进入胰腺癌模型中的肿瘤，与对照相比，肿瘤大小显著减少(Adrenomedullin antagonist suppresses in-vivo growth of human pancreaticcancer cells in SCID mice by suppressing angiogenesis[肾上腺髓质素拮抗剂通过抑制血管生成而压制SCID小鼠中的人胰腺癌细胞的体内生长].Ishikawa T等人Oncogene[原癌基因].2003；22:1238-1242:DOI 10.1038/sj.onc.1206207)。

植入小鼠的过表达AM的胰腺细胞产生显著较大的肿瘤，而天然AM表达敲低的细胞具有较小的肿瘤。此外，具有AM敲低细胞的动物中的转移几乎不存在(Ishikawa T等人2003)。

在人癌症中，肿瘤周围的宿主组织中的AM

在临床试验中，无论肿瘤阶段、分化、可手术性和糖尿病的存在如何，在胰腺癌患者中观察到血清AM水平相比于对照升高(A Star of Connection Between PancreaticCancer and Diabetes:Adrenomedullin[胰腺癌和糖尿病之间的联系之星：肾上腺髓质素].

伴随着2型糖尿病的非典型发展的升高的血清AM水平也已显示预测早期胰腺癌(Kaafarani I等人Targeting adrenomedullin receptors with systemic delivery ofneutralizing antibodies inhibits tumour angiogenesis and suppresses growth ofhuman tumour xenografts in mice[在小鼠中靶向肾上腺髓质素受体伴随中和抗体全身递送抑制肿瘤血管生成并压制人肿瘤异种移植物的生长].FASEB J.[FASEB期刊]2009年6月22日:DOI:10.1096/fj.08-127852)。

因此，抑制AM

胰腺癌是一种毁灭性的疾病，其在诊断6个月内杀死大多数患者。在胰腺癌中少于20％的一年存活率与大多数被诊断第一次呈现出晚期疾病(此时间点没有有效的寿命延长治疗)的患者一致。在诊断在早期的情况下，手术切除是优选的治疗选项，肿瘤切除随后通常是化疗(例如细胞毒性疗法，包括吉西他滨或5-氟尿嘧啶和EGF受体酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼)。然而，由于早期诊断困难，大多数当前疗法和管理策略都集中在支持性化疗，对生命延长的预期非常有限。此外，胰腺癌从免疫学视角看是高度不寻常的，意味着当前疗法到免疫肿瘤学疗法如PDL-1抑制剂很大程度上对胰腺癌无效(From bench to bedside acomprehensive review of pancreatic cancer immunotherapy[胰腺癌免疫疗法的从实验室到临床综合评论].Kunk PR,Bauer TW,Slingluff CL,Rahma OE.Journal forImmunoTherapy of Cancer[癌症免疫疗法期刊].2016；4:14:DOI 10.1186/s40425-016-0119-z；Recent Advancements in Pancreatic Cancer Immunotherapy[胰腺癌免疫疗法的最新进展].Ma Y等人Cancer Research Frontiers[癌症研究前沿].2016年5月；2(2):252-276:DOI 10.17980/2016.252)。因此需要针对胰腺癌的新治疗。

WO 2008/127584描述了可用于治疗偏头痛和头痛的某些化合物，其被称为CGRP(降钙素基因相关肽)拮抗剂。

某些肽和抗体AM

在本申请的优先权日期后公开的WO 2018/211275描述了作为AM

然而，仍然需要新的作为AM

发明内容

根据本发明，提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O、S和N的环杂原子的4至9元饱和或部分饱和杂环基；

L不存在或是-C(R

每个R

X

X

L

R

Q

其中所述环烷基、环烯基和杂环基任选地被一个或多个R

其中所述芳基和杂芳基任选地被一个或多个R

L

R

R

R

R

R

R

R

R

卤基、＝O、＝NR

其中所述C

其中R

R

卤基、-CN、-NO

其中所述C

其中R

Q

其中所述C

其中所述C

L

R

卤基、＝O、-CN、-NO

其中所述C

R

卤基、-CN、-NO

其中所述C

Q

其中Q

其中Q

L

R

或取代基内的任何-NR

q是选自0、1、2、3和4的整数。

还提供了包含本发明的化合物、或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。在一些实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM

还提供了一种治疗有需要的受试者中由AM

在某些实施例中，本发明的化合物用于治疗增生性疾病，例如癌症。在某些实施例中，本发明的化合物用于预防或抑制癌症进展，例如通过预防或抑制癌细胞迁移和/或预防或抑制癌症转移。

还提供了用于治疗癌症的本发明的化合物，其中AM和/或AM

本发明的化合物可以单独使用或与本文所述的一种或多种抗癌剂和/或放射疗法组合使用。

附图说明

图1显示了本文所例示的化合物SHF-1041在实例中描述的异种移植小鼠模型中的作用。将小鼠用CFPAC-1细胞(衍生自导管腺癌的细胞(例如ATCC))接种。该图显示了与对照相比在24天每日腹膜内(i.p.)给予5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量的SHF-1041后的％肿瘤体积生长。

具体实施方式

定义

除非另有说明，否则说明书和权利要求书中使用的以下术语具有下文陈述的以下含义。

术语“治疗”(“treating”或“treatment”)是指成功治疗或减轻疾病、病变或病症的任何征候，包括任何客观或主观参数，例如症状的消除、缓解；减弱症状或使患者更能忍受病变或病症；减慢退化或衰退的速度；使退化终点不那么令人虚弱；改善患者的身体或心理健康。例如，本文的某些方法通过减少癌症的症状来治疗癌症。癌症的症状将是已知的或可由本领域普通技术人员确定。术语“治疗”及其词形变化形式包括预防病变、病症或疾病(例如预防与AM

在与疾病(例如癌症)相关的物质或物质活性或功能的上下文中，术语“相关”或“与……相关”意指该疾病(例如癌症)是由(全部或部分)或该疾病的症状是由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起的。例如，与AM

如本文所定义的，提及蛋白质抑制剂(例如拮抗剂)相互作用时，术语“抑制(inhibition/inhibit/inhibiting等)”意指相对于不存在该抑制剂的情况下蛋白质通路的活性水平或功能，负面影响(例如降低)蛋白质(例如AM

贯穿本说明书的描述和权利要求，词语“包括”和“包含”以及它们的变型意指“包括但不限于”，并且它们并不旨在(并且并不)排除其他部分、添加剂、组分、整数或步骤。贯穿本说明书的描述和权利要求，除非上下文另有要求，否则单数涵盖复数。特别地，当使用不定冠词时，除非上下文另有要求，否则本说明书应被理解为考虑到复数以及单数。

术语“卤基”或“卤素”是指周期表第17族的其中一种卤素。特别地，该术语是指氟、氯、溴和碘。优选地，该术语是指氟或氯。

术语C

术语“C

术语“C

术语“C

术语“C

术语“C

术语“C

术语“杂环基”、“杂环的”或“杂环”包括非芳族的饱和或部分饱和的单环的或稠合的、桥接的或螺双环的杂环环系统。单环杂环环可含有约3至12(适当地3至7个)环原子，在环中具有1至5(适合地1、2或3)个选自氮、氧或硫的杂原子。双环杂环在环中可以含有7至12个成员原子。双环杂环环可以是稠合环系统、螺环系统或桥环系统。杂环基基团可以是3-12元，例如3至9(例如，3至7)元非芳族单环或双环饱和或部分饱和基团，其在环系统中包含1、2或3个独立地选自O、S和N的杂原子(换句话说，形成环系统的原子中的1、2或3个选自O、S和N)。部分饱和意指该环可包含一个或两个双键。这特别适用于5至7元的单环环。双键典型地在两个碳原子之间，但可以在碳原子和氮原子之间。双环系统可以是螺稠合的，即环通过单个碳原子彼此连接；邻接稠合的，即环通过两个相邻的碳或氮原子彼此连接；或者它们可以共享桥头，即环通过两个非相邻的碳或氮原子(桥环系统)彼此连接。杂环基团的实例包括环醚，如环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二噁烷基和经取代的环醚。在环位置包含至少一个氮的杂环包括，例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢三嗪基、四氢吡唑基、四氢吡啶基、高哌啶基，高哌嗪基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚基等。典型的含硫杂环包括四氢噻吩基、二氢-1,3-二硫醇、四氢-2H-噻喃和六氢噻呯(hexahydrothiepine)。其他杂环包括二氢-氧杂硫醇基(oxathiolyl)、四氢噁唑基、四氢噁二唑基、四氢二噁唑基、四氢氧杂噻唑基、六氢三嗪基、四氢噁嗪基、四氢嘧啶基、二氧戊环基(dioxolinyl)、八氢苯并呋喃基、八氢苯并咪唑基和八氢苯并噻唑基。对于含硫的杂环，还包括含有SO或SO

术语“桥环系统”包括其中两个环共享多于两个原子的环系，参见例如AdvancedOrganic Chemistry[高等有机化学]，由Jerry March编辑，第4版，威利国际科学出版社(Wiley Interscience)，第131-133页，1992。适合地，桥形成在环系统中的两个非相邻的碳或氮原子之间。连接桥头原子的桥可以是键或包含一个或多个原子。桥接的杂环基环系统的实例包括氮杂-双环并[2.2.1]庚烷、2-氧杂-5-氮杂双环并[2.2.1]庚烷、氮杂-双环并[2.2.2]辛烷、氮杂-双环并[3.2.1]辛烷和奎宁环。

术语“螺双环环系统”包括其中两个环系统共享一个共同的螺碳原子的环系统，即杂环通过单个共同的螺碳原子与另一个碳环或杂环环连接。螺环环系统的实例包括3,8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷、6-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷、2,7-二氮杂-螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷和2-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷。

“杂环基-C

“被-NRR取代的-C

当整体应用于取代基时，术语“芳族”包括在环或环系统内的共轭π体系中具有4n+2个电子的单环或多环环系统，其中所有对共轭π体系起作用的原子都在同一平面内。

术语“芳基”包括芳族烃环系统。该环系在环内的共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统起作用的原子都在同一平面内。例如，“芳基”可以是苯基和萘基。芳基系统本身可以被其他基团取代。

术语“杂芳基”包括掺入一个或多个(例如1-4个，特别是1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子的芳族单环或双环环。该环或环系在环内的共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统起作用的原子都在同一平面内。

杂芳基基团的实例是含有五至十二个环成员，并且更通常是五至十个环成员的单环和双环基团。杂芳基基团可以是例如5元或6元单环环或者9元或10元双环环，例如由稠合的五元和六元环或两个稠合的六元环形成的双环结构。每个环可以含有至多约四个典型地选自氮、硫和氧的杂原子。典型地，杂芳基环将含有至多3个杂原子，更通常至多2个，例如单个杂原子。在一个实施例中，杂芳基环含有至少一个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可以是碱性的，如在咪唑或吡啶的情况下那样，或基本上非碱性的，如在吲哚或吡咯氮的情况下那样。一般而言，存在于杂芳基基团(包括环的任何氨基基团取代基)中的碱性氮原子的数目将小于五。

杂芳基的实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、蝶啶基、萘啶基、咔唑基、吩嗪基、苯并异喹啉基、吡啶并吡嗪基、噻吩并[2,3-b]呋喃基、2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、1H-吡唑并[4,3-d]-噁唑基、4H-咪唑并[4,5-d]噻唑基、吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、咪唑并[2,1-b]噻唑基和咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基。在环的位置包含至少一个氮的杂芳基基团的实例包括吡咯基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋喃氮基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基和蝶啶基。“杂芳基”还涵盖部分芳族的二环或多环环系统，其中至少一个环是芳族环，并且一个或多个其他环是非芳族的、饱和或部分饱和的环，条件是至少一个环含有一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子。部分芳族杂芳基基团的实例包括例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基、2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯基、2,2-二氧代-1,3-二氢-2-苯并噻吩基、4,5,6,7-四氢苯并呋喃基、二氢吲哚基、1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基、1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪基和3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪基。

五元杂芳基基团的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋咱基、噁唑基、噁二唑基、氧杂三唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、三唑基和四唑基基团。

六元杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基和三嗪基。

包含与五元环稠合的六元环的双环杂芳基基团的特定实例包括但不限于：苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、异苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、嘌呤基(例如，腺嘌呤基、鸟嘌呤基)、吲唑基、苯并二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、吡咯并吡啶、和吡唑并吡啶基基团。

含有两个稠合六元环的双环杂芳基基团的特定实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、色满基、硫代色满基、色烯基、异色烯基、色满基、异色满基、苯并二噁烷基、喹嗪基、苯并噁嗪基、苯并二嗪基、吡啶并吡啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基和蝶啶基基团。

如本文所用，术语“氧代”或“＝O”意指与碳原子双键键合的氧。

术语“任选地取代”包括被取代的基团、结构或分子以及未被取代的基团、结构或分子。

当任选的取代基选自“一个或多个”基团时，应当理解，该定义包括选自指定基团之一的所有取代基或选自两个或更多个指定基团的取代基。

当一个部分被取代时，在化学上可能且与原子价要求一致的情况下，可以在该部分的任何点上取代。该部分可以被一个或多个取代基，例如1、2、3或4个取代基取代；任选地，基团上存在1或2个取代基。当存在两个或更多个取代基时，这些取代基可以是相同的或不同的。

取代基仅存在于它们在化学上可能的位置，本领域技术人员能够不费力地决定(实验上或理论上)在化学上可能的取代和在化学上不可能的取代。

邻位、间位和对位取代是本领域众所周知的术语。毫无疑问，“邻位”取代是相邻碳原具有取代基的取代模式，无论是单一基团(例如以下实例中的氟基基团)还是分子的其他部分，如以

“间位”取代是其中两个取代基在碳上，彼此隔开一个碳，即在取代的碳之间具有单个碳原子的取代模式。换句话说，第二个原子上有一个取代基，远离具有另一个取代基的原子。例如，下面的基团是间位取代的：

“对位”取代是其中两个取代基在碳上，彼此隔开两个碳，即在取代的碳之间具有两个碳原子的取代模式。换句话说，第三个原子上有一个取代基，远离具有另一个取代基的原子。例如，下面的基团是对位取代的：

提及形成4至6元杂环基的-NRR'基团是指R和R'与它们所附接的氮原子一起形成4至6元杂环基基团。例如，-NRR”如-NR

类似地，取代基内的-NRR'基团可以形成羰基连接的4至6元杂环基，例如-C(O)NRR'或基团可形成：

取代基如-OC(O)NRR'、-SO

HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O、S和N的环杂原子的4至9元饱和或部分饱和杂环基。提及“含有1个环氮”的杂环基是指HET中的N(R

提及R

其中A是C

亚烷基桥(例如上文的-A-)可以是直链或支链的，例如-CH

亚烷基桥的末端碳原子与HET中2个不同的可用环原子键合。优选地，亚烷基桥附接到HET中的非相邻环原子。除非另有说明，否则在R

如将认可的，提及“含有1个环氮杂原子”的HET是指NR

短语“本发明的化合物”意指本文中总体上和具体地披露的那些化合物。因此，本发明的化合物包括式(I)(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)和(VIII)的化合物和实例中的化合物。

以

结合本发明的特定方面、实施例或者实例一起描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应被理解为可适用于本文所描述的任何其他方面、实施例或实例，除非与之不相容。在本说明书中所披露的所有特征(包括任何所附权利要求书、摘要以及附图)和/或如此披露的任何方法或过程的所有步骤可以按任何组合的形式组合，这类特征和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合除外。本发明并不限于任何前述实施例的细节。本发明扩展到本说明书(包括任何所附权利要求书、摘要以及附图)中所披露的特征的任何新颖特征或任何新颖组合，或扩展到如此披露的任何方法或过程的步骤的任何新颖步骤或任何新颖组合。

读者的关注点是针对与本说明书同时或在本说明书之前连同本申请一起提交并且与本说明书一起开放以供公众检验的所有论文和文献，并且所有这类论文和文献的内容通过引用并入本文。

典型地选择构成本发明化合物的各种官能团和取代基，使得化合物的分子量不超过1000。更通常地，该化合物的分子量将小于750，例如小于700、或小于650、或小于600、或小于550。更优选地，分子量小于585，并且例如为575或更小。

本发明任何化合物的适合或优选特征也可以是任何其他方面的适合特征。

本发明考虑到本发明化合物的药学上可接受的盐。这些盐可以包括这些化合物的酸加成盐和碱式盐。这些盐可以是这些化合物的酸加成盐和碱式盐。

适合的酸加成盐由形成无毒的盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酚盐、1,5-萘二磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸/磷酸二氢盐、糖质酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

适合的碱式盐由形成无毒的盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、环匹罗司乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐以及锌盐。也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。关于适合的盐的综述，参见"Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use[药物盐手册：性质、选择和使用]",Stahl和Wermuth(Wiley-VCH[威利-VCH出版社],魏因海姆,德国,2002)。

本发明化合物的药学上可接受的盐可以通过例如以下一种或多种方法制备：

(i)通过使本发明的化合物与所需的酸或碱反应；

(ii)通过从本发明化合物的适合前体中去除酸或碱不稳定的保护基，或通过使用所需的酸或碱将适合的环状前体例如内酯或内酰胺开环；或

(iii)通过与适当的酸或碱反应或借助于适合的离子交换柱将本发明化合物的一种盐转化为另一种盐。

这些方法典型地在溶液中进行。所得的盐可以沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。所得的盐中的电离度可以从完全电离到几乎未电离变化。

