胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)受体激动剂的医药用途

技术领域

本发明属于化学药物技术领域，特别的，本发明涉及胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂在预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病药物方面的医药用途。

背景技术

脂肪代谢异常会导致很多疾病尤其是酒精性脂肪肝病(Alcoholic fattyliverdisease,AFLD)和非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fattyliver disease,NAFLD)。非酒精性脂肪性肝病是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。包括非酒精性单纯性脂肪肝(Nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)及其相关肝硬化和肝细胞癌。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10％～30％，其中NASH(非酒精性脂肪性肝炎)占比10％～20％，后者10年内肝硬化发生率高达25％。NAFLD除可直接导致失代偿期肝硬化、肝细胞癌和移植肝复发外，还可影响其他慢性肝病的进展，此外，NAFLD还参与II型糖尿病、动脉粥样硬化、代谢综合征相关恶性肿瘤等疾病的进程，并严重影响患者的生活质量和预期寿命。

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是肠促胰素的一种，由肠道上皮L细胞分泌，通过与其受体结合发挥生理效应。GLP-1受体(GLP-1R)属于G蛋白耦联受体亚家族，当GLP-1与GLP-1受体相结合后，引发一系列的生物学效应。利拉鲁肽(Liraglutide)是胰高血糖素样肽1(GLP-1)的市售的经化学修饰的类似物，起GLP-1受体(GLP-1R)激动剂的作用。研究已经证明此类GLP-1R激动剂可降低血糖并减轻体重，并且可以缓解NAFLD疾病进展。而且，用GLP-1R激动剂利拉鲁肽治疗经活检证实为NASH的肥胖患者导致39％的患者中NASH消退，相较于安慰剂为9％的患者(Armstrong等,BMJ Open 2013,vol.3,e003995；Armstrong等,Lancet2016,vol.387,pp.679-690)。

由于NAFLD的发病机制较为复杂，相关治疗药物研发进展十分缓慢。因此，迫切需要鉴定可以停止或逆转晚期纤维化或肝硬化的时程的新的、安全的和有效的药物。

申请人在前期申请PCT/CN2021/133447申请了包括下式所示的化合物A的一系列GLP-1R激动剂化合物：

发明内容

鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂在预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病药物中的应用。

具体而言，本发明通过以下技术方案得以实现：本发明提供一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂在制备用于预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病药物的应用，所述胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂为式I所示化合物及其可药用盐，

其中：R

m为0、1、2或3；W为O或NH；

R

X为CH或N；Y为CH或N；

Z选自-CR

作为本发明的一种优选技术方案，所述非酒精性脂肪性肝病选自：非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。

作为本发明的一种优选技术方案，所述烷基选自C

作为本发明的一种优选技术方案，所述烷氧基选自C

作为本发明的一种优选技术方案，所述卤素选自氟、氯、溴、碘，卤代烷基指烷基一个以上的氢原子被卤素取代，卤代烷氧基指烷氧基一个以上的氢原子被卤素取代，杂环烷基是指烷基一个以上的氢原子被杂环取代。

作为本发明的一种优选技术方案，所述胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的盐选自钠盐、钾盐、三羟基甲基氨基甲烷盐、钙盐、镁盐。

作为本发明的一种优选技术方案，所述胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂选自：

作为本发明的一种优选技术方案，所述胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂的盐选自：

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

本发明化合物的盐是指“药学上可接受的盐”，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与药学上可接受的酸或碱制备。

本发明的某些化合物的盐可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体，以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

本发明化合物分子的原子是同位素，通过同位素衍生化通常可以延长半衰期、降低清除率、代谢稳定和提高体内活性等效果。并且，包括一个实施方案，其中至少一个原子被具有相同原子数(质子数)和不同质量数(质子和中子和)的原子取代。本发明化合物中包括的同位素的实例包括氢原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子，其分别包括2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl。特别的是，随其衰退而发射辐射的放射性同位素例如3H或14C可用于药物制剂或者体内化合物的局部解剖学检验。稳定的同位素既不随其量衰减或变化，也不具有放射性，因此其可以安全使用。当构成本发明化合物分子的原子是同位素时，通过用包含相应同位素的试剂替代合成中所用的试剂，可以根据通用方法转化同位素。

本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(2H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。

