糖尿病的微量取样检测

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2018年8月22日提交的美国临时申请62/721,227的优先权，将其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开文本总体上涉及检测从微量取样装置获得的分析物的领域。描述了检测以下的方法：糖尿病的标记物睾酮和/或其他激素、微量白蛋白、肌酐/估计肾小球滤过率(eGFR)、促甲状腺激素(TSH)、C反应蛋白(CRP)、维生素D、和ω3，以及肾、肝、或者甲状腺功能的标记物。

背景技术

提供以下讨论以帮助读者理解本公开文本，并不承认描述或构成本公开文本的现有技术。

许多当前的诊断和生物样品分析方法都依赖于相对大量的流体样品。此类样品需要在干冰中冷藏或冷冻运输，这对处理样品的人员来说既昂贵又麻烦。同样，流体样品可能被认为是需要特殊运输方法的生物危害品，并且获得所需量的流体所需的体积可能需要获得专门的人员，诸如通过静脉穿刺收集血液的抽血医师。因此，替代样品类型对于改善患者体验和便利性很有意义。

替代取样方法包括使用减少的样品体积，特别是对于经常测试若干种分析物的患者(例如贫血或糖尿病患者)来说。依靠减少样品体积的方法可利用手指针刺获得几滴血液，而不用常规的放血，并且这使得该过程可以由患者在家中自行收集进行。这降低了基础设施成本，并使得静脉通路困难的患者(诸如儿童和肥胖患者)易于依从。

因此，本领域需要改进生物样品的生物取样和分析，以提高患者的依从性和易于获取。本公开文本满足了这一需求。

发明内容

本文描述了用于检测来自用于收集生物样品的微量取样装置的一种或多种分析物的装置和方法。

在一个方面，本公开文本提供了测定样品中糖化血红蛋白(HbA1c)的分数的方法，所述方法包括：从用于收集个体的生物样品的微量取样装置洗脱所述生物样品；从所述生物样品中提取血红蛋白；测量HbA1c的浓度和总血红蛋白(THb)的浓度；计算HbA1c在THb中的分数。

在一些实施方案中，所述生物样品是从患有或怀疑患有糖尿病的个体获得的。

在一些实施方案中，所述生物样品是干流体。在一些实施方案中，所述生物样品是干血清、干毛细血管血液或干全血。

在一些实施方案中，所述生物样品是通过手指针刺从患者收集的。在一些实施方案中，通过在水中孵育所述微量取样装置的吸收尖端来将所述生物样品从所述吸收尖端洗脱。

在一些实施方案中，提取包括使所述生物样品与裂解缓冲液接触以裂解所述样品中的红细胞。在一些实施方案中，所述方法还可以包括使所述样品与亚硝酸钠接触。在一些实施方案中，所述方法还可以包括使所述样品与蛋白酶、叠氮化钠和果糖基肽氧化酶中的一种或多种接触。

在一些实施方案中，通过测量吸光度来测定所述THb的浓度。在一些实施方案中，通过测量间接标记物来测定所述HbA1c的浓度。例如，在一些实施方案中，所述间接标记物是过氧化氢。

在一些实施方案中，通过质谱测量所述THb或所述HbA1c，而在一些实施方案中，通过质谱测量所述THb和所述HbA1c两者。

在一些实施方案中，所述微量取样装置是

在一些实施方案中，所述方法还可以包括检测葡萄糖、LDLp、肌酐和微量白蛋白中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述个体自行收集所述生物样品。在一些实施方案中，所述个体将用于自行收集所述生物样品的微量取样装置在预编址的信封中运送至测试设施。

