对胰高血糖素、GLP-1、和GIP受体都具有活性的三重激动剂或其缀合物对肝病的治疗用途

技术领域

本发明涉及对胰高血糖素、GLP-1、和GIP受体均具有活性的三重激动剂或其缀合物对肝病的治疗用途。

背景技术

肝脏是动物活体中的主要器官之一，且肝脏相关疾病的代表性实例包括非酒精性脂肪肝(NAFL)、肝炎、肝纤维化、胆汁淤积性肝病、肝硬化、肝代偿失调、肝癌等。已知病毒、酒精、药物、免疫异常、代谢病等可导致肝脏炎症，并且诸如肝纤维化、肝硬化、肝癌等疾病可随着肝脏炎症的进展和变成慢性而发展。

通常，肝炎是以肝脏炎症为特征的疾病，其占肝病的大部分，且已知随着肝炎的进展，各种肝病(例如，肝纤维化、肝硬化等)可能伴随肝脏炎症而发生或由肝脏炎症导致。肝炎根据其特征

肝病的其它代表性实例包括代谢性肝病(例如，脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(NAFLD；非酒精性脂肪性肝炎)、脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝代偿失调、肝癌等。由于这些肝病在早期阶段缺乏其任何症状或意识，只有在相当大的进展后才能被发现，它们不仅在韩国而且在全世界都被列为死亡的主要原因，且因此，对治疗药物的开发有很大的需求。

肝纤维化是反复肝损伤的创伤恢复过程的结果，且当肝损伤的原因被移除时，正常的恢复是可能的，但当肝纤维化反复且纤维化加重时，就会发生肝硬化。肝硬化是慢性病，其病理上伴随有肝细胞的坏死、炎症和纤维化，且其发展成疾病(如肝硬化并发症(例如，肝代偿失调)、肝癌等，最终导致死亡。特别地，由于在疾病的早期阶段对个人的症状缺乏意识，只有在相当大的进展后才能发现肝硬化，因此正在积极进行研究以开发及时治疗肝纤维化的方法，肝纤维化是在其演变成肝硬化之前的状况。Kunos博士的团队最近报道了通过化学改进ibipinapant而开发的药物，ibipinapant是脑穿透性大麻素1型(CB-1)受体拮抗剂的类型，但尚不清楚这种药物作为真正的药物是否有效(JCI Insight.2016；1(11):e87336.doi:10.1172/jci.insight.87336)。因此，仍然需要开发可以为患者提供方便，且无副作用的能够治疗各种组织的纤维化或肝的纤维化的药物。

非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)——代谢性肝病——是尽管与酒精消费无关，但仍显示出与酒精性肝炎相似的组织发现的疾病，且其包括单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)等。非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)已显示出随着肥胖和糖尿病人群的增加而增加的趋势，且在韩国的年发病率为约16％。

为了预防和/或治疗这种非酒精性脂肪性肝炎疾病，正在进行努力以改善胰岛素抵抗。例如，噻唑烷二酮(TZDs)或二甲双胍(其是一种类型的胰岛素致敏剂)的临床试验仍在积极进行中(Hepatology(2003)38:1008–17,J Clin Invest.(2001)108:1167–74)。

然而，在使用基于TZD的药物治疗的情况下，它们的缺点在于它们可能导致大量的体重增加并降低体液的流速。因此，已知这些药物的应用对于心脏病患者是不可能的。由于这些结果等，本领域已经众所周知的是直接使用已知对治疗糖尿病有效(例如，胰岛素抵抗改善剂)的药物作为治疗剂用于治疗非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)可导致问题(如副作用)。

同时，已知巨噬细胞负责肝中重要的免疫应答并参与包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)(Nat Rev Gastroenterol Hepatol.2019Mar；16(3):145–159)。具体地，已知巨噬细胞在患有非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)的患者中被激活，并且靶向这些巨噬细胞的药物可以抑制肝中的炎症和纤维化，且显示出针对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗效果。

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)是参与根据食物摄入调节血糖成分的代表性胃肠激素和神经激素。胰高血糖素是由胰腺分泌的肽类激素并与上面描述的两种材料一起参与血糖水平的调节。

GLP-1是由小肠分泌的激素且被食物摄入刺激，并且它以血糖依赖性方式促进胰腺中的胰岛素分泌并抑制胰高血糖素的分泌，从而有助于降低血糖水平的作用。另外，GLP-1还具有通过充当饱腹因子(satiety factor)来减缓胃肠道中的消化作用和通过延迟消化食物穿过胃肠道的时间来减少食物摄入量的作用。另外，据报道，对小鼠给予GLP-1具有抑制食物摄入和减轻体重的效果，并且这些效果被确认在正常和肥胖状态下同样发生，从而显示GLP-1作为治疗肥胖症的治疗剂的潜力。

GIP是由肠道K细胞分泌的42个氨基酸组成的激素，与GLP-1一样，是受食物摄入刺激而分泌的胃肠激素中的一种。据报道，GIP表现出以血糖依赖的方式促进胰腺中胰岛素分泌并帮助降低血糖水平的功能，具有增加GLP-1的活性的效果等。

胰高血糖素是当由于诸如药物治疗、疾病、激素或酶缺乏等原因导致的血糖水平下降时在胰腺中产生的。胰高血糖素发出信号用于肝脏中的糖原分解以诱导葡萄糖的释放，且从而将血糖水平增加到正常水平。除了增加血糖水平的效果外，已报道，胰高血糖素抑制动物和人类的食欲并激活脂肪细胞的激素敏感性脂肪酶，以促进脂肪分解和能量消耗，从而显示出抗肥胖作用。

发明内容

[技术问题]

本发明的一个目的是提供用于预防或治疗肝病的药物组合物，其含有对胰高血糖素受体、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体、和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)受体具有活性的肽或其缀合物。

本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗肝病的方法，其包括向需要其的受试者给予肽或含有该肽的组合物。

本发明的又一个目的是提供肽或含有该肽的组合物在制备用于预防或治疗肝病的药物中的用途。

[技术方案]

为了实现上述目的，本发明的一个方面提供了用于预防或治疗肝病的药物组合物，其含有对胰高血糖素受体、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)受体具有活性的肽或其缀合物。

在一个具体的实施方式中，用于预防或治疗肝病的药物组合物含有药学上可接受的赋形剂；和含有药学有效量的SEQ ID NOS:1至102中任一项的氨基酸序列的肽。

在另一个具体的实施方式中，肽的特征在于它是长效缀合物的形式，且长效缀合物的特征在于它由下式1表示：

[式1]

X-L-F

其中，在上式1中，

X是SEQ ID NOS:1至102中任一项的氨基酸序列的肽；

L是包含乙二醇重复单元的连接体；

F是免疫球蛋白Fc片段或其衍生物；以及

‘-’表示X和L之间以及L和F之间的共价键。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肽的特征在于，肽的C-末端被酰胺化。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是肝脏炎症。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，药物组合物的特征在于，在给予时，它减少肝组织中TNF-α、MCP-1和IL-6中至少一种的表达。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是代谢性肝病。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，药物组合物的特征在于，在给予时，其减少了肝组织中甘油三酯和/或的胆固醇的量。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是选自单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、肝脏炎症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胆汁淤积性肝病、肝纤维化、肝硬化、肝代偿失调、和肝癌中的至少一种疾病。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，胆汁淤积性肝病的特征在于，其是选自原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎及其组合中的任何一种。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是伴随有脂肪肝、肝纤维化或肝硬化的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)导致的肝癌。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是选自单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)和肝硬化中的至少一种疾病。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是选自肝脏炎症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和肝纤维化中的至少一种疾病。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肝病的特征在于，其是肝纤维化，且药物组合物的特征在于，当给予时，其减少了在给予该药物组合物的受试者中TIMP-1和/或透明质酸的血液浓度。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肽的特征在于，其包括选自SEQID NOS:21、22、42、43、50、64、66、67、70、71、76、77、96、97和100的氨基酸序列。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肽其特征在于，其包括选自SEQID NOS:21、22、42、43、50、66、67、77、96、97和100的氨基酸序列。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，肽其特征在于，其包括选自SEQID NOS:21、22、42、43、50、77和96的氨基酸序列。

在根据前述具体实施方式中任一项的组合物中，L中乙二醇重复单元部分的式量在1kDa至100kDa的范围内。

本发明的又一方面提供用于预防或治疗肝病的方法，其包括向需要其的受试者给予肽或含有该肽的组合物。

本发明的又一方面提供肽或含有该肽的组合物在制备用于预防或治疗肝病的药物中的用途。

本发明的又一方面提供肽或含有该肽的组合物在用于预防或治疗肝病中的用途。

[有益效果]

根据本发明的三重激动剂或其缀合物可以具有用于预防或治疗肝病的用途。

附图说明

图1示出了示例通过对由甲硫氨酸和胆碱缺乏(MCD)饮食摄入诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的小鼠模型每2天给予一次SEQ ID NO:42的长效缀合物，持续28天，小鼠中NAFLD活动性评分(NAFLD activity score，NAS)的变化结果的图表(p<0.05、**p<0.01、**p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体(vehicle)比较)。

图2示出了示例在患有由AMLN饮食诱导的脂肪性肝炎的小鼠中，确认通过SEQ IDNO:42的长效缀合物改善脂肪肝的效果的结果的图表。

图3示出了示例在患有由AMLN饮食诱导的脂肪性肝炎的小鼠中，确认通过SEQ IDNO:42的长效缀合物降低脂肪变性评分的效果的结果的图表和图像。

图4示出了示例在由TAA给予诱导的肝纤维化的小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，ELF评分变化的结果的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图5示出了示例在由TAA给予诱导的肝纤维化的小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，肝组织中的天狼星红(sirius red)染色阳性面积的变化的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图6示出了示例在由BDL诱导的肝纤维化的小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，在血液中的肝纤维化标记物浓度的变化的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较，

图7a示出了示例在由BDL诱导的肝纤维化的小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，天狼星红染色的结果的图像。

图7b示出了示例在由BDL诱导的肝纤维化的小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，肝组织的纤维化评分的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图8示出了在原发性胆汁性肝硬化(PBC)小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，示例H&E染色的结果的图像，示例肝组织的炎症评分变化的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图9示出了在原发性硬化性胆管炎(PSC)小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，示例H&E染色结果的图像，示例肝组织的实质坏死评分的变化的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图10示出了示例在PSC小鼠模型中，根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，胆管增生评分的变化的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图11示出了示例根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予，在肝组织中炎症相关细胞因子表达水平的变化的图表(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，通过单因素ANOVA与运载体比较)。

图12示出了示例在人巨噬细胞系中，通过SEQ ID NOS:42、66、67、97和100的三重激动剂，减少人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的效果的确认结果的图表。

具体实施方式

在下文中，将更详细地描述本发明。

同时，本文公开的每个解释和示例性实施方式可以适用于每个其他解释和示例性实施方式。即，本文公开的各种因素的所有组合属于本发明的范围。此外，本发明的范围不应受下文提供的具体公开的限制。

贯穿本发明的整个说明书，不仅使用用于天然存在的氨基酸的常规的单字母和三字母代码，而且使用通常允许用于其它氨基酸(如α-氨基异丁酸(Aib)、Sar(N-甲基甘氨酸)和α-甲基-谷氨酸)的那些三字母代码。另外，本文中提到氨基酸根据IUPAC-IUB的命名规则被缩写如下：

丙氨酸(Ala,A) 精氨酸(Arg,R)

天冬酰胺(Asn,N) 天冬氨酸(Asp,D)

半胱氨酸(Cys,C) 谷氨酸(Glu,E)

谷氨酰胺(Gln,Q) 甘氨酸(Gly,G)

组氨酸(His,H) 异亮氨酸(Ile,I)

亮氨酸(Leu,L) 赖氨酸(Lys,K)

甲硫氨酸(Met,M) 苯丙氨酸(Phe,F)

脯氨酸(Pro,P) 丝氨酸(Ser,S)

苏氨酸(Thr,T) 色氨酸(Trp,W)

酪氨酸(Tyr,Y) 缬氨酸(Val,V)

为实现本发明的目的，本发明的一个方面提供了用于预防或治疗肝病的药物组合物，其含有对胰高血糖素受体、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体、和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)受体具有活性的肽，且具体地，提供了含有SEQ ID NOS:1至102中任一项的氨基酸序列的肽。

在本发明中，“对胰高血糖素受体、GLP-1受体和GIP受体具有活性的肽”可以与三重激动剂互换使用。

这种肽包括对胰高血糖素、GLP-1和GIP受体具有显著水平的活性的各种材料(例如，各种肽)。

与相应受体的天然配体(天然胰高血糖素、天然GLP-1和天然GIP)相比，对胰高血糖素、GLP-1和GIP受体具有显著水平的活性的三重激动剂可对胰高血糖素、GLP-1和GIP受体中的一种或多种受体，具体地两种或更多种受体，且更具体地所有三种受体，表现出约0.001％或更高、约0.01％或更高、约0.1％或更高、约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、约5％或更高、约6％或更高、约7％或更高、约8％或更高、约9％或更高、约10％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高、约80％或更高、约90％或更高、和约100％或更高的体外活性，但三重激动剂不特别地限于此，且不受限制地包括具有显著增加的活性范围。

