一种分析氯乙酸乙酯中二氯乙酸乙酯杂质的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域。具体地，本发明涉及一种分析氯乙酸乙酯中二氯乙酸乙酯杂质的方法。

背景技术

氯乙酸乙酯是合成医药、农药及香料的重要中间体。例如，氯乙酸乙酯可以作为丹曲林钠的起始物料。但在工艺制备期间，它的使用可能会引入具有潜在遗传毒性的杂质二氯乙酸乙酯。因此，有必要对氯乙酸乙酯中的二氯乙酸乙酯进行控制，确保该杂质在可接受的范围内，以避免在起始物料中就引入了二氯乙酸乙酯。

因此，本发明提供了一种可靠、高效且耐用的分析氯乙酸乙酯中二氯乙酸乙酯杂质的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种分析氯乙酸乙酯中二氯乙酸乙酯杂质的方法。该方法采用色谱法，可靠性高、分离度好、方法耐用且氯乙酸乙酯成分回收率高。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的。

本发明提供了一种分析氯乙酸乙酯中二氯乙酸乙酯杂质的方法，其包括以下步骤：

(a)使二氯乙酸乙酯定量溶解于稀释剂，获得二氯乙酸乙酯对照品溶液；

(b)使氯乙酸乙酯和二氯乙酸乙酯定量溶解于稀释剂，获得系统适用性溶液；

(c)使供试品定量溶解于稀释剂，获得供试品溶液；

(d)在气相色谱条件下，分别取所述供试品溶液和所述对照品溶液进样；

所述气相色谱条件包括：采用毛细管色谱柱和ECD检测器；进样口温度为180℃～220℃；ECD检测器温度为250℃～350℃；进样体积为0.3μl～0.8μl，分流比为40～60:1；柱流量为0.5ml/min～1.5ml/min。

优选地，步骤(a)中，所述稀释剂选自正己烷、异辛烷、乙醇、乙醚中的至少一种。

优选地，所述稀释剂选自正己烷和/或异辛烷。

更优选地，所述稀释剂为异辛烷。

在本发明的具体实施方案中，进样口温度可以选择例如180℃、185℃、190℃、195℃、200℃、205℃、210℃、215℃、或220℃；ECD检测器温度可以选择例如250℃、255℃、260℃、270℃、280℃、290℃、300℃、310℃、320℃、330℃、340℃、或350℃；进样体积可以选择例如0.3μl、0.4μl、0.5μl、0.6μl、0.7μl、或0.8μl；分流比可以选择例如40:1、41:1、42:1、45:1、48:1、50:1、52:1、55:1、58:1、或60:1；柱流量可以选择例如0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min、或1.5ml/min。

优选地，所述气相色谱条件包括：进样口温度为200℃；ECD检测器温度为300℃；进样体积为0.5μl，分流比为50:1；柱流量为1.0ml/min。

优选地，所述毛细管色谱柱的柱升温程序包括：自起始温度110℃～130℃下停留1min～3min，以5℃/min～10℃/min的升温速率升温至160℃～180℃。

在本发明的具体实施方案中，所述毛细管色谱柱的柱升温程序包括：自起始温度110℃～130℃(例如，110℃、111℃、112℃、115℃、118℃、120℃、122℃、125℃、128℃、或130℃)下停留1min～3min，以5℃/min～10℃/min(例如，5℃/min、6℃/min、7℃/min、8℃/min、9℃/min、或10℃/min)的升温速率升温至160℃～180℃(例如，160℃、161℃、162℃、165℃、168℃、170℃、172℃、175℃、178℃、或180℃)。