在一些实施方案中，6.5％或更高的HbA1c/THb分数指示缺乏糖尿病控制。

在另一个方面，本公开文本提供了检测样品中的分析物的方法，所述方法包括：从用于从个体收集生物样品的微量取样装置洗脱所述生物样品；从所述生物样品中提取两种或更多种分析物；测量两种或更多种分析物的浓度；其中所述两种或更多种分析物选自HbA1c、总血红蛋白、葡萄糖、低密度脂蛋白颗粒数(LDLp)、微量白蛋白、肌酐/估计肾小球滤过率(eGFR)、促甲状腺激素(TSH)、C反应蛋白(CRP)、维生素D、ω3、肾功能的标记物(例如肌酐、尿素、尿酸、电解质)、肝功能的标记物(例如肝转氨酶天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、胆红素、白蛋白、碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶)、和甲状腺功能的标记物(例如TSH、T4、T3)。

以下详细说明是示例性和解释性的，并且旨在提供对本发明的进一步解释。

附图说明

图1示出了示例性的微量取样装置及其在从手指针刺获得/储存血液方面的用途。

图2示出了戴明回归的散点图，验证了使用HbA1c/THb作为糖尿病控制(即，随时间的血糖水平)的指标。

图3示出了戴明回归的散点图，表明根据所公开的方法皮质醇、睾酮和孕酮是经验证且可检测的。

图4示出了戴明回归的散点图，表明根据所公开的方法25-羟维生素D3是经验证且可检测的。

具体实施方式

本文公开的方法提供了一种在改善患者体验和依从性的同时降低生物样品处理的成本和提高生物样品处理的效率的方法。所公开的方法依赖于在处理和分析样品之前使用微量取样装置来获得和储存生物样品(例如血液、血浆、唾液、尿液等)。

在一些方面，所公开的方法特别适合于通过以下方式诊断和监测糖尿病(例如1型、2型糖尿病或妊娠糖尿病)：获得体液的微量样品，从微量取样装置洗脱生物样品，从样品中提取血红蛋白，并且测量糖化血红蛋白(HbA1c)和总血红蛋白(THb)的浓度以确定HbA1c在THb中的分数。HbA1c占THb的分数越高，糖尿病的控制就越差。所公开的方法允许准确反映长期血糖控制的微创连续监测，并且因此本文所述的方法提供了相对于常规技术而言相当大的进步。

定义

虽然以下术语被认为是本领域普通技术人员很好理解的，但阐述以下定义以便于解释本发明所公开的主题。

术语“一个/一种(a或an)”可以指一个或多个所述实体，即可以指复数个指代物。因此，术语“一个/一种(a或an)”、“一个/一种或多个/多种(one or more)”以及“至少一个/一种(at least one)”在本文中可互换使用。此外，不定冠词“一个/一种(a或an)”对“要素”的提及并不排除存在多于一个要素的可能性，除非上下文明确要求存在一个且仅存在一个要素。

在整个本说明书中，对“一个实施方案”、“一种实施方案”、“一个方面”或“一种方面”的提及意为结合所述实施方案描述的具体特征、结构或特性被包括在本公开文本的至少一个实施方案中。因此，在整个本说明书中各处出现的短语“在一个实施方案中”或“在一种实施方案中”不一定都指的是相同的实施方案。此外，具体特征、结构或特性可以在一个或多个实施方案中以任何合适的方式组合。

如本文所用，体液样品或培养物中分析物的“量”通常是指反映在样品或培养物体积中可检测到的分析物的质量的绝对值。然而，量还考虑了与另一个分析物量相比的相对量。例如，样品中分析物的量可以是大于样品中正常存在的分析物的对照水平或正常水平的量。

如本文所用，当在数值之前时，术语“约”或“大约”表示所述值加或减所述值的10％的范围。

在本文中可互换使用的“体液(Body fluid和bodily fluid)”是指来自人、动物或细胞培养物的流体样品。体液包括但不限于羊水、血液、脑脊液、腹膜液、血浆、胸膜液、唾液、精液、血清、痰、泪和尿液。在优选的实施方案中，所述体液(body fluid或bodilyfluid)是人血浆。

