一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法

技术领域

本发明属于微生物肥料产品检测检验技术领域，具体涉及一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法。

背景技术

微生物肥料是含有特定微生物的活体制品，应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境，包含农用微生物菌剂、生物有机肥和复合微生物肥料三类产品。上述三类产品均是将特定功能微生物工业化增殖后，经特定载体吸附而制成的微生物活体制品。用于生产微生物肥料产品的载体多种多样，例如乳粉、草炭、秸秆、畜禽粪便、生活垃圾及城市污泥等。载体的复杂多样、制备过程中工艺和操作上的差异导致样品均匀性较差，影响了检测结果的准确性。

微生物肥料的作用基础是起特定作用的活体微生物，有效菌数量作为评价微生物肥料产品质量的重要指标，其检测的准确性尤为关键。有效活菌数的检测依据是农业行业标准《微生物肥料产品检验规程》（NY/T 2321-2013）中的规定的活菌平板计数法。但是在实际操作过程中，样品的均匀性差致使样品检测工作难度增加，重复性劳动增多且费时费力。

发明内容

我们通过分析平板计数法的操作步骤发现，系列稀释中基础菌悬液的均匀与否是影响有效菌的关键因素，本发明主要是通过增加超声波处理、从而进一步混匀样品来完成基础菌悬液的制备工作 。

对装有样品的菌悬液进行超声处理，能很好的解决样品的均匀性问题，但是由于基础菌悬液量少（固体试样10 克加入带玻璃珠且装有100 毫升无菌水的500 毫升具塞锥形瓶中或液体试样10 毫升加入带玻璃珠且装有90 毫升无菌水的500 毫升具塞锥形瓶中）、超声仪器中水量较多且不能同时对多个样品进行超声，因此需要一个固定装置，固定锥形瓶，从而解决了人力固定锥形瓶这一问题。

本发明的目的在于公开了一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，所述方法包括NY/T 2321-2013 微生物肥料产品检验规程中有效活菌数的培养基平板制备步骤、系列稀释步骤、加样与培养步骤、菌落识别步骤、菌落计数步骤和结果结算步骤，其中：系列稀释步骤中在振荡器上200转/分钟充分振荡30分钟的操作后增加了对装有样品的菌悬液进行超声波处理步骤；加有样品的容器经由固定装置固定在超声波装置中，所述固定装置包括框体1，所述框体1上相对的两个侧壁上共同滑动插接有沿框体1侧壁滑动的多个支板3，每个支板3上并排设置有多个与支板3一侧连通的卡槽4；支板3的底板在卡槽4的周侧设置有多个用于贴合样品瓶外壁的侧面托板5，多个所述侧面托板5形成围绕样品瓶的半圆状，在多个所述侧面托板5背离支板3的一端共同设置有用于承托样品瓶的底部托板6；在卡槽4的卡槽口处相对的两个侧壁上设置有长度不同的滑槽8，其中在较长的滑槽8内滑动插设有挡板7，挡板7的长度大于卡槽口的长度；在框体1与支板3平行的条板底部设置有多个中心对称的弹性夹2。固定装置限制样品瓶漂浮，使得样品瓶能够深入超声波水浴盆内，保证了样品能够被充分的超声波处理；同时也保证样品瓶在通过超声波振动混合样品的过程中具有较高的稳定性，避免了样品瓶内菌悬液洒落的问题。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，所述超声波处理步骤具体为：将加有样品的容器在超声波装置中以超声频率60-70 KHz、温度为30℃条件下超声5-10分钟，期间每隔50秒取出手动振荡10秒，即制成基础菌悬液。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，将加有样品的容器在超声波装置中超声6分钟。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，所述支板3包括设置有卡槽4的条形板301，所述条形板301的两端均设置有用于夹持在框体1上的夹子302，且所述夹子302上供框体1进入的位置呈外八字形。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，所述夹子302包括两个设置在条形板301上的开口相背的V字板303，两个V字板303相对的尖端处均转动连接有多个滚珠304，且多个滚珠304沿V字板303的运动方向均匀设置，所述框体1的侧壁上设置有供滚珠304滚动的滚道305，每个所述V字板303的拐角处均设置有圆弧过渡。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，所述框体1包括两个平行设置的与支板3垂直的第一条板101和两个平行设置的与支板3平行的第二条板102；第二条板102垂直滑动设置在两个第一条板101之间，并沿第一条板101的长度方向滑动 。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，所述第二条板102与第一条板101之间的滑动为阻尼滑动。

上述技术方案所述的一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，其中，所述挡板7上背离滑槽8内底部的一端设置有拨动板9，两个滑槽8的槽口处均设置有供拨动板9插入的缺口10。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明在系列稀释步骤中增加了对装有样品的悬菌液进行超声波处理的步骤，使得菌悬液在容器内分布更加均匀，保证了无论从容器内哪个地方取得的样品内的含菌量都是一致的。

2、本发明使用特定的固定装置将加有样品的容器固定在超声波装置内，使得样品瓶能够深入超声波水浴盆内，保证了样品能够被充分的超声波处理；同时也保证样品瓶在通过超声波振动混合样品的过程中具有较高的稳定性，避免了样品瓶内菌悬液洒落的问题。