具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序或者其原子在空间中的排列不同的化合物称为“异构体”。术语“立体异构体”是其原子在空间排列上不同的异构体。彼此不成镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，并且彼此是不能重叠的镜像的立体异构体称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心，例如，该不对称中心键合到四个不同的基团时，可能有一对对映异构体。对映异构体可以其不对称中心的绝对构型来表征，并且通过Cahn和Prelog的R-和S-测序规则、或通过分子旋转偏振光平面的方式被描述并指定为右旋或左旋的(即，分别作为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体或其混合物存在。含有相等比例对映异构体的混合物称为“外消旋混合物”。当本发明的化合物具有两个或更多个立体中心时，可以考虑(R)和(S)立体异构体的任何组合。(R)和(S)立体异构体的组合可以产生非对映异构体混合物或单一非对映异构体。本发明的化合物可以作为单一立体异构体存在或者可以是立体异构体的混合物，例如外消旋混合物和其他对映异构体混合物，以及非对映异构体混合物。当混合物是对映异构体的混合物时，对映异构体过量可以是上文披露的任何对映异构体。当化合物是单一立体异构体时，化合物仍可含有其他非对映异构体或对映异构体作为杂质。因此，单一立体异构体不一定具有100％的对映异构体过量(e.e.)或非对映异构体过量(d.e.)，但是可以具有至少约85％的e.e.或d.e.，例如至少90％、至少95％或至少99％。

本发明的化合物可具有一个或多个不对称中心；因此，此类化合物可以作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或其混合物生成。除非另有说明，否则说明书和权利要求书中对特定化合物的描述或命名旨在包括单独的对映异构体及其外消旋混合物或其他混合物。用于立体化学测定和立体异构体分离的方法在本领域中是众所周知的(参见“AdvancedOrganic Chemistry[高等有机化学]”中第4章的讨论，第4版，J.March，约翰·威利父子出版公司(John Wiley and Sons)，纽约(New York)，2001)，例如通过从光学活性原材料合成或通过拆分外消旋形式。本发明的一些化合物可以具有几何异构中心(E-和Z-异构体)。应当理解，本发明涵盖具有AM

Z/E(例如顺式/反式)异构体可以通过本领域技术人员众所周知的常规技术分离，例如色谱和分步结晶。

必要时，用于制备/分离各个对映体的常规技术包括由适合的光学纯前体进行手性合成，或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)拆分外消旋体(或者盐或衍生物的外消旋体)。因此，本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(典型地是HPLC)在不对称树脂上以对映体富集形式获得，该色谱法具有由烃(典型地是庚烷或己烷)组成的流动相，该烃含有从0体积％至50体积％的异丙醇(典型地从2％至20％)，以及对于具体实例，从0体积％至5体积％的烷基胺(例如0.1％二乙胺)。浓缩洗脱液得到富集的混合物。

可替代地，该外消旋体(或外消旋前体)可以与一种适合的旋光化合物(例如，醇)反应，或在本发明的化合物包含酸性或碱性部分的情况下，与碱或酸(如1-苯乙胺或酒石酸)反应。所得的非对映异构体混合物可以通过色谱和/或分部结晶分离，并且一种或全部两种非对映异构体通过技术人员众所周知的方式转化为相应的一种或多种纯对映异构体。

当任何外消旋体结晶时，两种不同类型的晶体都是可能的。第一种类型是上文提及的外消旋化合物(真正的外消旋体)，其中产生一种均匀形式的晶体，其含有等摩尔量的两种对映体。第二种类型是外消旋混合物或聚集物，其中以等摩尔量产生两种形式的晶体，每种形式包含单一对映体。

尽管存在于外消旋混合物中的两种晶型具有相同的物理特性，但与真正的外消旋体相比可能具有不同的物理特性。外消旋混合物可以通过本领域技术人员已知的常规技术分离—参见例如E.L.Eliel和S.H.Wilen所著的“Stereochemistry of Organic Compounds[有机化合物的立体化学]”(威利出版社(Wiley)，1994年)。

本说明书中描述的化合物和盐可以是同位素标记的(或“放射性标记的”)。因此，一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界典型地发现的原子质量或质量数的原子置换。可掺入的放射性核素的实例包括

同位素标记化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术、或通过类似于所述那些的方法使用合适的同位素标记试剂代替先前采用的非标记试剂来制备。

化合物中氢被氘选择性置换可调节化合物的代谢、化合物的PK/PD特性和/或化合物的毒性。例如，氘化可以增加体内化合物的半衰期或减少体内化合物的清除。氘化还可以抑制有毒代谢产物的形成，从而提高安全性和耐受性。应当理解，本发明涵盖具有式(I)的化合物的氘化衍生物。如本文所用，术语氘化衍生物指的是在特定位置至少有一个氢原子被氘置换的本发明化合物。例如，C

某些本发明化合物可以以溶剂化形式以及非溶剂化形式(例如像水合形式)存在。应当理解，本发明涵盖具有AM

还应当理解，本发明的某些化合物可以展现出多态性，并且本发明涵盖具有AM

本发明的化合物可以以许多不同的互变异构形式存在，并且提及本发明的化合物包括所有此类形式。为避免疑义，在化合物可以以几种互变异构形式中的一种存在，并且只明确描述或示出一种的情况下，所有其他形式仍然包括在本发明的化合物中。互变异构体形式的实例包括酮、烯醇和烯醇化物形式，例如，在以下互变异构体对中那样：酮/烯醇(在下文中示出)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇和硝基/酸式硝基。

本发明的化合物的体内作用可以部分地通过一种或多种代谢产物来发挥，这些代谢产物是在施用本发明的化合物后在人或动物体内形成的。

还应当理解，具有式(I)的化合物的适合的药学上可接受的前药也构成本发明的一个方面。因此，本发明的化合物涵盖这些化合物的前药形式，且本发明的化合物可以以前药物的形式施用(即在人体或动物体内分解以释放本发明化合物的化合物)。可以使用前药来改变本发明化合物的物理特性和/或药代动力学特性。当本发明的化合物含有改性基团(property-modifying group)可以附接的适合的基团或取代基时，可以形成前药。前药的实例包括可以在本发明的化合物中的羧基基团或羟基基团处形成的可体内切割的酯衍生物和可以在本发明的化合物中的羧基基团或氨基基团处形成的可体内切割的酰胺衍生物。

因此，本发明包括当可通过有机合成获得时以及当可通过裂解其前药的方式在人或动物体内获得时如本文定义的本发明的那些化合物。因此，本发明包括通过有机合成手段产生的那些具有式(I)的化合物，并且还包括通过代谢前体化合物的方式在人体或动物体中产生的这类化合物，即，可以是合成产生的化合物或代谢产生的化合物的具有式(I)的化合物。

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药是基于合理的医学判断作为适合于向人或动物体施用而没有不希望的药理学活性并且没有异常毒性的药学上可接受的前药。

例如，在下列文献中，已经描述了各种形式的前药：-

a)Methods in Enzymology[酶学方法],第42卷,p.309-396,K.Widder等人编(学术出版社(Academic Press,1985)；

b)Design of Pro-drugs[前药设计],H.Bundgaard编(爱思唯尔出版社(Elsevier),1985)；

c)A Textbook of Drug Design and Development[药物设计和开发教科书],由Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编,第5章“Design and Application of Pro-drugs[前药的设计和应用]”,H.Bundgaard第113-191页(1991)；

d)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews[高级药物递送评论]，8，1-38(1992)；

e)H.Bundgaard等人，Journal of Pharmaceutical Sciences[药物科学杂志]，77,285(1988)；

f)N.Kakeya等人，Chem.Pharm.Bull.[化学与药学通报],32,692(1984)；

g)T.Higuchi和V.Stella，“Pro-Drugs as Novel Delivery Systems[前药作为新颖递送系统]”，A.C.S.Symposium Series[A.C.S.研讨会系列]，第14卷；以及

h)E.Roche(编辑)，“Bioreversible Carriers in Drug Design[药物设计中的生物可逆性载体]”，培格曼出版社(Pergamon Press)，1987。

具有化学式I的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有羧基基团)是例如其可体内裂解的酯。包含羧基基团的本发明的化合物的可体内裂解的酯是例如在人或动物体中切割以产生母体酸的药学上可接受的酯。羧基的适合的药学上可接受的酯包括C

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有羟基基团)是例如其可体内裂解的酯或醚。包含羟基基团的本发明的化合物的可体内裂解的酯或醚是例如在人或动物体中切割以产生母体羟基化合物的药学上可接受的酯或醚。羟基基团的适合的药学上可接受的酯形成基团包括无机酯，诸如磷酸酯(包括磷酰胺环酯)。羟基基团的其他适合的药学上可接受的酯形成基团包括：C

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有羧基基团)是例如，其可体内切割的酰胺，例如由胺(如氨、C

本发明的化合物的适合的药学上可接受的前药(该前药具有氨基基团)是例如其可体内裂解的酰胺或氨基甲酸酯衍生物。来自氨基基团的适合的药学上可接受的酰胺包括例如用C

化合物

以下段落适用于本发明的化合物。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物，HET通过HET中的环碳原子与式(I)中的-L-N(C(＝O)L

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(II)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

a是选自0、1和2的整数；

b是选自1、2、3和4的整数。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(III)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中b是选自1、2和3的整数。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(IV)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中b是选自1、2和3的整数。

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(V)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VI)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VII)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R

R

或R

其中所述C

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIII)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，R

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，q是0、1或2，并且R

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，q是0。

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，X

在任何具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物的某些实施例中，X

在某些实施例中，本发明的化合物包括，例如，具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物，或其药学上可接受的盐，除非另有说明，其中R

1.HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O和N的环杂原子的4至7元饱和或部分饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

2.HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O和N的环杂原子的4至7元饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

3.HET是含有1个环氮杂原子和任选地1个另外的选自O和N的环杂原子的4至7元部分饱和杂环基环，其中HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合。

4.HET是含有1个环氮杂原子(即NR

5.HET是含有1个环氮杂原子(即NR

6.HET选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、高哌啶基、高哌嗪基和高吗啉基，

其中：

(i)HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合；

(ii)HET中的一个或多个环氮原子被R

(iii)HET任选地被1、2、3或4个R

7.HET选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和高哌啶基，

其中：

(i)HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合；

(ii)HET中的环氮原子被R

(iii)HET任选地被1、2、3或4个R

8.HET是高哌啶基，

其中：

(i)HET通过HET中的环碳原子与式(I)的其余部分键合；

(ii)HET中的环氮原子被R

(iii)HET任选地被1、2、3或4个R

9.HET是：

其中a是选自0、1和2的整数(适合地，a是1或2)，b是选自1、2、3和4的整数，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

10.HET是：

其中a是选自0、1和2的整数，b是选自1、2、3和4的整数，总和a+b为2至7，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

11.HET是：

其中b是选自1、2、3和4的整数，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

12.HET是：

其中b是选自2、3和4的整数，并且*显示与该化合物的其余部分的附接点。

13.HET选自

其中A是C

14.HET是

其中A是C

15.HET选自：

其中A是C

16.HET选自：

其中A是C

17.HET选自：

其中A是C

18.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

19.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

20.HET选自

其中A是C

21.HET选自：

其中A是C

22.HET选自：

其中A是C

23.HET是

24.HET选自：

其中A是C

25.HET选自：

其中A是C

26.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

27.HET是

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

28.HET是：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

29.HET选自：

其中A是C

30.HET选自：

其中A是C

31.HET选自：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

32.HET选自：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

33.HET选自：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

34.Het是：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

35.HET是：

其中*显示与该化合物的其余部分的附接点。

36.HET是如上文(1)至(31)中任一项所定义的；R

37.HET是如上文(1)至(31)中任一项所定义的；R

38.HET是如上文(1)至(31)中任一项所定义的；R

39.R

40.R

41.q是选自0、1或2的整数。

42.q是0。

43.R

44.R

45.R

46.L不存在或是-CH

47.L不存在。

48.L是-CH

49.L不存在，并且HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的。

50.L是-CH

51.L是-C(R

其中A是C

52.R

Q

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R

L

R

卤基、＝O、-CN、C

其中所述C

其中R

Q

其中所述C

其中所述苯基、苯基-C

L

R

卤基、＝O、-CN、C

R

卤基、-CN、C

其中所述C

Q

其中Q

其中Q

L

53.R

Q

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R

L

R

卤基、＝O、-CN、C

其中所述C

其中R

R

被1个或2个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

其中所述4至7元杂环基具有1或2个选自O、S和N的杂原子，

其中所述C

其中所述苯基、苯基-C

L

R

卤基、＝O、-CN、C

R

卤基、-CN、C

54.R

Q

其中所述环烷基和杂环基任选地被一个或多个R

L

R

卤基、＝O、-CN、C

其中所述C

其中R

R

被1个或2个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

其中Q

其中所述C

其中所述苯基、苯基-C

L

R

卤基、＝O、-CN、C

R

卤基、-CN、C

55.R

其中所述C

其中所述C

L

Q

其中Q

其中所述C

其中所述苯基、苯基-C

56.R

其中所述4至6元杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基和吗啉基，

其中所述5或6元杂芳基选自：呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基，

其中所述C

其中所述杂环基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：＝O、卤基、C

其中所述苯基或杂芳基任选地被一个或多个(例如1个或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C

57.R

58.R

59.R

C

并且所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基任选地在环碳上被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、＝O、C

R

R

其中R

60.L

61.R

R

Q

其中Q

62.R

63.R

64.R

其中

R

R

R

或R

Q

Q

Q

其中Q

其中Q

65.R

其中

R

R

或R

66.R

其中

R

R

67.R

其中*显示与-L

68.R

其中

A是C

R

R

其中所述C

R

其中所述C

R

R

H、C

被1个或2个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

其中所述4至6元杂环基含有1或2个选自以下的杂原子：O、S和N，

其中所述C

其中所述苯基、苯基-C

L

R

R

q1是选自以下的整数：0、1、2、3和4；

条件是，当L

69.R

其中R

70.R

其中R

71.R

R

其中所述C

R

R

H、C

被1个或2个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

Q

其中

Q

Q

Q

其中所述Q

L

R

R

条件是，当L

72.R

R

其中所述C

R

R

H、C

被1个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

Q

其中

Q

Q

Q

其中所述Q

L

R

R

并且

R

条件是，当L

73.R

74.R

75.R

76.R

77.R

78.R

79.R

80.R

其中*指示R

81.R

82.R

83.L

其中R

R

q1是选自0、1、2、3和4的整数。

84.R

其中*显示与-L

85.R

其中*显示与-L

86.R

87.L

88.L

89.L

90.L

91.L

92.L

93.R

94.R

95.R

96.R

97.R

98.R

99.X

100.X

101.X

102.X

103.X

104.X

105.X

106.X

107.X

108.X

109.X

110.X

111.X

112.

113.

114.

115.

116.

117.

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

HET选自：

其中A是C

R

R

q是0、1或2(优选地q是0)；

L和L

R

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

HET选自：

其中A是C

R

R

q是0、1或2(优选地q是0)；

L和L

R

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

R

其中所述C

R

R

H、C

被1个或2个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

Q

其中

Q

Q

Q

其中所述Q

L

R

R

条件是，当L

R

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；

q1是选自0、1和2的整数；

并且

R

适合地，在此实施例中，L

适合地，在此实施例中，R

适合地，在此实施例中，R

在此实施例中，R

在此实施例中，R

在此实施例中，R

在此实施例中，R

适合地，在此实施例中，R

在某些实施例中，提供了具有式(I)的化合物，其中：

R

L和L

HET是如上文(1)至(38)中任一项所定义的；并且

R

在某些实施例中，提供了具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物，其中基团：

在某些实施例中，提供了具有式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的化合物，其中基团：

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(IIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

a是选自0、1和2的整数；

b是选自1、2、3和4的整数；并且

R

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(IIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

b是选自1、2、3和4的整数；并且

R

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(Va)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R

在某些实施例中，具有式(I)的化合物是根据式(VIIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中R

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)或(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R

R

其中所述C

R

R

H、C

被1个或2个选自以下的取代基取代的C

被1个选自以下的取代基取代的C

Q

Q

其中

Q

Q

Q

其中所述Q

L

R

R

条件是，当L

R

R

q1是选自0、1和2的整数。

适合地，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，L

适合地，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R

适合地，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R

在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R

在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R

在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物的这些实施例中，R

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)或(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R

其中所述C

Q

适合地，在此实施例中，L

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)或(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R

其中所述C

Q

适合地，在此实施例中，L

在某些实施例中，在具有式(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)、(IV)、(V)、(Va)、(VI)和(VIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，其中：

R

R

R

X

R

R

q是选自以下的整数：0、1和2。

适合地，在这些实施例中，q是0。

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中：

R

R

或R

氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌啶基和高哌嗪基，它们中的每个任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤基、C

R

Q

其中Q

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中：

R

R

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，R

在某些实施例中，在具有式(VII)和(VIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，基团-C(R

在某些实施例中，在本文所述的具有式(VII)、(VIIa)、(VIII)或(VIIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，X

在某些实施例中，在本文所述的具有式(VII)、(VIIa)、(VIII)或(VIIIa)的化合物或其药学上可接受的盐中，可以是如下情况：

R

R

X

R

R

q是选自以下的整数：0、1和2(例如q是0)。

在另一个实施例中，提供了选自列表1的化合物，或其药学上可接受的盐，或其前药：

列表1

在另一个实施例中，提供了选自本文任一个实例的化合物，或其药学上可接受的盐，或其前药。

当在实例中描述的AM

药物组合物

根据另一方面，本发明提供了包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

用于选择和制备适合的药物组合物的常规程序在例如“Pharmaceuticals-TheScience of Dosage Form Designs[药物-剂型设计科学]”,M.E.Aulton,丘吉尔利文斯敦出版公司(Churchill Livingstone),1988中有所描述。