如本文所用，术语“样品”是指从患者获得的临床样品。在优选的实施方案中，从生物来源获得样品(即“生物样品”)，诸如从受试者收集的组织或体液。样品来源包括但不限于粘液、痰(经处理或未经处理)、支气管肺泡灌洗液(BAL)、支气管冲洗液(BW)、血液、体液、脑脊液(CSF)、尿液、血浆、血清或组织(例如活检材料)或器官组织(例如胰腺组织)。优选的样品来源包括血浆、血清或全血(干的或液体的)。

如本文所用，“个体”、“患者”或“受试者”可以是单独的生物体、脊椎动物、哺乳动物或人。在优选的实施方案中，所述个体、患者或受试者是人。

本技术并非受限于本申请中描述的具体方面，所述具体方面旨在作为本技术的单独方面的单一说明。如对于本领域技术人员将清楚的，可以在不背离本技术的精神和范围的情况下，对本技术进行多种修饰和变更。本领域技术人员根据前述描述将清楚，除了本文列举的方法和装置外，在本技术范围内的功能上等效的方法和装置。此类修饰和变更旨在落于本技术的范围内。应理解，本技术不限于具体方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，当然它们可以改变。还应理解，本文中所用术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不旨在具有限制性。

本技术的方法中采用的微量取样装置

常规的干血斑技术伴有许多缺点，所述缺点包括不精确的样品体积和对恒定样品粘度的依赖(即样品将均匀地散布在样品卡上的预期)。当向卡片施用等体积的样品时，恒定粘度产生保持恒定的血斑直径。然而，由于血液中的血细胞比容(HCT)或红细胞压积(PCV)水平不同，所以血液样品之间的粘度显著变化。具有高血细胞比容水平的样品在血斑纸上形成较小直径的斑点，导致在取样斑点的固定直径内具有不同血液浓度。认为斑点直径中的PCV水平显示出约45％的变化。当将内标物喷洒在血斑上时，这可能会引起定量时45％的误差。本文公开的方法中采用的微量取样装置具有几个优点，包括收集更精确的血液体积，没有血细胞比容偏差，以及容易地用标准液体处理器进行自动化操作以进行实验室加工的能力。

另外，相对于所公开的微量取样装置，常规血斑技术需要相对多体积的血液。干血斑通常每个斑点需要50-75μl，而微量取样装置可以由大约20μl产生结果。本领域中已经认识到，对于检测病毒载量，与其他样品类型诸如血浆相比，干血斑通常具有性能可变性问题(Pannus等人,Medicine,95:48(e5475)(2016))，并且对于某些类型的评估(例如光密度)，与其他样品类型如血清相比，干血斑的体积可能需要显著较高(Brandao等人,J.Clin.Virol.,57:98-102(2013))。实际上，发现使用干血斑和血浆斑点筛查两者来检测在接受抗逆转录病毒疗法的HIV患者中的病毒载量和治疗无效，两个结果都产生高的假阳性率(Sawadogo等人,J.Clin.Microbiol.,52(11):3878-83(2014))。

可用于本技术的方法中的微量取样装置包括具有远端和近端的吸收尖端。吸收尖端远端的宽度比近端的宽度窄。近端附接于固持器，而远端配置成接触待吸收的流体，诸如血液。微量取样装置使得生物流体样品诸如血液可容易地干燥、运送，然后进行分析。在某些实施方案中，生物流体是来自手指针刺的血液。在图1中示出了示例性的微量取样装置及其在手指针刺上的应用，其进一步解释了在一些实施方案中，血液(或其他生物样品)可以被收集，密封在干燥剂袋中，并且被邮寄到实验室以供患者收集他或她自己的血液进行分析。使用许多其他常规取样技术无法进行这种类型的自检。

芯吸作用将血液吸入吸收尖端。吸收尖端与固持器之间的任选障壁阻止血液通过或芯吸到固持器。吸收尖端由即使在可获得过量流体时也芯吸起基本上相同体积的流体(体积计量吸收微量取样或VAMS

