用于关节稳定性的β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)的组合物和使用方法

本申请是2017年1月13日提交的题为“用于关节稳定性的β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)的组合物和使用方法”的中国专利申请201780013440.2的分案申请。

发明背景

本申请要求于2016年1月13日提交的美国临时专利申请第62/278,252号的优先权，并且通过引用将临时申请并入本文。

1.领域

本发明涉及包含β-羟基-β-甲基丁酸(β-hydroxy-β-methylbutyrate(HMB))的组合物和使用HMB来减少关节不稳定性、增加关节稳定性和提高平衡运动的方法。

2.背景

随着动物变老，它们的身体状况发生变化，围绕关节提供关节稳定性的肌肉骨骼系统可能减弱。关节不稳定性可导致运动范围和灵活性的降低以及炎症和疼痛的增加。结果是活动减少，不能进行日常任务如爬楼梯。

对关节不稳定性的阻力是通过围绕关节的健康的腱、韧带、筋膜和肌肉组织来实现的，并且可以是维持无痛运动范围和灵活性的重要决定因素。

神经肌肉系统由神经肌肉接头组成，并负责协调的和有力的肌肉收缩。这些系统一起在肌肉运动期间提供平衡运动和骨骼关节稳定性。靶向的营养疗法可能能够帮助维持这种平衡，从而维持老年动物(包括但不限于人类和伴侣动物)的活动和生活质量。包含施用如下所述的HMB的营养方案提高平衡运动、降低关节僵硬、有助于维持健康关节、并提高关节稳定性，导致活动增加和生活质量提高。

HMB

α-酮异己酸(KIC)是亮氨酸的第一主要和活性代谢物。KIC代谢的次要产物是β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)。已经发现HMB在各种应用的情况下是有用的。具体而言，在美国专利第5,360,613号(Nissen)中，HMB被描述为可用于降低总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的血液水平。在美国专利第5,348,979号(Nissen等人)中，HMB被描述为用于促进人体氮存留。美国专利第5,028,440号(Nissen)讨论了HMB增加动物瘦肉组织发育的有用性。而且，在美国专利第4,992,470号(Nissen)中，HMB被描述为有效增强哺乳动物的免疫应答。美国专利第6,031,000号(Nissen等人)描述了HMB和至少一种氨基酸用于治疗疾病相关的萎缩(wasting)的用途。

HMB用于抑制蛋白质水解的用途起源于亮氨酸具有节约蛋白质特征的观察。必需氨基酸亮氨酸既可用于蛋白质合成，也可转氨基成α-酮酸(α-酮异己酸盐，KIC)。在一种途径中，KIC可被氧化成HMB，并且这占亮氨酸氧化的约5％。HMB在增强肌肉质量和力量方面优于亮氨酸。当HMB以钙盐3.0g每天给予或以0.038g/kg体重每天给予时，可达到HMB的最佳效果，而亮氨酸的最佳效果需要超过30.0g每天。

一旦产生或摄入，HMB似乎有两个命运。第一个命运是通过尿液的简单排泄。喂食HMB后，其在尿液中浓度增加，导致约20-50％HMB损失于尿液。另一个命运涉及HMB激活为HMB-CoA。一旦转化为HMB-CoA，可发生进一步的代谢，HMB-CoA脱水为MC-CoA，或HMB-CoA直接转化为HMG-CoA，HMG-CoA为细胞内胆固醇合成提供底物。一些研究已经表明，HMB被掺入胆固醇合成途径中，并且可成为用于受损细胞膜再生的新细胞膜的来源。人类研究已经表明，通过在最初的48小时内补充HMB减少激烈运动后的肌肉受损(通过升高的血浆CPK(肌酸磷酸激酶)测量)。持续日常使用，HMB的保护作用持续长达三周。大量研究已经表明，HMB的有效剂量为3.0克每天的CaHMB(HMB钙)(～38mg/kg体重/天)。该剂量联合阻力训练使肌肉质量和力量增加，同时最小化与剧烈运动相关的肌肉受损。HMB已经过安全性测试，显示对健康的年轻人或老年人没有副作用。当补充给艾滋病和癌症患者时，HMB与L-精氨酸和L-谷氨酰胺的组合也被证明是安全的。

最近，开发了HMB的新的递送形式HMB游离酸。这种新的递送形式已被证明比CaHMB更快吸收并具有更大的组织清除。这种新的递送形式描述于美国专利公开系列第20120053240号中，其通过引用整体并入本文。