本发明的组合物可以为适于以下方式使用的形式：口服使用(例如作为片剂、锭剂、硬胶囊或软胶囊、水性或油性混悬剂、乳剂、可分散性粉剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)，局部使用(例如作为霜剂、软膏剂、凝胶，或者水性或油性溶液剂或混悬剂)，通过吸入施用(例如作为细粉或液体气溶胶剂)，通过吹入施用(例如作为细粉)或肠胃外施用(例如作为用于静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内给药的无菌水性或油性溶液剂，或者作为用于直肠给药的栓剂)。

本发明的组合物可以使用常规药物赋形剂，通过本领域众所周知的常规程序获得。因此，旨在口服使用的组合物可以包含例如一种或多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。

用于病症的疗法中的本发明的化合物的有效量是足以在症状上缓解温血动物(特别是人)的病症症状或足以减缓病症进展的量。

与一种或多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量必定将取决于所治疗的宿主和特定施用途径而变化。例如，旨在向人类口服施用的配制品将通常含有例如与适当且便利的量的赋形剂(按总组合物的重量计可以从约5％变化至约98％)配混的0.1mg至0.5g(更适合地0.5mg至100mg，例如1mg至30mg)的活性剂。

本发明的化合物的用于治疗目的或预防目的的剂量的大小将根据病症的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及施用途径，根据众所周知的医学原理而自然地变化。

在使用本发明的化合物用于治疗目的或预防目的时，通常这样施用该化合物：使得如果需要分剂量，则接受在一定范围内的日剂量，例如选自0.1mg/kg体重至100mg/kg体重、1mg/kg体重至750mg/kg体重、1mg/kg体重至600mg/kg体重、1mg/kg体重至550mg/kg体重、1mg/kg体重至75mg/kg体重、1mg/kg体重至50mg/kg体重、1mg/kg体重至20mg/kg体重或5mg/kg体重至10mg/kg体重的日剂量。一般来讲，当采用肠胃外途径时，将施用较低的剂量。因此，例如，对于静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内施用，通常将使用在例如0.1mg/kg至30mg/kg体重范围内的剂量。在某些实施例中，本发明的化合物是静脉内施用的，例如，日剂量为1mg/kg至750mg/kg、1mg/kg至600mg/kg、1mg/kg至550mg/kg或5mg/kg至550mg/kg，例如约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、180、200、225、250、275、300、350、400、450、500、540、550或575mg/kg。类似地，对于通过吸入施用，将使用例如0.05mg/kg体重至25mg/kg体重范围内的剂量。适合地，本发明的化合物口服施用，例如以片剂或胶囊剂型的形式。口服施用的日剂量可以是例如选自1mg至1000mg、5mg至1000mg、10mg至750mg或25mg至500mg的总日剂量。典型地，单位剂型将含有约0.5mg至0.5g的本发明化合物。在特定实施例中，本发明的化合物是通过胃肠外方式施用的，例如通过静脉内施用。在另一个特定实施例中，本发明的化合物是通过口服施用的。

治疗用途及应用

根据另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。

本发明的另一方面提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM

还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐在生产用于治疗由AM

还提供了一种治疗有需要的受试者中由AM

在本申请的以下部分中，提及用于治疗某些疾病或病症的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。应当理解，本文针对特定用途对化合物的任何提及也旨在提及(i)本发明的化合物或其药学上可接受的盐在生产用于治疗该疾病或病症的药物中的用途；以及(ii)治疗受试者中的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

AM

施用本发明的化合物的受试者可以是温血哺乳动物，例如人或动物。在特定实施例中，受试者或患者是人。在其他实施例中，受试者是动物，例如大鼠、小鼠、狗、猫、灵长类动物或马。

在本发明的背景下阐述了AM和AM

AM

RAMP1和RAMP3也与降钙素受体(CTR)相互作用以形成两种功能性糊精受体(AMY受体)。CTR和RAMP1形成AMY

在实施例中，与AM

适合地，相比AM结合的其他受体，本发明的化合物选择性地抑制AM

增生性疾病

本发明的另一方面提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗增生性疾病。增生性疾病可能是恶性的或非恶性的。

AM

本发明的化合物可用于治疗和/或预防，例如：

在一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗实体瘤，例如上文列出的任何实体瘤。在特定实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌和骨癌。

在另一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的激素依赖性前列腺癌。

在另一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的乳腺癌：管腔A型乳腺癌(激素受体阳性(雌激素受体和/或孕酮受体阳性)、HER2阴性和低水平的蛋白质Ki-67)；管腔B型乳腺癌(激素受体阳性(雌激素受体和/或孕酮受体阳性)和HER2阳性或HER2阴性伴随高水平的Ki-67)；三阴性乳腺癌(即，肿瘤是雌激素受体阴性、孕酮受体阴性和HER2阴性)；HER2阳性乳腺癌或正常样乳腺癌(Dai等人Am.J.CancerResearch[美国癌症研究期刊].2015；5(10):2929-2943的表1中所定义的分类)。

在一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、三阴性乳腺癌(即，肿瘤是雌激素受体阴性、孕酮受体阴性和HER2阴性)、激素难治性前列腺癌和非小细胞肺癌。

在实施例中，本发明的化合物提供了对癌症(例如本文披露的任何癌症)的抗癌作用，该抗癌作用选自以下中的一种或多种：抗增生作用、促凋亡作用、抗有丝分裂作用、抗血管生成作用、抑制细胞迁移、抑制或预防肿瘤侵袭和/或预防或抑制转移。

本发明的化合物可用于预防或抑制癌症的进展。本发明的化合物可用于减缓、延迟或停止癌症进展。典型地通过对癌症分期来确定癌症的进展。典型地通过向癌症分配从I到IV的数字来进行分期，I是孤立性癌症，且IV是疾病的晚期阶段，其中癌症已扩散到其他器官。分期通常考虑肿瘤的大小、是否已侵袭相邻器官、扩散到的淋巴结的数量以及癌症是否已经转移。预防或抑制癌症的进展对于预防癌症的扩散尤为重要，例如从I期到II期的进展，其中癌症局部扩散，或者从III期到IV期的进展，其中癌症转移到其他器官。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中癌症是原发性癌症，这可能是第二原发性癌症。

本发明的化合物可以用于预防或抑制第二原发性癌症的发生。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中癌症是对于化疗和/或放射疗法是难治的(有抗性)。该癌症可以从治疗开始就有抗性，或在治疗中变得有抗性。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中癌症是复发性癌症，其可以是局部、区域或远处复发性癌症。复发性癌症是初始治疗后和在无法检测到癌症的一段时间后恢复的癌症。相同的癌症可能在同一组织中或在身体的不同部分中恢复。

本发明的化合物可以用于预防或抑制癌症的复发。

本发明的化合物可以用于治疗癌症，其中该癌症是转移性或继发性癌症。

本发明的化合物可以用于预防或抑制癌症转移。转移性癌症的治疗可以与以前用于治疗原发性肿瘤的疗法相同或不同。例如，在某些实施例中，可以手术切除原发性肿瘤，并且将本发明的化合物用于预防癌细胞的扩散，这些癌细胞可能在手术后保留或者可能已经逃逸出了该原发性肿瘤。在其他实施例中，可以使用放射疗法治疗原发性肿瘤。在又其他实施例中，可以通过化疗治疗原发性肿瘤。组合疗法通常用于治疗癌症以改善治疗，并且典型地最大化缓解的长度和深度。本文披露的任何组合疗法可以与本发明的化合物一起使用。

当原发性肿瘤已经转移并且已经建立了继发性肿瘤时，可以使用本发明的化合物治疗继发性肿瘤。这可能涉及治疗继发性肿瘤和预防继发性肿瘤转移。本文提及转移旨在包括本文披露的任何肿瘤的转移。通常，继发性肿瘤将处于与原发性肿瘤不同的组织中。例如，继发性肿瘤可以是骨中的继发性肿瘤。在特定实施例中，本发明的化合物用于治疗骨中的继发性肿瘤，例如用于治疗继发性骨肿瘤，其中原发性肿瘤是乳腺或前列腺肿瘤。

胰腺肿瘤

在一个实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗胰腺肿瘤，尤其恶性胰腺肿瘤。术语“胰腺肿瘤”包括可能是良性或恶性的外分泌和内分泌肿瘤。外分泌肿瘤是最普遍的胰腺癌形式，占病例的约95％。外分泌癌症包括，例如导管腺癌(PDAC)、腺泡细胞癌、乳头状肿瘤(例如导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN))、黏液性肿瘤(例如粘液性囊腺癌)、实体瘤和浆液性肿瘤。胰腺内分泌肿瘤是罕见的，并且由于胰腺内的胰岛细胞异常而发生。胰腺内分泌肿瘤的实例包括胃泌素瘤(卓-艾综合征)、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、生长抑素瘤、血管活性肠肽瘤(VIPoma，弗-莫综合征)、非功能性胰岛细胞肿瘤和多发性内分泌瘤1型(MEN1，也称为韦尔默综合征)。在特定实施例中，该化合物用于治疗胰腺癌，特别是选自以下的胰腺癌：胰腺导管腺癌、胰腺腺癌、腺泡细胞癌、导管内乳头状黏液性肿瘤伴随侵袭性癌、黏液性囊性肿瘤伴随侵袭性癌、胰岛细胞癌和神经内分泌肿瘤。在另一个特定实施例中，胰腺癌是胰腺腺癌。

本发明的化合物可以用于治疗其中肿瘤可切除的患者的胰腺癌。在该实施例中，将本发明的化合物作为肿瘤手术切除后的辅助疗法施用于患者。

在一些实施例中，本发明的化合物用于治疗早期胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是晚期的胰腺癌(late stage pancreatic cancer)。在一些实施例中，该胰腺癌是晚期胰腺癌(advanced pancreatic cancer)。在一些实施例中，该胰腺癌是局部晚期胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是复发性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是非转移性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是转移性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是原发性胰腺癌。在一些实施例中，该原发性胰腺肿瘤已转移。在一些实施例中，该胰腺癌已在缓解后复发。在一些实施例中，该胰腺癌是进展性胰腺癌。在一些实施例中，该胰腺癌是缓解期胰腺癌。

在一些实施例中，胰腺癌的治疗是辅助治疗。辅助治疗可以是如下治疗，其中患者曾具有胰腺癌史，并且通常(但不一定)对包括但不限于手术切除、放射疗法和/或化学疗法的疗法有反应；然而，由于他们的癌症史，患者被认为具有疾病发展的风险。在辅助设定的治疗或施药是指后续的治疗方式。

在一些实施例中，胰腺癌的治疗可能是新辅助治疗。“新辅助”意指本发明的化合物在针对胰腺癌的主要/确定性疗法之前用于治疗患者。在一些实施例中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中患者以前未针对胰腺癌进行过治疗。

在一些实施例中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，该患者先前已针对胰腺癌进行过治疗或者同时正在进行治疗。既往或同时治疗可包括化疗剂，例如选自以下的治疗：吉西他滨、吉西他滨与白蛋白结合型紫杉醇(AbraxaneTM)；5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、组合治疗亚叶酸钙(FOLFIRINOX)(亚叶酸(leucovorin)、5-FU、伊立替康和奥沙利铂)、奥沙利铂和5-FU(也称为FOLFOX)组合以及吉西他滨和卡培他滨组合。在一些实施例中，既往治疗包括吉西他滨和/或厄洛替尼。在一些实施例中，既往治疗包括5-FU。

在一些实施例中，本发明的化合物用于患有胰腺癌的患者的二线或三线治疗中。例如，其中患者曾用已失败或基本失败的第一和/或第二疗法进行过既往治疗。

本发明的化合物可以用于治疗胰腺癌，胰腺癌对于常规化疗是难治的，例如用于治疗对于吉西他滨和/或5FU而言难治的胰腺癌。

在一些实施例中，在治疗胰腺癌中，本发明的化合物与另一种抗癌剂组合使用。可以使用本文披露的任何组合治疗。

在实施例中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中该患者已发展非典型2型糖尿病。

塞加里(Sézary)综合征

塞加里综合征是罕见的皮肤T细胞淋巴瘤。它是侵犯性癌症，其特征是皮肤病损，包括泛发性瘙痒红皮病和血液、皮肤和/或淋巴结中的癌症T细胞(塞加里细胞)的存在。患有塞加里综合征的受试者还有淋巴结肿大(淋巴结病)。患有塞加里综合征的患者的预后差，5年生存率为30％至40％(Agar等人J.Clin.Oncol.[临床肿瘤学期刊],2010；28:4730e9)。

目前对塞加里综合征的治疗是有限的，包括常规化疗剂(例如抗代谢物，如吉西他滨、甲氨蝶呤(methotrexate)或喷司他丁(pentostatine)；拓扑异构酶抑制剂，如多柔比星及其脂质体形式，如多喜(doxil)；血管生成抑制剂如来那度胺(lenalidomide)；和烷基化剂，如环磷酰胺)；视黄醇(例如蓓萨罗丁(bexarotene))；HDAC抑制剂(例如罗米地辛(romidepsin)或伏立诺他(vorinostat))；免疫疗法，包括抗CD52抗体(例如阿仑单抗(alemtuzumab))；抗体-药物缀合物(例如本妥昔单抗(brentuximab vedotin))；干扰素-α或白介素-2疗法(例如地尼白介素-白喉毒素连接物(denileukin difitox))；光疗或放射疗法。仍然需要针对塞加里综合征的新治疗。

Prasad等人(Journal of Investigative Dermatology[研究皮肤病学杂志],2016,136,1490-1499)鉴定了某些体细胞点突变和体细胞拷贝数变异，包括RAMP3的复制。如本文所讨论的，RAMP3也是AM2受体的组分。如本发明的实例中所示，诸位发明人已经鉴定出AM2受体抑制剂化合物有效于降低塞加里细胞的活力。因此，本发明的化合物作为对塞加里综合征的治疗可以是有效的。

因此，还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防塞加里综合征。还提供了治疗或预防受试者中的塞加里综合征的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

在某些实施例中，本发明的化合物用作治疗塞加里综合征的单一疗法。在某些其他实施例中，本发明的化合物与另一种治疗剂组合使用，例如本文所述的一种或多种抗癌剂和/或放射疗法。在特定实施例中，本发明的化合物与一种或多种针对塞加里综合征的现有治疗组合使用，包括上述塞加里综合征治疗中的一种或多种。

良性增生性疾病

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗良性增生性疾病。良性疾病可以是良性肿瘤，例如血管瘤、肝细胞腺瘤、海绵状血管瘤、局灶性结节性增生、听神经瘤、神经纤维瘤、胆管腺瘤、胆管囊肿、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、结节性再生性增生、颗粒性结膜炎、化脓性肉芽肿、胎块、子宫纤维瘤、甲状腺腺瘤、肾上腺皮质腺瘤或垂体腺瘤

患者选择和生物标志物

许多癌症中的血清AM上调，例如人胰腺癌。与正常组织和胰腺炎相比，来自胰腺癌患者的组织切片中的AM也上调。另外，AM

预期本发明的化合物有益于治疗癌症，例如胰腺癌，其中与参考样品相比，生物学样品中的AM

由于AM、AM

因此，本发明提供了预测或确定对用本发明的化合物进行的治疗的治疗反应性的方法，该方法包括以下步骤：

(a)分析从受试者获得的生物学样品以确定一种或多种生物标志物的表达水平，其中这些生物标志物选自AM和/或AM

(b)将在(a)中测定的这些生物标志物的表达水平与一个或多个参考值进行比较，其中与该一个或多个参考值相比，来自该受试者的一个或多个样品中的一种或多种生物标志物的表达水平的增加指示对用本发明化合物进行的治疗的治疗反应性和/或指示癌症的存在，例如早期胰腺癌。

将理解，可以选择指示癌症(例如早期胰腺癌)的任何生物标志物，即AM和/或AM

通常，将分析样品(例如血清样品或肿瘤样品)中AM的表达水平，并与一个或多个参考值进行比较。优选地，将分析样品(例如血清样品或肿瘤样品)中AM和/或AM

同样地，将分析样品(例如肿瘤样品或循环肿瘤细胞)中AM

来自受试者的一个或多个样品中的一种或多种生物标志物的表达水平与一个或多个参考值相比的增加预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性。优选地，来自受试者的血清样品中AM的表达水平与一个或多个参考值相比的增加预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性。优选地，来自受试者的血清样品中AM

生物标志物

自始至终，据说来自受试者的一个或多个生物学样品中的生物标志物差异表达并指示例如早期胰腺癌，其中与一个或多个参考值相比，它们的表达水平显著上调。取决于各生物标志物，早期胰腺癌可以在生物学样品中通过表达水平的增加来诊断，关于样本均值和样本方差进行缩放，相对于一个或多个对照样品或一个或多个参考值的情况。显然，各种生物标志物的敏感性、受试者和样品的变化意指每种生物标志物附属着不同置信水平。当关于样品均值和样品方差缩放生物标志物表达水平后，可以说，本发明的生物标志物显著上调(或升高)，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，它们展现出2倍变化。优选地，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，所述生物标志物将展现出3倍或更多的变化。更优选地，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，本发明的生物标志物将展现出4倍或更多的变化。也就是说，在表达水平增加(相对于参考值上调)的情况下，生物标志物水平将是参考值或在一个或多个对照样品中观察到的情况的两倍。优选地，生物标志物水平将是一个或多个参考值的水平或一个或多个对照样品中的水平的3倍。更优选地，生物标志物水平将是一个或多个参考值的水平或一个或多个对照样品中的水平的4倍。