特别地，与天然受体相比，对受体的活性可能包括，例如，那些情况，其中体外活性为0.1％或更高、1％或更高、2％或更高、3％或更高、4％或更高、5％或更高、6％或更高、7％或更高、8％或更高、9％或更高、10％或更高、20％或更高、30％或更高、40％或更高、50％或更高、60％或更高、70％或更高、80％或更高、90％或更高、100％或更高、以及约200％或更高，但活性不限于此。

如本文所用，术语“约”是指包括±0.5、±0.4、±0.3、±0.2、±0.1等中的所有的范围，并且其包括与紧接在术语“约”之后的值相等的值或在类似范围内的值的所有值，但不限于此。

用于测量三重激动剂体外活性的方法可参考本发明实施例1，但方法不特别限定于此。

同时，三重激动剂的特征在于具有下述活性i)至iii)中一种或多种，且具体地具有其显著的活性：

i)GLP-1受体的激活；ii)胰高血糖素受体的激活；和iii)GIP受体的激活。

特别地，受体的激活可能包括例如其中与天然受体相比，体外活性为约0.1％或更高、约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、约5％或更高、约6％或更高、约7％或更高、约8％或更高、约9％或更高、约10％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高、约80％或更高、约90％或更高、和约100％或更高的那些情况，但活性不限于此。

另外，肽可以是与天然GLP-1、天然胰高血糖素和天然GIP中的任一种相比具有增加的体内半衰期的肽，但肽不特别地限于此。

肽可以是非天然存在的肽，但不是特别地限于此。

肽可以是天然胰高血糖素的类似物，但不特别地限于此。具体地，天然胰高血糖素类似物包括：与天然胰高血糖素的氨基酸序列相比在氨基酸序列中具有至少一个差异的肽；经由天然胰高血糖素序列的修饰而修饰的肽；和天然胰高血糖素的模拟物。

同时，天然胰高血糖素可能具有以下氨基酸序列，但不是特别地限于此：His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr(SEQ ID NO:118)

具体地，肽可以是天然胰高血糖素的类似物，其中在天然胰高血糖素序列的至少一个氨基酸上已经发生了选自取代、添加、缺失、修饰及其组合的变异，但肽不特别地限于此。

另外，氨基酸的取代包括用氨基酸取代和用非天然化合物取代。

另外，添加可以在肽的N-末端和/或C-末端进行。同时，添加的氨基酸长度没有特别限制，而可以添加1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、和11个或更多个氨基酸，且广义上，添加可以包括多肽的添加，但添加不特别地限于此。

更具体地，肽可以是那些，其中选自天然胰高血糖素的氨基酸序列中第1、2、3、7、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、27、28和29位的氨基酸中的1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个、或20个氨基酸被其它氨基酸取代，且另外，可以是那些，其中在其C-末端独立地或额外地添加1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、或11个或更多个氨基酸，但肽不特别地限于此。

甚至更具体地，肽可以是那些，其中选自天然胰高血糖素氨基酸序列中第1、2、3、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、27、28和29位的氨基酸中的1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、或19个氨基酸被其它氨基酸取代，且另外，可以是那些，其中在其C-末端独立地或额外地添加1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、或11个或更多个氨基酸，但肽不特别地限于此。

甚至更具体地，肽可以是那些，其中选自天然胰高血糖素氨基酸序列中第1、2、3、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、28和29位的氨基酸中的1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、或17个氨基酸被其它氨基酸取代，且另外，可以是那些，其中在其C-末端独立地或额外地添加1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、或11个或更多个氨基酸，但肽不特别地限于此。

甚至更具体地，肽可以是那些，其中选自天然胰高血糖素氨基酸序列中第1、2、13、16、17、18、19、20、21、23、24、27、28和29位的氨基酸中的1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、或14个氨基酸被其它氨基酸取代，且另外，可以是那些，其中在其C-末端独立地或额外地添加1个或更多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、或11个或更多个氨基酸，但肽不特别地限于此。

待引入的氨基酸可以选自酪氨酸、α-甲基-谷氨酸、Aib、甲硫氨酸、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和精氨酸，但待引入的氨基酸不特别地限于此。

例如，待添加的氨基酸序列(一个或多个)可以是源自天然GLP-1氨基酸序列、天然GIP氨基酸序列、或天然的毒蜥外泌肽-4氨基酸序列中的一个或多个氨基酸序列。

这种肽可以包括分子内桥(例如，共价交联或非共价交联)，且具体地，可以是包括环的形式，例如，可以是在肽的第16个氨基酸和第20个氨基酸之间形成环的形式，但肽不特别地限于此。

环的非限制性实例可包括内酰胺桥(或内酰胺环)。

另外，肽包括经修饰以包括环、或包括能够在目标位置形成环的氨基酸的肽的全部。

例如，肽可以是一种肽，其中第16个和第20个氨基酸中的一个被谷氨酸取代且另一个被赖氨酸取代，这可以形成环，但肽是不限于此。

这种环可以在肽内的氨基酸侧链之间形成；例如，环可以是在赖氨酸的侧链和谷氨酸的侧链之间形成内酰胺环的形式，但环不特别地限于此。

通过这些方法的组合制备的肽的实例可以包括其中其氨基酸序列与天然胰高血糖素的氨基酸序列在至少一个氨基酸上不同，并且其N-末端的α-碳被移除，同时对胰高血糖素受体、GLP-1受体和GIP受体具有活性的肽等，但肽不限于此，并且适用于本发明的肽可以通过用于制备类似物的各种方法的组合制备。

另外，关于本发明的肽，为了增加肽的体内半衰期，氨基酸中的一些可以被其它氨基酸或非自然化合物取代以避免被降解酶识别，但肽不特别地限于此。

具体地，肽可以是一种肽，其中通过肽的氨基酸序列中的第2个氨基酸序列的取代来避免被降解酶识别而增加体内半衰期，但不受限制地包括为避免被体内降解酶识别的氨基酸的任何取代或修饰。

另外，这种用于制备肽的这种修饰包括使用L型或D型氨基酸和/或非自然氨基酸的所有修饰；和/或天然序列的修饰，例如侧链官能团的修饰、分子内共价键合(例如，侧链之间的环形成)、甲基化、酰化、泛素化、磷酸化、氨基己烷化(aminohexanation)、生物素化等。

另外，修饰还包括其中一个或多个氨基酸被添加到天然胰高血糖素的氨基和/或羧基末端的修饰的全部。

不仅可以使用常见于人类蛋白质中的20种氨基酸，也可以使用非典型或非自然存在的氨基酸作为用于取代或添加的氨基酸。非典型氨基酸的商业来源包括Sigma-Aldrich、ChemPep Inc.,和Genzyme Pharmaceuticals。包括这些氨基酸的肽，以及典型的肽序列可以从商业肽合成公司(例如，American Peptide Company、Bachem(美国)或Anygen(韩国))合成和购买。

可以以相同方式获得氨基酸衍生物，且作为一个这样的实例，可以使用4-咪唑乙酸等。

另外，为了保护免受体内蛋白酶的影响，同时增加其稳定性，根据本发明的肽可以是变体的形式，其中肽的N-末端和/或C-末端等被化学修饰或由有机基团保护，或氨基酸可以被添加到肽的末端。

特别地，在化学合成肽的情况下，其N-末端和C-末端是带电荷的。因此，为了移除这种电荷，肽的N-末端可能被乙酰化和/或肽的C-末端可能被酰胺化，但肽修饰不特别地限于此。

另外，根据本发明的肽包括肽本身、其盐(例如，其药学上可接受的盐)、或其溶剂化物的形式的所有。另外，肽可以是任何药学上可接受的形式。

盐的种类没有特别地限制。然而，盐优选地是对受试者(例如，哺乳动物)是安全且有效的形式的盐，但盐不是特别地限于此。

术语“药学上可接受的”是指在药物医学决定(pharmaco-medical)范围内，在不引起过度毒性、刺激性、过敏反应等的情况下，可以有效地用于期望用途的物质。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指衍生自药学上可接受的无机酸、有机酸或碱的盐。合适的酸的实例可以包括盐酸、溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、甲苯-对-磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。衍生自合适碱的盐的可包括碱金属(例如钠、钾等)；碱土金属(例如，镁)；铵等。

如本文所用，术语“溶剂化物”是指根据本发明的肽或其盐和溶剂分子之间形成的复合物。

在肽的另一个实施方式中，它可以是包括由以下通式1表示的氨基酸序列的肽：Xaa1-Xaa2-Xaa3-Gly-Thr-Phe-Xaa7-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-Xaa23-Xaa24-Trp-Leu-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30-R1(通式1,SEQ ID NO:103)。

在上面的通式1中，

Xaa1是组氨酸、4-咪唑乙酰基、或酪氨酸；

Xaa2是甘氨酸、α-甲基-谷氨酸、或Aib；

Xaa3是谷氨酸或谷氨酰胺；

Xaa7是苏氨酸或异亮氨酸；

Xaa10是亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、或缬氨酸；

Xaa12是赖氨酸、丝氨酸、或异亮氨酸；

Xaa13是谷氨酰胺、酪氨酸、丙氨酸、或半胱氨酸；

Xaa14是亮氨酸、甲硫氨酸、或酪氨酸；

Xaa15是半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、或亮氨酸；

Xaa16是甘氨酸、谷氨酸、或丝氨酸；

Xaa17是谷氨酰胺、精氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、或组氨酸；

Xaa19是丙氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、或缬氨酸；

Xaa20是赖氨酸、谷氨酰胺、或精氨酸；

Xaa21是谷氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、半胱氨酸、或天冬氨酸；

Xaa23是异亮氨酸、缬氨酸；

Xaa24是丙氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、或谷氨酸；

Xaa27是缬氨酸、亮氨酸、或赖氨酸；

Xaa28是半胱氨酸、赖氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、或天冬氨酸；

Xaa29是半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、谷氨酸、或组氨酸；

Xaa30是半胱氨酸、甘氨酸、赖氨酸、或组氨酸，或是不存在的；以及

R1是半胱氨酸、GKKNDWKHNIT(SEQ ID NO:106)、m-SSGAPPPS-n(SEQ ID NO:107)、或m-SSGQPPPS-n(SEQ ID NO:108)、或是不存在的，其中：

m是-Cys-、-Pro-、或-Gly-Pro-；以及

n是-Cys-、-Gly-、-Ser-、或-His-Gly-、或是不存在的。

三重激动剂的实例可以是包括选自SEQ ID NOS:1至11和SEQ ID NOS:13至102的氨基酸序列的三重激动剂；以及(实质上(必需地，

另外，尽管在本发明中被描述为“由特定SEQ ID NO组成的肽”，只要肽具有与由相应的SEQ ID NO的氨基酸序列组成的肽的活性相同或相应的活性，那么这种描述不排除通过在相应的SEQ ID NO的氨基酸序列的上游或下游添加无意义的序列而可能发生的突变、或可能自然发生的突变、或其沉默突变，并且即使在肽中具有这种序列添加或突变时，其也显然属于本发明的范围。

以上可以适用于本发明的其它具体实施方式或方面，但不限于此。

具体地，在上述通式1中，Xaa14可以是亮氨酸或甲硫氨酸，并且Xaa15可以是半胱氨酸、天冬氨酸、或亮氨酸。

这种肽的实例可以包括包含选自SEQ ID NOS:1至11、14至17、和21至102的氨基酸序列的肽；或(实质上)由其组成的肽，但肽不特别地限于此。

肽可显著激活胰高血糖素受体、GLP-1受体和GIP受体中的至少一种，但肽不特别地限于此。具体地，肽可以是显著地激活GLP-1受体，或另外显著地激活胰高血糖素受体和/或GIP受体的肽，但肽不特别地限于此。

更具体地，肽可以是一种肽，

其中在上述通式1中，

Xaa2是甘氨酸、α-甲基-谷氨酸、或Aib；

Xaa7是苏氨酸；

Xaa10是酪氨酸、半胱氨酸、或缬氨酸；

Xaa12是赖氨酸或异亮氨酸；

Xaa13是酪氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、或半胱氨酸；

Xaa14是亮氨酸、半胱氨酸、或甲硫氨酸；

Xaa15是半胱氨酸、亮氨酸、谷氨酸、或天冬氨酸；

Xaa17是谷氨酰胺、精氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、或组氨酸；

Xaa19是丙氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、或半胱氨酸；

Xaa20是赖氨酸、精氨酸、或谷氨酰胺；

Xaa21是谷氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、半胱氨酸、或天冬氨酸；

Xaa23是异亮氨酸或缬氨酸；

Xaa24是半胱氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、谷氨酸、或天冬氨酸；和

Xaa27是亮氨酸或赖氨酸，

但肽并不特别地限于此。

更具体地，肽可以是一种肽，

其中在上述通式1中，

Xaa2是甘氨酸、α-甲基-谷氨酸或Aib；

Xaa7是苏氨酸；

Xaa10是酪氨酸、半胱氨酸、或缬氨酸；

Xaa12是赖氨酸或异亮氨酸；

Xaa13是酪氨酸、丙氨酸、或半胱氨酸；

Xaa14是亮氨酸或甲硫氨酸；

Xaa15是半胱氨酸或天冬氨酸；

Xaa17是谷氨酰胺、精氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、精氨酸、或组氨酸；

Xaa19是丙氨酸、谷氨酰胺、或半胱氨酸；

Xaa20是赖氨酸或谷氨酰胺；

Xaa21是谷氨酸、半胱氨酸、或天冬氨酸；

Xaa23是缬氨酸；

Xaa24是丙氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、天冬酰胺、或天冬氨酸；和Xaa27是亮氨酸或赖氨酸，但肽不特别地限于此。

