水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体、蛋白质、表达载体及其应用

技术领域

本发明涉及水稻育种技术领域，具体而言，涉及水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体、蛋白质、表达载体及其应用。

背景技术

水稻根系是水稻的重要组成部分，其不但是地上部的物理支撑，同时也是水稻从地下吸收营养成分和水分的重要器官。水稻根系构型为须根系，能不断地从茎节最靠近中柱维管的分生区细胞发生不定根，最后由数量众多的不定根及其侧根构成了它的根系结构。根型由长度、数量和空间范围等几个参数决定，研究发现根长决定了其他根系性状的遗传表现，是所有根系性状中最重要性状，单株产量等7个地上部农艺性状与根长呈极显著正相关。根系伸长的主要细胞学基础之一是根尖分生组织的细胞分裂，根尖分生组织功能或结构的缺陷会导致短根发生。根系的伸长另外一个主要细胞学基础是根尖伸长区细胞的伸长，这与细胞壁形成、纤维素的合成和微管组织形成等相关。尽管根长对植物产量和抗性有重要的作用，但由于根系生长在土壤里加大了研究的难度，使对根系伸长的遗传背景和分子机理所知甚少，使得在水稻育种与栽培上，根长的因素并没有被充分利用。因此，重点挖掘控制水稻根长的基因，分离、克隆一系列控制根长的基因便于定向改良水稻根系性状，如授权公告号为CN104031928B的发明专利，就公开了与水稻根系生长有关的基因OsKASI，该基因OsKASI及编码的蛋白质有些碱基和氨基酸发生突变，水稻根系表现为短根系。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种水稻根系伸长调控基因OsDRP1C，通过其DNA序列中一个或几个碱基对错义突变，能抑制或促进水稻根系的伸长，可以为水稻的根系改良和杂交育种或转基因植物的开发创造条件。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

基因OsDRP1C在调控水稻根系伸长中的应用，为通过其DNA序列中一个或几个碱基对错义突变，调控水稻根系的伸长；

所述基因OsDRP1C在TIGR中的编号为LOC_Os03g50520，含有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

与现有技术相比，本发明通过调控TIGR中的编号为LOC_Os03g50520的基因OsDRP1C，通过其DNA序列中一个或几个碱基对错义突变，抑制或促进水稻主根、不定根、侧根和根毛细胞的伸长，可实现对水稻根系伸长性能的调整。

一种水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体，该水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的核苷酸序列为在SEQ ID NO：1所示的基础上，所述DNA序列2858bp处的碱基发生错义突变，胸腺嘧啶(T)被鸟嘌呤(A)取代。通过诱导基因OsDRP1C的DNA序列的2858位的胸腺嘧啶(T)被鸟嘌呤(A)取代，可使含有基因OsDRP1C的突变体的水稻主根、不定根、侧根和根毛细胞的伸长被抑制，使水稻根部生长缓慢。

一种水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体所编码的蛋白质，所述蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO：2所示的基础上，氨基酸序列的233位酪氨酸(Tyr)突变为终止密码子。该水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体所编码的蛋白质，可使含有该蛋白质的水稻的根系的细胞的伸长被抑制，根部生长缓慢。

一种含有上述水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的表达载体。含有该水稻根系伸长调制基因OsDRP1C的表达载体，可促进或抑制含有该表达载体的水稻的根系的伸长。

所述水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的表达载体在水稻根系性状改良方面的应用。将该表达载体应用在水稻根系性状改良方面，可优化水稻的根系性状。

所述水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体在调控水稻根系性状中的应用。将该稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体应用在调控水稻根系性状中，可使水稻根系表达为短根系。

附图说明

图1为野生型(WT)和Osdrp1c突变体正常水培7天的表型比较图，a为7天苗龄的野生型(WT)和Osdrp1c的突变体的全株照，bar＝2.0cm；b和c分别为WT和Osdrp1c的主根在体视镜下的观测结果，bars＝1.0mm；