优选地，所述毛细管色谱柱的柱升温程序包括：自起始温度120℃下停留2min，以6℃/min的升温速率升温至180℃。

优选地，所述毛细管色谱柱的固定液选自硝基对苯二酸改性的聚乙二醇、5％苯基-95％二甲基聚硅氧烷。

优选地，所述毛细管色谱柱的固定液为硝基对苯二酸改性的聚乙二醇。

优选地，所述毛细管色谱柱选自DB-FFAP 30m×0.32mm×0.5μm色谱柱、DB-FFAP30m×0.25mm×0.25μm色谱柱、Nukol

优选地，所述毛细管色谱柱为DB-FFAP 30m×0.32mm×0.5μm色谱柱。

优选地，所述载气为氮气。

优选地，所述二氯乙酸乙酯对照品溶液的浓度为1μg/ml～3μg/ml；所述供试品溶液的浓度为300μg/ml～500μg/ml；所述系统适用性溶液中氯乙酸乙酯的浓度为300μg/ml～500μg/ml，二氯乙酸乙酯的浓度为1μg/ml～3μg/ml。

在本发明的具体实施方案中，所述二氯乙酸乙酯对照品溶液的浓度可以选择例如1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、或3μg/ml；所述供试品溶液的浓度可以选择例如300μg/ml、320μg/ml、350μg/ml、380μg/ml、400μg/ml、420μg/ml、450μg/ml、480μg/ml、或500μg/ml；所述系统适用性溶液中氯乙酸乙酯的浓度可以选择例如300μg/ml、320μg/ml、350μg/ml、380μg/ml、400μg/ml、420μg/ml、450μg/ml、480μg/ml、或500μg/ml，二氯乙酸乙酯的浓度可以选择例如1μg/ml、1.5μg/ml、2μg/ml、2.5μg/ml、或3μg/ml。

优选地，所述二氯乙酸乙酯对照品溶液的浓度为2μg/ml；所述供试品溶液的浓度为400μg/ml；所述系统适用性溶液中氯乙酸乙酯的浓度为400μg/ml，二氯乙酸乙酯的浓度为2μg/ml。

优选地，所述进样采用直接进样方式进行。

在本发明的一个优选实施方案中，所述二氯乙酸乙酯对照品溶液如下配制：

精密称取二氯乙酸乙酯置于量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，作为二氯乙酸乙酯对照品一级贮备液；精密量取一级贮备液置于量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为二氯乙酸乙酯对照品二级贮备液；精密量取二级贮备液置于容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，获得准确的浓度，作为二氯乙酸乙酯对照品溶液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述系统适用性溶液如下配制：

精密称取氯乙酸乙酯对照品置于量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，作为氯乙酸乙酯贮备液；精密量取氯乙酸乙酯贮备液和二氯乙酸乙酯二级贮备液置于量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，获得准确的浓度，作为系统适用性溶液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述供试品溶液如下配制：

精密称定供试品置于量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度；精密量取上述稀释液置于量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，获得准确的浓度，作为供试品溶液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述气相色谱条件包括：

以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱为色谱柱(例如，DB-FFAP30m×0.32mm×0.5μm)；起始温度120℃，维持2min，然后以6℃/min的速率升温至180℃。进样口温度为200℃；ECD检测器，温度为300℃。载气为氮气，柱流量为1.0ml/min，分流比为50:1。进样方式为直接进样，进样量为0.5μl。分别取供试品溶液和对照品溶液进样，记录色谱图。

在本发明的一个优选实施方案中，所述气相色谱的系统适用性实验如下进行：

配制系统适用性溶液、二氯乙酸乙酯对照品溶液1和二氯乙酸乙酯对照品溶液2(例如，按照下文实施例1中描述的方法进行配制)；其中系统适用性溶液应当满足以下条件：

当用于系统适用性实验时，应当使氯乙酸乙酯峰和二氯乙酸乙酯峰之间的分离度不小于1.5；应当使二氯乙酸乙酯对照品溶液1连续6针峰面积RSD％不得超过10.0％；应当使二氯乙酸乙酯对照品溶液2回收率在90.0％～110.0％之间。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为实施例2中不同稀释溶剂下气相色谱谱图溶剂峰对比；

图2为实施例2中柱温150℃、维持30min下的气相色谱谱图；

图3为实施例2中柱温100℃、维持20min下的气相色谱谱图；

图4为实施例2中柱温120℃、维持7min下的气相色谱谱图；

图5为实施例2中在起始温度120℃下停留2min，以6℃/min升温至180℃条件下的气相色谱谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