更具体地，肽可以是一种肽，

其中在上述通式1中，

Xaa2是α-甲基-谷氨酸或Aib；

Xaa7是苏氨酸；

Xaa10是酪氨酸或半胱氨酸；

Xaa12是赖氨酸或异亮氨酸；

Xaa13是酪氨酸、丙氨酸、或半胱氨酸；

Xaa14是亮氨酸或甲硫氨酸；

Xaa15是半胱氨酸或天冬氨酸；

Xaa16是谷氨酸；

Xaa17是精氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、精氨酸、或组氨酸；

Xaa19是丙氨酸、谷氨酰胺、或半胱氨酸；

Xaa20是赖氨酸或谷氨酰胺；

Xaa21是谷氨酸或天冬氨酸；

Xaa23是缬氨酸；

Xaa24是谷氨酰胺、天冬酰胺、或天冬氨酸；

Xaa27是亮氨酸；和

Xaa28是半胱氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、或天冬氨酸。

具体地，肽可以是一种肽，

其中在上述通式1中，

Xaa1是组氨酸或4-咪唑乙酰基；

Xaa2是α-甲基-谷氨酸或Aib；

Xaa3是谷氨酰胺；

Xaa7是苏氨酸；

Xaa10是酪氨酸；

Xaa12是异亮氨酸；

Xaa13是丙氨酸或半胱氨酸；

Xaa14是甲硫氨酸；

Xaa15是天冬氨酸；

Xaa16是谷氨酸；

Xaa17是异亮氨酸或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸或组氨酸；

Xaa19是谷氨酰胺或半胱氨酸；

Xaa20是赖氨酸；

Xaa21是天冬氨酸；

Xaa23是缬氨酸；

Xaa24是天冬酰胺；

Xaa27是亮氨酸；

Xaa28是丙氨酸或天冬酰胺；

Xaa29是谷氨酰胺或苏氨酸；和

Xaa30是半胱氨酸或赖氨酸、或是不存在的。

更具体地，肽可以是一种肽，

其中在上述通式1中，

Xaa2是甘氨酸、α-甲基-谷氨酸、或Aib；

Xaa3是谷氨酰胺；

Xaa7是苏氨酸；

Xaa10是酪氨酸、半胱氨酸、或缬氨酸；

Xaa12是赖氨酸；

Xaa13是酪氨酸；

Xaa14是亮氨酸；

Xaa15是天冬氨酸；

Xaa16是甘氨酸、谷氨酸、或丝氨酸；

Xaa17是谷氨酰胺、精氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、精氨酸、或组氨酸；

Xaa19是丙氨酸或谷氨酰胺；

Xaa20是赖氨酸或谷氨酰胺；

Xaa21是谷氨酸、半胱氨酸、或天冬氨酸；

Xaa23是缬氨酸；

Xaa24是丙氨酸、谷氨酰胺、或半胱氨酸；

Xaa27是亮氨酸或赖氨酸；和

Xaa29是甘氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、或组氨酸，但肽不是特别地仅限于此。

这样的肽可对应于其中肽对GLP-1受体和胰高血糖素受体两者均具有显著激活水平、或与对GIP受体的激活水平相比具有更高的激活水平的情况；其中肽对GLP-1受体、胰高血糖素受体和GIP受体全部都具有显著激活水平的情况；或其中肽对GLP-1受体和GIP受体两者具有显著激活水平并且与对与胰高血糖素受体的激活水平相比具有更高激活水平的情况；但情况并不特别地限于此。

肽的实例可包括包含选自SEQ ID NOS:8、9、21至37、39、42、43、49至61、64至83、85、86、88、89、91至93、和95至102的氨基酸序列的肽；或(实质上)由选自以上的氨基酸序列组成的肽，但肽不特别地限于此。

在具体的实施方式中，肽可以包括由下面的通式2表示的氨基酸序列。

Xaa1-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Lys-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-Xaa23-Xaa24-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Ser-Ser-Gly-Gln-Pro-Pro-Pro-Ser-Xaa40(通式2，SEQ ID NO:104)

在上述通式2中，肽可以是一种肽，其中：

Xaa1是4-咪唑乙酰基、组氨酸、或酪氨酸；

Xaa2是甘氨酸、α-甲基-谷氨酸、或Aib；

Xaa10是酪氨酸或半胱氨酸；

Xaa13是丙氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、或半胱氨酸；

Xaa14是亮氨酸、甲硫氨酸、或酪氨酸；

Xaa15是天冬氨酸、谷氨酸、或亮氨酸；

Xaa16是甘氨酸、谷氨酸、或丝氨酸；

Xaa17是谷氨酰胺、精氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、或组氨酸；

Xaa19是丙氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、或缬氨酸；

Xaa20是赖氨酸、谷氨酰胺、或精氨酸；

Xaa21是半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、或天冬氨酸；

Xaa23是异亮氨酸或缬氨酸；

Xaa24是半胱氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、或谷氨酸；

Xaa28是赖氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、或天冬氨酸；

Xaa29是甘氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、或组氨酸；

Xaa30是半胱氨酸、甘氨酸、赖氨酸、或组氨酸；

Xaa31是脯氨酸或半胱氨酸；和

Xaa40是半胱氨酸或是不存在的。

更具体地，肽可以是一种肽，其中在通式2中，

Xaa13是丙氨酸、酪氨酸、或半胱氨酸；

Xaa15是天冬氨酸或谷氨酸，

Xaa17是谷氨酰胺、精氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸、精氨酸、或组氨酸；

Xaa21是半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、或天冬氨酸；

Xaa23是异亮氨酸或缬氨酸；

Xaa24是半胱氨酸、谷氨酰胺、或天冬酰胺，

Xaa28是半胱氨酸、天冬酰胺、或天冬氨酸；

Xaa29是谷氨酰胺、半胱氨酸、或组氨酸；和

Xaa30是半胱氨酸、赖氨酸、或组氨酸。

肽的实例可包括包含选自SEQ ID NOS:21、22、42、43、50、64至77、和95至102的氨基酸序列的肽；更具体地，包含选自SEQ ID NOS:21、22、42、43、50、64至77、和96至102的氨基酸序列的肽；或(实质上)由选自以上的氨基酸序列组成的肽，但肽不特别地限于此。

在具体的实施方式中，肽可以包括由下面的通式3表示的氨基酸序列。

Xaa1-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Xaa13-Leu-Asp-Glu-Xaa17-Xaa18-Xaa19-Lys-Xaa21-Phe-Val-Xaa24-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Xaa29-Xaa30-Xaa31-Ser-Ser-Gly-Gln-Pro-Pro-Pro-Ser-Xaa40(通式3,SEQ ID NO:105)。

肽可以是一种肽，其中在以上通式3中，

Xaa1是组氨酸或酪氨酸；

Xaa2是α-甲基-谷氨酸或Aib；

Xaa13是丙氨酸、酪氨酸或半胱氨酸；

Xaa17是精氨酸、半胱氨酸、或赖氨酸；

Xaa18是丙氨酸或精氨酸；

Xaa19是丙氨酸或半胱氨酸；

Xaa21或谷氨酸或天冬氨酸；

Xaa24是谷氨酰胺或天冬酰胺；

Xaa28是半胱氨酸或天冬氨酸；

Xaa29是半胱氨酸、组氨酸、或谷氨酰胺；

Xaa30是半胱氨酸或组氨酸；

Xaa31是脯氨酸或半胱氨酸；和

Xaa40是半胱氨酸或是不存在的。

肽的实例可以包括包含选自SEQ ID NO：21、22、42、43、50、64至71、75至77和96到102的氨基酸序列的肽；或(实质上)由选自以上的氨基酸序列组成的肽，但肽不是特别地限于此。

另外，肽可以是一种肽，其中在上述通式1中，R1是半胱氨酸、GKKNDWKHNIT(SEQ IDNO:106)、CSSGQPPPS(SEQ ID NO:109)、GPSSGAPPPS(SEQ ID NO:110)、GPSSGAPPPSC(SEQ IDNO:111)、PSSGAPPPS(SEQ ID NO:112)、PSSGAPPPSG(SEQ ID NO:113)、PSSGAPPPSHG(SEQ IDNO:114)、PSSGAPPPSS(SEQ ID NO:115)、PSSGQPPPS(SEQ ID NO:116)、或PSSGQPPPSC(SEQID NO:117)、或是不存在的，但肽不特别限于此。

另外，本发明的肽可以根据其长度通过本领域公知的方法(例如，通过肽自动合成仪)合成，并且可以通过基因工程技术生产。

具体地，本发明的肽可以通过标准制备合成方法、重组表达系统、或本领域已知的任何其它方法来制备。因此，本发明的肽可以通过多种方法合成，多种方法包括，例如，以下描述的方法：

(a)通过固相或液相法逐步或通过片段装配合成肽，随后分离和纯化最终肽产物的方法；或

(b)在宿主细胞中表达编码肽的核酸构建体并从宿主细胞培养物中回收表达产物的方法；或

(c)进行编码肽的核酸构建体的体外无细胞表达并从中回收表达产物的方法；或

通过方法(a)、(b)和(c)的任意组合获得肽的片段，通过连接肽片段获得肽，然后回收肽的方法。

具体地，根据本发明的组合物是用于预防或治疗肝病的药物组合物，且其可以是含有药学上可接受的赋形剂的药物组合物；以及包含SEQ ID NOS:1至102中任一项的氨基酸序列的肽或以药学有效量(实质上)由其组成的肽。

在更具体的实施方式中，肽可以是包括选自SEQ ID NOS:21、22、42、43、50、64、66、67、70、71、76、77、96、97和100的氨基酸序列、或(实质上)由选自以上的氨基酸序列组成的肽；包括选自SEQ ID NOS:21、22、42、43、50、66、67、77、96、97和100的氨基酸序列、或(实质上)由选自以上的氨基酸序列组成的肽；或包括选自SEQ ID NOS:21、22、42、43、50、77和96的氨基酸序列、或(实质上)由选自以上的氨基酸序列组成的肽；但肽不限于此。另外，在本发明中，肽是长效缀合物的形式，并且长效缀合物可以是其中用于增加肽的体内半衰期的生物相容性物质与对胰高血糖素受体、GLP-1受体和GIP受体具有活性的肽连接的长效缀合物。在本说明书中，生物相容性物质可与载体互换使用。

在本发明中，与未连接载体的肽相比，肽的缀合物可表现出增强的功效持续时间，并且在本发明中，这样的缀合物被称为“长效缀合物”，其可与“缀合物”互换使用。

同时，缀合物可以是非自然存在的缀合物。

具体地，长效缀合物可以是由以下式1表示的长效缀合物，但长效缀合物不限于此。

[式1]

X-L-F

其中在以上式1中，

X是包含SEQ ID NOS:1至102中任一项的氨基酸序列的肽；

L是含有乙二醇重复单元的连接体；

F是免疫球蛋白Fc片段或其衍生物；以及

‘-’表示X和L之间以及L和F之间的共价键。

在上述缀合物中，F是能够增加X(即，对胰高血糖素受体、GLP-1受体和GIP受体具有活性的肽；且具体地，含有SEQ ID NOS:1至102中任一项的氨基酸序列的肽)的半衰期的物质，并且它对应于构成本发明缀合物的部分的构造。

F可以是通过共价化学键或非共价化学键与X连接的F，且具体地，F和X可以通过共价化学键通过L彼此连接。

在具体实施方式中，F可以是免疫球蛋白Fc片段或其衍生物，且更具体地，免疫球蛋白Fc片段或其衍生物可以衍生自IgG，但F不特别地限于此。

在本发明中，术语“免疫球蛋白Fc片段”是指包括重链恒定区2(CH2)和/或重链恒定区3(CH3)部分，不包括免疫球蛋白重链和轻链的可变区的区。免疫球蛋白Fc片段可以是构成本发明缀合物部分的构造。

在本发明中，Fc片段不仅包括通过木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白获得的天然序列，还包括其衍生物(例如，其中天然序列中的一个或多个氨基酸残基通过缺失、插入、非保守或保守取代或其组合被修饰的序列)，且因此与天然形式的Fc片段不同。