目前的证据表明，HMB通过高强度或长时间运动后加速骨骼肌的再生能力起作用。当训练和/或饮食被控制时，HMB可以剂量依赖性方式降低骨骼肌受损和蛋白质分解指数。最近，已开发了具有提高的生物利用度的游离酸形式的HMB(HMB-FA)。最初的研究表明，与目前可得的形式的HMB钙相比，这种形式的HMB补充在施用后约四分之一的时间内引起大约两倍的HMB血浆水平。此外，在急性大剂量阻力训练前30分钟给予HMB-FA能够减弱肌肉受损指数并提高阻力训练运动员的感知恢复(61)。此外，急性摄入2.4克HMB-FA分别使骨骼肌蛋白质合成增加+70％，并使蛋白质分解降低-56％。

HMB对肌肉的影响已有详细记载。已知HMB补充导致肌肉质量和力量增加，并且可导致有氧提高。本发明包含HMB的组合物和使用HMB导致降低关节不稳定性、增加关节稳定性、提高平衡运动和提高肌肉运动期间骨骼关节稳定性的方法。

关节问题可能对生活质量有显著影响。如果关节变得不稳定，关节可能最终改变形状并且可能发展成畸形。炎症和疼痛也是不稳定关节的结果。肌肉、腱、韧带和软骨一起作用以确保关节功能平稳、通过其运动范围以引导和比对关节、并且以使运动成为可能。关节不稳定性可能会有各种影响，包括起立和坐下的麻烦、缓慢或僵硬的运动、爬楼梯困难、跛行和/或偏向一侧肢体而不是另一侧。

肌肉质量和肌肉收缩对维持功能性关节至关重要。肌肉抵消载荷力并维持关节的功能。作为关节稳定剂的肌肉募集取决于肌肉可以施加的力，其基于许多因素；然而，肌肉质量或肌肉大小被认为是维持关节稳定性和正常功能的更重要的决定因素之一。肌肉质量的减少可导致关节不稳定性并影响关节功能，这可能导致炎症并最终导致关节炎。

如果身体一侧的一个或多个关节受到关节不稳定性、炎症或损伤的影响，维持或提高对侧力量有助于克服上述关节不稳定、炎症或损伤导致的运动受损，特别有助于弥补由于同侧受损的肌肉和关节导致的缺乏平衡(Jeon K.Comparison of knee laxity andisokinetic muscle strength in patients with a posterior cruciate ligamentinjury.J Phys Ther Sci 2016；28:831-836)。

在进行膝稳定训练之前，有膝不稳定性和肌肉力量低的患者的肌肉强化已被证明是重要的。(Knoop J,van der LM,Roorda LD et al.Knee joint stabilization therapyin patients with osteoarthritis of the knee and knee instability:subgroupanalyses in a randomized,controlled trial.J Rehabil Med2014；46(7):703-707)。提高腿部力量对于有关节萎缩的患者是有益的，并且帮助他们更容易地进行日常活动如步行和爬楼梯(Knoop J,Steultjens MP,Roorda LD et al.Improvement in upper legmuscle strength underlies beneficial effects of exercise therapy in kneeosteoarthritis:secondary analysis from arandomised controlledtrial.Physiotherapy 2015；101(2):171-177)。

力量对平衡运动很重要。已经表明，下肢力量的下降与平衡的下降有关。力量较大的老年人平衡下降较少(Messier SP,Glasser JL,Ettinger WH,Jr.,Craven TE,MillerME.Declines in strength and balance in older adults with chronic knee pain:a30-month longitudinal,observational study.Arthritis Rheum 2002；47(2):141-148)。

关节问题包括关节炎症、关节受损、关节损伤和退行性关节问题如骨关节炎和髋和/或肘发育不良。因此，存在对于一种组合物和组合物的使用方法的需要，以解决关节问题、稳定关节、减少关节僵硬和提高平衡运动。