图2为野生型(WT)和Osdrp1c突变体正常水培7天的主根树脂切片比较图；

图3为OsDRP1C基因的图位克隆和基因结构图，a为基因OsDRP1C的精细定位结果，RM1350N为定位所用到的SSR标记，In1、In2、In3和In4为新发展的多态标记，OSJNBa0014G15代表BAC克隆，Rec代表重组子；b为基因OsDRP1C的结构和突变位点，内含子用实线表示，非翻译区用空心方框表示，外显子用实心方框表示，箭头指示突变位点；

图4为野生型(WT)、Osdrp1c突变体和两株T

图5为超表达转化载体pCAMBIA1300改的结构示意图。

具体实施方式

下面将结合实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1

本实施例提供了基因OsDRP1C在调控水稻根系伸长中的应用，为通过其DNA序列中一个或几个碱基对错义突变，调控水稻根系的伸长；

所述基因OsDRP1C在TIGR中的编号为LOC_Os03g50520，含有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

与现有技术相比，本发明通过调控TIGR中的编号为LOC_Os03g50520的基因OsDRP1C，通过其DNA序列中一个或几个碱基对错义突变导致根尖分生组织功能或结构的缺陷，抑制或促进水稻主根、不定根、侧根和根毛细胞的伸长，可实现对水稻根系伸长性能的调整。

实施例2

本实施例提供了一种水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体及其所编码的蛋白质，该水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的核苷酸序列为在SEQ ID NO：1所示的基础上，所述DNA序列2858bp处的碱基发生错义突变，胸腺嘧啶(T)被鸟嘌呤(A)取代；所述蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO：2所示的基础上，氨基酸序列的233位酪氨酸(Tyr)突变为终止密码子。

通过诱导基因OsDRP1C的DNA序列的2858位的胸腺嘧啶(T)被鸟嘌呤(A)取代，相应地所编码的蛋白质的氨基酸序列的233位酪氨酸(Tyr)突变为终止密码子，可使含有基因OsDRP1C的突变体或其所编码的蛋白质的水稻主根、不定根、侧根和根毛细胞的伸长被抑制，使水稻根部生长缓慢。

本实施例还提供的水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体在调控水稻根系性状中的应用。将该稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体应用在调控水稻根系性状中，可使水稻根系表达为短根系。

实施例3突变体的表型及遗传分析

从甲基磺酸乙酯诱变的籼稻(Oryza Sativa L.ssp indica)品种Kasalath突变体库中筛选到一个水稻短根系突变体Osdrp1c。7天苗龄的Osdrp1c突变体的根系伸长受到严重抑制，主根、不定根、侧根和根毛都变短(图1)。突变体Osdrp1c细胞伸长受到抑制导致主根长度较野生型明显变短，突变体成熟区与伸长区的细胞较宽但分生区细胞略窄，导致突变体根系变粗但根尖略小(图2)。因此，OsDRP1C基因可通过控制水稻根系细胞的长度与宽度，进一步调控根系的生长发育。以突变体突变体Osdrp1c为父本，与野生型Kasalath杂交，获得子一代F1植株与野生型Kasalath完全一致，说明Osdrp1c为隐性突变。F1代自花授粉所得的F2中，正常植株与短根植株的分离比为379/131＝2.89，卡方检测结果为0.13<χ

实施例4OsDRP1C基因的定位

从突变体Osdrp1c和Nipponbare的杂交后代F2中分离出短根突变个体，利用基因图位克隆法(Map-based Cloning)对突变基因进行定位。初定位(30个F2突变个体)将突变基因定位在第3染色体SSR标记为RM1350N和RM5813N之间。之后，扩大定位群体，并在该区间内发展了4对有多态的新的InDel分子标记，分别命名为In1，In2，In3和In4，序列如下：

In1U-5’ACCTCCTCCTCCGCCAGCTCC 3’

In1L-5’AAATCTCCTCGCCCTTCTTCCC 3’

In2U-5’TGCCCACTGATTAGCCGTAG 3’

In2L-5’GGATAGAGATGCCCATAGATTTG 3’

In3U-5’GCGGTGTTTATCAGATTGGT 3’