生物标志物参考序列

AM

如本文所用，“AM”表示“肾上腺髓质素”。可从GenBank数据库获得全长人AM mRNA转录物的参考序列，登录号NM_001124，版本NM_001124.2。

AM

如本文所用，“AM

CLR

如本文所用，“CLR”表示“降钙素样受体”。可从NCBI-GenBank数据库获得全长人CLR mRNA转录物变体1的参考序列，登录号NM_005795，版本NM_005795.5。可从GenBank数据库获得全长人CLR mRNA转录物变体2的参考序列，登录号NM_214095，版本NM_214095.1。

RAMP3

如本文所用，“RAMP3”表示“受体活性改性蛋白3”。可从NCBI-GenBank数据库获得全长人RAMP3 mRNA转录物的参考序列，登录号NM_005856，版本NM_005856.2。

本文披露的生物标志物的参考序列的所有登录号和版本号获得自NCBI-GenBank数据库(平面文件发布218.0)，可在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/获得。

参考值

自始至终，术语“参考值”可以指预定的参考值，例如指定用于诊断或预测受试者对早期胰腺癌的易感性的置信区间或阈值。优选地，“参考值”可以指预定的参考值，指定用于预测对本发明的化合物的敏感性和/或治疗反应性的置信区间或阈值。可替代地，可以从‘对照’生物学样品中相应的一种或多种生物标志物的表达水平来推导参考值，例如阳性(例如癌性或已知癌前)或阴性(例如健康)对照。此外，参考值可以是‘内部’标准或内部标准范围，例如蛋白质、转录物、标记或化合物的已知浓度。可替代地，参考值可以是用于校准表达值或者验证样品或测量技术的质量的内部技术控制。这可能涉及对样品内的已知组成型表达或以已知水平表达的一种或多种转录物的测量。因此，对本领域技术人员来说单独或组合应用这些已知技术是惯例，以便相对于标准品或其他转录物或蛋白质定量样品中的生物标志物的水平，或以便验证生物学样品、测定或统计分析的质量。

生物学样品

典型地，本发明的生物学样品将选自血清样品、组织样品或肿瘤组织样品。通常，本发明的生物学样品将是血清样品。在患有早期胰腺癌的受试者的血清中可能可检测到AM和/或AM

适合地，本发明的方法可以利用从受试者中取出的一系列生物学样品以确定选自AM和/或AM

血清和/或组织和/或肿瘤组织样品中AM和/或AM

适合地，生物标志物选自由以下组成的组：生物标志物蛋白；和编码该生物标志物蛋白的核酸分子。优选的是，该生物标志物是核酸分子，特别优选的是，它是mRNA分子。

优选的是，使用特异性结合配偶体研究生物学样品中的生物标志物的水平。适合地，结合配偶体可以选自由以下组成的组：互补核酸；适体；抗体或抗体片段。用于任何给定生物标志物的结合配偶体的适合类别对于技术人员将是显而易见的。

适合地，可以通过直接评估靶分子和结合配偶体之间的结合来检测生物学样品中的生物标志物的水平。

便利地，使用附接于结合配偶体的报告部分检测生物学样品中的生物标志物的水平。优选地，报告部分选自由以下组成的组：荧光团；生色底物；和生色酶。

结合配偶体

可以使用与生物标志物或其片段特异性结合或杂交的结合配偶体来研究生物学样品中的生物标志物的表达水平。关于本发明，术语‘结合配偶体’可包括能够与相关的生物标志物和/或其核苷酸或肽变体以高亲和力特异性结合的任何配体。所述配体包括但不限于核酸(DNA或RNA)、蛋白质、肽、抗体、抗体-缀合物、合成亲和力探针、碳水化合物、脂质、人造分子或小有机分子如药物。在某些实施例中，结合配偶体可以选自由以下组成的组：互补核酸；适体；抗体或抗体片段。在检测mRNA的情况下，核酸代表高度适合的结合配偶体。

在本发明的上下文中，应将与生物标志物特异性结合的结合配偶体视为需要该结合配偶体应能够与至少一种这样的生物标志物以与非生物标志物的分子非特异性结合的方式可区分的方式结合。适合的区分可以例如基于此类结合的幅度上的可区别差异。

在本发明的方法的优选实施例中，生物标志物是核酸，优选mRNA分子，并且结合配偶体选自包括以下的组：互补核酸或适体。

适合地，结合配偶体可以是核酸分子(典型地是DNA，但可以是RNA)，其具有与其靶向的相关mRNA或cDNA的序列互补的序列。这种核酸通常称为‘探针’(或报告分子或寡聚物)，其结合的互补序列通常被称为‘靶标’。通常通过检测荧光团标记的、银标记的或化学发光标记的靶标来检测和定量探针-靶杂交，以确定靶标中核酸序列的相对丰度。

探针的长度可以是25至1000个核苷酸。然而，30至100个核苷酸的长度是优选的，并且长度为约50个核苷酸的探针通常成功地用在完整转录组分析中。

虽然可能难以确定适合的探针(例如在非常复杂的阵列中)，但有许多可用的完整转录组阵列的商业来源，并且使用公开可用的序列信息来开发定制阵列以检测任何给定的特定mRNA组是惯例。用于转录组分析的微阵列的商业来源包括Illumina和Affymetrix。

将理解，按惯例可以针对AM(NM_001124.2)、AM

可替代地，生物标志物可以是蛋白质，并且适合地，结合配偶体可以选自包括以下的组：抗体、抗体-缀合物、抗体片段或适体。这种结合配偶体将能够特异性地结合AM、AM

编码上述的本发明的生物标志物的任何特异性结合配偶体的多核苷酸可以是分离的和/或纯化的核酸分子，并且可以是RNA或DNA分子。

自始至终，如本文所用，术语“多核苷酸”是指单链或双链形式或者正义或反义的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并涵盖天然存在的核苷酸的类似物，其以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交。这种多核苷酸可以衍生自智人，或者可以是合成的，或者可以衍生自任何其他生物。

通常，用作本发明中的结合配偶体的多肽序列和多核苷酸可以是分离的或纯化的。“纯化”意指它们基本上不含其他细胞组分或材料或培养基。“分离”意指它们也可以在天然序列侧翼不含天然存在的序列，例如在核酸分子的情况下，分离可能意指它不含5'和3'调节序列。

在本发明的方法的优选实施例中，核酸是mRNA。本领域已知许多适合的用于定量测量给定生物学样品中的mRNA转录物水平的技术。这些技术包括但不局限于：“Northern”RNA印迹、实时聚合酶链式反应(RTPCR)、定量聚合酶链式反应(qPCR)、数字PCR(dPCR)、多重PCR、逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)或者高通量分析如杂交微阵列、下一代测序(NGS)或直接mRNA定量(例如通过“纳米孔”测序)。可替代地，可以使用“基于标签”技术，其包括但不限于基因表达的系列分析(SAGE)。通常，可通过珠阵列微阵列技术或通过RNA-Seq，通过与杂交微阵列或“芯片”上的特异性互补核苷酸探针杂交来确定给定生物学样品中的生物标志物mRNA转录物的水平，其中序列数据与参考基因组或参考序列匹配。

在核酸是mRNA的优选实施例中，本发明提供了一种预测或确定对本发明的化合物进行的治疗的治疗反应性的方法，其中一种或多种生物标志物转录物的水平通过PCR测定。各种适合的基于PCR扩增的技术是本领域众所周知的。PCR应用是本领域的惯例，并且技术人员将能够选择适当的聚合酶、缓冲剂、报告部分和反应条件。优选地，mRNA转录物丰度将通过qPCR、dPCR或多重PCR测定。按惯例可以通过本领域众所周知的方法，针对AM(NM_001124.2)、AM

本领域已知的许多不同技术适合于检测靶序列的结合以及蛋白质相互作用的高通量筛选和分析。根据本发明，适当的技术包括(独立地或组合地)但不限于；共免疫沉淀、双分子荧光互补(BiFC)、双表达重组酶(DERB)单载体系统、亲和电泳、下拉测定、标记转移、酵母双杂交筛、噬菌体展示、体内交联、串联亲和纯化(TAP)、ChIP测定、化学交联随后高质量MALDI质谱、strep-蛋白相互作用实验(SPINE)、定量免疫沉淀组合敲低(QUICK)、邻位连接测定(PLA)、生物层干涉法、双偏振干涉法(DPI)、静态光散射(SLS)、动态光散射(DLS)、表面等离子体共振(SPR)、荧光相关光谱、荧光共振能量转移(FRET)、等温滴定量热法(ITC)、微尺寸热泳(MST)、染色质免疫沉淀测定、电泳迁移率变动测定、下拉测定、微孔板捕获和检测测定、报告分子测定、RNA酶保护测定、FISH/ISH共定位、微阵列、微球阵列或基于硅纳米线(SiNW)的检测。如果要定量生物标志物蛋白水平，则优选使用附接荧光报告分子的抗体分析结合配偶体和生物标志物蛋白之间的相互作用。

在本发明的某些实施例中，可以通过直接评估生物标志物与其结合配偶体的结合来检测特定生物标志物的表达水平。根据本发明的该实施例的这种方法的适合实例可以利用诸如电阻抗光谱(EIS)等的技术，以直接评估结合配偶体(例如抗体)与靶生物标志物(例如生物标志物蛋白)的结合。

在本发明的某些实施例中，该结合配偶体可以是抗体、抗体缀合物或抗体片段，并且靶分子的检测利用免疫学方法。在方法或装置的某些实施例中，免疫学方法可以是酶联免疫吸附测定(ELISA)或利用横流装置。

本发明的方法可以进一步包括定量指示来自受试者的生物学样品中存在的生物标志物的表达的靶分子的量。本发明的其中已经定量存在的靶分子的量并且已知患者样品的体积的适合方法可以进一步包括确定该患者样品中存在的靶分子的浓度，其可用作对受试者的病症进行定性评估的基础，这反过来又可用于表明受试者的适当疗程，例如用一种或多种本发明化合物进行治疗。

报告部分

在本发明的某些实施例中，可以确定生物学样品中蛋白质的表达水平。在一些情况下，可以直接(例如，用GFP)或通过目的蛋白质的酶促作用(POI)产生可检测的光学信号来确定表达。然而，在一些情况下，可以选择确定物理表达，例如，通过抗体探测，并依靠单独的测试来验证物理表达是否伴随着所需的功能。

在本发明的某些实施例中，将可通过高通量筛选方法在生物学样品中检测特定生物标志物的表达水平，例如，依赖于光信号的检测，例如使用报告部分。为此目的，特异性结合配偶体可能需要掺入标签，或用可移除标签来标记，该标签允许检测表达。这种标签可以是，例如荧光报告分子。这种标签可以为生物标志物表达的可视化提供适合的标志物，因为它的表达可以简单地通过体外或阵列上的荧光测量直接测定。可替代地，它可以是可用于产生光信号的酶。用于检测表达的标签也可以是抗原肽标签。类似地，报告部分可以选自由以下组成的组：荧光团；生色底物；和生色酶。其他类的标签可用于标记包括可以是小分子的有机染料分子、放射性标记和自旋标记的核酸结合配偶体。

便利地，可以通过在高严格或非常高严格条件下测量互补核苷酸探针与目的生物标志物的特异性杂交来定量一种或几种生物标志物的水平。

便利地，可通过检测荧光团标记的、银标记的或化学发光标记的探针来检测和定量探针-生物标志物杂交，以确定样品中生物标志物核酸序列的相对丰度。可替代地，可以通过RNA测序或纳米孔测序技术直接测定生物标志物mRNA转录物丰度的水平。

本发明的方法可以利用选自由以下组成的组的分子：生物标志物蛋白；和编码该生物标志物蛋白的核酸。

核苷酸和杂交条件

自始至终，如本文所用，术语“多核苷酸”是指单链或双链形式或者正义或反义的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并涵盖天然存在的核苷酸的类似物，其以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交。

本领域技术人员将针对与AM(NM_001124.2)、AM

当然，本领域技术人员将认识到，在设计适当的探针序列以检测生物标志物表达时，需要探针序列能够选择性地并且特异性地结合与AM(NM_001124.2)、AM

在本文中针对杂交条件的任何参考文献中，以下是示例性而非限制性的：

非常高严格(允许共享至少90％同一性的序列杂交)

杂交：5x SSC，在65℃下，持续16小时

洗涤两次：2x SSC，在室温(RT)下，每次持续15分钟

洗涤两次：0.5x SSC，在65℃下，每次持续20分钟

高严格(允许共享至少80％同一性的序列杂交)

杂交：5x-6x SSC，在65℃-70℃下，持续16-20小时

洗涤两次：2x SSC，在RT下，每次持续5-20分钟

洗涤两次：1x SSC，在55℃-70℃下，每次持续30分钟

低严格(允许共享至少50％同一性的序列杂交)

杂交：6x SSC，在RT至55℃，持续16-20小时

洗涤至少两次：2x-3x SSC，在RT至55℃，每次持续20-30分钟。

在另一方面，本发明涉及治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的AM

任选地，该方法可以包括在所述受试者的生物学样品中确定AM和/或CLR和/或RAMP3的水平，并在确定AM和/或CLR和/或RAMP3在生物学样品中表达或以相对于一个或多个参考值增加的水平表达时向所述受试者施用本发明的化合物。

在另一方面，本发明涉及鉴定对AM

其中与一个或多个参考值相比，AM、CLR和/或RAMP3水平增加，表明受试者对AM

组合疗法

本发明的化合物可以单独使用以提供治疗作用。本发明的化合物也可以与一种或多种额外的抗癌剂和/或放射疗法组合使用。

此类化学疗法可以包括以下类别的抗癌剂中的一种或多种：

(i)抗增生药/抗肿瘤药及其组合，如烷化剂(例如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin)、环磷酰胺、氮芥、尿嘧啶芥、苯达莫司汀(bendamustin)、美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、盐酸氮芥(chlormethine)、白消安(busulphan)、替莫唑胺(temozolamide)、亚硝基脲、异环磷酰胺(ifosamide)、美法仑(melphalan)、哌泊溴烷(pipobroman)、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基硫代磷胺、卡莫司汀(carmustine)、洛莫斯汀(lomustine)、链脲佐菌素(stroptozocin)和达卡巴嗪(dacarbazine))；抗代谢物(例如吉西他滨和抗叶酸剂，如氟嘧啶(如5-氟尿嘧啶和喃氟啶(tegafur))、雷替曲塞(raltitrexed)、甲氨蝶呤、培美曲塞(pemetrexed)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿苷(floxuridine)、阿糖胞苷(cytarabine)、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、喷司他丁，及吉西他滨和羟基脲)；抗生素(例如蒽环类，如阿霉素(adriamycin)、博来霉素(bleomycin)、多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunomycin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素-C(mitomycin-C)、放线菌素D(dactinomycin)和光辉霉素(mithramycin))；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱(像长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨)和紫杉烷(像紫杉醇和泰索帝)以及polo激酶抑制剂)；蛋白酶体抑制剂，例如卡非佐米(carfilzomib)和硼替佐米(bortezomib)；干扰素疗法；以及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素(如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide))、安吖啶(amsacrine)、拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone)和喜树碱(camptothecin))；博来霉素、放线菌素D、正定霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、ara-C、紫杉醇(Taxol

(ii)细胞生长抑制剂，如抗雌激素药(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和吲哚昔芬(iodoxyfene))、抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)以及5α-还原酶抑制剂(如非那雄胺)；和诺维本(navelbene)、CPT-ll、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑(letrazole)、卡培他滨(capecitabine)、来罗噻吩(reloxafme)、环磷酰胺、异环磷酰胺和屈洛昔芬(droloxafine)；

(iii)抗侵袭剂，例如达沙替尼(dasatinib)和博舒替尼(bosutinib)(SKI-606)，以及金属蛋白酶抑制剂、尿激酶纤溶酶原激活因子受体功能抑制剂或乙酰肝素酶的抗体；

(iv)生长因子功能的抑制剂：例如，此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体，例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]、抗EGFR抗体帕尼单抗(panitumumab)、抗erbB1抗体西妥昔单抗(cetuximab)、酪氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼、厄洛替尼、6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)、阿法替尼(afatinib)、凡德他尼(vandetanib)、奥希替尼(osimertinib)和罗西替尼(rociletinib))，erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼(lapatinib))和共刺激分子如CTLA-4、4-lBB和PD-l的抗体，或细胞因子(IL-I0、TGF-β)的抗体；肝细胞生长因子家族的抑制剂；胰岛素生长因子家族的抑制剂；细胞凋亡蛋白调节因子的调节剂(例如Bcl-2抑制剂)；血小板衍生生长因子家族的抑制剂，如伊马替尼和/或尼罗替尼(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂诸如法尼基转移酶抑制剂，索拉非尼、替吡法尼和洛那法尼)、通过MEK和/或AKT激酶进行的细胞信号传导的抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂、Plt3激酶抑制剂、CSF-1R激酶抑制剂、IGF受体激酶抑制剂例如多妥珠单抗(dalotuzumab)；极光激酶抑制剂和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，如CDK2和/或CDK4抑制剂；CCR2、CCR4或CCR6拮抗剂；RAF激酶抑制剂，如WO 2006043090、WO 2009077766、WO 2011092469或WO 2015075483中描述的那些；和Hedgehog抑制剂，例如维莫德吉(vismodegib)。

(v)抗血管生成剂，如抑制血管内皮生长因子作用的抗血管生成剂，[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(bevacizumab)(Avastin