发明概述

本发明的一个目的是提供用于降低关节不稳定性的组合物。

本发明的另一个目的是提供用于提高关节稳定性的组合物。

本发明的另一个目的是提供用于在肌肉运动期间提供平衡运动和骨骼关节稳定性的组合物。

本发明的另一个目的是提供用于降低关节不稳定性的组合物的施用方法。

本发明的另一个目的是提供用于增加关节稳定性的组合物的施用方法。

本发明的另一个目的是提供用于在肌肉运动期间提高平衡运动和骨骼关节稳定性的组合物的施用方法。

本发明的另一个目的是提供用于减少关节僵硬的组合物的施用方法。

本发明的另一个目的是提供用于维持和/或提高对侧力量的组合物的施用方法，其中同侧有关节受损、关节炎症、关节减弱或关节损伤。

参考以下说明书、附图和权利要求，本发明的这些和其他目的对于本领域技术人员而言将变得清楚。

本发明旨在克服迄今为止遇到的困难。为此，提供了包含HMB的组合物。将所述组合物施用于有需要的对象。所有方法包括将HMB施用于动物。包括在本发明中的对象包括人类和非人类哺乳动物，包括伴侣动物如犬、猫和马。

附图简述

图1是描绘平均肌肉质量的图。

图2是描绘平均肌肉力量的图。

发明详述

令人惊讶且出乎意料地发现，HMB提高关节稳定性、减少关节僵硬、保持和/或提高健康关节功能、并提高平衡运动。本发明包含HMB组合物和使用HMB以降低关节不稳定性、提高关节稳定性、减少关节僵硬、促进健康的关节、增加关节运动范围、提高平衡运动和骨骼关节稳定性的方法。

该组合物可用于寻求这些结果的所有年龄组。该组合物还可用于人类和非人类哺乳动物，包括但不限于伴侣动物如犬、猫和马。

HMB

β-羟基-β-甲基丁酸或β-羟基-异戊酸可以其游离酸形式表示为(CH

生产HMB及其衍生物的方法是本领域熟知的。例如，HMB可以通过双丙酮醇的氧化来合成。在Coffman et al.,J.Am.Chem.Soc.80:2882-2887(1958)中描述了一种合适的步骤。如其中所述，HMB通过双丙酮醇的碱性次氯酸钠氧化合成。产物以游离酸形式回收，可以转化成盐。例如，HMB可以通过类似于Coffman等人(1958)的步骤制备成其钙盐，其中HMB的游离酸用氢氧化钙中和并通过从乙醇水溶液中结晶回收。HMB的钙盐可从MetabolicTechnologies，Ames，Iowa商购获得。

β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)钙补充

二十多年前，HMB的钙盐被开发为人类的营养补充剂。大量研究表明，CaHMB补充联合阻力运动训练提高肌肉质量和力量，并减弱例如癌症和艾滋病等疾病中肌肉质量损失。Nissen和Sharp进行了补充剂与阻力训练联合使用的荟萃分析，发现HMB是临床研究显示与阻力训练显著增加力量和瘦肉质量的仅有的两种补充剂之一。研究表明，38mg的CaHMB每kg体重似乎是普通人的有效剂量。

除了力量和肌肉质量增加外，CaHMB补充还降低肌肉受损和蛋白质降解的指标。人类研究表明，激烈运动后的肌肉受损(通过升高的血浆CPK(肌酸磷酸激酶)测量)随着HMB补充而降低。已显示持续日常使用，HMB的保护作用持续至少三周。分离的大鼠肌肉的体外研究表明，HMB是肌肉蛋白水解的有效抑制剂，尤其是在应激期间。这些发现已在人类中得到证实；例如，HMB抑制参与阻力训练的对象的肌肉蛋白水解。

已经报道了HMB降低蛋白质分解和增加蛋白质合成的分子机制。Eley等人进行了体外研究，显示HMB通过mTOR磷酸化刺激蛋白质合成。其他研究已经表明，当蛋白水解诱导因子(PIF)、脂多糖(LPS)和血管紧张素II刺激肌肉蛋白质分解代谢时，HMB通过减弱泛素-蛋白酶体蛋白水解途径的诱导来降低蛋白水解。还有其他研究已经表明，HMB还减弱半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-8蛋白酶的激活。总之，这些研究表明，HMB补充通过降低蛋白质水解和增加蛋白质合成的组合，导致瘦肉质量增加并伴随力量增加。

HMB游离酸形式

在大多数情况下，用于临床研究并作为增补剂(ergogenic aid)销售的HMB一直是钙盐形式。最近的进展已经使得HMB以游离酸形式制造以用作营养补充剂。最近，开发了一种新的游离酸形式的HMB，其显示出比CaHMB更快地吸收，导致更快和更高的血清HMB水平峰值并提高组织的血清清除。游离酸形式的HMB由名称“HMB-酸”表示。

因此，HMB游离酸可是比钙盐形式更有效的施用HMB的方法，特别是在激烈运动之前直接施用时。在运动的急性发作前30分钟开始的HMB游离酸在减轻肌肉受损和改善炎症反应方面比CaHMB更有效。然而，本领域普通技术人员将认识到，本发明包括任何形式的HMB。