In3L-5’TAAATAGATACTCCATCGGCTTA 3’

In4U-5’CGCCAATGGTGTGTAGGAGGA 3’

In4L-5’CCGTTATGCCGTCCACAGATG 3’

最终将基因锁定在InDel标记为In2和In3(第3染色体上具体物理位置分别为28821343bp和28952920bp)之间，重组子分别为3/1112和3/1112，且重组的号码不同。该区间有131.2kb大小(图3)。

实施例5基因预测和序列分析

根据精细定位的结果，OsDRP1C基因位于BAC克隆OSJNBa0014G15上(图3)。根据TIGR(http://www.tigr.org/tdb/e2k1/osa1/)的水稻基因注释信息，对定位的染色体区段内基因预测分析，该区间共有19个预测的基因，用Kasalath野生型和Osdrp1c突变体DNA模板对候选的19个基因进行扩增，扩增产物分别测序，测序结果进行比对分析，发现基因号为LOC_Os03g50520(Dynamin相关蛋白)基因的DNA序列的2858bp的胸腺嘧啶(T)被鸟嘌呤(A)取代，从而导致编码的氨基酸序列的233位酪氨酸(Tyr)突变为终止密码子，命名该基因为OsDRP1C。

实施例6OsDRP1C功能互补实验

根据OsDRP1C基因的CDS序列信息，设计扩增完整CDS的引物，引物序列如下(加下划线的为酶切位点)：

OsDRP1C-CDSU：5’TGAGCCGGAGACTACAGCGAC 3’

OsDRP1C-CDSL：5’AACCGATCATTTCCACGCGAC 3’；

OsDRP1C-OVU：5’AAAGAGCTCCTTTGCCCGAGATGGCGACGA3’

OsDRP1C-OVL：5’AAATCTAGAAACCGATCATTTCCACGCGAC3’；

采用上海生工RNA提取试剂盒(SK1321)提取水稻kasalash叶片总RNA，以Oligo(dt)-18为引物，以所提取的总RNA为模板进行反转录合成第一链cDNA。以此cDNA为模板，OsDRP1C-CDSU与OsDRP1C-CDSL为引物，利用PrimeSTAR HS DNA Polymerase扩增全长ORF，PCR条件：98℃预变性10s，然后进入循环反应(98℃10s，58℃10s，72℃，2min)，循环数为30，最后再延伸10min结束。琼脂糖电泳割胶回收PCR产物，纯化并连接到pEASY-Blunt SimpleCloning Vector载体。连接产物热击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，37℃培养16h后挑阳性单克隆测序，测序鉴定序列无误后，以此重组载体为模板，OsDRP1C-OVU与OsDRP1C-OVL为引物，利用PrimeSTAR HS DNA Polymerase扩增全长ORF，PCR条件：98℃预变性10s，然后进入循环反应(98℃10s，58℃10s，72℃，2min)，循环数为30，最后再延伸10min结束。琼脂糖电泳割胶回收PCR产物，再用SacI和XbaI在37℃双酶切过夜，连入经同样双酶切的pCAMBIA1300改(35S)载体中(图5)，命名为35S-OsDRP1COVER。连接产物以相同的方法热击转化大肠杆菌DH5α感受态，涂布在含有kan抗性的LB平板培养16h后挑取单克隆，摇菌抽提质粒双酶切并通过琼脂糖胶检测正确后电击转化农杆菌EHA105。

酶切检测正确的质粒通过农杆菌株系EHA105介导的水稻遗传转化体系导入到突变体Osdrp1c中，经过侵染、共培养、筛选具有潮霉素抗性的愈伤、分化、生根、练苗移栽，得到转基因植株。农杆菌(EHA105)介导的水稻遗传转化体系主要应用Hiei等人(1994)报道的方法基础上进行优化。该转基因植株中分离的Osdrp1c突变体的根系长度恢复成野生型(图4)，说明Osdrp1c的表型确实是有OsDRP1C突变引起的。

虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员，在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。