(vi)基因疗法途径，包括例如置换异常基因如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法；

(vii)免疫疗法途径，包括例如抗体疗法，如阿仑单抗、利妥昔单抗、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)

(viii)细胞毒性剂，例如氟达拉滨(福达华)、克拉屈滨(cladribine)、喷司他丁(Nipent

(ix)靶向疗法，例如PI3K抑制剂，例如艾代拉里斯(idelalisib)和哌立福辛(perifosine)；SMAC(第二线粒体来源的半胱天冬酶激活因子)模拟物，也称为凋亡蛋白抑制剂(IAP)拮抗剂(IAP拮抗剂)。这些药剂起到阻抑IAP，例如XIAP、cIAP1和cIAP2的作用，从而重新建立细胞凋亡通路。特定的SMAC模拟物包括Birinapant(TL32711，泰特拉洛吉克药业公司(TetraLogic Pharmaceuticals))、LCL161(诺华公司(Novartis))、AEG40730(埃格拉医疗公司(Aegera Therapeutics))、SM-164(密歇根大学(University of Michigan))、LBW242(诺华公司)、ML101(桑福德-伯纳姆医学研究所(Sanford-Burnham MedicalResearch Institute))、AT-406(阿森达治疗公司(Ascenta Therapeutics)/密歇根大学)、GDC-0917(基因泰克公司(Genentech))、AEG35156(艾格拉治疗公司(AegeraTherapeutic))和HGS1029(人类基因组科学公司(Human Genome Sciences))；以及靶向泛素蛋白酶体系统(UPS)的药剂，例如硼替佐米、卡非佐米(carfilzomib)、马里佐米(marizomib)(NPI-0052)和MLN9708；CXCR4拮抗剂，例如普乐沙福(plerixafor)或BL-8040；

(x)PARP抑制剂，例如尼拉帕尼(niraparib)(MK-4827)、他拉唑帕尼(talazoparib)(BMN-673)、维利帕尼(veliparib)(ABT-888)；奥拉帕尼(olaparib)、CEP9722和BGB-290

(xi)嵌合抗原受体、抗癌疫苗和精氨酸酶抑制剂；

(xii)降解透明质酸的药剂，例如透明质酸酶PEGPH20

额外的抗癌剂可以是单一药剂或本文列出的其他药剂中的一种或多种。

可以与本发明的化合物一起使用的特定抗癌剂包括例如厄洛替尼、卡博替尼、贝伐单抗、多妥珠单抗、奥拉帕尼、PEGPH20、维莫德吉、紫杉醇(包括白蛋白结合型紫杉醇)、吉西他滨、奥沙利铂、伊立替康、亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一些实施例中，该另外的抗癌剂选自卡培他滨、吉西他滨和5-氟尿嘧啶(5FU)。

此类组合治疗可以通过同时、依序或单独地将该治疗的各个组分给药的方式来实现。此类组合产品采用在上文所述的治疗有效剂量范围内的本发明化合物，以及在其批准的剂量范围内的其他药物活性剂。

在此，在使用术语“组合”的情况下，应当理解，这是指同时施用、单独施用或顺序施用。在本发明的一个方面，“组合”是指同时施用。在本发明的另一个方面，“组合”是指单独施用。在本发明的另一方面，“组合”是指顺序施用。在依序施用或单独施用的情况下，延迟施用第二组分不应当导致该组合的有益作用丧失。

在其中使用组合治疗的一些实施例中，当组合时，本发明的化合物的量和其他药物活性剂的量在治疗上有效地治疗患者的靶向障碍。在这种背景下，组合量是“治疗有效量”，如果将它们组合则足以减少或完全减轻该障碍的症状或其他不利影响；治愈该障碍；反转、完全停止、或减缓该障碍的进展；或降低该障碍变得更糟的风险。典型地，此类量可以由本领域技术人员通过例如从本说明书中针对本发明的化合物描述的剂量范围和其他药物活性化合物的批准或以其他方式公开的剂量范围开始确定。

根据本发明的另一方面，提供了如上文所定义的本发明的化合物和如上文所定义的额外的抗癌剂，用于癌症的联合治疗。

根据本发明的另一方面，提供了包含如上文所定义的本发明的化合物和如上文所定义的额外的抗癌剂的药物产品，用于癌症的联合治疗。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括与上文所定义的额外的抗癌剂同时、依序或单独地向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。

根据本发明的另一方面，提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，与上文所定义的额外的抗癌剂同时、依序或单独使用，用于治疗癌症。

本发明的化合物也可以与放射疗法组合使用。适合的放射疗法包括例如X射线疗法、质子束疗法或电子束疗法。放射治疗还可以涵盖使用放射性核素剂，例如

根据本发明的另一方面，提供了如上文所定义的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，与放射疗法联合用于治疗癌症。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括与放射疗法同时、依序或单独地向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。

生物学测定

这些化合物的生物学作用可以使用本文在实例中所述的一种或多种测定来评估。

合成

在下文所述的合成方法的描述中以及在用于制备原材料的参考合成方法中，应当理解，本领域技术人员可以选择所有提出的反应条件，包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理程序的选择。

有机合成领域的技术人员应当理解，存在于分子各部分上的官能度必须与所用试剂和反应条件相容。

可以通过有机化学的标准程序获得必要的原材料。结合以下代表性过程变型并在所附实例中描述了此类原材料的制备。可替代地，必需的原材料可以通过与所示的在有机化学家的普通技术范围内的那些类似的程序获得。

将理解，在以下定义的过程中合成本发明化合物期间，或在某些原材料的合成期间，可能需要保护某些取代基基团以防止其不希望的反应。熟练的化学家将理解，何时需要此类保护，以及怎样才能将此类保护基团置于合适的位置并且随后去除。

关于保护基团的实例，参见关于该主题的许多一般文本之一，例如西奥多拉格林(Theodora Green)的“有机合成中的保护基团(Protective Groups in OrganicSynthesis)”(出版者：约翰威利国际出版公司(John Wiley&Sons))。保护基团可以通过文献中描述的或熟练的化学家已知的任何便利的、适合于去除所讨论的保护基团的方法除去，选择此类方法以便在分子中其他地方的基团的最小扰动的情况下来实现保护基团的去除。

因此，如果反应物包括例如基团，如氨基、羧基或羟基，则可能需要在本文提及的一些反应中保护该基团。

举例来说，氨基或烷基氨基基团的适合的保护基团是例如酰基基团(例如烷酰基基团如乙酰基或三氟乙酰基)、烷氧基羰基基团(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基基团)、芳基甲氧基羰基基团(例如苄氧基羰基)、或芳酰基基团(例如苯甲酰基)。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以通过用适合的碱如碱金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠)进行水解来除去酰基基团如烷酰基或烷氧基羰基基团或芳酰基基团。可替代地，可以例如通过用适合的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理来去除酰基基团如叔丁氧基羰基基团，并且可以例如通过经催化剂如钯碳的加氢，或通过用路易斯酸例如BF

羟基基团的适合的保护基团是例如酰基基团(例如烷酰基基团如乙酰基、芳酰基基团例如苯甲酰基)、或芳基甲基基团(例如苄基)。上述保护基团的脱保护条件将必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用适合的碱(如碱金属氢氧化物例如氢氧化锂、或氢氧化钠，或氨)进行水解来去除酰基基团如烷酰基或芳酰基基团。可替代地，可以例如通过经催化剂如钯碳的加氢来除去芳基甲基基团如苄基基团。

羧基基团的适合的保护基团是例如酯化基团，例如甲基或乙基基团(其可以例如通过用碱如氢氧化钠进行水解而除去)，或例如叔丁基基团(其可以例如通过用酸例如有机酸如三氟乙酸进行处理而除去)，或例如苄基基团(其可以例如通过经催化剂如钯碳的加氢而除去)。

树脂也可以用作保护基团。

一般合成途径

还提供了制备具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括偶联具有式(IX)的化合物或其盐：

其中HET、R

其中X

并且此后任选地进行以下程序中的一个或多个：

·将具有式(I)的化合物转化为另一种具有式(I)的化合物

·除去任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

在一个实施例中，在具有式(X)的化合物中，X

可以使用众所周知的方法进行偶联反应，例如通过使具有式(IX)的酸或其活化的衍生物在适合的偶联剂存在下与具有式(X)的胺反应，例如：碳二亚胺(例如二环己基碳二亚胺(DCC)或N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCl))，任选地与添加剂如羟基苯并三唑(HOBt)或1-羟基7-氮杂苯并三唑(HOAt)组合；脲盐或铵盐，例如1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵四氟硼酸盐(TBTU)。

具有式(IX)的酸可以通过例如形成酰卤而活化。当具有式(IX)的化合物处于酰卤的形式时，可以使化合物与具有式(X)的胺直接反应，而不需要偶联剂。

适合地，该反应在适合的溶剂(例如DMF)中并且在碱、优选叔胺如N,N-二异丙基乙胺存在下进行。

具有式(IX)和(X)的化合物可以使用类似于实例中描述的那些的方法制备。

还提供了制备具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括偶联具有式(XI)的化合物或其盐：

其中HET、R

并且此后进行以下程序中的一个或多个：

·将具有式(I)的化合物转化为另一种具有式(I)的化合物

·除去任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

适合地，L不存在。

关于具有式(IX)和(X)的化合物的偶联，可以使用类似于上述那些的方法进行偶联。

适合地，在溶剂例如极性质子溶剂如N,N-二甲基甲酰胺存在下进行反应。适合地，在有机叔胺碱如N,N-二异丙基乙胺存在下进行反应。具有式(XI)的化合物可以使用类似于实例中描述的那些的条件制备。具有式R

具有式(I)的化合物(其中R

其中HET、R

适合的氨基保护基包括例如本文披露的那些，例如叔丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBz)和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。优选地，Pg是BOC。可以通过常规方法除去氨基保护基团，例如用适合的酸或碱处理。

本文所述的某些中间体是新颖的并形成本发明的另一方面。因此，还提供了具有式(IX)、(XI)或(XII)的化合物。

在一些实施例中，具有式(IX)的化合物是具有式(IXa)的化合物：

其中R

在一些实施例中，具有式(IX)的化合物是具有式(IXb)的化合物：

其中R

在一些实施例中，具有式(IX)的化合物是具有式(IXc)的化合物：

其中R

在一些实施例中，具有式(XI)的化合物是具有式(XIa)的化合物：

其中R

在一些实施例中，具有式(XII)的化合物是具有式(XIIa)的化合物：

其中R

在某些实施例中，在具有式(IX)、(IXa)、(IXb)、(IXc)(XI)、(XIa)、(XII)和(XIIa)的化合物中，L和L

在某些实施例中，在具有式(IX)、(IXa)、(XII)和(XIIa)的化合物中，R

在某些实施例中，在具有式(XI)和(XII)的化合物中，HET具有上文(1)至(38)所定义的任何值。

在某些实施例中，在具有式(XI)、(XIa)、(XII)和(XIIa)的化合物中，

实例

缩写：

BINAP-2,2'-二(二苯基膦)-1,1'-联萘基

Bn-苄基

Boc-叔丁氧羰基

CBz-苄氧基羰基

CPME-环戊基甲醚

DCM-二氯甲烷

DEA-二乙胺

DIEA-N,N-二异丙基乙胺

DIPA-二异丙胺

DMAc-二甲基乙酰胺

DMF-N,N-二甲基甲酰胺

DMP-戴斯-马丁过碘烷

DMSO-二甲亚砜

EDCI-1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

ee-对映异构体过量

eq.-当量

Ghosez试剂-1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺

HATU-1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐

HOAt-1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HPLC-高效液相色谱法

IPA-异丙醇

LC-MS-液相色谱-质谱联用仪

LDA-二异丙氨基锂

MeCN-乙腈

MS-质谱法

NBS-N-溴代琥珀酰亚胺

NMM-N-甲基吗啉

NMR-核磁共振

o/n-过夜

Pd/C-钯碳

Piv-新戊酰基

Prep-制备型

pTSA-对甲苯磺酸

Py-吡啶

rt-保留时间

RT-室温

SEM-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基

SPE-固相萃取

Su-琥珀酰亚胺

TBAB-四丁基溴化铵

TEA-三乙胺

TFA-三氟乙酸

TFAA-三氟乙酸酐

THF-四氢呋喃

TLC-薄层色谱

试剂和条件

除非给定合成，否则从商业来源获得试剂和原材料。除非另有说明，否则所有反应均在氮气或氩气的惰性气氛下进行。

化合物名称

例示化合物使用CambridgeSoft的ChemDraw Ultra 12.0命名。其他化合物，特别是商业试剂，使用ChemDraw Ultra 12.0生成的名称或在线数据库和目录中常见的名称。

分析方法

在Shimadzu LC-30AD仪器上进行超临界流体色谱(SFC)分析。柱：kromasil 3-Cellucoat 50×4.6mm，粒径3μm。方法：流动相溶剂A：二氧化碳，相溶剂B：甲醇(0.05％DEA)，A中B 0％至95％，流速：3.0mL/min；波长：220nm

NMR

使用运行ACD/Spectrus处理器的Bruker Avance 400MHz光谱仪获得所有NMR光谱。

中间体A的合成

方案1

1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶1.2

将7-氮杂吲哚1.1(95g，804mmol)在二甲基甲酰胺(500mL)中的溶液冷却至0℃，然后以几小份添加氢化钠(38.6g，965mmol)，保持内部温度在10℃以下。将悬浮液在0℃-5℃下搅拌1h。然后在5℃-10℃逐滴添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(171mL，965mmol)。将黄色悬浮液在室温下搅拌18h。通过缓慢添加水淬灭混合物直至停止起泡，然后用另外的水稀释至总共1.5L。将混合物用乙酸乙酯萃取(2x1.5L)。将合并的有机萃取物用水(2x1L)和盐水(2x1L)洗涤，然后用硫酸镁干燥并蒸发，以提供呈琥珀色油的化合物1.2(199g，99％产率，96％纯度)。

3,3-二溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮1.3

使用冰/水浴将三溴化吡啶鎓(646g，2.02mol)在1,4-二噁烷(900mL)中的机械搅拌悬浮液冷却至10℃-15℃，并逐滴添加1.2(100g，403.2mmol)在1,4-二噁烷(500mL)中的溶液(注意：未观察到显著的放热，但反应保持冷却以最小化聚合物副产物的形成)。在10℃-15℃下搅拌2h后，将混合物在水(1.5L)和乙酸乙酯(1.5L)之间分配。收集乙酸乙酯层并用水(2x1L)、饱和碳酸氢钠水溶液(1L)、硫代硫酸钠溶液(1M溶液，1L)和盐水(2x1L)洗涤。将乙酸乙酯层用硫酸镁干燥并蒸发，以提供化合物1.3(144g，85％产率，89％纯度)。

1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮1.4

向1.3(144g，341mmol)在四氢呋喃(2L)中的机械搅拌的溶液中添加饱和氯化铵水溶液(0.5L)。将悬浮液在冰/盐/水浴中冷却至5℃-10℃，并按份添加锌粉(223g，3.41mol)。在添加了一半的锌后，内部温度在24℃达到峰值，在添加剩余的锌后没有注意到进一步显著的放热。在室温下搅拌2h后，将混合物通过

(4-硝基-1,2-亚苯基)二甲醇1.8

将硼烷-四氢呋喃络合物(THF中1M，1.23L，1.23mol)的机械搅拌溶液冷却至0℃。在45min的时间段内逐滴添加4-硝基邻苯二甲酸(100g，472mmol)在四氢呋喃(1L)中的溶液，将内部温度保持在10℃以下。然后去除冷却水浴，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将经搅拌的混合物再次冷却至0℃，并缓慢添加甲醇以破坏过量的硼烷(直至不再观察到泡腾)。将混合物浓缩至25％-30％的体积，然后通过添加水稀释至1L。将混合物通过添加2M水性氢氧化钠调节至pH 10，然后用乙酸乙酯(5x1L)萃取。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，并蒸发，以提供化合物1.8(85.5g，98％产率，98％纯度)。

1,2-双(溴甲基)-4-硝基苯1.9

将二醇1.8(95.5g，522mmol)在二噁烷(2L)中的悬浮液冷却至0℃，并逐滴添加三溴化磷(54mL，574mmol)。然后除去冷却，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物仔细倒入饱和碳酸氢钠(1.5L)的搅拌溶液中，并用乙酸乙酯(3x1L)萃取。将有机萃取物用硫酸镁干燥，并蒸发，以提供化合物1.9(154g，96％产率，98％纯度)。

5-硝基-1'-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮1.5

向化合物1.4(55g，208mmol)在二甲基甲酰胺(1.65L)中的机械搅拌溶液中添加1.9(70.8g，229mmol)。然后按一份添加碳酸铯(238g，729mmol)。将该悬浮液在室温下搅拌16h，然后通过

5-氨基-1'-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮1.6

向1.5(70g，170.3mmol)在四氢呋喃(1.1L)中的机械搅拌的溶液中添加饱和氯化铵溶液(300mL)，随后按三份添加锌粉(111g，1.70mol)。内部温度最初从22℃升至33℃，然后在1h内缓慢冷却至环境温度。2.5h后LC-MS分析指示产物和羟胺/亚硝基中间体的混合物。添加另外的35g锌粉和100mL饱和氯化铵溶液。在另外3.5h后，完成还原。将混合物通过