在一些实施方案中，用于吸收尖端的材料是亲水性的(例如聚酯)。可替代地，所述材料最初可以是疏水性的，随后进行处理以使其成为亲水性的。可以通过各种已知方法使疏水性基质具有亲水性，所述方法诸如基质的等离子体处理或表面活性剂处理(例如Tween-40或Tween-80)。在一些实施方案中，使用等离子体处理使疏水性材料诸如聚烯烃(例如聚乙烯)具有亲水性。可替代地，将亲水性聚合物接枝到表面上和用极性或亲水性分子诸如糖将表面上的活性基团化学官能化可用于实现吸收尖端的亲水性表面。还可以使用共价修饰来将极性或亲水性官能团添加到吸收尖端的表面上。用于吸收尖端的其他合适材料包括烧结玻璃、烧结钢、烧结陶瓷以及塑料的烧结聚合物和烧结聚乙烯。

在一些实施方案中，微量取样装置包括由亲水性聚合物材料制成的吸收尖端，所述吸收尖端的大小足以在约2-5秒内吸收最多约20μL的血液，长度小于约5mm(0.2英寸)，横截面积小于约20mm

在某些实施方案中，吸收尖端的体积为约35mm

吸收尖端可以成形为具有类似截头圆锥的具有窄且圆的远端的外部。在一些实施方案中，固持器具有圆柱形柱，所述圆柱形柱配合到吸收尖端中心内的凹部中并且沿着吸收尖端和固持器的纵向轴线延伸。吸收尖端的圆锥形形状有助于快速且均匀地芯吸样品。

可以将固持器适配为与移液器一起使用。在一些实施方案中，管状圆锥形固持器是优选的，其中吸收尖端位于固持器的窄端。固持器的较宽相对端可以是封闭的或开放且中空的，并且可以被任选地配置成附接于移液器尖端。固持器可以具有向外延伸的凸缘，所述凸缘被设置成邻接固持器、干燥架或测试设备中的配合结构，以帮助将吸收尖端定位在此类固持器、干燥架和测试设备中的期望位置处。

在某些实施方案中，固持器可以包括移液器尖端或配置成与移液器尖端嵌套的逐渐变细的管状结构。吸收尖端可以由聚乙烯构成，并且吸收尖端和固持器都在无菌条件下制造，或最后进行灭菌。吸收尖端可以含有干抗凝血剂。在一些实施方案中，固持器具有沿固持器的长度延伸的多个肋。肋可以具有选择来使吸收尖端不与凹部的壁接触的高度和长度，其中固持器和吸收尖端被放置在凹部中以进行吸收尖端中干血液的运送或提取。

在吸收小体积样品之后，然后干燥吸收尖端。在一些实施方案中，将小体积血液样品在环境温度或室温下干燥至少10分钟，至少20分钟，至少30分钟，至少40分钟，至少50分钟，至少1小时，至少2小时，至少3小时，至少4小时，至少5小时，至少6小时，至少8小时，至少12小时，至少16小时，至少20小时，至少24小时，至少48小时，至少72小时或至少96小时。在某些实施方案中，将小体积血液样品干燥约2-3小时。

可以在合适的支架或固持器上进行干燥，或优选地，可以将吸收尖端和固持器转移到特殊的干燥容器中，所述干燥容器被配置成便于干燥，同时使吸收尖端与干燥容器的壁或其他潜在的污染表面之间的接触达最少。干燥容器可以具有干燥剂以便于干燥。干燥容器还可以提供保护盖，可以密封所述保护盖以进行运输而防止污染。在一些实施方案中，盖具有表面，可以在所述表面上写入印刷标记以鉴别干血液样品的来源并且提供其他相关信息。在一些实施方案中，容器的尺寸和容器内固持器的相对位置将符合SBS微孔板规格。可以将微量取样装置和干燥容器与干燥剂一起放置在塑料袋中以辅助干燥，并且可以以这种方式运送，或在去除干燥剂之后运送。

