一种用于PD1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类小分子抑制剂及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种用于PD1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类小分子抑制剂及其应用。

背景技术

免疫检查点抑制剂的临床成功不仅延长了晚期肿瘤患者的生存期，而且证明了免疫系统在对抗恶性细胞中起着关键作用，肿瘤可以通过刺激免疫抑制机制逃避免疫系统。程序性死亡1(PD-1)是目前研究最多、发展最快的免疫检查点抑制剂。它有两个配体，程序性死亡配体1(PD-L1)和PD-L2。PD-L1/L2在抗原呈递细胞中表达，PD-L1在多种组织中表达。PD-1和PD-L1的结合介导T细胞活化的共同抑制信号，抑制T细胞的杀伤功能，并对人体免疫应答起负调节作用。PD-L1在肿瘤组织中高表达，具有调节肿瘤浸润CD8+T细胞的功能，从而阻止肿瘤细胞被免疫系统杀死。因此，针对PD-1/PD-L1的免疫调节对抗肿瘤具有重要意义。在过去的十年中，一些抗体在许多肿瘤治疗中得到了迅速发展。人们越来越担心某些抗体的不利条件。例如，它对大多数实体瘤的有效率仍然只有20％至50％，加上成本高、患者耐受性差以及缺乏口服生物利用度，进一步限制了抗肿瘤药物的进一步应用。

近年来，数十种小分子阻断PD-1/PD-L1抑制剂已经被报道，其中大多数仍处于临床前研究阶段。根据作用机理主要分为三类:(1)作为直接竞争性PD-1/PD-L1调节剂的肽；(2)破坏PD-1/PD-L1相互作用并诱导PD-L1二聚化的小分子；(3)作用方式未知的小分子。因此，寻找PD-1/PD-L1的小分子抑制剂对肿瘤免疫治疗至关重要。

发明内容

本发明的旨在解决上述问题，提供了一种用于PD1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类小分子抑制剂，具有良好的生物活性，同时也是PD1/PD-L1靶点抑制剂的新型骨架。本发明是通过对免疫检查点PD-1的配体PD-L1及其抑制剂的研究，揭示PD-L1二聚体蛋白与其抑制剂的结合模式和其重要的氨基酸残基。在此基础上，从二聚体蛋白的结构出发，通过对PD-L1二聚体蛋白的结构分析，利用分子对接、分子动力学模拟及结合能计算预测等手段挑选出一系列小分子，并对其进行体外生物活性实验验证，得到对PD-L1二聚体蛋白具有抑制活性的全新骨架化合物分子。本发明提出的作为小分子抑制剂的联苯甲基苯基类化合物，具有多个可修饰的化学位点，可作为PD1/PD-L1靶点的先导化合物，具有广泛应用前景。

本发明提出了一种PD-1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类小分子抑制剂，其包括式(A)所示的化合物：

其中，

R

R

R

R

R

R

R

优选地，

R

R

R

R

R

R

R

在具体实施方案中，

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

优选地，所述的R

本发明还提供了式(A)所示化合物在作为PD-1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类小分子抑制剂中的应用。

本发明还提供了所述抑制剂在制备抗肿瘤药物、降低肿瘤耐药和/或复发的药物中的应用。

其中，所述抑制剂用于抑制PD1/PD-L1的表达。

T细胞可以杀灭癌细胞，而有些狡猾的肿瘤细胞为了逃脱追杀，在自身表面伪装表达PD-1的配体PD-L1去迷惑T细胞。当肿瘤细胞表面的PD-L1与T细胞表面的PD-1结合，就诱导T细胞分解凋亡。肿瘤细胞从而能够躲避T细胞的杀伤而继续生长繁殖。而本发明提出式(A)所示化合物可以抑制PD/PD-L1的结合，从而抑制肿瘤免疫。

因PD-1抑制剂不是针对某一具体的肿瘤靶点，而是依据生物标志物，抗癌效果更加的广谱。因此从理论而言，本发明所述的抑制剂可以应用市面上的所有肿瘤类型。

本发明的实质创新及有益效果在于，提供了一种用于PD1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类小分子抑制剂，具有良好的生物活性(该生物活性指代的是IC50值)，同时也是PD1/PD-L1靶点抑制剂的新型骨架。本发明提出的作为小分子抑制剂的联苯甲基苯基类化合物，具有多个可修饰的化学位点，可作为PD1/PD-L1靶点的先导化合物，具有广泛应用前景。

具体实施方式

结合以下具体实施例，对发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。

本发明作为PD-1/PD-L1靶点的抑制剂其化学结构包括如下：

其中，R

R

R

R

R

R

R

实施例1

以下实施例使用的材料来源如下：

试剂盒：PD1/PD-L1BINDINGASSAYKITS(pd1/pd-l1结合试剂盒)

筛选样品：

实验步骤：

本发明采用均匀时间分辨荧光(HTRF)法评价式A’所示的化合物对PD-1/PD-L1相互作用的抑制效果。该技术具有灵敏度高、准确度高、假阳性率低等优点。该技术基于荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)原理。PD-1/PD-L1结合分析试剂盒(64ICP01PEG)购自Cisbio。实验程序严格按照试剂盒供应商的实验手册进行。具体步骤如下：

解冻Tag1-PD-L1蛋白溶液，在稀释剂中配制工作溶液。稀释液的最终浓度是结合分析所需浓度的5倍。例如，配制25NMTag1-Pd-L1工作液，最终浓度为5nM的Tag1-Pd-L1(最终体积为20μL)。

解冻Tag2-PD-1蛋白溶液，在稀释剂中配制工作溶液。稀释液的最终浓度是结合分析所需浓度的5倍。例如，配制250nmTag2-PD-1工作液，最终浓度为50nmTag2-PD1(最终体积为20μL)

Tag1-PD-L1和Tag2-PD-1不能反复冻融，必须预先分装，两者不能预先混合，必须再在单独的小瓶准备溶液。

解冻抗Tag1-Eu

在386孔板中每个孔加入2μL本发明式A’所示的化合物，4μL的前述Tag1-PD-L1蛋白溶液和4μL的Tag2-PD-1蛋白溶液。在室温下孵化15分钟。

然后加入10μL预混合的前述抗Tag1-Eu

封板，室温孵育2小时。

卸下密封，采用兼容HTRFr的酶标仪检测信号。

最终体积为20μL的抑制性测定的标准规程(单位μL)如下表1所示：

表1

本发明用Europium标记的抗Tag1(HTRF供体)和XL665标记的抗Tag2(HTRF受体)检测PD-L1与PD-1的相互作用。当PD-L1和PD-1结合时，在337nm的激发波长下，供体抗体在620nm处的发射波长触发了对受体抗体的荧光共振能量转移(FRET)，受体抗体在665nm处的发射。这种特定的信号与PD-1/PD-L1相互作用的程度成正比。因此，如果该化合物能抑制PD-1/PD-L1的相互作用，将导致HTRF信号值的降低。本发明化合物的最终实验结果如下表2所示：

表2

其中，用于PD1/PD-L1靶点的联苯甲基苯基类化合物，当R

本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。