精密称取二氯乙酸乙酯100mg，置于100ml量瓶中；用异辛烷溶解并稀释至刻度，作为二氯乙酸乙酯对照品一级贮备液(1mg/ml)；精密量取一级贮备液1ml置于50ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，作为二氯乙酸乙酯对照品二级贮备液(20μg/ml)；精密量取二级贮备液1ml置于10ml容量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，作为二氯乙酸乙酯对照品溶液，溶度为2μg/ml。记为1

以同样的条件，分别采用正己烷和乙醇作为稀释剂，制备二氯乙酸乙酯对照品溶液。分别记为2

精密称取氯乙酸乙酯对照品100mg，置于50ml量瓶中，用异辛烷溶解并稀释至刻度，作为氯乙酸乙酯贮备液；精密量取氯乙酸乙酯贮备液2ml和二氯乙酸乙酯二级贮备液1ml，置于10ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，作为系统适用性溶液(含氯乙酸乙酯400μg/ml、二氯乙酸乙酯2μg/ml)。记为1

以同样的条件，分别采用正己烷和乙醇作为稀释剂，制备系统适用性溶液。分别记为2

精密称定供试品100mg，置于50ml量瓶中，用异辛烷溶解并稀释至刻度；精密量取稀释溶液2ml置于10ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，作为供试品溶液(400μg/ml)。记为1

以同样的条件，分别采用正己烷和乙醇作为稀释剂，制备供试品溶液。分别记为2

气相色谱条件条件：采用DB-FFAP 30m×0.32mm×0.5μm色谱柱，以硝基对苯二酸改性的聚乙二醇作为色谱柱的固定液；采用ECD检测器，检测器温度为300℃；以氮气为载气；进样体积为0.5μl；分流比为50:1；其他进样条件、变量和结果总结于以下各表中。

表1气相色谱进样条件、稀释剂变量和结果

由表1中结果可见，改变稀释剂，对回收率影响不大。但从图1中各稀释剂的溶剂峰情况来看，乙醇为稀释剂溶剂峰很大，而正己烷和异辛烷为稀释剂溶剂峰较小，正己烷或异辛烷均可作为稀释剂，但正己烷具有易挥发特性，因此，选择异辛烷作为稀释剂最优。

如表2中所示，以1

表2气相色谱进样条件、柱流量变量和结果

如表3中所示，以1

表3气相色谱进样条件、升温程序变量和结果

由表3中结果可知，改变升温程序会对回收率产生影响，柱温升高可以使回收率变高，且逐步升温更有助于回收率变高；起始温度在110℃～130℃之间的回收率均在100.0％左右，选择120℃作为起始柱温度较佳。

另外，还考察了升温程序对分离度的改善情况，总结于表4中。

表4升温程序以及对应的分离度情况

由表4以及图2至图5中的结果可以发现，采用逐步升温的升温程序更有利于获得主成分与杂质之间良好的分离度。

为了更具体地考察本发明所提供的分析方法的耐用性和可靠性，按色谱条件，以微小变动流速(1.0ml/min±0.5ml/min)﹑初始柱温(120℃±10℃)、分流比(50±10:1)、同品牌不同序列号色谱柱进行测试，检测结果总结于以下表5至表9中。其中对照品溶液及供试品溶液按照本发明配制。

按色谱条件，表5中各进样测试的流速为1.0ml/min，分流比为50:1，升温程序：起始温度120℃下停留2min；以5℃/min的速率升温至180℃，其他条件同实施例2。