在一些实施方案中，固持器的较宽相对端是中空的，并且容器具有包括安装突起部分的第一部分，所述安装突起部分的大小被设计成配合到固持器的中空端中并且可释放地接合所述中空端。另外或可替代地，容器具有第二部分，所述第二部分可释放地紧固于第一部分，并且具有被配置成包封固持器的一部分以进行固持器运输的凹部。容器可以包含多个开口，从而使得空气可进入微量取样装置的吸收尖端。此外，第一部分可以具有如下侧面，其中具有足够大小的进入端口，并且所述进入端口被定位成使得当固持器在安装突起上时可以穿过所述端口施加标记并且施加到固持器上。

在测试位置处接收之后，可以手动或通过自动化构件在预定体积的合适缓冲液(如本文所述)中洗脱吸收尖端，以从干血中提取目标核酸或蛋白质。物理搅拌技术诸如流体和/或吸收尖端的超声处理或涡旋可以加速从干血到液体样品基质中的提取过程。可以使用物理分离技术诸如离心、蒸发/重构、浓缩、沉淀、液/液萃取和固相萃取进一步简化样品基质以进行进一步分析。

每个容器可以包封多个固持器，其中每个固持器在其远端包含吸收尖端并且具有中空的近端。容器同样具有多个细长的安装突起，安装突起各自的大小被设计成配合到多个固持器的中空端中并且可释放地接合所述中空端。容器的第二部分具有凹部，所述凹部被配置成将多个固持器中的每一个分别包封在容器内的单独外壳中。在某些实施方案中，多个固持器中的每一个具有沿固持器长度延伸的多个肋，其中肋被配置成使吸收尖端不接触容器的壁。根据需要，可以将干燥剂放置在容器内以帮助干燥吸收尖端中的血液或维持干燥。每个固持器可以具有将固持器与容器以及与至少一个其他固持器相关联的可见标记，诸如序列号，其中数字的各部分指示相关的固持器/吸收尖端和所运送固持器的容器。

测定HbA1c分数的方法

糖尿病是通常需要频繁和常规筛查和分析生物样品的适应症的示例，因此可以从替代取样方法中受益。

本发明公开了一种用于测定样品中糖化血红蛋白(HbA1c)的分数的方法，所述方法包括：(a)从用于收集生物样品的微量取样装置洗脱所述生物样品；(b)从所述生物样品中提取血红蛋白；(c)测量所述样品中HbA1c的浓度和总血红蛋白(THb)的浓度；并且(d)计算HbA1c在THb中的分数。

血红蛋白(Hb)由四个蛋白质链和四个血红素部分组成，是位于红细胞中的红色色素蛋白。它的主要功能是运输血液中的氧气和二氧化碳。每个Hb分子能够结合四个氧分子。Hb由多种亚组分和衍生物组成。在这种异质血红蛋白组中，HbA1c是糖化血红蛋白之一，糖化血红蛋白是由各种糖附接至Hb分子上形成的亚组分。通过葡萄糖与正常成人Hb(HbA)的β链的N末端氨基的非酶促反应，分两步形成HbA1c。第一步是可逆的，并产生不稳定的HbA1c。这在第二个反应步骤中缓慢重排以产生稳定的HbA1c。

在红细胞中，转化为稳定HbA1c的HbA的相对量随血液中葡萄糖的平均浓度而增加。转化为稳定HbA1c受到红细胞约100至120天寿命的限制。结果是，HbA1c反映前2至3个月期间的平均血糖水平。因此，HbA1c适用于监测糖尿病个体的长期血糖控制。更最近的血糖水平对HbA1c水平具有更大的影响。

糖尿病并发症(诸如糖尿病性肾病和视网膜病变)的风险随着代谢控制不佳而增加。根据HbA1c作为平均血糖水平指标的功能，HbA1c可预测1型糖尿病患者的糖尿病并发症的发生。HbA1c升高与这些并发症的风险增加直接相关。