F可以具有其中两个多肽链通过二硫键连接的结构、或其中两个多肽链通过两个链中仅一个中的氮原子连接的结构，但F的结构不限于此。通过氮原子的连接可以经由还原胺化被连接到赖氨酸的εN原子或N-末端氨基。

还原胺化反应是指其中反应物的胺基或氨基与另一反应物的醛(即，能还原胺化的官能团)反应以产生胺，且此后通过还原反应形成胺键的反应。还原胺化反应是本领域中众所周知的有机合成反应。

在一个实施方式中，F可以是通过N-末端脯氨酸的氮原子连接的F，但F不限于此。

这种免疫球蛋白Fc片段可以包括重链恒定区中的铰链区，但不限于此。

在本发明中，免疫球蛋白Fc片段可以在N-末端包括特异性铰链序列。

本文所用，术语“铰链序列”是指位于重链中并通过间二硫键(inter-disulfidebond)形成免疫球蛋白Fc片段的二聚体的区域。

在本发明中，铰链序列可以是其中具有以下氨基酸序列的铰链序列中的一部分缺失，且因此在序列中只有一个半胱氨酸残基的修饰序列，但铰链序列不限于此：

Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:119)。

铰链序列可以是其中SEQ ID NO:119的铰链序列中的第8或第11个半胱氨酸残基缺失并且因此在序列中仅包括一个半胱氨酸残基的铰链序列。本发明的铰链序列可由3至12个氨基酸组成，仅包括一个半胱氨酸残基，但铰链序列不限于此。更具体地，本发明的铰链序列可以具有以下序列：

Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:120)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Pro(SEQ ID NO:121)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser(SEQ ID NO:122)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro(SEQ IDNO:123)、Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Ser(SEQ ID NO:124)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO:125)、Glu-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO:126)、Glu-Ser-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:127)、Glu-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:128)、Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:129)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:130)、Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:131)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:132)、Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO:133)、Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro(SEQ ID NO:134)、Glu-Ser-Lys-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:135)、Glu-Ser-Pro-Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:136)、Glu-Pro-Ser-Cys(SEQ IDNO:137)、和Ser-Cys-Pro(SEQ ID NO:138)。

更具体地，铰链序列可以是包括SEQ ID NO:129(Pro-Ser-Cys-Pro)或SEQ ID NO:138(Ser-Cys-Pro)的氨基酸序列的铰链序列，但铰链序列不限于此。

本发明的免疫球蛋白Fc片段可以是其中免疫球蛋白Fc链的两个分子由于其中存在铰链序列而形成二聚体的形式，且另外，本发明的式1的缀合物可以是其中连接体的一端连接到二聚体免疫球蛋白Fc片段的一个链的形式，但免疫球蛋白Fc片段和式1的缀合物不限于此。

如本文所用，术语“N-末端”是指蛋白质或多肽的氨基末端，并且其可以包括氨基末端的最末端或从最末端起的1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个或更多个氨基酸。本发明的免疫球蛋白Fc片段可以在N-末端包括铰链序列，但免疫球蛋白Fc片段不限于此。

另外，只要本发明的免疫球蛋白Fc片段具有与其天然类型实质上相同或改进的效果，其可以是延伸的Fc片段，其包括重链恒定区1(CH1)和/或轻链恒定区1(CL1)的全部或部分，而不包括免疫球蛋白的重链和轻链可变区。另外，本发明的免疫球蛋白Fc片段可以是其中对应于CH2和/或CH3的一些相当长的氨基酸序列被移除的片段。

例如，本发明的免疫球蛋白Fc片段可以是1)CH1结构域、CH2结构域、CH3结构域和CH4结构域；2)CH1结构域和CH2结构域；3)CH1结构域和CH3结构域；4)CH2结构域和CH3结构域；5)CH1结构域、CH2结构域、CH3结构域和CH4结构域中的一个或两个或更多个结构域与免疫球蛋白铰链区(或铰链区的部分)之间的组合；以及6)重链恒定区的每个结构域与轻链恒定区的二聚体，但免疫球蛋白Fc片段不限于此。

另外，在具体实施方式中，免疫球蛋白F片段可以是二聚体形式，或X的一个分子可以共价连接到二聚体形式的一个Fc片段，且特别地，免疫球蛋白Fc和X可以通过非肽聚合物彼此连接。

同时，X的两个分子对称地结合到二聚体形式的一个Fc片段也是可能的。特别地，免疫球蛋白Fc和X可以通过非肽连接体彼此连接，但免疫球蛋白Fc片段和X之间的连接不限于上述实施方式。

另外，本发明的免疫球蛋白Fc片段包括天然氨基酸序列及其序列衍生物。氨基酸序列衍生物意指由于天然氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基中存在缺失、添加、保守或非保守取代、或其组合而使氨基酸的序列与其天然氨基酸的序列不同。

例如，IgG Fc中已知对连接重要的第214至238、297至299、318至322、或327至331位的氨基酸残基可用作适合于修饰的位点。

另外，各种类型的衍生物是可能的，例如，其中能够形成间二硫键的位点被移除的衍生物；其中从天然Fc中移除几个N-末端氨基酸的衍生物；其中在天然Fc的N-末端添加甲硫氨酸残基的衍生物，等。另外，可移除补体结合位点(例如，C1q结合位点)或抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)位点以移除效应物功能。制备免疫球蛋白Fc片段的序列衍生物的技术在国际公开号WO 97/34631、WO 96/32478等中公开。

蛋白质或肽中不改变分子的整体活性的氨基酸取代在本领域中是公知的(H.Neurath,R.L.Hill,The Proteins,Academic Press,New York,1979)。最常见的取代发生在Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly氨基酸残基之间。在一些情况下，氨基酸可能通过磷酸化、硫酸化、丙烯酰化(acrylation)、糖基化、甲基化、法尼基化、乙酰化、酰胺化等进行修饰。

另外，上述Fc衍生物可以是表现出与本发明的Fc区相同的生物学活性，并且具有Fc区对热、pH等增加的结构稳定性的衍生物。

另外，这种Fc片段可从分离自人类或动物(例如，牛、山羊、猪、小鼠、兔子、仓鼠、大鼠、豚鼠等)的天然类型获得，或者可以是从转化的动物细胞或微生物获得的重组体或其衍生物。特别地，Fc片段可通过从人或动物有机体分离整个免疫球蛋白，并且用蛋白酶处理它们而从天然Fc获得。Fc片段的木瓜蛋白酶处理生成Fab和Fc片段，而Fc片段的胃蛋白酶处理产生pF’c和F(ab)

另外，免疫球蛋白Fc片段可以是天然聚糖、相比于其天然型增加的聚糖、相比于其天然型减少的聚糖、或去糖基化的形式。免疫球蛋白Fc聚糖的增加、减少或移除可通过诸如化学方法、酶促方法和使用微生物的基因工程方法的常规方法实现。特别地，从Fc移除聚糖的免疫球蛋白Fc片段显示与补体(C1q)的结合亲和力显著降低，以及抗体依赖性细胞毒性或补体依赖性细胞毒性的降低或移除，并且因此它在体内不诱导不必要的免疫应答。在这点上，去糖基化的或非糖基化(aglycosylated)形式的免疫球蛋白Fc片段作为药物载体可能更合适满足本发明原始目的。

如本文所用，术语“去糖基化”意指从Fc片段用酶移除聚糖，并且术语“非糖基化”意指在原核生物中，且在更具体实施方式中，在大肠杆菌(E.coli.)中Fc片段以未糖基化形式产生。

同时，免疫球蛋白Fc片段可衍生自人类或动物(例如，牛、山羊、猪、小鼠、兔子、仓鼠、大鼠、豚鼠等)，且在更具体的实施方式中，其衍生自人类。

另外，免疫球蛋白Fc片段可衍生自IgG、IgA、IgD、IgE、IgM、或其组合或杂化物。在更具体的实施方式中，免疫球蛋白Fc片段可衍生自人类血液中最丰富的蛋白质中的IgG或IgM，并且在甚至更具体的实施方式中，其可衍生自已知增强配体结合蛋白质的半衰期的IgG。在还甚至更具体的实施方式中，免疫球蛋白Fc片段可以是IgG4 Fc片段，并且在最具体的实施方式中，它是衍生自人类IgG4的非糖基化的Fc片段，但免疫球蛋白Fc片段不限于此。

另外，在具体实施方式中，免疫球蛋白Fe片段作为人IgG4片段，可以是同型二聚体的形式，其中两个单体通过半胱氨酸之间的间二硫键(链间形式)相连，半胱氨酸是每个单体的第3个氨基酸。特别地，同源二聚体的每个单体在第35和95位的半胱氨酸之间独立地具有/或可以具有内部二硫键；和在第141和199位的半胱氨酸之间的内部二硫键(即，两个内部二硫键(链内形式))。关于氨基酸的数目，每个单体可以由221个氨基酸组成，并且形成同源二聚体的氨基酸可以由总共442个氨基酸组成，但氨基酸的数目不限于此。

具体地，免疫球蛋白Fc片段可以是其中两个具有SEQ ID NO:139的氨基酸序列(由221个氨基酸组成)的单体通过半胱氨酸之间的间二硫键形成同源二聚体的免疫球蛋白Fc片段，半胱氨酸是每个单体的第3个氨基酸，且其中同源二聚体的单体独立地形成第35和95位半胱氨酸之间的内部二硫键以及第141和199位半胱氨酸之间的内部二硫键，但免疫球蛋白Fc片段不限于此。

如本文所用，术语“组合”意指编码相同起源的单链免疫球蛋白Fc片段的多肽与不同起源的单链多肽连接以形成二聚体或多聚体。即，由选自IgG Fc、IgA Fc、IgM Fc、IgD Fc和IgE Fc的Fc片段的两个或更多个片段制备二聚体或多聚体是可能的。

同时，L可以是非肽连接体，例如，含有乙二醇重复单元的连接体。

在本发明中，术语“非肽连接体”包括其中连接两个或更多个重复单元的生物相容性聚合物。重复单元通过任何共价键(其不是肽键)彼此连接。非肽连接体可以是构成本发明的缀合物的部分的一个构造，并且其对应于上述式1中的L。作为可用于本发明的非肽连接体，可以不受限地使用在体内对蛋白酶具有抗性的任何聚合物。在本发明中，非肽连接体可与非肽聚合物互换使用。

尽管没有特别限制，但非肽连接体可以是含有乙二醇重复单元(例如，聚乙二醇)的连接体，以及另外地，本领域已知的那些衍生物和在本领域技术人员的技术水平上可以容易制备的衍生物被包括在本发明的范围内。

非肽连接体的重复单元可以是乙二醇重复单元，且具体地，非肽连接体可以是在包括乙二醇重复单元的同时在末端包括用于制备缀合物的官能团的非肽连接体。根据本发明的长效缀合物可以是其中X和F通过官能团连接的形式，但长效缀合物不限于此。在本发明中，非肽连接体可以包括两个、或三个或更多个官能团，且每个官能团可以彼此相同或不同，但非肽连接体不限于此。

具体地，连接体可以是通过以下式2表示的聚乙二醇(PEG)，但连接体不限于此：

[式2]

其中n为10至2,400，n为10至480，或n为50至250，但n的范围不是仅限于此。

在上述长效缀合物中，PEG部分可以不仅包括-(CH

另外，在具体的实施方式中，缀合物可以具有这样的结构，其中免疫球蛋白片段(F)通过含有乙二醇重复单元的连接体以共价键与含有SEQ ID NOS:1至102中任一个的氨基酸序列的肽(X)连接，但缀合物的结构不限于此。聚乙二醇是包括乙二醇的均聚物、PEG共聚物和单甲基取代的PEG聚合物(mPEG)的所有形式的总称，但聚乙二醇不特别限于此。

非肽聚合物的分子量可以在1kDa至100kDa，具体地1kDa至20kDa、或1kDa至10kDa的范围内，但非肽聚合物的分子量不限于此。另外，本发明的连接到对应于F的多肽的非肽连接体不仅可以包括单一种类的聚合物，而且可以包括不同种类的聚合物的组合。

在具体实施方式中，非肽连接体的一端可被连接至F的胺基或硫醇基(例如，免疫球蛋白Fe片段)，而另一端可被连接至X的胺基或硫醇基。

具体地，非肽聚合物可包括在其两端分别可与F(例如，免疫球蛋白Fc区)和X连接的反应性基团，并且具体地，可与位于X的N-末端或赖氨酸的胺基、或半胱氨酸的硫醇基，或者位于F的N-末端或赖氨酸的胺基、或半胱氨酸的硫醇基连接的反应性基团，但非肽聚合物不限制于此。