序列表

<110> 宁波大学科学技术学院

<120> 水稻根系伸长调控基因OsDRP1C的突变体、蛋白质、表达载体及其应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5948

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ggtactaaaa aaaatttttc cttcgatttc tctcgcctcc gcttctccac tctccggtag 60

atcccaccct ccaccgccgc cgccgccgcc gtgctccggt gagccgccgg tgagccggag 120

actacagcga cgtcgcgcag agccgttggg cgggtaggcg gttgggggct ttgcccgaga 180

tggcgacgat ggggagcctg atcgggctgg tgaaccggat ccagcgggcg tgcaccgtcc 240

tcggcgacca cgggggcggc ggcgaggggg gttccctctg ggaggcgctg ccctccgtcg 300

ccgtcgtcgg aggccaggta cgcgtgctcg ccaccaccct gcgtacctac ctctcagatc 360

caaagccatg gcggccagat ctggatatgg cgctcacccc ccttcggttt gcgtttgtga 420

tgcatccaga gttccgggaa gtcgtcggtg ctcgagagca tagtggggag ggacttcctg 480

cctcgtggat ccggtaatgc cgacgctgga tcgctcgttt ttttttcttt tttcgcgcgc 540

catttcgtct ggatcggctt ggtttgcgag ggattaatgc gcattctctc ggtttgatta 600

ggaatcgtga cgaggaggcc tcttgtgctg cagctgcaca agacggaggg tgggcaggag 660

tacgccgagt tcctccacgc cccgcggaag cgtttcactg actttggtaa gggatcattg 720

ccatatttgt gctttgcagt ccagcaggtt gatttgtgta ttcaatttca tttattagag 780

ttagtgttgt gcaaacttca aagttgtctt aattccaacg agtagacttt tccacgagag 840

atcagcaagg aggatgatac cgctttccct ggttatagtt tacttcactg aagtttgcct 900

atcaacctaa aaacaagaac atatacaatt agcatccaca cattgctata tgcagtgtga 960

actaaggaac taatgacgtt taggagtaga tctcacaagt cacaatcact gtaggatact 1020

agtgagtatc tgagcaaagt tatttcccgg ttcattacta gtgtcctaac atagctattg 1080

caagagatgt tcagttgaaa tatttaaatt ctttgtataa ttgcagctgc tgttaggaaa 1140

gagattgctg atgaaaccga tcgcattact ggaaaaacga aagctatatc aaatattccc 1200

atccatttga gtatatattc tccacatggt aagtcttgat gcttgttttg aacttttggt 1260

atgtgatgtg tactatgaat gtttcattca aacagaacct gcttcgctga ctcgctctca 1320

gctcccccaa atgcctgtaa actttaaatt gtatgttgtg gatgaaattt gggatcaata 1380

ggatgtagac tgataatttc tactattact tttacatttt taaatttgga ttcctttcag 1440

gatttatccc ttataattct tcaaaacttg agagctggca tatgtttcct ttaaaaaaaa 1500

tgtatatttg ctctgctctc cacctgttct tagttctgat gttggtctaa acccctccat 1560

tgtggtcctt tcagactaat cacaccaaac tgtatgaggc atctctgcag atttatatta 1620

gcacttcaaa atttcatgtt tgatattaat aatcgaccct gctttatatg caacaaaatt 1680

aagcatcaaa atattgacta tagaaacaat tcaaaaggtg tacataaaag gaatcattct 1740

ggaaatctat ttcttaaccc tgaggaacaa ataatcatat tatgataatt tgaaagtagt 1800

tacattgtgc ttgtgctgca gcatatgacc tgttatatag agacgttttg tgctcagcag 1860

atcctagtcc ttgtcataaa ttttttcact aatgtaattt tgcacccatt ttcttgcagt 1920

tgtaaacctg acacttattg atcttcctgg attgacgaag gttgctgtag gtatgttttc 1980

ttggatgctt ctagttttct atgcgtactc tttttatgtg attgtttgtg acacgaactt 2040