对于常规临床使用，通常每3至4个月进行一次测试就足够了。在某些临床情况诸如妊娠糖尿病下，或在疗法发生重大变化后，在2至4周的间隔内测量HbA1c可能是有用的。在一些实施方案中，所述生物样品是从患有或怀疑患有糖尿病(诸如1型或2型糖尿病或妊娠糖尿病)的患者获得的。

在一些实施方案中，所述生物样品是干流体，例如干血清、干毛细血管血液或干全血。在某些实施方案中，也可以使用其他体液，诸如唾液、尿液和汗液。

在一些实施方案中，所述生物样品是通过手指针刺从患者收集的，但是也可以使用静脉穿刺或其他获得血液样品的方法。

在一些实施方案中，所述生物样品获得和/或储存在微量取样装置(例如

在一些实施方案中，提取包括使所述生物样品与裂解缓冲液接触以裂解所述样品中的红细胞。在从红细胞中提取血红蛋白之后，所公开的方法可以利用酶法，所述酶法特异性地测量HbA1c的β链的N末端果糖基二肽。例如，所述酶法可以包括预处理过程，将血红蛋白通过与亚硝酸钠反应转化为高铁血红蛋白。添加另外的试剂可导致血红蛋白的β链的糖基化N末端二肽(果糖基-VH)通过蛋白酶的作用被切割，并且可以通过使高铁血红蛋白与叠氮化钠接触来将血红蛋白转化为稳定的高铁血红蛋白。这允许通过测量稳定的高铁血红蛋白叠氮化物的吸光度来测定总血红蛋白的浓度。添加包含果糖基肽氧化酶(FPOX)的另外的试剂可导致FPOX与从样品中的HbA1c切割的果糖基-VH之间的反应。这允许通过测量所得过氧化氢来测定HbA1c的浓度。

因此，在一些实施方案中，所公开的方法还可以包括使所述样品与亚硝酸钠接触和/或使所述样品与蛋白酶、叠氮化钠和果糖基肽氧化酶中的一种或多种接触。在一些实施方案中，通过测量吸光度来测定THb的浓度，并且在一些实施方案中，通过测量间接标记物(例如过氧化氢)来测定HbA1c的浓度，但是本领域已知的其他检测方法，诸如液相色谱(LC)和质谱(MS)，可用于其他实施方案中。例如，一些实施方案可以采用串联LC-MS/MS来检测给定样品中HbA1c和THb的量。

在一些实施方案中，微量取样装置可以是

HbA1c的高分数指示糖尿病或缺乏糖尿病控制。如图2所示，戴明回归分析表明，HbA1c分数是糖尿病控制的经验证标记物。例如，当HbA1c占THb的5.6％或更多时，它可以指示缺乏糖尿病控制，并且百分比或分数越大，就越指示缺乏糖尿病控制(即持续的高血糖水平)。在一些实施方案中，当HbA1c是约5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、或7.0％或更高时，指示缺乏糖尿病控制。

所公开的方法还可用于简化糖尿病测试和监测，这对于维持糖尿病患者的长期健康至关重要。因此，所公开的方法的一些实施方案可以包括患者经由微量取样装置自行收集生物样品(例如血液)，将所述样品邮寄到预定的实验室或测试设施，并且然后对所述样品进行洗脱和提取以测量并计算HbA1c占THb的分数。

另外的方法和分析物

除了检测HbA1c和确定样品中HbA1c在总血红蛋白(THb)中的分数的方法之外，本公开文本还提供了用于检测其他标记物和分析物的方法，所述其他标记物和分析物可用于评价个体的糖尿病、代谢和心血管健康以及评价个人的整体健康和营养。这些方法包括使用微量取样装置从个体获得生物样品。所述个体可能已被诊断出患有、怀疑患有、或有风险患糖尿病、代谢性疾病或心血管疾病。