进一步地，本发明的化合物一个或多个氢原子上被同位素氘(2H)取代，本发明化合物氘代后，具有延长半衰期、降低清除率、代谢稳定和提高体内活性等效果。

所述同位素衍生物的制备方法通常包括：相转移催化方法。例如，优选的氘化方法采用相转移催化剂(例如，四烷基铵盐，NBu4HSO4)。使用相转移催化剂交换二苯基甲烷化合物的亚甲基质子，导致比在酸(例如，甲磺酸)存在下用氘化硅烷(例如三乙基氘化甲硅烷)或用路易斯酸如三氯化铝采用氘化硼酸钠还原而引入较高的氘。

术语“治疗”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

附图说明

图1是本发明实施例7的小鼠肝脏病理切片图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-III核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用ISQ EC质谱仪(生产商:Thermo,型号:ISQ EC)。

高效液相色谱法(HPLC)分析使用Thermo U3000 HPLC DAD高效液相色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用CombiFlash Rf+LUMEN(TELEDYNE ISCO)。

薄层层析硅胶板使用烟台银龙HSGF254或GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.17mm～0.23mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

硅胶柱色谱法一般使用乳山上邦硅胶100～200目硅胶为载体。

实施例1

合成2-((S)-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸

合成2-((R)-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸

具体合成路线如下：

步骤A：合成4-(6-氯吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300.0毫克,1.61毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(12.0毫升)中，加入2,6-二氯吡啶(262.0毫克,1.77毫摩尔)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(135.4毫克,0.16毫摩尔)和碳酸铯(788.5毫克,2.42毫摩尔)。氮气保护下，升温至100摄氏度，搅拌反应5小时。旋干溶剂，柱层析分离(乙酸乙酯：正己烷＝1：10)，得150.0毫克米黄色固4-(6-氯吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：31.3％)。LC-MS：RT＝1.82min,[M-

步骤B：合成4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

将4-(6-氯吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150.0毫克，0.51毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(5.0毫升)中，加入3-氟-4-(羟甲基)苯甲腈(76.3毫克，0.51毫摩尔)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(43.2毫克，0.05毫摩尔)和碳酸铯(246.8毫克，0.76毫摩尔)。氮气保护下，升温至100摄氏度，搅拌反应15小时。旋干溶剂，柱层析分离(乙酸乙酯：正己烷＝1：10)，得102.0毫克米黄色固体4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：49.1％)。LC-MS：RT＝2.23min,[M-tBu+H]

步骤C：合成3-氟-4-(((6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈

将4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(102.0毫克，0.25毫摩尔)溶于甲醇(2.0毫升)中，加入盐酸/1,4-二氧六环溶液(0.5毫升，2.0毫摩尔)。室温条件下，搅拌反应3小时。旋干溶剂，得73.7毫克白色固体3-氟-4-(((6-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(收率：73.5％)。LC-MS：RT＝1.68min,[M+H]+＝313.25。

步骤D：合成2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯

25摄氏度下，向含有4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪盐酸盐(652毫克,2.09毫摩尔)的乙腈(8.0毫升)中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.0毫升)、碘化钾(420毫克，3.13毫摩尔)和碳酸钾(577毫克，4.18毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(10.0毫升)中，最后加入2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(650毫克,2.09毫摩尔)，N

反应结束，加水淬灭，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合并有机相，饱和食盐水(30毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷＝2/1。得到690毫克黄色固体2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：56.4％，dr＝66％)。LC-MS:RT＝1.93min,[M+H]

步骤E：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物A-a)和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物A-b)

零摄氏度下，向含有2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(690毫克,1.18毫摩尔)的四氢呋喃(3毫升)和甲醇(1毫升)混合溶液中，滴加氢氧化锂(198毫克,4.72毫摩尔)的水溶液(1毫升)，于25摄氏度下反应30分钟。

反应结束，加水淬灭，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷＝1/10。得到290毫克白色固体2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物A-a)(收率：43.0％)和59毫克白色固体2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物A-b)(收率8.7％)。粗产品用制备型高效液相色谱纯化。分离条件如下：色谱柱：Agilent 5Prep-C

化合物A-a:HPLC:RT＝10.12min。LC-MS:RT＝1.79min,[M+H]

化合物A-b:HPLC:RT＝12.17min。LC-MS:RT＝1.79min,[M+H]

实施例2

合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸钠盐

将2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(1克，1.75毫摩尔)溶解于20毫升水中得到混悬液，冰浴条件下滴加氢氧化钠水溶液(0.175毫摩尔/毫升，10毫升，1.75毫摩尔)，溶液变澄清，保持冰浴条件继续搅拌1小时，样品直接冻干得钠盐样品。