表5多组对照品溶液和供试品溶液进样结果

从表5中可以看出，对照品溶液1是同一份对照品溶液平行进样6次，在该色谱条件下仪器的系统稳定性RSD值为1.7％，在10.0％范围内，证明系统稳定。

对照品溶液2是按照相同的方法配制的另一份对照品溶液，平行进样2次。本发明在该色谱条件下对照品回收率在90％～110％范围内，证明对照品配制准确。

供试品溶液1、2，是每份供试品溶液平行进样2次，此数据是本发明最优选条件下所得二氯乙酸乙酯含量，用于与其他色谱条件做比较。

按色谱条件，表6中各进样测试的条件同表5，不同之处在于改变流速。

表6不同流速下多组对照品和供试品进样结果

从表6中可以看出，对照品溶液1是同一份对照品溶液平行进样6次，在该色谱条件下仪器的系统稳定性RSD值在10.0％范围内，证明系统稳定。

对照品溶液2是按照相同的方法配制的另一份对照品溶液，平行进样2次。本发明在该色谱条件下对照品回收率在90％～110％范围内，证明对照品配制准确。

供试品溶液1、2，是每份供试品溶液平行进样2次。本发明在该色谱条件下的供试品溶液中二氯乙酸乙酯含量与本发明最优选条件下所得数据的RSD值为0.87％，在10.0％范围内，证明本发明在最优选条件下微小变动流速(1.0ml/min±0.5ml/min)是可行的。

按色谱条件，表7中各进样测试的条件同表5，不同之处在于改变起始柱温。

表7不同起始柱温下多组对照品和供试品进样结果

从表7中可以看出，对照品溶液1是同一份对照品溶液平行进样6次，在该色谱条件下仪器的系统稳定性RSD值在10.0％范围内，证明系统稳定。

对照品溶液2是按照相同的方法配制的另一份对照品溶液，平行进样2次。本发明在该色谱条件下对照品回收率在90％～110％范围内，证明对照品配制准确。

供试品溶液1、2，是每份供试品溶液平行进样2次。本发明在该色谱条件下的供试品溶液中二氯乙酸乙酯含量与本发明最优选条件下所得数据的RSD值为1.1％，在10.0％范围内，证明本发明在最优选条件下微小变动初始柱温(120℃±10℃)是可行的。

按色谱条件，表8中各进样测试的条件同表5，不同之处在于改变进样的分流比。

表8不同分流比下多组对照品和供试品进样结果

从表8中可以看出，对照品溶液1是同一份对照品溶液平行进样6次，在该色谱条件下仪器的系统稳定性RSD值在10.0％范围内，证明系统稳定。

对照品溶液2是按照相同的方法配制的另一份对照品溶液，平行进样2次。本发明在该色谱条件下对照品回收率在90％～110％范围内，证明对照品配制准确。

供试品溶液1、2，是每份供试品溶液平行进样2次。本发明在该色谱条件下的供试品溶液中二氯乙酸乙酯含量与本发明最优选条件下所得数据的RSD值为1.8％，在10.0％范围内，证明本发明在最优选条件下微小变动分流比(50±10:1)是可行的。

按色谱条件，表9中各进样测试的条件同表5，不同之处在于色谱柱的不同序列号。

表9同品牌不同序列号色谱柱下多组对照品和供试品进样结果

从表9中可以看出，对照品溶液1是同一份对照品溶液平行进样6次，在该色谱条件下仪器的系统稳定性RSD值在10.0％范围内，证明系统稳定。

对照品溶液2是按照相同的方法配制的另一份对照品溶液，平行进样2次。本发明在该色谱条件下对照品回收率在90％～110％范围内，证明对照品配制准确。

供试品溶液1、2，是每份供试品溶液平行进样2次。本发明在该色谱条件下的供试品溶液中二氯乙酸乙酯含量与本发明最优选条件下所得数据的RSD值为1.1％，在10.0％范围内，证明本发明不同序列号的色谱柱对检测没有影响。

由表5至表9中结果可以发现，当流速、初始柱温、分流比及色谱柱型号发生微调时，对测定结果基本无影响，表明本发明所提供的分析方法在考察范围内耐用性良好，稳定性优异，可靠性高。

在允许的进样浓度范围内，本发明验证了二氯乙酸乙酯的峰面积与浓度的线性关系，其回归方程为y＝611.61x+57.578，R＝0.9994(≥0.995)，可见线性关系良好，线性和范围均符合可接受的范围。

在允许的各种水平下，回收率均保持在90％～110％范围内，并且回收率的RSD值均在在10.0％范围内，可见准确度均符合可接受的范围。