任何形式的HMB可以以一种方式掺入递送和/或施用形式中，以便在24小时内导致约0.5克HMB至约30克HMB的典型剂量范围。HMB还可以在24小时内以0.01至0.2克HMB每kg体重的剂量范围施用。

HMB本身可以以任何形式存在；例如，CaHMB通常是可以掺入任何递送形式的粉末，而HMB-酸通常是可以掺入任何递送形式的液体或凝胶。递送形式的非限制性实例包括丸剂、片剂、胶囊、囊形片、液体、饮料、固体和凝胶。对于动物如伴侣动物，可以将HMB单独以先前列出的递送形式掺入饲料，包括商业宠物食品、咀嚼物和美味食物。

术语施用给或施用包括向哺乳动物提供组合物、消耗组合物及其组合。

当组合物以可食用形式口服施用时，该组合物优选为膳食补充剂、食品或药物介质的形式，更优选为膳食补充剂或食品的形式。在本发明的上下文中可使用任何合适的包含该组合物的膳食补充剂或食品。本领域普通技术人员将理解，无论形式(例如膳食补充剂、食品或药物介质)如何，组合物可包括氨基酸、蛋白质、肽、碳水化合物、脂肪、糖、矿物质和/或微量元素。

为了制备作为膳食补充剂或食品的组合物，组合物通常以使得组合物基本均匀分布在膳食补充剂或食品中的方式组合或混合。或者，可将组合物溶解于液体如水中。

膳食补充剂的组合物可以是粉末、凝胶、液体或可以制成片剂或装入胶囊。

尽管可以在本发明的上下文中使用包含该组合物的任何合适的药物介质，但优选地，该组合物与合适的药物载体如葡萄糖或蔗糖组合。

此外，药物介质的组合物可以以任何合适的方式静脉内施用。对于通过静脉内输注施用，组合物优选为水溶性无毒形式。静脉内施用特别适用于正在接受静脉内(IV)治疗的住院患者。例如，可以将组合物溶解在施用于患者的IV溶液(例如盐水或葡萄糖溶液)中。而且，组合物可以添加到营养IV溶液中，其可以包括氨基酸、肽、蛋白质和/或脂质。待静脉内施用的组合物的量可以与口服施用的水平相似。静脉内输注可以比口服施用更加可控和准确。

计算组合物施用频率的方法是本领域公知的，并且可以在本发明的上下文中使用任何合适的施用频率(例如一次6克剂量每天或两次3克剂量每天)，并且在任何合适的时间段内(例如，可以在5分钟的时间段内或在1小时的时间段内施用单剂量，或者可以在延长的时间段内施用多剂量)。HMB可以在延长的时间段内施用，例如数周、数月或数年。该组合物可以以包含一或多剂量/单独份量每天的单独份量施用，以使每日份量包含一天或24小时期间施用的组合物的总量。

在本发明的上下文中可以使用任何合适剂量的HMB。计算适当剂量的方法是本领域熟知的。

通常，所提供的HMB的量的水平足以导致关节不稳定性降低、关节稳定性增加、关节僵硬降低，对侧力量增加或保持，肌肉运动期间平衡运动和骨骼关节稳定性提高。

病例研究

以下实施例将更详细地说明本发明。容易理解的是，如本文实施例中一般描述和说明的，本发明的组合物可以多种制剂和剂型合成，并且可以应用于任何年龄范围和任何物种，包括人类和非人类动物。因此，本发明方法、制剂和组合物的目前优选实施方案的以下更详细描述并非如权利要求一样旨在限制本发明的范围，而是仅代表本发明的当前优选实施方案。

一只体重约70磅的11岁雌性金毛猎犬被诊断为关节中有关节炎，并且正在经历明显付出代价和显著减少的活动。在发展出关节炎之前，犬爬楼梯，跳进跳出汽车，并爬上家具。

将胶囊形式的CaHMB以2克/天的量施用于犬，每次与正常饮食施用1克剂量。

在治疗方案开始后不久，犬开始爬楼梯，跑有限距离的步，并爬上家具。

在开始HMB方案后大约两个月，该犬发展出与脑肿瘤生长相关的癫痫活动。癫痫活动的治疗包括苯巴比妥、加巴喷丁和溴化钾，这导致严重的共济失调，使得犬不能在没有帮助的情况下从躺下的姿势站起来、爬楼梯或上家具。在癫痫发作并引入抗癫痫药物后，HMB施用暂时中止约两周。在恢复HMB方案后，犬在没有帮助的情况下开始站起来，并且能够在没有显著帮助的情况下爬楼梯。主人观察到共济失调也有显著改善。