tttattaaca gaggggcaac aagaatctat tgtccaagat attgaaaaca tggttcggtc 2100

ttatgttgat aaggtaaaag aagtctgttg catgccatta gtgccatgtt tattttagct 2160

ccatgtgcta cattcactta atgagtactg tccaccctgc catatcaatt ctaagcttta 2220

ctattgttct tgtccaatgt ttatttgtgg tgacagtttt tttttctggg gtgggtagtg 2280

ggtactacga gtcaagtcta gaaacattat tcttttgttc tctggcctgt cttatggtca 2340

tgctaatata acttaatgta tttctatatg ctgcaaattc tgcttggtca tgttctgatt 2400

aaaactgttc atttttgttc ctacatttgt tctttttgga aacttcagcc aaattctatc 2460

atactggcca tatctccagc taatcaagat atagcaacat cagatgctat caagcttgct 2520

agggatgttg atccttcagg tacattttat attttcttca ctgtggcatt tcaaatattt 2580

ctcacatatg acaataattt tatgcatatt ttattttatt gccatacagc agtattgcag 2640

tgatctgtct tgttccattc ttatctgttg acaatttatt tcataatatt tttaggtgac 2700

agaacctttg gagtgttgac aaagcttgat ttgatggata agggtaccaa tgctgttgat 2760

gtatgtgact tgtcattttt tcttaactct tgtacgctat ggacacagca ctcattttca 2820

acgccatgta atcctaggta cttgaaggga ggcagtatcg tttgcaacac ccctgggtgg 2880

gaattgtcaa ccggtcacaa gctgatatca acaggaatgt cgacatgcta gcagcaagac 2940

gcaaagaaaa ggagtacttt gaaagtagcc cagattatgg tcacttggca cataaaatgg 3000

gtgcagagta ccttgctaag cttctgtctc aggtcagggc attttgctat tgtggtgtac 3060

tttccctctc cccaaaaaat aactggattg aaaaggctga ctgctgatac acttctattt 3120

acacattcag cacttagagg ctgtgatcag agcaaaaatt ccaagtatta tagccatgat 3180

taacaaaaca attgatgaaa ttgaagctga gttggatcgc cttggtaggc caattggagg 3240

tgatgctggg gtaagaaaaa ccgtactttg cttgttgtaa ctttctgcaa gtgttcaggt 3300

tcatgttgtt cgtgccacaa cctgcaacat tcatttgaat ggcaccctag cacattatct 3360

attcccaaac catgtctaca tcatgctgtc tcataaactt atcataatct acaggcacaa 3420

ctgtacacaa tattggacat gtgtcgtgcg tttgaccgag tttttaaaga gcacctagat 3480

ggcgggtaag atattttatt aggccctttt cttgagtgct gttgcttttt atgccatata 3540

tattgataaa tagtatccca tagatgaatg gcaaagaatc tacaggcatg ttaataacac 3600

tcaattattt tttgttctct tagtcggcca ggtggagatc gtatttatgg tgtctttgac 3660

caccaattac cagcagcact gaaaaagctt ccatttgata agcatctttc attgcaaaat 3720

gttcggaaag tcatttcaga ggctgatggt tatcaacccc acttgattgc ccctgagcaa 3780

gggtacagaa ggcttataga tagttcgctc cactacttca ggggtccagc ggaagcttca 3840

gttgatgcgg tatacttctc atcaatagat cttctttagg cacttttaat ttaattatta 3900

agcaagtagg atcctgttcc aatgactgat atatagactt acataaacta gccttttctt 3960

atccaatata tacattttcc ccctgtgttg aacaactaaa acatcatatg agaagattgc 4020

agaaccatga cgagcttctt gtcaaagtag tgaatataag agtgcttaag ttcatcaagt 4080

gctcaattgc ggaaagagag ggatactata gatttaattg gaatgtacca tttgtttatt 4140

caacaaagga aggcatttga ttccagtgct tttgggggca ttttcatatg tcaagccata 4200

ttgcactacg tctgttttgt tcactacatc tggttgatta tgttctcgta tctgctaggt 4260

