一株杀香鱼假单胞菌flgC基因沉默菌株及其构建与应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株杀香鱼假单胞菌

背景技术

杀香鱼假单胞菌（

鞭毛是致病细菌的基本组成部分，在对宿主的致病过程中发挥重要作用。例如，鞭毛通过促进粘附、入侵、趋化和细菌生物膜的形成促进侵入宿主的过程。此外，鞭毛还通过特殊的III型分泌系统将毒力蛋白转入宿主细胞，并通过Toll样受体5（TLR5）信号途径刺激宿主的促炎症反应，增强细菌的致病性。

鞭毛的合成和组装是一个有序的级联过程，需要50多个基因的合作和协调。

本发明通过基因沉默技术构建了一株杀香鱼假单胞菌

发明内容

本发明的主要目的是提供一株杀香鱼假单胞菌

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一株杀香鱼假单胞菌

一种构建上述的杀香鱼假单胞菌

S1：使用比较转录组学技术分析杀香鱼假单胞菌在斜带石斑鱼脾脏内的基因表达情况，发现

S2：针对

S3：用5

S4：利用dual RNA-seq技术分别对杀香鱼假单胞菌

通过基因测序和比对，本发明提供的菌株为一株杀香鱼假单胞菌

上述的杀香鱼假单胞菌

上述的杀香鱼假单胞菌

本发明的显著优点在于：

与野生型菌株相比，杀香鱼假单胞菌

附图说明

图1：野生型菌株和

图2：

图3：基于DESeq2分析

图4：与DEMs的GO富集分析。

图5：DEMs的KEGG通路富集分析与Toll样受体信号通路分析。（A）：DEMs的KEGG通路富集分析。(B)：Toll样受体信号通路分析。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

本发明实施例提供的杀香鱼假单胞菌

S1：使用比较转录组学技术分析杀香鱼假单胞菌（分离自福建宁德患内脏白点病的大黄鱼脾脏）在斜带石斑鱼脾脏内的基因表达情况，发现

S2：使用Thermo-fisher Scientific 公司在线shRNA设计工具针对

4对shRNA引物序列如下：

引物1：

C1F:5'-TGCAGTTTCGAGACGGCTATCGTTCAAGAGACGATAGCCGTCTCGAAACTGCTTTTTTT-3'，

C1R:5'-GTACAAAAAAAGCAGTTTCGAGACGGCTATCGTCTCTTGAACGATAGCCGTCTCGAAACTGCATGCA-3'；

引物2：

C2F:5'-TGGCTATCGAGGTGCTCAATCGTTCAAGAGACGATTGAGCACCTCGATAGCCTTTTTTT-3'，

C2R:5'-GTACAAAAAAAGGCTATCGAGGTGCTCAATCGTCTCTTGAACGATTGAGCACCTCGATAGCCATGCA-3'；

引物3：

C3F:5'-TGGCCAGCAACCTGGCCAATATTTCAAGAGAATATTGGCCAGGTTGCTGGCCTTTTTTT-3'，

C3R:5'-GTACAAAAAAAGGCCAGCAACCTGGCCAATATTCTCTTGAAATATTGGCCAGGTTGCTGGCCATGCA-3'；

引物4：

C4F:5'-TGCCAATATTGATTCGGCAGCCTTCAAGAGAGGCTGCCGAATCAATATTGGCTTTTTTT-3'，

C4R:5'-GTACAAAAAAAGCCAATATTGATTCGGCAGCCTCTCTTGAAGGCTGCCGAATCAATATTGGCATGCA-3'。

将上述的杀香鱼假单胞菌

S3：开展野生株与

如图1B所示，杀香鱼假单胞菌野生菌株与

S4：分别使用

注射10天后，对野生型菌株组、

S5：利用RNA-seq技术对

RNA-seq分析结果显示，在mRNA水平上，根据统计标准 （|log2 fold change| ≥1, padj ≤ 0.05），在感染第4天，斜带石斑鱼中共鉴定出35320个差异表达基因。与感染野生型菌株相比，感染

利用比较转录组的结果进行GO和KEGG富集分析，确定DEMs的生物学功能，分析病原菌在感染过程中转录组的变化。在图5B中，Toll样受体信号通路基因的表达在

上述结果说明，杀香鱼假单胞菌

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。