1

实施例3

合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸钾盐

将2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(1克，1.75毫摩尔)溶解于20毫升水中得到混悬液，冰浴条件下滴加氢氧化钾水溶液(0.175毫摩尔/毫升，10毫升，1.75毫摩尔)，溶液变澄清，保持冰浴条件继续搅拌1小时，样品直接冻干得钾盐样品。

1

实施例4

合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸三羟基甲基氨基甲烷盐

将2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(599.9毫克，1.05毫摩尔)溶解于10毫升甲醇得到混悬液，室温条件下加入三羟甲基氨基甲烷水溶液(2毫摩尔/毫升，524.9微升，1.05毫摩尔)，室温搅拌10分钟后溶液变澄清，室温条件下继续搅拌2小时，将澄清样品转移至室温下真空干燥，向干燥所得固体样品中加入10毫升甲基叔丁基醚得混悬液，将混悬液在温度循环下(50℃～5℃，0.1℃/min)搅拌24小时，将混悬液离心，固体在50℃下真空干燥得三羟基甲基氨基甲烷盐(tris盐)样品。

实施例5：本发明化合物大鼠药代动力学研究

实验材料

SD大鼠：雄性，180-250g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。

试剂：DMSO(二甲亚砜)，PEG-400(聚乙二醇400)，生理盐水，肝素，乙腈，甲酸，普萘洛尔(内标)均为市售可得。

仪器：赛默飞LC-MS(U300 UPLC，TSQ QUANTUMN ULTRA三重四级杆质谱)。

实验方法

称取实施例1化合物A-a及按照CN201780086550.1实施例4A-1和10A-77制备得到的相应化合物溶于DMSO-PEG-400-生理盐水(5：60：35，v/v/v)体系中，大鼠静脉或灌胃给药后，于15min、30min、1h、2h、5h、7h、24h(iv组加采5min)采集静脉血200μL于肝素化EP管中，12000rpm离心2min，取血浆-80℃冻存待测。精密称取一定量供试品用DMSO溶解至2mg/mL，作为储备液。准确吸取适量的化合物储备液，加入乙腈稀释制成标准系列溶液。准确吸取上述标准系列溶液各20μL，加入空白血浆180μL，涡旋混匀，配制成相当于血浆浓度为0.3、1、3、10、30、100、300、1000、3000ng/mL的血浆样品，每一浓度进行双样本分析，建立标准曲线。取30μL血浆(静脉给药5min、15min、30min、1h血浆稀释10倍)，加入内标普萘洛尔(50ng/mL)的乙腈溶液200μL，涡旋混匀后，加入100μL纯化水，再次涡旋混匀，4000rpm离心5min，取上清LC-MS分析。LC-MS检测条件如下：

色谱柱：赛默飞HYPERSIL GOLD C-18UPLC柱，100*2.1mm，1.7μm。

流动相：水(0.1％甲酸)-乙腈按下表进行梯度洗脱

数据处理

LC-MS检测血药浓度后，采用WinNonlin 6.1软件，非房室模型法计算药动学参数,结果见表五。

表1：本发明化合物对大鼠药代动力学结果

结论：从表1中可以看出本发明化合物在大鼠口服吸收较好，具有较高的暴露量和生物利用度。

实施例6：对hERG钾离子通道作用的研究

1、细胞培养

将稳定表达hERG钾离子通道的中国仓鼠卵巢细胞系CHO-hERG用于该实验中。细胞采用F12完全培养基，10％胎牛血清，1％抗生素(G418)，89μg/mL潮霉素。恢复培养基为F12培养基，10％胎牛血清，于37℃、5％ CO

2、hERG测定

采用手动膜片钳系统，测定本发明化合物系列梯度浓度对CHO-hERG中钾离子通道的抑制活性。

3、数据处理

hERG电流值导入到EXCEL中用于数据分析，测得的IC

表2：本发明化合物对hERG钾离子通道的抑制作用结果

结论：从表2中可以看出本发明化合物对hERG的抑制作用较弱，IC

实施例7：本发明化合物对DIO诱导的转人源GLP-1R基因小鼠肥胖模型的药效研究

实验方法：根据模型小鼠的禁食血糖及体重将其分成5组(10只/组)：正常对照组(G1组)、模型对照组(G2组)、实施例4化合物A-a的tris盐低剂量组(3mg/kg bid，PO)(G3组)、实施例4化合物A-a的tris盐中剂量组(7.5mg/kg bid，PO)、实施例4化合物A-a的tris盐高剂量组(18.75mg/kg bid，PO)。给药一周后，基于体重和摄食量的变化结果，将实施例4化合物A-a的tris盐中、高剂量调整为实施例4化合物A-a的tris盐中剂量组(10mg/kg bid，PO)(G4组)、实施例4化合物A-a的tris盐高剂量组(30mg/kg bid，PO)(G5组)，再继续给药共给药44天，定义给药第一天为D1。在实验D44采集动物血液及组织，分别进行血脂检测及肝脏的病理评估。化合物A-a的tris盐剂量以游离形式的化合物A-a计算。

