吡咯烷酮类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的用途
文献发布时间:2023-06-19 12:08:44
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及吡咯烷酮类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的用途。
背景技术
一点红药材系菊科植物(Compositae)一点红Emilia sonchifolia(Linnaeus)deCandolle的新鲜或干燥全草。本品长10~50cm。根细而弯曲,有须根。茎细圆柱形,表面暗绿色,下部被茸毛。叶多皱缩,展平后基生叶呈琴状分裂,长5~10cm,宽2.5~5cm,灰绿色或暗绿色,先端裂片大,近三角形,基部抱茎,边缘具疏钝齿;茎生叶渐狭。头状花序2~3个排成聚伞状,总苞圆柱形,苞片1层,呈条状披针形或近条状,长约1cm;管状花棕黄色,冠毛白色。瘦果狭矩圆形,长约3mm,有棱。
中国华南、华中和西南等地均有野生。一点红性平,味苦微辛,凉血解毒,其以食嫩梢嫩叶为主,可炒食、作汤或作火锅料,质地爽脆,类似茼蒿的品味,具有清热解毒、活血散淤等功效,还可以治泌尿系统感染、咽喉炎、毒疮等。
神经保护剂是一种保护易受损神经元,减轻或阻止疾病进展的神经调节剂。可减少神经元的死亡,常用的神经保护剂包括钙通道阻滞剂、自由基清除剂、谷氨酸拮抗剂、细胞膜稳定剂等。目前,神经保护剂是急性脑卒中的治疗手段之一。神经保护药物可以抑制细胞死亡和阻止缺血区组织再灌注损伤,借此可以延长脑卒中发作后的使用纤维蛋白溶解疗法的治疗时间。
发明内容
本发明公开了式I的化合物及其药学上可接受的盐;
所述的式I的化合物的制备方法包括以下步骤:
A、取一点红药材经体积分数80-95%的乙醇回流提取1-3次,合并提取液,浓缩干燥后得浸膏;
B、将浸膏与硅藻土以1:1-3的重量比例拌样后,依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯回流洗脱,取乙酸乙酯回流提取物,回收溶剂,得乙酸乙酯提取物;
C、将乙酸乙酯提取物用硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比20:1-0:1进行梯度洗脱,取其中11:1-9:1段的洗脱留分;
D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱,取其中以氯仿-甲醇29:1-20:1洗脱收集段的洗脱留分;
E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱,取其中以氯仿-甲醇40-21:60-79洗脱收集段的洗脱留分;
F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离,采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱,取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后,即得。
本发明还公开了式I的化合物在制备神经细胞保护药物中的用途。
本发明还公开了一种神经细胞保护药物组合物,含有式I的化合物和/或其药学上可接受的盐。
所述的药物组合物,还含有一点红、白花蛇舌草、鸡血藤、桃金娘根、白背叶根、地桃花、菥蓂中的一种或几种。
所述的药物组合物,还含有一点红、白花蛇舌草、鸡血藤、桃金娘根、白背叶根、地桃花、菥蓂中的一种或几种的提取物。
所述的药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂、软膏剂、栓剂或喷雾剂。
本发明所述的式Ⅰ的化合物为一点红中新发现的化合物,经过本实验例2的细胞水平实验表明其对皮质酮损伤的PC12细胞具有明显的保护作用,体现出了较好的神经细胞保护作用,是一种新型的神经细胞保护药物。
附图说明
本发明附图如下:
图1是不同浓度的式Ⅰ的化合物对皮质酮损伤的PC12细胞存活力的影响结果图;
图2是本发明化合物的式Ⅰ。
具体实施方式
实施例1
所述化合物的制备方法包括以下步骤:
A、取一点红药材30kg,干燥、切碎,用6倍量体积分数为80%的乙醇回流提取2次,每次2小时,合并提取液,浓缩干燥得浸膏备用;将浸膏与硅藻土以1:1的重量比例拌样
B、将步骤A中浸膏与硅藻土混合物用石油醚进行回流洗脱,取石油醚回流洗脱后的残渣,用二氯甲烷进行回流洗脱,取二氯甲烷回流洗脱后的残渣,用乙酸乙酯进行回流洗脱,收集洗脱液,命名为ZF-3;
C、将洗脱液ZF-3用60-180目的柱层析硅胶进行色谱分离,洗脱溶剂为氯仿-甲醇,氯仿和甲醇体积比逐步变化,20:1to 0:1;其按顺序收集洗脱留分,其中以氯仿-甲醇(20:1、19:1、18:1)洗脱收集为Fr1;以氯仿-甲醇(17:1、16:1、15:1)洗脱收集为Fr2;以氯仿-甲醇(14:1、13:1、12:1)洗脱收集为Fr3;以氯仿-甲醇(11:1、10:1、9:1)洗脱收集为Fr4;以氯仿-甲醇(8:1、7:1、6:1)洗脱收集为Fr5;以氯仿-甲醇(5:1、4:1、3:1)洗脱收集为Fr6;以氯仿-甲醇(2:1、1:1、0:1)洗脱收集为Fr7;