中间体A

5-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮

将1.6(51.8g，136mmol)在新鲜制备的甲醇中的氯化氢[制备至大约15％浓度(w/v)]的溶液加热至回流持续6h。一旦反应完成，就停止加热，并使溶液冷却至室温过夜。将混合物在真空下浓缩至浓橙色液体，然后用300mL水稀释，并用饱和碳酸钠溶液将pH调节至9。将水性混合物用二氯甲烷(3x500mL)和9:1二氯甲烷/甲醇(3x500mL)萃取。将合并的有机物用硫酸镁干燥并蒸发至橙色固体，将其用2:1二氯甲烷/乙酸乙酯(约60mL)研磨，以提供呈淡橙色粉末的中间体A(21.5g，63％产率，97％纯度)。1H NMR(DMSO-d

中间体B的合成

方案2

将3,5-双(三氟甲基)苄基溴(5.00g，17.0mmol)和辛可尼定(5.50g，17.8mmol)在异丙醇中的溶液在回流下加热3.5h。在冷却至室温后，将反应混合物伴随搅拌缓慢倒入二乙醚(250mL)中。将沉淀的固体过滤，用二乙醚(150mL)和戊烷(100mL)洗涤，以得到化合物2.1(8.60g，84％)。

方案3

N-叔丁基-3-甲基-吡啶-2-胺3.2

将化合物3.1(20.00g，116mmol)和叔丁醇钠(22.35g，232mmol)在甲苯(200mL)中的混合物在真空下脱气，并用氮气吹扫三次。在25℃下添加2-甲基丙-2-胺(12.75g，174mmol)、Pd

甲基1-叔丁基-2-羟基-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸酯3.3

在氮气下，在-40℃下向化合物3.2(27.5g，167mmol)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中逐滴添加2.5M n-BuLi(73.67mL，184mmol)。将混合物在-10℃下搅拌0.5h。然后将氯甲酸甲酯(17.40g，184mmol)在-40℃下缓慢添加到混合物中。将混合物在10℃下搅拌1.5h。将反应的反应温度保持在-40℃，并逐滴添加2.5M n-BuLi(46.88mL，117mmol)。将混合物在-40℃下搅拌0.5h。在氮气下，在-40℃下向混合物中添加二异丙胺(23.72g，234mmol)，随后添加2.5M n-BuLi(107.16mL，267mmol)。将混合物在-40℃下搅拌0.5h，并且然后在20℃下再搅拌10h。在反应完成后，将混合物冷却至0℃并添加氯甲酸甲酯(20.57g，218mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h。将混合物通过添加1M盐酸调节至pH 3至4。将混合物用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。合并萃取物，用盐水(100mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1稀释，以得到呈红色固体的化合物3.3(36g，78％产率，97％纯度)。

方案4

二甲基4-硝基苯-1,2-二甲酸酯4.1

向4-硝基邻苯二甲酸(50.0g，237mmol)在甲醇(500mL)中的溶液中添加甲磺酸(34.14g，355mmol)。将混合物在80℃下搅拌16h。将混合物在真空下浓缩并且将残余物溶于乙酸乙酯(500mL)。将溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(2x500mL)、盐水(500mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色固体的化合物4.1(102.0g，粗品)。

二甲基4-氨基苯-1,2-二甲酸酯4.2

在氮气下，向化合物4.1(37g，155mmol)在甲醇(500mL)中的溶液中添加10％Pd/C(2g)。然后将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。将所得混合物在20℃下搅拌10h。将反应混合物过滤，并将滤液在真空下浓缩，以提供呈黄色固体的化合物4.2(30g，粗产物)。

二甲基4-(二苄基氨基)苯-1,2-二甲酸酯4.3

向化合物4.2(90.0g，430mmol)在二甲基乙酰胺(500mL)中的溶液中添加碘化钠(12.9g，86.0mmol)、碳酸钾(208.10g，1.51mol)和苄基氯(163.4g，1.29mol)。将混合物在90℃下搅拌15h。过滤反应混合物，并将滤液倒入水(1L)中。将混合物用乙酸乙酯萃取(3x1L)。将有机相合并，用盐水(3x1L)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝50:1至25:1研磨，以提供呈黄色油的化合物4.3(180.0g，97％产率)。

[4-(二苄基氨基)-2-(羟基甲基)苯基]甲醇4.4

在-20℃下，在1h内按份向化合物4.3(44.0g，113mmol)在四氢呋喃(500mL)中的溶液中添加氢化铝锂(7.74g，204mmol)，并将混合物在10℃下搅拌16h。通过将混合物冷却至0℃并添加水(10mL)、10％水性氢氧化钠(10mL)、水(10mL)和硫酸钠(50g)来淬灭反应。将混合物过滤并收集滤液。将滤饼用四氢呋喃(5x100mL)洗涤。将有机相合并，在减压下浓缩，以提供呈浅黄色固体的化合物4.4(35.2g，93％产率)。

[4-(二苄基氨基)-2-(羟基甲基)苯基]甲醇4.5

将亚硫酰氯(83.1g，698mmol)在乙腈(228mL)中的溶液冷却至0℃，并按份添加化合物4.4(76.0g，228mmol)，同时保持内部温度低于18℃。将反应混合物在25℃下搅拌10min。将混合物用MTBE(1L)稀释，并在0℃下静置2h。通过过滤收集晶体，并在真空下干燥，以给出呈黄色固体的化合物4.5(68.0g，74％产率，HCl盐)。1H NMR(DMSO-d

方案5

(R)-1'-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮5.1

在室温下向NaOH(72g，1.80mol)在水(60mL)中的溶液中添加甲苯(130mL)和化合物4.5(4.7g，12.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌，同时使氩气鼓泡通过溶液持续5min。在10min内按三份添加化合物3.3(3.00g，12.1mmol)。继续使氩气鼓泡通过搅拌溶液持续15min，并在室温下按一份添加化合物2.1(700mg，1.2mmol)。在氩气鼓泡的情况下，将该混合物在室温下搅拌3h。添加水(约300mL)[注意：放热反应]，并将混合物搅拌约15min，同时温热至室温。分离两层，将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用水洗涤，用MgSO

(3R)-5'-(二苄基氨基)螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-2-酮5.2

将化合物5.1(26.8g，55.0mmol)在20℃下用甲磺酸(67.00mL)溶解，并添加甲苯(10mL)。将所得混合物在90℃下搅拌3h。LC-MS显示出原材料完全消耗并检测所需的MS。将混合物倒入水(100mL)中并用碳酸钠调节至pH10。将混合物用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1研磨，以提供呈黄色固体的化合物5.2(20g，83％产率)。

中间体B

(R)-5-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮

向化合物5.2(20g，46.35mmol)在甲醇(200mL)中的溶液中添加10％Pd/C(1.5g)和甲磺酸(7.15g，74.4mmol)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。在氢气球囊下，将混合物在20℃下搅拌16h，过滤，并在减压下浓缩滤液，给出残余物。将残余物用四氢呋喃(100mL)溶解，添加饱和水性碳酸钠直至pH＝8，并将混合物过滤，以给出粉红色固体。将固体溶解在四氢呋喃(100mL)中，用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈浅黄色固体的中间体B(10.78g，83％产率，90.2％纯度)。

方案6

叔丁基3-[(2-甲氧基-2-氧代-乙基)氨基]哌啶-1-甲酸酯6.2

将化合物6.1(1.00g，5.02mmol)、2-氨基乙酸甲酯(756mg，6.02mmol，HCl盐)和乙酸钠(617mg，7.53mmol)在甲醇(10mL)中的混合物在20℃下搅拌2h，添加氰基硼氢化钠(946mg，15.06mmol)并继续搅拌12h。将反应混合物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1洗脱，以提供呈黄色油的化合物6.2(580mg，42％产率)。

叔丁基3-(N-(2-甲氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯6.3

在0℃下向化合物6.2(580mg，2.13mmol)和DIEA(1.48mL，8.52mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中逐滴添加2,2-二甲基丙酰氯(308mg，2.56mmol)。将混合物在氮气下在20℃下搅拌30min，倒入水(40mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1洗脱，以提供呈白色固体的化合物6.3(580mg，76％产率)。

2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸6.4

在20℃下向化合物6.3(300mg，0.84mmol)在四氢呋喃(3mL)和甲醇(2mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(141mg，3.37mmol)在水(1mL)中的溶液。然后将所得混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将水相用1M盐酸调节至pH4。将所得混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈无色胶的化合物6.4(280mg，97％产率)。

叔丁基3-(N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯6.5

在20℃下向化合物6.4(68mg，0.20mmol)、EDCI(50mg，0.26mmol)和HOAt(35mg，0.26mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加DIEA(90mg，0.70mmol)。添加中间体A(50mg，0.20mmol)并将混合物在20℃下搅拌12h。将反应混合物添加到水(15mL)中并过滤。将沉淀物用水(10mL)洗涤，用MeCN(20mL)溶解并在真空下浓缩，以给出呈黄色固体的化合物6.5(84mg，66％产率，90.1％纯度)。

实例1

N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-(哌啶-3-基)棕榈酰胺

在20℃下向化合物6.5(70mg，0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加溴化锌(274mg，1.22mmol)。将混合物在20℃下搅拌16h。将反应混合物溶于甲醇(20mL)中。将饱和水性碳酸钠添加到混合物中直至pH＝8。然后将所得混合物用乙酸乙酯(4x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3x30mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Gemini 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.05％氢氧化氨v/v)，溶剂B：MeCN]；B％：29％-59％，12min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例1(14mg，24％产率，100％纯度)。

方案7

(S)-叔丁基3-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)哌啶-1-甲酸酯7.2

向(S)-3-氨基-1-boc-哌啶(7.1)(800mg，3.99mmol)和三乙胺(0.7mL)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加2-溴乙酸乙酯(700mg，4.19mmol)。将混合物在15℃下搅拌16h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至2:1)，以得到呈无色油的化合物7.2(1.00g，87％产率)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯7.3

向化合物7.2(280mg，0.98mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(253mg，1.96mmol)和新戊酰氯(141mg，1.17mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用二氯甲烷(20mL)稀释并用水(20mL)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物7.3(360mg，99％产率)。

(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸7.4

向化合物7.3(360mg，0.97mmol)在甲醇(10mL)和水(2mL)中的溶液中添加水合氢氧化锂(122mg，2.92mmol)。将混合物在20℃下搅拌1h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将水相用1M盐酸调节至pH＝3-4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物7.4(300mg，90％产率)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯7.5

向化合物7.4(80mg，0.23mmol)和中间体B(59mg，0.23mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加EDCI(90mg，0.47mmol)、HOAt(64mg，0.47mmol)和二异丙基乙胺(60mg，0.47mmol)。将混合物在20℃下搅拌2h，用乙酸乙酯(25mL)稀释，并用水(20mL)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Gemini 150x25mm.5μm；流动相：[溶剂A：水(0.05％氢氧化氨v/v)，溶剂B：MeCN]；B％：42％-72％，12min)。在用乙酸乙酯萃取后，获得呈白色固体的化合物7.5(50mg，37％产率，100％纯度)。

实例2

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)棕榈酰胺

向化合物7.5(50mg，0.087mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(293mg，1.30mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用甲醇(5mL)稀释，用饱和水性碳酸氢钠调节至pH8-9，并用乙酸乙酯(3x25mL)萃取。将有机相合并，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈黄色固体的实例2(5.6mg，TFA盐，98.6％纯度)。

实例3

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((R)-哌啶-3-基)棕榈酰胺

以类似于实例2的方式由(R)-3-氨基-1-boc-哌啶制备实例3。将最终化合物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston pH-lex 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：18％-38％，8min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例3(58mg，TFA盐，64％产率，96.5％纯度，94.31％ee)。

中间体C的合成

方案8

叔丁基(3S)-3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]哌啶-1-甲酸酯8.1

在0℃下向化合物7.2(3.50g，12.22mmol)和DIEA(3.95g，30.56mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中添加三氟乙酸酐(3.08g，14.67mmol)。将混合物在20℃下搅拌0.5h，倒入水(60mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用0.1M盐酸(40mL)和盐水(2x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1洗脱，以给出呈黄色油的化合物8.1(3.60g，产率77％)。

2-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]乙酸8.2

在20℃下向化合物8.1(3.60g，9.41mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中添加氢氧化钠(377mg，9.41mmol)在水(10mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(60mL)中并用乙酸乙酯(80mL)洗涤。将水相用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x80mL)萃取。将有机相合并，用盐水(60mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物8.2(1.70g，51％产率)。

(S)-叔丁基3-(2,2,2-三氟-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)乙酰胺基)哌啶-1-甲酸酯8.3

在20℃下向化合物8.2(627mg，1.77mmol)、EDCI(441mg，2.30mmol)和HOAt(313mg，2.30mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(687mg，5.31mmol)和中间体B(445mg，1.77mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(40mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:3洗脱，以给出呈黄色固体的化合物8.3(910mg，86％产率，98％纯度)。

中间体C

叔丁基(3S)-3-[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-yl]氨基]乙基]氨基]哌啶-1-甲酸酯

在20℃下向化合物8.3(1.30g，1.52mmol)在甲醇(20mL)和水(6mL)中的混合物中添加碳酸钾(632mg，4.57mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用乙酸乙酯(30mL)稀释并倒入水中(30mL)。添加1M盐酸直至pH＝3。除去有机相。将水相用碳酸氢钠碱化直至pH＝8并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x30mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1洗脱，以给出呈白色固体的中间体C(6 50mg，86％产率，99.5％纯度)。

一般途径A

方案9

步骤1a：在室温下向羧酸(1.5至2.0当量)在DMF(1至5mL)中的溶液中添加EDCI(1.5至2.0当量)、HOAt(1.5至2.0当量)和DIEA(1.5至2.0当量)。然后添加中间体C(25-70mg，0.075-0.105mmol，1当量)。将所得混合物在室温下搅拌2至16h。TLC或LC-MS检测到反应。当反应结束时，将混合物倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取。将合并的有机相用1M盐酸(10mL)、盐水(10mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将粗产物直接用于下一步骤或通过硅胶柱色谱法纯化。

步骤1b：在室温下向羧酸(2.0至4.0当量)在二氯甲烷(1至5mL)中的溶液中添加Ghosez试剂(1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺)。将混合物搅拌4h，并在0℃下添加到中间体C(25-70mg，0.075-0.105mmol)和TEA(4.0至8.0当量)的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌16h。TLC或LC-MS检测到反应。当反应结束时，将混合物倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机相合并，用1M盐酸(10mL)、盐水(10mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将粗产物直接用于下一步骤或通过硅胶柱色谱法纯化。

步骤2：将在TFA/DCM(1/5，1至5mL)溶液中的来自步骤1的产物搅拌0.5至2h。通过TLC或LC-MS监测反应。当反应结束时，将混合物在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化并冻干以提供终产物。

实例4

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1a，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，10min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例4(27mg，56％产率，TFA盐，99.7％纯度)。

实例5

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)环戊烷甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1a，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例5(27mg，42％产率，TFA盐，95.6％纯度)。

实例6

2-氟-2-甲基-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-N-[(3S)-3-哌啶基]丙酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，10min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例6(20mg，40％产率，TFA盐，99.3％纯度)。

实例7

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Boston Prime C18 150x30mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例7(23mg，44％产率，TFA盐，99.2％纯度)。

实例8

1-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)环丁烷甲酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Boston Prime C18 150x30mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例8(12mg，22％产率，TFA盐，99.1％纯度)。

实例9

3,3,3-三氟-2,2-二甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丙酰胺

一般途径A，使用中间体C(40mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例9(30mg，38％产率，TFA盐，100％纯度)。

实例10

2-氰基-2-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丙烯酰胺

一般途径A，使用中间体C(60mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例10(14mg，38％产率，TFA盐，97.2％纯度)。

实例11

2-甲氧基-2-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丙烯酰胺

一般途径A，使用中间体C(60mg)和步骤1b，之后使用产物而不经纯化。步骤2之后通过制备型HPLC进行纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例11(31mg，53％产率，TFA盐，98.3％纯度)。

一般途径B

方案10

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.2a

向1-(三氟甲基)环丁烷甲酸(10.1a)(150mg，0.89mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中添加草酰氯(0.2mL)和DMF(6.39mg，0.087mmol)。将混合物在15℃下搅拌1h并在15℃下浓缩。将残余物用二氯甲烷(2mL)溶解，并在0℃下添加到化合物7.2(150mg，0.52mmol)和三乙胺(0.3mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中。将混合物在15℃下搅拌2h，倒入水(40mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至3:1)，以得到呈白色固体的化合物10.2a(130mg，57％产率)。

(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺基)乙酸10.3a

向化合物10.2a(130mg，0.31mmol)在甲醇(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化钠(62mg，1.54mmol)。将混合物在15℃下搅拌6h，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物10.3a(110mg，87％产率)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.4a

向化合物10.3a(100mg，0.24mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(79mg，0.61mmol)、HOAt(43mg，0.32mmol)、EDCI(61mg，0.32mmol)和中间体B(61mg，0.24mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h，倒入水(50mL)中并且用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈浅黄色固体的化合物10.4a(130mg，粗品)。LC-MS方法10:rt 0.981min,(664.4[M+Na]

实例12

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺10.5a

向化合物10.4a(100mg，0.16mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在25℃下搅拌30min并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：15％-45％，5min)。在冷干后，获得呈白色固体的化合物10.5a(89.10mg，84.9％产率，TFA盐，97.4％纯度)。

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.2b

在20℃下向4,4,4-三氟-2,2-二甲基-丁酸(10.1b)(370mg，2.17mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加1-氯-N,N,2-三甲基-丙-1-烯-1-胺(406mg，3.04mmol)。将混合物在20℃下搅拌4h，并在20℃下添加到化合物7.2(623mg，2.17mmol)和三乙胺(660mg，6.52mmol)在DCM(6mL)中的溶液中。将所得混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：52％-82％，9min)。在冻干后，获得呈无色油的化合物10.2b(35mg，3％产率，92％纯度)。LC-MS方法1:rt 1.006min,[M+Na]