实验结果：

表3本发明化合物对小鼠血脂水平和肝重指标的影响(mean±sem，n＝10)

注：与模型组相比，*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.01

如表3，在血脂水平方面，化合物A-a的tris盐中高剂量能显著性降低TG水平，高剂量能显著性的降低TC、HDL-C和HDL-C水平，化合物A-a的tris盐低中高能显著性的降低肝脏的重量，根据肝脏病理结果，化合物A-a的tris盐能剂量依赖性的降低肝脏脂肪变性，以上结果表明，本发明的化合物具有改善非酒精性脂肪性肝病的潜力。

参考测量血清胆固醇水平、肝重量和肝TG的图1，可以看出，与G1正常对照组及G2模型对照组相比，向其施用实施例4化合物A-a的tris盐的小鼠的血清胆固醇水平、肝重量和肝甘油三酯显著降低，其中，G4、G5组能显著性降低TG水平，G5组能显著性的降低TC、HDL-C和HDL-C水平，G3、G4组能显著性的降低肝脏的重量。根据肝脏病理结果，实施例4化合物A-a的tris盐能剂量依赖性的降低肝脏脂肪变性。如此，揭示了根据本发明的化合物在用于预防和治疗非酒精性脂肪肝疾病方面有效。

实施例8：本发明化合物对自发性糖尿病猴的药效研究

实验方法：选用48只自发性糖尿病食蟹猴，根据HbA1c、血糖、胰岛素及静脉葡萄糖耐量(IVGTT)和体重，均衡地分成5组(8只/组)：模型对照组(G1)，实施例4化合物A-a的tris盐低剂量组(20mg/kg bid，PO)(G2)、实施例4化合物A-a的tris盐中剂量组(40mg/kg bid，PO)(G3)、实施例4化合物A-a的tris盐高剂量组(60mg/kg bid，PO)(G4)、利拉鲁肽组(30μg/kg qd，SC)(G5)、给药5天后，根据24小时随机血糖和动物耐受情况，实施例4化合物A-a的tris盐高剂量组调整剂量为80mg/kg bid，PO，再继续给药共给药26天，定义给药第一天为D1。在实验D26采集动物血液，进行血脂检测。化合物A-a的tris盐剂量以游离形式的化合物A-a计算。

实验结果：

表4本发明化合物对糖尿病猴血生化的影响(mean±sem，n＝5-8)

注：与模型组比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.005；变化率％＝(D26值-基础值)/基础值*100；

如表4，实施例4化合物A-a的tris盐低中高剂量均能降低TC、TG、LDL-C水平，与模型组相比，化合物A-a的tris盐低中高剂量组能显著性的降低TG水平，化合物A-a的tris盐中高剂量能显著性的降低LDL-C水平，优于利拉鲁肽组；化合物A-a的tris盐高剂量能显著性的升高HDL-C水平，优于利拉鲁肽组，因此，化合物A-a的tris盐具有降血脂的作用。以上结果表明，本发明化合物具有改善包括非酒精性脂肪性肝病的潜力。

实施例9：本发明化合物对HFHC诱导的转人源GLP-1R基因小鼠NASH模型的药效研究

实验方法：选取6-8周龄的雄性转人源GLP-1R基因小鼠，以HFHC饲料D12492(60％脂肪)进行饲喂诱导，诱导4周后，开始口服给予实施例4化合物A-a的tris盐(30mg/kg bid，PO)，连续给药12周，期间测量小鼠的体重、摄食量，给药期结束后取血取材，测量肝重、血生化、肝脏病理(脂肪变性、炎症、纤维化评分)。剂量以化合物A-a的tris盐游离形式计算。

结果显示，化合物A-a的tris盐能改善动物的体重、摄食量、肝脏重量、血生化以及肝脏病理评分等指标，表明本发明化合物具有治疗NASH的潜力。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。