给这只犬施用HMB导致关节稳定性增加、关节不稳定性降低、运动平衡和骨骼关节稳定性提高，使她能够恢复日常活动，如爬楼梯和无需帮助站立。她的主人认为她的生活质量得到了显著提高。

前面的描述和附图包括本发明的说明性实施例。本文描述的前述实施例和方法可以基于本领域技术人员的能力、经验和偏好而变化。仅以某种顺序列出该方法的步骤并不构成对该方法步骤顺序的任何限制。前面的描述和附图仅解释和说明本发明，并且本发明不限于此，除非权利要求如此限定。在不脱离本发明的范围的情况下，在其之前具有公开内容的本领域技术人员将能够在其中进行修改和变化。

实验实施例

二十一只雌性新西兰白兔(43周龄)(Covance Research Products，Inc.，Greenfield，IN)用于在University of Calgary(Calgary,Alberta,Canada)进行的为期8周的研究中。Botox被用作重复软组织创伤的制剂。将兔子随机分配到以下处理组之一：

(1)对照组：单侧盐水注射(n＝7)；

(2)Botox组：单侧单次Botox注射(n＝7)；

(3)Botox+HMB组：在整个实验期间单侧单次Botox注射+CaHMB食物补充(n＝7)。HMB＝β-羟基-β-甲基丁酸钙盐

第1组兔作为对照并随机(右或左)接受肌内盐水注射到四头肌肌肉系统。注射盐水的总体积与Botox的总体积相同。第2组和第3组兔接受一次性肌内Botox注射，并在注射后8周收集数据。

盐水和Botox注射：盐水组的兔子注射0.175ml盐水/kg体重。Botox和Boxtox+HMB组中的兔子注射肉毒梭菌(Clostridium botulinum)A型(BTX-A)神经毒素复合物(Botox，Allergan，Inc.，Toronto，Ontario，Canada)。简而言之，将冻干的毒素(100U/小瓶)用0.9％氯化钠重构至浓度为20U/ml。随机选择右腿或左腿，并按3.5U/kg体重注射到四头肌肌肉。通过触诊分离大腿的前腔室，并且将四头肌肌肉目测分成上半和下半。然后将每一半细分为内侧、外侧和中间部分。将BTX-A剂量的六分之一注射到每部分中以增加扩散并使BTX-A均匀分布于四头肌肌肉系统。

饮食：第1组和第2组兔子接受高纤维饮食(Laboratory Rabbit Diet HF5326,LabDiet,Richmond,IN)，而第3组兔子接受相同的基础饮食并定制配制有0.44％CaHMB(Metabolic Technologies,Inc.,Ames Iowa,USA)。每周记录体重和饲料摄入。

四头肌肌肉力量：通过在测试之前植入的股神经套囊电极刺激四头肌来评估膝伸肌力量。在神经套囊植入后，在骨盆和股髁使用骨针将兔子固定在立体定向框架中。使用放置在兔胫骨远端部分上的应变测量校准棒测量膝关节屈曲80°、100°和120°的等距膝伸肌力。

刺激膝伸肌肌肉系统(Grass S8800刺激器；Astro-Med Inc.，Longueil，Quebec，Canada)是在比α运动神经元阈值高三倍的电压进行的，以确保所有运动单元的激活。刺激持续500ms，脉冲持续0.1ms，并且在两个刺激频率100Hz和200Hz进行测量。在刺激之间给予两分钟的休息时间以防止肌肉疲劳。

四头肌肌肉质量：在喂养8周后，通过给予心脏过量的Euthanyl(MTCPharmaceutical，Cambridge，Ontario，Canada)处死兔子。在动物牺牲后立即测定四头肌的湿肌肉质量。去除四头肌肌肉群，并分离股直肌(RF)、股内侧肌(VM)、股外侧肌(VL)和小股外侧肌(SVL)，并使用精确度为0.01克的商业秤单独称重。

统计分析

使用SAS中的Proc GLM(SAS for Windows 9.4，SAS Institute，Inc.，Cary，NC)分析数据。该模型使用处理的主效应。对于实际肌肉重量和力量测量，兔子的体重用作协变量。报告的平均值是最小二乘均数，平均值的标准误差来自主效应模型的误差项的均方来计算。给出的全部处理的p值来自主效应模型，而个体平均值使用最小二乘均数预测差异进行比较。p值≤0.05表示显著性，而0.05