tcatttggtc ttgaaggaac ttgttcgtag atcgattgca gcaacagagg tttgtgttga 4320

ttttcaattc tcagtgaacc tcagtagata ttactgatca ctcaatgaca ctcctgcatt 4380

gactgtttac attggttatc ttggatgcca caggagttga agcgtttccc aacacttcag 4440

acagatatag ctgctgcagc aaatgaaagc ctggaaagat ttcgtgagga tggtcgaaag 4500

acagttattc gtcttgttga gatggaggcc agctacctaa ctgtagaatt tttcagaaaa 4560

ctccctacag aaccagataa gggggctaat aataacactc cagccaatga cagatatcag 4620

gacaaccatt taagaagaat cggtaacaat tcaacattct attttgtttc tttaatggca 4680

attgattgag tcaactgttc taagacctca acacagaggt cacacgaagt acttaacaaa 4740

ctgacttaat aagcagaatc taagatgtaa catagggtac tagtgccatt cacgttctgc 4800

tgagtgctga cactagcaaa catgtcaaga tatgaccata tgtgaatttc gatgacaaca 4860

attatgcgaa ctaatttttt aaatcgacaa agtatattca tgacatcatc attgttttat 4920

tcagggtcaa atgtatcatc ttacattaac atggtttgtg agacattgag gaacaccatt 4980

ccaaaagctg tggtgcactg tcaagtgaag gaggcaaaaa gaaacttgct taaccgtttc 5040

tatgctcatg tgggaagcaa ggaggtatgt tttatactac cttagttcaa aactaaaaaa 5100

agataacgtg tttcatagtg attagaaagt tggctcataa ttaatatcga gtaaattgca 5160

ctctacttca aaatattaac catccatttc aaaatatatg tacactgtat ttgtggctaa 5220

atgaaaattt tcttgtttta tccttgtgtc gcattgattt gcacatttat attaacttgg 5280

acaccatttg ctttttattt ccataacgca gaagaaacag ctcagcgcga tgttggatga 5340

ggatcccgct ttgatggaga agagggattc cttagtcaag aggctagagc tgtacaaatc 5400

tgcccggaac gagatcgact cagtcgcgtg gaaatgatcg gttagcgaag tcacagctgg 5460

aagagataga catacatctg cgacacacag atcattgccg tagaatgctc taattccatt 5520

tacgtctgga ttcacatgga gatccgtaca ctattctttc tttctttttt ctttcatgcg 5580

agtgtccttt ctaccttgtc agacaagtat atttccttgg ccatcttggc ctttttgtat 5640

gatgttgatg atgatgagct ggtcctccgg gatcacactg atatgaatgc agatatatat 5700

attctttgtt gatttagcac ctccactgat atatcatgag agattttaga tgccttgttg 5760

ccaactgaaa ggatccgcat tcttggtaga gctacatttt ttgctaatgg aggcggctct 5820

tgaagtcgtc ccatggaaga tccttctcca ggtactcgat gttggtggga ttgaacgggc 5880

ccctcaccac gtccaccgtc tgtatgatcg ccctctccgg cagcacgctc atcgctggat 5940

ccgccgcc 5948

<210> 2

<211> 611

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Ala Thr Met Gly Ser Leu Ile Gly Leu Val Ala Ala Ile Gly Ala

1 5 10 15

Ala Cys Thr Val Leu Gly Ala His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser

20 25 30

Leu Thr Gly Ala Leu Pro Ser Val Ala Val Val Gly Gly Gly Ser Ser

35 40 45

Gly Leu Ser Ser Val Leu Gly Ser Ile Val Gly Ala Ala Pro Leu Pro

50 55 60

Ala Gly Ser Gly Ile Val Thr Ala Ala Pro Leu Val Leu Gly Leu His

65 70 75 80

Leu Thr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Ala Gly Pro Leu His Ala Pro Ala