钠(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)-4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酰胺基)乙酸酯10.3b

在20℃下向化合物10.2b(35mg，0.080mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(6.39mg，0.16mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，用1M盐酸调节至pH8，并在真空下浓缩，以得到呈黄色固体的化合物10.3b(Na盐)(35mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。LC-MS方法1:rt 0.881min,[M+H]

(S)-叔丁基3-(4,4,4-三氟-2,2-二甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丁酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.4b

在20℃下向化合物10.3b(Na盐)(35mg，0.081mmol)、EDCI(23mg，0.12mmol)和HOAt(16mg，0.12mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIEA(21mg，0.16mmol)，随后添加中间体B(20mg，0.081mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用0.1M盐酸(20mL)和盐水(4x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型TLC纯化(乙酸乙酯)，以提供呈白色固体的化合物10.4b(20mg，37％产率，96.7％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.947min,[M+H]

实例13

4,4,4-三氟-2,2-二甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)丁酰胺10.5b

在20℃下向化合物10.4b(20mg，0.031mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加三氟乙酸(320μL)。将混合物搅拌30min并在真空下浓缩，以给出残余物，将其通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈灰白色固体的化合物10.5b(5mg，23％产率，TFA盐，96.7％纯度)。

根据方案10A制备羧酸10.1c，并用于通过一般途径B合成实例14

方案10A

甲基4-乙基四氢-2H-吡喃-4-甲酸酯10A.2

在氮气下，在-70℃下向化合物10A.1(3.00g，20.8mmol)在THF(30mL)中的溶液中逐滴添加2M LDA(13.53mL)。在氮气下，将混合物在-70℃下搅拌1h。在-70℃下将碘乙烷(4.87g，31.2mmol)逐滴添加到混合物中。将所得混合物在-70℃下搅拌30min，使其温热至20℃并再搅拌2h。将反应混合物倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至5:1洗脱，以提供呈无色油的化合物10A.2(3.50g，98％产率)。

4-乙基四氢吡喃-4-甲酸10.1c

在20℃下向化合物10A.2(3.50g，20.3mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中添加氢氧化钠(813mg，20.3mmol)在水(10mL)中的溶液。将混合物加热至80℃并搅拌16h。将其倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物10.1c(2.10g，65％产率)。

叔丁基(3S)-3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-(4-乙基四氢吡喃-4-羰基)氨基]哌啶-1-甲酸酯10.2c

在20℃下向化合物10.1c(414.3mg，2.62mmol)和DMF(7.66mg，0.10mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加亚硫酰氯(1.87g，15.7mmol)，并搅拌1h。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物用二氯甲烷(3mL)溶解，并在0℃下添加到化合物7.2(300mg，1.05mmol)和三乙胺(636mg，6.29mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中。将混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将合并的有机相用0.1M盐酸(30mL)、盐水(2x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:3洗脱，以提供呈无色油的化合物10.2c(90mg，17％产率，83.2％纯度)。

2-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-(4-乙基四氢吡喃-4-羰基)氨基]乙酸10.3c

在20℃下向化合物10.2c(90mg，0.18mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加氢氧化钠(35mg，0.88mmol)在水(1mL)中的溶液。将混合物搅拌2h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸酸化至pH4，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物10.3c(70mg，95％产率，95.1％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.864min,(421.2[M+Na]

(S)-叔丁基3-(4-乙基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯10.4c

在20℃下向化合物10.3c(70mg，0.18mmol)、EDCI(50mg，0.26mmol)和HOAt(36mg，0.26mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(68mg，0.53mmol)，随后添加中间体B(44mg，0.18mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用0.1M盐酸(20mL)、盐水(2x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色固体的化合物10.4c(90mg，73％产率，90.3％纯度)。

实例14

4-乙基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺10.5c

在20℃下向化合物10.4c(70mg，0.11mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加TFA(0.4mL)，将混合物搅拌30min并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，10min)。在冷干后，获得呈白色固体的化合物10.5c(41mg，57％产率，TFA盐，99.8％纯度)。

中间体D和E的合成

方案11

4-((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-4-甲基哌啶-1-甲酸酯11.2a

向化合物11.1a(730mg，2.63mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中添加DMF(19mg，0.26mmol)和亚硫酰氯(1.91mL)。将混合物在15℃下搅拌1h并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(5mL)中，并添加到化合物7.2(660mg，2.30mmol)和三乙胺(727mg，7.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。将混合物在10℃下搅拌32h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过反相快速色谱法纯化[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]B％：0至95％，以得到呈无色油的化合物11.2a(400mg，30％产率，93.9％纯度)。

(S)-2-(1-((苄基氧基)羰基)-N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)-4-甲基哌啶-4-甲酰胺基)乙酸11.3a

向化合物11.2a(760mg，1.39mmol)在四氢呋喃(3mL)、甲醇(0.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(111mg，2.79mmol)。将混合物在70℃下搅拌30min，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈浅黄色油的化合物11.3a(720mg，96％产率，95.7％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.848min,(518.4[M+H]

苄基4-(((S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酰基)-4-甲基哌啶-1-甲酸酯11.4a

向化合物11.3a(720mg，1.39mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(539mg，4.17mmol，3当量)、HOAt(246mg，1.81mmol，1.3当量)、EDCI(347mg，1.81mmol，1.3当量)和中间体B(400mg，1.59mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.225％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：45％-75％，10min)。在用乙酸乙酯(3x50mL)萃取后，获得呈白色固体的化合物11.4a(460mg，44％产率)。

中间体D

(S)-叔丁基3-(4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯

向化合物11.4a(500mg，0.67mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加TFA(76mg，0.67mmol)和10％Pd/C(50mg)。将混合物脱气并用氢气吹扫三次，并在氢气球囊下，在25℃下搅拌16h。通过过滤除去催化剂，并将滤液浓缩，以得到呈白色固体的中间体D(410mg，99％产率，TFA盐，99.3％纯度)。1H NMR(CD

实例15

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺

向化合物中间体D(40mg，0.065mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL)。将混合物在25℃下搅拌30min，浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：LunaC18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-27％，7min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例15(21mg，43％产率，双-TFA盐，99.0％纯度)。

中间体E

上文详细描述的程序适用于中间体E的类似合成，下文给出了针对其的数据和关键程序细节。

苄基4-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基甲酰基]-4-乙基-哌啶-1-甲酸酯11.2b

通过硅胶柱色谱法进行最终纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝12:1至3:1洗脱，给出呈黄色油的化合物11.2b。

2-[(1-苄基氧基羰基-4-乙基-哌啶-4-羰基)-[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]氨基]乙酸11.3b

获得呈黄色固体的粗品11.3b。

苄基4-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基-3-哌啶基]-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基甲酰基]-4-乙基-哌啶-1-甲酸酯11.4b

通过硅胶柱色谱法进行纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝3:1至0:1洗脱，给出呈黄色油的化合物11.4b。

中间体E

叔丁基(3S)-3-[(4-乙基哌啶-4-羰基)-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]哌啶-1-甲酸酯

将中间体E不经纯化作为黄色油分离出来。

一般途径C

方案12

实例16

1-乙酰基-4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺12.2a

向乙酸(10mg，0.16mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(52mg，0.40mmol)、EDCI(32mg，0.16mmol)和HOAt(22mg，0.16mmol)。添加中间体D(50mg，0.81mmol)，并将混合物在20℃下搅拌12h，用水(10mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物12.1a，将其溶于二氯甲烷(1mL)中并添加三氟乙酸(0.2mL)。将混合物在20℃下搅拌5min，在真空下浓缩，并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：15％-32％，7min)。在冻干后，获得呈白色固体的化合物12.2a(24mg，45％产率，TFA盐，100％纯度)。

实例17

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-1-甲基吡啶基-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺12.2b

根据一般途径C，使用针对化合物12.2a描述的方法并从中间体D(50mg)起始，制备化合物12.2b。直接使用化合物12.1b而不经纯化。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：LunaC18 150x25mm 5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：17％-34％，7min)，并且冻干，得到呈白色固体的12.2b(23mg，34％产率，TFA盐，100.0％纯度)。

实例18

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-1-(2-(哌嗪-1-基)乙酰基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺12.2c

根据一般途径C，使用针对化合物12.2a描述的方法并从中间体D(50mg)起始，制备化合物12.2c。直接使用化合物12.1c而不经纯化。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm 10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：1％-27％，10min)，并且冻干，得到呈白色固体的12.2c(29mg，36％产率，三-TFA盐，97.6％纯度)。

实例19

1-乙酰基-4-乙基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺

根据一般途径C，使用针对化合物12.2a描述的方法，从中间体E起始，制备标题化合物。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Phenomenex Luna C18 250x50mm10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：7％-32％，10min)，并且冻干，得到呈白色固体的产物(TFA盐)。

一般路径D

方案13

(S)-叔丁基3-(4-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯13.1a

在0℃下向中间体D(70mg，0.11mmol)和三乙胺(46mg，0.45mmol)在THF(1.5mL)中的溶液中添加三光气(30mg，0.10mmol)。将混合物在20℃下搅拌30min。在0℃下，添加甲胺(31mg，0.45mmol，HCl盐)和三乙胺(57mg，0.57mmol)。将混合物在20℃下搅拌10min，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：33％-50％，7分钟)，以给出呈白色固体的化合物13.1a(35mg，41％产率，89.9％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.801min,(674.2[M+H]

实例20

N1,4-二甲基-N4-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-N4-[(3S)-3-哌啶基]哌啶-1,4-二甲酰胺13.2a

向化合物13.1a(35mg，0.052mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中添加TFA(0.1mL)。将混合物在25℃下搅拌30min，浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：PhenomenexSynergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：6％-33％，10min)。冻干得到呈白色固体的化合物13.2a(13mg，43产率，TFA盐，98.6％纯度)。

实例21

4-甲基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)-1-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-4-甲酰胺13.2b

根据一般途径D，使用针对化合物13.2a描述的方法并使用吡咯烷作为胺组分(RR'NH)，制备化合物13.2b。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Phenomenex Synergi C18150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：3％-39％，10min)，并且冻干，得到呈白色固体的化合物13.2b(23mg，56％产率，TFA盐，100％纯度)。

一般途径E

方案14

(S)-叔丁基3-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)吡咯烷-1-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯14.1a

在0℃下向化合物7.2(150mg，0.52mmol)和三乙胺(185mg，1.83mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加三光气(155mg，0.52mmol)在四氢呋喃(1mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌30min。然后在0℃下添加吡咯烷(149mg，2.10mmol)，然后添加三乙胺(159mg，1.57mmol)。将混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用1M盐酸(20mL)和盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:2)，以提供呈无色油的化合物14.1a(175mg，69％产率，79.1％纯度)。

(S)-2-(N-(1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基)吡咯烷-1-甲酰胺基)乙酸14.2a

在20℃下向化合物14.1a(175mg，0.36mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(58mg，1.44mmol)在水(1.5mL)中的溶液。将混合物搅拌1h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物14.2a(143mg，88％产率，79.1％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.818min,(356.2[M+H]

(S)-叔丁基3-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸酯14.3a

在20℃下向化合物14.2a(80mg，0.18mmol)、EDCI(51mg，0.27mmol)和HOAt(36mg，0.27mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(69.03mg，0.53mmol)，随后添加中间体B(45mg，0.18mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物14.3a(100mg，70％产率，73.7％纯度)。LC-MS方法1rt 0.829min,(589.4[M+H]

实例22

N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)吡咯烷-1-甲酰胺14.4a

在20℃下向化合物14.3a(50mg，0.085mmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加溴化锌(478mg，2.12mmol)。将混合物搅拌15h，倒入水(20mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：5％-35％，9min)。在冷干后，获得呈黄色固体的化合物14.4a(7mg，14％产率，TFA盐，98.5％纯度)。

叔丁基4-乙酰基哌嗪-1-甲酸酯

在0℃下向叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(1.00g，5.37mmol)和三乙胺(815mg，8.05mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加乙酰氯(464mg，5.91mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h，倒入水(20mL)中并且用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层合并，用1M盐酸(20mL)、饱和碳酸氢钠(20mL)洗涤。将所得有机相用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈无色油的标题化合物(1.40g)，并不经进一步纯化而使用。

1-乙酰基哌嗪盐酸盐

将4M HCl/二噁烷(20mL)中的叔丁基4-乙酰基哌嗪-1-甲酸酯(1.40g，6.13mmol)在20℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，以给出呈白色固体的标题化合物(1.00g，99％产率，HCl盐)。

实例23

4-乙酰基-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-哌啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺14.4b

根据一般途径E，使用1-乙酰基哌嗪作为RR'NH和针对化合物14.4a详述的程序来制备化合物14.4b。将终产物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：2％-32％，9min)，随后冻干，以得到呈黄色胶的化合物14.4b(TFA盐，96.8％纯度)。

方案15

叔丁基(3S)-3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]吡咯烷-1-甲酸酯15.2

在20℃下向化合物15.1(1.00g，5.37mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加2-溴乙酸乙酯(986mg，5.91mmol)，随后添加三乙胺(1.36g，13.42mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(60mL)中并且用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x60mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:1洗脱，以提供呈无色油的化合物15.2(1.04g，71％产率)。

叔丁基(3S)-3-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]吡咯烷-1-甲酸酯15.3

在20℃下向化合物15.2(500mg，1.84mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中添加DIEA(711mg，5.51mmol)，随后添加2,2-二甲基丙酰氯(266mg，2.20mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用0.2M盐酸(2x40mL)、饱和碳酸氢钠(40mL)和盐水(2x50mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物15.3(610mg，93％产率)。

2-[[(3S)-1-叔-丁氧基羰基吡咯烷-3-基]-(2,2-二甲基丙酰基)氨基]乙酸15.4

向化合物15.3(300mg，0.84mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加氢氧化锂水合物(177mg，4.21mmol)在水(2mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌12h，用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL)萃取。将水相用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x40mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色胶的化合物15.4(270mg，98％产率)。

叔丁基(3S)-3-[2,2-二甲基丙酰基-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]氨基]吡咯烷-1-甲酸酯15.5

在20℃下向化合物15.4(82mg，0.25mmol)、EDCI(69mg，0.36mmol)和HOAt(42mg，0.31mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(123mg，0.96mmol)，随后添加中间体A(60mg，0.24mmol)。然后将混合物在25℃下搅拌6h，倒入水(20mL)中并过滤。将滤饼溶于乙酸乙酯(20mL)中并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色固体的化合物15.5(80mg，51％产率)。

实例24

N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((S)-吡咯烷-3-基)棕榈酰胺

在20℃下向化合物15.5(80mg，0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加溴化锌(412mg，1.83mmol)，并搅拌20h。将混合物溶于甲醇(20mL)中，倒入饱和碳酸氢钠(20mL)中，并用乙酸乙酯(8x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(40mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC(柱：Boston pH-lex 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：18％-38％，8min)和制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：18％-48％，9min)纯化。在冻干后，获得呈白色固体的实例24(27mg，38％产率，TFA盐，99.3％纯度)。

方案16

叔丁基3-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.2

向化合物16.1(200mg，0.93mmol)在THF(2mL)中的溶液中添加三乙胺(284mg，2.80mmol)和2-溴乙酸乙酯(172mg，1.03mmol)。将混合物在30℃下搅拌12h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝30:1至5:1洗脱，以给出呈黄色油的化合物16.2(180mg，产率64％)。

叔丁基3-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.3

向化合物16.2(180mg，0.60mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(387mg，3.00mmol)和新戊酰氯(94mg，0.78mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h，倒入水(10mL)中并且用二氯甲烷(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物16.3(220mg，粗品)。

叔丁基3-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.4

向化合物16.3(220mg，0.57mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加水合氢氧化锂(120mg，2.86mmol)在水(2mL)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌2h，用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。丢弃有机层。然后将水相通过1M盐酸(5mL)酸化并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x30mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物16.4(180mg，粗品)。

叔丁基3-(N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)氮杂环庚烷-1-甲酸酯16.5

向化合物16.4(100mg，0.28mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(142mg，1.40mmol)、EDCI(81mg，0.42mmol)和HOAt(58mg，0.42mmol)。然后添加中间体A(71mg，0.28mmol)并将混合物在25℃下搅拌12h。将反应用水(10mL)淬灭，并将混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚:乙酸乙酯＝0:1)，以给出呈黄色固体的化合物16.5(102mg，61％产率，99.2％纯度)。

实例25

N-(氮杂环庚烷-3-基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物16.5(100mg，0.17mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加溴化锌(573mg，2.54mmol)，并将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用甲醇(2mL)溶解，并添加水(10mL)。将混合物用饱和碳酸氢钠(3mL)碱化，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：23％-53％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例25(30mg，30％产率，TFA盐，99.7％纯度)。

方案17

叔丁基4-氨基氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.1

向化合物17.1(500mg，2.34mmol)和25％水性氢氧化铵(2.46g，17.58mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(80mg)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。在氢气氛(15psi)下，将所得混合物在20℃下搅拌12h。将混合物用甲醇(30mL)稀释，过滤，并将滤液在真空下浓缩，以给出呈黄色油的化合物17.2(480mg，95％产率)。

叔丁基4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.3

在20℃下向叔丁基4-氨基氮己烷-1-甲酸酯17.2(250mg，1.17mmol)和三乙胺(295mg，2.92mmol)在四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加2-溴乙酸乙酯(214mg，1.28mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至0:1)，以得到呈黄色油的化合物17.3(210mg，59.9％产率)。