身体重量和饲料摄入

在进行肌肉测量时，平均体重没有差异。对照组、Botox和Botox+HMB兔子分别称重为4.17±0.08、4.04±0.13和3.99±0.10kg。对于对照组、botox和botox+HMB兔子，8周研究中的饲料摄入平均分别为168.5±7.6、135.5±7.9和129.4±8.0克/天。由于botox注射后饲料摄入减少，botox和botox+HMB组吃掉显著更少的饲料(p<0.005)。

肌肉质量数据

所有21只兔子的肌肉质量数据显示在表1中。使用的Botox注射导致注射的肢体中肌肉质量的显著损失。唯一显著的差异是Botox+HMB组对侧肢体股直肌显著大于单独Botox组的对侧股直肌。

基于注射侧的肌肉系统选择21只兔子的子集。由于使用相当严重的botox剂量，从该子集分析中丢弃了每个处理组中具有最低总重量肌肉系统的2只兔子。因此，分析了来自21只兔子中的15只的肌肉数据。来自该子集的肌肉质量数据显示在表2中。

注射botox导致所测量的所有肌肉的肌肉大小降低约36％。只有小股外侧肌肌肉不受botox注射的影响。botox+HMB组注射的腿股内侧肌肌肉比单独botox组更大，并且最小二乘均数差异的t检验显示只有botox组显著不同于对照组(p<0.05)。此外，botox+HMB组注射的腿小股外侧肌肌肉倾向于大于对照组(p<0.07)。最小二乘均数分析botox+HMB组对侧股直肌肌肉倾向于大于对照组的股直肌肌肉重量(p<0.08)。对于botox+HMB组，对侧腿所测量的肌肉的总重量倾向于大于botox单独组(p<0.07)，并且还倾向于大于对照组中肌肉的总重量(p<0.09)。此外，botox+HMB组中最受botox注射影响的肌肉(股外侧肌、股内侧肌和股直肌)在对侧腿的称重多于botox组(p<0.04)。以体重的百分比表示肌肉重量表现出相同的效果，与botox组(p<0.10)和对照组(p<0.03)相比，HMB组具有更大的对侧肌肉系统。这些结果如图1所示。

补充有HMB有助于保持botox注射的兔子的肌肉质量。与botox组和对照组相比，HMB大大增加了botox+HMB组对侧腿的肌肉肥大。因此，尽管肉毒杆菌毒素具有严重的性质，但HMB确实有助于保持和肥大肌肉。

肌肉力量数据

在botox或盐水注射8周后，在盐水注射(对照)或botox注射和对侧肌肉系统中测量等长膝伸肌力量。

如上所述刺激股神经，并且在表3和4中显示在100和200Hz频率刺激的刺激结果。

与对照组相比，botox单独和botox+HMB组的botox注射肌肉的力量总体降低相似。在100Hz和200Hz刺激频率测量时，两个botox注射组均失去63-66％的肌肉力量。botox注射的兔子的对侧肌肉力量分别在100和200Hz下降16.8和26.3％，而botox+HMB兔子的对侧力量分别在100和200Hz仅下降了约一半，为9.9和12.3％。在100Hz时，与对照兔子相比，HMB在对侧肌肉中没有导致统计学上显著的力量损失，而在单独botox的兔子的对侧肌肉中力量显著损失(p<0.01)。在200Hz刺激，HMB处理导致对侧肌肉的力量保持更大。在80和100度，botox+HMB处理的兔子的力量显著高于单独botox组，并且在80和120度，botox+HMB和对照组之间的力量没有显著差异。总之，botox注射不仅导致在注射的肌肉系统中力量显著损失，而且在对侧肌肉组织中力量显著损失，并且HMB防止了对侧肌肉系统中大部分botox诱导的力量损失。这些结果如图2所示。

前面的描述和附图包括本发明的说明性实施例。本文所述的前述实施例和方法可基于本领域技术人员的能力、经验和偏好而变化。仅仅以某种顺序列出该方法的步骤并不构成对该方法的步骤顺序的任何限制。前面的描述和附图仅解释和说明本发明，而本发明不限于此，除非权利要求是如此限定的。具有公开内容的本领域技术人员在不脱离本发明的范围的情况下将能够进行修改和变化。