D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱,其中以氯仿-甲醇(50:1-45:1)洗脱收集为Fr4.1;以氯仿-甲醇(44:1-40:1)洗脱收集为Fr4.2;以氯仿-甲醇(39:1-35:1)洗脱收集为Fr4.3;以氯仿-甲醇(34:1-30:1)洗脱收集为Fr4.4;以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集为Fr4.5;以氯仿-甲醇(19:1-10:1)洗脱收集为Fr4.6;以氯仿-甲醇(9:1-0:1)洗脱收集为Fr4.7。取其中以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5;
E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱,其中以氯仿-甲醇(100-81:0-19)洗脱收集为Fr4.5.1;以氯仿-甲醇(80-61:20-39)洗脱收集为Fr4.5.2;以氯仿-甲醇(60-41:40-59)洗脱收集为Fr4.5.3;以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集为Fr4.5.4;以氯仿-甲醇(20-100:80-0)洗脱收集为Fr4.5.5。取其中以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5.4;
F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离,采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱,取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后,即得式1的化合物。
将制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测,结果证明所得化合物为式1的化合物。
实施例2
所述化合物的制备方法包括以下步骤:
A、取一点红药材30kg,干燥、切碎,用9倍量体积分数为95%的乙醇回流提取2次,每次2小时,合并提取液,浓缩干燥得浸膏备用;将浸膏与硅藻土以1:3的重量比例拌样
B、将步骤A中浸膏与硅藻土混合物用石油醚进行回流洗脱,取石油醚回流洗脱后的残渣,用二氯甲烷进行回流洗脱,取二氯甲烷回流洗脱后的残渣,用乙酸乙酯进行回流洗脱,收集洗脱液,命名为ZF-3;
C、将洗脱液ZF-3用60-180目的柱层析硅胶进行色谱分离,洗脱溶剂为氯仿-甲醇,氯仿和甲醇体积比逐步变化,20:1to 0:1;其按顺序收集洗脱留分,其中以氯仿-甲醇(20:1、19:1、18:1)洗脱收集为Fr1;以氯仿-甲醇(17:1、16:1、15:1)洗脱收集为Fr2;以氯仿-甲醇(14:1、13:1、12:1)洗脱收集为Fr3;以氯仿-甲醇(11:1、10:1、9:1)洗脱收集为Fr4;以氯仿-甲醇(8:1、7:1、6:1)洗脱收集为Fr5;以氯仿-甲醇(5:1、4:1、3:1)洗脱收集为Fr6;以氯仿-甲醇(2:1、1:1、0:1)洗脱收集为Fr7;
D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱,其中以氯仿-甲醇(50:1-45:1)洗脱收集为Fr4.1;以氯仿-甲醇(44:1-40:1)洗脱收集为Fr4.2;以氯仿-甲醇(39:1-35:1)洗脱收集为Fr4.3;以氯仿-甲醇(34:1-30:1)洗脱收集为Fr4.4;以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集为Fr4.5;以氯仿-甲醇(19:1-10:1)洗脱收集为Fr4.6;以氯仿-甲醇(9:1-0:1)洗脱收集为Fr4.7。取其中以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5;
E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱,其中以氯仿-甲醇(100-81:0-19)洗脱收集为Fr4.5.1;以氯仿-甲醇(80-61:20-39)洗脱收集为Fr4.5.2;以氯仿-甲醇(60-41:40-59)洗脱收集为Fr4.5.3;以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集为Fr4.5.4;以氯仿-甲醇(20-100:80-0)洗脱收集为Fr4.5.5。取其中以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5.4;
F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离,采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱,取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后,即得式1的化合物。
将制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测,结果证明所得化合物为式1的化合物。
实施例3
所述化合物的制备方法包括以下步骤:
A、取一点红药材30kg,干燥、切碎,用7倍量体积分数为90%的乙醇回流提取2次,每次2小时,合并提取液,浓缩干燥得浸膏备用;将浸膏与硅藻土以1:2的重量比例拌样
B、将步骤A中浸膏与硅藻土混合物用石油醚进行回流洗脱,取石油醚回流洗脱后的残渣,用二氯甲烷进行回流洗脱,取二氯甲烷回流洗脱后的残渣,用乙酸乙酯进行回流洗脱,收集洗脱液,命名为ZF-3;
C、将洗脱液ZF-3用60-180目的柱层析硅胶进行色谱分离,洗脱溶剂为氯仿-甲醇,氯仿和甲醇体积比逐步变化,20:1to 0:1;其按顺序收集洗脱留分,其中以氯仿-甲醇(20:1、19:1、18:1)洗脱收集为Fr1;以氯仿-甲醇(17:1、16:1、15:1)洗脱收集为Fr2;以氯仿-甲醇(14:1、13:1、12:1)洗脱收集为Fr3;以氯仿-甲醇(11:1、10:1、9:1)洗脱收集为Fr4;以氯仿-甲醇(8:1、7:1、6:1)洗脱收集为Fr5;以氯仿-甲醇(5:1、4:1、3:1)洗脱收集为Fr6;以氯仿-甲醇(2:1、1:1、0:1)洗脱收集为Fr7;
D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱,其中以氯仿-甲醇(50:1-45:1)洗脱收集为Fr4.1;以氯仿-甲醇(44:1-40:1)洗脱收集为Fr4.2;以氯仿-甲醇(39:1-35:1)洗脱收集为Fr4.3;以氯仿-甲醇(34:1-30:1)洗脱收集为Fr4.4;以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集为Fr4.5;以氯仿-甲醇(19:1-10:1)洗脱收集为Fr4.6;以氯仿-甲醇(9:1-0:1)洗脱收集为Fr4.7。取其中以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5;
E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离,采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱,其中以氯仿-甲醇(100-81:0-19)洗脱收集为Fr4.5.1;以氯仿-甲醇(80-61:20-39)洗脱收集为Fr4.5.2;以氯仿-甲醇(60-41:40-59)洗脱收集为Fr4.5.3;以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集为Fr4.5.4;以氯仿-甲醇(20-100:80-0)洗脱收集为Fr4.5.5。取其中以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5.4;
F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离,采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱,取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后,即得式1的化合物。
将制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测,结果证明结果证明所得化合物为式1的化合物。
实验例1
结构鉴定:
式I化合物
白色粉末;UV(MeOH)λ
式I化合物的碳谱和氢谱
实验例3
通式I的生物碱类化合物神经保护作用的研究:
一点红生物碱对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用
以式I化合物为研究对象,考察其对神经细胞的保护作用。PC12细胞株为大鼠肾上腺嗜铬细胞克隆化细胞株,分化的PC12细胞有典型的神经细胞特征,其胞膜上糖皮质激素受体表达丰富。用高浓度的皮质酮诱导PC12细胞损伤,已成为研究抑郁症的一种常用体外模型。本研究用高浓度的皮质酮与PC12细胞共同孵育,模拟抑郁症病人的大脑神经元损伤状态,以此观察一点红生物碱碱对神经细胞的保护作用。
1材料与试剂
1.1药物式I的化合物。
1.2试剂大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞(上海细胞库);精致胎牛血清、马血清、青霉素钠、链霉素(Gibco公司);皮质酮,DMEM,MTT,二甲基亚砜(Sigma公司)。
1.3仪器纯水仪(美国Millipore公司);二氧化碳培养箱(NAPCO 6500TC法国);连续波长酶标仪(美国BIO-TEK)。
2方法
2.1PC12细胞培养
PC12细胞液置于15mL的离心管中,1000rpm,离心5min,弃上清液,将细胞用含有10%胎牛血清、5%马血清的高糖DMEM培养基悬浮,分装于25mL的培养瓶中,置于37℃的二氧化碳培养箱中培养,每2-3d换液1次。
2.2供试品对皮质酮损伤的PC12细胞存活力的影响
PC12细胞培养基养至对数生长期,用含10%胎牛血清、5%马血清的DMEM培养基(含青霉素钠100U/ml、链霉素100μg/ml)重悬细胞,调细胞浓度为每毫升1×10
实验结果见图1,从图1中可见式I的化合物在5μg/mL)时显示出较强的保护作用(P<0.05),细胞存活率为87%.在更高的浓度时(20μg/mL)会导致细胞生存率下降。
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