叔丁基4-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.4

在20℃下向化合物17.3(210mg，0.70mmol)和N,N-二异丙基乙胺(226mg，1.75mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加2,2-二甲基丙酰氯(101mg，0.84mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用0.2M盐酸(30mL)和盐水(2x20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤和浓度得到呈黄色胶的化合物17.4(260mg，97％产率，100％纯度)。

2-[(1-叔-丁氧基羰基氮杂环庚烷-4-基)-(2,2-二甲基丙酰基)氨基]乙酸17.5

向17.4(260mg，0.68mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加氢氧化钠(162mg，4.06mmol)在水(1mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌4h，倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将水相用1M盐酸酸化至pH4，并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2x40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到呈黄色胶的化合物17.5(210mg，0.59mmol，87％产率)。

叔丁基4-(N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)氮杂环庚烷-1-甲酸酯17.6

在20℃下向化合物17.5(104mg，0.29mmol)、EDCI(80mg，0.42mmol)和HOAt(49mg，0.36mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(126mg，0.98mmol)和中间体A(70mg，0.28mmol)。将混合物在20℃下搅拌3h，倒入水(20mL)中并过滤。将沉淀物通过过滤收集，溶于乙酸乙酯(40mL)中，并用无水硫酸钠干燥。过滤和在真空下浓缩得到呈黄色固体的化合物17.6(140mg，77％产率，90％纯度)。

LC-MS方法1:rt 0.946min,(612[M+Na]

实例26

N-(氮杂环庚烷-4-基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物17.6(140mg，0.21mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加溴化锌(723mg，3.21mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，溶于甲醇(15mL)中，倒入饱和碳酸氢钠(30mL)中并用乙酸乙酯(8x40mL)萃取。将有机相合并，用盐水(40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18150x25mm，10μm；流动相：[溶剂A：水(0.1％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)，以得到呈白色固体的实例26(32mg，25％产率，TFA盐，98.7％纯度)。

有关实例27、28和29的注释：相对立体化学通过框加粗(block bold)键和虚键指示，并且绝对立体化学由楔形加粗(wedge bold)键和虚键指示。因此，哌啶环周围的立体化学是相对的，并且衍生自中间体B的立体化学是绝对的。虽然示出了一种异构体，但是实例27、28和29是非对映异构体的混合物。相对立体化学在化合物名称中以S*和R*表示。

方案18

(3S*,5S*)-叔丁基3-((2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲基哌啶-1-甲酸酯18.2

向化合物18.1(200mg，0.94mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加10％Pd/C(10mg)、乙酸钠(192mg，2.34mmol)和2-氨基乙酸甲酯(235mg，1.88Mmol，HCl盐)。将混合物脱气并用氢气吹扫三次，并在氢气球囊下，在25℃下搅拌16h。通过过滤除去催化剂，并将滤液倒入水中(20mL)。添加1M盐酸(10mL)，并将水性混合物用乙酸乙酯(2x20mL)洗涤。将水相用碳酸钠调节至pH8，并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，仅获得呈黄色油的外消旋反式异构体化合物18.2(150mg，56％产率)。

(3S*,5S*)-叔丁基3-(N-(2-甲氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-5-甲基哌啶-1-甲酸酯18.3

在0℃下向化合物18.2(170mg，0.59mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加DIEA(192mg，1.48mmol)和新戊酰氯(143mg，1.19mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，通过添加水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物18.3(218mg，粗品)。

2-(N-((3S*,5S*)-1-(叔-丁氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸18.4

向化合物18.3(210mg，0.57mmol)在甲醇(6mL)和水(2mL)中的溶液中添加氢氧化钠(45mg，1.13mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，倒入水(30mL)中并用二氯甲烷(20mL)洗涤。将水相用1M盐酸(10mL)酸化并且用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物18.4(200mg，99％产率)。

(3S*,5S*)-叔丁基3-甲基-5-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯18.5

向化合物18.4(180mg，0.50mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIEA(163mg，1.26mmol)、HOAt(89mg，0.66mmol)、EDCI(126mg，0.66mmol)和中间体B(127mg，0.50mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物通过添加水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1洗脱，以提供呈白色固体的化合物18.5(170mg，54％产率，95.1％纯度)。

实例27

N-((3S*,5S*)-5-甲基哌啶-3-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物18.5(80mg，0.14mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(458mg，2.03mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应通过添加水(50mL)淬灭，并将混合物用碳酸钠粉末调节至pH10。用乙酸乙酯(2x30mL)萃取悬浮液。将有机层合并，用盐水(20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例27(24mg，29％产率，TFA盐，97.1％纯度)。

实例28

N-((3S*,6S*)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

使用针对实例27描述的程序制备目标，从2-甲基-2-丙基2-甲基-5-氧代-1-哌啶甲酸酯起始。通过制备型HPLC进行最终纯化(柱：Luna C18 150x25mm 5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)，给出呈白色固体的实例28(40mg，39％产率，TFA盐，98.8％纯度)。

方案19

(2R*,5S*)-苄基5-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯19.2

在20℃下向化合物19.1(300mg，1.21mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加三乙胺(183mg，1.81mmol)和2-溴乙酸乙酯(222mg，1.33mmol)。将混合物在20℃下搅拌15h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:1洗脱，以给出呈无色油的化合物19.2(301mg，产率74％)。

(2R*,5S*)-苄基5-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯19.3

在0℃下向化合物19.2(300mg，0.90mmol)和三乙胺(272mg，2.69mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加新戊酰氯(195mg，1.61mmol)。将混合物在20℃下搅拌2h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:1洗脱，以给出呈无色油的化合物19.3(240mg，产率64％)。

2-(N-((3S*,6R*)-1-((苄基氧基)羰基)-6-甲基哌啶-3-基)棕榈酰胺基)乙酸19.4

在20℃下向化合物19.3(210mg，0.50mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(110mg，2.75mmol)在水(1.5mL)中的溶液。将混合物在20℃下搅拌1h，倒入水(20mL)中，用盐酸将pH调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取所得混合物。将有机层合并，用盐水(20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物19.4(140mg，71％产率)。

(2R*,5S*)-苄基2-甲基-5-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)哌啶-1-甲酸酯19.5

在20℃下向化合物19.4(70mg，0.18mmol)、EDCI(52mg，0.27mmol)和HOAt(37mg，0.27mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(93mg，0.72mmol)，随后添加中间体B(45mg，0.17mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层合并，用0.1M盐酸(20mL)、盐水(50mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:5洗脱，以给出呈白色固体的化合物19.5(74mg，66％产率，99.7％纯度)。

实例29

N-((3S*,6R*)-6-甲基哌啶-3-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物19.5(74mg，0.12mmol)和三氟乙酸(14mg，0.12mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(20mg)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫三次。在氢气球囊(15psi)下，将所得混合物在20℃下搅拌3h。通过过滤除去催化剂，并将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例29(23mg，33％产率，TFA盐，99.1％纯度)。

方案20

叔丁基6-氧代-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.2

在20℃下向化合物20.1(200mg，0.94mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(477mg，1.13mmol)。将混合物在20℃下搅拌1h，倒入饱和水性亚硫酸钠(20mL)中，并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机相合并，用饱和水性碳酸氢钠(20mL)和盐水(2x20mL)洗涤并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至10:1洗脱，以给出呈白色固体的化合物20.2(129mg，产率65％)。

叔丁基6-((2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.3

在20℃下向化合物20.2(129mg，0.61mmol)和乙酸钠(110mg，1.34mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(20mg)和甘氨酸甲酯盐酸盐(109mg，1.22mmol)。将混合物脱气并用氢气吹扫三次，并在氢气球囊(15psi)下，在25℃下搅拌16h。通过过滤除去催化剂，并将滤液倒入水中(20mL)。将混合物用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将水相用饱和水性碳酸钠调节至pH10。将所得混合物用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物20.3(155mg，89％产率)。

叔丁基6-(N-(2-甲氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.4

在0℃下向化合物20.3(155mg，0.55mmol)和三乙胺(165mg，1.64mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加新戊酰氯(13mg，1.09mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将有机层合并，用1M盐酸(20mL)和盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至5:1洗脱，以给出呈黄色油的化合物20.4(179mg，产率89％)。

2-(N-(2-(叔-丁氧基羰基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚-6-基)棕榈酰胺基)乙酸20.5

在20℃下向化合物20.4(179mg，0.49mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中添加水(1.5mL)中的

叔丁基6-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)-2-氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯20.6

在20℃下向化合物20.5(145mg，0.41mmol)、EDCI(117.64mg，0.61mmol)和HOAt(84mg，0.61mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加DIEA(211mg，1.64mmol)和中间体B(113mg，0.45mmol)。将混合物在20℃下搅拌4h，倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将有机层合并，用1M盐酸(20mL)和盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈白色固体的化合物20.6(210mg，87％产率，94.4％纯度)。LC-MS方法1:rt 0.908min,(588.3[M+H]

实例30

N-(2-氮杂二环[2.2.1]庚-6-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2，3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

在20℃下向化合物20.6(100mg，0.17mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(958mg，4.25mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h，并在真空下除去挥发物。将残余物溶于甲醇(10mL)中并倒入水(10mL)中。将悬浮液用饱和水性碳酸钠调节至pH10，并用乙酸乙酯(5x50mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：12％-42％，9min)。在冻干后，获得呈灰白色固体的实例30(30mg，28％产率，TFA盐，96.3％纯度)。

方案21

叔丁基2-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯21.2

向化合物21.1(150mg，0.66mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加三乙胺(80mg，0.80mmol)和2-溴乙酸乙酯(122mg，0.73mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h，倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(2x10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物21.2(188mg，粗品)。

叔丁基2-(N-(2-乙氧基-2-氧代乙基)棕榈酰胺基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯21.3

向化合物21.2(188mg，0.60mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加DIEA(101mg，0.78mmol)和新戊酰氯(87mg，0.72mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，倒入水(10mL)中并且用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物21.3(207mg，粗品)。

2-(N-(8-(叔-丁氧基羰基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-2-基)棕榈酰胺基)乙酸21.4

向化合物21.3(200mg，0.50mmol)在甲醇(4mL)和水(2mL)中的溶液中添加氢氧化钠(81mg，2.02mmol)。将混合物在20℃下搅拌15h，倒入水(10mL)中，用1M盐酸调节至pH4，并用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(10mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，获得呈黄色油的化合物21.4(99mg，粗品)。

叔丁基2-(N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯21.5

向化合物21.4(80mg，0.22mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(70mg，0.54mmol)、EDCI(50mg，0.26mmol)、HOAt(35mg，0.26mmol)和中间体B(56mg，0.22mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h，倒入水(10mL)中，用1M盐酸酸化至pH4，并用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3x20mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1洗脱，以得到呈黄色固体的化合物21.5(86mg，66％产率)。

实例31A和31B

N-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-2-基)-N-(2-氧代-2-(((R)-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)棕榈酰胺

向化合物21.5(106mg，0.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加溴化锌(595mg，2.64mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h，倒入盐水(10mL)中，用饱和水性碳酸钠调节至pH10，并用5:1乙酸乙酯/甲醇(6x20mL)萃取。将有机层合并，并用硫酸钠干燥。在过滤和浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25mm，5μm；流动相：[溶剂A：水(0.075％TFA)，溶剂B：MeCN]；B％：10％-40％，9min)。在冻干后，获得呈白色固体的实例31A(26mg，24％，TFA盐，97.2％纯度)-第一峰(非对映异构体)，较短的LCMS保留时间-和实例31B(12mg，14％产率，TFA盐，98.5％纯度)-第二峰(非对映异构体)，较长的LCMS保留时间。实例31A

生物学测定

可以使用以下测定来测量本发明的化合物的作用。

cAMP/激动剂-拮抗剂在细胞系中的竞争测定

对化合物抑制配体诱导的cAMP升高的能力进行评估，使用珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)LANCE cAMP测定，使用表达目的特异性受体的可商购细胞，使用以下一般程序：

在添加到粉末原料中的二甲亚砜(DMSO-99.9％纯)中制备化合物(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)，目录号：D4540)，以产生20mM溶液(100％DMSO)，将其在37℃下超声处理10分钟以完全溶解化合物。将20mM原料进一步稀释在DMSO中，以产生2mM溶液，将其在37℃下超声处理10分钟。将2mM原料溶于测定/刺激缓冲液中，以产生400μM溶液，针对所有cAMP测定，将其在37℃下超声处理10分钟。所有原料储存在-20℃。然后进行连续稀释(稀释因子：10)以达到所需的实验浓度。

根据制造商的说明，使用

·28mL汉克氏平衡盐溶液(+MgCl

·150μl HEPES(1M)-(赛默飞世尔科技公司目录号：15630080)

·400μl稳定剂(DTPA)纯化BSA(7.5％)-(珀金埃尔默公司，目录号：CR84-100)

·60μl IBMX(250mM)-(西格玛奥德里奇公司，目录号：I5879)

特异性cAMP/激动剂-拮抗剂竞争测定

使用上文程序运行以下特异性测定

AM

使用上文方案评估化合物抑制表达AM

该测定中化合物的活性在表4中阐述。

AM

使用上文一般方案评估化合物抑制表达AM

在该测定中测试的化合物通常展现出在5至5.7的范围内的pIC

AMY

使用上文一般方案评估化合物抑制表达AMY

在该测定中测试的化合物通常展现出在3.5至6.6的范围内的pIC

细胞活力测定

使用RealTime-GloVMT细胞活力测定试剂盒(普洛麦格公司(Promega)，目录号：G9712)，根据制造商的说明，进行细胞活力测定。这些测定证明了测试化合物(3μM)将细胞存活和生长抑制40％和70％的能力。

使用的所有细胞系购自美国弗吉尼亚州ATCC公司(表1)。将细胞以完全生长培养基中的所需密度接种到白色透明底96孔板(康宁公司(Corning)，目录号：3610)中。将各板在室温下孵育15min(以确保细胞均匀沉降)，之后在37℃下在5％CO

表1：细胞系和相应的完全生长培养基、次佳培养基和接种密度

体内作用：异种移植小鼠模型

可以使用以下异种移植小鼠模型来评估化合物的体内疗效

肿瘤接种

在体内实验中使用的所有细胞系购自美国弗吉尼亚州ATCC公司(表2)。在T500TripleFlasks(赛默飞世尔科技公司，目录号：132913)中以完全生长培养基培养细胞。当达到80％-90％汇合时，使用TrypLE Express酶解离缓冲液(赛默飞世尔科技公司，目录号：12605)从烧瓶中分离细胞。使用Countess II自动细胞计数器对细胞计数，然后以110xg离心5min。将沉淀物重新悬浮在适当体积的冰冷PBS中(取决于细胞数)。为了确保肿瘤接种，将细胞(500μL)与500μL冰冷的基质胶(康宁公司，目录号：354234)使用冷的移液器吸头混合(慢慢移液以确保均匀混合并防止基质胶中形成气泡)。在注射给小鼠之前，将基质胶/细胞悬液和注射器保持在冰上。针对每个实验(10个处理组和10个媒介物对照组)，将100μL细胞悬液(50％PBS+50％基质胶中5x 10

表2：细胞系和相应的完全生长培养基

化合物制备

根据以下式，在100％DMSO(西格玛奥德里奇公司，目录号：D4540)中稀释粉末形式化合物：

然后将这些化合物在37℃下超声处理10h。然后根据下式，添加适当体积的溶剂(表4)，产生6％DMSO/94％溶剂溶液：

然后将这些化合物在37℃下超声处理10h。

表3：化合物溶剂的配方

用测试化合物进行体内处理

在处理之前，将每个化合物小瓶用等分溶剂稀释，得到3％DMSO中的4mg/mL化合物，然后在37℃下超声处理10min。适合地，每天用100μL处理(20mg/kg)或媒介物对照腹膜内对小鼠进行处理。也可以使用例如5mg/kg或10mg/kg的剂量的测试化合物。每周测量一次肿瘤大小和小鼠重量。

生物学数据

表4中所示的化合物在上述AM

表4

体内异种移植数据

在上述小鼠异种移植模型中测试了本文所例示的化合物之一，化合物SHF-1041，其中将小鼠接种CFPAC-1细胞(来自导管腺癌的细胞(例如ATCC))。以5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量，每天一次，向处理小鼠组腹膜内施用SHF-1041测试化合物。在图1中示出了与对照组相比，在24天的SHF-1041给药后对％肿瘤体积生长的影响。与对照组相比，在5mg/kg的剂量下，SHF-1041将肿瘤体积生长抑制了42％。

塞加里细胞活力

测试了AM2受体抑制剂化合物SHF-1038对塞加里细胞活力的影响。SHF-1038是在本发明的权利要求的范围之外的小分子AM2受体抑制剂，但在本文所述的AM2D2测定中具有>8的pIC50。

将HUT-78塞加里细胞悬液接种在48孔板中含有2％胎牛血清的DMEM中(2,500个细胞/mL，1mL/孔)中。每天用终浓度为3μM的AM2受体抑制剂化合物(SHF-1038)(或媒介物对照)处理细胞，持续9天。每3天轻轻更换新鲜培养基(每孔800μL)。使用台盼蓝排除方法在第5、7和9天对细胞计数。将10μL细胞悬液添加到10μL台盼蓝中。将该混合物转移到一次性计数载玻片，并使用Countess II自动细胞计数器(赛默飞世尔科技公司)计数。将每个处理条件的细胞活力相对于媒介物处理的细胞(为100％活力)归一化。

测试化合物SHF-1038在9天处理期后将细胞活力降低68％。