博来霉素与达卡巴嗪联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用

技术领域：

本发明属于医药领域，特别涉及博来霉素与达卡巴嗪联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用。

背景技术：

胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，是仅次于肝癌的第二大肝胆系统常见恶性肿瘤。肝胆恶性肿瘤总体死亡率在所有恶性肿瘤中居第5位。我国为胆管癌高发地区，近年来发病率不断上升。胆管癌侵袭性强，仅30％~40％的病人在诊断时能通过手术切除得到有效的治疗，而大多数患者确诊时已处于晚期，缺乏有效的治疗手段，预后极差。

博来霉素(Bleomycin)是一种比较常见的临床化疗药物。来自于轮枝链霉菌的糖肽抗生素，广谱抗肿瘤药物，能有效对抗各种癌症如淋巴瘤，睾丸肿瘤，食管癌和鳞状细胞癌，淋巴瘤，睾丸肿瘤和恶性胸腔积液等。博来霉素作为临床抗肿瘤药物最大的优势是，其在抗肿瘤的同时没有明显的骨髓抑制作用，同时对机体的免疫功能也没有抑制作用。但同大多数化疗药物一样，博来霉素也有不容忽视的副作用：长期使用会导致肺炎样症状及肺纤维化症状，因而长期使用博来霉素治疗肿瘤也是非常危险的。

达卡巴嗪是是一种新型抗肿瘤药物，具有广谱抗瘤活性，是治疗肿瘤的一线药物。达卡巴嗪为一种三氮杂苯衍生物，它的作用机制是在体内释放出甲基正离子起烷化作用，也作为嘌呤核苷酸前体的类似物而抑制嘌呤核苷酸的合成，具有较好的抗肿瘤转移活性。

关于博来霉素与达卡巴嗪共同作用效果的报道尚未出现。本发明在小鼠pdx模型中研究了博来霉素与达卡巴嗪联合用药在治疗胆管癌中的作用。

发明内容：

发明目的

提出博来霉素联合达卡巴嗪在制备治疗胆管癌药物中的作用，使得抗肿瘤疗效显著增强，为老药新用提供依据。

技术方案

本发明提供了博来霉素与达卡巴嗪联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用。

因此，博来霉素与达卡巴嗪联用在制备抗胆管癌药物方面的应用，以及一种同时含有博来霉素与达卡巴嗪的抗胆管癌药物，都在本发明的保护范围之内。

优选地，所述博来霉素与达卡巴嗪的用量比例为2.25mg/kg：30 mg/kg。

有益效果

本发明首次公开了博来霉素与达卡巴嗪联合用药在抑制胆管癌肿瘤方面的发现，可以实现协同增效的作用，实现抗肿瘤效果的显著提高，通过联合用药减少了博来霉素与达卡巴嗪用量，从而减低毒副作用，对博来霉素与达卡巴嗪联合用药抗胆管癌应用具有显著的意义。

附图说明：

图1是实验小鼠移植瘤体积增长曲线图。

图2是给予不同药物后肿瘤组织病理HE染色结果。

具体实施方式：

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

实施例1小鼠pdx模型建立

一、实验材料

Matrigel®Matrix基质胶（Corning，美国）、RPMI 1640培养基（BiologicalIndustries,以色列）、胆管癌人源肿瘤组织。

二、肿瘤组织接种

1.将基质胶解冻同1640培养基按1:1混匀稀释，置冰上备用。

2.将在裸鼠皮下生长至足够体积的人源肿瘤剖取下置于培养皿中，皿置冰上并倒有适量预冷的生理盐水。

3.小心剔除掉肿瘤组织上的坏死部分、血管及瘤体表面包膜等。

4.将瘤组织剪切成1 mm

5.用套管针将混有基质胶的小瘤块植入裸鼠右胁皮下。

6.待2-4周，瘤块在裸鼠皮下稳定生长，挑取瘤体大小合适的裸鼠，随机分组，按要求开始给药。

实施例2小鼠移植瘤体积变化

一、实验分组

1.空白组：不给药。

2.博来霉素组：给予博来霉素2.25mg/kg，腹腔注射给药，两天一次。

3.达卡巴嗪组：给予达卡巴嗪30 mg/kg，静脉注射给药，两天一次。

4.联合用药组：博来霉素腹腔注射给药，2.25mg/kg，两天一次；达卡巴嗪静脉注射给药，30 mg/kg，两天一次。

二、结果分析

给药开始前测量瘤径，以后每4天测量一次瘤径，直至实验结束。给药结束后第二天脱椎处死小鼠，剖取皮下瘤组织，拍照。

表1各组小鼠移植瘤体积变化

根据图1显示的结果，博来霉素与达卡巴嗪联合组较其他三组比，移植瘤体积明显较小，体积增长率明显小于其他实验组，由上述内容可以得知，博来霉素与达卡巴嗪联合用药对抑制胆管癌细胞效果显著。

实施例3肿瘤病理HE染色

一、HE染色

将剖取的皮下瘤组织用固定液固定，制备成石蜡切片。分别按照二甲苯I、II、III各脱蜡3分钟，无水乙醇I、II各2分钟，95％乙醇、90％乙醇、80％乙醇各1分钟，苏木精染色10分钟，水冲洗之后1％盐酸酒精分化15秒，水中浸泡10分钟，伊红染色3分钟，80％乙醇、90乙醇各10秒，95％乙醇1-2分钟，无水乙醇I、II、III各3分钟，二甲苯I、II、III各3分钟，最后中性树胶封片，显微镜下拍照。

二、结果分析

根据图2所显示的染色结果可以看出，空白组、博来霉素组、达卡巴嗪组肿瘤细胞核染明显较深，核质比大，形状不规则，肿瘤细胞密集排列；联合用药组核染较浅，瘤细胞排列较疏松，可见较多坏死区域。由此说明博来霉素与达卡巴嗪联合用药对抑制胆管癌细胞效果显著。