另外，可与F(例如，免疫球蛋白Fc片段)和X连接的非肽聚合物的反应性基团可以选自醛基、马来酰亚胺基、和琥珀酰亚胺衍生物，但反应性基团不限制于此。

在上文中，作为醛基的实例，可以使用丙醛基或丁醛基，但醛基不限于此。

在上文中，作为琥珀酰亚胺衍生物，可使用琥珀酰亚胺基戊酸酯、琥珀酰亚胺基甲基丁酸酯、琥珀酰亚胺基甲基丙酸酯、琥珀酰亚胺基丁酸酯、琥珀酰亚胺基丙酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺、羟基琥珀酰亚胺基、琥珀酰亚胺基羧基甲基、或琥珀酰亚胺基碳酸酯，但琥珀酰亚胺衍生物不限制于此。

非肽连接体可通过这些反应性基团与X和F连接，但反应性基团不特别限制于此。

另外，通过醛键还原性胺化生成的最终产物比通过酰胺键连接的更稳定。醛反应性基团在低pH下与N-末端选择性地反应，同时其在高pH(例如，pH 9.0)下可与赖氨酸残基形成共价键。

另外，在非肽连接体的两端的反应性基团可彼此相同或彼此不同。例如，非肽连接体可在一端具有马来酰亚胺反应性基团，而在另一端具有醛基、丙醛基、或丁醛基。然而，只要F(具体地，免疫球蛋白Fc片段)可与在非肽连接体的每一端的X连接，反应性基团不特别限制于此。

例如，非肽连接体可在一端作为反应性基团包括马来酰亚胺基，而在另一端包括醛基、丙醛基、或丁醛基等。

当在其两端具有反应性羟基基团的聚乙二醇用作非肽聚合物时，可通过已知的化学反应将羟基基团激活为各种反应性基团、或者通过使用具有修饰的反应性基团的商业可获得的聚乙二醇来制备本发明的长效蛋白质缀合物。

在具体实施方式中，非肽聚合物可以是与X的半胱氨酸残基，并且更具体地，与半胱氨酸的-SH基团连接的非肽聚合物，但非肽聚合物不限制于此。

例如，非肽聚合物可以是在第10个半胱氨酸残基、第13个半胱氨酸残基、第15个半胱氨酸残基、第17个半胱氨酸残基、第19个半胱氨酸残基、第21个半胱氨酸残基、第24个半胱氨酸残基、第28个半胱氨酸残基、第29个半胱氨酸残基、第30个半胱氨酸残基、第31个半胱氨酸残基、第40个半胱氨酸残基或第41个半胱氨酸残基的位置与对应于X的肽连接的非肽聚合物，但非肽聚合物不特别限于此。

具体地，非肽聚合物的反应性基团可连接至半胱氨酸残基的-SH基团，以上所有描述都可适用于反应性基团。在使用马来酰亚胺-PEG-醛的情况下，马来酰亚胺基可通过硫醚键与X的-SH基团连接，并且醛基可通过还原性胺化反应与F(具体地，免疫球蛋白Fc的-NH

另外，在上述缀合物中，非肽聚合物的反应性基团可与位于免疫球蛋白Fc片段的N-末端的-NH

另外，缀合物可以是与未被F修饰的天然GLP-1、GIP或胰高血糖素、或X相比具有增加的功效持续时间的缀合物，并且这样的缀合物不仅包括上述形式，而且包括包封在生物可降解纳米颗粒等中的所有形式。

根据本发明的肽或其缀合物可具有预防或治疗肝病的用途。

如本文所用，术语“肝病”是指发生在肝脏中的疾病，并且它可能包括代谢性肝病或肝脏炎症，但肝病不限于此。肝病的代表性实例可能包括单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、肝脏炎症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胆汁淤积性肝病、肝纤维化、肝硬化、肝代偿失调、肝癌等，并且只要肝脏的组织和功能中发生异常，就可能是根据本发明的肝病。在很多情况下，肝脏炎症可能是由于病毒、酒精、药物、免疫紊乱、代谢病等原因发生，且并且已知根据肝脏炎症的进展和慢性化，肝脏炎症发展成诸如肝硬化、肝癌等疾病。根据本发明的组合物可以显示对伴随有肝脏炎症(例如，肝脏炎症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或肝纤维化)的肝病或由肝脏炎症导致的肝病的效果，但肝病不限于此。

同时，根据本发明的组合物可以甚至对于不伴有炎症的肝病的预防或治疗显示出效果，以及这种肝病的实例可能包括单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、肝硬化等，但肝病不限于此。

本发明的肽或其缀合物对具有治疗效果的肝病可以是代谢性肝病，但肝病不限于此。代谢性肝病是身体的异常化学反应(其干扰身体的新陈代谢)导致的疾病，且其包括单纯性脂肪变性、脂肪肝、脂肪性肝炎等。

根据本发明的组合物可以是在给予时通过减少肝组织中甘油三酯和/或胆固醇的量显示出对代谢性肝病的预防或治疗效果的组合物，但组合物不限于此。代谢性肝病可以伴随有或可以不伴随有炎症，可以用根据本发明的组合物治疗的肝病的实例可以包括单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)等，但肝病不限于此。

“非酒精性脂肪肝病(NAFLD)”，作为代谢性肝病的代表性实例，是指即使受试者无酒精摄入史或与酒精摄入无关，但伴随有脂肪肝的情况。脂肪肝是指出现甘油三酯与正常情况不同表现出异常沉积在肝细胞内的现象。正常肝脏的约5％由脂肪组织组成。虽然甘油三酯、脂肪酸、磷脂、胆固醇、和胆固醇酯是脂肪的主要成分，但一旦发生脂肪肝，大部分成分被甘油三酯取代，且当甘油三酯的量相对于肝重达到5％或更高时，就诊断为脂肪肝。脂肪肝是由肝细胞中脂肪代谢紊乱或转运过多脂肪的过程中的缺陷等导致的，而且主要是由肝脏内脂肪代谢紊乱导致的。脂肪肝中积累的脂肪大部分可能是甘油三酯。

非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)是指包括仅有脂肪在肝细胞内过度积累的单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、伴有肝细胞坏死、炎症和纤维化的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)等的一组疾病，但只要该疾病可以用根据本发明的组合物治疗，非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)不限于此。根据本发明的非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)可以是伴随非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的非酒精性脂肪性肝炎疾病，但非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)不限于此。

另外，本发明的肽或其缀合物具有治疗效果的肝病可以是肝脏炎症，但肝病不限于此。如本文所用，术语“肝脏炎症”(其是肝病最常见原因)是指导致肝脏的炎症的疾病，且根据病因和症状分为急性肝炎和慢性肝炎。病毒、酒精、药物、免疫紊乱、代谢性疾病等是主要原因。

根据本发明的组合物在给予时可降低肝组织中TNF-a、MCP-1和IL-6中的至少一种的表达，并且通过这样，组合物可显示出对肝脏炎症的预防或治疗效果，但组合物的效果不限于此。

本发明的肽或其缀合物不仅可以显示出减轻肝脏自身的炎症的效果，而且可以显示出对伴随有肝脏的炎症的或由肝脏的炎症导致的疾病(例如，肝炎、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝纤维化等)的治疗效果。

如本文所用，作为非酒精性脂肪性肝炎疾病之一的“非酒精性脂肪性肝炎(NASH)”是伴随肝细胞坏死、炎症和纤维化的肝病的代表性实例。根据本发明的组合物可以抑制肝脏炎症和纤维化，且从而显示出对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的效果，并且具体地，可以显示出对伴随脂肪肝、肝纤维化或肝硬化的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；或者由非酒精性脂肪性肝炎(NASH)导致的肝癌的效果，但疾病不限于此。

如本文所用，“肝纤维化”是指作为反复肝损伤的创伤愈合过程的结果，在修复或应答过程期间，在器官或组织中形成过多的纤维结缔组织。肝脏炎症的慢性化和加重已知是肝纤维化发生的原因。已知肝纤维化是可逆的(不像肝硬化)、由薄纤维组成、且没有小节(nodule)形成。一旦肝损害的原因停止，正常肝脏的恢复可以是可能。然而，当肝纤维化过程不断重复时，细胞外基质(ECMs)之间的交联增加，从而导致带有小节的不可逆性肝硬化的进展。

根据本发明的组合物可显示出对肝纤维化的预防或治疗效果，且具体地是对伴随有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的肝纤维化的预防或治疗效果，但效果不限于此。

当给予受试者时，根据本发明的组合物可通过降低TIMP-1和/或透明质酸的血液水平，对用该组合物给予的受试者中的肝纤维化显示出预防或治疗效果，但作用不限于此。

具体地，根据本发明的肽或其缀合物可以显示出对肝纤维化的效果，并且具体地，该效果可以是通过降低增强的肝纤维化(enhanced liver fibrosis，ELF)评分来预防或治疗肝纤维化。

ELF评分(增强的肝纤维化评分)是确认肝纤维化愈合程度的评分，其它可以通过以下等式计算。ELF评分可在测量血液样品中的透明质酸(HA)、III型前胶原的N-末端前肽(PIIINP)、和金属蛋白酶的组织抑制物-1(TIMP-1)的浓度之后，通过以下等式计算：

ELF评分＝2.278+0.851ln(CHA)+0.751ln(CPIIINP)+0.394ln(CTIMP-1)

与未给予根据本发明的肽或其长效缀合物的组相比，上述ELF评分的降低可以是降低约10％至约100％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、或约14％至约30％，但ELF评分的降低不限于此。

该组合物可通过将给予组合物的受试者的ELF评分降低至约9.8以下、约9.8以下、约9.7以下、约9.6以下、约9.5以下、约9.4以下、约9.3以下、约9.2以下、或约9.1以下来预防或治疗肝纤维化，但ELF评分的降低不限于此。

在本发明中，“胆汁淤积”是指其中胆汁从肝脏向十二指肠的流动减慢或受阻的病况，且“胆汁淤积性肝病”意指肝脏中的胆汁形成根据诸如各种疾病、扩大的颈静脉营养、或具体药物(例如，一些抗生素)的副作用的病况而受损。胆汁淤积的常见体征包括疲劳、瘙痒感(发痒)、黄疸、和黄瘤(皮下富含胆固醇的物质的沉积)。胆汁淤积的影响是极端和广泛的，导致肝病加剧为全身性疾病，肝代偿失调，且需要肝移植。胆汁淤积性肝病的原因可能包括急性肝炎、胆管的炎症等。

胆汁淤积性肝病可包括原发性胆汁性胆管炎(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、进行性家族性肝内胆汁淤积(PFIC)和阿拉日耶(Alagille)综合征(AS)，但胆汁淤积性肝病不限于此。

原发性胆汁性肝硬化也称为原发性胆汁性胆管炎(PBC)，是隐源性慢性胆汁淤积性肝病。由于门脉(portal)和门静脉周(periportal)炎症引起的进行性胆管损害可导致进行性纤维化和最终肝硬化。到目前为止，免疫、遗传和环境因素是原发性胆汁性肝硬化的潜在原因。原发性胆汁性肝硬化多发生于中年女性，且在原发性胆汁性肝硬化发病早期也可能出现诸如疲劳、发痒、或不明的高脂血症的症状。

目前，原发性胆汁性肝硬化被认为是免疫介导的疾病，且具体地，门脉及门静脉周区中的T淋巴细胞的免疫组化染色显示CD4阳性和CD8阴性的T细胞。

另外，在受影响受试者的无症状一级亲属(同类，relatives)中报告了异常的抑制性T细胞活性。据报道，白细胞介素可通过有助于改变的免疫功能和纤维化在PBC的发病机制中发挥作用(G.J.Webb等人,J.Autoimmunity,2015Nov；64:42–52)。

治疗PBC的方法是用熊去氧胆酸(UDSA)和奥贝胆酸(obeticholic acid，OCA)进行胆汁酸治疗。两种药物在PBC中的作用机制与其激活FXR和TGFR-5以发挥其抗炎效果的能力相关联。然而，在用UDCA治疗的患者中，约40％没有实现充分的生化应答。

原发性硬化性胆管炎(PSC)是由肝内外胆管的炎症和纤维化导致的隐源性慢性胆汁淤积性肝病。具体地，它是胆管和胆道的炎症性疾病，且一旦病情进展，就会发生纤维化且胆管壁变得增厚，从而使胆管变窄。

该病的原因尚未确定，但似乎诸如遗传因素、环境因素和相关免疫应答的多种因素的组合可能是可能的原因。

当通过血液进行肝功能试验的结果显示碱性磷酸酶水平升高，转氨酶水平升高，并有γ球蛋白血的指征时，受试者被诊断为具有原发性硬化性胆管炎。

用于治疗PSC的方法至今未见明确报道，而肝移植手术是可以从根本上治疗PSC的唯一治疗方法。

因此，仍然需要开发能够在无副作用同时确保患者方便的情况下治疗PBS和PSC的药物。

本发明的“肝硬化”是随着肝细胞和纤维组织再生的反复增加而发生的慢性疾病，其病理上伴有坏死、炎症和纤维化，并进展为肝硬化并发症(例如，肝代偿失调)和疾病(例如，肝癌)，最终导致死亡。特别地，由于在疾病早期对自身症状缺乏认识，只有在相当大的进展后才能发现肝硬化，因此要求对肝纤维化(其是在演变为肝硬化等之前的状况)迅速治疗。根据本发明的组合物可以对肝硬化显示出预防或治疗效果，且具体地对伴有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的肝硬化显示出预防或治疗效果，但组合物的作用不限于此。