因此，本公开文本还提供了对来自用微量取样装置获得的生物样品的一种或多种分析物进行检测的方法，所述一种或多种分析物来自由以下组成的列表：HbA1c、总血红蛋白、葡萄糖、低密度脂蛋白颗粒数(LDLp)、微量白蛋白、肌酐/估计肾小球滤过率(eGFR)、促甲状腺激素(TSH)、C反应蛋白(CRP)、维生素D、ω3、肾功能的标记物(例如肌酐、尿素、尿酸、电解质)、肝功能的标记物(例如肝转氨酶天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、胆红素、白蛋白、碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶)、和甲状腺功能的标记物(例如TSH、T4、T3)。在一些实施方案中，对分析物浓度的检测和/或测定可包括质谱、免疫学测定、酶测定或吸光度测定。

可以评估所公开的分析物的各种组合，以便提供对个体的糖尿病、代谢、心血管或整体健康的深入了解。例如，在一些实施方案中，可以对HbA1c、葡萄糖、LDLp、肌酐和微量白蛋白一起评估以判定个体的糖尿病是否在控制之下。在一些实施方案中，可以对TSH和CRP一起评估。在一些实施方案中，可以对LDLp、HbA1c和CRP一起评估以判定个体的心脏代谢健康。在一些实施方案中，可以对LDLp、HbA1c、CRP、维生素D和ω3连同任选地肾、肝和/或甲状腺功能的一种或多种标记物一起评估，以判定个体的心脏代谢和营养健康。

图3和图4示出当根据所公开的方法经由微量取样装置获得生物样品时，在生物样品中可检测到皮质醇、睾酮、孕酮和25-羟维生素D3。

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可以在不存在本文没有明确公开的任一种要素和多种要素、任何一种限制或多种限制的情况下适当地实践本文说明性描述的方法。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应以广阔且无限制的方式来理解。另外，本文采用的术语和表达已经被用作具有描述性而没有限制性的术语，并且在使用此类术语和表达时并非意图排除所示和所述特征或其部分的任何等效物。应认识到，在所要求保护的本公开文本的范围内，各种修饰是可能的。因此，应理解的是，虽然本公开文本已通过优选实施方案和任选特征明确公开，本文公开的其中实施的本公开文本的修饰和变更可以由本领域技术人员采取，并且这样的修饰和变更被认为是在本公开文本的范围内。

已经在此宽泛且概括地对本公开文本进行了说明。落在总公开文本之内的更窄的种类和亚属的分类中的每个也形成了方法的一部分。这包括方法的总描述，具有从属中除去任何主题的条件或否定式限制，无论切除的材料是否在本文中被明确地引述。本技术并非受限于本申请中描述的具体实施方案，所述实施方案旨在作为本技术的单独方面的单一说明。如对于本领域技术人员将清楚的，可以在不背离本技术的精神和范围的情况下，对本技术进行多种修饰和变更。本领域技术人员根据前述描述将清楚，除了本文列举的方法和装置外，在本技术范围内的功能上等效的方法和装置。此类修饰和变更旨在落于本技术的范围内。应理解，本技术不限于具体方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，当然它们可以改变。还应理解，本文中所用术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不旨在具有限制性。

本领域技术人员容易理解，本公开文本非常适合于实现该目的并获得所提及的结果和优点，以及其中固有的那些。本领域技术人员将想到其中的修饰和其他用途。这些修饰包含在本公开文本的精神内，并且由权利要求的范围限定，权利要求的范围阐述了本公开文本的非限制性实施方案。

另外，当本公开文本的特征或方面以马库什组(Markush group)描述时，本领域技术人员将意识到本公开文本还由此以马库什组的任何单独的成员或成员子组描述。

出于所有目的，将本文引用的所有参考文献、文章、出版物、专利、专利出版物和专利申请通过引用以其整体并入。

然而，提及本文引用的任何参考文献、文章、出版物、专利、专利出版物和专利申请并非且也不应被视为承认或任何形式的如下建议，即它们构成有效的现有技术或形成世界上任何国家公知常识的一部分。