附图说明

1、图1为本发明实施例提供的固定装置的结构示意图；

2、图2为本发明实施例中图1中支板的结构示意图；

3、图3为本能够实施例中图1中所示A部分的结构放大示意图；

4、图4为本发明实施例中图2中所示B部分的结构放大示意图。

图号说明：

1、框体，101、第一条板，102、第二条板；2、弹性夹；3、支板，301、条形板，302、夹子，303、V字板，304、滚珠，305、滚道；4、卡槽；5、侧面托板；6、底部托板；7、挡板；8、滑槽；9、拨动板；10、缺口。

具体实施方式

为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施例及附图对本发明一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法作进一步的说明。

实施例1：一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法：

一种提高微生物肥料样品测定均匀性的方法，所述方法包括NY/T 2321-2013 微生物肥料产品检验规程中的培养基平板制备步骤、系列稀释步骤、加样与培养步骤、菌落识别步骤与菌落计数步骤，其中：系列稀释步骤中在振荡器上200转/分钟充分振荡30分钟后增加了对装有样品的菌悬液进行超声波处理步骤，超声波处理步骤具体操作为：将加有样品的锥形瓶在超声波装置中以超声频率60-70 KHz、温度为30℃条件下超声5-10分钟，期间每隔50秒取出手动振荡10秒，即制成基础菌悬液。

为了保证样品能够被充分的处理，加有样品的锥形瓶经由固定装置固定在超声波装置中；所述固定装置如图1至图4所示，包括框体1，所述框体1上相对的两个侧壁上共同滑动插接有沿框体1侧壁滑动的多个支板3，每个支板3上并排设置有多个与支板3一侧连通的卡槽4；支板3的底板在卡槽4的周侧设置有多个用于贴合样品瓶外壁的侧面托板5，多个所述侧面托板5形成围绕样品瓶的半圆状，在多个所述侧面托板5背离支板3的一端共同设置有用于承托样品瓶的底部托板6；在卡槽4的卡槽口处相对的两个侧壁上设置有长度不同的滑槽8，其中在较长的滑槽8内滑动插设有挡板7，挡板7的长度大于卡槽口的长度；在框体1与支板3平行的条板底部设置有多个中心对称的弹性夹2；所述支板3包括设置有卡槽4的条形板301，所述条形板301的两端均设置有用于夹持在框体1上的夹子302，且所述夹子302上供框体1进入的位置呈外八字形；所述夹子302包括两个设置在条形板301上的开口相背的V字板303，两个V字板303相对的尖端处均转动连接有多个滚珠304，且多个滚珠304沿V字板303的运动方向均匀设置，所述框体1的侧壁上设置有供滚珠304滚动的滚道305，每个所述V字板303的拐角处均设置有圆弧过渡；所述框体1包括两个平行设置的与支板3垂直的第一条板101和两个平行设置的与支板3平行的第二条板102；第二条板102垂直滑动设置在两个第一条板101之间，并沿第一条板101的长度方向阻尼滑动滑动；所述挡板7上背离滑槽8内底部的一端设置有拨动板9，两个滑槽8的槽口处均设置有供拨动板9插入的缺口10。这样通过固定装置限制样品瓶漂浮，使得样品瓶能够深入超声波水浴盆内，保证了样品能够被充分的超声波处理；同时也保证样品瓶在通过超声波振动混合样品的过程中具有较高的稳定性，避免了样品瓶内菌悬液洒落的问题。

采用本发明的方法与NY/T 2321-2013《微生物肥料产品检验规程》中的方法分别对不同微生物肥料样品进行有效活菌数的检测，同一样品不同处理方式之间的比对结果如表1所示（样品在中国农业科学院农业资源与农业区划研究所的编号为：样品1为4243，样品2为1347，样品3为1350，样品6为1341，样品7为0199，样品8为0497，样品9为4717）：

表1 检测结果

注1：样品4为肥料用巨大芽孢杆菌标准物质，编号及批号GSB 11-3928-2021

注2：样品5为肥料用枯草芽孢杆菌标准物质，编号及批号GSB 11-3929-2021

表1中通过对比样品1、2、3的数据和标准差发现，通过超声处理的方式，样品标准差大幅度下降，样品的均匀性变得更好，且超声处理6分钟效果最佳。

样品4和样品5为国家有证标准样品，标准样品有效期，2020年03月26日至2022年03月25日，使用标准样品进行测试，发现超声处理6分钟后，数据之间的差异在标准值范围区间内，超声处理不影响样品的有效菌数。

样品6和样品7也同样按照超声时间6分钟进行处理，通过分析标准差发现，超声处理后数据之间的稳定性更好。

样品8和样品9是随机选取的样品，进行了常规处理和超声检测，数据之间无明显差异，所以对于均匀性好的样品，常规检测就能达到很好的检测数据结果。

本发明参数是在进行大量实验（表1为部分数据）而得出来的超声处理参数，使用此参数的前提是首先要保证测量结果的准确性，否则失去了此发明的意义。且微生物肥料样品中功能微生物菌种不同、性质不同，所以本实验是对近3年中样品均匀性不好的不同肥料类型，不同菌种类型的肥料进行试验而得出具体参数。在本发明的表1的检测结果中，通过对比样品1、2、3的数据而确定了超声时间6分钟，时间过长或者过短都达不到很好的处理效果；在确定超声时间后首先对国家标准样品进行了测试，发现超声处理不影响样品的有效菌数；对随机样品检测时发现，对于均匀性好的样品，标准处理与超声处理数据之间无明显差异，常规检测就能得到很好的检测数据结果。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。