在本发明中，“肝代偿失调”是指其中由于病毒性肝炎、肝硬化、药物或酒精对肝脏的损害、或肝病导致肝功能减弱，且肝脏不能进行作为正常生理功能的蛋白质合成和代谢功能的状况。肝代偿失调根据进展速率分为急性肝代偿失调和慢性肝代偿失调，且已知导致各种并发症。由于根据本发明的组合物显示出诸如抑制炎症和纤维化的效果，因此它可以显示出对肝代偿失调的预防或治疗作用。

在本发明中，“肝癌(肝细胞癌)”是指起源于肝细胞的恶性肿瘤，且其可分为发生于肝细胞本身的原发性肝癌(肝细胞癌)和其它组织的癌转移到肝脏的转移性肝癌，且约90％或更多的肝癌为原发性肝癌。除了肝炎和慢性肝病之外，主要原因是酒精、吸烟、肥胖等。

根据本发明的组合物可以对肝癌显示预防或治疗作用，且具体地对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)导致的肝癌显示预防或治疗效果，但组合物的效果不限于此。

本发明实例中使用的模型已知为：由MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型；和由AMLN饮食诱导的脂肪肝和脂肪性肝炎模型。另外，已知AMLN/TAA小鼠模型可用作肝纤维化或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型。上述模型是在与肝病相关联的各种研究中使用的模型，并且在本发明的实例中，在每个模型中确认了根据本发明的肽(三重激动剂)或其长效缀合物的效果，这提示根据本发明的肽(三重激动剂)或其长效缀合物对于肝病(例如，肝炎、肝纤维化、单纯性脂肪变性、非酒精性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)等)的预防或治疗是有用的。另外，在本发明的实例中，在PBC和/或PSC模型中确认了三重激动剂的长效缀合物的改善效果，并且也确认了对胆汁淤积性肝病的效果。

根据本发明的组合物的特征可能在于，没有体重增加或体重增加程度相对较低，体重增加是用于肝病的常规治疗剂的副作用。

本发明的组合物可以通过执行以下特性(a)至(k)中的一个或多个来预防或治疗肝病，但要执行的特性不限于此。

(a)NAS值(非酒精性脂肪性肝炎疾病(NAFLD)活动性评分)的降低；

(b)肝脏中甘油三酯水平的降低；

(c)血液中胆固醇水平的降低；

(d)脂肪变性评分的降低；

(e)肝组织中TNF-α、MCP-1和IL-6水平的降低；

(f)肝脏的炎症评分的降低；

(g)实质坏死评分的降低；

(h)胆管增生评分的降低；

(i)增强的肝纤维化(ELF)评分的降低；

(j)TIMP-1和/或透明质酸(即，肝纤维化标记物)的血液浓度的降低；以及

(k)纤维化评分的降低。

如本文所用，术语“预防”是指通过给予上述肽或含有该肽的组合物抑制或延迟肝病的发生的所有行为，而术语“治疗”是指通过给予上述肽或含有该肽的组合物改善或有利地改变肝病的症状的所有行为。

本发明的药物组合物可进一步含有药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂可以是非自然存在的。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指具有足以呈现治疗效果的量且不导致不良作用的性能，并且可由本领域技术人员基于在医学领域中公知的因素(如疾病的种类、年龄、体重、健康状况、性别、患者的药物敏感性、给予途径、给予方法、给予频率、治疗的持续时间、混合或同时给予的药物(一种或多种)等)容易地确定。

本发明的含有肽的药物组合物可进一步含有药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂对于口服给予可包括粘合剂、润滑剂、崩解剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、悬浮剂、着色剂、香料等；对于注射剂可包括缓冲剂、保存剂、镇痛剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等，它们可组合使用；并且对于局部给予，碱、赋形剂、润滑剂、保存剂等。

根据本发明的组合物的制剂类型可通过与上述药学上可接受的赋形剂组合多样地制备。例如，对于口服给予，组合物可配制成片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、悬浮剂、糖浆剂、糯米纸囊剂(wafer)等，且对于注射剂，组合物可被配制成单位剂量安瓿或多剂量容器。组合物还可被配制成溶液、悬浮剂、片剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂等。

同时，合适的载体、赋形剂和稀释剂的实例可包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等。另外，组合物可进一步含有填充剂、抗凝剂、润滑剂、润湿剂、香料、防腐剂等。

另外，本发明的药物组合物可以具有选自片剂、丸剂、粉末、颗粒剂、胶囊剂、悬浮剂、内用液体药物、乳剂、糖浆剂、无菌水溶液、非水性溶剂、冻干制剂和栓剂的任何一种制剂类型。

另外，组合物被可被配制成适合于给予到患者身体内的单位剂型的制剂，并且具体地根据药物领域中的常规方法被配制成对肽药物有用的制剂，以通过口服或肠胃外途径(包括皮肤、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、肺、经皮、皮下、腹膜内、鼻内、胃内、局部、舌下、阴道或直肠途径)给予，但给予途径不限制于此。

另外，缀合物可通过与各种药学上可接受的载体(如生理盐水或有机溶剂)混合使用。为了增加稳定性或吸收性，碳水化合物(例如，葡萄糖、蔗糖或葡聚糖)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸或谷胱甘肽)、螯合剂、低分子量蛋白质、或其它稳定剂等可用作药品

本发明的药物组合物的给予剂量和频率根据活性成分(一种或多种)的类型与各种因素一起确定，各种因素如待治疗的疾病、给予途径、患者的年龄、性别和体重、以及疾病的严重程度等。具体地，本发明的组合物可以是含有包含SEQ ID NOS：1至102中任一项的氨基酸序列的肽的组合物或含有药学有效量的该肽的长效缀合物，但本发明的组合物不限于此。

含有药学有效量的肽或其长效缀合物是指可通过肽或其长效缀合物获得期望的药理活性(例如，肝病的预防、改善或治疗)的水平，且另外，可以是指在要给予的受试者中不发生或以不显著水平发生毒性或不良作用的水平，或者是指药学上可接受的水平，该水平不限于此。这样的药学有效量可以通过综合考虑给予次数、患者、制剂等来确定。

本发明的组合物的总有效量可以单次剂量给予患者，或者可根据分次治疗方案以多剂量长时间段给予。在本发明的药物组合物中，活性成分(一种或多种)的含量可根据疾病严重程度而改变。具体地，本发明的缀合物的日总剂量可以是每1kg的患者体重约0.0001mg至500mg。然而，考虑包括患者的年龄、体重、健康状况、性别、疾病严重程度、饮食、及排泄率、以及药物组合物的给予途径和治疗频率的各种因素，来确定缀合物的有效剂量。在这个方面，本领域技术人员可容易地确定适合于本发明的药物组合物特定用途的有效剂量。只要根据本发明的药物组合物显示本发明的效果，其不特别限制于制剂类型与给予途径和方法。

本发明的药物组合物显示优异的体内功效的持续时间和效价，并且因此可显著减少本发明的药物制剂的给予次数和频率。

为实现本发明的目的，本发明的又一方面提供了用于预防或治疗肝病的方法，其包括向需要其的受试者给予肽或含有该肽的组合物。

肽或含有该肽的组合物、肝病、预防和治疗方法如上所述。

在本发明中，受试者是指怀疑患有肝病的受试者，怀疑患有肝病的受试者是指包括人、大鼠、家畜等的哺乳动物，它们患有肝病或处于发展成肝病的风险下，但是可以用本发明的缀合物或含有该缀合物的组合物治疗的任何受试者都不受限制地被包括在内。

如本文所用，术语“给予”是指通过任何适当的方法将特定物质引入受试者中，并且组合物的给予途径可以是能够将组合物递送到靶标的任何常规途径(例如，腹膜内给予、静脉内给予、肌内给予、皮下给予、皮内给予、口服给予、局部给予、鼻内给予、肺内给予、直肠内给予等)，但给予途径不限于此。

本发明的方法可包括以药学有效量给予含有肽的药物组合物。

药物组合物的适当的日总剂量可在医师的正确的医学判断的范围内确定，并且药物组合物可给予一次或分剂量给予几次。然而，为了本发明的目的，对于任何特定患者，优选的是，药物组合物的具体治疗有效剂量根据要实现的应答的种类和程度、包括是否根据情况

为实现本发明的目的，本发明的又一方面提供用于预防或治疗肝病的肽或含有该肽的组合物的用途。

为了实现本发明的目的，本发明的又一方面提供肽或含有该肽的组合物在制备用于预防或治疗肝病的药物中的用途。

肽或含有该肽的组合物、肝病、预防和治疗如上所述。

在下文中，将参考以下实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅用于示例目的，并且本发明的范围不受这些实施例限制。

制备了对GLP-1、GIP和胰高血糖素受体都显示活性的三重激动剂，且其序列示于下表1中。

[表1]

在表1中所述的序列中，X指示的氨基酸表示氨基异丁酸(Aib)，其是非天然氨基酸，以及带下划线的氨基酸表示在带下划线的氨基酸之间形成环。另外，在表1中，CA表示4-咪唑乙酰基以及Y表示酪氨酸。

对于实施例1的三重激动剂(SEQ ID NOS:21、22、42、43、50、77和96)的半胱氨酸残基的聚乙二醇化，使用在每个末端具有马来酰亚胺基和醛基的PEG(10kDa)(即，马来酰亚胺-PEG-醛(10kDa，NOF，日本))，将三重激动剂和马来酰亚胺-PEG-醛以1:1-3的摩尔比、在1mg/mL至5mg/mL的蛋白质浓度下在低温下反应0.5至3小时。特别地，反应是在其中向50mMTris缓冲液(pH 7.5)添加了20％至60％异丙醇的环境中进行的。反应完成后，将反应物应用于SP sepharose HP(GE Healthcare，USA)以纯化在半胱氨酸上单聚乙二醇化的三重激动剂。

然后，将纯化的单聚乙二醇化的三重激动剂与免疫球蛋白Fc以1:1-5的摩尔比，在10mg/mL至50mg/mL的蛋白质浓度下在4℃至8℃下反应12至18小时。反应是在其中向100mM磷酸钾缓冲液(pH 6.0)添加了10mM至50mM氰基硼氢化钠(NaCNBH

在制备后，通过反相色谱、尺寸排阻色谱和离子交换色谱分析的纯度显示为95％或更高。

特别地，其中将SEQ ID NO:21的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:21的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:21的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

特别地，其中将SEQ ID NO:22的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:22的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:22的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

特别地，其中将SEQ ID NO:42的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:42的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:42的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

特别地，其中将SEQ ID NO:43的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:43的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:43的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

特别地，其中将SEQ ID NO:50的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:50的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:50的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

特别地，其中将SEQ ID NO:77的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:77的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:77的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

特别地，其中将SEQ ID NO:96的三重激动剂和免疫球蛋白Fc通过PEG连接的缀合物命名为“包括SEQ ID NO:96的三重激动剂和免疫球蛋白Fc的缀合物”或“SEQ ID NO:96的长效缀合物”，且这些缀合物在本发明中可以互换使用。

通过使用其中分别转化了GLP-1受体、胰高血糖素(GCG)受体和GIP受体的细胞系测量体外细胞活性的方法，测量了实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物的活性。

上述细胞系中的每一种是其中将人GLP-1受体、人GCG受体和人GIP受体的基因分别转化到中国仓鼠卵巢(CHO)中以在其中表达的细胞系，且因此适合于测量GLP-1、GCG和GIP的活性。因此，使用相应的转化细胞系对各部分的活性进行了测量。

为了测量实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物的GLP-1活性，将人GLP-1进行从50nM到0.000048nM的4倍连续稀释，以及将实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物进行从400nM到0.00038nM的4倍连续稀释。从其中表达人GLP-1受体的培养的CHO细胞中移除了培养液，并将连续稀释的物质中的每种分别以5μL的量添加至CHO细胞，并以5μL的量向其添加含有cAMP抗体的缓冲液，并在室温下培养了15分钟。然后，以10μL的量向其添加含有细胞裂解缓冲液的检测混合物(detection mix)用于细胞的裂解，并在室温下反应了90分钟。反应完成后，将细胞裂解物应用到LANCE cAMP试剂盒(PerkinElmer，USA)，以通过累积的cAMP计算EC

为了测量实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物的GCG活性，将人GCG进行从50nM到0.000048nM的4倍连续稀释，以及将实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物进行从400nM到0.00038nM的4倍连续稀释。从其中表达人GCG受体的培养的CHO细胞中移除了培养液，并将连续稀释的物质中的每种分别以5μL的量添加至CHO细胞，并以5μL的量向其添加含有cAMP抗体的缓冲液，并在室温下培养了15分钟。然后，以10μL的量向其添加含有细胞裂解缓冲液的检测混合物用于细胞的裂解，并在室温下反应了90分钟。反应完成后，将细胞裂解物应用到LANCE cAMP试剂盒(PerkinElmer，USA)，以通过累积的cAMP计算EC