85 90 95

Leu Ala Pro Thr Ala Pro Ala Ala Val Ala Leu Gly Ile Ala Ala Gly

100 105 110

Thr Ala Ala Ile Thr Gly Leu Thr Leu Ala Ile Ser Ala Ile Pro Ile

115 120 125

His Leu Ser Ile Thr Ser Pro His Val Val Ala Leu Thr Leu Ile Ala

130 135 140

Leu Pro Gly Leu Thr Leu Val Ala Val Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ile

145 150 155 160

Val Gly Ala Ile Gly Ala Met Val Ala Ser Thr Val Ala Leu Pro Ala

165 170 175

Ser Ile Ile Leu Ala Ile Ser Pro Ala Ala Gly Ala Ile Ala Thr Ser

180 185 190

Ala Ala Ile Leu Leu Ala Ala Ala Val Ala Pro Ser Gly Ala Ala Thr

195 200 205

Pro Gly Val Leu Thr Leu Leu Ala Leu Met Ala Leu Gly Thr Ala Ala

210 215 220

Val Ala Val Leu Gly Gly Ala Gly Thr Ala Leu Gly His Pro Thr Val

225 230 235 240

Gly Ile Val Ala Ala Ser Gly Ala Ala Ile Ala Ala Ala Val Ala Met

245 250 255

Leu Ala Ala Ala Ala Leu Gly Leu Gly Thr Pro Gly Ser Ser Pro Ala

260 265 270

Thr Gly His Leu Ala His Leu Met Gly Ala Gly Thr Leu Ala Leu Leu

275 280 285

Leu Ser Gly His Leu Gly Ala Val Ile Ala Ala Leu Ile Pro Ser Ile

290 295 300

Ile Ala Met Ile Ala Leu Thr Ile Ala Gly Ile Gly Ala Gly Leu Ala

305 310 315 320

Ala Leu Gly Ala Pro Ile Gly Gly Ala Ala Gly Ala Gly Leu Thr Thr

325 330 335

Ile Leu Ala Met Cys Ala Ala Pro Ala Ala Val Pro Leu Gly His Leu

340 345 350

Ala Gly Gly Ala Pro Gly Gly Ala Ala Ile Thr Gly Val Pro Ala His

355 360 365

Gly Leu Pro Ala Ala Leu Leu Leu Leu Pro Pro Ala Leu His Leu Ser

370 375 380

Leu Gly Ala Val Ala Leu Val Ile Ser Gly Ala Ala Gly Thr Gly Pro

385 390 395 400

His Leu Ile Ala Pro Gly Gly Gly Thr Ala Ala Leu Ile Ala Ser Ser

405 410 415

Leu His Thr Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Ser Val Ala Ala Val His

420 425 430

Leu Val Leu Leu Gly Leu Val Ala Ala Ser Ile Ala Ala Thr Gly Gly

435 440 445

Leu Leu Ala Pro Pro Thr Leu Gly Thr Ala Ile Ala Ala Ala Ala Ala

450 455 460

Gly Ser Leu Gly Ala Pro Ala Gly Ala Gly Ala Leu Thr Val Ile Ala

465 470 475 480

Leu Val Gly Met Gly Ala Ser Thr Leu Thr Val Gly Pro Pro Ala Leu

485 490 495

Leu Pro Thr Gly Pro Ala Leu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Pro Ala Ala

500 505 510

Ala Ala Thr Gly Ala Ala His Leu Ala Ala Ile Gly Ser Ala Val Ser

515 520 525

Ser Thr Ile Ala Met Val Cys Gly Thr Leu Ala Ala Thr Ile Pro Leu

530 535 540

Ala Val Val His Cys Gly Val Leu Gly Ala Leu Ala Ala Leu Leu Ala

545 550 555 560

Ala Pro Thr Ala His Val Gly Ser Leu Gly Leu Leu Gly Leu Ser Ala

565 570 575

Met Leu Ala Gly Ala Pro Ala Leu Met Gly Leu Ala Ala Ser Leu Val

580 585 590

Leu Ala Leu Gly Leu Thr Leu Ser Ala Ala Ala Gly Ile Ala Ser Val

595 600 605

Ala Thr Leu

610