为了测量实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物的GIP活性，将人GIP进行从50nM到0.000048nM的4倍连续稀释，以及将实施例1-1和1-2中制备的三重激动剂及其长效缀合物进行从400nM到0.00038nM的4倍连续稀释。从其中表达人GIP受体的培养的CHO细胞中移除了培养液，并将连续稀释的物质中的每种分别以5μL的量添加至CHO细胞，并以5μL的量向其添加含有cAMP抗体的缓冲液，并在室温下培养了15分钟。然后，以10μL的量向其添加含有细胞裂解缓冲液的检测混合物用于细胞的裂解，并在室温下反应了90分钟。反应完成后，将细胞裂解物应用到LANCE cAMP试剂盒(PerkinElmer，USA)，以通过累积的cAMP计算EC

[表2]三重激动剂的相对效价比

[表3]三重激动剂的长效缀合物的相对效价比

上述制备的三重激动剂的新型长效缀合物具有三重激动剂的功能，其可以激活GLP-1受体、GIP受体和胰高血糖素受体中的全部，且因此三重激动剂的长效缀合物可用作用于治疗目标疾病的治疗物质。

本发明人试图确认根据本发明的三重激动剂对代谢性肝病的治疗效果。

首先，三重激动剂的长效缀合物对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的效果确认如下。

通过在C57BL/6小鼠中执行甲硫氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食的饮食摄入2周，诱导了非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的小鼠模型。

为了确认开发的物质对治疗NASH的治疗效果，将小鼠分成正常小鼠；NASH诱导小鼠(赋形剂对照组)、和给予SEQ ID NO:42的长效缀合物(0.36nmol/kg、0.72nmol/kg和1.44nmol/kg，Q2D)的组，并将该物质反复皮下给予4周。重复给予4周后，通过尸体解剖从每种小鼠收集了肝组织，且对肝组织进行苏木精和伊红(H&E)染色，以通过非酒精性脂肪性肝炎疾病活动性评分(NAS)评估NASH进展程度。

如图1中所示，作为重复给予SEQ ID NO:42的长效缀合物4周的结果，确认了肝组织中NAS值显著降低了(NASH赋形剂对照组＝3.71、给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物的组(0.36nmol/kg)＝2.57、给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物的组(0.72nmol/kg)＝0.43、给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物的组(1.44nmol/kg)＝0)。

由以上结果确认了SEQ ID NO:42的长效缀合物对NASH的治疗效果，该缀合物是根据本发明的代表性三重激动剂的缀合物。

另外，为了确认根据本发明的三重激动剂对改善脂肪肝的效果，本发明人使用了AMLN小鼠模型。

已知AMLN饮食具有高含量的脂肪、果糖和胆固醇，且因此已知当长时间段喂养时诱发肥胖和脂肪性肝炎。因此，将AMLN小鼠模型用作脂肪性肝炎的模型。

用37周AMLN饮食诱导的小鼠被分成赋形剂对照组；给予了奥贝胆酸(30mg/kg，QD，口服给予)的组；和给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物(2.6nmol/kg，Q2D，皮下给予)的组；并且对它们进行重复给予12周。重复给予12周后，通过尸体解剖从每种小鼠收集了肝组织，且通过测量肝组织中的脂肪含量并通过H&E染色评价了改善脂肪肝的功效。

结果，确认了当重复给予SEQ ID NO:42的长效缀合物12周时，给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物的组中的甘油三酯和胆固醇水平与赋形剂对照组和给予了奥贝胆酸的组中的甘油三酯和胆固醇水平相比显著降低了。由此结果确认了，通过根据本发明的SEQ IDNO:42的长效缀合物(图2)减少了肝脏中的脂肪含量。

另外，为了进一步确认根据SEQ ID NO:42的长效缀合物的给予改善脂肪肝的效果，本发明人检查了通过以与上述相同的方式给予SEQ ID NO:42的长效缀合物的脂肪变性评分的变化。

结果，确认了与赋形剂对照组和给予了奥贝胆酸的组的脂肪变性评分相比，当给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物时，脂肪变性评分(即，指示脂肪变性水平的值)显著降低了(图3)。

为了确认通过实施例1中制备的三重激动剂的长效缀合物改善肝纤维化的效果，使用了称为肝纤维化模型的AMLN/TAA(硫代乙酰胺)小鼠模型。简单地说，使C57BL/6小鼠经受了AMLN饮食摄入和TAA给予(50mg/kg至400mg/kg，TIW：每周3次)持续16周以诱导模型。将诱导的动物分成赋形剂对照组和给予了被选为代表性的三重激动剂的SEQ ID NO:42的长效缀合物(1.3nmol/kg，Q2D)的组，并在诱导期的最后8周期间皮下重复给予相应的物质。只用AMLN饮食喂养的小鼠被用作阴性对照。重复给予8周后，分析了通过采血获得的血样中透明质酸、金属蛋白酶-1的组织抑制物(TIMP-1)、和III型前胶原的N-末端前肽(PIIINP)的血液浓度，且从而计算了被称为无创性肝纤维化指标的增强的肝纤维化(ELF)评分。

如图4中所示，确认了作为重复给予SEQ ID NO:42的长效缀合物8周的结果，ELF评分(其在AMLN/TAA赋形剂对照组中增加了)显著降低了。

这些结果提示，本发明的三重激动剂或其长效缀合物可显著降低ELF评分，且因此对肝纤维化具有预防或治疗效果。

基于实施例3-1确认的改善无创性肝纤维化指标的效果，应用了有创性方法以明确评价三重激动剂的长效缀合物对肝纤维化的治疗效果。简单地说，通过尸体解剖收集了实施例3-1中使用的小鼠的肝组织(8周重复给予)，且然后对肝组织进行天狼星红染色。

结果确认了，经天狼星红染色的肝组织中的阳性面积也因给予三重激动剂的长效缀合物而显著减少了(图5)。

这些结果提示本发明的三重激动剂或其长效缀合物对肝纤维化具有预防或治疗效果。

为了确认通过实施例3-1和3-2中确认的SEQ ID NO:42的长效缀合物改善肝纤维化的效果，使用了称为肝纤维化模型的胆管结扎(BDL)小鼠模型。简单地说，麻醉了C57BL/6小鼠，并通过手术疗法缝合胆管诱导小鼠发生胆汁淤积，且从而诱导小鼠发生肝纤维化。将诱导的动物分成赋形剂对照组和给予了被选为代表性的三重激动剂的SEQ ID NO:42的长效缀合物(1.3nmol/kg，Q2D，皮下给予)的组。作为对照，使用了给予作为

结果，确认了TIMP-1和透明质酸的浓度通过给予三重激动剂的长效缀合物而一贯地降低了(图6)。

这些结果再次提示本发明的三重激动剂或其长效缀合物对肝纤维化具有治疗效果。

基于实施例3-3确认的改善无创性肝纤维化指标的效果，应用了有创性方法以明确评价三重激动剂的长效缀合物对肝纤维化的治疗效果。简单地说，通过尸体解剖收集了实施例3-3中使用的小鼠(2周重复给予)的肝组织，且然后对肝组织进行天狼星红染色。基于天狼星红染色测量了纤维化评分。

结果确认了，当重复给予SEQ ID NO:42的长效缀合物2周时，纤维化评分(其在BDL赋形剂对照组中增加了)显著降低了(图7a和7b)。

上述结果提示，本发明的三重激动剂或其长效缀合物可用作用于预防或治疗肝纤维化的药剂。

为了确认对胆汁淤积性肝病(其是一种肝病)的治疗效果，进行了如下实验。

为了确认通过实施例1中制备的三重激动剂的长效缀合物改善原发性胆汁性肝硬化(PBC)的效果，使用了称为PBC模型的胆管结扎(BDL)小鼠模型。简单地说，麻醉了C57BL/6小鼠，并通过手术疗法缝合胆管诱导小鼠发生胆汁淤积，且从而诱导小鼠发生肝脏炎症。

将诱导的动物分成赋形剂对照组和给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物(1.3nmol/kg，Q2D，皮下给予)的组。作为对照，使用了给予作为

结果确认了，当重复给予三重激动剂的长效缀合物2周时，炎症评分(其在BDL赋形剂对照组中增加了)显著降低了(图8)。

由以上结果确认了，三重激动剂的长效缀合物在PBC小鼠中具有改善肝脏炎症的优良效果。

为了确认通过实施例1中制备的三重激动剂的长效缀合物改善原发性硬化性胆管炎(PSC)的效果，使用了称为PSC模型的胆管结扎(BDL)小鼠模型。

具体地，麻醉了C57BL/6小鼠，并通过手术疗法缝合胆管诱导小鼠发生胆汁淤积，且从而诱导小鼠发生肝脏和胆管上的损伤。将诱导的动物分成赋形剂对照组和给予了SEQID NO:42的长效缀合物的组(1.3nmol/kg，Q2D)。从手术后第2天起进行了缀合物的重复皮下给予2周。重复给予2周后，通过尸体解剖从每种小鼠收集了肝组织，并通过H&E染色评价了改善在肝脏和胆管上的损伤的效果。

结果确认了，当重复给予三重激动剂的长效缀合物2周时，胆汁反流引起的实质坏死评分(其在BDL赋形剂对照组中增加了)明显降低了(图9)。

另外，如图10中所示，确认了通过给予三重激动剂的长效缀合物可显著降低由于胆管上的损伤引起的胆管增生评分的增加。

由以上结果确认了，三重激动剂的长效缀合物可改善PSC小鼠中肝脏和胆管上的损伤并减轻肝脏炎症。

为了确认通过实施例1中制备的三重激动剂的长效缀合物改善肝脏中炎症的效果，本发明人使用了AMLN/TAA(硫代乙酰胺)小鼠模型。

具体地，使C57BL/6小鼠经受了AMLN饮食摄入和TAA给予(50mg/kg至400mg/kg，TIW：每周3次)16周以诱导模型。将诱导的动物分成赋形剂对照组和给予了SEQ ID NO:42的长效缀合物(1.3nmol/kg，Q2D)的组，并在诱导期的最后8周期间皮下重复给予相应的物质。以仅用AMLN饮食喂养的小鼠作为阴性对照。另外，还测量了通过尸体解剖收集的每种小鼠肝组织中的细胞因子的表达水平。

具体地，参见图11，确认了当对于AMLN(赋形剂对照组)的MCP-1表达水平设为1.0时，对于AMLN/TAA(赋形剂对照组)的MCP-1的相对表达水平为1.506且对于AMLN/TAA(SEQID NO:42的长效缀合物)的MCP-1的相对表达水平为0.984；并且当对于AMLN(赋形剂对照组)的IL-6的表达水平设为1.0时，对于AMLN/TAA(赋形剂对照组)的IL-6的相对表达水平为1.61且对于AMLN/TAA(SEQ ID NO:42的长效缀合物)的IL-6的相对表达水平为1.048。确认了，在给予了三重激动剂的长效缀合物的组中MCP-1和IL-6的表达水平相对于AMLN/TAA的MCP-1和IL-6的表达水平，分别减少了34.7％和34.9％。

即，如图11中所示，确认了通过给予三重激动剂的长效缀合物一贯地降低了肝组织中MCP-1和/或IL-6的表达水平。

另外，为进一步确认图11中确认的改善肝脏炎症的效果，在人巨噬细胞系(THP-1细胞系)中测量了人坏死因子-α(TNF-α)水平的变化。

具体地，用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)处理了人巨噬细胞系并允许分化72小时。然后，将所得到的人巨噬细胞系用SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:100的三重激动剂中的每一种在培养基中处理至浓度为1μM，并将每一种用作试验组。三重激动剂中的每一种被处理48小时后以及然后用脂多糖(LPS)处理6小时以激活炎症应答。

12小时后，使用人TNF-αELISA试剂盒，对用三重激动剂中的每种处理的试验组；不用三重激动剂和LPS处理的阴性对照组；和仅用LPS处理而未用三重激动剂处理的阳性对照组的培养基中的每个中分泌的人坏死因子-α(TNF-α)的量的变化进行了测量，并将结果进行了比较(图12)。为了统计学处理，结果采用单因素ANOVA在阳性对照组、试验组和阴性对照组之间进行了比较。

结果确认了，与仅用LPS处理的阳性对照组的人坏死因子-α(TNF-α)的量相比，在其中在人巨噬细胞系上处理了三重激动剂(其不限于具体序列的情况下能够激活GLP-1、GIP和胰高血糖素受体中的全部)的所有试验组的培养基中分泌的人坏死因子-α(TNF-α)的量显著降低了。从这一结果确认了三重激动剂对伴有炎症的肝病的治疗作用。

通过上述实施例，本发明人已经确认本发明的三重激动剂的长效缀合物可对各种肝病(如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、原发性胆汁性肝硬化(PBC)和原发性硬化性胆管炎(PSC))表现出治疗效果。

综合起来，本发明的三重激动剂及其长效缀合物对肝病有治疗作用，且因此它们可有效用于药品的制造。

由上可知，本发明所属领域的技术人员将能够理解在不改变本发明的技术概念或必要特征的情况下，本发明可以以其它具体形式实施。就此而言，本文公开的示例性实施方式仅用于示例目的且不应被解释为限制本发明的范围。相反，本发明意图在不仅涵盖示例性实施方式，而且涵盖可能被包括在由所附权利要求限定的本发明的精神和范围内的各种替代、修改、等同物和其它实施方式。

<110> 韩美药品株式会社

<120> 三角胰高血糖素/GLP-1/GIP受体激动剂或其缀合物对肝病的治疗用途

<130> OPA20113-PCT

<150> KR 10-2019-0077776

<151> 2019-06-28

<150> KR 10-2020-0004379

<151> 2020-01-13

<150> KR 10-2020-0004386

<151> 2020-01-13

<150> KR 10-2020-0069219

<151> 2020-06-08

<160> 139

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 1

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Asp Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Cys

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<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 12

Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Met Asp Glu

1 5 10 15

Gln Ala Val Gln Leu Phe Val Glu Trp Leu Met Ala Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 13

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 13

Xaa Gly Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Gln Leu Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ala Val Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 14

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 14

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Gln Leu Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ala Val Arg Asp Phe Val Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 15

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 15

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Glu

1 5 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 16

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 16

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Ser

1 5 10 15

Glu Ala Gln Gln Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 17

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 17

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Glu

1 5 10 15

Glu Arg Ala Arg Glu Phe Ile Glu Trp Leu Leu Ala Gln Lys Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 18

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 18

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Asp Ser

1 5 10 15

Glu Arg Ala Arg Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Thr Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 19

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 19

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Gln Tyr Asp Ser

1 5 10 15

Glu His Gln Arg Asp Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asp Thr Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 20

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<400> 20

Xaa Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ile Gln Tyr Glu Glu

1 5 10 15

Glu Ala Gln Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Lys Asp Thr Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

35 40

<210> 21

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 21

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

<210> 22

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 22

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

<210> 23

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 23

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys

20 25 30

Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr

35 40

<210> 24

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 24

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Cys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 25

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 25

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 26

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 26

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Ser

1 5 10 15

Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 27

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 27

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Arg Ala Cys Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gln Gly Gly Pro

20 25 30

Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35 40

<210> 28

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 28

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Gln Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys

20 25 30

Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr

35 40

<210> 29

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 29

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Cys

20 25 30

<210> 30

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 30

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Cys

20 25 30

<210> 31

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 31

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Cys Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gln

20 25

<210> 32

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 32

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Cys Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 33

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 33

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys

20 25 30

<210> 34

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 34

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys

20 25 30

<210> 35

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 35

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys

20 25 30

<210> 36

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 36

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Cys Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly

35 40

<210> 37

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 37

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Cys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly

35 40

<210> 38

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 38

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ser Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Ser

35 40

<210> 39

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 39

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Gly

1 5 10 15

Gln His Ala Gln Cys Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Gly Pro

20 25 30

Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35 40

<210> 40

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 40

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Arg Ala Cys Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 41

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<400> 41

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Cys Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 42

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 42

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 43

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 43

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Cys Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

<210> 44

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<400> 44

His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Gln Leu Asp Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 45

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<400> 45

His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Met Asp Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Gln Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 46

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<400> 46

His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Gln His Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 47

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<400> 47

His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Gln Glu Phe Val Ala Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 48

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<400> 48

His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 49

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 49

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Cys Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys

20 25 30

<210> 50

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 50

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 51

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 51

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Cys

20 25 30

<210> 52

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 52

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Cys

20 25 30

<210> 53

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 53

His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys

20 25 30

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<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 54

His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asp Trp Leu Leu Ala Glu Cys

20 25 30

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 55

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys

20 25 30

<210> 56

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 56

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 57

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Cys

20 25 30

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 58

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

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Lys His Cys Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

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<212> PRT

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<220>

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

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<212> PRT

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<220>

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

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<212> PRT

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<220>

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<220>

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 71

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

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Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

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<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 72

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Cys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

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Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

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Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

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<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Cys Leu Asp Glu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 76

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

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Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 78

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Lys Cys

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<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 79

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

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<222> (16)..(20)

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

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<220>

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

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<222> (16)..(20)

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

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<212> PRT

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<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

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<220>

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<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

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20 25 30

<210> 85

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 85

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys

20 25 30

<210> 86

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 86

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Cys

20 25 30

<210> 87

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 87

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Cys

20 25 30

<210> 88

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 88

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys

20 25 30

<210> 89

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 89

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr Lys Cys

20 25 30

<210> 90

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 90

Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys

20 25 30

<210> 91

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 91

Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asp Trp Leu Leu Ala Glu Lys Cys

20 25 30

<210> 92

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 92

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys

20 25 30

<210> 93

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 93

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Gln Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Cys

20 25 30

<210> 94

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa是4-咪唑乙酰基 (CA)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 94

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu

1 5 10 15

Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asn Thr Lys Cys

20 25 30

<210> 95

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 95

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Cys His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

<210> 96

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 96

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp His Cys Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

<210> 97

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 97

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Cys His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

35

<210> 98

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 98

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 99

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 99

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp His His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 100

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 100

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Gln His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 101

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 101

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp Gln His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 102

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 三角激动剂

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa是氨基异丁酸 (Aib)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(20)

<223> 第16位和第20位的氨基酸形成环

<400> 102

Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Asp Gln His Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

35 40

<210> 103

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 通式1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa 是 His (H), 4-咪唑乙酰基 (CA), 或 Tyr (Y)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa 是 Gly (G), α-甲基-谷氨酸, 或 Aib

(氨基异丁酸)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)

<223> Xaa 是 Glu (E) 或 Gln (Q)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)

<223> Xaa 是 Thr (T) 或 Ile (I)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)

<223> Xaa 是 Leu (L), Tyr (Y), Lys (K), Cys (C), 或 Val (V)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)

<223> Xaa 是 Lys (K), Ser (S), 或 Ile (I)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)

<223> Xaa 是 Gln (Q), Tyr (Y), Ala (A), 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)

<223> Xaa 是 Leu (L), Met (M), 或 Tyr (Y)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)

<223> Xaa 是 Cys (C), Asp (D), Glu (E), 或 Leu (L)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)

<223> Xaa 是 Gly (G), Glu (E), 或 Ser (S)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)

<223> Xaa 是 Gln (Q), Arg (R), Ile (I), Glu (E), Cys (C), 或 Lys (K)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)

<223> Xaa 是 Ala (A), Gln (Q), Arg (R), 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)

<223> Xaa 是 Ala (A), Gln (Q), Cys (C), 或 Val (V)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (20)

<223> Xaa 是 Lys (K), Gln (Q), 或 Arg (R)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)

<223> Xaa 是 Glu (E), Gln (Q), Leu (L), Cys (C), 或 Asp (D)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (23)

<223> Xaa 是 Ile (I) 或 Val (V)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)

<223> Xaa 是 Ala (A), Gln (Q), Cys (C), Asn (N), Asp (D), 或 Glu (E)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (27)

<223> Xaa 是 Val (V), Leu (L), Lys (K), 或 Met (M)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)

<223> Xaa 是 Cys (C), Lys (K), Ala (A), Asn (N), 或 Asp (D)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)

<223> Xaa 是 Cys (C), Gly (G), Gln (Q), Thr (T), Glu (E), 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)

<223> Xaa 是 Cys (C), Gly (G), Lys (K), 或 His (H), 或是不存在的; 且

Xaa可被进一步连接至R1, 其中R1 是 Cys (C),

GKKNDWKHNIT, m-SSGAPPPS-n, 或 m-SSGQPPPS-n, 或是不存在的, 且

其中 m 是 -Cys-, -Pro-, 或 -Gly-Pro-, 且 n 是 -Cys-, -Gly-,

-Ser-, 或 -His

<400> 103

Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Xaa Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

<210> 104

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 通式2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa 是 His (H), 4-imidazoacetyl (CA), 或 Tyr (Y)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa 是 Gly (G), alpha-methyl-glutamic acid, 或 Aib

(氨基异丁酸)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)

<223> Xaa 是 Tyr (Y) 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)

<223> Xaa 是 Gln (Q), Tyr (Y), Ala (A), 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)

<223> Xaa 是 Leu (L), Met (M), 或 Tyr (Y)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)

<223> Xaa 是 Asp (D), Glu (E), 或 Leu (L)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)

<223> Xaa 是 Gly (G), Glu (E), 或 Ser (S)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)

<223> Xaa 是 Gln (Q), Arg (R), Ile (I), Glu (E), Cys (C), 或 Lys (K)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)

<223> Xaa 是 Ala (A), Gln (Q), Arg (R), 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)

<223> Xaa 是 Ala (A), Gln (Q), Cys (C), 或 Val (V)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (20)

<223> Xaa 是 Lys (K), Gln (Q), 或 Arg (R)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)

<223> Xaa 是 Glu (E), Gln (Q), Leu (L), Cys (C), 或 Asp (D)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (23)

<223> Xaa 是 Ile (I) 或 Val (V)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)

<223> Xaa 是 Ala (A), Gln (Q), Cys (C), Asn (N), 或 Glu (E)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)

<223> Xaa 是 Cys (C), Lys (K), Asn (N), 或 Asp (D)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)

<223> Xaa 是 Cys (C), Gly (G), Gln (Q), 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)

<223> Xaa 是 Cys (C), Gly (G), Lys (K), 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (31)

<223> Xaa 是 Pro (P) 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)

<223> Xaa 是 Cys (C), 或是不存在的

<400> 104

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Xaa

35 40

<210> 105

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 通式3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa 是 His (H) 或 Tyr (Y)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa 是 α-甲基-谷氨酸, 或 Aib (氨基异丁酸)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)

<223> Xaa 是 Tyr (Y), Ala (A), 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)

<223> Xaa 是 Arg (R), Cys (C), 或 Lys (K)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (18)

<223> Xaa 是 Ala (A) 或 Arg (R)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)

<223> Xaa 是 Ala (A) 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)

<223> Xaa 是 Glu (E) 或 Asp (D)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)

<223> Xaa 是 Gln (Q) 或 Asn (N)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)

<223> Xaa 是 Cys (C) 或 Asp (D)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)

<223> Xaa 是 Cys (C), Gln (Q), 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (30)

<223> Xaa 是 Cys (C) 或 His (H)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (31)

<223> Xaa 是 Pro (P) 或 Cys (C)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (40)

<223> Xaa 是 Cys (C), 或是不存在的

<400> 105

Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Xaa Leu Asp Glu

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Ser

20 25 30

Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Xaa

35 40

<210> 106

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 106

Gly Lys Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr

1 5 10

<210> 107

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 107

Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

1 5

<210> 108

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 108

Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

1 5

<210> 109

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 109

Cys Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

1 5

<210> 110

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 110

Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

1 5 10

<210> 111

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 111

Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys

1 5 10

<210> 112

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 112

Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

1 5

<210> 113

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 113

Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly

1 5 10

<210> 114

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 114

Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser His Gly

1 5 10

<210> 115

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 115

Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Ser

1 5 10

<210> 116

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 116

Pro Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser

1 5

<210> 117

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R1

<400> 117

Pro Ser Ser Gly Gln Pro Pro Pro Ser Cys

1 5 10

<210> 118

<211> 29

<212> PRT

<213> 智人

<400> 118

His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser

1 5 10 15

Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr

20 25

<210> 119

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<400> 119

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro

1 5 10

<210> 120

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 120

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Cys Pro

1 5 10

<210> 121

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 121

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Pro

1 5 10

<210> 122

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 122

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser

1 5 10

<210> 123

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 123

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro

1 5 10

<210> 124

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 124

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser

1 5

<210> 125

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 125

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

1 5

<210> 126

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 126

Glu Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

1 5

<210> 127

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 127

Glu Ser Pro Ser Cys Pro

1 5

<210> 128

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 128

Glu Pro Ser Cys Pro

1 5

<210> 129

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 129

Pro Ser Cys Pro

1

<210> 130

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 130

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Ser Cys Pro

1 5 10

<210> 131

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 131

Lys Tyr Gly Pro Pro Pro Ser Cys Pro

1 5

<210> 132

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 132

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Ser Cys Pro

1 5

<210> 133

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 133

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

1 5

<210> 134

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 134

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

1 5

<210> 135

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 135

Glu Ser Lys Pro Ser Cys Pro

1 5

<210> 136

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 136

Glu Ser Pro Ser Cys Pro

1 5

<210> 137

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 137

Glu Pro Ser Cys

1

<210> 138

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链区的变体

<400> 138

Ser Cys Pro

1

<210> 139

<211> 221

<212> PRT

<213> 智人

<400> 139

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

1 5 10 15

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

20 25 30

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

35 40 45

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

50 55 60

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

65 70 75 80

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

85 90 95

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

100 105 110

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

115 120 125

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

130 135 140

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

145 150 155 160

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

165 170 175

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

180 185 190

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

195 200 205

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

210 215 220